CN107669583B - 一种保湿组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种保湿组合物及其应用，所述保湿组合物包括以下质量百分含量的各组分：山茶花提取液40～60％；白芨提取液40～60％。所述保湿组合物具有明显的协同效应，可显著增加皮肤中游离氨基酸和反式尿刊酸的含量，达到最佳的保湿效果；且能使皮肤中产生反式尿刊酸(一种内源性的UVB保护剂)，一定程度上能抗紫外，减少UVB带来的损伤。该保湿组合物可广泛应用于化妆品中，有效改善皮肤干燥问题。

Description

一种保湿组合物及其应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种保湿组合物及其应用。
背景技术
干性皮肤中，连接角质细胞之间的桥粒不能实现自身完全降解的程序，皮肤不能正常的剥离脱屑，角质层结合水的能力减弱，进入屏障质量降低的恶性循环。近来的研究表明，天然保湿因子与丝聚蛋白及其相关的水解酶具有密不可分的关系。丝聚蛋白最初在颗粒层被合成，为400kd的多聚蛋白，包含N末端钙结合区域、B结构域、10-12个串联重叠的中间丝相关蛋白肽和C端结构域，为角质透明蛋白粒的主要成分。在角化过程中，丝聚蛋白原被裂解为碱性丝聚蛋白亚单元，这些丝聚蛋白亚单元组合角蛋白中间纤维(K1和K10)，并促进他们的聚集和角质细胞内纤维基质的形成；在分化末期，角蛋白纤维被半胱天冬酶-14、钙依赖蛋白酶I和博来霉素水解酶彻底降解成NMF(天然保湿因子)。因此，在维持角质层的保湿作用和屏障作用中，半胱天冬酶-14、钙依赖蛋白酶I和博来霉素水解酶是作用机制产生NMF的氨基酸的重要靶点。
传统的保湿剂有多元醇类、透明质酸、神经酰胺、胶原等，多元醇类长效保湿效果不理想，透明质酸与胶原较难进入角质层以下，外用与注射效果相差甚远，而神经酰胺目前价格比较昂贵。因此，有必要去研究新型的活性保湿剂来弥补已有保湿剂的缺点，改善干燥皮肤。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种保湿组合物及其应用。本发明通过前期的高通量筛选，制备出了含有半胱天冬酶-14(caspase-14)促进剂和博来霉素水解酶促进剂的天然保湿因子，并通过将其组合可有效改善皮肤干燥的问题。本方案作用靶点易实现，原材料易获得且成本低廉，但保湿效果明显超过传统保湿剂。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种保湿组合物，包括以下质量百分含量的各组分：
山茶花提取液 40～60％；
白芨提取液 40～60％。
优选地，所述山茶花提取液的制备方法包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花浸泡2h后，采用10倍水、60～70℃温度、搅拌转速为200rpm下搅拌提取2h，除去残渣，得到粗提液；
A2、除杂：在粗提液中加入40～50％乙醇，冷藏静置8h后，过滤；
A3、浓缩：将除杂后的粗提液经减压蒸馏除去乙醇；
A4、过滤：浓缩后得到的提取液采用微滤膜进行微滤，至渗出液不再渗出，然后补充等量的水继续微滤至渗出液的量等于微滤前起始提取液的量；
A5、配制：将步骤A4制得的渗出液配制成相当于生药质量5％、且甘油质量浓度为5％的山茶花提取液，即可。
优选地，步骤A4中，所述微滤膜的截留分子量为200nm，操作压力为4～10bar，微滤温度为小于等于60℃。
优选地，所述白芨提取液的制备方法包括以下步骤：
B1、提取：将白芨粉浸泡2h后，采用20倍水、75～85℃温度下、外循环设备提取3h，除去残渣，得到第一滤液；
B2、过滤：在滤液中加入硅藻土，用板框进行过滤，得第二滤液；
B3、微滤：将第二滤液采用微滤膜进行微滤，至得到为药材15倍质量的第一提取液；
B4、超滤：将第一提取液采用超滤膜进行超滤，得到为药材10倍质量的第二提取液，即生药10％的白芨提取液。
优选地，步骤B3中，所述微滤膜的截留分子量为30nm，操作压力为2～6bar，微滤温度为小于等于85℃。
优选地，步骤B3中，所述超滤膜的截留分子量为3500～5000D，操作压力为6～8bar，微滤温度为小于等于85℃。
本发明还提供了一种保湿组合物在制备保湿化妆品中的应用。
优选地，所述保湿化妆品中，保湿组合物的添加质量为5％～10％。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1、相比于传统化学保湿剂，本发明的保湿组合物能使皮肤中产生反式尿刊酸(一种内源性的UVB保护剂)，一定程度上能抗紫外，减少UVB带来的损伤。
2、从促进自身产生天然保湿因子的机理出发，本发明的保湿组合物作用在角质层，易透入，是价格昂贵的透明质酸和神经酰胺完全达不到的效果。
3、本发明的组合物具有明显的协同效应，可显著增加皮肤中游离氨基酸和反式尿刊酸的含量，达到最佳的保湿效果。
4、本发明通过特定提取方法制得的山茶花提取液可进一步提高Caspase-14的表达量，通过特定提取方法制得的白芨提取液可进一步提高BH的表达量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
以下实施例和对比例所涉及的各组分原料均为市售通用产品，所涉及的实验方法均为本领域常用方法。
实施例1
本实施例提供了一种山茶花提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花浸泡2h后，采用10倍水(w/w)、60℃温度、搅拌转速为200rpm下搅拌提取2h，除去残渣，得到粗提液；
A2、除杂：在粗提液中加入50％乙醇，冷藏静置8h后，过滤；
A3、浓缩：将除杂后的粗提液经减压蒸馏除去乙醇；
A4、过滤：将浓缩后得到的提取液采用截留分子量为200nm的微滤膜，操作压力4～6bar，温度保持≤60℃，进行微滤，至渗出液不再渗出，然后补充等量的水继续微滤至渗出液的量等于微滤前起始提取液的量；
A5、配制：将步骤A4制得的渗出液配制成相当于生药质量5％、且甘油质量浓度为5％的山茶花提取液，即可。
实施例2
本实施例提供了一种山茶花提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花浸泡2h后，采用10倍水(w/w)、65℃温度、搅拌转速为200rpm下搅拌提取2h，除去残渣，得到粗提液；
A2、除杂：在粗提液中加入40％乙醇，冷藏静置8h后，过滤；
A3、浓缩：将除杂后的粗提液经减压蒸馏除去乙醇；
A4、过滤：将浓缩后得到的提取液用截留分子量为200nm的微滤膜，操作压力6～8bar，温度保持≤60℃，进行微滤，至渗出液不再渗出，然后补充等量的水继续微滤至渗出液的量等于微滤前起始提取液的量；
A5、配制：将步骤A4制得的渗出液配制成相当于生药质量5％、且甘油质量浓度为5％的山茶花提取液，即可。
实施例3
本实施例提供了一种山茶花提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花浸泡2h后，采用10倍水(w/w)、70℃温度、搅拌转速为200rpm下搅拌提取2h，除去残渣，得到粗提液；
A2、除杂：在粗提液中加入45％乙醇，冷藏静置8h后，过滤；
A3、浓缩：将除杂后的粗提液经减压蒸馏除去乙醇；
A4、过滤：将浓缩后得到的提取液采用截留分子量为200nm的微滤膜，操作压力8～10bar，温度保持≤60℃，进行微滤，至渗出液不再渗出，然后补充等量的水继续微滤至渗出液的量等于微滤前起始提取液的量；
A5、配制：将步骤A4制得的渗出液配制成相当于生药质量5％、且甘油质量浓度为5％的山茶花提取液，即可。
对比例1
本对比例提供了一种山茶花提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花花瓣浸泡2h；10倍水(w/w)70℃搅拌提取3h，除去残渣，得到粗提液；
A2、絮凝：在粗提液中加入1％的絮凝剂，100rpm常温搅拌，过滤；
A3、过滤：在经步骤A2过滤后的粗提液中加入硅藻土拌土过滤，得提取液；
A4、配制：将步骤A3得到的提取液配成相当于生药质量5％，甘油质量浓度为5％的山茶花提取液。
对比例2
本对比例提供了一种山茶花提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花花瓣浸泡2h，采用6倍水煮沸3h，得第一滤液和药渣；将药渣加4倍水煮沸1h，得第二滤液，将第一滤液和第二滤液合并得粗提液；
A2、冷藏：将粗提液在0℃下放置8h，过滤；
A3、过滤：将经步骤A2过滤后的粗提液加入硅藻土拌土过滤，得提取液；
A4、配制：将步骤A3所得的提取液与甘油和水混合，配成相当于生药质量5％，甘油质量浓度为5％的山茶花提取液。
实施例4
本实施例提供了一种白芨提取液的制备方法，包括以下步骤：
B1、提取：将白芨粉浸泡2h后，采用20倍水(w/w)、85℃温度下、外循环设备提取3h，除去残渣，得到第一滤液；
B2、过滤：在滤液中加入硅藻土，用板框进行过滤，得第二滤液；
B3、微滤：将第二滤液采用截留分子量为30nm的微滤膜、操作压力2～4bar，温度保持≤85℃，进行微滤，至得到为药材15倍质量的第一提取液；
B4、超滤：将第一提取液采用截留分子量为5000D的超滤膜，操作压力6～8bar，温度保持≤85℃，进行超滤，得到为药材10倍质量的第二提取液，即生药10％的白芨提取液。
实施例5
本实施例提供了一种白芨提取液的制备方法，包括以下步骤：
B1、提取：将白芨粉浸泡2h后，采用20倍水(w/w)、80℃温度下、外循环设备提取3h，除去残渣，得到第一滤液；
B2、过滤：在滤液中加入硅藻土，用板框进行过滤，得第二滤液；
B3、微滤：将第二滤液采用截留分子量为30nm的微滤膜、操作压力2～4bar，温度保持≤80℃，进行微滤，至得到为药材15倍质量的第一提取液；
B4、超滤：将第一提取液采用截留分子量为5000D的超滤膜，操作压力6～8bar，温度保持≤85℃，进行超滤，得到为药材10倍质量的第二提取液，即生药10％的白芨提取液。
实施例6
本实施例提供了一种白芨提取液的制备方法，包括以下步骤：
B1、提取：将白芨粉浸泡2h后，采用20倍水(w/w)、75℃温度下、外循环设备提取3h，除去残渣，得到第一滤液；
B2、过滤：在滤液中加入硅藻土，用板框进行过滤，得第二滤液；
B3、微滤：将第二滤液采用截留分子量为30nm的微滤膜、操作压力4～6bar，温度保持≤75℃，进行微滤，至得到为药材15倍质量的第一提取液；
B4、超滤：将第一提取液采用截留分子量为3500D的超滤膜，操作压力6～8bar，温度保持≤85℃，进行超滤，得到为药材10倍质量的第二提取液，即生药10％的白芨提取液。
对比例3
本对比例提供了一种白芨提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将白芨粉10倍水(w/w)煮沸3h，除去残渣，得到粗提液；
A2、絮凝：在粗提液中加入1％的絮凝剂，100rpm常温搅拌，过滤；
A3、过滤：在经步骤A2过滤后的粗提液中加入硅藻土拌土过滤，得提取液；
A4、配制：将步骤A3得到的提取液加水配成相当于生药质量10％的白芨提取液。
对比例4
本对比例提供了一种白芨提取液的制备方法，包括以下步骤：
A1、提取：将白芨粉采用6倍水煮沸3h，得第一滤液和药渣；将药渣加4倍水煮沸2h，得第二滤液，将第一滤液和第二滤液合并得粗提液；
A2、过滤：将粗提液加入硅藻土拌土过滤，得提取液；
A3、配制：将步骤A2所得的提取液与水混合，配成相当于生药质量10％白芨提取液。
效果验证1：促进半胱天冬酶-14(caspase-14)和博来霉素水解酶(BH)表达的实验
实验方法：
1、将HaCaT培养一段时间后，添加2mM的钙离子诱导细胞分化。
2、在培养基中分别加入不同浓度的山茶花提取液和白芨提取液，然后采用100Mj/cm2UVB照射，空白对照组为未经UVB照射的细胞且不加样品。
3、24小时后，收集细胞提取总蛋白，western blot检测caspase-14和BH的表达变化。
统计学处理：采用SPSS19.0中T检验统计分析空白对照组与其他实验组的差异，实验结果如表1和表2所示。
表1
Figure BDA0001426780310000061
Figure BDA0001426780310000071
表1中，空白对照组条带灰度值设为100；**表示显著性高，P<0.01；*表示显著差异，P<0.05。
表2
Figure BDA0001426780310000072
表2中，空白对照组条带灰度值设为100；**表示显著性高，P<0.01；*表示显著差异，P<0.05。
由表1和表2可知，山茶花提取液在能促进半胱天冬酶-14(Caspase-14)的表达、白芨提取液可促进博来霉素水解酶(BH)的表达。
实施例7-9
本实施例提供了一种保湿组合物，以保湿组合物的质量为100％计，包括表3所示的各组分。
对比例5-7
本对比例提供了一种保湿组合物，以保湿组合物的质量为100％计，包括表3所示的各组分。
表3
山茶花提取液 白芨提取液 水 透明质酸 神经酰胺
对照组 - - 100％ - -
实施例7 50％ 50％ - - -
实施例8 40％ 60％ - - -
实施例9 60％ 40％ - - -
对比例5 50％ - 50％ - -
对比例6 - 50％ 50％
对比例7 - - - 50％ 50％
效果验证2：人体测试
将实施例7-9和对比例5-7所示的保湿组合物以及100％水作为对照组，进行人体测试。通过测定使用添加山茶花提取液和白芨提取液样品后皮肤中游离氨基酸的变化值来评价保湿活性。
实验设计采用空白对照、随机、双盲的方法。受试志愿者人数为30人(30-60岁)，其中男性18人，女性12人。志愿者均为干性皮肤，皮肤相对粗糙暗沉，非过敏体质，且测试部位无疤痕或者毛发，测试季节为穿短袖季节，受试志愿者分别在左前臂和右前臂分别涂抹对照组样品(5％水+基础乳液)或者添加实施例7-9、对比例5-7的保湿组合物样品(5％活性物+基础乳液)，每天早晚分别涂抹一次(剂量为4mg/cm2)，测试周期为8周。第9周，用胶带对测试部位分别进行5次无损连续粘贴，采集试样，用HPLC检测游离氨基酸的含量以及测总蛋白的含量、反式尿刊酸的含量。
统计学处理：采用SPSS19.0中T检验统计分析对照组与其他实验组的差异，结果如表4所示。
表4
Figure BDA0001426780310000081
表4中，**表示显著性高，P<0.01；*表示显著差异，P<0.05。
结果分析表明，皮肤中氨基酸和反式尿刊酸及其衍生物来自于丝聚蛋白的分解与代谢，反式尿刊酸的含量与相关酶的表达与活性相关，且与紫外照射程度有关，紫外照射情况下会转换为顺式尿刊酸。志愿者与平时生活无差异，而涂抹添加实施例7-9的保湿组合物的样品区域的天然保湿因子氨基酸的含量和反式尿刊酸含量有明显提高。
综合所述，以上结果表明，本发明的保湿组合物可促进半胱天冬酶-14和博来霉素水解酶的表达，并促进天然保湿因子氨基酸和内源性UVB保护剂生成，使皮肤保湿的同时具有一定的抗紫外效果。
本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种保湿组合物，其特征在于，由以下质量百分含量的各组分组成：
山茶花提取液 40～60％；
白芨提取液 40～60％；
所述山茶花提取液的制备方法包括以下步骤：
A1、提取：将山茶花浸泡2h后，采用10倍水、60～70℃温度、搅拌转速为200rpm下搅拌提取2h，除去残渣，得到粗提液；
A2、除杂：在粗提液中加入40～50％乙醇，冷藏静置8h后，过滤；
A3、浓缩：将除杂后的粗提液经减压蒸馏除去乙醇；
A4、过滤：将浓缩后得到的提取液采用微滤膜进行微滤，至渗出液不再渗出，然后补充等量的水继续微滤至渗出液的量等于微滤前起始提取液的量；
A5、配制：将步骤A4制得的渗出液配制成相当于生药质量5％、且甘油质量浓度为5％的山茶花提取液，即可；
所述白芨提取液的制备方法包括以下步骤：
B1、提取：将白芨粉浸泡2h后，采用20倍水、75～85℃温度下、外循环设备提取3h，除去残渣，得到第一滤液；
B2、过滤：在滤液中加入硅藻土，用板框进行过滤，得第二滤液；
B3、微滤：将第二滤液采用微滤膜进行微滤，至得到为药材15倍质量的第一提取液；
B4、超滤：将第一提取液采用超滤膜进行超滤，得到为药材10倍质量的第二提取液，即生药10％的白芨提取液；
步骤A4中，所述微滤膜的截留分子量为200nm，操作压力为4～10bar，微滤温度为小于等于60℃；
步骤B3中，所述微滤膜的截留分子量为30nm，操作压力为2～6bar，微滤温度为小于等于85℃；
步骤B3中，所述超滤膜的截留分子量为3500～5000D，操作压力为6～8bar，微滤温度为小于等于85℃。
2.一种如权利要求1所述保湿组合物在制备保湿化妆品中的应用。
3.如权利要求2所述的保湿组合物在制备保湿化妆品中的应用，其特征在于，所述保湿化妆品中，保湿组合物的添加质量为5％～10％。
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