CN104911239A - 一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法，该方法包括以下的步骤：1）在将珍珠蛋白溶液中加入5～20倍pH值6.5～7.5的磷酸盐缓冲液，匀质；2）将匀质后混合液的进入100～120℃，0.15～0.2MPa环境下预处理20～60分钟处理；3）将混合液置于反应锅中，加入体系质量0.5%～2%的中性蛋白酶，在40～70℃温度中进行酶催化反应4～8小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠活性多肽。本发明将珍珠粉中功效成分进行分离，且在不破坏珍珠粉成分活性的基础下，进行珍珠粉重要成分的分离提取，珍珠粉中蛋白的获得，并纯化后酶解，更为有效发挥珍珠粉美白的作用。
Description
技术领域
本发明涉及珍珠深加工方法，尤其涉及一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法。
发明内容
目前，珍珠粉的应用过程中，曾相继遇到颗粒大小安全隐患、流动性差、不溶水以及功效成分难以释放等诸多问题，这些直接影响珍珠粉的应用领域。为能解决以上问题，业内已经向水溶性珍珠粉以及珍珠水解液发展。
中国发明专利（申请号：01139157.X 申请日：2001-12-19）公开了一种珍珠粉的生物酶解制备方法,其关键是以乳酸水溶液为溶剂,将珍珠溶解,并调整溶液的pH值至近中性再用酸回调至偏酸性,再放入适量生物活性酶催化分解其蛋白质,得到酶解珍珠胶液,再采用喷雾干燥将酶解珍珠胶液快速干燥,固化造粒,制得超细酶解珍珠粉。所制备的珍珠粉保留了珍珠中的多种氨基酸、微量元素等有效成份,并使珍珠中的碳酸钙转化为人体易吸收的活性钙,胃酸不溶解的角质蛋白酶解成易吸收的游离氨基酸。
中国发明专利（申请号：200710141569.X 申请日：2007-08-07）公开了一种制备珍珠活性肽的方法,它从新活的珍珠贝里取出珍珠粒,水洗干净,将珍珠粒与去离子水混合后,用磷酸盐缓冲溶液将混合液的PH值调至中性偏酸,然后用沙雷肽酶与珍珠粒进行酶水解反应；用滤网过滤分离得珍珠粒和澄清液,然后将反应液水煮灭酶；再将所得的溶液经喷雾干燥即得珍珠活性肽。
中国发明专利（申请号：200910114409.5 申请日：2009-09-18）公开了珍珠水解液的制备方法，其步骤如下：1)取珍珠粉置于盐酸水溶液中，搅拌，直至反应完全，用氨水调节该混合液的pH值至中性，离心，得沉淀A；2)沉淀A用纯净水溶解，再以氨水调节其pH值为7.5～8.5，离心，得沉淀B；3)沉淀B用纯净水溶解，加入酶进行酶解，酶解液离心，得上清液和沉淀C；所述的酶为蜗牛蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，加入量为沉淀B重量的0.3～1.05％；4)将沉淀C用纯净水溶解加酶进行二次酶解，离心，收集上清液；酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物，加入量为沉淀B重量的0.2～0.45％；5)合并两次上清液，煮沸，用孔径为1～3nm的纳滤膜过滤，即得。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明的目的是提供一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法，本该方法利用机械化学原理，快速无破损地分离珍珠功效成分，获得珍珠活性多肽，为珍珠护肤品和保健品提供原料。
为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法，该方法包括以下的步骤：
1）在将珍珠蛋白溶液中加入5～20倍pH值6.5～7.5的磷酸盐缓冲液，匀质；
2）将匀质后混合液的进入100～120℃，0.15～0.2MPa环境下预处理20～60分钟处理；
3）将混合液置于反应锅中，加入体系质量0.5%～2%的中性蛋白酶，在40～70℃温度中进行酶催化反应4～8小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠活性多肽。
作为优选，所述的珍珠活性多肽灭菌处理，无菌灌装，压盖制成珍珠活性多肽。
本发明由于采用了上述的技术方案，将珍珠粉中功效成分进行分离，并将机械化学原理应用于制备方法中。机械方法能在不破坏珍珠粉成分活性的基础下，进行珍珠粉重要成分的分离提取，珍珠粉中蛋白的获得，并纯化后酶解，能够更为有效发挥珍珠粉美白的作用。此方法的应用，极大的扩大珍珠粉的应用领域，并精细化珍珠粉的深加工应用。
附图说明
图1为实施例1的经压力温度处理过后的珍珠蛋白相比未处理过的珍珠蛋白酶解效果存在明显的提升作用。
图2为实施例1制得的珍珠活性多肽成分分析图。
图3实施例1制得的珍珠复合美白因子对酪氨酸酶活性的影响图。
图4 为实施例1制得的珍珠活性多肽对细胞生长的影响图。
图5为实施例1制得的珍珠复合美白因子对细胞内黑色素含量的影响图。
图6为显微镜观察珍珠复合美白因子对细胞的影响，a c分别表示添加珍珠复合美白因子24h和48h的细胞生长情况，b d分别表示未添加珍珠复合美白因子24h和48h的细胞生长情况。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明做进一步详细说明，但本发明不仅限于以下实施例。
实施例1
一种从珍珠中分离得到可溶食用钙的方法，包括以下原料和步骤：将珍珠粉碎至纳米级10～100nm，然后加入6份的去离子水，通过压力1MPa和温度50℃的协同，将珍珠粉进行微乳化，然后将珍珠粉乳液进行电渗析，选择压力为30～40V,流速60～80L/h，浓水池装去离子水5L，淡水池装珍珠粉乳液15L，进行循环脱钙Ca2+ 1～３h，每隔15min取样测定珍珠粉乳液中的电导率和钙盐含量。将获得含钙盐溶液过滤得到透明清夜，灭菌处理，无菌灌装，即为珍珠可溶性液体钙。
将获得的珍珠蛋白溶液中加入10倍pH值7.0的磷酸盐缓冲液，匀质；首先进入120℃、0.15MPa环境下预处理40分钟处理，然后将混合液置于反应锅中，加入体系质量1.0%的中性蛋白酶，在40℃温度中进行酶催化反应6小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠活性多肽。
实施例2
一种从珍珠中分离得到可溶食用钙的方法，包括以下原料和步骤：将珍珠粉碎至纳米级10～100nm，然后加入10份的去离子水，通过压力10MPa和温度40℃的协同，将珍珠粉进行微乳化，然后将珍珠粉乳液进行电渗析，选择压力为30～40V,流速60～80L/h，浓水池装去离子水5L，淡水池装珍珠粉乳液10L，进行循环脱钙Ca2+ 2h。获得含钙盐溶液真空干燥研磨制成粉状珍珠蛋白保健品和化妆品原料。
将获得的珍珠蛋白溶液中加入15倍pH值6.5的磷酸盐缓冲液，匀质；首先进入100℃、0.2MPa环境下预处理40分钟处理，然后将混合液置于反应锅中，加入体系质量1.0%的中性蛋白酶，在40℃温度中进行酶催化反应6小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠活性多肽。
实施例3
一种从珍珠中分离得到可溶食用钙的方法，包括以下原料和步骤：将珍珠粉碎至纳米级10～100nm，然后加入10份的去离子水，通过压力15MPa和温度30℃的协同，将珍珠粉进行微乳化，然后将珍珠粉乳液进行电渗析，选择压力为30～40V,流速60～80L/h，浓水池装去离子水2L，淡水池装珍珠粉乳液10L，进行循环脱钙Ca2+ 2h。获得含钙盐溶液真空干燥研磨制成粉状珍珠蛋白保健品和化妆品原料。
将获得的珍珠蛋白溶液中加入8倍pH值7.5的磷酸盐缓冲液，匀质；首先进入120℃、0.15MPa环境下预处理60分钟处理，然后将混合液置于反应锅中，加入体系质量1.0%的中性蛋白酶，在50℃温度中进行酶催化反应5小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠活性多肽。
试验例1
1、实施例1制备的珍珠活性多肽（以下称珍珠复合美白因子溶液）成分分析
经过氨基酸分析仪、凯式定氮仪和原子吸收分光光度计等仪器的精密检测，获得如下数据。这些数据说明，较之以往的水解珍珠液蛋白含量>0.15%，珍珠复合美白因子溶液中含有较高的蛋白质含量为1.58%，蛋白质含量明显升高。并且未检测到钙离子，说明溶液中不再存在钙元素。
表1珍珠复合美白因子溶液成分分析表
2、分子量分析
进行液相串联质谱分析，看到珍珠复合美白因子中有效成分分子量均在1000Da以内，说明蛋白质酶解完全，多肽为寡肽、三肽、二肽以及各种氨基酸。有益于皮肤吸收，以及充分发挥多肽和氨基酸的活性功能。
、抑制黑色素
①珍珠复合美白因子溶液对酪氨酸酶的影响
珍珠复合美白因子能明显抑制细胞内酪氨酸酶活性。8%浓度时，珍珠复合美白因子对细胞内酪氨酸酶活性达到半抑制剂量。
②珍珠复合美白因子溶液对B16黑色素瘤细胞的影响
A、对细胞生长的影响
根据B16细胞生长的结果，样品浓度达到10%时对细胞的存活率仍几乎没有影响，并且相对于对照，珍珠复合美白因子还能促进细胞生长。
B、 对细胞中黑色素的影响
结果表明，4%浓度时，珍珠复合美白因子溶液能明显减少黑色素的相对含量。
Claims (2)
1.一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：
1）在将珍珠蛋白溶液中加入5～20倍pH值6.5～7.5的磷酸盐缓冲液，匀质；
2）将匀质后混合液的进入100～120℃，0.15～0.2MPa环境下预处理20～60分钟处理；
3）将混合液置于反应锅中，加入体系质量0.5%～2%的中性蛋白酶，在40～70℃温度中进行酶催化反应4～8小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠活性多肽。
2.根据权利要求1所述的一种从珍珠蛋白中酶解分离珍珠活性多肽的方法，其特征在于珍珠活性多肽灭菌处理，无菌灌装，压盖制成珍珠活性多肽。
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