KR20160134362A - 감미질 및 결정화가 개선된 사이코스 혼합당 조성물 - Google Patents

감미질 및 결정화가 개선된 사이코스 혼합당 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 사이코스, 포도당 및 과당을 포함하며, 감미질 및 결정화가 개선된 혼합당 조성물, 및 사이코스를 포함하는 혼합당 조성물의 결정화 방지 방법에 관한 것이다.

Description

감미질 및 결정화가 개선된 사이코스 혼합당 조성물 {Saccharide mixture containing psicose with improved sweetness quality and crystallization}
본 발명은 사이코스를 함유하며 감미질 및 결정화가 개선된 혼합당 조성물, 및 사이코스를 포함하는 혼합당 조성물의 결정화 방지 방법에 관한 것이다.
설탕은 수크로오스를 주성분으로 하는 것으로 음식에 첨가하여 단맛을 내는 대표적인 감미료 중의 하나이다. 설탕은 뛰어난 감미도를 지니고 있어 과거부터 여러 음식, 가공 식품 등에 첨가되어 음식의 맛을 좋게 하고 입맛을 돋우는 가장 선호되는 감미료로 여겨져 왔다. 그러나 최근, 설탕의 유해성이 계속하여 밝혀짐에 따라 문제가 제기되고 있다. 구체적으로, 설탕의 과잉 섭취가 충치는 물론 비만, 당뇨병 등 각종 생활 습관병의 큰 원인으로 지적되고 있어 이를 대체할 만한 감미료 개발의 필요성이 전세계적으로 대두되고 있는 실정이다.
이에 따라, 설탕을 대체할 만한 감미도를 지니면서도 저칼로리이고, 나아가 단순히 당류의 흡수를 저해하는 것만으로 당의 과잉 섭취를 차단하는 감미료가 아닌, 보다 개선된 대체 감미료의 개발이 지속적으로 요구되고 있다.
사이코스(Pscicose)는 과당(D-fructose)의 에피머로서 희소당으로 알려진 기능성 당류의 일종으로, 설탕의 약 60 내지 70%의 높은 감미도를 나타내면서도 열량은 거의 제로 칼로리에 가까워 당뇨병의 예방 및 개선에 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 또한 사이코스는 용해성도 우수한 것으로 알려져 있어, 식품에의 활용이 주목되고 있는 소재 중 하나이다.
그러나, 사이코스를 단독으로 사용하여 식품 첨가용 감미료로 활용하는 것은 사이코스가 설탕에 비해 상대적으로 낮은 감미도를 가질 뿐만 아니라 감미질도 설탕과 달라서, 기존의 설탕의 단맛에 익숙해진 소비자들의 입맛을 충족시키기 어려워 소비자 기호도에 악영향을 미치는 문제가 발생하게 된다.
따라서, 사이코스에 다양한 종류의 단당류, 이당류 또는 고감미도 감미료 등을 추가하여 감미도 및/또는 감미질을 개선하고자 하는 시도가 있었다. 다만, 혼합당의 경우 당조성에 따라 백탁, 결정화, 또는 감미질 퇴하 등의 문제점이 있어, 이를 해결할 필요가 있으며, 특히 다른 당류의 첨가량을 증가시킬수록 물성이 더욱 나빠질 수 있다.
따라서, 사이코스를 포함하는 혼합당의 감미질 및 물성 등을 개선한 혼합당 조성물을 제공할 필요가 있다.
본 발명의 목적은 사이코스의 감미도 및 감미질을 개선한, 사이코스 함유 혼합당 조성물을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명의 목적은, 사이코스 함유 혼합당 조성물의 결정 석출 또는 백탁 발생을 방지하거나 지연시키는 사이코스 함유 혼합당 조성물, 실온뿐만 아니라 저온, 결정 유도물질의 존재 또는 장기간의 저장 등 가혹한 조건에서도 결정 석출 또는 백탁 현상이 발생하지 않는 안정화된 사이코스 함유 혼합당 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 사이코스 함유 혼합당 조성물을 포함하는 음식물, 의약품 또는 의약 부외품을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가 목적은 사이코스, 과당 및 포도당을 포함하는 혼합당 조성물중, 포도당 함량을 특정 조성범위로 조절함으로써, 혼합당 조성물의 당결정 생성을 방지하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 사이코스를 포함하는 혼합당의 감미질 및 물성 등을 개선한 혼합당 조성물 및 사이코스를 포함하는 혼합당 조성물의 당결정 생성을 방지하는 방법에 관한 것이다.
구체적으로, 본 발명은 사이코스, 포도당 및 과당을 함유하는 혼합당 조성물에 포함된 전체 당류의 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 포도당 함량이 24 중량부 이하인 무결정화 혼합당 조성물에 관한 것이다.. 상기 혼합당 조성물의 사이코스의 감미질을 더욱 개선함과 동시에, 혼합당의 백탁 및 결정화를 방지할 수 있다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물은 혼합당 조성물에 포함된 전체 당류의 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 포도당 함량이 24 중량부 이하, 20 중량부 이하, 18 중량부 이하, 15 중량부 이하, 10 중량부 이하, 또는 5 중량부 이하일 수 있다. 또한, 혼합당 조성물에 포함된 전체 당류의 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 포도당 함량이 24 중량부 이하이고, 하한치는 0.1 중량부 이상, 또는 1 중량부 이상일 수 있으며 예를 들면 0.1 내지 24 중량부일 수 있다. 상기 혼합당중 포도당 함량을 조절함으로써, 상기 포도당, 사이코스 및 과당을 함유하는 혼합당 조성물의 결정화 또는 백탁 현상을 방지할 수 있다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물은 포도당, 사이코스 및 과당만을 함유하거나,추가로 여러 가지 단당류, 이당류 및 올리고당을 포함할 수 있다.
또한, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 과당의 함량이 30 중량부 미만, 25 중량부 미만, 20 중량부 미만, 15 중량부 미만, 10 중량부 미만, 5 중량부 미만일 수 있다. 과당의 ?t량을 적절히 조절함으로써 또한 사이코스를 포함하는 혼합당 조성물의 감미질을 개선할 수 있다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물은 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당 의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 과당의 함량이 25 중량부 이하이고, 상기 과당과 사이코스의 합계 함량이 70 중량부를 초과하는 것일 수 있다. 또한, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 포도당 함량이 24 중량부 이하이고, 과당의 함량이 15 중량부 이하이며, 사이코스 함량이 60 중량부 이상인 혼합당 조성물이 제공될 수 있다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물에 상기 사이코스, 포도당 또는 과당은 각각 D-사이코스, D-포도당, 또는 D-과당인 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물을 사이코스를 함유하여 칼로리가 낮으며, 포도당 및 과당을 포함하며 감미질이 개선되며, 결정형성 및 백탁이 방지된 혼합당 조성물이 제공된다. 본 발명에 따른 혼합당 조성물은 무결정화 혼합당으로서, 예를 들면, -20℃ 내지 38℃ 온도조건에서 1년 동안 보관시 당결정이 석출되지 않는 것일 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서 상기 혼합당은 사이코스, 포도당 및 과당을 각각 혼합하여 상기 혼합당 조성으로 제조할 수도 있고, 사이코스 결정화 모액과 포도당 결정화 모액을 혼합하여 제조할 수 있다. 결정화 모액을 사용하여 제조하는 경우, 예를 들면 사이코스 함량이 80 중량% 이상인 사이코스 결정화 모액과, 포도당 함량이 80 중량% 이상인 포도당 결정화 모액을 혼합하여 제조될 수 있다.
상기 사이코스 결정화 모액은 주성분이 사이코스인 것으로서, 전체 당류 고형분 함량중 사이코스가 50중량% 이상, 예를 들면, 60중량% 이상, 70 중량% 이상, 80 중량% 이상일 수 있으며, 구체적으로 전체 당류 고형분 함량을 기준으로 80 내지 99.9 중량%의 사이코스를 함유하며, 추가적으로 여러 가지 단당류, 이당류 또는 올리고당으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있으며, 예를 들면 포도당; 과당; 여러 가지 올리고당; 및 알로스, 타가토스, 알로스, 알트로오스 등과 같은 다양한 희소당을 함유할 수 있다.
상기 포도당 결정화 모액은 주성분이 포도당인 것으로서, 전체 당류 고형분 함량중 포도당이 50중량% 이상, 예를 들면, 60중량% 이상, 70 중량% 이상, 80 중량% 이상일 수 있으며, 구체적으로 전체 당류 고형분 함량을 기준으로 80 내지 99.9 중량%의 포도당을 함유하며, 추가적으로 여러 가지 단당류, 이당류 또는 올리고당으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
본 명세서에서, 당류의 결정화 모액이라 함은 목적 당류를 함유하는 제조 원액에서 목적 당류를 결정화 또는 분말화 처리를 수행하여 결정 또는 분말을 형성하고 그 결과물을 분리한 후 남은 모액을 의미하며, 상기 목적 당류가 사이코스인 경우 사이코스 결정화 모액이고, 상기 목적 당류가 포도당인 경우 포도당 결정화 모액이라고 한다. 통상 포도당 결정화 모액을 하이드롤(hydrol)이라고도 한다.
사이코스 결정화 모액의 예로는 D-사이코스 에피머화 효소가 들어있는 엔시퍼 균주를 고정화 시킨 담체에 의한 과당의 D-사이코스로의 전환을 포함하는, D-사이코스를 연속으로 생산하는 방법에 의해 D-사이코스를 제조하였다. 상기 방법에 의해 제조된 D-사이코스 용액을 Ca+ type 분리 수지를 이용하여 고순도로 분리하여 80중량%까지 농축하여 결정화를 진행하였다. 결정화 공정을 거쳐 탈수 공정에서 결정이 되지 않고 탈수되어 나온 탈수액을 사이코스 결정화 모액으로 얻을 수 있다.
포도당 결정화 모액의 예로는 포도당 결정을 수득하고 남은 결정 모액으로서, 통상 모액에 함유된 당류는 총 당류 고형분 대비 80~99중량%의 포도당 및 1~20 중량%의 올리고당(이당류, 삼당류, 사당류 등)을 함유한다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물은 사이코스, 포도당 및 과당을 포함하는 것으로서, 바람직하게는 혼합당 고형분 100 중량부를 기준으로, 포도당 함량이 24 중량부 이하로 포함하는 것일 수 있다. 본 발명에 따른 호합당 조성물은 사이코스, 포도당 및 D-과당 성분 이외에, 추가로 다른 종류의 단당류, 이당류 및는 올리고당으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 당류를 추가로 포함할 수 있다.
상기 사이코스는 화학적 합성, 또는 사이코스 에피머화 효소를 이용한 생물학적 방법으로 수행할 수 있으며, 바람직하게는 생물학적 방법으로 수행할 수 있다. 이에, 상기 사이코스는 사이코스 에피머화 효소, 상기 효소를 생산하는 균주의균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 및 상기 파쇄물 또는 배양물의 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 사이코스 생산용 조성물을, 과당-함유 원료와 반응하여 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 일예에서, 생물학적 방법에 따라 사이코스를 제조하는 방법으로는 사이코스 에피머화 효소를 생산하는 균주 또는 사이코스 에피머화 효소를 암호화하는 유전자가 도입된 재조합 균주를 배양하고, 이로부터 얻어진 사이코스 에피머화 효소를 과당-함유 원료와 반응하여 생산할 수 있다. 상기 사이코스 에피머화 효소는 액상 반응 또는 고정화 효소를 이용한 고상 반응으로 수행될 수 있다.
또는, 사이코스 에피머화 효소를 생산하는 균주 또는 사이코스 에피머화 효소를 암호화하는 유전자가 도입된 재조합 균주를 얻고, 균주의균체, 상기 균주의 배양물, 상기 균주의 파쇄물, 및 상기 파쇄물 또는 배양물의 추출물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 사이코스 생산용 조성물을, 과당-함유 원료와 반응하여 제조될 수 있다. 사이코스 에피머화 효소를 생산하는 균주의 균체를 이용하여 사이코스를 제조하는 경우 액상 반응 또는 고정화 균체를 이용한 고상 반응으로 수행될 수 있다.
본 발명의 구체적 일예에서, 사이코스 에피머화 효소를 생산하는 균주로는높은 안정성을 가지면서도 고수율로 사이코스 에피머화 효소를 생산할 수 있는 균주일 수 있으며. 상기 재조합 균주는 다양한 숙주세포, 예컨대 대장균, 바실러스속균주, 살모넬라속균주 및 코리네박테리움속 균주 등을 사용할 수 있으나, 바람직하게는 GRAS 균주인코리네박테리움속 균주일 수 있으며, 코리네박테리움 글루타리쿰일 수 있다.
재조합 균주를 이용한 경우 사이코스 에피머화 효소는 다양한 균주에서 유래된 효소의 암호화 유전자를 사용할 수 있으며, 예를 들면 한국특허공개 2014-0021974에 기재된 트리포네마 프리미티아 유래 효소, 한국특허공개 2014-0080282에 기재된 루미노코코 스토르크 유래 효소 및 한국등록특허 10-1318422호에 기재된 클로스티리디움 신댄스 유래 효소일 수 있으며, 또한 엔시퍼 아드해렌스 유래 효소일 수 있다. 구체적인 일예에서, 본 발명에 따른 사이코스 에피머화 효소는 클로스티리디움신댄스 유래 효소일 수 있으며, 예를 들면 서열번호 7의 아미노산 서열을 가지며, 서열번호 8 또는 서열번호 9의 핵산서열을 포함한다. 서열번호 8의 핵산서열은 대장균 최적화 핵산서열이고, 서열번호 9은 코리네박테리움에 적합하게 변형된 핵산서열이다.
본 발명의 일예에 따른 재조합 균주의 제조에 있어서, 상기 사이코스 에피머화 효소를 암호화하는 핵산서열의 상부에 위치하는 조절 서열을 사용하여 효소의 발현을 조절할 수 있으며, 조절서열은 전사 프로모터를 필수적으로 포함하며, 추가로 리보솜 결합 영역 및/또는 스페이서 서열 등을 포함할 수 있다. 상기 조절 서열을 구성하는 요소들은 직접 연결되거나 1개 내지 100개의 염기, 예를 들면 5개 내지 80 염기를 가지는 핵산서열의 링커를 하나 이상 포함하여 연결될 수 있다.
일 구체예에서, 상기 전사 프로모터는 코리네박테리움속 균주에서사이코스 에피머화 효소를 암호화하는 핵산서열을 발현하는 핵산분자일 수 있으나, tac1, tac2, trc, sod 프로모터일 수 있다. sod 프로모터는 코리네박테리움 글루타리쿰에서 유래된 것이며, 바람직하게는 서열번호 1의 핵산서열을 코어영역으로 포함한다. trc프로모터는 대장균 유래 프로모터로서 trp프로모터과 lac UV5 프로모터의 조합으로 제조된 것이다. Tac1 프로모터는 대장균 유래 프로모터로서, trp프로모터과 lac UV5 프로모터의 조합으로 제조된 것이다. Tac2 프로모터는 대장균 유래 프로모터로서 trp 프로모터와 lac UV5 프로모터의 조합으로 제조된 것으로서 상기 Tac1 프로모터의 서열을 변형하여 최적화한 형태이다.
상기 리보좀 결합 영역과 스페이서는 화학적으로 직접 연결되거나 그 중간에 링커 핵산서열을 개재하여 간적접으로 연결될 수 있다. 본 발명의 일예에서리보좀 결합 영역(ribosome binding region) 및 스페이서 서열은 5'부터 3'순으로 순차적으로 연결된 하나의 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 본 발명의 일예에 따른 프로모터 서열, 리보좀 결합 영역(ribosome binding region) 및 스페이서 서열의 핵산서열을 하기 표 1에 나타낸다. 표 1에서 진하게 밑줄로 표시된 부분은 조절서열중, 리보솜결합영역, 스페이서 서열, 링커서열 등을 나타낸다.
서열
번호		 서열(5'--> 3') 명명
1 aagcgcc tcatcagcgg taaccatca cgggttcgggt gcgaaaaacc atgccataac aggaatgttc ctttcgaaaa ttgaggaagc cttatgccct tcaaccctac ttagctgcca attattccgg gcttgtgacc cgctacccgataaataggtc ggctgaaaaa tttcgttgca atatcaacaa aaaggcctat cattgggaggtgtcgcacca agtacttttg cgaagcgcca tctgacggat tttcaaaaga tgtatatgct cggtgcggaa acctac
gaaagga ttttttaccc atggctg tatacgaact cccagaactc gactacgcat acgac
gaaagga ttacaaa 		Sod promoter
2 tgacaattaatcatcggctcgtatattgt gtggaattgtgagcggataacaatttcacacaggaaacagaattcccggg gaaagga ttacaaa tac1 promoter
3 tgacaattaatcatccggctcgtataatgt taacaatttgtggaattgtgagcggacacacaggaaacagaccatggaattcgagctcggtacccggg gaaagga ttacaaa Tac2 promoter
4 tgacaattaatcatcggcctcgtataatgt trc promoter
5 gaaagga Ribosome binding region
6 ttacaaa Spacer sequence
본 발명에 따른 사이코스 에피머화 효소는 효소활성 및 열안정성이 우수한 것이 바람직하고, 이에 본 발명의 구체예에서, 전사 프로모터 또는 조절서열은 사이코스 에피머화 효소를 코딩하는 유전자와의 조합이 중요하며, 본 발명에 사용된 사이코스 에피머화 효소와는 tac1, tac2, trc, sod 프로모터 모두 적정 이상의 단백질 발현을 제공할 수 있으며, sod 프로모터를 사용한 경우에는 단백질의 폴딩(folding)이 견고하여 열안정성이 높게 나타나는 결과를 얻을 수 있어 더욱 바람직하다.
재조합 균주를 이용한 사이코스 생산방법 등은 한국특허공개 2014-0021974, 한국특허공개 2014-0080282 및 한국등록특허 10-1318422호에 기재된 방법에 따라 수행될 수 있으나 특별히 한정되지 않는다. 상기 사이코스 생산 방법에 있어서, 효율적인 사이코스 생산을 위하여, 기질로서 사용되는 과당의 농도는 전체 반응물 기준으로 40 내지 75%(w/v), 예컨대, 50 내지 75%(w/v)일 수 있다. 과당의 농도가 상기 범위보다 낮으면 경제성이 낮아지고, 상기 범위보다 높으면 과당이 잘 용해되지 않으므로, 과당의 농도는 상기 범위로 하는 것이 좋다. 상기 과당은 완충용액 또는 물(예컨대 증류수)에 용해된 용액 상태로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 혼합당 조성물은 결정화가 방지되고, 감미질을 개선된 것으로서, 다양한 식품, 의약품 또는 의약부외품 등에 감미료로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 사이코스를 포함하는 혼합당 조성물 및 이의 결정화 방지 방법은, 사이코스를 포함하는 혼합당의 감미질 및 물성 등을 개선하여, 구체적으로는 실온뿐만 아니라 저온, 결정 유도물질의 존재 또는 장기간의 저장 등 가혹한 조건에서도 결정 석출 또는 백탁 현상이 발생하지 않는 안정화된 사이코스 함유 혼합당 조성물을 제공하여 음식물, 의약품, 의약부외품 또는 화장품 등 다양한 제품에 적용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 2에 따른 고순도 사이코스 시럽 조성물의 포도당 농도별 결정 가속 테스트 결과를 나타내는 사진이다.
도 2는 본 발명의 실시예 3에 따른 고순도 사이코스 시럽 조성물의 포도당 농도별 결정 가속 테스트 결과를 나타내는 사진이다.
도 3은 본 발명의 실시예 4에 따라, 장기간 보관 시 고순도 사이코스 시럽 조성물의 포도당 농도별 결정 가속 테스트 결과를 나타내는 사진이다.
도 4은 본 발명 사용되는 사이코스 시럽 제조를 위한 발현 재조합 벡터(pCES_sodCDPE)의 일예를 도시한 도면이다.
도 5는 본 발명의 실시예 1에 따라, 액상 과당 시럽에서 결정을 분리 및 건조하고, HPLC로 분석한 결과 그래프이다.
본 발명을 하기 실시예에 의해 더 상세하게 설명된다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명의 바람직한 실시예 일뿐, 본 발명은 이에 한정되지 않는다.
제조예 1: 사이코스 결정화 모액 제조
크로스트리디움 신댄스(Clostridiuim scindens ATCC 35704)로부터 유래된 사이코스 에피머화 효소의 암호화 유전자(DPE gene; Gene bank: EDS06411.1)를, 대장균에 최적화하여 변형한 형태의 폴리뉴클리오티드로 합성하고 CDPE라 명명하였다. 대장균에 최적화된 폴리뉴클리오티드(서열번호 2)와 pET21a 벡터로부터 확보한 sod 프로모터와 T7 터미네이터를 피씨알을 통해 각각의 주형으로 확보하였고, 이를 오버랩 피씨알(PCR) 법으로 하나의 주형으로 연결하여 T-vector cloning을 통해 pGEM T-easy vector에 클로닝하여, sod 프로모터(서열번호 1), 서열번호 8의 최적화 CDPE 서열 및 T7-터미네이터를 포함하는 폴리뉴클레오티드의 서열을 확인하였다.
상기 확인된 전체 폴리뉴클레오티드를 제한효소 NotI과 XbaI(NEB)을 사용하여 발현벡터인 pCES208(J. Microbiol. Biotechnol., 18:639-647, 2008)의 동일한 제한효소 부위에 삽입하여 재조합 벡터 pCES208/사이코스 에피머화 효소(pCES_sodCDPE)를 제조하였다. 상기 제조된 재조합 벡터(pCES_sodCDPE)의 개열지도를 도 2에 개시하였다.
상기 제조된 재조합 벡터(pCES_sodCDPE) 플라스미드를 전기천공법(electroporation)을 사용하여 코리네박테리움 글루타리쿰을 형질전환시켰다. 콜로니를 picking하여 카나마이신(Kanamycin)을 최종농도 15ug/ml로 첨가한 LB 배지(트립톤 10g/L, NaCl 10g/L, 효모 추출물 5g/L) 4ml에 접종한 후, 배양조건 30? 및 250rpm에서 약 16시간 동안 배양하였다. 그리고 나서 상기 배양액 중 1ml을 수득하여 15ug/ml의 카나마이신을 포함하고 있는 100ml LB 배지에 접종하여 본 배양을 16시간 이상 진행하였다. Beadbeater를 이용하여 배양한 세포를 용해(lysis)시킨 후 상등액만 취득하여 샘플버퍼와 1 : 1로 혼합 후 100 ℃에서 5분간 가열한다. 준비한 샘플은 12% SDS-PAGE gel (조성: running gel - 3.3 ml H2O, 4.0 ml 30% acrylamide, 2.5 ml 1.5M Tris buffer(pH 8.8), 100 ㎕ 10% SDS, 100 ㎕, 10% APS, 4 ㎕ TEMED / stacking gel - 1.4 ml H2O, 0.33 ml 30% acrylamide, 0.25 ml 1.0M Tris buffer(pH 6.8), 20 ㎕ 10% SDS, 20 ㎕ 10% APS, 2 ㎕ TEMED)에 180V로 약 50 분 동안 전기영동하여 단백질 발현을 확인하였다. CDPE의 발현을 SDS-PAGE gel상에서 확인 후 정확한 발현량의 측정을 위해 Ni-NTA resin을 이용한 His-tag정제 진행하여, 계산식(발현율(%) = (Purified protein(mg) / Total soluble protein(mg)) * 100)을 이용하여 발현율 계산하였다. 상기 제조된 형질전환 코리네박테리움 글루타리쿰은 전체 수용성 단백질을 16.62mg 및 정제된 효소 단백질 1.74 mg을 생산하였다.
1-2: 사이코스 시럽의 제조
제조예 1-1에서 얻어진 사이코스 에피머화 효소를 생산하는 재조합 균주를 이용하여 과당으로부터 사이코스를 제조하고자, 균주 배양에서 원심분리로 세포를 회수하였다.
그런 후에 상기 세포 현탁액에 최종 부피에 유화제(M-1695)를 0.05% (w/v) 처리하여 35℃(± 5℃)에서 60 분간 처리하였다. 반응이 완료된 균체는 다시 원심분리기를 이용하여 유화제가 포함된 상등액은 제거한 뒤 균체를 회수하였다.
고정화 비드 제조를 위하여, 상기 회수된 균체는 D.W.와 혼합하여 최종 균체 농도 5% (w/v)로 맞추고, 물에 용해된 4% (w/v) 알긴산과 회수된 균체 5%(w/v)를 1:1로 혼합하고, 혼합시 생성된 기포를 제거하기 위해 4 ℃에서 냉장 보관하였다. 상기 냉장 보관된 혼합액은 Neddle (내경 0.20~0.30mm)을 통해 혼합액이 사출되어 방울 형태로 형성되며 무게에 의해 낙하하게 되며, 낙하 된 혼합액은 미리 제조된 100mM 염화칼슘 (CaCl2) 용액으로 떨어뜨려 경화시켜 구형 또는 타원형의 비드를(지름 2.0~2.2mm) 형성하였다. 상기 형성된 비드들은 100mM 염화칼슘 용액에 담그어 교반기에 의해 골고루 섞어지면서 더욱 경화되도록 하였다.
상기 혼합액이 모두 사출된 후에, 4~6시간 냉장 보관하면서 비드를 더욱 경화시킨 뒤에 새로운 100mM 염화칼슘 용액과 교체하여 냉장 상태에서 약 6시간 정도 경화를 시켰다. 경화가 완료된 비드는 걷어내 물기를 완전히 제거한 후, 비드 부피 대비 3배 부피의 물을 투입한 후 10분간 교반하고, 이러한 과정을 3회 처리하여 염화칼슘 용액을 제거하였다. 세척된 비드들은 망간 소킹을 위하여 물기를 완전 제거한 후, 10mM 망간이 포함된 40 brix (%) 반응 기질을 비드 부피 대비 3 배 부피로 투입한 후 10분간 교반하고, 이러한 처리를 3회 이상 처리하여 10mM 망간이 포함된 반응 기질로 교체하였다. 반응 기질은 pH 6.8~7.2로 3N NaOH에 의해 조절되며, 생산물의 종류에 따라 액상 과당 또는 결정 과당이 반응 기질이 될 수 있다. 10mM 망간이 포함된 반응 기질로 교체된 비드들은 반응조로 옮겨진 뒤, 반응 온도 50?에서 약 30~60분간 반응하여 망간 및 과당으로 비드의 소킹 작업을 완료하였다. 소킹이 완료된 비드는 지름이 약 1.6~1.8 mm로 줄어들며 강도 또한 증가하게 된다. 소킹이 완료된 비드들의 기질을 제거 후 고정화 반응 컬럼에 충진 후 사이코스 시럽 생산에 이용하였다.
<고정화 컬럼 반응조건>
반응 온도: 컬럼 자켓 내부 온도 50 ℃
기질 유속: 0.5 SV (space velocity L. h-1)
반응 기질: 결정 과당 40brix, pH 6.8~7.2,
비드 제조: 2.5%(w/w) 균체, 2%(w/w) 알긴산 혼합 및 10mM Mn2 + soaking
상기 고정화 반응 컬럼에, 원료 용액이 75 %의 고형분을 포함하고, 전체 고형분 함량이 100 중량부일 때, 과당의 함량이 92 중량부로 포함하는 원료를 제공하여 두 가지 조성의 혼합당인 사이코스 시럽을 제조하였다. 즉, 상기 반응액으로부터 포도당:과당:사이코스:올리고당의 중량비로 포도당:과당:사이코스:올리고당=6:67:25:2인 25(w/w)% 사이코스 시럽을 수득하여 하기 실시예에 사용하였다.
1-3: 사이코스 결정화 모액의 제조
제조예 1-2에서 얻어진 사이코스 시럽을 유색 및 이온 성분 등의 불순물을 제거하기 위해 양이온 교환수지, 음이온 교환수지 및 양이온과 음이온교환수지가 6혼합된 수지로 충진된 상온의 컬럼에 시간당 이온교환수지 2배 부피의 속도로 통액 시켜 탈염시킨 후, 칼슘(Ca2 +) 타입의 이온교환수지로 충진된 크로마토그래피를 이용하여 고순도의 사이코스 용액으로 분리하여 사이코스 함량이 80중량%가 될 때까지 농축하여 결정화를 진행하였다. 결정화 공정을 거쳐 탈수 공정에서 결정이 되지 않고 탈수되어 나온 탈수액을 사이코스 결정화 모액으로 수득하였으며, 상기 모액은 65.1 Bx이고,고형분 조성으로 과당 8.4중량% 및 사이코스 91.6중량%을 포함하였다.
실시예 1: 과당-함유 시럽의 결정화 물질
시판되는 액상과당 42 (과당 39.5중량% 및 포도당 53.2중량%) 및 액상과당 55 (과당 54.0중량% 및 포도당 37.0중량%) 시럽 중에서 결정이 생성된 것을 채취하여 5,000 RPM에서 30분 동안 원심분리를 수행한 후에, 상등액을 버리고 결정부분을 취하였다. 완벽하게 시럽 성분을 제거하기 위해, 에탄올로 세척하면서 5 μm 멤브레인 필터를 사용하여 진공여과 하였다. 필터에 통과된 수용액을 버리고, 필터에 남은 결정을 60 ℃ 오븐에 하루 동안 건조하였다.
건조된 결정을 HPLC 분석한 결과, 포도당 80 중량%로 결정의 주성분으로 표 2과 도 5에 나타내었다. HPLC 당조성 분석은 Biorad사의 Aminex HPX-87C 컬럼 (80 ℃)을 사용하여 물 용매를 0.6ml/min 유속으로 샘플 10 μL 주입하여 RI로 검출하였다. 따라서 과당 시럽에서 생성된 결정은 시럽 내의 포도당에 의한 것임을 알 수 있었다.
구분 4당류 이상 3당류 2당류 포도당 과당 에탄올
당조성 0.5% 0.4% 1.4% 80.6% 13.1% 4.0%
실시예 2: 결정화 시럽 조성물의 제조
제조예 1에서 고순도 분리를 통해 95중량% 이상의 사이코스 함량을 포함하는 시럽을 결정화 후 나오는 결정 모액과 포도당 결정 후 나오는 결정 모액을 일정 혼합비로 혼합하여 고순도 사이코스 시럽을 제조하였다.
구체적으로, 제조예 1에서 얻은 사이코스 결정 모액 (삼양제넥스, 65.1 Bx, 고형분조성: 과당 8.4중량%, 사이코스 91.6중량%)과 제조예 2에서 얻은 포도당 결정 모액(하이드롤) (삼양제넥스, 65.3 Bx, 고형분조성: 이당류 이상 8.7 중량%, 포도당 91.3중량%)을 이용하여, 표 3에 기재된 다양한 혼합비로 혼합하여 제조한 시럽 조성물를 제조하였다. 상기 시럽 조성물은 각각 포도당 함량 10중량%, 20중량%, 30중량%, 40중량%, 또는 50중량%가 되도록 제조하고, 75 Bx으로 농축하여 농축 시럽액을 제조하였다.
상기 포도당 결정 모액 제품은, 포도당 제조시 포도당 원액을 결정화 처리하여 포도당 결정(무수결정 또는 함수결정)을 형성한 뒤, 그 결과물을 여과하여 포도당 결정을 수득하고 남은 결정 모액을 얻었다. 상기 얻어진 하이드롤은 65.3 Bx이고 고형분 조성으로서 이당류 이상 8.7 중량% 및 포도당 91.3중량%를 포함하였다.
상기 농축 시럽액에 무수결정 포도당 (삼양제넥스)을 고형분 0.5 중량%씩 첨가하여 4 ℃에서 4일간 보관하여 결정 가속 시험을 진행하였다. 무수 포도당 분말을 혼합하여 얻어진 시럽액의 당조성은 표 3에 나타내었다. 표 3은 본 발명의 사이코스 결정 모액과 포도당 결정 모액 조성물 고형분 조성을 나타낸다.
결정 석출 (백탁 현상) 유무를 관찰하여 다음과 같은 기준으로 평가하여 그 결과를 표 3 및 도 1에 나타내었다.
하이드롤:사이코스 모액의
혼합비 (중량%)		 이당류 이상 포도당 과당 사이코스
55% : 45% 4.7% 50.0% 3.7% 41.1%
44% : 56% 3.8% 40.0% 4.7% 51.6%
33% : 67% 2.8% 30.0% 5.6% 61.3%
22% : 78% 1.9% 20.0% 6.5% 71.2%
11% : 89% 1.0% 10.0% 7.4% 81.4%
하기 표 4는 사이코스 결정 모액과 포도당 결정 모액 조성물의 결정 가속 테스트 결과를 나타낸다.
<평가 기준>
-: 결정이 없음
±: 결정 핵은 생기나, 실용성 있음
+: 육안으로 결정이 보이나 유동성 있음
++: 결정이 석출하고 백탁현상이 있음
+++: 결정이 석출하고 유동성 없음
보관기간 포도당 10% 포도당 20% 포도당 30% 포도당 40% 포도당 50%
0h - - - - -
1h - - - + +
2h - - - + ++
3h - - - + ++
4h - - + ++ ++
5h - - + ++ ++
6h - - + ++ ++
12h - - + ++ ++
24h - - + ++ ++
48h - - + +++ +++
72h - - + +++ +++
96h - - + +++ +++
표 4 및 도 1에서 알 수 있듯이, 포도당 가속테스트 실험결과에서 시럽 내의 포도당 함량이 30 중량% 이상에서 백탁이 생성되는 것을 알 수 있었고, 특히 40 중량% 이상에서는 백탁에서 결정화가 진행되고 있음을 확인하였다. 포도당 함량이 20 중량% 이하에서는 백탁이 발생하지 않았는데, 포도당 함량 범위를 좀 더 구체적으로 확인하고자 포도당 함량 20~30 중량% 범위를 세분화하여 실시예 3를 진행하였다.
실시예 3: 결정화 시럽 조성물의 제조
시럽 조성물의 결정화를 유도하는 포도당의 농도를 세부적으로 밝히고자, 포도당 농도를 더욱 세분화하여 시럽 조성물을 제조하여 결정화 실험을 수행하였다.
구체적으로, 실시예 1과 실질적으로 동일한 방법으로 사이코스 결정 모액과 포도당 결정 모액을 혼합하여 농축 시럽액을 제조하고, 결정 가속테스트를 실시하였다. 다만, 이때 고순도 사이코스 시럽의 조성물은 표 5와 같다. 결정 석출 (백탁 현상) 유무를 관찰하여 실시예 2와 같은 기준으로 평가하여 그 결과를 표 6, 표 7, 및 도 2에 나타내었다. 하기 표 5는 사이코스 결정 모액과 포도당 결정 모액 조성물 고형분 조성을 나타낸다.
하이드롤:사이코스 모액의 혼합비
 이당류 이상 포도당 과당 사이코스
23% : 77% 2.1% 21.0% 6.5% 70.5%
24% : 76% 2.2% 22.0% 6.4% 69.6%
25% : 75% 2.3% 23.0% 6.3% 68.7%
27% : 73% 2.3% 24.0% 6.1% 66.9%
28% : 72% 2.4% 25.0% 6.0% 66.0%
29% : 71% 2.4% 26.0% 6.0% 65.0%
30% : 70% 2.5% 27.0% 5.9% 64.1%
31% : 69% 2.6% 28.0% 5.8% 63.2%
32% : 68% 2.7% 29.0% 5.7% 62.3%
33% : 67% 2.8% 30.0% 5.6% 61.4%
하기 표 6 및 표 7은 사이코스 결정 모액과 포도당 결정 모액 조성물의 결정 가속 테스트 결과를 나타낸다.
보관기간 포도당21% 포도당22% 포도당23% 포도당24% 포도당25%
0h - - - - -
1h - - - - -
2h - - - - -
3h - - - - -
4h - - - - -
5h - - - - -
6h - - - - -
12h - - - - -
24h - - - - -
48h - - - - +
72h - - - - +
96h - - - - +
보관기간 포도당26% 포도당27% 포도당28% 포도당29% 포도당30%
0h - - - - -
1h - - - - -
2h - - - - +
3h - - - - +
4h - - - - +
5h - - - - +
6h - - - - +
12h - - - + +
24h + + + + +
48h + + + + +
72h + + + + +
96h + + + + ++
표 6 및 7과 도 2에서 알 수 있듯이, 포도당 가속테스트 실험결과에서 시럽 내의 포도당 함량이 25 중량% 이상에서 백탁이 생성되는 것을 알 수 있었다. 포도당 함량이 24 중량% 이하에서는 백탁이 발생하지 않았다.
실시예 3의 결과를 토대로 포도당 함량이 24 중량% 이하에서는 가혹 조건에서도 백탁 현상이 발생되지 않아 장시간 저장할 경우에도 제품의 품질을 유지할 수 있을 것이다.
실시예 4: 결정화 시럽 조성물의 제조
실시예 3의 결과에서 나타난 포도당 함량 24 중량% 이하에서 장시간 저장할 경우에도 제품의 품질을 유지되는지 입증하고자 실시예 3과 동일한 포도당 농도를 세분화한 시럽 조성물을 제조하여 장기 보관 결정화 실험을 수행하였다.
구체적으로, 실시예 3과 실질적으로 동일한 방법으로 사이코스 결정 모액과 포도당 결정 모액을 혼합하여 농축 시럽액을 제조하고, 결정 가속테스트를 실시하였다. 이때 고순도 사이코스 시럽의 조성물은 실시예 3의 표 5와 같다. 결정 석출 (백탁 현상) 유무를 관찰하기 위하여 저온실에 96일간 보관 후 실시예 2와 같은 기준으로 평가하여 그 결과를 표 8, 표 9, 및 도 3에 나타내었다.
보관기간 포도당21% 포도당22% 포도당23% 포도당24% 포도당25%
96일 - - - - +++
보관기간 포도당26% 포도당27% 포도당28% 포도당29% 포도당30%
96일 +++ +++ +++ +++ +++
표 8 및 9와 도 3에서 알 수 있듯이, 가속테스트 실험결과에서 시럽 내의 포도당 함량이 25 중량% 이상에서 백탁이 생성되는 것을 알 수 있었다. 포도당 함량이 24 중량% 이하에서는 백탁이 발생하지 않았다.
종합해보면, 실시예 2, 3, 4 의 결과를 토대로 포도당 함량이 24 중량% 이하에서는 장시간 가혹 조건에서도 백탁 현상이 발생되지 않아 장시간 제품의 품질을 유지할 수 있다.
<110> SAMYANG GENEX CORPORATION <120> Saccharide mixture containing psicose with improved sweetness quality and crystallization <130> DPP20145679KR <160> 9 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 356 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sod promoter (6) <400> 1 aagcgcctca tcagcggtaa ccatcacggg ttcgggtgcg aaaaaccatg ccataacagg 60 aatgttcctt tcgaaaattg aggaagcctt atgcccttca accctactta gctgccaatt 120 attccgggct tgtgacccgc tacccgataa ataggtcggc tgaaaaattt cgttgcaata 180 tcaacaaaaa ggcctatcat tgggaggtgt cgcaccaagt acttttgcga agcgccatct 240 gacggatttt caaaagatgt atatgctcgg tgcggaaacc tacgaaagga ttttttaccc 300 atggctgtat acgaactccc agaactcgac tacgcatacg acgaaaggat tacaaa 356 <210> 2 <211> 93 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tac1 promoter (4) <400> 2 tgacaattaa tcatcggctc gtatattgtg tggaattgtg agcggataac aatttcacac 60 aggaaacaga attcccgggg aaaggattac aaa 93 <210> 3 <211> 112 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tac2 promoter (4) <400> 3 tgacaattaa tcatccggct cgtataatgt taacaatttg tggaattgtg agcggacaca 60 caggaaacag accatggaat tcgagctcgg tacccgggga aaggattaca aa 112 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Trc promoter (1) <400> 4 tgacaattaa tcatcggcct cgtataatgt 30 <210> 5 <211> 7 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ribosome binding region <400> 5 gaaagga 7 <210> 6 <211> 7 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Spacer sequence <400> 6 ttacaaa 7 <210> 7 <211> 289 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of an enzyme protein originated from Clostridium scindens <400> 7 Met Lys His Gly Ile Tyr Tyr Ala Tyr Trp Glu Gln Glu Trp Ala Ala 1 5 10 15 Asp Tyr Lys Arg Tyr Val Glu Lys Ala Ala Lys Leu Gly Phe Asp Ile 20 25 30 Leu Glu Val Gly Ala Ala Pro Leu Pro Asp Tyr Ser Ala Gln Glu Val 35 40 45 Lys Glu Leu Lys Lys Cys Ala Asp Asp Asn Gly Ile Gln Leu Thr Ala 50 55 60 Gly Tyr Gly Pro Ala Phe Asn His Asn Met Gly Ser Ser Asp Pro Lys 65 70 75 80 Ile Arg Glu Glu Ala Leu Gln Trp Tyr Lys Arg Leu Phe Glu Val Met 85 90 95 Ala Gly Leu Asp Ile His Leu Ile Gly Gly Ala Leu Tyr Ser Tyr Trp 100 105 110 Pro Val Asp Phe Ala Thr Ala Asn Lys Glu Glu Asp Trp Lys His Ser 115 120 125 Val Glu Gly Met Gln Ile Leu Ala Pro Ile Ala Ser Gln Tyr Gly Ile 130 135 140 Asn Leu Gly Met Glu Val Leu Asn Arg Phe Glu Ser His Ile Leu Asn 145 150 155 160 Thr Ser Glu Glu Gly Val Lys Phe Val Thr Glu Val Gly Met Asp Asn 165 170 175 Val Lys Val Met Leu Asp Thr Phe His Met Asn Ile Glu Glu Ser Ser 180 185 190 Ile Gly Asp Ala Ile Arg His Ala Gly Lys Leu Leu Gly His Phe His 195 200 205 Thr Gly Glu Cys Asn Arg Met Val Pro Gly Lys Gly Arg Thr Pro Trp 210 215 220 Arg Glu Ile Gly Asp Ala Leu Arg Glu Ile Glu Tyr Asp Gly Thr Val 225 230 235 240 Val Met Glu Pro Phe Val Arg Met Gly Gly Gln Val Gly Ser Asp Ile 245 250 255 Lys Val Trp Arg Asp Ile Ser Lys Gly Ala Gly Glu Asp Arg Leu Asp 260 265 270 Glu Asp Ala Arg Arg Ala Val Glu Phe Gln Arg Tyr Met Leu Glu Trp 275 280 285 Lys <210> 8 <211> 870 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified nucleic acid sequence (1) of the enzyme protein of SEQ ID NO: 7 <400> 8 atgaaacacg gtatctacta cgcgtactgg gaacaggaat gggcggcgga ctacaaacgt 60 tacgttgaaa aagcggcgaa actgggtttc gacatcctgg aagttggtgc ggcgccgctg 120 ccggactact ctgcgcagga agttaaagaa ctgaaaaaat gcgcggacga caacggtatc 180 cagctgaccg cgggttacgg tccggcgttc aaccacaaca tgggttcttc tgacccgaaa 240 atccgtgaag aagcgctgca gtggtacaaa cgtctgttcg aagttatggc gggtctggac 300 atccacctga tcggtggtgc gctgtactct tactggccgg ttgacttcgc gaccgcgaac 360 aaagaagaag actggaaaca ctctgttgaa ggtatgcaga tcctggcgcc gatcgcgtct 420 cagtacggta tcaacctggg tatggaagtt ctgaaccgtt tcgaatctca catcctgaac 480 acctctgaag aaggtgttaa attcgttacc gaagttggta tggacaacgt taaagttatg 540 ctggacacct tccacatgaa catcgaagaa tcttctatcg gtgacgcgat ccgtcacgcg 600 ggtaaactgc tgggtcactt ccacaccggt gaatgcaacc gtatggttcc gggtaaaggt 660 cgtaccccgt ggcgtgaaat cggtgacgcg ctgcgtgaaa tcgaatacga cggtaccgtt 720 gttatggaac cgttcgttcg tatgggtggt caggttggtt ctgacatcaa agtttggcgt 780 gacatctcta aaggtgcggg tgaagaccgt ctggacgaag acgcgcgtcg tgcggttgaa 840 ttccagcgtt acatgctgga atggaaataa 870 <210> 9 <211> 870 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> modified nucleic acid sequence(2) of the enzyme protein of SEQ ID NO:7 <400> 9 atgaagcacg gcatctacta cgcatactgg gagcaggagt gggcagcaga ctacaagcgc 60 tacgttgaga aggcagcaaa gctgggcttc gacatcctgg aggttggcgc agcaccactg 120 ccagactact ccgcacagga ggttaaggag ctgaagaagt gcgcagacga caacggcatc 180 cagctgaccg caggctacgg cccagcattc aaccacaaca tgggctcctc cgacccaaag 240 atccgcgagg aggcactgca gtggtacaag cgcctgttcg aggttatggc aggcctggac 300 atccacctga tcggcggcgc actgtactcc tactggccag ttgacttcgc aaccgcaaac 360 aaggaggagg actggaagca ctccgttgag ggcatgcaga tcctggcacc aatcgcatcc 420 cagtacggca tcaacctggg catggaggtt ctgaaccgct tcgagtccca catcctgaac 480 acctccgagg agggcgttaa gttcgttacc gaggttggca tggacaacgt taaggttatg 540 ctggacacct tccacatgaa catcgaggag tcctccatcg gcgacgcaat ccgccacgca 600 ggcaagctgc tgggccactt ccacaccggc gagtgcaacc gcatggttcc aggcaagggc 660 cgcaccccat ggcgcgagat cggcgacgca ctgcgcgaga tcgagtacga cggcaccgtt 720 gttatggagc cattcgttcg catgggcggc caggttggct ccgacatcaa ggtttggcgc 780 gacatctcca agggcgcagg cgaggaccgc ctggacgagg acgcacgccg cgcagttgag 840 ttccagcgct acatgctgga gtggaagtaa 870

Claims (14)

  1. 사이코스, 포도당 및 과당을 함유하는 혼합당 조성물에 포함된 전체 당류의 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 포도당 함량이 24 중량부 이하인, 감미질 개선 및 무결정화 혼합당 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물은 -20℃ 내지 38℃온도에서 1년간 보관하는 조건에서 당결정이 석출되지 않는 것인 혼합당 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당 의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 과당의 함량이 30 중량부 미만인 혼합당 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당 의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 과당의 함량이 25 중량부 이하이고, 상기 과당과 사이코스의 합계 함량이 70 중량부를 초과하는 것인, 혼합당 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당 의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 포도당 함량이 24 중량부 이하이고, 과당의 함량이 15 중량부 이하이며, 사이코스 함량이 60 중량부 이상인 혼합당 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물은, 사이코스 함량이 80 중량% 이상인 사이코스 결정화 모액과, 포도당 함량이 80 중량% 이상인 포도당 결정화 모액을 혼합하여 제조되는 것인 혼합당 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 사이코스 결정화 모액은, 전체 당류 고형분 함량을 기준으로 80 내지 99.9 중량%의 사이코스를 함유하며, 추가적으로 과당, 포도당, 올리고당 및 희소당으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것인 혼합당 조성물.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 사이코스 결정화 모액은, 전체 당류 고형분 함량을 기준으로 과당 20 중량% 이하, 및 포도당 1.0 중량% 이하로 포함하는 것인 혼합당 조성물.
  9. 제 1 항에 있어서, 상기 사이코스, 포도당 또는 과당은 각각 D-사이코스, D-포도당, 또는 D-과당인 것인 혼합당 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 따른 혼합당 조성물을 함유하는 식품 조성물.
  11. 사이코스, 포도당 및 과당을 포함하는 혼합당 조성물에서, 혼합당 조성물에 포함된 전체 당류의 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 포도당 함량이 24 중량부 이하로 조절하여, 혼합당 조성물의 당결정 생성을 방지하는 방법.
  12. 제 11 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당 의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 과당의 함량이 30 중량부 미만인 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 상기 혼합당 조성물에 포함된 포도당, 사이코스 및 과당 의 합계 고형분 함량 100 중량부를 기준으로, 상기 과당의 함량이 25 중량부 이하이고, 상기 과당과 사이코스의 합계 함량이 70 중량부를 초과하는 것인, 방법.
  14. 제 11 항에 있어서, 사이코스 함량이 80 중량% 이상인 사이코스 결정화 모액과, 포도당 함량이 80 중량% 이상인 포도당 결정화 모액을 혼합하여 포도당 함량이 24 중량부 이하로 조절하는 것인 방법.
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