CN111548978B - 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111548978B
CN111548978B CN202010405145.5A CN202010405145A CN111548978B CN 111548978 B CN111548978 B CN 111548978B CN 202010405145 A CN202010405145 A CN 202010405145A CN 111548978 B CN111548978 B CN 111548978B
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus subtilis
mannan
gene
recombinant
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010405145.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111548978A (zh
Inventor
金鹏
杜琪珍
王圆圆
陈春晓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang A&F University ZAFU
Original Assignee
Zhejiang A&F University ZAFU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang A&F University ZAFU filed Critical Zhejiang A&F University ZAFU
Priority to CN202010405145.5A priority Critical patent/CN111548978B/zh
Publication of CN111548978A publication Critical patent/CN111548978A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111548978B publication Critical patent/CN111548978B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07013—Mannose-1-phosphate guanylyltransferase (2.7.7.13)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y504/00—Intramolecular transferases (5.4)
    • C12Y504/02—Phosphotransferases (phosphomutases) (5.4.2)
    • C12Y504/02008—Phosphomannomutase (5.4.2.8)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用木糖诱导型启动子PxylA，诱导来源于植物瓜尔豆的甘露聚糖合酶基因ctmanS表达，在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168中实现了甘露聚糖的生产，使得甘露聚糖产量可达2.15g/L。本发明为高效制备甘露聚糖奠定了一定的基础，适合于工业化生产应用。

Description

一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。
背景技术
甘露聚糖(Mannan)是一种半纤维素聚多糖，广泛存在与多种生命形式中。甘露聚糖作为一种优良的低热量、高纤维素的水溶性膳食纤维，被广泛应用于食品和医药等行业。甘露聚糖因其独特的分子结构和理化性质而具有独特的生物活性，能在机体内参与一些十分重要的生理过程，如刺激机体免疫应答，促进肠道内有益菌的营养生长，降低血清胆固醇含量等。
甘露聚糖广泛存在于魔芋粉、瓜尔豆胶、田著胶和石斛等植物体及多种微生物细胞壁内，当前商品化的甘露聚糖主要从魔芋和酵母细胞中提取而来。魔芋甘露聚糖提取分离工艺复杂，收率和纯度低；且魔芋甘露聚糖分子量高、粘稠度大，提纯后的产品还需要进一步通过降解制备为低聚甘露糖使用，产品质量不够稳定。因此，微生物发酵法开始逐渐替代提取法生产甘露聚糖。基于食品安全和医疗卫生越来越高的要求以及消费者的偏好，应用食品安全级的微生物发酵生产甘露聚糖日益受到青睐。
目前，已有报道采用生物法生产甘露聚糖，主要是以啤酒酵母发酵制备甘露聚糖，由于酵母的培养周期及成本较大，特别是难以从其内部代谢水平上强化产物的合成，因此，以枯草芽孢杆菌代谢改造的甘露聚糖生产菌种具有很大的潜能实现规模化生产制备。该发明操作过程简单，且产品纯度高，易于实现工业化生产制备甘露聚糖。
因而，亟待寻求一种能够安全、简便生产甘露聚糖的生物方法。
发明内容
为解决目前在甘露聚糖生产过程中存在的一些问题，本发明通过在枯草芽孢杆菌中整合表达甘露聚糖合成途径中的缺失途径基因3个，即编码甘露聚糖合酶基因ManS和GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因manC和磷酸甘露糖酶基因manB，完善了枯草芽孢杆菌代谢合成甘露聚糖的途径，实现了以葡萄糖为碳源从头发酵合成甘露聚糖。本发明在枯草芽孢杆菌中构建甘露聚糖代谢合成途径，实现分泌发酵甘露聚糖。
甘露聚糖从头合成途径(以蔗糖或者葡萄糖为碳源)主要涉及磷酸葡萄糖异构酶、磷酸甘露糖异构酶、磷酸甘露糖酶、GDP-甘露糖焦磷酸化酶以及β-型甘露糖糖基转移酶(β-Mannosyl-transferase，甘露糖合酶ManS)。磷酸甘露糖异构酶催化底物D-Fructose-6-phosphate转化为D-Mannose-6-phosphate；磷酸甘露糖酶是一种双功能酶，催化D-Mannose-6-phosphate和D-Mannose-1-phosphate之间的互变。GDP-Mannose焦磷酸酸化酶以D-Mannose-1-phosphate为底物，催化生成甘露糖的活化形式GDP-Mannose，为多糖的合成提供底物。甘露糖糖基转移酶(甘露聚糖合酶)主要参与β型的甘露聚糖的合成，以GDP-Mannose为底物，将甘露糖转移到糖链上形成甘露聚糖。而在枯草芽孢杆菌中具备从具备磷酸葡萄糖异构酶基因pgi，磷酸甘露糖异构酶基因manA；但是缺乏下游的途径的磷酸甘露糖酶、GDP-甘露糖焦磷酸化酶以及甘露聚糖合酶的编码基因。因此，将来源于大肠杆菌的磷酸甘露糖酶基因manB、GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因manC和来源于瓜尔豆的甘露聚糖合酶基因ctManS在枯草芽孢杆菌中异源表达，完成甘露聚糖的合成途径。由于枯草芽孢杆菌拥有较强的蛋白分泌能力，易于进行大规模发酵，产品易于分离纯化，同时，本发明通过在基因水平是对甘露糖的代谢途径进行强化，实现甘露聚糖的高效合成。
本发明提供一种重组枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌表达表达甘露聚糖合酶基因ManS，并过表达GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因manC、磷酸甘露糖酶基因manB和磷酸甘露糖异构酶基因manA。
在本发明的一种实施方式中，以Bacillus subtilis 168为出发菌株。
在本发明的一种实施方式中，所述甘露聚糖合酶基因ManS为来源于瓜尔豆的ctManS。
所述GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因manC和磷酸甘露糖酶基因manB来源于大肠杆菌BL21(DE3)。
在本发明的一种实施方式中，所述manA来源于Bacillus subtilis 168，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
在本发明的一种实施方式中，所述ctManS的GeneBank的登录号为AY372247.1。
在本发明的一种实施方式中，所述manC的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
在本发明的一种实施方式中，所述manB的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
在本发明的一种实施方式中，以pP43NMK为表达载体。
本发明还提供了一种构建所述重组枯草芽孢杆菌的方法，是将编码甘露聚糖合酶的基因ctManS与启动子PxylA融合作为一个模块，整合至枯草芽孢杆菌的基因组上；将manC和manB整合至枯草芽孢杆菌的基因组上；将manC、manB和manA连接表达载体，转化枯草芽孢杆菌。
在本发明的一种实施方式中，将所述基因manC和manB整合至枯草芽孢杆菌基因组的nagA-nagBA位点。
本发明还提供了一种生产甘露聚糖的方法，将所述枯草芽孢杆菌在含有碳源的体系中生产甘露聚糖。
在本发明的一种实施方式中，所述碳源为葡萄糖。
在本发明的一种实施方式中，利用木糖作为诱导剂，对菌株诱导48h。
在本发明的一种实施方式中，发酵温度控制在25～35℃。
在本发明的一种实施方式中，发酵时间控制为45～50h。
在本发明的一种实施方式中，将所述重组枯草芽孢杆菌接种于发酵培养基，培养3～5h后加入终浓度为5～15mg/L的木糖作为诱导剂。
本发明保护所述重组枯草芽孢杆菌，或所述生产甘露聚糖的方法在食品、生物、化工领域制备甘露聚糖中的应用。
本发明的有益效果：利用枯草芽孢杆菌产甘露聚糖，与其他啤酒酵母菌相比，该发明具有非常大的应用优势。首先，本发明过程中使用的宿主具有较强的生长能力，胞外分泌杂质少，产品易于分离纯化；其次，以葡萄糖等廉价碳源为底物，可进行高密度发酵，甘露聚糖产量可达2.15g/L；再次，食品级枯草芽孢杆菌表达系统无内毒素，不会对产物的医用食品安全带来隐患。基于应用分析，本发明方法在工业上用于制备甘露聚糖具有潜在而非常广泛的价值。
附图说明
图1为途径基因manC-manB操纵子整合B.subtilis168/ctManS示意图。
图2为途径基因过表达重组质粒构建示意图。
图3为重组工程菌株摇瓶发酵产甘露聚糖水平。
具体实施方式
发酵培养基：酵母粉2g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4 1.5g/L，磷酸盐缓冲液50mM，葡萄糖浓度为1％，卡那霉素浓度为50μg/mL，pH 7.0。
甘露聚糖含量测定(HPLC进行定量分析)：提取的多糖沉淀经强碱水解1h，用盐酸调节pH至中性，多糖水解液再用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)试剂进行柱前衍生，用HPLC分析，参照标样为D-甘露糖。
色谱条件为：色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱；流动相：乙睛-0.02moL/L的乙酸铵溶液(20:80)；流速:1.0mL/min；柱温：30℃，检测波长：250nm。
实施例1：B.subtilis168/ctmanS重组菌株的构建
根据NCBI数据库瓜尔豆甘露聚糖合成酶基因信息序列，合成ctManS基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，利用引物BSZH/ctManS-F和BSZH/ctManS-R，以合成的ctManS基因为模板扩增，回收扩增产物；将回收产物通过限制性内切酶BamHI和SacII连接至B.subtilis整合诱导型载体pAX01(利用启动子PxylA诱导基因表达)上，构建得到重组质粒pAX01-ctManS；将重组质粒pAX01-ctManS转化至B.subtilis168，利用2mg/mL的红霉素卡LB平板筛选阳性克隆(在37℃、培养至长出单克隆)；挑取单克隆进行DNA测序，测序验证正确的即为B.subtilis168/ctmanS重组菌株。
所用引物：5’-3’方向(下划线处为酶切位点)
BSZH/ctManS-F：CGCGGATCCATGCGTAATCTGATTTTCGAAGAAC(SEQ ID NO.9)，
BSZH/ctManS-R：TCCCCGCGGTTAGGTCGGCACAATGGTGCCAACC(SEQ ID NO.10)。
实施例2：B.subtilis168M01重组菌株的构建
将E.coli BL21(DE3)菌株在接种于5ml LB液体培养基，在37℃200rpm培养16h后，收集菌体，采用细菌基因组提取试剂盒(试剂盒购自赛默飞世尔)提取菌株的基因组DNA；采用引物ZHCB/manC-F和ZHCB/manB-R以提取的基因组为模版PCR扩增manC-manB基因片段(核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示)；将manC-manB基因片段同源重组至人工合成的lox66-Kan-lox71-Pspac片段(核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示)，获得lox71-Kan-lox66-Pspac-manC-manB片段，操纵子manC-manB基因置于组成型启动子Pspac(来源于枯草芽孢杆菌质粒pMUTIN)控制下进行控制转录翻译表达；为将manC-manB基因重组至菌株B.subtilis168/ctmanS基因组的nagA-nagBA，选取该位点上下游各500bp基因作为重组同源臂Uarm和Darm(PCR扩增Uarm片段引物为ZHCB/Uarm-F和ZHCB/Uarm-R；扩增Darm片段引物为ZHCB/Darm-F和ZHCB/Darm-R)；将扩增得到的同源臂Uarm和Darm(核酸序列分别如SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.8所示)，与lox71-Kan-lox66-manC-manB片段进行融合PCR重组；最终获得manC-manB进行同源整合的DNA重组片段Uarm-lox71-Kan-lox66-Pspac-manC-manB-Darm(图1)，该重组片段转化B.subtilis168/ctmanS感受态后(枯草芽孢杆菌感受态制备参见文献：李瑞芳等,2015,枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究，生物技术通报，5：227-230)，采用含50mg/mL卡那霉素的LB平板进行筛选(在37℃下培养至长出单克隆)，挑取平板上长出的单克隆进行测序，验证通过的单克隆即为B.subtilis168M01菌株。
表1引物序列
Figure BDA0002490988140000041
Figure BDA0002490988140000051
实施例3：B.subtilis168M02重组菌株的构建
为消除B.subtilis168M01菌株中的lox71-kan-lox66片段，将温敏型质粒pDG148-Cre转化至B.subtilis168M01，经含30mg/mL氯霉素的LB培养基进行筛选，测序验证，获得菌株B.subtilis168M01/pDG148-Cre；将菌株B.subtilis168M01/pDG148-Cre添加至含0.1MIPTG的LB培养基37℃培养24h以诱导Cre表达来消除lox71-kan-lox66表达盒，经过PCR鉴定和抗性选择验证确定去除lox71-kan-lox66表达盒的重组菌株，继续于50℃培养1-2天，高温诱导消除温敏型质粒pDG148-Cre；最后获得具备甘露聚糖合成途径的重组工程菌株命名为B.subtilis168M02。
实施例4：甘露聚糖合成关键基因过表达菌株的构建
(1)重组质粒pP43NMK-C的构建
以E.coliBL21(DE3)基因组为模板，以引物对BSman/manC-F和BSman/manC-R扩增manC基因片段(核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示)，将manC基因经KpnI、SacI限制性内切酶重组至E.coli-B.subtilis穿梭载体pP43NMK质粒中，获得重组质粒pP43NMK-C。
(2)重组质粒pP43NMK-CB的构建
以E.coli BL21(DE3)基因组为模板，以引物对BSman/manB-F和BSman/manB-R扩增manB基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示)，将manB基因经SacI、XhoI限制性内切酶重组至pP43NMK-C质粒，获得重组质粒pP43NMK-CB。
(3)重组质粒pP43NMK-CBA的构建
以Bacillus subtilis 168基因组为模版，以引物对BSman/manA-F和BSman/manA-R扩增manA基因(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)，将manA基因经XbaI、XhoI限制性内切酶连接至pP43NMK-CB质粒，获得重组质粒pP43NMK-CBA。
将步骤(1)～(3)所获得的三个重组质粒(如图2所示)pP43NMK-C、pP43NMK-CB、pP43NMK-CBA分别转化实施例3中获得的菌株B.subtilis168M02中，利用含50μg/mL卡那霉素抗性的LB培养基进行筛选，测序验证得到阳性菌株，将获得菌株分别命名为B.subtilis168M03(含重组质粒pP43NMK-C)、B.subtilis168M04(含重组质粒pP43NMK-CB)、B.subtilis168M05(含重组质粒pP43NMK-CBA)。
表2引物序列
Figure BDA0002490988140000052
Figure BDA0002490988140000061
实施例5：重组枯草芽孢杆菌的摇瓶发酵
将实施例2～4得到的重组菌株B.subtilis168M02、B.subtilis168M03、B.subtilis168M04、B.subtilis168M05分别进行摇瓶培养实验，验证产甘露聚糖效果。
挑取重组菌株单克隆接种于5mL LB培养基，置于200rpm 37℃培养；培养16h后，将得到的菌液按体积比1％的接种量接种于装有100mL发酵培养基的250mL三角摇瓶中，置于200rpm 30℃培养；在菌株培养4h后添加终浓度为10g/L木糖作为诱导剂，再诱导培养48h。将发酵液在10000rpm下4℃离心10min，收集上清液，上清采用3倍体积的无水乙醇进行沉淀甘露聚糖产物，10000rpm下4℃离心10min；此过程重复2-3次，沉淀用2mL溶解，保存至-80℃冰箱。
对照组为Bacillus subtilis 168除不加抗生素外同等条件下发酵液的回收物。
产物经水解后用HPLC进行定量分析，重组菌株B.subtilis168M02、B.subtilis168M03、B.subtilis168M04、B.subtilis168M05的甘露糖产量分别为0.97g/L，1.23g/L，1.97g/L，2.15g/L(图3)，对照组不产甘露聚糖。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 浙江农林大学
<120> 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用
<160> 24
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1581
<212> DNA
<213> Cyamopsis tetragonoloba
<400> 1
atgagaaacc taatcttcga ggagcctgaa gggattccag gcaacagttc aagcagtctg 60
cgctatgcct ggcaatcaat tcgtgcccca gtgatcatac ctcttctaaa actagcagtc 120
atagtgtgct cagttatgtc aatcatgcta tttgttgaaa gagtagccat ggcagctgta 180
attttgattg tcaaagtgct gaggaagaaa agatacacca agtataactt ggaagccatg 240
aaacagaagc tagagagaag caaaaaatac cccatggtgc tgatccaaat acctatgtat 300
aacgagaaag aggtgtacaa gctttccatt ggagcagtat gtgggctttc atggccagct 360
gacaggttca tagttcaagt tcttgatgac tcaacaaatc cagtcttaag ggagttggtt 420
gaaatggagt gtcaaaaatg gatacagaaa ggtgtgaatg tcaagtatga aaataggaga 480
aatcgcaatg gttacaaagc aggtgcctta aaagagggtt tggagaagca atatgtagag 540
gattgtgagt ttgtagcaat atttgatgca gatttccaac cagatgcgga ttttctttgg 600
aacacaattc cttatctgct ggaaaatcca aagttgggtt tggttcaggc gagatggaaa 660
tttgtgaact cagaagaatg tatgatgaca cggcttcaag agatgtcact agattaccac 720
tttagtgttg aacaggaagt cggctcttca acatactcat tcttcggttt caatggaaca 780
gcaggagttt ggcggatcca agccataaaa gatgctggag gatggaaaga ccgaacaacg 840
gtggaggata tggaccttgc agttagagca agcttgcatg gctgggaatt tgtttttgtg 900
ggtgatgtaa aggtcaaaaa tgaattacca agtacattta aagcatatcg atttcagcag 960
cacaggtggt catgcggtcc agctaatctc tttaagaaaa tgaccaagga aatcatctgt 1020
tgcaaaaggg tgccacttct caagagactc catctcatct atgctttctt ctttgtgaga 1080
aaaatagttg cacactgggt tacgttcttc ttttactgca tagttatacc agcttgtgtg 1140
atagttcccg aagttaatct caaaaagcag attgccatat acatcccagc aaccattaca 1200
attctaaatg cagtctccac cccaagatcc atgcatctac tagtactctg gatactcttt 1260
gagaatgtca tgtcactcca tcgaactaaa gcagcaatta ttggactctt ggaagcaaat 1320
cgtgtcaatg aatgggttgt gactgagaag cttggaaatg ccatgaaaca gaggaacaat 1380
gctaggccat caagagcttc acggtttcga attatagaaa ggatccaccc attggagatt 1440
atagtgggga tgtatatgct gcactgtgca acctatgacc tgttattcgg acacgaccat 1500
ttctttgtct atcttctgtt gcaggcaggg gcgttcttta caatgggatt tggcctagta 1560
ggaacaattg tacccaccta a 1581
<210> 2
<211> 948
<212> DNA
<213> bacillus subtilis
<400> 2
atgacgactg aaccgttatt tttcaagcct gttttcaaag aaagaatttg gggcgggacc 60
gctttagctg attttggcta taccattccg tcacaacgaa caggggagtg ctgggctttt 120
gccgcgcatc aaaatggtca aagcgttgtt caaaacggaa tgtataaggg gttcacgctc 180
agcgaattat gggaacatca cagacattta ttcggacagc ttgaagggga ccgtttccct 240
ctgcttacaa aaatattaga tgctgaccag gacttatctg ttcaggtgca tccgaatgat 300
gaatatgcca acatacatga aaacggtgag cttggaaaaa cagaatgctg gtacattatt 360
gattgccaaa aagatgccga gattatttat ggccacaatg caacaacaaa ggaagaacta 420
actaccatga tagagcgtgg agaatgggat gagctcttgc gccgtgtaaa ggtaaagccg 480
ggggattttt tctatgtgcc aagcggtact gttcatgcga ttggaaaagg aattcttgct 540
ttggagacgc agcagaactc agacacaacc tacagattat atgattatga ccgaaaagat 600
gcagaaggca agctgcgcga gcttcatctg aaaaagagca ttgaagtgat agaggtcccg 660
tctattccag aacggcatac agttcaccat gaacaaattg aggatttgct tacaacgaca 720
ttgattgaat gcgcttactt ttcggtgggg aaatggaact tatcaggatc agcaagctta 780
aagcagcaaa aaccattcct tcttatcagt gtgattgaag gggagggccg tatgatctct 840
ggtgagtatg tctatccttt caaaaaagga gatcatatgt tgctgcctta cggtcttgga 900
gaatttaaac tcgaaggata tgcagaatgt atcgtctccc atctgtaa 948
<210> 3
<211> 1425
<212> DNA
<213> Escherichia coli
<400> 3
atgagctcac ctcttattcc ggttatatta agtggtggta atggtactag gttatggcca 60
ctatctagag aggaatatcc taagcagttt ttaaaactaa ccgactcaat atcaatgctg 120
caatcaacaa tatctcggtt agactcatta aatacttcct ctccagttgt aatatgcaat 180
gaattacaca gatttattgt tgcagaacaa ctcaggcact taaataaatt agataataat 240
attattttag aaccatctgg tcgcaatact gcacctgcta tttgtattgc tgctttaatt 300
ttaaaaatga agcatccaaa tgaaaatcca cttatgctcg ttcttccagc cgatcactcc 360
gtaaaaaaag tcaaaacttt ttgtaataca ataaaaagtg ctattccctt cgctgaagct 420
ggtaatttgg tttcttttgg tattaaacct actcatcctg agacggggta tggatatata 480
caaaaaggca aagtgttatc tgattctgat atatatgagg tcagtgaagt tagaactttt 540
gttgaaaagc ctaatcttaa aacagcagaa agctttatag aaaaagatga gtattattgg 600
aatagtggta tgtatttgtt tagtgttgaa cgttacttac aagagttatc attataccga 660
ccagacatag ttaaagtatg ccaggaaact gttaaaaata ttcattatga tatggatttt 720
attagattgg acgataaaat atttcggaac tgtccacagg agtctattga ttatgctgta 780
atggagaaaa caaaggatgc tgtagttgct acaatggata tcggttggaa tgatgtagga 840
gcatggtctt cgctttggga attagggaaa aaagactcct ctggtaatgt tatcacggga 900
gacatcgttt gccacgagac agaaaatagt tatatttata ctgagtctgg attggtagca 960
actattggta ttcaagatct tgttattatt catactaaag attcattact ggtttccaga 1020
cgcgattcag tacaaaatgt aaaaaatatt gttcagcatc ttgatttgtc aggacgtaaa 1080
gaacataaag aacataggga agtattcaag tcatggggac gatgtgactc catagatagt 1140
agtgaaaagt accactatca ggtcaaacga ataacagtta atccaagtga aaaattatcg 1200
ttgcaattac atcatcaccg tgcggaacat tgggttgttg taatggggat tgctaaagtt 1260
acagttgcag aagaaataaa aattttaaaa gagaatgagt ctgtatatat tcctgcaggt 1320
attaagcata gtttggaaaa tattgggaca ataccacttg tgttaataga agtttggacc 1380
ggttcttatc ttgctgatga tgatatcctt cgatttgaag attaa 1425
<210> 4
<211> 1365
<212> DNA
<213> Escherichia coli
<400> 4
atgctaactt gctttaaagc ttatgatatt cgcgggaaac taggcgaaga actgaatgaa 60
gatatcgcct ggcgcattgg gcgtgcctat ggcgaatttc tcaaaccgaa aaccattgtg 120
ttaggcggtg atgtccgcct caccagcgaa accttaaaac tggcgctggc gaaaggttta 180
caggatgcgg gcgtcgatgt gctggatatc ggtatgtccg gcaccgaaga gatctatttc 240
gccacgttcc atctcggcgt ggatggcggc attgaagtta ccgccagcca taatccgatg 300
gattataacg gcatgaaact cgtgcgcgag ggggctcgcc cgatcagcgg ggataccgga 360
ctgcgcgatg tccagcgtct ggcagaagcc aacgacttcc ctcccgttga tgaaaccaaa 420
cgcggtcgtt atcagcaaat caatctgcgt gacgcttacg ttgatcacct gttcggttat 480
atcaacgtca aaaacctcac gccgctcaag ctggtgatta actccgggaa tggcgcggcg 540
gggccggtgg tggacgccat tgaagcccgc tttaaagccc tcggcgcacc ggtggaatta 600
atcaaagtac acaacacgcc ggacggcaat ttccccaacg gtattcctaa cccgttgctg 660
ccggaatgcc gcgacgacac ccgtaatgcg gtcatcaaac acggcgcgga tatgggcatt 720
gcctttgatg gcgattttga ccgctgtttc ctgtttgacg aaaaagggca gtttatcgag 780
ggctactaca ttgtcggcct gctggcagaa gcattcctcg aaaaaaatcc cggcgcgaag 840
atcatccacg atccgcgtct ctcctggaac accgttgatg tggtgaccgc cgcgggcggc 900
actccggtga tgtcgaaaac cggacacgcc tttattaaag aacgtatgcg caaggaagac 960
gccatctacg gtggcgaaat gagcgcccac cactatttcc gtgatttcgc ttactgcgac 1020
agcggcatga tcccgtggct gctggtcgcc gaactggtgt gtctgaaagg aaaaacgctg 1080
ggcgaactgg tgcgcgaccg gatggcggcg tttccggcaa gcggtgagat caacagcaaa 1140
ctggcgcacc ccgttgaggc gattaatcgc gtcgaacagc attttagccg cgaggcgctg 1200
gcggtggatc gcaccgatgg catcagcatg acctttgccg actggcgctt taacctgcgc 1260
tcctccaaca ccgaaccggt ggtgcggttg aatgtggaat cgcgcggtga tgtaccgctg 1320
atggaagaaa agacaaaact tatccttgag ttactgaaca agtaa 1365
<210> 5
<211> 2823
<212> DNA
<213> Escherichia coli
<400> 5
atgagctcac ctcttattcc ggttatatta agtggtggta atggtactag gttatggcca 60
ctatctagag aggaatatcc taagcagttt ttaaaactaa ccgactcaat atcaatgctg 120
caatcaacaa tatctcggtt agactcatta aatacttcct ctccagttgt aatatgcaat 180
gaattacaca gatttattgt tgcagaacaa ctcaggcact taaataaatt agataataat 240
attattttag aaccatctgg tcgcaatact gcacctgcta tttgtattgc tgctttaatt 300
ttaaaaatga agcatccaaa tgaaaatcca cttatgctcg ttcttccagc cgatcactcc 360
gtaaaaaaag tcaaaacttt ttgtaataca ataaaaagtg ctattccctt cgctgaagct 420
ggtaatttgg tttcttttgg tattaaacct actcatcctg agacggggta tggatatata 480
caaaaaggca aagtgttatc tgattctgat atatatgagg tcagtgaagt tagaactttt 540
gttgaaaagc ctaatcttaa aacagcagaa agctttatag aaaaagatga gtattattgg 600
aatagtggta tgtatttgtt tagtgttgaa cgttacttac aagagttatc attataccga 660
ccagacatag ttaaagtatg ccaggaaact gttaaaaata ttcattatga tatggatttt 720
attagattgg acgataaaat atttcggaac tgtccacagg agtctattga ttatgctgta 780
atggagaaaa caaaggatgc tgtagttgct acaatggata tcggttggaa tgatgtagga 840
gcatggtctt cgctttggga attagggaaa aaagactcct ctggtaatgt tatcacggga 900
gacatcgttt gccacgagac agaaaatagt tatatttata ctgagtctgg attggtagca 960
actattggta ttcaagatct tgttattatt catactaaag attcattact ggtttccaga 1020
cgcgattcag tacaaaatgt aaaaaatatt gttcagcatc ttgatttgtc aggacgtaaa 1080
gaacataaag aacataggga agtattcaag tcatggggac gatgtgactc catagatagt 1140
agtgaaaagt accactatca ggtcaaacga ataacagtta atccaagtga aaaattatcg 1200
ttgcaattac atcatcaccg tgcggaacat tgggttgttg taatggggat tgctaaagtt 1260
acagttgcag aagaaataaa aattttaaaa gagaatgagt ctgtatatat tcctgcaggt 1320
attaagcata gtttggaaaa tattgggaca ataccacttg tgttaataga agtttggacc 1380
ggttcttatc ttgctgatga tgatatcctt cgatttgaag attaatatgg tagagcttag 1440
aaatagagag tcttaataat gctaacttgc tttaaagctt atgatattcg cgggaaacta 1500
ggcgaagaac tgaatgaaga tatcgcctgg cgcattgggc gtgcctatgg cgaatttctc 1560
aaaccgaaaa ccattgtgtt aggcggtgat gtccgcctca ccagcgaaac cttaaaactg 1620
gcgctggcga aaggtttaca ggatgcgggc gtcgatgtgc tggatatcgg tatgtccggc 1680
accgaagaga tctatttcgc cacgttccat ctcggcgtgg atggcggcat tgaagttacc 1740
gccagccata atccgatgga ttataacggc atgaaactcg tgcgcgaggg ggctcgcccg 1800
atcagcgggg ataccggact gcgcgatgtc cagcgtctgg cagaagccaa cgacttccct 1860
cccgttgatg aaaccaaacg cggtcgttat cagcaaatca atctgcgtga cgcttacgtt 1920
gatcacctgt tcggttatat caacgtcaaa aacctcacgc cgctcaagct ggtgattaac 1980
tccgggaatg gcgcggcggg gccggtggtg gacgccattg aagcccgctt taaagccctc 2040
ggcgcaccgg tggaattaat caaagtacac aacacgccgg acggcaattt ccccaacggt 2100
attcctaacc cgttgctgcc ggaatgccgc gacgacaccc gtaatgcggt catcaaacac 2160
ggcgcggata tgggcattgc ctttgatggc gattttgacc gctgtttcct gtttgacgaa 2220
aaagggcagt ttatcgaggg ctactacatt gtcggcctgc tggcagaagc attcctcgaa 2280
aaaaatcccg gcgcgaagat catccacgat ccgcgtctct cctggaacac cgttgatgtg 2340
gtgaccgccg cgggcggcac tccggtgatg tcgaaaaccg gacacgcctt tattaaagaa 2400
cgtatgcgca aggaagacgc catctacggt ggcgaaatga gcgcccacca ctatttccgt 2460
gatttcgctt actgcgacag cggcatgatc ccgtggctgc tggtcgccga actggtgtgt 2520
ctgaaaggaa aaacgctggg cgaactggtg cgcgaccgga tggcggcgtt tccggcaagc 2580
ggtgagatca acagcaaact ggcgcacccc gttgaggcga ttaatcgcgt cgaacagcat 2640
tttagccgcg aggcgctggc ggtggatcgc accgatggca tcagcatgac ctttgccgac 2700
tggcgcttta acctgcgctc ctccaacacc gaaccggtgg tgcggttgaa tgtggaatcg 2760
cgcggtgatg taccgctgat ggaagaaaag acaaaactta tccttgagtt actgaacaag 2820
taa 2823
<210> 6
<211> 1300
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
accgttcgta tagcatacat tatacgaagt tatttcaaca aacgggccag tttgttgaag 60
attagatgct ataattgtta ttaaaaggat tgaaggatgc ttaggaagac gagttattaa 120
tagctgaata agaacggtgc tctccaaata ttcttattta gaaaagcaaa tctaaaatta 180
tctgaaaagg gaatgagaat agtgaatgga ccaataataa tgactagaga agaaagaatg 240
aagattgttc atgaaattaa ggaacgaata ttggataaat atggggatga tgttaaggct 300
attggtgttt atggctctct tggtcgtcag actgatgggc cctattcgga tattgagatg 360
atgtgtgtca tgtcaacaga ggaagcagag ttcagccatg aatggacaac cggtgagtgg 420
aaggtggaag tgaattttga tagcgaagag attctactag attatgcatc tcaggtggaa 480
tcagattggc cgcttacaca tggtcaattt ttctctattt tgccgattta tgattcaggt 540
ggatacttag agaaagtgta tcaaactgct aaatcggtag aagcccaaac gttccacgat 600
gcgatttgtg cccttatcgt agaagagctg tttgaatatg caggcaaatg gcgtaatatt 660
cgtgtgcaag gaccgacaac atttctacca tccttgactg tacaggtagc aatggcaggt 720
gccatgttga ttggtctgca tcatcgcatc tgttatacga cgagcgcttc ggtcttaact 780
gaagcagtta agcaatcaga tcttccttca ggttatgacc atctgtgcca gttcgtaatg 840
tctggtcaac tttccgactc tgagaaactt ctggaatcgc tagagaattt ctggaatggg 900
attcaggagt ggacagaacg acacggatat atagtggatg tgtcaaaacg cataccattc 960
tgaataactt cgtatagcat acattatacg aacggtatac acagcccagt ccagactatt 1020
cggcactgaa attatgggtg aagtggtcaa gacctcacta ggcaccttaa aaatagcgca 1080
ccctgaagaa gatttatttg aggtagccct tgcctaccta gcttccaaga aagatatcct 1140
aacagcacaa gagcggaaag atgttttgtt ctacatccag aacaacctct gctaaaattc 1200
ctgaaaaatt ttgcaaaaag ttgttgactt tatctacaag gtgtggcata atgtgtggaa 1260
ttgtgagcgg ataacaatta agcttaagga ggaagcaggt 1300
<210> 7
<211> 551
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
cctcagctgg tctagatcac tagtctgaaa aagagtaaaa taaaggtatt caaattccag 60
aaaggcggat catctatggc agagagtctt cttatcaaag acattgcgat cgtgacagaa 120
aatgaagtaa tcaaaaacgg ctatgtcgga atcaatgacg gaaaaatcag cacagtttca 180
acagaacggc ccaaggagcc atattcaaaa gagattcaag cacctgcgga ttccgttttg 240
cttcccggca tgattgacat tcatatccac ggcggctatg gcgcagatac aatggatgct 300
agcttttcca cgctcgacat catgtcgtca agactgcccg aagaaggcac gacgagcttt 360
ttagccacaa cgattaccca agagcatggg aacatttctc aagctttggt gaacgcaaga 420
gagtggaaag cggctgaaga gtcctcttta ttaggtgcag aactgctcgg cattcattta 480
gagggcccct ttgtttcgcc taaaagagcc ggagcgcagc caaaggagtg gattaggcct 540
tcggatgttg a 551
<210> 8
<211> 548
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
tgtgacggta agaggacgaa cagcacttct ttcagacgga acccttgccg gttcgatcct 60
caaaatgaac gaaggcgcac ggcatatgcg tgagtttaca aattgctctt ggacggatat 120
agctaatata acttctgaaa acgcggccaa acagctgggc atctttgacc gaaaaggcag 180
tgtgactgtg ggaaaagatg cagatttggt gattgtcagc agtgattgcg aggtgattct 240
caccatttgc cgcggaaaca ttgcatttat atccaaggag gctgaccaga tatgaaagta 300
atggaatgtc aaacgtatga agagctaagc caaatagcag ccagaataac ggcagataca 360
atcaaagaaa aacctgatgc tgttctcggt ttagcgacgg gcggcacacc ggaaggcacg 420
tatcgccagc tgatccgcct gcaccaaact gagaatctct catttcaaaa catcactaca 480
gttaatttgg atgagtacgc cggactttca agcgatgacc cgaacagcta tcacttctat 540
atgaacga 548
<210> 9
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cgcggatcca tgcgtaatct gattttcgaa gaac 34
<210> 10
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
tccccgcggt taggtcggca caatggtgcc aacc 34
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
cctcagctgg tctagatcac tag 23
<210> 12
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
cgtataatgt atgctatacg aacggttcaa catccgaagg cctaatccac 50
<210> 13
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
tcgtatagca tacattatac gaagttattt caacaaacgg gccagtttgt tgaag 55
<210> 14
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
aggtgagctc atacctgctt cctccttaag cttaatt 37
<210> 15
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
ggaggaagca ggtatgagct cacctcttat tccgg 35
<210> 16
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
accgtcacac tcacattaat tgcgttgcgc 30
<210> 17
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
acgcaattaa tgtgagtgtg acggtaagag gacgaacagc 40
<210> 18
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
tcgttcatat agaagtgata gctg 24
<210> 19
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
cggggtacca agagaggaat gtacacatga gttcacctct tattccggtt a 51
<210> 20
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
tccgagctct taatcttcaa atcgaaggat atc 33
<210> 21
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
tccgagctca agagaggaat gtacacatgc taacttgctt taaagcttat g 51
<210> 22
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
ccgctcgagg actagactag tttacttgtt cagtaactca aggata 46
<210> 23
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
ggtctagaaa gagaggaatg tacacatgac gactgaaccg ttatttttca 50
<210> 24
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
ccgctcgagt tacagatggg agacgataca ttc 33

Claims (8)

1.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，将编码甘露聚糖合酶基因ctManS与启动子P xylA 融合作为一个模块，整合至枯草芽孢杆菌的基因组上，再将GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因和磷酸甘露糖酶基因整合至该枯草芽孢杆菌的基因组上，得到整合后的枯草芽孢杆菌；再将GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因、磷酸甘露糖酶基因和磷酸甘露糖异构酶基因连接表达载体，转化至上述整合后的枯草芽孢杆菌；所述编码甘露聚糖合酶的基因ctManS的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述磷酸甘露糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；磷酸甘露糖异构酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以Bacillus subtilis 168为宿主。
3.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以pP43NMK为表达载体。
4.一种生产甘露聚糖的方法，其特征在于，将权利要求1~3任一所述的重组枯草芽孢杆菌加入含有碳源的体系中，发酵生产甘露聚糖。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述碳源选自：生物质碳源、蔗糖、果糖、葡萄糖中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，以木糖为诱导剂，诱导菌株产酶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，木糖的终浓度为5~15 mg/L。
8.权利要求1~3任一所述重组枯草芽孢杆菌，或权利要求4~7任一所述方法在食品、生物、化工领域制备甘露聚糖中的应用。
CN202010405145.5A 2020-05-14 2020-05-14 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用 Active CN111548978B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010405145.5A CN111548978B (zh) 2020-05-14 2020-05-14 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010405145.5A CN111548978B (zh) 2020-05-14 2020-05-14 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111548978A CN111548978A (zh) 2020-08-18
CN111548978B true CN111548978B (zh) 2021-11-12

Family

ID=71998358

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010405145.5A Active CN111548978B (zh) 2020-05-14 2020-05-14 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111548978B (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1402385B1 (it) * 2010-09-09 2013-09-04 Fidia Farmaceutici Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus subtilis
CN109402158B (zh) * 2018-09-14 2022-01-11 江苏大学 一种产岩藻糖基乳糖的重组表达质粒载体、代谢工程菌及生产方法
CN109749976B (zh) * 2019-01-30 2022-04-01 光明乳业股份有限公司 一种高效合成鸟苷二磷酸岩藻糖的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用
CN110846296A (zh) * 2019-11-13 2020-02-28 三峡大学 枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的克隆表达与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111548978A (zh) 2020-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111712570B (zh) 一种生产阿洛酮糖及其衍生物的工程菌株及其构建方法和应用
CN109402158B (zh) 一种产岩藻糖基乳糖的重组表达质粒载体、代谢工程菌及生产方法
CN102869783B (zh) 阿洛酮糖-差向异构酶的固定化以及使用所述阿洛酮糖-差向异构酶制备d-阿洛酮糖的方法
US20170152538A1 (en) Biosynthesis of Oligosaccharides
CN114466934A (zh) 在宿主细胞中生产岩藻糖基乳糖
CN112725319B (zh) polyG底物特异性的褐藻胶裂解酶FaAly7及其应用
CN114874964B (zh) 一种高产2′-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌的构建方法及应用
CN114480465B (zh) 一种产生2’-岩藻糖基乳糖的枯草芽孢杆菌及其应用
CN108884120A (zh) 用于通过使用微生物纯化3，6-脱水-l-半乳糖的新颖方法
CN114507658B (zh) 酶共表达系统及其在合成唾液酸的应用
CN112342178A (zh) 重组微生物、其制备方法及在生产塔格糖中的应用
WO2023103578A1 (en) A genetically engineered bacterium and a preparation method and use thereof
CN111548978B (zh) 一种产甘露聚糖的枯草芽孢杆菌及其应用
CN115011622B (zh) 一种d-阿洛酮糖3-差向异构酶突变体的筛选方法及其应用
US11312985B2 (en) Enzymatic method for preparing Rebaudioside C
CN109337882A (zh) 一种α-1,2-岩藻糖基转移酶及制备人乳寡糖中的应用
US8137946B2 (en) Recombinant GRAS strains expressing thermophilic arabinose isomerase as an active form and method of preparing food grade tagatose by using the same
CN111808836B (zh) 耐热的i型普鲁兰酶的突变体酶及其制备方法与应用
CN111607548B (zh) 一种产甘露聚糖的重组大肠杆菌及其应用
US8691535B2 (en) Sucrose mutase with improved product specificity
CN111549013A (zh) 一种atp依赖的甘露糖激酶及其在岩藻基乳糖合成中的应用
CN113817701B (zh) α-1,2-岩藻糖基转移酶突变体及其应用
CN113201512B (zh) 一种产蔗果三糖的菊糖蔗糖酶突变体
CN108795832A (zh) 一种内源l-门冬酰胺酶ii基因敲除的宿主菌、其制备方法及其应用
CN118147103A (zh) 一种α1,3/4-岩藻糖基转移酶突变体及其生物合成二岩藻糖基乳糖的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant