CN105163603A

CN105163603A - 甜味料组合物及其制造方法以及其用途

Info

Publication number: CN105163603A
Application number: CN201480020243.XA
Authority: CN
Inventors: 新谷知也; 吉川谅; P·K·古洛帕利; 何森健
Original assignee: Matsutani Chemical Industries Co Ltd
Current assignee: Matsutani Chemical Industries Co Ltd
Priority date: 2013-04-08
Filing date: 2014-03-27
Publication date: 2015-12-16
Also published as: KR102213209B1; KR20150139611A; WO2014168018A1

Abstract

本发明提供一种克服了由于摄取异构化糖而造成的疾病患病风险、以及含有稀少糖的糖浆的制造工序上或味道上的缺点的新型的甜味料及其制造方法、以及其用途。该甜味料组合物的制造方法为在特定的条件下使酸和/或酶作用于砂糖从而有效地分解为葡萄糖和果糖之后，进一步在特定的条件下使用碱和/或酶将其异构化，在该异构化生成物中作为稀少糖主要含有D-阿洛酮糖，由此成为以特定的组成比例含有砂糖、D-葡萄糖、D-果糖以及至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖，或者成为以特定的组成比例含有D-葡萄糖、D-果糖以及至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖。

Description

甜味料组合物及其制造方法以及其用途

技术领域

本发明涉及以砂糖为原料来制造目标的甜味料组合物的方法和该制造的甜味料组合物以及其用途，具体来说，涉及制造水解砂糖而得到的、在以砂糖、葡萄糖和果糖或者葡萄糖和果糖为主组成的混合糖中含有D-阿洛酮糖的甜味料组合物的方法及该得到的甜味料组合物以及其用途。

背景技术

将淀粉糖化制成糖化液，将其用葡萄糖异构酶处理而制造的异构化糖由于与砂糖的甜味度相同且生产成本低廉，因此，在以软饮料为首的饮料或食品中被广泛地用作甜味料，全世界的异构化糖生产量达到1730万吨(2009年统计)。该异构化糖的代表性的制造方法为用酶将淀粉水解制成淀粉分解物(糊精)之后，进一步用其它酶水解制成葡萄糖溶液(糖化液)，接着，通过葡萄糖异构酶将葡萄糖异构化为果糖的方法。由于异构化反应是平衡反应，因此，通过该制造方法得到的异构化糖的葡萄糖与果糖的比例通常为58:42左右。进一步，有为了消除甜味的不足而添加精制果糖的情况，在该情况下，通常使葡萄糖与果糖的比例为45:55左右。

另一方面，近年来，稀少糖由于具有各种生理效果而受到关注，正在积极地进行研究，但为了广泛地工业利用，有效地生产这些稀少糖是不可欠缺的。

在作为糖的基本单元的单糖中，相对于自然界大量存在的以D-葡萄糖(葡萄糖)为代表的“天然型单糖”，稀少糖被定义为“自然界仅微量存在的单糖”。稀少糖的存在量非常少，与D-葡萄糖(葡萄糖)相比存在量压倒性地少。

其中，现在能够大量生产的稀少糖为D-阿洛酮糖和D-阿洛糖。D-阿洛酮糖是被分类为己酮糖的阿洛酮糖的D体，并且是六碳糖(己糖)。

另外，D-阿洛糖是被分类为己醛糖的阿洛糖的D体，同样是六碳糖(己糖)。这些D-阿洛酮糖和D-阿洛糖分别为0kcal/g，分别在人体试验(非专利文献1)和动物试验(非专利文献2)中得到了证明。

D-阿洛酮糖可以通过使特定的酶作用于果糖而得到，在使D-己酮糖·3-差向异构酶(专利文献1)作用的情况下，以收率20～25％生成；在使D-阿洛酮糖·3-差向异构酶(非专利文献3)作用的情况下，以30％左右的收率生成；进一步在并用硼酸的情况下，有以60％左右的收率生成的报告(非专利文献4)。在尝试使用该酶工业大量生产稀少糖时，以确认酶的安全性为首，必须依次克服成为酶源的菌体的培养、酶的精制、酶的固定化等关于各生产工序的问题点。

对于D-阿洛糖，已知使L-阿拉伯糖异构酶作用于含有D-阿洛酮糖的溶液，从而由D-阿洛酮糖生成D-阿洛糖(专利文献2)等。

这样，稀少糖可以通过使特定的酶作用于特定的原料糖而得到，不过也公开了一些除此以外的获取方法。例如，已知有自1800年代被称为LobrydeBruynandAlberdavanEkenstein转化反应的通过烯二醇的醛糖、酮糖的异构化反应。该异构化反应是将某种糖放置在碱条件下从而能够异构化为其它糖的反应。如果利用该反应，则能够将糖异构化，因此，可以得到若干量的稀少糖(非专利文献5)，但是对于得到含有显示上述生理活性的浓度的稀少糖的异构化物，存在需要与实际的工业生产效率不相称的反应时间、由于焦糖化等副反应造成的生成物着色显著、其后的精制困难等的问题，并且难以工业利用。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平6-125776号公报

专利文献2：日本特开2002-17392号公报

专利文献3：国际公开第2010/113785号

专利文献4：日本特开2009-515091号公报

专利文献5：PCT/JP2012/67209

非专利文献

非专利文献1：IidaT,HayashiN,YamadaT,YoshikawaY,MiyazatoS,KishimotoY,OkumaK,TokudaM,IzumoriK(2010)FailureofD-psicoseabsorbedinthesmallintestinetometabolizeintoenergyanditslowlargeintestinalfermentabilityinhumans.Metabolism59:p206-214.

非专利文献2：伊贺悠祐、松尾达弘(2010)，“大鼠的D-阿洛糖的体内动态”，日本营养·粮食学会杂志63：p17-19.

非专利文献3：Appl.Environ.Microbiol.,2006,74(10),981-5.

非专利文献4：Appl.Environ.Microbiol.,2008,74(10),3008-13.

非专利文献5：Carbohydr.Res.,1987,169,13-21.

发明内容

发明所要解决的技术问题

以异构化糖或砂糖为代表的糖质(可同化糖，assimilablesugars)并发糖尿病或肥胖，近来被视作问题。另一方面，上述稀少糖具有各种有用的生理效果，特别是明确了制成葡萄糖与果糖的混合甜味料组合物时显示出优异的抗肥胖效果，还报告了通过将异构化糖碱异构化从而制造含有稀少糖的糖浆的方法(专利文献3)，或利用酶来制造含有稀少糖的糖浆的方法(专利文献4)。然而，这些糖浆由于仅由单糖构成，因此，甜味稍薄，为了使消费者长期喜欢，在甜味平衡的方面尚有改良的余地。

克服了如上的关于甜味的缺点的甜味料以及制造方法一直以来还不存在，现状是不能得到考虑了生产效率和安全方面的工业上能够实际使用的制造方法。关于甜味的缺点，使用异构化糖(上述的主要是由淀粉的分解等而得到的由葡萄糖和果糖构成的组合物)作为原料，由于异构化糖含有寡糖而且组成也不同，因此，认为甜味度、甜味品质都与砂糖不同，基于此尝试以砂糖作为原料制造含有稀少糖的甜味料。砂糖在异构化糖普及以前昂贵，因此，一直持续倾向于被异构化糖所替代，但现在世界生产1亿8千万吨左右，价格也比较稳定。通过将砂糖作为原料，可以利用砂糖的良好的甜味，另外，由于砂糖是葡萄糖与果糖结合而成的二糖，因此，也能够作为葡萄糖和果糖的供给原料利用，所以认为比异构化糖在成本上更廉价。进一步，如上所述，将砂糖作为原料的含有稀少糖的甜味料还具有比以异构化糖作为原料的甜味料杂味更少的优点。基于这些可同化糖，可期待在甜味和物性方面优异并且不会引起这些疾病的甜味料的上市。

因此，本发明想要提供一种克服了由于摄取异构化糖而造成的上述疾病患病风险、以及含有稀少糖的糖浆的制造工序上或味道上的缺点的新型的甜味料及其制造方法、以及其用途。

解决技术问题的手段

本发明者们为了解决上述技术问题而重复专门研究，结果发现：通过在特定的条件下使酸和/或酶作用于砂糖有效地分解为葡萄糖(D-葡萄糖)和果糖(D-果糖)之后，进一步在特定的条件下使用碱和/或酶将其异构化，在该异构化产物中主要含有D-阿洛酮糖作为稀少糖，从而可以得到具有特定的糖组成的甜味料组合物，以至完成本发明。

即，具体来说，本发明由以下的(1)～(9)的甜味料组合物的制造方法构成。

(1)一种甜味料组合物的制造方法，其特征在于，经过将砂糖作为原料，通过原料砂糖的水解得到作为砂糖水解物的砂糖、D-葡萄糖和D-果糖的混合物或者D-葡萄糖和D-果糖的混合物的工序；以及通过将该砂糖水解物异构化，从而得到作为最终产物的砂糖、D-葡萄糖、D-果糖、和至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖的混合物，或者得到D-葡萄糖、D-果糖、和至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖的混合物的工序，

根据原料砂糖的水解反应的程度来调节最终产物中的砂糖的含量，

最终产物以特定的组成比例含有砂糖、D-葡萄糖、D-果糖以及至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖，或者以特定的组成比例含有D-葡萄糖、D-果糖以及至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖。

(2)如上述(1)所述的甜味料组合物的制造方法，其中，原料砂糖的水解工序通过使用了酸和/或酶的分解来进行，将砂糖水解物异构化的工序通过碱异构化、使用了钙离子的催化作用的异构化和/或酶异构化来进行。

(3)如上述(2)所述的甜味料组合物的制造方法，其中，碱异构化生成包含D-阿洛酮糖、D-阿洛糖、D,L-山梨糖、D-塔格糖以及D-甘露糖的稀少糖，最终产物成为这些单糖与砂糖、D-葡萄糖和D-果糖的混合物，或者成为这些单糖与D-葡萄糖和D-果糖的混合物。

(4)如上述(2)所述的甜味料组合物的制造方法，其中，酶异构化由果糖仅生成D-阿洛酮糖，最终产物成为D-阿洛酮糖与砂糖、D-葡萄糖和D-果糖的混合物，或者成为D-阿洛酮糖与D-葡萄糖和D-果糖的混合物。

(5)如上述(2)或(4)所述的甜味料组合物的制造方法，其中，酶异构化使用来自球形节杆菌(ArthrobacterGlobiformis)M30(保藏号为NITEBP-1111)的异构酶来进行。

(6)如上述(2)、(4)或(5)所述的甜味料组合物的制造方法，其中，酶异构化使用具有1000U/湿重树脂(g)的活性的固定化酶来进行。

(7)如上述(1)～(6)中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，最终产物是甜味强度和杂味少的甜味组合物。

(8)如上述(1)～(6)中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，最终产物是提高风味释放的甜味组合物。

(9)如上述(1)～(6)中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，最终产物为砂糖的比例为10份至75份的具有良好的浓厚感和甜味平衡的甜味组合物。

(10)如上述(1)～(6)中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，最终产物为砂糖的比例为10份至80份的具有显著地降低了胰岛素分泌量的功能的甜味组合物。

另外，本发明由以下的(11)的甜味料组合物、(12)和(13)的饮食物、(14)和(15)的医药品、准医药品、化妆品构成。

(11)通过上述(1)～(10)中任一项所述的制造方法得到的甜味料组合物。

(12)使用上述(11)所述的甜味料组合物而成的饮食物。

(13)如上述(12)所述的饮食物，其中，赋予了抑制体重的上升、身体脂肪蓄积的上升的要旨的表示。

(14)由上述(11)所述的甜味料组合物构成的医药品、准医药品、化妆品。

(15)如上述(14)所述的医药品、准医药品、化妆品，其中，用于抑制体重的上升、身体脂肪蓄积的上升。

发明的效果

根据本发明，可以通过将砂糖作为原料，从而利用砂糖的良好的甜味，并且由于砂糖是葡萄糖与果糖结合而成的二糖，因此，也可以作为葡萄糖和果糖的供给原料来利用，比将异构化糖作为原料成本上更廉价，基于这些可同化糖，可以提供甜味和物性方面优异，并且不会引起这些疾病的甜味料。可以提供一种克服了由于摄取异构化糖而造成的糖尿病和肥胖的并发的疾病患病风险、以及含有稀少糖的糖浆的制造工序上或味道上的缺点的新型的甜味料及其制造方法、以及其用途。即，根据本发明，可以提供平衡性良好地含有砂糖、D-葡萄糖、D-果糖以及以D-阿洛酮糖为首的稀少糖的接近砂糖味道的甜味料组合物。另外，本发明由于是不仅物性方面而且性价比优异的制造方法，因此，可以提供能够廉价且安全地利用于医药品或准医药品、口腔用组合物、化妆品以及食品、食品添加物中的甜味剂。进一步，本发明品由于是比异构化糖或砂糖本身味道和功能性更优异的甜味剂，因此，能够具有对于饮食物品作为抗肥胖剂、摄食抑制剂、胰岛素抵抗性改善剂或者低热量甜味剂的特质。

附图说明

图1是表示将砂糖作为原料的含有稀少糖的甜味料的制造流程。

图2是表示使人摄取本发明的各甜味料组合物时的血糖值曲线下面积。

图3是表示使人摄取本发明的各甜味料组合物时的胰岛素浓度曲线下面积。

符号的说明

1砂糖溶解罐

2水解罐和中和罐

3转化酶固定化柱

4异构化罐

5差向异构酶固定化罐

6精制装置

7分离装置

具体实施方式

本发明由将砂糖作为原料，成为以特定的组成比例含有砂糖、D-葡萄糖、D-果糖、稀少糖(D-阿洛酮糖等)等的甜味料组合物及其制造方法以及其用途构成。

通过成为原料的砂糖的水解反应的程度，能够调节最终得到的甜味料者中的砂糖的含量，进一步，通过第二工序的异构化反应的程度，可以调节最终得到的甜味料组合物中的稀少糖的含量，但为了得到本发明的味道上的效果，最终甜味料组合物中的砂糖优选为3～80％，优选含有D-阿洛酮糖3％以上(以下只要没有特别说明，％表示糖组合物(固形物)中的质量％)，即使比较调制成不含砂糖的甜味组合物，通过将砂糖作为原料也比将异构化糖作为原料时成为杂味更少的甜味料组合物。

本发明的甜味料组合物中的D-阿洛酮糖含量为3％以上时，可以得到味道上的效果，作为砂糖分解后进行的异构化的方法，在选择后述的碱异构化时，除了D-阿洛酮糖以外的D-阿洛糖、D-塔格糖、D-阿卓糖等稀少糖以外，生成D-甘露糖、D-山梨糖、L-山梨糖等。如果碱异构化反应过度进行，则着色显著进行，难以进行之后的精制，因此，作为该精制工序中不花费成本的异构化反应的程度，D-阿洛酮糖和D-阿洛糖的组成相对于最终甜味料组合物中除去砂糖时的糖质量分别优选为0.5～17.0％(优选为1～15％)和0.2～10.0％(优选为0.4～8％)，通过设定为该组成，可以得到兼顾本发明的味道上的效果和降低精制工序的成本的甜味料组合物。另外，除去砂糖，与其它生成稀少糖一并在最终甜味料组合物中所含的D-阿洛酮糖和D-阿洛糖分别为2.3％以上和1.3％以上时，本发明的甜味料组合物显示能够用作抗肥胖剂、摄食抑制剂、以及胰岛素抵抗性改善剂的特性，此外，稀少糖含量越多，则热量越低，因此，也可以用作低热量甜味剂。

[原料砂糖]

本发明中的作为原料的砂糖只要含有D-葡萄糖(葡萄糖)和D-果糖(果糖)结合而成的糖即可，没有限定为来自甘蔗或甜菜等原料来源，对于离心糖(centrifugalsugar)或非离心糖(non-centrifugalsugar)等制法的差异或白砂糖(whitegranulatedsugar)、粗晶中绵白糖(coarsecrystalmediumsoftsugar)、细砂糖(granulatedsugar)、上等白糖、金黄幼砂糖(softbrownsugar)、转化糖、方糖、冰糖、黑糖、红糖、以及和三盆糖等产品分类也没有限定，另外，砂糖的精制过程中的任何糖液都可以，是指包含砂糖的全部糖。进一步，在本发明中，作为成为原料的砂糖，也可以利用包含砂糖的三糖以上的寡糖(低聚果糖、耦合糖、低聚乳果糖(Lactosucrose)、6-O-α-D-吡喃葡萄糖基-α-D-吡喃葡萄糖基β-D-呋喃果糖苷(Theanderose，6-O-α-D-Glucopyranosyl-α-D-glucopyranosylβ-D-fructofuranoside))。

关于将上述列举的原料的用于制造砂糖时的浓度，如果考虑到事后的浓缩工序的简化，则原料糖液浓度越高越优选，但由于原料砂糖液的浓度越低则越能够提高稀少糖的收率，因此，如果同时考虑生产效率，则原料砂糖液的浓度可以为3～80％，优选为10～60％，进一步优选为20～40％。

另一方面，从防止固定化酶的载体树脂和精制中使用的树脂的悬浮的观点出发，更加优选为3～40％左右。

另外，通过调节糖浓度也可以得到生成组成物比不同的混合糖，例如，相对于糖浓度为100％的原料、即粉体，喷雾酸或碱也能够生产。

[原料砂糖的水解]

原料砂糖的水解工序通过使用了酸和/或酶的分解来进行。为了将原料糖水解，可以使用酸(酸性溶液)。使用了酸的分解可以将无机酸、磺酸或羧酸用作酸性溶液来进行。更详细地说，在本发明中，作为酸性溶液，可以适当使用无机酸类(盐酸、硫酸、硝酸、氢溴酸、次氯酸、高氯酸、磷酸、硼酸、氟磺酸等)、磺酸类、羧酸类(乙酸、柠檬酸、甲酸、葡萄糖酸、乳酸、草酸、酒石酸等)等，但从安全性和费用的方面出发，优选为盐酸。最适宜的酸的浓度受反应时间和温度影响，通常优选在原料砂糖溶液中含有0.01～5mol/l左右。另外，酸分解的反应温度优选为20℃以上，进一步优选为30℃～100℃。

作为将砂糖水解的方法，不通过上述酸的分解，也可以使用酶进行分解。使用了酶的分解可以使用转化酶(invertase)来进行。更详细地说，作为酶，可以列举蔗糖酶、转化酶(IUPAC-IUB系统名称为β-D-呋喃果糖苷酶(E.C.3.2.1.26))，菌株来源没有特别地限定。

关于酶浓度，根据底物浓度和反应时间而不同，通常优选以相对于底物为0.00075～0.003％(w/w)来使用100unit/mg的酶，也可以根据酶的反应条件或酶的固定化条件来适当变更。另外，酶的反应温度优选为20℃以上，进一步优选为30℃～100℃。最佳在60℃附近。

转化酶的固定化通过将市售转化酶溶解于缓冲液(pH7)，对于柱填充树脂在4℃下使之通液，从而得到使转化酶蛋白质结合于离子交换树脂的固定化转化酶。

如上所述，原料砂糖的水解可以通过使用了酸或转化酶的分解的任一种来进行，通常可以根据所要得到的生成物的组成分别使用，可以仅使用任一种，也可以并用。

[砂糖水解物的异构化]

将砂糖水解物异构化的工序通过碱异构化、使用了钙离子的催化作用的异构化和/或酶异构化来进行。

首先，对酶异构化进行说明。

将作为原料的砂糖水解之后，为了自果糖生成D-阿洛酮糖，可以选择塔格糖-3-差向异构酶或阿洛酮糖-3-差向异构酶这样的异构化(差向异构化)酶的方法。作为这些异构化酶的塔格糖-3-差向异构酶或阿洛酮糖-3-差向异构酶的获取源的微生物的菌株来源没有特别地限定，但为也可以用于食品中的安全的菌种。

从承认制造食品时使用的现有添加物名单清单列表中收录的菌种并且几乎没有毒性的菌种中，优选为产生以高收率对由D-果糖异构化为D-阿洛酮糖进行催化的新型的酮糖3-差向异构酶的节杆菌(Arthrobacter)属的菌种(专利文献5)，进一步优选为节杆菌属球形种，尤其优选为球形节杆菌M30(保藏号为NITEBP-1111)。关于酶浓度，根据底物浓度和反应时间而适宜的范围不同，在酶的固定化时，优选具有1000U/湿重树脂(g)左右的活性。

作为进行酶异构化的反应温度，优选为20℃以上，进一步优选为30℃～80℃。实用上优选为45℃附近。

对于上述的球形节杆菌进行说明。本发明中能够使用的酮糖-3-差向异构酶可以通过培养属于节杆菌(Arthrobacter)属并且具有酮糖-3-差向异构酶生产能力的微生物，从培养液中繁殖的菌体中采取酮糖-3-差向异构酶来进行调制。作为属于节杆菌(Arthrobacter)属的微生物，可以有利地利用例如球形节杆菌(Arthrobacterglobiformis)M30(保藏号为NITEBP-1111)株以及这些的突变株等。M30株的酮糖-3-差向异构酶的生产能力比较高，在得到本发明的酶上优选。M30株在日本独立行政法人制品评价技术基础机构专利生物保藏中心(日本千叶县木更津市东上总镰足2-5-8)由2011年6月22日原保藏的NITEP-1111基于布达佩斯条约在2012年5月2日请求保藏的移管，保藏号为NITEBP-1111进行了国际保藏。

即，本发明中能够使用的优选的酮糖-3-差向异构酶可以由属于节杆菌属的微生物得到，并且是具有下述(A)、(B)的底物特异性的酮糖-3-差向异构酶。

(A)将D-酮糖或L-酮糖的3位差向异构体化，生成对应的D-酮糖或L-酮糖；

(B)在D-酮糖或L-酮糖中相对于D-果糖和D-阿洛酮糖的底物特异性最高。

来自球形节杆菌M30(保藏号NITEBP-1111)的酮糖-3-差向异构酶通过SDS-PAGE的亚基的分子量约32kDa，通过凝胶过滤法的分子量为120kDa，并且为亚基的分子量为32kDa的同源四聚体结构，具有下述的理化学性质(a)～(e)并且具有下述的底物特异性1.～8.(参照专利文献5)。

(a)最佳pH

在30℃下、反应30分钟、20mM的镁(Mg²⁺)存在下的条件下为6～11。

(b)最佳温度

在pH7.5、反应30分钟、20mM的镁(Mg²⁺)存在的条件下为60～80℃。

(c)pH稳定性

在4℃、保持24小时的条件下至少在pH5～11的范围内稳定。

(d)热稳定性

在pH7.5、保持1小时、4mM的镁离子(Mg²⁺)存在的条件下在约50℃以下稳定；在镁离子(Mg²⁺)不存在的条件下在约40℃以下稳定；

(e)通过金属离子的活化

通过二价锰离子(Mn²⁺)、二价钴离子(Co²⁺)、钙(Ca²⁺)和镁离子(Mg²⁺)进行活化。

1.将D-果糖作为底物时的相对活性为43.8％；

2.将D-阿洛酮糖作为底物时的活性为100％；

3.将D-山梨糖作为底物时的相对活性为1.13％；

4.将D-塔格糖作为底物时的相对活性为18.3％；

5.将L-果糖作为底物时的相对活性为0.97％；

6.将L-阿洛酮糖作为底物时的相对活性为21.2％；

7.将L-山梨糖作为底物时的相对活性为16.6％；

8.将L-塔格糖作为底物时的相对活性为44.0％，

其中，将D-阿洛酮糖的差向异构化活性作为100将相对于各酮糖的活性表示为相对活性。

[异构化酶的固定化]

另外，最实用的是将异构化酶固定化于离子交换树脂等适当的基材来使用。整体的制造工序是由混合和加热处理构成的简便的工序，可以使用分批式或连续式的任一方式。在连续式的情况下，以一连串的工序进行原料砂糖的水解工序和将砂糖水解物异构化的工序，进一步，将由球形节杆菌M30(保藏号NITEBP-1111)得到的酶固定化来进行。这样，以一连串的工序进行将砂糖作为原料的水解和异构化工序，此外，一直以来没有将由该菌种得到的酶固定化从而用于制造中的制造方法，可以说是新型的制造法。酶异构化使用具有1000U/湿重树脂(g)的活性的固定化酶来进行。节杆菌属产生的异构化酶可以将通过培养得到的菌体悬浊于缓冲液(pH7.0)，一边冷却一边通过超声波处理进行细胞破碎，或者使用通过溶菌酶的处理将存在于该菌体的细胞壁的多糖类成分消化从而将该菌体细胞破坏，从由此得到的破坏细胞的溶液中采集作为粗酶液。可以对进行了柱填充的离子交换树脂，在低温(4℃)下使上述粗酶液通液，使粗酶蛋白质结合于离子交换树脂，通过精制水进行清洗，得到固定化酶。从能够完全满足商业上生产的稳定性(活性维持)的观点出发，可以得到能够承受连续生产的固定化体系。使用得到的固定化酶可以连续地进行大量的差向异构化反应。

对于上述M30菌体的固定化，由于已知在通过0.1～2％氯化钠和溶菌酶的破碎处理之后，在40～70℃进行5～60分钟的加热处理之后得到的上清液中能够得到较多的具有活性的酮糖-3-差向异构酶，因此，预计另外进行专利申请。

作为将原料砂糖分解后进行异构化的方法，不限于通过上述酶的异构化(差向异构化)，也可以选择利用了碱异构化的方法。作为进行碱异构化反应时使用的碱性溶液，可以列举氢氧化钠、氢氧化钾、氨、氢氧化钙、氧化钙、氢氧化钡、氢氧化铅、氢氧化锶、氢氧化镁、氢氧化锡、氢氧化铝，从安全性和费用方面出发，优选为氢氧化钠和氢氧化钙。

最佳的碱浓度受是否并用离子交换树脂影响，但通常在己糖(六单糖)溶液中优选含有0.005mol/l以上。

关于碱异构化的反应温度，优选为20℃以上，进一步优选为30℃～100℃。

进一步，使用了钙离子的催化作用的异构化在生成钙离子的钙盐的存在下进行己糖的异构化反应来进行。

在专利文献3中记载了使用了氯化钙的葡萄糖的异构化方法，在本发明中也可以进行使用了钙离子的催化作用的异构化反应。在本发明中，可以在生成钙离子的钙盐，例如氯化钙的存在下进行己糖的异构化反应，即，例如由果糖来制造含有D-阿洛酮糖和D-阿洛糖的糖组合物。钙盐优选在碱共存下，优选在糖液中含有0.005mol/l以上。在钙盐存在的体系中不一定需要碱性离子交换树脂的共存。

[最终产物]

通过作为原料的砂糖的水解反应的程度来调节最终产物中的砂糖的含量。最终产物以特定比例含有砂糖、D-葡萄糖、D-果糖以及至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖，或者以特定的组成比例含有D-葡萄糖、D-果糖以及至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖。如果进行碱异构化，则生成包含D-阿洛酮糖、D-阿洛糖、D,L-山梨糖、D-塔格糖以及D-甘露糖的稀少糖，最终产物成为这些单糖、砂糖、葡萄糖以及果糖的混合物。使用了钙离子的催化作用的异构化由果糖生成包含D-阿洛酮糖和D-阿洛糖的稀少糖，最终产物成为这些单糖、砂糖、葡萄糖以及果糖的混合物。如果进行酶异构化，则由果糖仅生成D-阿洛酮糖，最终产物成为D-阿洛酮糖、砂糖、葡萄糖以及果糖的混合物，或者成为D-阿洛酮糖、葡萄糖以及果糖的混合物。使用碱异构化或酶异构化的哪一种都可以根据水解的量和所要得到的产物的组成分别使用，可以仅使用任一种，也可以使用两者。

此外，通过适当改变原料砂糖浓度、酸浓度、碱浓度、酶浓度、反应温度等，可以调整生成的组合物的糖组成，即，最终作为甜味料可以得到调整为优选的味道、物性的组合物。另外，特别在需要严密的组成比调整的情况下，也可以适当添加砂糖、葡萄糖、果糖、稀少糖等来调整。在想要提早反应时间的情况下，也可以施加压力提高生产性。

另外，关于得到的反应液的精制，通常可以适当使用糖质产业中使用的离子交换树脂、活性碳以及通过过滤的精制，例如，可以从得到的反应液中通过柱色谱法分离除去不是目标的糖，或者可以使用与糖螯合的药剂进行沉淀分离。通过本发明的方法，在通过柱色谱仪进行分离之前不发生显著的褐变，但是考虑柱的寿命，也可以在前段加入通过活性碳的脱臭、脱色过程等通常已知的精制工序。另外，关于色谱分离方式，对于本目的来说模拟移动相色谱方式最佳，但没有特别地限定。

进一步，如果鉴于分离工序的优点，也可以从得到的反应液中仅分离稀少糖，适当添加于混合糖中来制成目标的组合物，因此，能够再利用分离目标糖后残留的糖液。即，将残糖液与原料糖再合一再次导入水解反应工序，从而能够构筑连续机械设备，因此，可以简化制造工序。

将本发明的优选的实施方式图示于图1中。

通过本发明的制造方法，可以编组图1所示的生产流程(装置)，可以采取该一连串的工序来简便地得到本发明的甜味料组合物。

在图1中，工序1是使原料砂糖溶解的罐，工序2是将原料砂糖酸水解的罐，3是将原料砂糖水解的转化酶固定化柱。砂糖的水解可以考虑水解时间或反应效率等使用工序2或3。接着，4、5的工序是通过碱的异构化工序或者通过酶的异构化工序，可以使用任一种，由于通过碱的异构化还生成D-阿洛酮糖以外的稀少糖，而通过酶的异构化仅生成D-阿洛酮糖作为稀少糖，因此，可以根据目标来选择该工序。工序6是离子交换树脂、活性碳、过滤器等糖精制中所用的一般的精制工序。进一步，进行至工序7也可以分离取得稀少糖单品。在工序7中分离取得稀少糖的情况下，可以将残留的砂糖、葡萄糖、果糖的混合糖液再次回到工序1中作为原料糖进行再利用。

[最终产物的用途]

根据本发明，可以得到将砂糖作为原料的甜味强度和杂味少的甜味组合物。可以得到将砂糖作为原料的提高了风味释放的甜味组合物。从上述将砂糖作为原料的包含稀少糖的甜味料比将异构化糖作为原料的甜味料杂味少的优点的观点出发，可以得到砂糖的比例为10份至75份的具有良好的浓厚感和甜味平衡的甜味组合物。进一步，从上述甜味和物性方面优异，并且不会引起并发糖尿病和肥胖等疾病的甜味料的观点出发，即使将砂糖的比例增加至约80份也可以保证为具有显著地降低胰岛素分泌量的功能的甜味组合物。因此，本发明涉及使用上述的甜味料组合物而成的饮食物，赋予了抑制体重的上升、身体脂肪蓄积的上升的宗旨的表示的饮食物。另外，涉及由甜味料组合物构成的医药品、准医药品、化妆品，用于抑制体重的上升、身体脂肪蓄积的上升的医药品、准医药品、化妆品。

在将本发明的甜味料组合物利用于饮食物的情况下，其形态没有特别地限定，可以是直接的形态、稀释于油等溶剂中的形态、乳液状的形态、或者添加了食品业界中通常使用的载体的形态等任一种形态。

作为利用本发明的甜味料组合物的具体的对象饮食物，可以列举以下的产品。即，可以列举西点类(布丁、果冻、橡皮糖、糖果、水果糖、牛奶糖、口香糖、巧克力、面粉糕饼、甜奶油酱、卡仕达酱(custardcream)、泡芙、薄煎饼、面包、薯片、炸薯条、爆玉米花、饼干、咸饼干、馅饼、海绵蛋糕(spongecake)、长崎蛋糕(Castilla)、华夫饼、蛋糕、甜甜圈、饼干、曲奇、煎饼、烤年糕片、米花糖、包子、饴糖等)、挂面产品(通心粉、意大利面)、蛋制品(蛋黄酱、鲜奶油)、饮料(功能性饮料、乳酸饮料、乳酸菌饮料、浓缩乳饮料、果汁饮料、无果汁饮料、果肉饮料、透明碳酸饮料、加果汁碳酸饮料、水果着色碳酸饮料、酒精饮料、啤酒类饮料)、嗜好品(绿茶、红茶、速溶咖啡、可可、罐装咖啡饮料)、乳制品(冰激凌、酸奶、咖啡用牛奶、黄油、奶油酱、奶酪、发酵乳、加工乳)、酱类(橘皮果酱、果酱、面酱(flourpaste)、花生酱、果泥、果子的糖浆腌制品)、畜肉制品(火腿、香肠、培根、风干肠、牛肉干、猪油)、鱼类和贝类制品(鱼肉火腿、鱼肉香肠、鱼糕、竹轮、鱼肉山芋饼、晒干的鱼、干制鲣鱼、干青花鱼、小杂鱼干、海胆酱、咸乌贼、干鱿鱼、腊制小干鱼、晒干的贝类、鲑鱼等的熏制品)、咸烹海味类(小鱼、贝类、野菜、蘑菇、海带)、咖喱类(即食咖喱、甑煮咖喱、罐装咖喱)、调味料(味增、味增粉、酱油、酱油粉、未过滤的酱油、鱼酱、沙司、番茄酱、蚝油、固体肉汤(solidbouillon)、烤肉酱、咖喱粉、炖菜原汁、速溶汤、高汤原汁、酱、速食汤、紫菜盐、沙拉酱、色拉油)、油炸制品(油炸豆腐、油炸点心、方便面)、豆浆、人造奶油、起酥油等。

另外，上述饮食物也可以作为功能性食品、营养补充食品或保健食品之类使用。其形态没有特别地限定，例如可以按照通常的方法与取得氨基酸平衡的营养价值高的乳蛋白、大豆蛋白、卵清蛋白等蛋白质、这些的分解物、蛋白的寡肽、大豆水解物、氨基酸单体的混合物等一起使用。另外，也可以以软胶囊、片剂、薄膜等的形态利用。

作为上述营养补充食品或功能性食品的例子，可以列举配合有糖类、脂肪、微量元素、维生素类、乳化剂、香料等的流质食品、半消化态营养食品、成分营养食品、饮料剂、胶囊剂、经肠营养剂等的加工形态。这些各种饮食品中，例如运动饮料、营养饮料等饮食物以营养平衡和风味的提高为目的，还可以进一步配合氨基酸、维生素类、矿物质类等营养上的添加物、甜味料、香辛料、香料、色素等。

本发明的甜味料组合物除了上述以外，可以作为以改善糖质代谢异常和/或脂质代谢异常为目的的食品原材料或食品添加物来利用，在作为药剂使用的情况下，可以以片剂、胶囊剂、溶解于饮料的用途的粉末或颗粒等固形剂、果冻等半固形体、饮用水等液体、稀释使用的高浓度溶液等的形态来利用。

进一步，将本发明的甜味料组合物适当添加到饮食品中，也可以制成以改善糖质代谢异常和/或脂质代谢异常为目的的保健食品或病人食品，作为任意成分可以适当配合通常添加于食品中的维生素类、碳水化合物、色素、香料等。对于其形态，也可以是液状、固体状、或者用明胶等外包胶囊化后的软胶囊剂的形态，该胶囊例如可以用通过在原料明胶中加入水进行溶解，在其中加入增塑剂(甘油、D-山梨糖醇等)而制得的明胶皮膜制作。

另外，本发明的甜味料组合物可以应用于家畜、家禽、宠物类的饲料。例如，可以配合于干狗粮、干猫粮、湿狗粮、湿猫粮、半湿狗粮、养鸡用饲料、牛、猪等的家畜用饲料中。饲料本身可以按照通常的方法进行调制。

这些治疗剂和预防剂也可以用于人以外的动物，例如牛、马、猪、羊等的家畜用哺乳类、鸡、鹌鹑、驼鸟等的家禽类、爬行类、鸟类或者小型哺乳类等的宠物类、养殖鱼类等。

另外，根据本发明的甜味料组合物还可以进一步与阿斯巴甜、三氯蔗糖、乙酰磺胺酸钾、甜菊、莫纳甜(monatin)、莫内林、非洲奇果蛋白(miraculin)等高甜味度甜味料、山梨糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、乳糖醇、麦芽糖醇等糖醇、酮糖、醛糖等甜味料混合调节甜味来调制甜味料。

本发明的甜味料组合物可以利用于食品、保健用食品、病患用食品、食品原材料、保健用食品原材料、病患用食品原材料、食品添加物、保健用食品添加物、病患用食品添加物、饮料、保健用饮料、病患用饮料、饮用水、保健用饮用水、病患用饮用水、药剂、制剂原料、饲料、患畜和/或患畜用饲料、医药品或准医药品、口腔用组合物、化妆品、食品添加物等的需要甜味或功能性的全部产品中，可以简便且廉价地提供能够安全地使用的甜味料组合物。

另外，根据本发明，可以提供着眼于特定的己糖所具有的生理作用的含有特定的己糖的糖组合物、以及使用了其的特定用保健食品、医药品或准医药品、口腔用组合物、化妆品等，具体来说，含有砂糖、葡萄糖、果糖以及D-阿洛酮糖，在作为进行异构化的方法选择碱异构化反应的情况下，由于可以得到也含有D-阿洛糖等的在味道上物性上生理上都优异的糖组合物，因此，相对于可同化糖，例如异构化糖或砂糖，能够具有作为味道优异的甜味剂、抗肥胖剂、摄食抑制剂、胰岛素抵抗性改善剂、低热量甜味剂、血压抑制剂的特质。

应该特别写出的是得到的本发明的甜味料组合物与一直以来已知的单糖不同，低热量，并且具有食欲抑制效果，因此，具备抗肥胖效果也优异等新型的特质。另外，本发明的甜味料组合物甜味品质接近砂糖，且热量低，因此，可以广泛地用作低热量甜味剂。

上述饮食物可以通过将本发明的甜味料组合物作为其原料配合来进行加工制造，本发明的甜味料组合物相对于上述饮食物的配合量根据作为对象的饮食物的形态而不同，没有特别地限定，通常在饮食物中优选为0.1～50质量％。

本发明的新型糖组合物不仅可以期待广泛地用作软饮料或其它饮料的甜味料，还可以期待利用于食品、医药品或准医药品、口腔用组合物、化妆品中。

实施例

通过实验例和实施例来更详细地说明本发明，但本发明并没有被任何实施例限定。

<实验例A：砂糖的酸水解>

使用砂糖和盐酸，调制含有砂糖3％(w/v)的0.7mol/l盐酸溶液。对其以温度40℃分别进行20分钟、30分钟、50分钟、80分钟的水解。用氢氧化钠将分解液中和之后，用HPLC(检测器：RI，柱：三菱化成MCIGELCK08EC，移动相：水，流速：0.4ml/min)进行分析(该分析条件在以下的实验例中也相同。)。

将得到的水解物的糖组成(％)示于以下的表1中。

[表1]

接着，为了确认由酸水解得到的糖组成在不同的浓度下是否也同样地发生分解，对砂糖80％(w/w)溶液确认了在90℃下酸水解条件下的糖组成，结果确认了分解。

另外，为了确认由酸水解得到的糖组成是否通过不同的酸浓度都发生分解，确认了利用盐酸浓度为0.01～5mol/l的各浓度的盐酸通过水解得到的糖组成，结果确认了分解。

<实验例B～D：砂糖的酶水解>

使用砂糖和转化酶(MPBiomeicals,Inc.制造，100unit/mg)，调制含有转化酶(0.003％w/w，砂糖g)的3％(w/v)砂糖溶液。对其在温度40℃下分别进行20分钟、30分钟、40分钟的水解，用与实施例1同样的方法进行HPLC分析。

将得到的水解物的糖组成(％)示于以下的表2中。

[表2]

接着，调制含有转化酶(0.00075％w/w，砂糖g)的25％(w/v)砂糖溶液，对其在温度40℃下分别进行10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟、70分钟、80分钟的水解，同样地进行HPLC分析。

将得到的水解物的糖组成(％)示于以下的表3中。

[表3]

进一步，将市售转化酶(DSM公司制造，200U/mg)固定化于离子交换树脂(树脂：IRA904，柱内径1.5cm，固定化酶1500U/湿重(g))(关于方法，示于以下。)，使用该树脂20ml，在温度45℃、送液速度3ml/min、速度2ml/min、速度1ml/min下将砂糖30％溶液送液使之反应。对此时从柱中洗脱的反应液进行取样，进行了HPLC分析。

将得到的水解物的糖组成(％)示于以下的表4中。

[表4]

转化酶的固定化：

将0.2g市售转化酶(DSM公司制造，200000U/g)溶解于磷酸缓冲液(pH7)中，在4℃下将其200ml对20ml柱填充树脂通液(SV＝1)，由此使转化酶蛋白质结合于离子交换树脂。固定化效率为75％。接着，通入1L的精制水进行清洗，最终得到了固定化酶(1500U/湿重(g))。

<实验例E：砂糖的酶水解物的通过碱的异构化反应>

将实验例2中的实验区C3、C4、C5中得到的酶水解物的各液调制成0.1MNaOH，在温度60℃下进行2小时异构化反应。对异构化反应后的一部分反应液进行取样，通过HPLC分析糖组成。

将得到的碱异构化反应物的糖组成示于以下的表5中。

[表5]

<实验例F：砂糖的酶水解物的通过酶的异构化反应>

将实验例2的实验区C1、C3、C4、C8中得到的水解物供给于从球形节杆菌M30(保藏号NITEBP-1111)中提取从而固定化于离子交换树脂的酶(对于固定化的方法示于以下)，进行了异构化反应。异构化通过在温度45℃、送液速度0.5ml/min下送液于离子交换树脂50ml(树脂：AmberliteIRA900J，柱内径1.5cm)进行，对柱洗脱液进行取样，分析其糖组成。

将得到的酶异构化反应物的糖组成(％)示于以下的表6中。

[表6]

※节杆菌属生产的异构化酶的固定化：

<通过超声波的菌体内酶的提取>

将通过培养得到的菌体60g悬浊于600ml10mM磷酸缓冲液(pH7.0)中，在冰水中一边冷却一边用超声波均质机(株式会社SONICS&MATERIALS)进行细胞破碎之后，在50℃下赋予15分钟的热休克。将对该破碎物通过12000rpm·20分钟的离心分离而得到的上清液约500ml作为粗酶液。

<粗酶的固定化>

对于柱填充后的离子交换树脂(AmberliteIRW904J，柱内径1.5cm)通液上述粗酶液(4℃、SV＝1)，并使粗酶蛋白质结合于离子交换树脂。接着，通入1L精制水进行清洗，得到了固定化酶(固定化酶1000U/湿重(g))。

<通液反应>

作为原料糖，使用10mM磷酸缓冲液(pH7.5)调制高果糖液糖以成为Bx30，以送液速度0.5ml/min送液至上述固定化酶树脂50ml(40℃)。半衰期为第51天，本固定化法在产业上可以说非常优异。

[实施例1]

<糖组合物的感官评价1>

使用20多岁～40多岁的味觉上精通的专业评价人员5人，对于在实验例E、F中得到的糖液的组合物(E1、E3、F1、F3)、将各糖适当混合制成的G1(葡萄糖49:果糖42:D-阿洛酮糖7)、G2(葡萄糖51:果糖36:D-阿洛酮糖10)、G3(砂糖10:葡萄糖48:果糖38)以及G4(砂糖40:葡萄糖25:果糖25)的各糖组合物的味道进行感官评价。糖组合物全部使用调整为固体成分10％后的组合物，评价对甜味的“浓厚感”和“平衡”以5分满分(1分：差～5分：非常良好)进行评价，将其结果(5名专业评价人员的合计分数)表示于表7中。

[表7]

与G1、G2、G3和G4比较，E1、E3、F1以及F3浓厚感和甜味的平衡都良好。

即，可知通过使砂糖不完全水解至最后，并且在该组合物中存在D-阿洛酮糖，从而与将砂糖完全水解后异构化所得到的糖组合物相比较，改善了甜味的浓厚感和平衡性。

另外，在甜味料中砂糖的比例为10份以下的情况下或超过75份的情况下，发现有浓厚感或平衡性变坏的倾向，优选以设定为该范围的砂糖比例的方式进行制造。

<糖组合物的感官评价2>

接着，对于E1、E3、F1、F3以及将各甜味料适当混合制成的H1(D-阿洛酮糖10:赤藓糖醇30:三氯蔗糖0.1)、H2(D-阿洛酮糖60:赤藓糖醇20:三氯蔗糖0.055)的各糖组合物的味道，以与之前同样的顺序进行了感官评价。将结果(5名专业评价人员的合计分数)示于表8中。

但是，为了含有高甜味度甜味料而难以使甜味料组合物中的固体成分一定来进行比较，从而使甜味料组合物的甜味度一定来比较甜味品质。

[表8]

通常已知高甜味度甜味料比低甜味度甜味料后味差(有异味)，实际上在使用作为高甜味度甜味料的三氯蔗糖的情况下，评价结果为后味差(表7)。为了高甜味度甜味料在后味有长时间残留的甜味或异味，大多采用与前味中感觉到爽快的甜味的糖醇并用的方法，但在该情况下也非常难以使各甜味料的甜味品质具有统一性(一体感)，有分别感觉到各个甜味料的甜味的难点，结果本发明的甜味料组合物即E1、E3、F1以及F3与含有高甜味度甜味料的H1和H2相比，在后味也没有异味等难点，成为具有统一性的非常优秀的甜味品质。

即，由砂糖、葡萄糖、以及果糖构成的甜味组合物中含有至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖的甜味料在与由糖醇和高甜味度甜味料构成的甜味组合物中添加了D-阿洛酮糖的甜味料相比的情况下，可以说是甜味品质更有统一性的甜味料。

仿照实验例C的顺序将砂糖完全酶水解的组合物进一步仿照实验例F用异构化酶异构化，并得到了组合物I1(葡萄糖50:果糖38:D-阿洛酮糖12)。另外，将市售的一般的异构化糖(葡萄糖50:果糖45:寡糖5)仿照实验例F用异构化酶异构化，从而得到组合物I2(葡萄糖50:果糖34:D-阿洛酮糖11:寡糖5)。对于各糖组合物的味道，通过与上述(<糖组合物的感官评价1>)同样的评价方法进行感官评价。但是，评价项目为“甜味的前味开始的强度”和“杂味”。

其结果，I1与I2相比不仅甜味的前味开始强，而且从杂味少方面出发，作为甜味料也优异。由此可以说，将砂糖作为原料通过上述方法得到的异构化甜味组合物相比将异构化糖作为原料通过上述方法得到的异构化甜味组合物，作为甜味料更优异。这或许可以认为是由于市售的一般的异构化糖中所含的寡糖等的混杂物多少抑制甜味的前味的开始，并使人感觉到杂味。

由该结果可以说，相比于将市售的一般的异构化糖作为原料，将砂糖作为原料得到的甜味组合物作为甜味料是优选的味道品质。

[实施例2]

<酸性饮料的调制和感官评价1>

使用上述实验例E、F中得到的糖组合物(E1、E3、F1、F3)、将各糖适当混合制成的G1(葡萄糖45:果糖42:D-阿洛酮糖7)、以及G2(葡萄糖51:果糖36:D-阿洛酮糖10)的各糖组合物，按照表9的配合调制了酸性饮料。对于该酸性饮料，与实施例1同样由5名专业评价人员进行感官评价。将其结果示于表10中。

[表9]

*其中，为固体成分换算量。

[表10]

与糖组合物本身的感官评价结果同样地，与G1和G2相比，使用了E1、E3、F1、F3的糖组合物的酸性饮料分别浓厚感和甜味平衡都良好。

<酸性饮料的调制和感官评价2>

使用上述实验例E、F中得到的糖组合物(E2、F4)、将各糖适当混合制成的G5(葡萄糖60:果糖38:D-阿洛酮糖10)、G6(葡萄糖55:果糖30:D-阿洛酮糖20)、G7(砂糖36:葡萄糖45:果糖22)以及G8(砂糖12:葡萄糖50:果糖33)的各糖组合物，按照表11的配合调制酸性饮料。对于该酸性饮料，与实施例1同样地由5名专业评价人员进行感官评价。将其结果示于表12中。

[表11]

*其中，为固体成分换算量。

[表12]

使用了E2、F4的糖组合物的酸性饮料与使用了欠缺砂糖或D-阿洛酮糖的任一种的糖组合物的酸性饮料相比，浓厚感和甜味平衡都良好。

<酸性饮料的调制和感官评价3>

相对于上述实验例F中得到的糖组合物F3(砂糖35:葡萄糖33:果糖22:D-阿洛酮糖8)或将各糖适当混合而制成的G1(葡萄糖45:果糖42:D-阿洛酮糖7)的各1重量份，添加甜菊0.002份，将得到的组合物分别作为F3-1、G1-1；将添加乙酰磺胺酸钾0.003份而得到的组合物分别作为F3-2、G1-2；将添加阿斯巴甜0.003份而得到的组合物分别作为F3-3、G1-3。使用这些各糖组合物，按照表13的配合调制了酸性饮料。对于该酸性饮料，与实施例1同样地由5名专业评价人员进行感官评价。将其结果示于表14中。

[表13]

*其中，为固体成分换算量。

[表14]

其结果，使用了含有砂糖的甜味组合物的酸性饮料与使用了不含砂糖的甜味组合物的酸性饮料相比，后味和甜味的统一性都良好。

在近年来的饮食品市场中，倾向于并用糖质系甜味料和高甜味度甜味料降低热量并且谋求味道品质的提高。相对于糖质系甜味料分别并用了作为高甜味度甜味料的甜菊、乙酰磺胺酸钾、或者阿斯巴甜的甜味组合物，通过含有砂糖，可以得到良好的浓厚感和甜味平衡。

<酸性饮料的调制和感官评价4>

使用上述实验例F中得到的糖组合物F3(砂糖35:葡萄糖33:果糖22:D-阿洛酮糖10)以及将各糖适当混合制成的G1(葡萄糖45:果糖42:D-阿洛酮糖7)，制成表15的配合的酸性饮料，通过与实施例1同样的感官评价法比较各香料的香味。

[表15]

其结果发现，使用了F3的酸性饮料与使用了G1的酸性饮料相比，确认了取得平衡的甜味并且衬托风味。由此可知，含有D-阿洛酮糖和砂糖的甜味组合物不仅有良好的甜味平衡，而且风味显现也良好。

[实施例3]

糖液在低温化下的结晶化成为保存时和运输时的大的障碍。因此，关于本含有砂糖的组合物的结晶化天数，与不含砂糖的组合物进行了比较。具体来说，在4℃下保存70％(w/w)溶液，测定组合物E3、F1、G2的冷藏保存时结晶化所需的天数。

其结果，E3、F1比G2结晶化所需的天数多，确认了改善。由此，确认含有砂糖的组合物比不含砂糖的组合物倾向于难以结晶化，明确了在保存运输时有效。

[实施例4]

<人体中本发明的甜味料组合物对血糖值和胰岛素分泌产生的影响>

研讨了使人摄取通过本发明的制造方法得到的甜味料组合物，即，使碱作用于砂糖的酶水解物所得到的各甜味料组合物时对血糖值和胰岛素分泌所产生的影响。将使用的各甜味料组合物(J1～J4)的糖组成示于表16中。另外，J1是用于得到各甜味料组合物的原料(三井制糖公司制造，商品名“上白糖”)，将其作为比较对照区。

对于6名没有吸烟习惯的健康人(平均年龄34.7岁，男性4名、女性2名，平均BMI22.1kg/m²，平均空腹时血糖92.4mg/dL)，使之摄取表16所示的各甜味料组合物的38.5％水溶液之后，测定血糖值和胰岛素浓度的变动。试验通过摄取表16所记载的糖组合物水溶液的单盲交叉法(singleblindcrossover)来实施。另外，各个试验分隔约1周的间隔进行。

首先，自试验当天的12小时前让被试验者绝食，然后，空腹时采血。接下来，使之摄取200mL表16所示的甜味料组合物的38.5％水溶液的任一种，摄取30、60以及90分钟后采血。为了调整血液的水分，试验中每次采血摄取50mL的水，除此以外断绝饮食。测定采集的血液的血糖值和胰岛素浓度，记录经时的血糖值和胰岛素浓度的变化。以平均值和标准偏差表示得到的结果，统计学检验使用Student’st检验来进行。检验的显著性水平为两侧小于5％。

另外，血糖值的测定使用葡萄糖CII-TestWako(和光纯药工业公司制造)来进行，胰岛素浓度的测定使用超高灵敏度人胰岛素ELISA试剂盒(Mercodia公司制造)来进行。

[表16]

将自摄取各甜味料组合物的水溶液开始的经过时间(分钟)作为横轴，将其每经过时间的血糖值数值作为纵轴进行制图，将由此得到的血糖值曲线下面积的数值结果示于图2中。其结果，J3降低至J1的约81.0％，J4降低至J1的70.0％，可知本发明的甜味料与砂糖相比显著地抑制血糖值上升。另一方面，虽然J2降低至J1的约93.1％，但是没有发现显著性差异。

另外，对于血糖值曲线下面积的数值，J1为50.4mg·h/dL，J2为46.9mg·h/dL，J3为40.8mg·h/dL，J4为35.3mg·h/dL。

将胰岛素浓度曲线下面积的结果示于图3中。J2降低至J1的约70.2％，J4降低至J1的61.7％，可知显著地抑制了胰岛素分泌。另一方面，虽然J3降低至J1的约80.9％，但是没有发现显著性差异。

另外，对于胰岛素曲线下面积，J1为28.2mU·h/L，J2为19.8mU·h/L，J3为22.8mU·h/L，J4为17.4mU·h/L。

在摄取了砂糖的情况下，砂糖通过体内酶被分解为葡萄糖和果糖，相当于葡萄糖的部分参与血糖值的上升和胰岛素分泌量的增加。因此，对于对照区J1(砂糖)，相当于砂糖的1/2的部分(50％)参与血糖值的上升和胰岛素分泌量的增加，对于本发明的甜味料组合物J2、J3和J4由于除了相对于砂糖的1/2的部分以外葡萄糖也参与，因此，分别成为48.7％、49.0％和46.8％参与血糖值的上升和胰岛素分泌量的增加。

因此，在摄取本发明的甜味料组合物J2、J3和J4的情况下，推测观察到与J1同样的血糖值上升和胰岛素分泌量的增加，但是意外地J2特别显著地降低了胰岛素分泌量，J3特别显著地抑制了血糖值上升，至于J4，则显著地降低了血糖值和胰岛素分泌量两者。

即，本发明的甜味料组合物尽管是与砂糖大致同等的甜味品质，可是能够作为赋予了抑制摄取时血糖值和/或胰岛素分泌量的效果的甜味料进行利用。

本发明的甜味料以砂糖作为原料，更优选成为最终得到的甜味料组合物中残留砂糖的组成，假设将砂糖完全分解，得到最终不残留砂糖的甜味料组合物再添加适当砂糖也可以得到同样的组成的甜味料组合物。

在此，仅供参考，在通过再表2010/113785号公报中记载的方法制造的糖组合物(作为组合物相当于本发明的甜味料组合物的不包括砂糖部分的物质)中添加砂糖，从而调制相当于得到的上述J2～J4的糖组合物，进行与实施例4同样的人体试验，结果得到大致同样的结果。

综上所述，本发明的甜味料组合物是具有抑制血糖值和/或胰岛素分泌的效果的甜味料组合物，可以说是能够期待降低糖尿病患病风险的效果的甜味料组合物。另外，通过持续摄取该甜味料，最终有能够降低体脂肪积蓄的可能性。

产业上利用的可能性

本发明的新型糖组合物不仅可以期待广泛地用作软饮料或其它饮料的甜味料，还可以期待利用于食品、医药品或准医药品、口腔用组合物、化妆品。另外，本发明的新型糖组合物由于能够以低的生产成本大量生产提供，因此，可以期待进一步扩大用途范围。

Claims

1.一种甜味料组合物的制造方法，其特征在于，

经过将砂糖作为原料，通过原料砂糖的水解得到作为砂糖水解物的砂糖、D-葡萄糖和D-果糖的混合物或者D-葡萄糖和D-果糖的混合物的工序；和通过将该砂糖水解物异构化，从而得到作为最终产物的砂糖、D-葡萄糖、D-果糖、和至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖的混合物，或者得到D-葡萄糖、D-果糖、和至少包含D-阿洛酮糖的稀少糖的混合物的工序，

通过原料砂糖的水解反应的程度来调节最终产物中的砂糖的含量，

2.如权利要求1所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

原料砂糖的水解工序通过使用了酸和/或酶的分解来进行，将砂糖水解物异构化的工序通过碱异构化、使用了钙离子的催化作用的异构化和/或酶异构化来进行。

3.如权利要求2所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

碱异构化生成包含D-阿洛酮糖、D-阿洛糖、D,L-山梨糖、D-塔格糖以及D-甘露糖的稀少糖，最终产物成为这些单糖与砂糖、D-葡萄糖和D-果糖的混合物，或者成为这些单糖与D-葡萄糖和D-果糖的混合物。

4.如权利要求2所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

酶异构化由果糖仅生成D-阿洛酮糖，最终产物成为D-阿洛酮糖与砂糖、D-葡萄糖和D-果糖的混合物，或者成为D-阿洛酮糖与D-葡萄糖和D-果糖的混合物。

5.如权利要求2或4所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

酶异构化使用来自球形节杆菌M30的异构酶来进行，所述球形节杆菌M30的保藏号为NITEBP-1111。

6.如权利要求2、4或5所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

酶异构化使用相对于每克湿重树脂具有1000U的活性的固定化酶来进行。

7.如权利要求1～6中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

最终产物是甜味强度和杂味少的甜味组合物。

8.如权利要求1～6中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

最终产物是提高风味释放的甜味组合物。

9.如权利要求1～6中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

最终产物为砂糖的比例为10份至75份的具有良好的浓厚感和甜味平衡的甜味组合物。

10.如权利要求1～6中任一项所述的甜味料组合物的制造方法，其中，

最终产物为砂糖的比例为10份至80份的具有显著地降低胰岛素分泌量的功能的甜味组合物。

11.一种甜味料组合物，其中，

通过权利要求1～10中任一项所述的制造方法而得到。

12.一种饮食物，其中，

使用权利要求11所述的甜味料组合物而成。

13.如权利要求12所述的饮食物，其中，

赋予了抑制体重的上升、身体脂肪蓄积的上升的要旨的表示。

14.一种由权利要求11所述的甜味料组合物构成的医药品、准医药品、化妆品。

15.如权利要求14所述的医药品、准医药品、化妆品，其中，

用于抑制体重的上升、身体脂肪蓄积的上升。