KR20160125381A - 결합 단백질 및 그의 사용 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간 베타 클로토를 비롯한 베타 클로토와 결합하는 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 사용 방법을 제공한다.

Description

결합 단백질 및 그의 사용 방법{BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF}
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 그 전문이 본 발명에서 참조로서 포함되는 것으로서, 2014년 1월 24일자로 출원된 미국 가출원 제 61/931,531호에 대한 우선권 이익을 주장한다.
본 발명은 일반적으로, 인간 베타 클로토를 비롯한 베타 클로토와 결합하는 결합 단백질, 예를 들어 항체 및 그의 사용 방법에 관한 것이다.
클로토 패밀레에 속하는 베타 클로토는 단일-막관통 I형 막 단백질(single-pass type I membrane protein)이다. 베타 클로토는, 패밀리 1 글리코시다제와 동종성을 공유하나, 글루코시다제 촉매 활성이 결핍된 2개의 내부 반복체로 이루어진 세포 외 도메인을 가진다. 베타 클로토의 발현은 주로 간, 췌장 및 지방 조직에서 검출된다. 이토와 그의 동료들은, 베타 클로토-결핍(KLB-/-) 마우스가 CYP7A1 및 CY8B1의 mRNA 수준을 상승시키며, 담즙 산의 합성 및 배출의 증가를 나타낸다고 보고하였다 (Ito et al ., 2005, J Clin Invest 115: 2202-2208). 베타 클로토는 섬유아세포 성장 인자 (FGF) 수용체와 복합체를 형성하며, FGF19 및 FGF21을 비롯한 FGF의 공동 수용체로서 기능한다.
22개의 인간 FGF 패밀리 멤버가 확인되었으며, FGF (FGFR1-FGFR4)와 결합하는 4개의 티로신 키나아제 수용체가 확인되었다. FGF와 그의 수용체 사이의 상호작용은 FGFR 이량체화를 초래하고, 상기 수용체의 세포질 도메인의 인산 전이 및 활성화를 가능하게 하여, 결국, 하류 신호 전달 분자의 인산화 및 활성화를 초래한다.
FGF19의 고 친화성 수용체는 FGFR4이며, FGF19와 FGFR4의 결합은 베타 클로토에 의해 촉진된다. FGF19 트랜스제닉 마우스 (transgenic mouse)에서, 지방 축적이 감소하고, 대사율이 증가하며, 간 트리글리세리드가 감소하고, 지방산의 산화가 증가하며, 글루코오스 수준이 감소하고, 인슐린 감도가 증가한다는 것이 보고된 바 있다 (Tomlinson et al ., 2002, Endocrinology 143: 1741-1747). 또한, 이러한 트랜스제닉 마우스는 고지방식에서, 비만 또는 당뇨병이 되지 않는다는 것이 보고되었다 (Tomlinson et al ., 2002, Endocrinology 143: 1741-1747). 또한, FGF19 처리가, 갈색 지방 조직의 유전적 절제 (genetic ablation) 또는 렙틴의 유전적 부재에 의해 비만이 된 마우스에서, 당뇨병을 억제 또는 반전시킨다는 것이 보고된 바 있다 (Fu et al ., 2004, Endocrinology 145: 2594-2603).
FGF21은 FGFR 및 베타 클로토의 상호 작용을 통해 작용한다. FGFR1은 백색 지방 조직에 풍부한 수용체이며, 대부분, 백색 지방 조직에서 FGF21의 주요 기능성 수용체일 수 있다. FGF21의 발현은 간, 흉선, 지방 조직 및 췌장의 섬형 베타 세포에서 검출된다. 베타 클로토-FGFR 복합체와 FGF21의 상호 작용이 글루코오스 흡수를 자극하고, 글루카곤의 분비를 감소시키며, 인슐린 감도 및 글루코오스 제거율을 개선시키고, 단식에 대한 반응으로, 백색 지방 조직을 촉진시키며, 단식에 대한 반응으로, 간에서의 케톤체 생성을 증가시키고, 혈장 트리글리세리드 수준을 저하시키며, 에너지 소비량을 증가시킨다는 것이 보고된 바 있다 (Iglesias et al., 2012, European Journal of Endocrinology 167: 301-309).
FGF19 및 FGF21은 세포 신호 전달에 있어서, FGFR 및 베타 클로토 양자를 필요로 하므로, 그의 효과 또는 글루코오스 대사 또는 지질 대사로 인해, FGF19 및/또는 FGF21을 모방한 제제가 바람직할 수 있다. 그러나, FGF19-형 또는 FGF21-형 세포 신호 전달 활성을 부여하는 제제에 있어서, 어떤 특성이 요구되는지는 분명하지 않다.
본 발명은, 베타 클로토와 결합하는 항체와 같은 결합 단백질을 포함하는 것으로서, 베타 클로토와 결합하는 단백질을 제공한다. 항체를 비롯한 이러한 결합 단백질은 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 단편 및/또는 베타 클로토 에피토프와 결합할 수 있다. 항체를 비롯한 이러한 결합 단백질은 (예를 들어, FGF 수용체의 FGF19-형 또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하거나 또는 베타 클로토/FGF 수용체 복합체를 활성화하는) 작용제일 수 있다.
본 발명은 또한, (i) 인간 베타 클로토와 결합하고, (ii) FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하며, (iii) 베타 클로토와의 상호 작용에 있어서, FGF19 및/또는 FGF21과 경쟁하지 않는 항체를 비롯한 결합 단백질 또는 그의 단편을 제공한다.
일부 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 단편, 베타 클로토 에피토프와 결합하는 인간화 항체이다. 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는, 본 발명에서 개시되는 바와 같이, 5H23, 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 또는 1G19로 명명되는 모노클로날 항체 또는 그의 인간화 변이체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함한다. 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는 인간 면역글로불린 아미노산 서열 또는 그의 변이체의 VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및/또는 VL FR4를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 결합 단백질 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)는 6개의 CDR 또는 6개 이하의 CDR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 단백질 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)은, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3에서 선택되는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 단백질 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)은, 본 발명에서 개시되는 바와 같이, 5H23, 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 또는 1G19로서 명명되는 모노클로날 항체 또는 그의 인간화 변이체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3에서 선택되는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 단백질 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)은 인간 면역글로불린 아미노산 서열 또는 그의 변이체의 VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및/또는 VL FR4를 포함하는 스캐폴드 영역 또는 프레임 워크 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, 상기 항체는 인간화 항체, 모노클로날 항체, 재조합 항체, 항원 결합 단편 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시형태에서, 베타 클로토 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현 또는 용해성 베타 클로토), 베타 클로토 단편, 베타 클로토 에피토프와 결합하는 인간화 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다.
본 발명은 또한, (i) (예를 들어, 투여량-의존적 방식으로), 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체를 베타 클로토 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현 또는 용해성 베타 클로토), 베타 클로토 단편, 베타 클로토 에피토프와의 결합으로부터 경쟁적으로 차단하고/거나, (ii) 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체가 결합하는 베타 클로토 에피토프와 결합하는 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체를 또한 제공한다. 기타 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은, (예를 들어, 투여량-의존적 방식으로), 본 발명에서 제공되는 모노클로날 항체 5H23 또는 1G19 또는 그의 인간화 변이체를 베타 클로토 폴리펩티드 (예를 들어, 세포 표면-발현 또는 용해성 베타 클로토), 베타 클로토 단편, 베타 클로토 에피토프와의 결합으로부터 경쟁적으로 차단한다. 기타 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은, 본 발명에서 제공되는 모노클로날 항체 5H23, 또는 1G19 또는 그의 인간화 변이체가 결합 (예를 들어, 인식)하는 베타 클로토 에피토프와 결합한다.
본 발명은 또한, (i) 서열번호:25의 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:26의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체에 의해 인식되는 인간 베타 클로토 및 시아노몰거스 원숭이 베타 클로토 (cynomologous monkey beta klotho)의 에피토프와 결합하거나, 또는 (ii) 인간 베타 클로토와의 결합에 있어서, 서열번호:25의 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:26의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항체를 비롯한 결합 단백질 또는 그의 단편을 또한 제공한다. 일부 실시형태에서, 인간 베타 클로토 또는 시아노 베타 클로토 (cyno beta klotho)의 에피토프를 비롯한 영역과 결합하는 항체를 비롯한 결합 단백질 또는 그의 단편이 본 발명에서 제공된다. 일부 실시형태에서, 항체를 비롯한 결합 단백질 또는 그의 단편은 인간 베타 클로토 또는 시아노 베타 클로토의 영역과 결합하며, 예를 들어, (i) 서열번호:297의 아미노산 잔기 509 내지 1044를 포함하는 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인; (ii) 서열번호:297의 아미노산 잔기 517 내지 967을 포함하는 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인의 당류 가수분해 효소 1 영역; (iii) 서열번호:297의 아미노산 잔기 657 내지 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 영역; 또는 (iv) 서열번호:299의 아미노산 잔기 657 내지 703을 포함하는 시아노 베타 클로토의 영역과 결합하는 것들이 이에 포함된다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, (i) 인간 베타 클로토 (서열번호: 297)의 아미노산 잔기 657, 701 및/또는 703 중 적어도 하나를 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; (ii) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; (iii) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 701을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; (iv) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; (v) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657 및 701을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; (vi) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657 및 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; (vii) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 701 및 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프; 또는 (viii) 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657, 701 및 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합하는 것들을 포함하여, 인간 베타 클로토의 특정 에피토프와 결합하는 항체를 비롯한 결합 단백질 또는 그의 단편이 본 발명에서 제공된다. 일부 실시형태에서, 상기에서 제공된 이러한 항체는, 인간 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하거나 또는 베타 클로토/FGF 수용체 복합체를 활성화할 수 있다. 또한, 일부 실시형태에서, 상기 항체는 모노클로날 항체, 예를 들어 인간화, 인간 또는 키메라 항체이다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체는 진단제, 검출제 또는 치료제와 접합되거나 또는 재조합적으로 결합된다. 일부 측면에서, 상기 치료제는, 예를 들어 비구아니드 및 설포닐우레아 (예를 들어, 메트포르민 톨부타미드, 클로르프로미드, 아세토헥사미드, 톨라자미드, 글리벤클라미드, 글리부리드, 및 글리피자이드), 티아졸리딘디온 (예를 들어, 로시글리타존, 피오글리타존), GLP-1 유사체, PPAR 감마 작용제 (예를 들어, 피오글리타존 및 로시글리타존), 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 저해제 (예를 들어, JANUVIN®, ONGLYZA®) 브로모크립틴 제형물 및 담즙산 격리제 (예를 들어, 세 벨람), 및 인슐린 (예를 들어, 볼루스 및 기본 유사체), 알파 글루코시다제 저해제 (예를 들어, 아카보스, 로글리보스) 메트포르민 (예를 들어, 메트포르민 하이드로클로라이드) (TZD), SGLT-2 저해제, 식욕 억제 또는 체중 감소 약제 (예를 들어, Meridia® / 시부트라민, Xenical® / 오르티스타트 (ortistat))와 같은 하나 또는 그 이상의 약제를 포함하는 약제이다. 일부 측면에서, 상기 검출제는 방사성 동위 원소, 효소, 형광 화합물, 생체 발광 화합물, 또는 화학 발광 화합물이다.
특정 실시형태에서, 본 발명에서 개시되는 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체를 포함하는 조성물이 제공된다. 본 발명에서 개시되는 바와 같이, 결합 단백질, 예를 들어 베타 클로토 항체를 포함하는 약제학적 조성물이 또한 본 발명에서 제공된다.
본 발명은 또한, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 에피토프와 결합하는 결합 단백질 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)의 면역글로불린 중쇄, 면역글로불린 경쇄, VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 인코딩하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 핵산 분자는 본 발명에서 개시되는 바와 같이, 5H23, 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 또는 1G19로 명명되는 모노클로날 항체 또는 그의 인간화 변이체의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 인코딩한다. 일부 실시형태에서, 상기 핵산 분자는 인간 면역글로불린 아미노산 서열 또는 그의 변이체의 VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및/또는 VL FR4를 포함하는 스캐폴드 영역 또는 프레임워크 영역을 추가로 인코딩한다. 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체의 생성을 촉진하는 조건하에서, 본 발명에서 제공되는 숙주 세포의 배양에 의한 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체의 생성 방법뿐만 아니라, 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포 및 벡터가 또한 본 발명에서 제공된다.
본 발명은 또한, 질환, 장애 또는 병증 (예를 들어, 하나 또는 그 이상의 증상)의 치료, 예방 또는 완화 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체를 비롯한 대상체에, 본 발명에서 제공되는 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체의 치료학적 유효량을 투여하여, 상기 질환, 장애 또는 병증을 치료, 예방 또는 완화시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 질환, 장애 또는 병증은 대상체에서, 베타 클로토에 의해 야기되거나 또는 그렇지 않으면 그와 연관된 것이며, 예를 들어, FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달과 관련된 것들이다. 특정 실시형태에서, 상기 질환 (예를 들어, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환, 대사 증후군)은, 혈중 글루코오스, 인슐린 또는 혈청 지질 수준의 저하에 의해, 치료될 수 있다.
일부 실시형태에서, 상기 질환, 장애 또는 병증은 글루코오스 대사 또는 지질 대사와 관련된다. 일부 실시형태에서, 상기 질환, 장애 또는 병증은 고혈당 병증의 그룹으로부터 선택된다. (예를 들어, 당뇨병, 예를 들어 제1형 당뇨병, 제2형 당뇨병, 임신성 당뇨병, 인슐린 저항성, 고인슐린혈증, 글루코오스 불내성, 대사 증후군, 또는 비만).
일부 실시형태에서, 상기 치료, 예방 또는 호전 방법은 글루코오스 대사의 개선 방법 및/또는 지질 대사의 개선 방법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 치료, 예방 또는 호전 방법은, 글루코오스 수준의 감소 (예를 들어, 혈중 글루코오스의 감소), 인슐린 감도의 증가, 인슐린 저항성의 감소, 글루카곤의 감소, 글루코오스 내성의 개선 글루코오스 대사의 개선, 항상성의 개선, 췌장 기능의 개선, 트리글리세리드의 감소, 콜레스테롤의 감소, IDL의 감소, LDL의 감소, VLDL의 감소, 혈압의 저하, 혈관 내부 육화 (internal thickening of a blood vessel)의 저하 및/또는 체질량 또는 체중 증가의 저하를 초래한다.
본 발명은, 적어도 부분적으로, FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c 또는 FGFR4 및 베타 클로토 및 FGF19 또는 FGF21을 포함하는 복합체의 생체 내 형성에 의해 개시되는 FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달의 유도에 의해, 대상체 (예를 들어, 환자)에서의 개시가 초래되는 것으로서, 임의의 질환, 장애 또는 병증을 포함하는, 인간 FGF19 및/또는 인간 FGF21과 관련된 질환, 장애 또는 병증의 치료 방법을 제공한다. FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달의 유도에 의해, 상기 질환 또는 병증의 중증도가 또한 저하될 수 있다. 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질에 의해 치료될 수 있는 질환 및 병증의 예에는 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환 및 대사 증후군이 포함된다.
이와 같이, 본 발명에서 개시되는 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과를 모방하거나 또는 증대시키는 것이 바람직한 임의의 질환, 장애 또는 병증뿐만 아니라, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증 (예를 들어, 과트리글리세리드혈증), NASH, 심혈관 질환 및/또는 대사 증후군의 치료에 사용될 수 있거나, 또는, 예를 들어 그에 따른 혈당 및/또는 심혈관계 위험 인자 특성 개선의 제공을 포함하여, 증상 (예를 들어, 혈장 글루코오스 수준의 상승, 트리글리세리드 및 콜레스테롤 수준의 상승)의 빈도 및/또는 중증도를 예방 또는 감소시키기 위해, 예를 들어, 매일, 매주, 격주, 매달, 격달, 격년 등으로, 투여되는 예방 치료로서 사용될 수 있다. 본 발명은, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항체를 비롯한 결합 단백질 또는 그의 단편 또는 본 발명에서 개시되는 약제학적 조성물을 대상체에 투여함으로써, 대사 파라미터를 개선하는 방법으로서, 예를 들어, 상기 개선에 체중, 체질량 지수, 복부둘레비율, 피하 지방 두께, 글루코오스, 인슐린 및/또는 트리글리세리드의 감소가 포함되는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, FGFR1, FGFR2, FGFR3, 또는 FGFR4와 같은 하나 또는 그 이상의 FGF 수용체 및 베타 클로토의 세포 표면 발현을 가지는 세포에서, FGF19-형 또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하는 방법으로서, 본 발명에서 개시되는 바와 같이, 베타 클로토와 결합하는 결합 단백질 (예를 들어, 항체)의 유효량과 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 세포는 지방 세포 또는 간세포이다. 기타 실시형태에서, 상기 세포는 베타 클로토를 인코딩하는 유전자 및 임의로 FGF 수용체를 인코딩하는 유전자에 의해 형질감염된 세포이다. 제공되는 추가적 방법에는, FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달 효과를 매개하는 활성을 가지는 것으로서, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체를 사용하는 단계가 포함된다.
본 발명은 또한, 대상체에서, FGF19-형 또는 FGF21-형 신호 전달을 조절하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체를 비롯하여, 대상체에, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 조절에는 FGF19-형 활성화가 포함된다. 일부 실시형태에서, 상기 조절에는 FGF21-형 활성화가 포함된다. 일부 실시형태에서, 상기 조절에는 글루코오스 대사의 증가 (예를 들어, 혈중 글루코오스 수준과 같은 글루코오스 수준의 감소)가 포함된다.
본 발명은 또한, 샘플에서, 베타 클로토를 검출하는 방법으로서, 검출제를 포함하는, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체와 샘플을 접촉시키는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시형태에서, 상기 샘플은, 그 표면에서 베타 클로토가 발현되는 세포를 포함한다.
본 발명은 또한, 본 발명에서 개시되는 바와 같이, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 단편 또는 베타 클로토 에피토프와 결합하는 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체를 포함하는 키트를 제공한다.
도 1a-1b는 5H23, 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 및 1G19로 명명되는 항-베타 클로토 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. CDR 경계는 Kabat, AbM, Chothia, Contact 및 IMGT 번호로 지정된다.
도 2aa 및 2ab는, 공통 CDR 서열을 제공하는 것으로서, 항-베타 클로토 항체의 중쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. 상부 그룹은 5H23, 1D19, 2L12, 3L3, 4P5, 5C23 및 5F7로 명명되는 항체로 구성된다. 하부 그룹은 1C17 및 1G19로 명명되는 항체로 구성된다. 하단 그룹은 3N20으로 명명되는 항체만으로 구성된다. 가변 잔기는 "X"로 표시된다. CDR 경계는 Kabat, AbM, Chothia, Contact 및 IMGT 번호로 지정된다.
도 2ba 및 2bb는, 공통 CDR 서열을 제공하는 것으로서, 항-베타 클로토 항체의 경쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. 상부 그룹은 5H23, 1D19, 2L12, 3L3, 4P5, 5C23 및 5F7로 명명되는 항체로 구성된다. 하부 그룹은 1C17 및 1G19로 명명되는 항체로 구성된다. 하단 그룹은 3N20으로 명명되는 항체만으로 구성된다. 가변 잔기는 "X"로 표시된다. CDR 경계는 Kabat, AbM, Chothia, Contact 및 IMGT 번호로 지정된다.
도 3aa 및 3ab는, 인간화 서열 (vH1-vH9)을 포함하는 것으로서, 5H23으로 명명되는 항-베타 클로토 항체의 중쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. 볼드체로 된 잔기는, 본래의 항체로부터 변형된 예시적 잔기를 나타낸다. 볼드체로서, 밑줄 쳐진 잔기는, 마우스 잔기로 재변경된 잔기를 나타낸다.
도 3b는, 인간화 서열 (vL1-vL5)을 포함하는 것으로서, 5H23으로 명명되는 항-베타 클로토 항체의 경쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. 볼드체로 된 잔기는, 변형된 예시적 잔기를 나타낸다. 볼드체의 밑줄 친 잔기는, 마우스 잔기로 재변경된 잔기를 나타낸다.
도 3ca 및 3cb는 인간화 서열 (v1-39a- v1-39p)을 포함하는 것으로서, 5H23으로 명명되는 항-베타 클로토 항체의 경쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. 볼드체로 된 잔기는, 변형된 예시적 잔기를 나타낸다.
도 3da 및 3db는 다양한 인간화 서열 (v3-20a- v3-20j)을 포함하는 것으로서, 5H23으로 명명되는 항-베타 클로토 항체의 경쇄 가변 영역의 서열 정렬을 보여준다. 볼드체로 된 잔기는, 변형된 예시적 잔기를 나타낸다.
도 4a-4c는 인간, 마우스 및 키메라 베타 클로토 폴리펩티드의 서열 정렬을 보여준다. 키메라 폴리펩티드 chMoHu는 마우스 KLB(M1-F506)-인간 KLB(S509-S1044)를 나타낸다. 키메라 폴리펩티드 chHuMo는 인간 KLB (M1-F508)-마우스 KLB (P507-S1043)를 나타낸다. 마우스 잔기에 해당하는 잔기는 볼드체의 이탤릭체이다.
도 5a-5f는 본 발명에서 개시되는 다양한 종류의 베타 클로토 폴리펩티드의 서열 정렬을 보여준다.
도 6은 인간 시토졸 베타-글리코시다제의 균등 위치의 3개의 확인된 결합 잔기 (흑색 네모)의 3차원 모델을 보여준다. 구조는 클로토-베타 잔기 521-963의 균등물을 보여준다.
인간 및/또는 시아노 베타 클로토를 비롯한 베타 클로토와 결합하는 결합 단백질, 예를 들어 항체가 본 발명에서 제공된다. 본 발명에서 개시되는 항체를 비롯한 이러한 결합 단백질의 고유 특성은, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과를 모방하고, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하는 능력을 포함한 그들의 작용성 (agonistic nature)에 있다. 더욱더 구체적으로, 예를 들어 다수의 시험관 내 세포-기반 분석의 경우를 포함하는 것으로서, 본 발명에서 개시되는 베타 클로토와의 결합 단백질, 예를 들어 항체 중 일부는 (i) 인간 및 시아노 베타 클로토와 결합하고, (ii) 결합에 있어서, FGF19 및/또는 FGF21과 경쟁하지 않으며, (iii) FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도한다. 이러한 분석에는 (1) ELK-루시페라제 리포터 분석 (예를 들어, 실시예 4 참조); (2) ERK-인산화를 위한 재조합 FGF19 수용체 매개 세포 분석 (예를 들어, 실시예 4 참조); 및 (3) ERK-인산화를 위한 인간 지방 세포 분석 (예를 들어, 실시예 5 참조)이 포함될 수 있다. 따라서, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 결합 단백질, 예를 들어 항-베타 클로토 항체는, FGF19 및/또는 FGF21의 자연 생물학적 기능과 일치하는 생체 내 활성을 나타낼 것으로 기대된다. 이러한 특성은, 항-베타 클로토 항체를 비롯한 개시된 결합 단백질이, 대사 질환 (예를 들어, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환, 대사 증후군) 및, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과를 모방 또는 증대하는 것이 바람직한 광범위한 임의의 질환, 장애 또는 병증의 치료를 위한 성공가능한 치료법이 되도록 만든다.
본 발명에서 제공되는, 베타 클로토와 결합하는 결합 단백질, 예를 들어 항체는 베타 클로토와의 결합에 있어서, 서로 경쟁하는 공통 특성을 공유한다 (예를 들어, 5H23 에피토프 빈 (에피토프 빈)의 항체를 개시하는 실시예 3 참조). 이러한 경쟁적 저해는, 각 항체가 베타 클로토의 동일한 영역 (예를 들어, 동일한 에피토프)과 결합하여, 유사한 효과를 발휘한다는 것을 나타낸다. 본 발명에서 개시되는 항-베타 클로토 항체에는, 인간 베타 클로토의 특정 도메인 (예를 들어, KL2 (잔기 S509-S1044); 실시예 9 참조)과 결합하는 인간화 항-베타 클로토 항체를 비롯한 항-베타 클로토 항체와 같은 것으로서, 표 1-10 또는 도 1-3에 개시된 바와 같은 CDR 서열을 가지는 5H23, 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 및/또는 1G19로부터 유래하거나 또는 이를 기반으로 하는 인간화 항-베타 클로토 항체를 비롯한 인간화 항-베타 클로토 항체가 포함된다. 또한, 이러한 결합은 주로, 본 발명에서 개시되는 항-베타 클로토 항체에 의해 인식되는 에피토프를 포함하는 것으로서, KL2 영역 내의 특정 아미노산 잔기 (예를 들어, H657, Y701 및 R703)에 의해 기인할 수 있다. 종합하면, 본 발명에서 개시되는 결과들은, 표 1-10 또는 도 1-3에 개시되는 하나 또는 그 이상의 CDR을 가지는 항체를 비롯한, 5H23 에피토프 빈의 항체 또는 5H23으로부터 유래하거나 또는 이를 기반으로 하는 항-베타 클로토 항체에서 관측되는 효과가, 동일하거나 또는 유사한 에피토프 특성 (예를 들어, 동일하거나 또는 유사한 CDR)을 가지는 본 발명에서 개시되는 다른 항-베타 클로토 항체에 대해서도 추론될 수 있다는 것을 입증한다. 예를 들어, 예시적 인간화 항-베타 클로토 항체에 대해, 실시예 8에서 입증된 생체 내 효과뿐만 아니라, 실시예 4-7 및 9에서 제시되는 바와 같은 항체의 시험관 내 활성은, 본 발명에서 개시되는 항-베타 클로토 항체의 활성 및 효과의 대표적 사례이다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은, 표 1-10에서 개시되는 바와 같이, 하나 또는 그 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하는 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 이러한 결합 단백질 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)에서, CDR (들)의 적절한 항원 결합 특성이 획득되도록 CDR (들)을 배향시키는 하나 또는 그 이상의 스캐폴드 영역 또는 프레임워크 영역과 CDR이 결합될 수 있다. 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체를 비롯한 이러한 결합 단백질은, FGFR1c와 베타 클로토 사이의 상호 작용을 용이하게 하거나 또는 향상시킬 수 있으며, FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도할 수 있다.
일반적 기술
본 발명에 개시 또는 인용되는 기술 및 절차에는, 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003)); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, Z. An, ed, Wiley, Hoboken N.J. (2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols, M. Albitar, ed., Humana Press, Totawa, N.J. (2010); and Antibody Engineering, 2nd Ed., Vols 1 and 2, Kontermann and Dubel, eds., Springer-Verlag, Heidelberg, 2010]에 개시된 광범위하게 이용되는 방법론과 같이, 통상의 방법론을 이용함으로써, 당업자에 의해 일반적으로 잘 이해되고/거나 통상적으로 사용되는 것들이 포함된다.
용어
별도로 언급되지 않는 한, 본 발명에서 사용되는 모든 기술 과학적 용어는, 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 발명의 이해를 위해, 용어에 대한 하기 설명이 적용될 것이며, 적절한 경우, 단수로 사용된 용어의 경우, 복수를 또한 포함하는 것이고, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 모든 특허, 출원, 공개 출원 및 기타 문헌은 그 전문이 참조로서 포함된다. 용어의 설명이 본원에 참조로 포함되는 문서와 충돌하는 경우, 아래에 적시된 용어의 설명이 우선한다.
*용어 "베타 클로토" 또는 "베타 클로토 폴리펩티드" 및 유사 용어는, 별도로 언급되지 않는 한, 영장류 (예를 들어, 인간, 시아노몰거스 원숭이 (시아노)), 개 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함하는 것으로서, 임의의 척추동물 공급원의 폴리펩티드 ("폴리펩티드" 및 "단백질"은 본 발명에서 혼용됨) 또는 임의의 천연 베타 클로토 (native beta klotho)를 의미하며, 특정 실시형태에서, 그의 SNP 변이체를 포함하는 것으로서, 관련 베타 클로토 폴리펩티드가 포함된다. 베타 클로토는 2개의 도메인, 베타 클로토 1 (KLB1) 및 베타 클로토 2 (KLB2)를 포함한다. 각각의 베타 클로토 도메인은 당류 가수분해 효소 1 영역을 포함한다. 예를 들어, 인간 베타 클로토의 KLB1 도메인은, 아미노산 잔기 77-508을 포함하는 당류 가수분해 효소 1 영역을 가지는 아미노산 잔기 1-508을 포함하고, 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인은 아미노산 잔기 517-967을 포함하는 당류 가수분해 효소 1 영역을 가지는 아미노산 잔기 509-1044를 포함한다. 인간 베타 클로토의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
Figure pct00001
Figure pct00002
(서열번호: 297)
인간 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
Figure pct00003
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Figure pct00005
(서열번호: 298)
학명 Macaca fascicularis의 시아노몰거스 원숭이 (시아노)의 베타 클로토의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 299)
시아노 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 300)
학명 Mus musculus의 마우스의 베타 클로토 상동체의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 301)
마우스 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 302)
학명 Rattus norvegicus의 랫트의 베타 클로토의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호:356)
랫트 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호:357)
학명 Cricetulus griseus의 햄스터의 베타 클로토의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 408)
햄스터 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 409)
학명 Oryctolagus cuniculus의 토끼의 베타 클로토의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 410)
토끼 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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Figure pct00031
(서열번호: 411)
학명 Canis lupus familiaris의 개의 베타 클로토의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 412)
개의 베타 클로토의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호: 413)
인간/마우스 베타 클로토 키메라 단백질 (인간 KLB (M1-F508)-마우스 KLB (P507-S1043))의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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Figure pct00039
(서열번호:374).
인간/마우스 베타 클로토 키메라 단백질의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호:375)
마우스/인간 베타 클로토 키메라 단백질 (마우스 KLB (M1-F506) - 인간 KLB(S509-S1044))의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다:
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(서열번호:376)
마우스/인간 베타 클로토 키메라 단백질의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
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Figure pct00049
(서열번호:377)
관련 베타 클로토 폴리펩티드에는, 바람직하게는, 베타 클로토 활성을 유지하고/거나, 항-베타 클로토 면역 반응의 생성에 충분한 대립 유전자 변이체 (예를 들어, SNP 변이체); 스플라이스 변이체 (splice variant); 단편; 유도체; 치환, 결실 및 삽입 변이체; 융합 폴리펩티드; 및 종간 상동체가 포함된다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체는 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드단편, 베타 클로토 항원, 및/또는 베타 클로토 에피토프와 결합할 수 있다. 에피토프트는 더 큰 베타 클로토 항원의 일부일 수 있으며, 더 큰 베타 클로토 폴리펩티드 단편의 일부일 수 있고, 결과적으로 더 큰 베타 클로토 폴리펩티드의 일부일 수 있다. 베타 클로토는 천연 형태 또는 변성 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에서 개시되는 베타 클로토 폴리펩티드는 다양한 공급원, 예를 들어 인간 조직 유형 또는 기타 공급원으로부터 단리될 수 있거나 또는 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. 베타 클로토 폴리펩티드는 자연에서 유래하는 해당 베타 클로토 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 베타 클로토 폴리펩티드는 베타 클로토 폴리펩티드 (예를 들어, 세포외 도메인 서열), 상기 폴리펩티드의 변이체 형태 (예를 들어, 대체 스플라이스 형태 (alternatively spliced form)) 및 대립 변이체의 절두 (truncated) 또는 분비 형태를 포괄하는 것이다. 베타 클로토 폴리펩티드의 오솔로그 (ortholog)가 또한 당 업계에 잘 알려져 있다.
용어 "베타 클로토"는, 세포 내 가공으로부터 생성되는 임의의 형태의 베타클로토뿐만 아니라, "전장 (full-length)의" 비가공 베타 클로토를 포괄한다. 또한, 상기 용어는 베타 클로토의 자연 발생 변이체 또는 돌연변이 (예를 들어, 스플라이스 변이체, 대립 변이체, SNP 변이체 및 이소폼 (isoform))를 포괄하는 것이다. 본 발명에서 개시되는 베타 클로토 폴리펩티드는 다양한 공급원, 예를 들어 인간 조직 유형 또는 기타 공급원으로부터 단리될 수 있거나 또는 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 베타 클로토와 결합하는 항체와 같은 결합 단백질에 적용되는 경우, 용어 "FGF19-형 신호 전달" 및 "FGF19-형 신호 전달을 유도한다"는, 상기 결합 단백질 (예를 들어, 항체)이, (i) 베타 클로토; (ii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4; 또는 (iii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4 중 하나 및 베타 클로토를 포함하는 복합체의 결합에 의해 유도되는 생체 내 생물학적 효과를 모방 또는 조절하고, 그렇지 않으면, 생체 내에서, (i) 베타 클로토; (ii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 또는 FGFR4; 또는 (iii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4 중 하나 및 베타 클로토를 포함하는 복합체와의 FGF19 결합으로부터 생성되는 생물학적 반응을 유도한다는 것을 지칭한다. 항-베타 클로토 항체, 예를 들어, 베타 클로토 (예를 들어, 인간 베타 클로토)와 결합하는 항체 또는 그의 단편의 결합 및 특이성 평가시, (1) 재조합 FGF19 수용체 매개 루시페라아제-리포터 세포 분석 (예를 들어, 실시예 4 참조); (2) 재조합 FGF19 수용체 매개 세포 분석의 ERK-인산화 (예를 들어, 실시예 4 참조); 또는 (3) 인간 지방 세포의 ERK-인산화 (예를 들어, 실시예 5 참조)에서, 그 반응이, 서열번호:304의 성숙형 (mature form) (예를 들어, 인간 FGF19의 성숙형)을 포함하는 야생형 FGF19 표준의 활성의 5%와 동일하거나 또는 그를 초과하고, 바람직하게는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%와 동일하거나 또는 그를 초과하고, EC50이 100 nM와 동일하거나 또는 그 이하, 예를 들어, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM 또는 10 nM이고, FGF19 표준의 5%와 동일하거나 또는 그 이상의 효능 수준을 나타내는 특성을 가지는 경우, 항체 또는 그의 단편은 생물학적 반응을 유도하는 것으로 고려된다.
용어 "FGF19R"은, FGF19가 알려지거나 또는 생체 내에서 형성될 것으로 예상되는 다중 결합 수용체 복합체를 의미할 수 있다. 다양한 실시형태에서, FGF19R은 (i) FGFR, 예를 들어, FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c 또는 FGFR4, 및 (ii) 베타 클로토를 포함한다.
본 발명의 베타 클로토와 결합하는 항체와 같은 결합 단백질에 적용되는 경우, 용어 "FGF21-형 신호 전달" 및 "FGF21-형 신호 전달을 유도한다"는, 상기 결합 단백질 (예를 들어, 항체)이, (i) 베타 클로토; (ii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4; 또는 (iii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4 중 하나 및 베타 클로토를 포함하는 복합체의 결합에 의해 유도되는 생체 내 생물학적 효과를 모방 또는 조절하고, 그렇지 않으면, 생체 내에서, (i) 베타 클로토; (ii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 또는 FGFR4; 또는 (iii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4 중 하나 및 베타 클로토를 포함하는 복합체와의 FGF21 결합으로부터 생성되는 생물학적 반응을 유도한다는 것을 지칭한다. 항-베타 클로토 항체, 예를 들어, 베타 클로토 (예를 들어, 인간 베타 클로토)와 결합하는 항체 또는 그의 단편의 결합 및 특이성 평가시, (1) 재조합 FGF21 수용체 매개 루시페라아제-리포터 세포 분석 (예를 들어, 실시예 4 참조); (2) 재조합 FGF21 수용체 매개 세포 분석의 ERK-인산화 (예를 들어, 실시예 4 참조); 또는 (3) 인간 지방 세포의 ERK-인산화 (예를 들어, 실시예 5 참조)에서, 그 반응이, 서열번호:306 또는 429의 성숙형 (mature form) (예를 들어, 인간 FGF21 서열의 성숙형)을 포함하는 야생형 FGF21 표준의 활성의 5%와 동일하거나 또는 그를 초과하고, 바람직하게는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%와 동일하거나 또는 그를 초과하고, EC50이 100 nM와 동일하거나 또는 그 이하, 예를 들어, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM 또는 10 nM이고, FGF21 표준의 5%와 동일하거나 또는 그 이상의 효능 수준을 나타내는 특성을 가지는 경우, 항체 또는 그의 단편은 생물학적 반응을 유도하는 것으로 고려된다.
용어 "FGF21R", FGF21가 알려지거나 또는 생체 내에서 형성될 것으로 예상되는 다중 결합 수용체 복합체를 의미할 수 있다. 다양한 실시형태에서, FGF21R은 (i) FGFR, 예를 들어, FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c 또는 FGFR4, 및 (ii) 베타 클로토를 포함한다.
용어 "결합 단백질"은, 인간 및/또는 시아노 베타 클로토를 비롯한 베타 클로토와 결합하는 부분 (예를 들어, 하나 또는 그 이상의 결합 영역, 예를 들어 CDR) 및, 임의로, 결합 부분에서, 베타 클로토 폴리펩티드, 단편 또는 에피토프와 상기 결합 단백질의 결합을 촉진하는 입체 구조가 채택될 수 있도록 하는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분 (예를 들어, 하나 또는 그 이상의 스캐폴드 또는 프레임워크 영역)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 이러한 결합 단백질의 예에는 인간 항체, 인간화 항체; 키메라 항체; 재조합 항체; 단일 사슬 항체; 디아바디; 트리아바디 (triabody); 테트라바디 (tetrabody); Fab 단편; F (ab') 2 단편; IgD 항체; IgE 항체; IgM 항체; IgG1 항체; IgG2 항체; IgG3 항체; 또는 IgG4를 항체 및 그의 단편과 같은 항체가 포함된다. 상기 결합 단백질은, 예를 들어 이식 CDR (grafted CDR) 또는 CDR 유도체를 가지는 대안적 단백질 스캐폴드 (alternative protein scaffold) 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 예를 들어, 생체 적합성 중합체를 포함하는 완전 합성 스캐폴드뿐만 아니라, 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키기 위해, 도입되는 돌연변이를 포함하는 항체-유래 스캐폴드가 포함된다. 예를 들어, 문헌 [Korndorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, 53(1):121-129 (2003); Roque et al., Biotechnol. Prog. 20:639-654 (2004)]을 참조한다. 또한, 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 사용한 항체 유사체를 기반으로 하는 스캐폴드뿐만 아니라, 펩티드 항체 유사체 (peptide antibody mimetic) ("PAM")가 사용될 수 있다. 본 발명의 문맥상, 예를 들어, 해리 상수 (KD)≤10-8 M인 경우, 상기 결합 단백질이 베타 클로토에 특이적으로 결합하거나 또는 선택적으로 결합한다고 고려된다. KD≤10-9 M 또는 KD≤10-10 M인 경우, 상기 결합 단백질은 고 친화성으로 베타 클로토에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 약 10-7 M 내지 약 10-12 M의 KD에서, 상기 결합 단백질 (예를 들어, 항체)이 FGFR1c 및 베타 클로토를 포함하는 복합체 또는 베타 클로토와 결합할 수 있으며, 다른 실시형태에서, 1-2 x 10-9 M의 KD에서, 상기 결합 단백질 (예를 들어, 항체)이 결합할 수 있다.
용어 "항체" 및 "면역글로불린" 또는 "Ig"는 본 발명에서 혼용되며, 최광의 개념으로 사용되고, 구체적으로, 예를 들어, 하기에서 개시되는 바와 같은 것으로서, 각각의 항-베타 클로토 모노클로날 항체 (작용제, 길항제, 중화 항체, 전장 또는 무손상 모노클로날 항체 (full length or intact monoclonal antibody) 포함), 폴리에피토프 또는 모노에피토프 특이성을 가지는 항-베타 클로토 항체 조성물, 폴리클로날 또는 1가 항체, 다가 항체, 적어도 2개의 무손상 항체로부터 형성되는 다중 특이성 항체 (예를 들어, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 이중 특이성 항체), 단일 사슬 항-베타 클로토 항체 및 항-베타 클로토 항체의 단편을 포괄하는 것이다. 항체는 다른 종, 예를 들어 마우스, 토끼 등의 항체뿐만 아니라, 인간, 인간화, 키메라 및/또는 친화성이 성숙된 것일 수 있다. 용어 "항체"는, 특이적 분자 항원과 결합할 수 있으며, 각 쌍이 하나의 중쇄 (약 50-70 kDa) 및 하나의 경쇄 (약 25 kDa)를 가지며, 각 사슬의 각각의 아미노 말단 부분이 약 100 내지 약 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 각 사슬의 각 카르복시 말단 부분이 불변 영역을 포함하는 동일한 2쌍의 폴리펩티드 사슬로 이루어진 면역글로불린 종류의 폴리펩티드 내의 B 세포의 폴리펩티드 생성물을 포함하는 것으로 의도된다. (문헌 [Borrebaeck (ed.) (1995) Antibody Engineering, Second Ed., Oxford University Press.; Kuby (1997) Immunology, Third Ed., W.H. Freeman and Company, New York]을 참조한다). 특정 실시형태에서, 상기 특이적 분자 항원은, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 단편 또는 베타 클로토 에피토프를 포함하는 것으로서, 본 발명에서 제공되는 항체에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한, 이로 제한되는 것은 아니나, 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합 생성 항체, 다중 특이적 항체 (이중 특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 카멜화 항체 (camelized antibody), 키메라 항체, 인트라바디 (intrabody), 항-유전자형 (항-Id) 항체 및, 단편이 유래한 항체의 결합 활성 전부 또는 그 일부를 유지하는, 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 부분을 의미하는 것으로서, 전술된 것의 기능성 단편 (예를 들어, 베타 클로토 결합 단편과 같은 항원-결합 단편)을 포함한다. 기능성 단편 (예를 들어, 베타 클로토 결합 단편과 같은 항원-결합 단편)의 비제한 예에는 단일 사슬 Fvs (scFv) (예를 들어, 단일 특이성, 이중 특이성 등 포함), Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, 이황화-결합 Fvs (sdFv), Fd 단편, Fv 단편, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 미니바디가 포함된다. 특히, 본 발명에서 제공되는 항체에는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역 활성 부분, 예를 들어, 베타 클로토 항원과 결합하는 항원-결합 자리 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체의 하나 또는 그 이상의 상보성 결정 영역 (CDR))를 포함하는 항원 결합 도메인 또는 분자가 포함된다. 이러한 항체 단편은, 예를 들어 문헌 [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (1989); Myers (ed.), Molec. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, New York: VCH Publisher, Inc.; Huston et al., Cell Biophysics, 22:189-224 (1993); Pluckthun and Skerra, Meth. Enzymol., 178:497-515 (1989) and in Day, E.D., Advanced Immunochemistry, Second Ed., Wiley-Liss, Inc., New York, NY (1990)]에 개시된 것을 찾아 볼 수 있다. 본 발명에서 제공되는 항체는 면역글로불린의 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 종류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 임의의 하위 종류 (예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)일 수 있다. 항-베타 클로토 항체는 작용성 항체 또는 길항성 항체일 수 있다. 본 발명에서, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하는 항체를 포함하는 것으로서, 베타 클로토에 대한 작용성 항체가 제공된다. 베타 클로토에 대한 바람직한 작용성 항체는, 예를 들어 FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 또는 FGFR4c를 비롯한 FGF 수용체와 FGF19 및/또는 FGF21의 결합에서 경쟁하지 않는다.
용어 "섬유아세포 성장 인자"는, 인간 FGF 패밀리의 22개 멤버를 포함하는 성장 인자 패밀리를 지칭한다. 섬유아세포 성장 인자의 FGF19 하위 패밀리는 인간 FGF21, FGF23 및 FGF19 및 마우스 FGF15로 구성된다. FGF 패밀리 멤버의 효과는, 각각의 FGFR1, FGFR2 및 FGFR3의 2개의 스플라이스 변이체뿐만 아니라, 각각 티로신 키나아제 도메인, FGFR1, FGFR2, FGFR3 및 FGFR4를 가지는 4개의 멤버를 포함하는 것으로서, FGF 수용체 티로신 키나아제 (FGFR) 패밀리의 하나 또는 그 이상의 멤버와의 그의 헤파린-의존적 결합의 결과이다. FGFR1, FGFR2 및 FGFR3의 엑손 3에서 발생하는 이들 스플라이스 변이체는 "b" 및 "c" 변이체 (예를 들어, 또한 각각 FGFR1(III)b, FGFR2(III)b, FGFR3(III)c, FGFR1(III)c, FGFR2(III)c 및 FGFR3(III)c로 알려진 FGFR1b, FGFR2b, FGFR3c, FGFR1c, FGFR2c 및 FGFR3c)로 명명된다. 예를 들어, FGF19는 지방 세포 및 간세포 양자를 표적으로 하며, 그에 대해 효과를 가진다. 재조합 인간 FGF19 (rhFGF19)로 처리된 마우스는, 고지방식에도 불구하고, 대사율의 증가, 지방 산화의 증가, 호흡률 저하 및 체중 감소를 나타낸다. 또한, 이들 마우스는 고지방식 및 식욕 감퇴의 부재에도 불구하고, 렙틴, 인슐린, 콜레스테롤 및 트리글리세리드의 혈청 수준의 저하 및 혈중 글루코오스의 정상 수준을 나타낸다. 또한, 렙틴이 결핍되었으나, FGF19 전이유전자를 포함하는 비만 마우스는 체중 감소, 콜레스테롤 및 트리글리세리드의 저하를 나타내었고, 당뇨병이 발생하지 않았다. 또한, rhFGF19이 주입된 경우, 렙틴이 결핍된 비만 당뇨병 마우스는 혈중 글루코오스의 저하 및 체중 감소 형태로, 그의 대사 특징의 반전을 나타내었다. 예를 들어, FGF21은 간에 의해 주로 발현되며, 지방 조직에 대한 그의 효과를 통한 대사의 증가, 체중 감소, 혈중 글루코오스 수준의 저하 및 비만 및 당뇨병에 대한 저항성과 같은 것으로서, FGF19와 유사한 대사 효과를 가진다. 또한, FGF21-트랜스제닉 마우스는 사료 유도 비만 (diet-induced obesity)에 대해 저항성이었으며, 당뇨병 설치류 모델에서, FGF21의 투여는 혈중 글루코오스 및 트리글리세리드 수준을 저하시켰다. FGF19 및 FGF21 대사 효과는 FGFR1c, FGFR2c 및 FGFR3c 수용체를 비롯한 그의 결합 FGF 수용체를 통해 발생하고, 결합을 위해, 베타 클로토를 필요로 하였다. FGFR1c 및 FGFR2c와 FGF19 및 FGF21의 결합은 현저하다. 또한, FGF19는 FGF21과는 구별되는 대사 효과를 가지는 것으로 나타났으며, 여기에는 FGF21의 경우 관측되지 않는 것으로서, 간 분열 촉진 효과 (liver mitogenic effect), 그의 간-특이적 효과를 통한 간에 의한 담즙 생성의 조절, 및 식후 담즙 생성에 대한 반응으로, 담즙 생성의 음성 조절이 포함된다. 예를 들어, FGF19 트랜스제닉 마우스는, 간세포 이형성 및 증식의 증가로 인해, 간 선암 (hepatic adenocarcinoma)이 발달하고, rhFGF19-처리 마우스는 간세포의 간세포 증식을 나타낸다. FGF19의 이러한 추가적 활성은 그의 FGFR4와의 결합을 통해 매개되는 것으로 나타난다. FGF19는 베타 클로토-의존적 및 베타 클로토-비의존적 방식 둘 모두로, FGFR4와 결합할 수 있다. 또한, FGF21이 베타 클로토-의존적 방식으로, FGFR4와 결합하는 것으로 나타났으나, 종래에 FGFR4와 FGF21의 결합으로부터 유효한 신호 전달이 관측된 바는 없다.
본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은 본 발명에서 개시되는 바와 같은 FGF19-형 신호 전달을 유도할 수 있다. 생체 내에서, FGF19의 성숙 형태는 상기 분자의 활성 형태이다. 전장의 FGF19를 인코딩하는 핵산 서열이 하기에서 제공된다; 신호 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드는 밑줄 친 것이다:
Figure pct00050
Figure pct00051
(서열번호:303)
전장의 FGF19의 아미노산 서열이 제공된다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이다:
Figure pct00052
(서열번호:304)
본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은 본 발명에서 개시되는 바와 같은 FGF21-형 신호 전달을 유도할 수 있다. 생체 내에서, FGF21의 성숙 형태는 상기 분자의 활성 형태이다. 전장의 FGF21을 인코딩하는 핵산 서열이 하기에서 제공된다; 신호 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드는 밑줄 친 것이다:
Figure pct00053
(서열번호:305).
전장의 FGF21의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이다:
Figure pct00054
(서열번호:306).
전장의 FGF21의 핵산 서열이 제공된다; 신호 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드는 밑줄 친 것이다:
Figure pct00055
(서열번호:428).
전장의 FGF21의 아미노산 서열이 제공된다; 신호 서열을 인코딩하는 아미노산은 밑줄 친 것이다:
Figure pct00056
(서열번호:429)
본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은 단독으로 또는 FGFR1c와 같은 FGF 수용체와의 복합체로, 베타 클로토와 결합한다. 인간 FGFR1c의 인코딩 핵산 서열 (유전자 은행 수탁 번호 NM 023110; 또한 FGFRαIIIc로 명명됨)이 하기에서 제공된다:
Figure pct00057
Figure pct00058
(서열번호:307)
인간 FGFR1c의 아미노산 서열 (유전자 은행 수탁 번호 NP 075598)(또한 FGFRαIIIC로 명명됨)이 하기에서 제공된다:
Figure pct00059
Figure pct00060
(서열번호:308)
본 발명에서 개시되는 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은, FGFR1c와 같은 FGF 수용체의 세포 외 부분과의 복합체로, 베타 클로토와 결합할 수 있다. FGFR1c의 세포 외 영역의 예는 하기와 같다:
Figure pct00061
Figure pct00062
(서열번호:309)
FGFR1c (αIIIc)의 세포 외 영역의 예는 하기와 같다:
Figure pct00063
(서열번호:427)
FGFR1c (βIIIc)의 세포 외 영역의 예는 하기와 같다:
Figure pct00064
Figure pct00065
(서열번호: 426)
본 명에서에서 개시되는 바와 같이, FGFR1c 단백질은 또한 단편을 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어는, 수용체, 특히, 별도로 언급되지 않는 한, 베타 클로토및 FGF21의 결합시, FGF21-형 신호 전달을 유도하는 인간 수용체를 의미하는 것으로서, 혼용된다.
또한, 용어 FGFR1c는, 예를 들어, 가능한 N-결합 당화 자리의 FGFR1c 아미노산 서열의 번역 후 변형을 포함한다. 따라서, 상기 항원 결합 단백질은 하나 또는 그 이상의 위치에서, 당화된 단백질과 결합할 수 있거나, 그로부터 생성될 수 있다.
본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은 단독으로 또는 FGFR2c와 같은 FGF 수용체와의 복합체로, 베타 클로토와 결합한다. 인간 FGFR2c의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
Figure pct00066
Figure pct00067
(서열번호:310)
인간 FGFR2c의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이다:
Figure pct00068
Figure pct00069
(서열번호:311)
본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은 단독으로 또는 FGFR3c와 같은 FGF 수용체와의 복합체로, 베타 클로토와 결합한다. 인간 FGFR3c의 인코딩 핵산 서열 (유전자 은행 수탁 번호 NP 000133)이 하기에서 제공된다:
Figure pct00070
Figure pct00071
(서열번호:312)
인간 FGFR3c의 아미노산 서열이 하기에서 제공된다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이다:
Figure pct00072
Figure pct00073
(서열번호:313)
본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질은 단독으로 또는 FGFR4와 같은 FGF 수용체와의 복합체로, 베타 클로토와 결합한다. 인간 FGFR4의 인코딩 핵산 서열이 하기에서 제공된다:
Figure pct00074
Figure pct00075
(서열번호:314)
인간 FGFR4의 아미노산 서열 (유전자 은행 수탁 번호 NP. 002002.3)이 하기에서 제공된다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이다:
Figure pct00076
(서열번호:315)
"항원"은, 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 소정의 항원이다. 표적 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐 또는 기타 천연 발생 또는 합성 화합물 일 수 있다. 바람직하게는, 표적 항원은 폴리펩티드이다.
용어 "항원 결합 단편", "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 및 유사 용어는, 항원과 상호작용하는 아미노산 잔기를 포함하고, 결합제에, 항원에 대한 그의 특이성 및 친화성을 부여하는 항체의 부분 (예를 들어, 상보성 결정 영역 (CDR))을 지칭한다.
용어는 "~와 결합한다" 또는 "결합"은, 예를 들어 복합체의 형성을 포함하는 것으로서, 분자들 사이의 상호 작용을 지칭한다. 예를 들어, 상호 작용은 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호 작용, 및 / 또는 반데르발스 상호 작용을 포함한 비공유 상호 작용일 수 있다. 또한, 복합체는 공유 또는 비공유 결합, 상호 작용 또는 힘에 의해, 함께 유지되는 2개 또는 그 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 베타 클로토와 같은 표적 분자의 단일 에피토프와 항체의 단일 항원-결합 자리 사이의 비공유 상호작용의 총 강도가 상기 에피토프에 대한 항체 또는 기능성 단편의 친화성이다. 1가 항원에 대한 항체의 결합 (k1) 대 해리 (k-1)의 비율 (k1/ k-1)은, 친화성 측정치인 결합 상수 K이다. K 값은 항체와 항원의 다른 복합체에 따라 다르며, k1 및 k-1 양자에 의존적이다. 본 발명에서 제공되는 항체에 대한 결합 상수 K는 본 발명에서 제공되는 임의의 방법 또는 당업자에 잘 공지되어 있는 기타 임의의 방법을 사용하여 결정할 수 있다. 하나의 결합 자리에서의 친화성이 항체와 항원 사이의 상호작용의 진성 강도 (true strength)를 항상 반영하는 것은 아니다. 다가 베타 클로토와 같은 다중, 반복 항원 결정기를 포함하는 복합체 항원이, 다중 결합 자리를 포함하는 항체와 접촉하는 경우, 하나의 자리에서의 항원과 항체의 상호작용은 제2의 자리에서의 반응 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체와 항원 사이의 이러한 다중 상호작용의 강도가 이른바 결합 활성 (avidity)이다. 항체의 결합 활성은, 그의 개별적인 결합 자리의 친화성이기 보다는, 그의 결합능으로서, 더욱 적당한 측정치일 수 있다. 예를 들어, 높은 결합 활성은, 종종, 그의 다가성으로 인한 것으로서, IgG 보다 낮은 친화성을 가지나, IgM의 높은 결합 활성을 가질 수 있는 5량체 IgM 항체에서 발견되는 것과 같은 낮은 친화성을 상쇄할 수 있으며, 항원과의 효과적인 결합을 가능하게 한다.
또한, 용어 "베타 클로토에 특이적으로 결합하는 항체", "베타 클로토 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체" 및 유사 용어는 본 발명에서 혼용되며, 베타 클로토 항원 또느는 단편 또는 에피토프 (예를 들어, 인간 베타 클로토, 예를 들어 인간 베타 클로토 폴리펩티드, 항원 또는 에피토프)와 같은 베타 클로토 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 베타 클로토, (예를 들어, 인간 베타 클로토)에 특이적으로 결합하는 항체는, 베타 클로토의 세포 외 도메인으로부터 유래하는 세포 외 도메인 또는 펩티드와 결합할 수 있다. 베타 클로토 항원 (예를 들어, 인간 베타 클로토)에 특이적으로 결합할 수 있는 항체는 관련 항원 (예를 들어, 시아노 베타 클로토)과 교차 반응성일 수 있다. 특정 실시형태에서, 베타 클로토 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 항원과는 교차 반응하지 않는다. 베타 클로토 항원에 특이적으로 결합하는 항체는, 예를 들어, 면역분석, Biacore 또는 당업자에 공지되어 있는 기타 기술에 의해, 확인할 수 있다. 방사성 면역 측정법 (RIA) 및 효소 결합 면역 분석법 (ELISA)과 같은 실험 기술을 사용하여 측정되는 것으로서, 임의의 교차 반응성 항원 보다 더 높은 친화성을 가지는 베타 클로토 항원과 결합하는 경우, 항체는 베타 클로토 항원에 특이적으로 결합한다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 적어도 2배의 백그라운드 신호 또는 잡음에서 일 것이며, 10배 이상의 백그라운드일 수 있다. 예를 들어, 항체 특이성에 대한 논의를 위해, 문헌 [Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332 336]을 참조한다. 관심 대상 항원 (예를 들어, 베타 클로토와 같은 표적 항원)과 "결합하는" 항체는, 상기 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적으로 하는 경우, 상기 항체가 치료제로서 유용할 수 있을 만큼 충분한 친화성으로, 상기 항원과 결합하며, 다른 단백질과 유의미한 정도로 교차 반응하지 않는 것이다. 이러한 실시형태에서, "비표적" 단백질에 대한 상기 항체의 결합 정도는, 예를 들어, 형광 활성 세포 분류 (FACS) 분석 또는 방사성 면역 침전법 (RIA)에 의해 측정되는 것으로서, 그의 특정 표적 단백질과 상기 항체의 결합의 약 10% 이하일 것이다. 표적 분자와 항체의 결합에 있어서, 용어, 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적의 에피토프와 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적인"은, 비특이적 상호작용과는 어느 정도 다른 결합을 지칭한다. 예를 들어, 특이적 결합은, 일반적으로, 결합 활성을 가지지 않는 유사 구조 분자인 대조군 분자의 결합에 비교하여, 분자의 결합을 측정함으로써, 측정할 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은, 예를 들어 과량의 비표지 표적으로서, 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 측정될 수 있다. 이러한 경우에 있어서, 프로브와 표지 표적과의 결합이 과량의 비표지 표적에 의해 경쟁적으로 저해되는 경우, 특이적 결합이 확인된다. 용어, 본 발명에서 사용되는 바와 같은 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적의 에피토프와 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적인"은, 예를 들어 적어도 약 10-4 M, 대안적으로 적어도 약 10-5 M, 대안적으로 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M 또는 그 초과의 표적 Kd를 가지는 분자에 의해, 나타날 수 있다. 일 실시형태에서, 용어 "특이적 결합"은, 임의의 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프와 실질적으로 결합함이 없이, 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드의 에피토프와 분자가 결합하는 결합을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 베타 클로토와 결합하는 항체는 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM과 동일하거나 또는 그 이하의 해리 상수 (Kd)를 가진다. KD가 낮을수록, 항-베타 클로토 항체의 친화성은 높다. 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는 다른 종 (예를 들어, 인간과 시아노 베타 클로토)의 베타 클로토 중에 보존되는 베타 클로토의 에피토프와 결합한다.
표적 상의 동일한 에피토프 또는 결합 자리에 대해 경쟁하는 항-베타 클로토 항체 (예를 들어, (i) 베타 클로토; 또는 (ii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4 중의 하나 및 베타 클로토를 포함하는 복합체와 결합하는 결합 단백질 및 작용성 항체)의 문맥 내에 사용되는 경우, 용어 "경쟁한다"는, 연구되는 그의 항체 (또는 결합 단편)가 공통 항원 (예를 들어, 베타 클로토 또는 그의 단편)과 참조 분자 (예를 들어, 참조 리간드 또는 참조 항원 결합 단백질, 예를 들어 참조 항체)의 특이적 결합을 억제 또는 저해하는 분석에 의해 측정되는 바와 같은 그 사이의 경쟁을 지칭한다. 시험 항체가 베타 클로토 (예를 들어, 인간 베타 클로토)와의 결합에 있어서, 참조 항체와 경쟁하는지에 대한 측정을 위해, 다양한 유형의 경쟁 결합 분석이 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 분석의 예에는, 고상 직접 또는 간접 방사성 면역 측정법 (RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역 측정법 (EIA), 샌드위치 경쟁 분석 (예를 들어, 문헌 [Stahli et al., (1983) Methods in Enzymology 9:242-253] 참조), 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Kirkland et al., (1986) J. Immunol. 137:3614-3619] 참조), 고상 직접 표지 분석, 고상 직접 표지 샌드위치 분석 (예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane, (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); 1-125 표지를 사용한 고상 직접 표지 RIA (예를 들어, 문헌 [Morel et al., (1988) Molec. Immunol. 25:7-15] 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Cheung, et al., (1990) Virology 176:546-552] 참조); 및 직접 표지 RIA (Moldenhauer et al., (1990) Scand. J. Immunol. 32:77-82)가 포함된다. 전형적으로, 이러한 분석에는, 비표지 시험 항원 결합 단백질 (예를 들어, 시험 항-베타 클로토 항체) 또는 표지 참조 항원 결합 단백질 (예를 들어, 참조 항-베타 클로토 항체) 중 하나를 가지는 세포 또는 고체 표면에 결합하는 정제 항원 (예를 들어, 인간 베타 클로토와 같은 베타 클로토)의 사용이 포함된다. 경쟁적 저해는, 시험 항원 결합 단백질의 존재하에, 고체 표면 또는 세포에 결합하는 표지의 양을 측정함으로써, 측정될 수 있다. 일반적으로, 시험 항원 결합 단백질은 과량으로 존재한다. 경쟁 분석에 의해 확인되는 항체 (경쟁 항체)에는, 항체 입체 장해 (steric hindrance) 생성을 위한 것으로서, 참조에 의해 결합되는 에피토프와 충분히 근거리의 인접 에피토프와 결합하는 항체 및/또는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체가 포함된다. 경쟁적 결합의 측정 방법에 대한 추가적인 상세 정보가 본 발명에 개시된다. 일반적으로, 경쟁 항체 단백질이 과량으로 존재하는 경우, 이것은 공통 항원과 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 23%, 예를 들어 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 저해할 것이다. 일부 예에서, 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96% 또는 97%, 98%, 99% 또는 그 이상으로, 그 결합이 저해된다.
용어 "항-베타 클로토 항체" 또는 "베타 클로토와 결합하는 항체"에는, 베타 클로토를 표적으로 하는 경우, 상기 항체가 진단 및/또는 치료제로서 유용할 수 있을 만큼 충분한 친화성으로, 베타 클로토와 결합할 수 있는 항체가 포함된다. 바람직하게는, 비관련 비-베타 클로토 단백질과 항-베타 클로토 항체의 결합 정도는, 예를 들어 형광 활성 세포 분류 (FACS) 분석 또는 방사성 면역 측정법 (RIA)과 같은 면역 분석에 의해 측정되는 바와 같이, 베타 클로토와 상기 항체의 결합의 약 10% 이하이다. 베타 클로토와 "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적인" 항체는 상기에서 도시되었다. 특정 실시형태에서, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 베타 클로토와 결합하는 항체는 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM과 동일하거나 또는 그 이하이고/거나 0.1nM과 동일하거나 또는 그를 초과하는 해리 상수 (Kd)를 가진다. 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는, 다른 종 (예를 들어, 인간 및 시아노 베타 클로토)의 베타 클로토 중에 보존된 베타 클로토의 에피토프에 결합한다.
"단리된" 항체는, 세포성 물질 또는 상기 세포 또는 조직 공급원의 다른 오염 단백질 및/또는 상기 항체가 유래한 다른 오염 성분이 실질적으로 부재하고/거나 화학적 합성시, 화학적 전구 물질 또는 다른 화학 물질이 실질적으로 부재하다. 문구 "세포성 물질의 실질적 부재"에는, 단리되거나 또는 재조합 생성된 세포의 세포 성분으로부터 항체가 단리되는 항체의 제조물이 포함된다. 따라서, 세포성 물질이 실질적으로 부재하는 항체는, 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 이하 (건조 중량)의 이종 단백질 (또한, 본 발명에서 "오염 단백질"로 지칭됨)을 가지는 항체의 제조물이 포함된다. 특정 실시형태에서, 항체의 재조합 생성시, 배양 배지가 실질적으로 부재하며, 예를 들어, 배양 배지는 단백질 제조물 용적의 약 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 이하를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 항체의 화학 합성시, 화학적 전구 물질 또는 다른 화학 물질이 실질적으로 부재하며, 예를 들어, 항체는, 상기 단백질의 합성시 포함되는 화학적 전구 물질 또는 다른 화학 물질로부터 단리된다. 따라서, 상기 항체의 이들 제조물은 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 이하 (건조 중량)의 관심 대상 항체 외의 화학 물질 또는 화학적 전구 물질을 가진다. 오염 성분에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 상기 항체의 치료 용도를 방해하는 물질이 포함될 수 있으며, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질이 포함될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 항체는 (1) Lowry 방법 (Lowry et al. J. Bio. Chem. 193: 265-275, 1951)에 의해 측정되는 것으로서, 95% 초과의 항체 중량, 예를 들어 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중량, (2) 회전 컵 서열분석기 (spinning cup sequenator)에 의해, 적어도 15개의 잔기의 N-말단 또는 내부 아미노산 서열을 획득하기에 충분한 정도 또는 (3) 쿠마시 블루 (Coomassie blue) 또는 바람직하게는 실버 스테인 (silver stain)을 이용한 것으로서, 환원 또는 비환원 조건하에서, SDS-PAGE에 의한 상동성으로 정제될 수 있다. 상기 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이므로, 단리된 항체는 재조합 세포 내에 인 시투 (in situ) 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. 특정 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체가 단리된다.
4-사슬 항체 단위는, 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성되는 이종 4량체 당단백질 (heterotetrameric glycoprotein)이다. IgG의 경우, 4-사슬 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 사슬은 하나의 공유 이황화 결합에 의해 H 사슬에 결합되며, 2개의 H 사슬은 H 사슬 이소타입에 따라, 하나 또는 그 이상의 이황화 결합에 의해 서로 결합된다. 각각의 H와 L 사슬은 또한 규칙적으로 이격된 사슬 내 이황화 다리를 가진다. 각각의 H 사슬은 N-말단에, 가변 도메인 (VH), 이어서, α 및 γ 사슬 각각의 3개의 불변 도메인 (CH) 및 μ 및 ε 이소타입의 4개의 CH 도메인을 가진다. 각각의 L 사슬은 N-말단에, 가변 도메인 (VL), 이어서, 다른 쪽 말단에 불변 도메인 (CL)을 가진다. VL은 VH와 정렬되고, CL은 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄와 중쇄 가변 도메인 사이의 인터페이스를 형성한다고 여겨진다. VH 및 VL 쌍은 함께, 단일 항원-결합 자리를 형성한다. 다른 종류의 항체의 구조 및 특성을 위해, 예를 들어 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참조한다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노 말단에 위치하며, 중쇄의 경우, 약 120 내지 130개의 아미노산 길이를 가지고, 경쇄의 경우, 약 100 내지 110개의 아미노산 길이를 가지며, 특정 항원의 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 이용되는 항체의 경쇄 또는 중쇄 부분을 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH"로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 "VL"로 지칭될 수 있다. 용어 "가변"은, 항체 간에, 가변 영역의 특정 절편의 서열이 광범위하게 다른 것을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하며, 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 규정한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110개의 아미노산 범위에 걸쳐 균등하게 분산되지 않는다. 그 대신, V 영역은, 각각 약 9-12개의 아미노산 길이인 이른바 "초가변 영역"의 가변성이 더 큰 (예를 들어, 극단적 가변성 (extreme variability)의) 더 짧은 영역에 의해 분리되는, 약 15-30개의 아미노산의 이른바 프레임워크 영역 (FR)의 가변성이 더 작은 (예를 들어, 비교적 불변의) 구간으로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각, 주로, 루프 연결을 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결되는 β 시트 입체배치를 채택하고, 일부 경우, β 시트 구조의 일부를 형성하는 4개의 FR을 포함한다. 각 사슬의 초가변 영역은 FR과 함께 인접 유지되며, 다른 사슬의 초가변 영역과 함께, 항체의 항원-결합 자리의 형성에 기여한다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)]을 참조한다). 불변 영역은 항원과 항원의 결합에 직접 관여하지는 않으나, 항체 의존적 세포 매개 세포 독성 (antibody dependent cellular cytotoxicity) (ADCC) 및 보체 의존적 세포 독성 (complement dependent cytotoxicity) (CDC)에서, 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다. 가변 영역의 서열은 다른 항체 간에 광범위하게 상이하다. 서열의 가변성은 CDR에 집중되며, 가변 영역 중 가변성이 덜한 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로서 지칭된다. 경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항체의 상호작용의 주원인이 된다. 특정 실시형태에서, 상기 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 "Kabat의 가변 영역 잔기 번호" 또는 "Kabat의 아미노산 위치 번호", 그의 변형형은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of lmmunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에서, 항체 컴파일의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 사용되는 번호 시스템을 지칭한다. 이러한 번호 시스템을 사용하는 경우, 실제 선형 아미노산 서열은, 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 (shortening) 또는 삽입 (insertion)에 해당하는 것으로서, 더 소수의 또는 추가의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후, 단일 아미노산 인서트 (insert) (Kabat에 따르면, 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 이후, 삽입 잔기 (예를 들어, Kabat에 따르면, 잔기 82a, 82b, 및 82c, 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 번호는 주어진 항체에 있어서, "표준" Kabat 번호 서열을 가지는 항체 서열의 상동 영역의 정렬에 의해, 결정될 수 있다. 가변 도메인의 잔기 (대략, 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113)의 인용시, 일반적으로 Kabat 번호 시스템이 사용된다 Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기의 인용시, 일반적으로 "EU 번호 시스템" 또는 "EU 인덱스"가 사용된다 (예를 들어, 전술된 문헌 [Kabat et al.]에서 보고된 EU 인덱스). "Kabat의 EU 인덱스"는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 번호를 지칭한다. 예를 들어 AbM, Chothia, Contact, IMGT 및 AHon에 의한 것을 포함하여, 기타 번호 시스템이 개시되었다. 다양한 번호 시스템이 도 1-3에 도시되어 있다.
"무손상" 항체는 CL 및 적어도 중쇄 불변 영역, CH1, CH2 및 CH3뿐만 아니라, 항원-결합 자리를 포함하는 것이다. 상기 불변 영역에는 인간 불변 영역 또는 그의 아미노산 서열 변이체가 포함될 수 있다. 바람직하게는, 무손상 항체는 하나 또는 그 이상의 효과기 기능을 가진다.
"항체 단편"은 무손상 항체의 일부, 바람직하게는, 상기 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예에는, 제한 없이, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디 및 디-디아바디 (예를 들어, 문헌 [Holliger, P. et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-8; Lu, D. et al., (2005) J. Biol. Chem. 280:19665-72; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); WO 93/11161; 및 미국 특허 제 5,837,242호 및 제 6,492,123호] 참조); 단일 사슬 항체 분자 (예를 들어, 미국 특허 제 4,946,778호; 제 5,260,203호; 제 5,482,858호 및 제 5,476,786호 참조); 이중 가변 도메인 항체 (예를 들어, 미국 특허 제 7,612,181호 참조); 단일 가변 도메인 항체 (SdAb) (예를 들어, 문헌 [Woolven et al., Immunogenetics 50: 98-101, 1999; Streltsov et al., Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-12449, 2004] 참조); 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중 특이적 항체가 포함된다.
치료 항체의 "기능성 단편" 또는 "결합 단편" 또는 "항원 결합 단편"은, 무손상 항체에 의해 기인되는 생물학적 기능의 일부 또는 전부는 아닐지라도, 적어도 하나의 기능을 나타낼 것이며, 상기 기능에는 적어도, 표적 항원과의 결합이 포함된다 (예를 들어, 베타 클로토 결합 단편 또는, 베타 클로토에 결합하는 단편).
본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "융합 단백질"은, 항체의 아미노산 서열 및 이종 폴리펩티드 또는 단백질 (예를 들어, 일반적으로, 항체 (예를 들어, 비-항-베타 클로토 항원 결합 항체)의 일부가 아닌 폴리펩티드 또는 단백질)의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 베타 클로토 또는 항-베타 클로토 항체와 관련하여 사용되는 경우, 용어 "융합"은, 이종 펩티드 또는 폴리펩티드와, 펩티드 또는 폴리펩티드 또는 그의 단편, 변이체 및/또는 유도체의 결합을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 상기 융합 단백질은 베타 클로토 또는 항-베타 클로토 항체의 생물학적 활성을 유지한다. 특정 실시형태에서, 상기 융합 단백질은 베타 클로토 항체 VH 영역, VL 영역, VH CDR (1, 2 또는 3개의 VH CDR), 및/또는 VL CDR (1, 2 또는 3개의 VL CDR)을 포함하며, 여기서, 상기 융합 단백질은 베타 클로토 에피토프, 베타 클로토 단편 및/또는 베타 클로토 폴리펩티드에 결합한다.
항체에 대해 인용되어 사용되는 경우, 용어 "중쇄"는, 아미노 말단 부분은 약 120 내지 130개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시 말단 부분은 불변 영역을 포함하는 약 50-70 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭한다. 불변 영역은, 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ) 및 뮤 (μ)로 지칭되는 5개의 개별 유형 (예를 들어, 이소타입) 중 하나일 수 있다. 별개의 붕쇄는 크기가 다르다: α, δ, 및 γ는 대략 450개의 아미노산을 포함하며, μ 및 ε는 대략 550개의 아미노산을 포함한다. 경쇄와 결부시, 중쇄의 이들 개별 유형은, IgG의 4개의 하위 종류, 즉 IgG1, IgG2, IgG3및 IgG4를 포함하여, 잘 알려진 5개의 항체 종류 (예를 들어, 이소타입), 각각 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 생성시킨다. 중쇄는 인간 중쇄일 수 있다.
항체에 대해 인용되어 사용되는 경우, 용어 "경쇄"는, 아미노 말단 부분은 약 100 내지 약 110개 또는 그 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시 말단 부분은 불변 영역을 포함하는 약 25 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭한다. 경쇄의 대략적 길이는 211 내지 217개의 아미노산이다. 여기에는, 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 하여, 카파 (κ) 또는 람다 (λ)로 지칭되는 2개의 개별 유형이 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당 업계에 잘 공지되어 있다. 경쇄는 인간 경쇄일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "숙주"는 포유동물 (예를 들어, 인간)과 같은 동물을 지칭한다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "숙주 세포"는, 핵산 분자에 의해 형질감염될 수 있는 특정 대상체 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은, 다음 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산 분자의 삽입으로 인해, 핵산 분자에 의해 형질감염된 부모 세포와 동일하지 않을 수 있다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는, 실질적 동종 항체 집단으로부터 획득되는 항체, 예를 들어, 상기 집단이, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 외에는 동일한 개별 항체를 의미하며, 각각의 모노클로날 항체는 일반적으로, 항원 상의 단일 에피토프를 인식한다. 특정 실시형태에서, 본 발명에서 사용되는 바와 같은 "모노클로날 항체"는, 예를 들어 ELISA 또는 당 업계에 공지된 기타 항원-결합 또는 경쟁적 결합 분석에 의해 측정되는 바와 같이, 상기 항체가 단지 베타 클로토 에피토프에만 결합하는 것으로서, 단일 하이브리도마 또는 기타 세포에 의해 생성되는 항체이다. 용어 "모노클로날"은 항체를 제조하기 위한 임의의 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 유용한 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 처음 개시된 하이브리도마 방법론에 의해 제조될 수 있거나 또는, 박테리아, 진핵 동물 또는 식물 세포에서, 재조합 DNA 방법을 이용하여 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 제 4,816,567호 참조).또한, "모노클로날 항체"는, 예를 들어 문헌 [Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에 개시된 기술을 이용하여, 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주 및 그에 따라 발현되는 모노클로날 항체의 제조를 위한 기타 방법은 당 업계에 잘 알려져 있다 (예를 들어, 문헌 [Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조). 모노클로날 항체의 예시적 생성 방법이 본 발명의 실시예에서 제공된다.
핵산 분자, 폴리펩티드, 숙주 세포 등과 같은 생물학적 물질과 연계하여 사용되는 경우, 용어 "천연 (native)"은, 자연에서 발견되며, 인류에 의해 조작, 변형 및/또는 변화 (예를 들어, 단리, 정제, 선택)되지 않은 것을 지칭한다.
본 발명에서 제공되는 항체에는, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가, 특정 종으로부터 유래되거나 또는 특정 항체 종류 또는 하위 종류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 또는 상동이고, 사슬 (들)의 나머지가 다른 종으로부터 유래하거나 또는 또 다른 항체 종류 또는 하위 종류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 또는 상동인 "키메라" 항체뿐만 아니라, 그들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 이러한 항체의 단편이 포함될 수 있다 (미국 특허 제 4,816,567호; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)] 참조).
비인간 (예를 들어, 쥣과 동물) 항체의 "인간화" 형태는, 천연 CDR 잔기가, 원하는 특이성, 친화성 및 능력을 가지는 마우스, 랫트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종 (예를 들어, 공여 항체)의 해당 CDR의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린 (예를 들어, 수용 항체)을 포함하는 키메라 항체이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 하나 또는 그 이상의 FR 영역 잔기는 해당 비인간 잔기에 의해 대체된다. 또한, 인간화 항체는, 수용 항체 또는 공여 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형에 의해, 항체 성능이 추가로 세분화된다. 인간화 항체의 중쇄 또는 경쇄는, CDR의 전체 또는 실질적 전체가 비인간 면역글로불린의 CDR에 해당하고, FR의 전체 또는 실질적 전체가 인간 면역글로불린 서열의 FR인 적어도 하나 또는 그 이상의 가변 영역의 실질적 전체를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가적 상세 정보를 위해, 문헌 [Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992); Carter et al., Proc. Natl. Acd. Sci. USA 89:4285-4289 (1992); 및 미국 특허 제 6,800,738호 (2004년 10월 5일자로 취득됨), 제 6,719,971호 (2005년 9월 27일자로 취득됨), 제 6,639,055호 (2003년 10월 28일자로 취득됨), 제 6,407,213호 (2002년 6월 18일자로 취득됨), 및 제 6,054,297호 (2000년 4월 25일자로 취득됨)]을 참조한다.
"인간 항체"는, 본 발명에서 개시된 바와 같은 인간 항체의 제조 기술을 이용하여 제조되고/거나 인간에 의해 생성되는 항체의 서열에 해당하는 아미노산 서열을 가지는 것이다. 인간 항체에 대한 이러한 정의에는 구체적으로, 비인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 배제된다. 인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리 (Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)) 및 효모 디스플레이 라이브러리 (Chao et al., Nature Protocols 1: 755-768 (2006))를 포함하여, 당 업계에 공지된 다양한 기술을 이용하여, 생성될 수 있다. 또한, 인간 모노클로날 항체의 제조에 이용될 수 있는 방법은 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibody and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991). See also van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)]에 개시되어 있다. 인간 항체는, 항원 공격 (antigenic challenge)에 대한 반응으로, 이러한 항체를 생성하도록 변형되었으나, 내인성 유전자좌는 불능인 트랜스제닉 동물, 예를 들어 마우스에, 상기 항원을 투여함으로써, 제조될 수 있다 (예를 들어, XENOMOUSETM 기술에 있어서, 문헌 [Jakobovits, A., Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6(5):561-6; Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8(4):455-8; 및 미국 특허 제 6,075,181호 및 제 6,150,584호] 참조). 또한, 예를 들어, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성되는 인간 항체에 관한 문헌 [Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]을 참조한다.
"CDR"은, 면역글로불린 (Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역 (L1, L2 또는 L3) 중 하나 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역 (H1, H2 또는 H3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은, 프레임워크 영역 서열 내에 배치된 가변 영역 서열이다. CDR 영역은 당업자에 잘 공지되어 있으며, 항체 가변 (V) 도메인 내의 최고 초가변성 영역으로서, 예를 들어 Kabat에 의해 정의되었다 (Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat, Adv. Prot. Chem. 32:1-75 (1978)). CDR 영역 서열은 또한, 보존된 β-시트 프레임워크의 일부가 아니며, 따라서, 다른 입체 구조 (conformation)가 채택될 수 있는 잔기로서, Chothia에 의해 구조적으로 정의되었다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). 두 용어 모두 당 업계에 잘 인지되어 있다. CDR 영역 서열은 또한 AbM, Contact 및 IMGT에 의해 정의된 바 있다. CDR 영역 서열이 도 1-3에 도시되어 있다. 정규 가변 영역 (canonical 항체 variable region) 내의 CDR 위치가 다양한 구조 비교에 의해 측정되었다 (Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997); Morea et al., Methods 20:267-279 (2000)). 다른 항체인 경우, 초가변 영역 내의 잔기의 수가 달라지므로, 정규 위치에 관련된 추가 잔기는 통상적으로, 정규 가변 영역 번호 체계의 잔기 번호 다음에, a, b, c 등으로 번호 붙여진다 (Al-Lazikani et al., supra (1997)). 이러한 명명법은 마찬가지로 당업자에게 잘 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 경우, 용어 "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV"는, 서열이 초가변되고/거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 가변 영역의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 초가변 영역; VH에 3개 (H1, H2, H3), 및 VL에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 초가변 영역 도해의 번호가 사용되며, 본 발명에 포함되어 있다. Kabat 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열의 가변성을 기반으로 하며, 가장 통상적으로 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). Chothia는 구조적 루프의 위치를 대신 지칭한다 (예를 들어, 문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)] 참조). Kabat 번호 방식을 사용하여 번호를 붙이는 경우, Chothia CDR-H1 루프의 끝은 상기 루프의 길이에 따라, H32와 H34 사이에서 달라진다 (즉, 이는, Kabat 번호 체계가 H35A와 H35B에, 삽입부를 배치하기 때문이다; 35A와 35B가 모두 존재하지 않는 경우, 루프는 32에서 끝나며; 단지 35A만 존재하는 경우, 루프는 33에서 끝나고; 35A와 35B가 모두 존재하는 경우, 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR 및 Chothia 구조 루프의 중간물 (compromise)을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Martin, in Antibody Engineering, Vol. 2, Chapter 3, Springer Verlag] 참조). "접촉" 초가변 영역은 가능한 복합체 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 이들 초가변 영역 또는 CDR 각각의 잔기가 하기에 제시된다.
최근, 범용 번호 시스템이 개발되었으며, 광범위하게 채택되고 있다. ImMunoGeneTics (IMGT) Information System® (Lafranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003)). IMGT는 인간 및 기타 척추동물의 면역글로불린 (IG), T 세포 수용체 (TR) 및 주요 조직 적합성 복합체 (MHC)에 관한 통합 정보 시스템이다. 본 발명에서, CDR은 아미노산 서열 및 경쇄 또는 중쇄 내의 위치 양자의 용어로 지칭된다. 구조 특성에 따라, 가변 도메인 서열이 정렬되는 번호 시스템을 사용함으로써, 면역글로불린 가변 도메인 구조 내의 CDR의 위치가 종 간에 보존되고, 루프로 일컬어지는 구조 내에 존재하기 때문에, CDR 및 프레임워크 잔기가 용이하게 확인된다. 이러한 정보는, 한가지 종의 면역글로불린의 CDR 잔기의 전형적으로 인간 항체의 수용체 프레임워크로의 이식 및 대체에 사용될 수 있다. 추가적 번호 시스템 (AHon)이 Honegger 및 Pluckthun에 의해 개발되었다 (Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309: 657-670 (2001)). 예를 들어, Kabat 번호 및 IMGT 고유 번호 시스템을 포함하여, 번호 시스템 사이의 연관성은 당업자에 잘 알려져 있으며 (예를 들어, 문헌 [Kabat, supra; Chothia and Lesk, supra; Martin, supra; Lefranc et al., supra] 참조), 또한 도 1-3에 도시되어 있다. 본 발명에 제시되는 예시적 시스템은 Kabat와 Chothia를 조합한 것이다.
Figure pct00077
초가변 영역은 하기와 같은 "확장 초가변 영역"을 구성할 수 있다: VL의 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3) 및 VH의 26-35 또는 26-35A (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3). 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 용어 "HVR" 및 "CDR"은 혼용된다.
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은, 항원과 항체의 결합에 직접 포함되지 않으나, Fc 수용체와의 상호 작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단 부분을 지칭한다. 상기 용어는, 항원 결합 자리를 포함하는 가변 영역 이외의 면역글로불린의 다른 부분과 관련된 것으로서, 더욱 보존된 아미노산 서열을 가지는 면역글로불린 분자의 일부를 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 포함할 수 있다.
용어 "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 CDR 측면의 가변 영역 잔기이다. FR 잔기는, 예를 들어 키메라, 인간화, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체 및 이중 특이적 항체에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
"친화성 성숙" 항체는, 변경 (들)이 없는 부모 항체와 비교하여, 항원에 대한 항체의 친화성의 향상을 초래하는 것으로서, 하나 또는 그 이상의 HVR의 하나 또는 그 이상의 변경 (예를 들어, 변화, 첨가 및/또는 결실을 포함하는 아미노산 서열 변이 (amino acid sequence variation))를 가지는 것이다. 바람직한 친화성 성숙 항체는 표적 항원에 대해, 나노몰 또는 심지어 피코몰의 친화성을 가질 것이다. 친화성 성숙 항체는 당 업계에 공지된 절차에 의해 생성된다. 검토를 위해, 문헌 [Hudson and Souriau, Nature Medicine 9 :129-134 (2003); Hoogenboom, Nature Biotechnol. 23 : 1105-1116 (2005); Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4 : 39-51 (2010)]을 참조한다.
"차단 (blocking)" 항체 또는 "길항제" 항체는, 결합하는 항원의 생물학적 활성을 저해 또는 저하시키는 것이다. 예를 들어, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 저해할 수 있다.
*"작용제 항체"는, 반응을 개시시키는 항체, 예를 들어, 관심 대상 폴리펩티드 (예를 들어, FGF19 또는 FGF21)의 기능성 활성 중 적어도 하나를 모방하는 것이다. 작용제 항체에는, 예를 들어, 리간드가 세포 표면 수용체와 결합하고, 세포내 세포 신호 전달 경로를 통해, 상기 결합에 의해, 세포 신호 전달 또는 활성이 유도되며, 항체에 의해, 유사한 세포 신호 전달 또는 활성화가 유도되는 리간드 모방체인 항체가 포함된다.
베타 클로토의 "작용제"는, 예를 들어, 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, 베타 클로토의 생물학적 활성 중 하나 또는 그 이상을 활성화하거나 또는 그렇지 않으면 증가시킬 수 있는 분자를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 베타 클로토의 작용제 (예를 들어, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 작용성 항체)는, 예를 들어, 작용제의 부재하에, 베타 클로토 단백질 및 FGF 수용체를 발현하는 세포의 활성화 및/또는 세포 신호 전달을 활성화하거나 또는 그렇지 않으면 증가시켜서, 베타 클로토-매개 생물학적 활성과 관련된 세포의 베타 클로토-매개 생물학적 활성을 증가시킴으로써, 작용할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하는 항체를 비롯한 작용성 항-베타 클로토 항체이다.
"결합 친화성"은, 분자 (예를 들어, 항체와 같은 결합 단백질)의 단일 결합 자리와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총 합 강도를 지칭한다. 별도로 언급되지 않는 한, 본 발명에서 사용되는 바와 같이, "결합 친화성"은, 결합 쌍 멤버 (예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 내재성 결합 친화성을 지칭한다. 그의 결합 파트너 Y에 대한 결합 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수 (KD)로 표시될 수 있다. 친화성은, 본 발명에서 개시되는 것들을 비롯하여, 당 업계에 공지된 종래 방법에 의해 측정될 수 있다. 저친화성 항체는 일반적으로 항원과 느린 속도로 결합하고, 쉽게 해리되는 경향이 있으며, 고친화성 항체는 일반적으로 항원과 더욱 빠른 속도로 결합하고, 더욱 장기간 동안 결합 상태를 유지하는 경향이 있다. 다양한 결합 친화성 측정 방법이 당 업계에 공지되어 있으며, 이들은 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 구체적 예시 실시형태가 하기에 포함되어 있다. 일 실시형태에서, "KD" 또는 "KD 값"은, 당 업계에 공지된 분석, 예를 들어 결합 분석에 의해, 측정될 수 있다. KD는, 예를 들어, 관심 대상 항체와 그의 항원의 Fab 버젼을 이용하여 수행되는 것으로서, 방사성 표지 항원 결합 측정법 (RIA)으로 측정될 수 있다 (Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881). KD 또는 KD 값은 또한, 예를 들어 OctetQK384 시스템 (ForteBio, Menlo Park, CA)을 이용한 바이오층 간섭법 (biolayer interferometry) 또는, 예를 들어 BIAcoreTM-2000 또는 BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)을 이용한 Biacore에 의한 표면 플라즈몬 공명 분석법에 의해 측정될 수 있다. "온-레이트 (on-rate)" 또는 "결합 속도"또는 "해리 속도"또는 "kon"은 또한, 예를 들어 BIAcoreTM-2000 또는 BIAcoreTM-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ), 또는 OctetQK384 시스템 (ForteBio, Menlo Park, CA)을 이용하여, 전술된 것과 같은 표면 플라스몬 공명 또는 바이오층 간섭법으로 측정할 수 있다.
문구 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은, 2개의 수치 (예를 들어, 본 발명의 항체와 관련된 것 하나와 참조 항체와 관련된 것 다른 하나) 사이의 유사성 정도가 현저히 커서, 당업자가, 2개의 값 사이의 차이에, 상기 값 (예를 들어, KD 값)에 의해 측정되는 생물학적 특성의 맥락에서, 생물학적 및/또는 통계학적 유의성이 거의 없거나 또는 전혀 없다고 판단하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 2개의 값 사이의 차이는, 참조 항체의 값의 함수로서, 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 약 20% 이하, 약 10% 이하, 약 5% 이하일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 바와 같이, 문구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 다른"은, 2개의 수치 (예를 들어, 본 발명의 항체와 관련된 것 하나와 참조 항체와 관련된 것 다른 하나) 사이의 차이의 정도가 현저히 커서, 당업자가, 2개의 값 사이의 차이에, 상기 값에 의해 측정되는 생물학적 특성의 맥락에서, 통계학적 유의성이 있다고 판단하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 상기 2개의 값 사이의 차이는, 참조 항체의 값의 함수로서, 바람직하게는 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과, 약 50% 초과일 수 있다.
항체 "효과기 기능"은 항체의 Fc 영역 (예를 들어, 천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변형 Fc 영역)에 의한 생물학적 활성을 의미하며, 항체 이소타입에 의해 달라진다. 항체 효과기 기능의 예에는 C1q 결합 및 보체 의존적 세포 독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개 세포 독성 (ADCC); 식균 작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체)에 의한 하향 조절; 및 B 세포 활성화가 포함된다.
본 발명의 용어 "Fc 영역"은, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역, 및 변형 Fc 영역을 포함하는 것으로서, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역의 정의에 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계가 달라질 수 있다 할지라도, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종, 위치 Cys226의 아미노산 잔기 또는 Pro230로부터 그의 카르복시 말단까지의 구간으로 정의된다. Fc 영역의 C 말단 리신 (EU 번호 시스템에 따른 경우, 잔기 447)은, 예를 들어, 항체의 생성 또는 정제 과정 동안 또는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산의 재조합적 엔지니어링 (recombinantly engineering)에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은, 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 존재 및 부재하는 항체 혼합물을 가지는 항체 집단을 포함할 수 있다.
"기능성 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "효과기 기능"을 가진다. 예시적 "효과기 기능"에는 C1q 결합; 보체 의존적 세포 독성 (CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개 세포 독성 (ADCC); 식균 작용; 세포 표면 수용체 (예를 들어, B 세포 수용체; BCR)에 의한 하향 조절 등이 포함된다. 이러한 효과기 기능은 일반적으로, Fc 영역이, 결합 영역 또는 결합 도메인 (예를 들어, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합될 필요가 있으며, 개시된 바와 같은 다양한 분석을 사용하여, 평가할 수 있다.
"천연 서열 Fc 영역"은, 자연에서 발견되며, 인간에 의해 조작, 변형 및/또는 변화 (예를 들어, 단리, 정제, 선택, 가변 영역 서열과 같은 다른 서열과의 조합 또는 포함)되지 않은 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 알로타입); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라, 그의 자연 발생 변이체를 포함한다.
"변형 Fc 영역"은, 적어도 하나의 아미노산 변형 (예를 들어, 치환, 첨가 또는 결실), 바람직하게는 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환 (들)의 맥락에서, 천연 서열 Fc 영역과 다른 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 상기 변형 Fc 영역은, 천연 서열 Fc 영역 또는 부모 폴리펩티드의 Fc 영역에 비교하여, 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어, 천연 서열 Fc 영역 또는 부모 폴리펩티드의 Fc 영역에, 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환 및 바람직하게는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 가진다. 본 발명의 변형 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 부모 폴리펩티드의 Fc 영역과 바람직하게는 적어도 약 80%의 상동성 및 더욱 바람직하게는 적어도 약 90% 상동성, 예를 들어 적어도 약 95% 상동성을 가질 것이다. 예를 들어, 인간 IgG1 Fc 서열의 2개의 위치에서, 2개의 아미노산이 알라닌으로 변화된 변이체가 하기 제공된 아미노산 서열에서 볼드체로 제시된다:
Figure pct00078
(서열번호:316)
이러한 변형 서열은, 하기 제공되는 바와 같이, 5H23(vH3)-hIgG1(E233A)(L235A)로 명명되는 인간화 5H23-vH3 (예를 들어, 실시예 7 참조)에 있어서, 하기에서 제시되는 바와 같은 인간화 중쇄 작제물에 사용될 수 있다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이며, 가변 영역 서열은 볼드체 부분이다:
Figure pct00079
(서열번호:317)
"경쇄 불변 영역"은 카파 및 람다 불변 영역을 포함한다. 예시적 카파 불변 영역이 하기에서 제공된다:
Figure pct00080
(서열번호: 318)
이러한 카파 불변 영역 서열은, 하기 제공되는 바와 같이, 인간화 5H23-vL2 (예를 들어, 실시예 7 참조)에 있어서, 하기에서 제시되는 바와 같은 인간화 경쇄 작제물에 사용될 수 있다; 신호 서열을 구성하는 아미노산은 밑줄 친 것이며, 가변 영역 서열은 볼드체 부분이다:
Figure pct00081
(서열번호: 319)
베타 클로토 또는 항-베타 클로토 항체와 연관되어 사용되는 경우, 용어 "변이체"는, 천연 또는 비변형 베타 클로토 서열과 비교하여, 하나 또는 그 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 아미노산 서열 치환, 결실 및/또는 첨가를 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 의미할 수 있다. 예를 들어, 베타 클로토 변이체는, 천연 베타 클로토의 아미노산 서열에, 하나 또는 그 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개 또는 약 1 내지 약 5개)의 변화로부터 초래될 수 있다. 또한, 예시적으로, 항-베타 클로토 항체의 변이체는 천연 또는 사전 변형되지 않은 항-베타 클로토 항체의 아미노산 서열에, 하나 또는 그 이상 (예를 들어, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개 또는 약 1 내지 약 5개)의 변화로부터 초래될 수 있다. 대립 또는 스플라이스 변이체와 같은 변이체는 자연 발생할 수 있거나 또는 인공적으로 작제될 수 있다. 폴리펩티드 변이체는 상기 변이체를 인코딩하는 해당 핵산 분자로부터 제조될 수 있다. 특정 실시형태에서, 베타 클로토 변이체 또는 항-베타 클로토 항체 변이체는 각각 적어도 베타 클로토 또는 항-베타 클로토 항체 기능성 활성을 유지한다. 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체 변이체는 베타 클로토와 결합하고/거나, 베타 클로토 활성에 대해, 길항성이다. 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체 변이체는 베타 클로토와 결합하고/거나, 베타 클로토 활성에 대해, 작용성이다. 특정 실시형태에서, 상기 변이체는, 베타 클로토 또는 항-베타 클로토 항체 VH 또는 VL 영역 또는 하위 영역, 예를 들어 하나 또는 그 이상의 CDR을 인코딩하는 핵산 분자의 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP)에 의해 인코딩된다.
용어 "벡터"는, 예를 들어, 핵산 서열을 숙주 세포로 도입시키기 위한 경우를 포함하는 것으로서, 핵산 서열을 전달 또는 포함시키는데 사용되는 물질을 지칭한다. 사용 적용 가능한 벡터에는, 예를 들면, 숙주 세포 염색체로의 안정한 혼입을 위해, 조작 가능한 선택 서열 또는 마커를 포함할 수 있는 발현 벡터, 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 에피좀 및 인공 염색체가 포함된다. 또한, 벡터는 하나 또는 그 이상의 선택성 마커 유전자 및 적절한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 포함될 수 있는 선택성 마커 유전자는, 예를 들어, 항생제 또는 독소에 대한 저항성을 제공하거나, 영양요구성 결함 (auxotrophic deficiency)을 보완하거나, 또는 배양 배지에 존재하지 않는 주요 영양소를 공급한다. 발현 조절 서열은, 당 업계에 잘 알려져 있는 항시성 (constitutive) 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서, 전사 종결인자 등을 포함할 수 있다. 2개 또는 그 이상의 핵산 분자가 공동 발현되어야 하는 경우 (예를 들어, 항체 중쇄 및 경쇄 또는 항체 VH 및 VL 둘 모두), 두 핵산 분자 모두, 예를 들어, 단일 발현 벡터 또는 별도의 발현 벡터로 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현에 있어서, 인코딩 핵산은 하나의 공통 발현 조절 서열에 작동적으로 결합될 수 있거나 또는, 다른 발현 조절 서열, 예를 들어 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 항시성 프로모터에 작동적으로 결합될 수 있다. 숙주 세포로의 핵산 분자의 도입은 당 업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 확인할 수 있다. 이러한 방법에는, mRNA의 노던 블롯 또는 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 증폭과 같은 핵산 분석 또는 유전자 생성물 발현에 대한 면역블로팅 또는, 도입된 핵산 서열 또는 해당 유전자 생성물의 발현을 시험하기 위한 기타 적절한 분석 방법이 포함된다. 당업자는, 핵산 분자가, 원하는 생성물 (예를 들어, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체)을 생성하기에 충분한 양으로 발현된다는 것을 이해하며, 당 업계에 잘 공지된 방법을 사용하여, 충분한 발현을 획득하기 위해, 발현 수준을 최적화할 수 있다는 것을 추가로 이해한다.
"항체-의존적 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는, 특정 세포독성 세포 (예를 들어, 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포)에 존재하는 Fc 수용체 (FcR)에 결합된 분비 Ig가, 이들 세포독성 효과기 세포가 항원-내재 표적 세포에 특이적으로 결합하여, 그후, 세포 독성에 의해, 표적 세포를 살해할 수 있도록 하는 세포독성 형태를 지칭한다. 항체는 세포독성 세포를 "무장"시키며, 이러한 살해 과정을 위해, 절대적으로 필요하다. ADCC를 매개하는 1차 세포 (primary cell)인 NK 세포는 단지 FcγRIII만을 발현하나, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포에서의 FcR 발현이 알려져 있다 (예를 들어, 표 3, 464 페이지, Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)). 관심 대상 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관 내 ADCC 분석 (예를 들어, 미국 특허 제 5,500,362호 또는 제 5,821,337호)을 수행할 수 있다. 이러한 분석에 유용한 효과기 세포에는 말초 혈 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 대상 분자의 ADCC 활성은, 예를 들어 동물 모델에서, 생체 내 평가할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998)] 참조). ADCC 활성이 거의 없거나 또는 전혀 없는 항체를 사용하기 위해 선택할 수 있다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은, 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 규정한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR은 IgG 항체와 결합하는 것 (예를 들어, 감마 수용체)이며, FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위 종류의 수용체를 포함하고, 이들 수용체의 대립 변이체 및 대안적으로 스플라이스 형태를 포함한다. FcγII 수용체는, 주로 그의 세포질 도메인에서 상이한 유사 아미노산 서열을 가지는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("저해 수용체")를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)] 참조). FcR은 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)] 참조). 미래에 확인되어야 하는 것들을 포함하여, 기타 FcR은 본 발명에서, 용어 "FcR"로 포괄된다. 또한, 상기 용어에는, 모체 IgG의 태아로의 전달을 담당하는 신생아 수용체인 FcRn이 포함된다 (예를 들어, 문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)] 참조). FcR과의 결합이 향상되거나 또는 저하된 항체 변이체가 개시된 바 있다 (예를 들어, WO 2000/42072; 미국 특허 제 7,183,387호, 제 7,332,581호 및 제 7.335,742호; Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001)] 참조).
"보체 의존적 세포 독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하의 표적 세포의 용해를 지칭한다. 전형적 보체 경로의 활성화는, 동족 항원에 결합하는 (적절한 하위 종류의) 항체와 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화의 평가를 위해, CDC 분석 (예를 들어, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)] 참조)을 실시할 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열이 변경되고 (변형 Fc 영역을 가지는 폴리펩티드), C1q 결합능이 증가 또는 감소된 폴리펩티드 변이체가 개시된 바 있다 (예를 들어, 문헌 [미국 특허 제 6,194,551호, WO 1999/51642, Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)] 참조). CDC 활성이 거의 없거나 또는 전혀 없는 항체를 사용하기 위해 선택할 수 있다.
베타 클로토 폴리펩티드 "세포 외 도메인" 또는 "ECD"는 막관통 및 세포질 도메인이 필수적으로 부재하는 베타 클로토 폴리펩티드의 형태를 지칭한다. 예를 들어, 베타 클로토 폴리펩티드 ECD는 1% 이하의 이러한 막관통 및/또는 세포질 도메인을 가질 수 있으며, 바람직하게는 0.5% 이하의 이러한 도메인을 가질 수 있다. 용어 "동일성 (identity)"은, 서열의 정렬 및 비교에 의해 측정되는 것으로서, 2개 또는 그 이상의 폴리펩티드 분자 또는 2개 또는 그 이상의 핵산 분자의 서열 사이의 관계를 지칭한다. "동일성 백분율"은 비교되는 분자의 아미노산 또는 뉴클레오티드 사이에 동일한 잔기의 백분율을 의미하며, 비교되는 분자 중 최소 크기를 기반으로 하여, 계산된다. 이러한 계산에 있어서, (존재한다면) 정렬 내의 갭 (gap)은 특정 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램 (예를 들어, "알고리즘")에 의해, 처리되어야 한다. 정렬된 핵산 또는 폴리펩티드의 동일성을 계산하는데 사용될 수 있는 방법에는 문헌 [Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), (1988) New York: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press; von Heinje, G., (1987) Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press; and Carillo et al., (1988) SIAM J. Applied Math. 48:1073]에 개시되어 있는 방법들이 포함된다.
동일성 백분율의 계산에 있어서, 비교되는 서열은, 서열 사이에 최대 일치 (mach)가 제공되는 방식으로, 정렬될 수 있다. 동일성 백분율 측정에 사용될 수 있는 컴퓨터 프로그램은 GCG 프로그램 패키지로서, 여기에는 GAP가 포함된다 (Devereux et al., (1984) Nucl. Acid Res. 12:387; Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.). 컴퓨터 알고리즘 GAP는, 서열 동일성 백분율이 측정되어야 하는 2개의 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 정렬시킨다. 그의 각각의 아미노산 또는 뉴클레오티드의 최적의 일치 (상기 알고리즘에 의해 측정되는 것으로서, "일치 범위")를 위해, 서열이 정렬될 수 있다. 갭 개방 패널티 (gap opening penalty) (이는 3x 평균 항(average diagonal)으로서 계산되고, 여기서 "평균 항"은 사용되는 비교 매트릭스(comparison matrix) 항의 평균이고; "항"은 특정 비교 매트릭스에 의해, 각각의 완전한 아미노산 일치에 배정된 스코어 또는 숫자이다) 및 갭 연장 패널티 (gap extension penalty) (이는 통상적으로, 갭 개방 페널티의 1/10배이다)뿐만 아니라, PAM 250 또는 BLOSUM 62와 같은 비교 매트릭스 (comparison matrix)가 상기 알고리즘과 함께 사용된다. 특정 실시형태에서, 표준 비교 매트릭스 (PAM 250 비교 매트릭스를 위해, 문헌 [Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352]를 참조하고; BLOSUM 62 비교 매트릭스를 위해, 문헌 [Henikoff et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919]을 참조한다)가 또한 상기 알고리즘에 의해 사용된다.
GAP 프로그램을 사용하여, 폴리펩티드 또는 뉴클레오티드 서열의 동일성 백분율을 측정하는데 있어서, 예시적 파라미터는 하기와 같다: (i) 알고리즘: Needleman et al., 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453; (ii) 비교 매트릭스: BLOSUM 62 / Henikoff et al., 1992, supra; (iii) 갭 패널티: 12 (그러나, 말단 갭에 대한 패널티 없음) (iv) 갭 길이 패널티: 4; 및 (v) 유사성 역치: 0.
2개의 아미노산 서열의 정렬을 위한 특정 정렬 체계는, 2개의 서열 중 단지 짧은 영역만의 일치를 초래할 수 있으며, 이러한 작은 정렬 영역은, 2개의 전장 서열 사이에 유의미한 관련성이 없다 할지라도, 매우 높은 서열 동일성을 가질 수 있다. 따라서, 선택되는 정렬 방법 (예를 들어, GAP 프로그램)은, 바람직한 경우, 표적 폴리펩티드의 아미노산 수, 예를 들어 적어도 50개의 인접 아미노산 범위의 정렬이 초래되도록, 조정될 수 있다.
참조 폴리펩티드 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 백분율 (%)"은, 서열을 정렬시키고, 최대 서열 동일성 백분율을 획득하기 위해, 필요한 경우, 갭을 도입시킨 후, 참조 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되며, 이때, 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부로서 고려되지 않는다. 아미노산 서열의 동일성 백분율을 측정하기 위한 정렬은, 당 업계 기술 내의 다양한 방법으로, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR)과 같은 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여, 획득될 수 있다. 당업자는, 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐, 최대 정렬을 획득하기 위해, 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
아미노산 잔기/위치의 "변형"은, 개시 아미노산 서열과 비교하는 경우, 기본 아미노산 서열의 변화를 의미하며, 여기서, 상기 변화는, 상기 아미노산 잔기/위치를 포함하는 서열의 변경으로부터 초래된다. 예를 들어, 전형적 변형에는, 또 다른 아미노산에 의한 상기 잔기의 치환 (예를 들어, 보존적 또는 비보존적 치환), 상기 잔기/위치에 인접한 하나 또는 그 이상 (예를 들어, 일반적으로, 5, 4 또는 3개 이하)의 아미노산의 삽입 및/또는 상기 잔기/위치의 결실이 포함된다.
"에피토프"는, 면역 반응을 이끌어낼 수 있는 포유동물 (예를 들어, 인간)과 같은 동물에서, 항원 또는 면역원성 활성을 가지며, 항체의 하나 또는 그 이상의 항원 결합 영역에 결합할 수 있는 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편 또는 베타 클로토 에피토프와 같은 항원 표면의 국소 영역과 같은 것으로서, 단일 항체 분자가 결합하는 항원 분자의 표면 상 자리이다. 면역원성 활성을 가지는 에피토프는, 동물에서, 항체 반응을 이끌어낼 수 있는 폴리펩티드의 부분이다. 항원 활성을 가지는 에피토프는, 예를 들어 면역분석을 포함하여, 당 업계에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 측정되는 바와 같은 것으로서, 항체가 결합하는 폴리펩티드의 부분이다. 항원 에피토프는 반드시 면역원성일 필요는 없다. 에피토프는 종종 당 측쇄 또는 아미노산과 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹으로 구성되며, 특정한 전하 특징뿐만 아니라, 특정한 3차원 구조 특징을 가진다. 용어 "에피토프"에는 구체적으로 선형 에피토프 및 입체 구조적 에피토프 (conformational epitope)가 포함된다. 에피토프가 되는 폴리펩티드의 영역은 상기 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나, 또는 에피토프가 상기 폴리펩티드의 2개 또는 그 이상의 비인접 영역으로부터 함께 이루어질 수 있다. 에피토프는 항원의 3차원 표면 특징이거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 특정 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프는 베타 클로토 폴리펩티드의 3차원 표면 특징이다. 기타 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프는 베타 클로토 폴리펩티드의 선형 특징이다. 일반적으로, 항원은 몇 개의 또는 다수의 다른 에피토프를 가지며, 다수의 다른 항체와 반응할 수 있다.
2개의 항체가 3차원 공간에서, 동일하거나, 중첩되거나 또는 인접하는 에피토프를 인식하는 경우, 항체는 "에피토프" 또는 참조 항체와 "필수적으로 동일한 에피토프" 또는 "동일한 에피토프"와 결합한다. 2개의 항체가 3차원 공간에서, 동일하거나, 중첩되거나 또는 인접하는 에피토프에 결합하는지 여부를 측정하기 위한 가장 광범위하게 사용되는 빠른 방법에는, 예를 들어 표지 항원 또는 표지 항체 중 하나를 이용하여, 다양한 다른 형식으로 구성될 수 있는 경쟁 분석이 있다. 일부 분석에서, 항원은 96-웰 플레이트 상에 고정되거나, 또는 세포 표면 상에서 발현되고, 방사성, 형광 또는 효소 표지를 이용하여, 표지 항체의 결합을 차단하는 비표지 항체의 능력이 측정된다.
"에피토프 매핑 (epitope mapping)"은 그의 표적 항원 상의 항체의 결합 자리 또는 에피토프를 확인하는 과정이다. 항체 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체 구조적 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프는 단백질에서, 연속 아미노산 서열에 의해, 형성된다. 입체 구조적 에피토프는, 단백질 서열에서, 불연속이나, 단백질의 접힘으로, 그의 3차원 구조로 되는 아미노산에 의해 형성된다. 유도 에피토프는, 단백질의 3차원 구조가, 예를 들어 또 다른 단백질 또는 리간드의 활성화 또는 결합 (예를 들어, FGRFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 또는 FGFR4c와 같은 FCF 수용체와 베타 클로토의 결합) 후, 변경된 구조가 되는 경우, 형성된다.
"에피토프 비닝 (epitope binning)"은 인식되는 에피토프를 기반으로 한 항체의 그룹화 과정이다. 보다 구체적으로, 에피토프 비닝은, 그의 에피토프 인식 특성을 기반으로 하는 항체의 집단화를 위한 컴퓨터 과정과 조합한 경쟁 분석을 이용하여, 다른 항체의 에피토프 인식 특성을 식별하고, 개별적 결합 특이성을 가지는 항체를 확인하기 위한 방법 및 시스템을 포함한다.
"베타 클로토-매개 질환" 및 "베타 클로토-매개 장애" 및 "베타 클로토-매개 병증"은 혼용되며, FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 또는 FGFR4와 같은 FGF 수용체와 베타 클로토의 상호작용 또는 베타 클로토에 의해 전적으로 또는 부분적으로 야기되거나 또는 그 결과인 임의의 질환, 장애 또는 병증 및/또는, 대안적으로, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과의 모방 또는 증대가 바람직한 임의의 질환, 장애 또는 병증을 지칭한다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료학적 유효량"은, 소정의 질환, 장애 또는 병증 및/또는 그와 관련된 증상의 중증도 및/또는 기간을 감소 및/또는 호전시키기에 충분한 제제 (예를 들어, 본 발명에서 개시되는 항체 또는 본 발명에서 개시되는 임의의 다른 제제)의 양을 지칭한다. 치료제를 비롯한 제제의 치료학적 유효량은 (i) 소정의 질환, 장애 또는 병증의 진행 또는 확장의 감소 또는 호전, (ii) 소정의 질환, 장애 또는 병증의 재발, 발달 또는 개시 (onset)의 감소 또는 호전 및/또는 (iii) 또 다른 치료 (예를 들어, 본 발명에서 제공되는 항체의 투여 이외의 치료법)의 예방 또는 치료 효과의 개선 또는 향상을 위해, 필요한 양일 수 있다. 본 발명의 물질/분자/제제 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)의 "치료학적 유효량"은, 개체의 질환 단계, 연령, 성별 및 체중 및, 개체에서 원하는 반응을 이끌어내는 상기 물질/분자/제제의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 치료학적 유효량은, 상기 물질/분자/제제의 임의의 독성 또는 유해 효과 보다, 치료학적으로 유리한 효과가 더 큰 양을 포괄한다. 특정 실시형태에서, 용어 "치료학적 유효량"은, 대상체 또는 포유동물에서, 질환, 장애 또는 병증을 "치료"하기에 효과적인 항체 또는 기타 제제 (예를 들어, 또는 약제)의 양을 지칭한다.
"유효량"은 일반적으로, 증상의 중증도 및/또는 빈도를 감소시키고, 증상 및/또는 근원적 원인을 제거하고, 증상 및/또는 이들의 근원적 원인의 발생을 예방하고/하거나, 예를 들어, 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 심혈관 질환, 대사 증후군을 비롯한 질환, 장애 또는 병증 또는, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과의 모방 또는 증대가 바람직한 광범위한 임의의 질환, 장애 또는 병증으로부터 초래되거나 또는 그와 관련된 손상을 개선 또는 교정하기에 충분한 양이다. 일부 실시형태에서, 유효량은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량이다. "치료적 유효량"은 어떠한 임의의 방식으로, 질환, 장애 또는 병증 (예를 들어, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환, 대사 증후군 또는, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과의 모방 또는 증대가 바람직한 광범위한 임의의 질환, 장애 또는 병증) 또는 증상, 특히, 이러한 질환, 장애 또는 병증과 관련된 질환, 장애 또는 병증 또는 증상을 치유하거나, 또는 그렇지 않으면, 상기 질환, 장애 또는 병증 또는, 이러한 질환, 장애 또는 병증과 관련된 바람직하지 않은 임의의 기타 증상을 예방, 방해, 지연 또는 역전시키기에 충분한 양이다. "예방적 유효량"은, 대상체에게 투여되는 경우, 의도된 예방적 효과, 예를 들어, 당뇨병, 비만, 또는 이상지질혈증의 개시 (또는, 재발)의 예방 또는 지연 또는, 예를 들어, 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 심혈관 질환, 대사 증후군을 비롯한 질환, 장애 또는 병증 또는 관련 증상 (들) 또는, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과의 모방 또는 증대가 바람직한 광범위한 임의의 질환, 장애 또는 병증 또는 관련 증상의 개시 (또는, 재발) 가능성의 감소를 나타내는 약제학적 조성물의 양이다. 완전한 치료적 또는 예방적 효과는 1회 투여량의 투여에 의해 반드시 발생하는 것은 아니며, 일련의 투여량의 투여 이후에만 발생할 수 있다. 따라서, 치료적 또는 예방적 유효량은 1회 또는 그 이상의 투여로 투여될 수 있다.
"예방적 유효량"은, 바람직한 예방적 결과를 획득하는데 필요한 투여량 및 기간에 효과적인 양을 지칭한다. 전형적으로, 그러나 반드시 그러한 것은 아니나, 예방적 투여가, 질환, 장애 또는 병증 이전에 또는 그의 초기 단계에, 대상체에서 사용되므로, 예방적 유효량은 치료학적 유효량 보다 소량일 수 있다.
"만성" 투여는, 연장 기간 동안, 초기 치료 효과 (활성)를 유지하기 위해, 급성 모드와 반대되는 것으로서, 연속 모드 (예를 들어, 수 일, 수 주, 수 개월 또는 수 년의 기간)의 제제 (들)의 투여를 지칭한다. "간헐적" 투여는, 중단 없이, 연속적으로 수행되기 보다는, 오히려 자연스럽게 순환되는 치료이다.
하나 또는 그 이상의 추가적 치료제와의 "병용 (combination)" 투여에는 동시 (예를 들어, 병행) 및 임의의 순서의 연속 투여가 포함된다. 다른 치료법 (예를 들어, 다른 제제)의 투여의 맥락에서, 용어 "병용"에는 하나 이상의 치료법 (예를 들어, 하나 이상의 제제)의 사용이 포함된다. 용어 "병용"의 사용은, 치료법이 대상체에 투여되는 순서에 제한되지 않는다. 제1 치료법 (예를 들어, 제제)은, 베타 클로토-매개 질환을 가지거나 또는 가질것으로 의심되는 대상체에, 제2 치료법 (예를 들어, 제제)의 투여 이전 (예를 들어, 1분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 8주, 9주, 10주, 11주, 또는 12주), 병행하여 또는 이후 (예를 들어, 1분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 또는 12주)에 투여될 수 있다.
임의의 추가적 치료법 (예를 들어, 제제)은 다른 추가적 치료법 (예를 들어, 제제)과 함께, 임의의 순서로 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 항체는, 베타 클로토-매개 질환의 예방, 치료, 관리 및/또는 호전을 위해, 하나 또는 그 이상의 치료법, 예를 들어 제제 (예를 들어, 현재 투여되는 항체가 아닌 제제를 비롯한 치료법)와 병용하여 투여될 수 있다. 항체와 병용 투여될 수 있는 치료법 (예를 들어, 제제)의 비제한 예에는, 예를 들어, 진통제, 마취제, 항생제, 또는 면역 조절제 또는 미국 약전 (Pharmacopoeia) 및/또는 의사용 처방 참고집 (Physician's Desk Reference)에 열거된 임의의 기타 제제가 포함된다. 병용 치료법에 유용한 제제의 예에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 비스테로이드성 항염증 약제 (NSAID), 예를 들어 아스피린, 이부프로펜 및 기타 프로피온산 유도체 (알미노프로펜 (alminoprofen), 베녹사프로펜 (benoxaprofen), 부클로실산 (bucloxic acid), 카프로펜 (carprofen), 펜부펜 (fenbufen), 페노프로펜 (fenoprofen), 플루프로펜 (fluprofen), 플루르비프로펜 (flurbiprofen), 인도프로펜 (indoprofen), 케토프로펜 (ketoprofen), 미로프로펜 (miroprofen), 나프록센 (naproxen), 옥사프로진 (oxaprozin), 피르프로펜 (pirprofen), 프라노프로펜 (pranoprofen), 수프로펜 (suprofen), 티아프로펜산 (tiaprofenic acid), 및 티옥사프로펜 (tioxaprofen)), 아세트산 유도체 (인도메타신 (indomethacin), 아세메타신 (acemetacin), 알클로페낙 (alclofenac), 클리다낙 (clidanac), 디클로페낙 (diclofenac), 펜클로페낙 (fenclofenac), 펜클로지산 (fenclozic acid), 펜티아작 (fentiazac), 퓨로페낙 (fuirofenac),이부페낙 (ibufenac), 이속세팍 (isoxepac), 옥스피낙 (oxpinac), 설린닥 (sulindac), 티오피낙 (tiopinac), 톨메틴 (tolmetin), 지도메타신 (zidometacin) 및 조메피락 (zomepirac)), 페남산 유도체 (플루페남산, 메클로페남산, 메페남산, 니플룸산 및 톨페남산), 비페닐카르복실산 유도체 (디플루니살 및 플루페니살), 옥시캄 (이속시캄, 피록시캄, 수독시캄 및 테녹시칸), 살리실레이트 (아세틸 살리실산, 설파살라진) 및 피라졸론 (아파존, 베즈피페릴론, 페프라존, 메페부타존, 옥시펜부타존, 페니닐부타존)이 포함된다. 기타 병용제에는 시클로옥시게나아제-2 (COX-2) 저해제가 포함된다. 기타 병용제에는 스테로이드, 예를 들어 프레드니솔론, 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 베타메타손, 덱사메타손 또는 히드로코르피손이 포함된다. 스테로이드제의 하나 또는 그 이상의 부작용은, 본 발명의 항체와 병용한 환자의 치료시, 필요한 스테로이드의 투여량을 점차 줄여감으로써, 감소되거나 또는 심지어 제거될 수 있으므로, 이러한 병용은 특히 유리할 수 있다. 병용제의 추가예에는 사이토카인 억제 항염증 약제 (들) (CSAID); 성장 인자 또는 다른 인간 사이토카인의 항체 또는 길항제, 예를 들어 TNF, LT, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, IL-16, IL-18, EMAP-II, GM-CSF, FGF, 또는 PDGF가 포함된다. 병용제에는 키메라, 인간화 또는 인간 TNF 항체, REMICADE, 항-TNF 항체 단편 (예를 들어, CDP870)과 같은 TNF 길항제가 포함될 수 있고, 용해성 p55 또는 p75 TNF 수용체, 그의 유도체, p75TNFRIgG (ENBREL®) 또는 p55TNFR1gG (LENERCEPT®), 용해성 IL-13 수용체 (sIL-13), 및 또한 TNFα 전환 효소 (TACE) 억제제; 유사 IL-1 억제제 (예를 들어, 인터루킨-1-전환 효소 억제제)가 효과적일 수 있다. 기타 병용제에는 인터루킨 11, 항-P7 및 p-셀렉틴 당단백질 리간드 (PSGL)가 포함된다. 병용 치료에 유용한 제제의 다른 예에는 인터페론-β1a (AVONEX); 인터페론-β1b (BETASERON®); 코팍손; 고압 산소; 정맥내 면역글로불린; 클라브리빈 (clabribine); 및 다른 인간 사이토카인 또는 성장 인자의 항체 또는 길항제 (예를 들어, CD40 리간드 및 CD80의 항체)가 포함된다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 "담체"에는, 사용되는 투여량 및 농도에서, 그에 노출되는 세포 또는 포유동물에 대해 무독성인 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제가 포함된다. 종종, 생리학적으로 허용 가능한 담체는 pH 완충 수용액이다. 생리학적으로 허용 가능한 담체의 예에는 인산염, 시스트산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산을 비롯한 산화방지제; 저 분자량 (예를 들면, 약 10개 이하의 아미노산 잔기) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 만니톨 또는 소르비톨과 같은 당 알콜; 나트륨과 같은 염-형성 반대 이온; 및/또는 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 PLURONICS™와 같은 비이온성 계면활성제가 포함된다. 용어 "담체"는 또한, 희석제, 어주번트 (예를 들어, 프로이드 어주번트 (완전 또는 불완전)), 부형제 또는 치료제가 함께 투여되는 비히클을 의미할 수 있다. 약제학적 담체를 비롯한 이러한 담체는 땅콩 유, 대두유, 광유, 참기름 등과 같은 석유 (petroleum), 동물, 식물 또는 합성 유래의 것을 비롯한 멸균 액체, 예를 들어 물 및 오일일 수 있다. 조성물 (예를 들어, 약제학적 조성물)이 정맥내로 투여되는 경우, 예시적 담체는 물이다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한, 특히 주사액을 위한 액체 담체로 사용될 수 있다. 적절한 부형제 (예를 들어, 약제학적 부형제)에는 전분, 글루코오스, 락토오스, 수쿠로오스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크, 실리카겔, 스테아르산 나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등이 포함된다. 바람직한 경우, 상기 조성물은 또한, 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 포함할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 분말, 서방성 제형물 등의 형태를 취할 수 있다. 제형물을 비롯한 구강 조성물은, 의약품용의 만니톨, 락토오스, 전분, 스테아르산 마그네슘, 소듐 사카린, 셀룰로오스, 탄산 마그네슘 등과 같은 표준 담체를 포함할 수 있다. 적절한 약제학적 담체의 예가 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 개시되어 있다. 약제학적 화합물을 포함하는 조성물은, 대상체 (예를 들어, 환자)로의 적절한 투여를 위한 형태를 제공하기 위한 것으로서, 적절한 양의 담체와 함께, 예를 들어 단리 또는 정제 형태의 항-베타 클로토 항체의 예방학적 또는 치료학적 유효량을 포함할 수 있다. 제형물은 투여 모드에 적합해야 한다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나, 미국 약전, 유럽 약전 또는, 동물 및 더욱 특히 인간에서, 사용하기 위한 것으로서, 일반적으로 인정되는 기타 약전에 열거된 것을 지칭한다.
용어 "약제학적 제형물"은, 활성 요소 (예를 들어, 항-베타 클로토 항체)의 생물학적 활성이 유효한 것이 되도록 하는 형태이며, 상기 제형물이 투여되는 대상체에 대해 허용 불가능한 독성이 있는 추가 성분을 포함하지 않는 제조물을 지칭한다. 이러한 제형물은 멸균될 수 있다.
"멸균" 제형물은 모든 살아있는 미생물 및 그의 포자가 부재하거나 또는 무균 상태이다.
본 발명에서 사용되는 바와 같은 "폴리클로날 항체"는, 다수의 에피토프를 가지는 단백질에 대한 면역원성 반응으로 생성되는 항체 집단을 의미하며, 따라서, 상기 단백질 내의 동일한 에피토프 및 다른 에피토프에 대해 유도되는 다양한 다른 항체를 포함한다. 폴리클로날 항체의 생성 방법은 당 업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 11 장: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York).
"단리된 핵산"은, 천연 서열을 자연 상 수반하는, 리보솜 및 중합효소와 같은 단백질 또는 복합체뿐만 아니라, 실질적으로, 다른 게놈 DNA 서열로부터 단리되는 핵산, 예를 들어 RNA, DNA, 혼합 중합체이다. "단리된" 핵산 분자는, 핵산 분자의 자연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 단리되는 것이다. 또한, cDNA 분자와 같은 "단리된" 핵산 분자는, 화학적으로 합성되는 경우, 화학적 전구 물질 또는 기타 화학 물질이 실질적으로 부재하거나 또는 재조합 기술에 의해, 생성되는 경우, 다른 세포성 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 부재할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항체를 인코딩하는 하나 또는 그 이상의 핵산 분자는 단리 또는 정제된다. 상기 용어는 그의 자연적 발생 환경으로부터 제거된 핵산 서열을 포용하고, 재조합 또는 복제 DNA 단리물 및 화학적 합성 유사체 또는, 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 상기 분자의 단리된 형태를 포함할 수 있다.
본 발명에서 혼용되는 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드 중합체를 의미하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형 뉴클레오티드 또는 염기 및/또는 그의 유사체 또는, DNA 또는 RNA 중합효소에 의해 또는 합성 반응에 의해, 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 메틸화 뉴클레오티드 및 그의 유사체와 같은 변형 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 바와 같은 "올리고뉴클레오티드"는 일반적으로, 길이가, 반드시 그러한 것은 아니나, 일반적으로 약 200개 이하의 뉴클레오티드인 짧은, 일반적으로 단일 가닥의, 일반적으로 합성 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고뉴클레오티드" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호 배타적인 것이 아니다. 폴리뉴클레오티드에 대한 상기 설명은 올리고뉴클레오티드에 동일하게 전적으로 적용될 수 있다. 본 발명의 항-베타 클로토 항체를 생성하는 세포에는, 상기 항체를 인코딩하는 핵산이 도입되는 박테리아 및 진핵 생물 숙주 세포뿐만 아니라, 부모 하이브리도마 세포를 포함할 수 있다. 적절한 숙주 세포가 하기에서 기술된다.
별도로 명시되지 않는 한, 본 발명에서 개시되는 임의의 단일 가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 좌측 말단은 5' 말단이며; 이중 가닥 폴리뉴클레오티드 서열의 좌측 방향은 5' 방향으로 지칭된다. 초기 RNA 전사체의 5'에서 3' 첨가 방향은 전사 방향으로 지칭되며; RNA 전사체의 5' 말단에 대해, 5'인, RNA 전사체와 동일한 서열을 가지는 DNA 가닥의 서열 영역은 "상류 서열"로서 지칭되고; RNA 전사체의 3' 말단에 대해, 3'인, RNA 전사체와 동일한 서열을 가지는 DNA 가닥의 서열 영역은 "하류 서열"로서 지칭된다.
용어 "패키지 삽입물 (package insert)"는, 이러한 치료 제품의 사용에 관한 표시, 용법, 투여량, 투여법, 사용 금지 사유 및/또는 경고에 대한 정보를 포함하는 것으로서, 치료 제품의 상업용 패키지에 통례적으로 포함되는 설명서를 지칭하는 것으로 사용된다.
용어 "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은, 본 발명에서 제공되는 치료법 또는 치료법의 병용 (예를 들어, 본 발명에서 제공되는 항체와 같은 예방 또는 치료 제제의 병용) 투여로부터 초래되는 것으로서, 베타 클로토-매개 질환 및/또는 그와 관련된 증상의 발달, 재발, 개시 또는 확산의 전체적 또는 부분적 억제를 지칭한다.
용어 "예방제"는 대상체에서, 베타 클로토-매개 질환 및/또는 그와 관련된 증상의 발달, 재발, 개시 또는 확산을 전체적 또는 부분적으로 억제할 수 있는 임의의 제제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 용어 "예방제"는 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체를 지칭한다. 기타 특정 실시형태에서, 용어 "예방제"는 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체 이외의 제제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 예방제는, 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증, 및/또는 그와 관련된 증상을 예방하거나, 또는 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증, 및/또는 그와 관련된 증상을 저지하는데 유용한 것으로 알려지거나 또는 그러한 목적으로 사용된 바 있거나 또는 현재 사용되고 있는 제제이다. 특정 실시형태에서, 예방제는 인간화 항-베타 클로토 항체, 예를 들어 인간화 항-베타 클로토 모노클로날 항체이다.
특정 실시형태에서, "예방학적으로 유효한 혈청 역가 (prophylactically effective serum titer)"는, 대상체에서, 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증, 및/또는 그와 관련된 증상의 발달, 재발, 개시 또는 확산을 전체적으로 또는 부분적으로 억제하는 것으로서, 대상체, 바람직하게는 인간의 혈청 역가이다.
특정 실시형태에서, "치료학적으로 유효한 혈청 역가"는, 대상체에서, 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증과 관련된 것으로서, 그 중증도, 기간 및/또는 증상을 감소시키는, 대상체, 바람직하게는 인간의 혈청 역가이다.
용어 "재조합 항체"는 재조합적 방법에 의해, 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 지칭한다. 재조합 항체는, 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 이용하여 발현된 항체, 재조합 복합 항체 라이브러리 (recombinant, combinatorial antibody library)로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 의해 트랜스제닉 및/또는 염색체 이식 (transchromosomal)된 동물 (예를 들어, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체 (예를 들어, 문헌 [Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 참조) 또는, 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱 (splicing)을 포함한 임의의 기타 방법에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체일 수 있다. 이러한 재조합 항체는 인간 생식 계열 면역글로불린 서열로부터 유래하는 것들을 포함하는 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다 (문헌 [Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH 공보 No. 91-3242] 참조). 그러나, 특정 실시형태에서, 이러한 재조합 항체는 시험관 내 돌연변이 유발 (또는, 인간 Ig 서열에 의한 트랜스제닉 동물이 사용되는 경우, 생체 내 체성 돌연변이 유발 (somatic mutagenesis))에 적용될 수 있으며, 따라서, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식 계열 VH 및 VL 서열로부터 유래하는 것으로서, 그와 관련된 것이나, 생체 내에서, 인간 항체 생식 계열 레퍼토리 (human antibody germline repertoire) 내에 자연 상 존재할 수 없는 서열이다.
용어 "혈청 역가"는 다중 샘플 (예를 들어, 1회의 현 시점 또는 다중 시점)의 대상체 또는 최소 10, 예를 들어 최소 20, 또는 최소 40 대상체, 최대 약 100, 1000 또는 그 이상의 집단의 평균 혈청 역가를 지칭한다.
용어 "부작용"은 치료법 (예를 들어, 예방 또는 치료 제제)의 의도치 않고/거나 부정적인 효과를 포괄한다. 의도치 않은 효과가 반드시 부정적인 것은 아니다. 치료법 (예를 들어, 예방 또는 치료 제제)의 부정적 효과는 유해하거나 또는 불편하거나 또는 위험한 것일 것이다. 부작용의 예에는 설사, 기침, 위장염, 천명 (wheezing), 구역 (nausea), 구토 (vomiting), 식욕 부진 (anorexia), 복부 경련, 발열, 통증, 체중 감소, 탈수, 탈모, 호흡 곤란, 불면증, 현기증, 점막염, 신경과 근육 효과, 피로, 구강 건조, 및 식욕 감퇴 (loss of appetite), 투여 부위의 발진 또는 종창, 발열, 오한, 피로와 같은 독감형 증상, 소화기 장애 및 알레르기 반응이 포함된다. 환자가 경험하는 의도치 않은 추가적 효과는 다양하며, 당 업계에 알려져 있다. 의사용 처방 참고집 (Physician's Desk Reference (68th ed., 2014))에 다수의 것이 기재되어 있다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 혼용될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 특정 실시형태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어 비영장류 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 랫트 등) 또는 영장류 (예를 들어, 원숭이 및 인간)이다. 특정 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 일 실시형태에서, 대상체는, 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증을 가지는 포유동물 (예를 들어, 인간)이다. 또 다른 실시형태에서, 대상체는 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증의 발달 위험에 있는 포유동물 (예를 들어, 인간)이다.
"실질적 전체"는 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100%를 지칭한다.
용어 "치료제"는, 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증 및/또는 그와 관련된 증상의 하나 또는 그 이상의 증상의 치료, 예방 또는 완화에 포함되는 것으로서, 질환, 장애 또느 병증의 치료, 예방 또는 완화에 사용될 수 있는 임의의 제제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 치료제는 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체를 지칭한다. 기타 특정 실시형태에서, 치료제는 본 발명에서 제공되는 항체 이외의 제제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 치료제는, 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증 및/또는 그와 관련된 증상의 하나 또는 그 이상의 증상의 치료, 예방 또는 완화에 유용한 것으로 알려지거나 또는 그러한 목적으로 사용된 바 있거나 또는 현재 사용되고 있는 제제이다.
치료법 (예를 들어, 치료제를 비롯한 제제의 사용)의 병용은 임의의 2 또는 그 이상의 단일 치료법의 추가적 효과 보다 더욱 효과적 (예를 들어, 상승적)일 수 있다. 상승적 효과는 기대 밖의 것이며, 예측할 수 없는 것이다. 예를 들어, 치료제 병용의 상승적 효과는, 베타 클로토-매개 질환을 가지는 대상체에, 하나 또는 그 이상의 제제의 더욱 소량의 투여량 및/또는 상기 제제의 더욱 소수의 투여 횟수의 사용을 가능하게 한다. 더욱 소량의 투여량의 치료제를 사용하고/거나 상기 치료법을 더욱 소수의 횟수로 투여하는 효험은, 베타 클로토-매개 질환의 하나 또는 그 이상의 증상의 예방, 치료 또는 완화시, 상기 치료법의 효능의 감소 없이, 대상체에 상기 치료법의 투여와 관련된 독성을 감소시킨다. 또한, 상승적 효과는 베타 클로토-매개 질환의 하나 또는 그 이상의 증상의 예방, 치료 또는 완화시, 치료법의 개선된 효능을 초래할 수 있다. 마지막으로, 치료법 (예를 들어, 치료제) 병용의 상승적 효과는, 임의의 단일 치료법의 사용과 관련된 부정적이거나 또는 의도치 않은 부작용을 회피하거나 감소시킬 수 있다.
용어 "치료법"은 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증의 예방, 관리, 치료 및/또는 호전에, 사용될 수 있는 임의의 프로토콜, 방법 및/또는 제제를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 용어 "치료법들" 및 "치료법"은, 의료인과 같은 당업자에 공지되어 있는 베타 클로토-매개 질환, 장애 또는 병증의 예방, 관리, 치료 및/또는 호전에 유용한 생물학적 치료법, 지지 요법 및/또는 기타 치료법을 지칭한다.
용어 "검출성 프로브"는 검출성 신호를 제공하는 조성물을 지칭한다. 상기 용어에는, 제한 없이, 그의 활성을 통해, 검출성 신호를 제공하는 것으로서, 임의의 형광단, 발색단, 방사성 표지, 효소, 항체 또는 항체 단편 등이 포함된다.
용어 "진단제"는, 질환, 장애 또는 병증의 진단시, 도움이 되는 것으로서, 대상체에 투여되는 물질을 지칭한다. 이러한 물질은 질환 야기 과정의 국소화의 공개, 정밀 조준 및/또는 정의에 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 진단제는, 대상체에 투여되거나 또는 대상체의 샘플과 접촉되는 경우, 베타 클로토-매개 질환의 진단시, 도움이 되는, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체에 접합된 물질이 포함된다.
용어 "검출제"는, 샘플 또는 대상체에서, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 원하는 분자의 실재 또는 존재의 확인에 사용될 수 있는 물질을 지칭한다. 검출제는, 시각화를 가능하게 하는 물질 또는, 그렇지 않으면, (예를 들어, 정량화에 의해) 결정 및/또는 측정을 가능하게 하는 물질일 수 있다.
핵산 분자에 대한 인용시, 사용되는 경우, 용어 "인코딩하다" 또는 그의 문법적 균등물은, 천연 상태에서 또는, 당업자에게 잘 알려진 방법에 의해 조작되는 경우, 전사되어, mRNA를 생성시키고, 그후, 폴리펩티드 및/또는 그의 단편으로 번역될 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 안티센스 가닥은 이러한 핵산 분자의 보체이며, 인코딩 서열은 그로부터 추론될 수 있다.
용어 "부형제"는, 희석제, 비히클, 보존제, 결합제 또는 안정화제로서, 통상적으로 사용되는 비활성 물질을 지칭하며, 이로 제한되는 것은 아니나, 단백질 (예를 들어, 혈청 알부민 등), 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산, 리신, 아르기닌, 글리신, 히스티딘 등), 지방산 및 인지질 (예를 들어, 알킬 술포네이트, 카 프릴레이트 등), 계면 활성제 (예를 들어, SDS, 폴리소르베이트, 비이온성 계면활성제 등), 당류 (예를 들어, 수크로오스, 말토스, 트레할로스 등) 및 폴리올 (예를 들어, 만니톨, 소르비톨 등)이 포함된다. 또한, 그 전문이 본 발명에서 참조로서 포함되는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]을 참조한다.
펩티드 또는 폴리펩티드의 맥락에서, 본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "단편"은, 전장 이하의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 이러한 단편은, 예를 들어, 아미노산 서열의 아미노 말단에서의 절두 (truncation), 카르복시 말단에서의 절두 및/또는 잔기 (들)의 내부 결실로부터 발생할 수 있다. 단편은, 예를 들어, 대체 RNA 스플라이싱 또는 생체 내 프로테아제 활성으로부터 초래될 수 있다. 특정 실시형태에서, 베타 클로토 단편에는, 베타 클로토 폴리펩티드 또는, 베타 클로토 폴리펩티드에 결합하는 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 10개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 15개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 20개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 25개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 40개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 50개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 60개의 인접 아미노 잔기, 적어도 70개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 80개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 90개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 인접 100개의 아미노산 잔기, 적어도 125개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 150개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 175개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 200개의 인접 아미노산 잔기, 적어도 250개, 적어도 300개, 적어도 350개, 적어도 400개, 적어도 450개, 적어도 500개, 적어도 550개, 적어도 600개, 적어도 650개, 적어도 700개, 적어도 750개, 적어도 800개, 적어도 850개, 적어도 900개, 또는 적어도 950개의 인접 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드가 포함된다. 특정 실시형태에서, 베타 클로토 폴리펩티드 또는, 베타 클로토 항원에 결합하는 항체의 단편은 상기 폴리펩티드 또는 항체의 기능 중 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 적어도 3개 또는 그 이상을 유지한다.
용어 "관리한다", "관리하는" 및 "관리"는, 질환의 치유를 초래하지 않는 것으로서, 치료법 (예를 들어, 예방 또는 치료제)으로부터 유도되는 대상체의 유리한 효과를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 질환의 진행 또는 악화를 예방하기 위한, 베타 클로토-매개 질환, 그의 하나 또는 그 이상의 증상의 "관리"에 있어서, 하나 또는 그 이상의 치료법 (예를 들어, 본 발명에서 제공되는 항체와 같은 예방 또는 치료제)이 대상체에 투여된다.
용어 "약" 또는 "대략"은 소정의 값 또는 범위의 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 9% 이내, 8% 이내, 7% 이내, 6% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내 또는 1% 또는 그 이하 이내를 의미한다.
"투여한다" 또는 "투여"는, 예를 들어 점막, 피내, 정맥내, 근육내 전달 및/또는, 본 발명에 개시되거나 또는 당 업계에 공지된 기타 임의의 물리적 전달 방법에 의해, 체외에 존재하는 바와 같은 물질 (예를 들어, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체)을 환자에 주입하거나 또는 다른 방식에 의해, 물리적으로 전달하는 행동을 지칭한다. 질환, 장애 또는 병증, 그의 증상의 치료시, 물질의 투여는 전형적으로, 질환, 장애 또는 병증 또는 그의 증상의 개시 후, 이루어진다. 질환, 장애 또는 병증, 또는 그의 증상의 예방시, 물질의 투여는 전형적으로, 질환, 장애 또는 병증 또는 그의 증상의 개시 전에, 이루어진다.
폴리펩티드의 맥락에서, 본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "유사체"는, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편 또는 항-베타 클로토 항체와 유사하거나 또는 동일한 기능을 가지나, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편 또는 항-베타 클로토 항체의 아미노산 서열과 유사하거나 또는 동일한 아미노산 서열을 반드시 포함하는 것은 아니거나, 또는 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편 또는 항-베타 클로토 항체의 구조와 유사하거나 또는 동일한 구조를 가지는 폴리펩티드를 지칭한다. 유사한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드는, 하기의 것 중 적어도 하나를 만족시키는 폴리펩티드를 지칭한다: (a) 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토 폴리펩티드 (예를 들어, 서열번호:297), 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 또는 항-베타 클로토 항체의 아미노산 서열과 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드; (b) 엄격한 조건하에, 적어도 5 아미노산 잔기, 적어도 10 아미노산 잔기, 적어도 15 아미노산 잔기, 적어도 20 아미노산 잔기, 적어도 25 아미노산 잔기, 적어도 40 아미노산 잔기, 적어도 50 아미노산 잔기, 적어도 60 아미노 잔기, 적어도 70 아미노산 잔기, 적어도 80 아미노산 잔기, 적어도 90 아미노산 잔기, 적어도 100 아미노산 잔기, 적어도 125 아미노산 잔기, 또는 적어도 150 아미노산 잔기의, 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 또는 항-베타 클로토 항체 (또는 그의 VH 또는 VL 영역)를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화되는 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드 (예를 들어, 문헌 [Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY] 참조); 및 (c) 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 또는 항-베타 클로토 항체 (또는 그의 VH 또는 VL 영역)를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드. 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 또는 항-베타 클로토 항체와 유사한 구조를 가지는 폴리펩티드는, 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토의 단편, 베타 클로토 항체와 유사한 2차, 3차 또는 4차 구조를 가지는 폴리펩티드를 지칭한다. 폴리펩티드의 구조는, 이로 제한되는 것은 아니나, X 선 결정학, 핵자기 공명, 결정학적 전자 현미경을 포함하여, 당업자에 공지된 방법에 의해 측정할 수 있다.
용어 "조성물"은, 임의로 소정량의 특정 요소 (예를 들어, 본 발명에서 제공되는 항체)를 포함하는 생성물뿐만 아니라, 임의로 소정량의 특정 요소의 조합으로부터, 직접 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포괄하는 것으로 의도된다.
폴리펩티드의 맥락에서, 본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "유도체"는 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드 또는, 아미노산 잔기의 치환, 결실 또는 첨가의 도입에 의해 변경된 베타 클로토 폴리펩티드에 결합하는 항체를 지칭한다. 본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "유도체"는 또한, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편 또는, 예를 들어, 임의의 유형의 상기 폴리펩티드 분자의 공유 접합 (covalent attachment)에 의해, 화학적으로 변형된 베타 클로토 폴리펩티드에 결합하는 항체를 지칭한다. 예를 들어, 제한 방식은 아니나, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 베타 클로토 항체는, 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 인지의 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백질 분해성 절단 (proteolytic cleavage), 세포 리간드 또는 다른 단백질과의 결합 등에 의해, 화학적으로 변형될 수 있다. 유도체는, 부착 분자의 유형 또는 위치에서, 자연 발생 또는 개시 펩티드 또는 폴리펩티드와 다른 방식으로 변형된다. 유도체는, 펩티드 또는 폴리펩티드에 자연 상 존재하는 하나 또는 그 이상의 화학적 그룹의 결실을 추가로 포함한다. 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 베타 클로토 항체의 유도체는, 이로 제한되는 것은 아니나, 튜니카마이신 (tunicamycin)의 대사 합성, 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 제형화를 포함하여, 당업자에 공지된 기술을 이용한 화학적 변형에 의해, 화학적으로 변형될 수 있다. 또한, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 베타 클로토 항체는 하나 또는 그 이상의 비전형적 아미노산을 포함할 수 있다. 폴리펩티드 유도체는 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드의 단편, 베타 클로토 항체와 유사하거나 또는 동일한 기능을 가진다.
조성물 및 동종의 것의 제조 방법
베타 클로토 (예를 들어, 인간 및/또는 시아노 베타 클로토)에 결합하는 항체와 같은 결합 단백질이 제공된다. 본 발명의 항체는, 예를 들어 베타 클로토의 발현과 관련된 질환, 장애 또는 병증의 진단 또는 치료에 유용하다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 항체는, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환, 대사 증후군과 같은 질환, 장애 또는 병증 또는, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과를 모방하거나 또는 증대시키는 것이 바람직한 임의의 광범위한 질환, 장애 또는 병증의 진단 또는 치료에 유용하다.
본 발명에서는, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 펩티드, 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체 베타 클로토의 세포 외 도메인 (ECD)에 결합한다. 또한, 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체를 베타 클로토 폴리펩티드와의 결합으로부터 경쟁적으로 차단하는 항체가 제공된다. 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체는 진단제, 검출제 또는 치료제와 접합되거나 또는 재조합적으로 융합될 수 있다. 베타 클로토 항체를 포함하는 조성물이 추가로 제공된다.
또한, 본 발명에서는, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 펩티드 또는 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항-베타 클로토 항체의 면역글로불린 중쇄, 경쇄, VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 인코딩하는 단리된 핵산 분자가 제공된다. 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 펩티드 또는 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항-베타 클로토 항체를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포 및 벡터가 추가로 제공된다. 또한, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 펩티드 또는 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항체의 제조 방법이 제공된다.
항-베타 클로토 항체의 사용 방법이 제공된다. 상기 방법은, 대상체에서, 질환, 장애 또는 병증의 하나 또는 그 이상의 증상을 치료, 예방 또는 완화하는 단계를 포함하여, 질환, 장애 또는 병증을 치료, 예방 또는 완화하는 단계를 포함한다. 질환, 장애 또는 병증의 비제한 예에는, 당뇨병 (제1형 및 제2형), 임신성 당뇨병, 고혈당증, 인슐린 저항성, 이상 글루코오스 대사, "당뇨병 전증"(공복 혈당 장애 (IFG) 또는 내당능 장애 (IGT))를 비롯한 글루코오스 이용 장애 및 그와 관련된 후유증 또는, 예를 들어 췌장 β 세포 파괴와 같은 조직 병리학적 변화를 비롯한 고혈당 병증과 관련되거나 또는 그로부터 초래되는 기타 생리 장애가 포함된다. 예를 들어, 치료가 필요한 질환, 장애 또는 병증을 가진 대상체는 약 100 mg/dl을 초과하는 공복 혈당 (FPG) 수준을 가질 수 있다. 기타 고혈당 관련 장애에는 신장 손상 (예를 들어, 세관 손상 또는 신장 병증), 간 변성, 눈 손상 (예를 들어, 당뇨병성 망막증 또는 백내장), 및 당뇨병성 발 질환이 포함된다. 기타 질환, 장애 또는 병증에는 이상지질혈증 및 그의 후유증, 예를 들어 죽상 동맥 경화증, 관상 동맥 질환, 뇌 혈관 질환 등 또는 대사 증후군과 관련될 수 있는 기타 질환, 장애 또는 병증, 예를 들어 비만 및 체질량 증가 (이로 제한되는 것은 아니나, 비 알코올성 지방간 질환 (NAFLD), 비 알코올성 지방 간염 (NASH), 및 다낭성 난소 증후군 (PCOS)와 같은 그의 중복 이환 조건 (co-morbid condition) 포함) 또는 혈전증, 응고 항진 및 혈전전 상태 (hypercoagulable and prothrombotic state) (동맥과 정맥), 고혈압, 심혈관 질환, 뇌졸중 및 심장 마비가 포함된다. 이들 질환, 장애 또는 병증에는 죽상 동맥 경화증, 만성 염증성 장 질환 (예를 들어, 크론병 및 궤양성 대장염), 천식, 홍반성 루푸스, 관절염 또는 기타 류마티스성 염증 질환이 포함된다. 기타 질환, 장애 또는 병증에는, 예를 들어 지방 육종, 고형 종양 및 신생물을 비롯한 지방 세포 종양, 지방종성 암종 (lipomatous carcinomas)이 포함된다. 기타 질환, 장애 또는 병증에는 신경 퇴행성 질환 및/또는 중추 및 말초 신경계의 탈수초성 장애 및/또는 신경 염증성 과정을 비롯한 신경 질환 및/또는 알츠하이머병, 다발성 경화증, 파킨슨병, 진행성 다초점 백색질뇌증 및 길랑-바레 증후군을 비롯한 말초 신경 병증이 포함된다. 기타 질환, 장애 또는 병증에는 홍반-편평 피부병 (erythemato-squamous dermatoses)을 비롯한 외피 및 피부 질환 (dermatological) 및/또는 상처 치유 과정 장애가 포함된다. 기타 질환, 장애 또는 병증에는 X 증후군, 골관절염, 및 급성 호흡 곤란 증후군이 포함된다. 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 대상체의 질환, 장애 또는 병증에 대한 인용시 사용되는 경우, 용어 "고혈당" 또는 "고혈당증"은, 대상체의 혈액에 존재하는 글루코오스의 일시적 또는 만성의 비정상적인 높은 수준을 지칭한다. 상기 질환, 장애 또는 병증은, 대상체가, 정상적인 대상체에서는 전형적으로 발견되지 않는 글루코오스 불내성 또는 글루코오스의 상승 상태를 나타내도록 하는, 글루코오스 대사 또는 흡수의 지연에 의해 초래될 수 있다 (예를 들어, 당뇨병이 발생할 위험이 있는 글루코오스-불내성 당뇨병 전증 대상체 또는 당뇨병 대상체의 경우). 예를 들어, 정상 혈당의 공복 혈당 (FPG) 수준은 약 100 mg/dl 이하일 수 있으며, 글루코오스 대사가 손상된 경우, 약 100 내지 126 mg/dl일 수 있고, 당뇨병의 경우, 약 126 mg/dl을 초과할 수 있다. (예를 들어, 특정 장애 (들)를 가질 소질이 있는 대상체의 경우) 예방 방법은, (예를 들어, 유사한 연령, 성별, 인종 등의 적절한 부합 대상체에 대한 정상 체질량 지수, 또는 "BMI"를 초과하는) 바람직하지 않은 체질량 또는 비만의 개시의 지연, 지체 또는 진행의 억제 또는 치료 (예를 들어, 호전)와 관련된다. 비만 또는 바람직하지 않은 체질량 (비만의 중복 이환 조건, 예를 들어 폐쇄성 수면 무호흡증, 관절염, 암 (예를 들어, 유방, 자궁 내막, 및 대장), 담석 또는 고혈당증 포함)의 치료 방법은, 비만 또는 바람직하지 않은 체질량을 치료하기에 효과적인 양으로, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체와 같은 결합 단백질을 접촉시키거나 또는 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 대상체는 25 초과, 예를 들어 25-30, 30-35, 35-40 또는 40 초과의 체질량 지수를 가질 수 있다. (예를 들어, 특정 장애 (들)를 가질 소질이 있는 대상체의 경우) 예방 방법은,
단독으로 또는 조합하여, 모두, 예를 들어 플라크 형성, 혈관 협착 또는 폐색 및 고혈압, 뇌졸중, 및 관상 동맥 질환의 위험 증가를 초래할 수 있는, 혈청/혈장 LDL, VLDL, 트리글리세리드 또는 콜레스테롤의 바람직하지 않은 수준 또는 비정상적인 상승의 개시의 지연, 지체 또는 진행의 억제 또는 치료와 관련된다. 이러한 질환, 장애 또는 병증은, 예를 들어 유전적 소인 또는 음식으로 인한 것일 수 있다.
항-베타 클로토 항체
일 실시형태에서, 본 발명은, 본 발명에서, 치료제로서의 용도가 발견될 수 있는 항-베타 클로토 항체를 제공한다. 예시적 항체에는 폴리클로날, 모노클로날, 인간화, 인간, 이중 특이적 이종 접합체 (heteroconjugate) 항체뿐만 아니라, 친화성 또는 다른 특성이 개선된 그의 변이체가 포함된다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서는 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 펩티드 또는 베타 클로토 에피토프를 비롯한 베타 클로토에 결합하는 항체가 제공된다. 일부 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는, 베타 클로토 폴리펩티드, 베타 클로토 폴리펩티드 단편, 베타 클로토 펩티드 또는 베타 클로토 에피토프를 비롯한 베타 클로토에 결합하는 인간화 항체 (예를 들어, 인간 불변 영역 포함)이다.
특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는, 표 1-10에 도시된 아미노산 서열과 같은 것으로서, 본 발명에서 개시된 바와 같은 쥣과 동물의 모노클로날 항체 중 임의의 하나의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 단리된 항체 또는 그의 기능성 단편은, 표 1-10에 제시된 바와 같은 것으로서, (a) 5H23으로 명명되는 항체; (b) 1C17로 명명되는 항체; (c) 1D19로 명명되는 항체; (d) 2L12로 명명되는 항체; (e) 3L3으로 명명되는 항체; (f) 3N20으로 명명되는 항체; (g) 4P5로 명명되는 항체; (h) 5C23으로 명명되는 항체; (i) 5F7로 명명되는 항체; (j) 1G19로 명명되는 항체의 1, 2, 및/또는 3개의 중쇄 CDR 및/또는 1, 2 및/또는 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
5H23으로 명명되는 항체는 서열번호:25의 VH 서열 및 서열번호:26의 VL 서열을 포함한다.
1C17로 명명되는 항체는 서열번호:51의 VH 서열 및 서열번호:52의 VL 서열을 포함한다.
1D19로 명명되는 항체는 서열번호:77의 VH 서열 및 서열번호:78의 VL 서열을 포함한다.
2L12로 명명되는 항체는 서열번호:103의 VH 서열 및 서열번호:104의 VL 서열을 포함한다.
3L3으로 명명되는 항체는 서열번호:129의 VH 서열 및 서열번호:130의 VL 서열을 포함한다.
3N20으로 명명되는 항체는 서열번호:155의 VH 서열 및 서열번호:156의 VL 서열을 포함한다.
4P5로 명명되는 항체는 서열번호:181의 VH 서열 및 서열번호:182의 VL 서열을 포함한다.
5C23으로 명명되는 항체는 서열번호:207의 VH 서열 및 서열번호:208의 VL 서열을 포함한다.
5F7로 명명되는 항체는 서열번호:233의 VH 서열 및 서열번호:234의 VL 서열을 포함한다.
IG19로 명명되는 항체는 서열번호:259의 VH 서열 및 서열번호:260의 VL 서열을 포함한다.
항체 5H23 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTSYDIN
(서열
번호:1)		 GYTFTSYD
(서열
번호:7)		 SYDIN
(서열
번호:12)		 GYTFTSY
(서열
번호:13)		 TSYDIN
(서열
번호:18)		 GYTFTSYDIN
(서열
번호:1)
VH CDR2 WIYPGDGSTKYNEKFKG
(서열
번호:2)		 IYPGDGST
(서열
번호:8)		 WIYPGDGSTKYNEKFKG
(서열
번호:2)		 PGDG
(서열
번호:14)		 WIGWIYPGDGSTK
(서열
번호:19)		 WIYPGDGSTK
(서열
번호:24)
VH CDR3 SDYYGSRSFAY
(서열
번호:3)		 ARSDYYGSRSFAY
(서열
번호:9)		 SDYYGSRSFAY
(서열
번호:3)		 DYYGSRSFA
(서열
번호:15)		 ARSDYYGSRSFA
(서열
번호:20)		 SDYYGSRSFAY
(서열
번호:3)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYVYMH
(서열
번호:4)		 KSVSTSGYVY
(서열
번호:10)		 RASKSVSTSGYVYMH
(서열
번호:4)		 SKSVSTSGYVY
(서열
번호:16)		 STSGYVYMHWN
(서열
번호:21)		 RASKSVSTSGYVYMH
(서열
번호:4)
VL CDR2 LASYLES
(서열
번호:5)		 LAS
(서열
번호:11)		 LASYLES
(서열
번호:5)		 LAS
(서열
번호:11)		 LLIYLASYLE
(서열
번호:22)		 LASYLES
(서열
번호:5)
VL CDR3 QHSRDLTFP
(서열
번호:6)		 QHSRDLTFP
(서열
번호:6)		 QHSRDLTFP
(서열
번호:6)		 SRDLTF
(서열
번호:17)		 QHSRDLTF
(서열
번호:23)		 QHSRDLTFP
(서열
번호:6)
VH 서열:
QVQLQQSGPELVKPGALVKISCKASGYTFTSYDINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGDGSTKYNE
KFKGKATLTADKSSRTAYMQLSSLTSENSAVYFCARSDYYGSRSFAYWGQGTLVTVSA
(서열번호: 25)
VL 서열:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYVYMHWNQQKPGQPPKLLIYLASYLESGVPA
RFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAAIYYCQHSRDLTFPFGGGTKLEIK (서열번호:26)
항체 1C17 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYSITSGYYWN
(서열
번호:27)		 GYSITSGYY
(서열
번호:33)		 SGYYWN
(서열
번호:38)		 GYSITSGY
(서열
번호:39)		 TSGYYWN
(서열
번호:44)		 GYSITSGYYWN
(서열
번호:27)
VH CDR2 YINYDGNSNYTPSLKN
(서열
번호:28)		 INYDGNS
(서열
번호:34)		 YINYDGNSNYTPSLKN
(서열
번호:28)		 YDG
(서열
번호:40)		 WMGYINYDGNSN
(서열
번호:45)		 YINYDGNSN
(서열
번호:50)
VH CDR3 KGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:29)		 ARKGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:35)		 KGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:29)		 GAYYSNYDSFD
(서열
번호:41)		 ARKGAYYSNYDSFD
(서열
번호:46)		 KGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:29)
VL CDR 서열 VL CDR1 KASQDINSYLS
(서열
번호:30)		 QDINSY
(서열
번호:36)		 KASQDINSYLS
(서열
번호:30)		 SQDINSY
(서열
번호:42)		 NSYLSWV
(서열
번호:47)		 KASQDINSYLS
(서열
번호:30)
VL CDR2 RANRLVD
(서열
번호:31)		 RAN
(서열
번호:37)		 RANRLVD
(서열
번호:31)		 RAN
(서열
번호:37)		 TLIYRANRLV
(서열
번호:48)		 RANRLVD
(서열
번호:31)
VL CDR3 LQYDEFPFT
(서열
번호:32)		 LQYDEFPFT
(서열
번호:32)		 LQYDEFPFT
(서열
번호:32)		 YDEFPF
(서열
번호:43)		 LQYDEFPF
(서열
번호:49)		 LQYDEFPFT
(서열
번호:32)
VH 서열:
QVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYINY
DGNSNYTPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLNSVTPEDTATYYCARKGAYYSNYDSFD
VWGTGTTVTVSS (서열번호:51)
VL 서열:
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINSYLSWVQQKPGKSPKTLIYRANRLVD
GVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPFTFGSGTKLEIK (서열번호:52)
항체 1D19 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTRYDIN
(서열
번호:53)		 GYTFTRYD
(서열
번호:59)		 RYDIN
(서열
번호:64)		 GYTFTRY
(서열
번호:65)		 TRYDIN
(서열
번호:70)		 GYTFTRYDIN
(서열
번호:53)
VH CDR2 WIYPGDSSTKFNENFKD
(서열
번호:54)		 IYPGDSST
(서열
번호:60)		 WIYPGDSSTKFNENFKD
(서열
번호:54)		 PGDS
(서열
번호:66)		 WIGWIYPGDSSTK
(서열
번호:71)		 WIYPGDSSTK
(서열
번호:76)
VH CDR3 SDYYGSRSFTY
(서열
번호:55)		 ARSDYYGSRSFTY
(서열
번호:61)		 SDYYGSRSFTY
(서열
번호:55)		 DYYGSRSFT
(서열
번호:67)		 ARSDYYGSRSFT
(서열
번호:72)		 SDYYGSRSFTY
(서열
번호:55)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:56)		 KSVSTSGYSY
(서열
번호:62)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:56)		 SKSVSTSGYSY
(서열
번호:68)		 STSGYSYMHWY
(서열
번호:73)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:56)
VL CDR2 LASNLES
(서열
번호:57)		 LAS
(서열
번호:63)		 LASNLES
(서열
번호:57)		 LAS
(서열
번호:63)		 LLIYLASNLE
(서열
번호:74)		 LASNLES
(서열
번호:57)
VL CDR3 QHSRELPYT
(서열
번호:58)		 QHSRELPYT
(서열
번호:58)		 QHSRELPYT
(서열
번호:58)		 SRELPY
(서열
번호:69)		 QHSRELPY
(서열
번호:75)		 QHSRELPYT
(서열
번호:58)
VH 서열: QVQPQESGPELVKPGALVKISCKASGYTFTRYDINWMKQRPGQGLEWIGWIYPGDSSTKFNE
NFKDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSENSTVYFCARSDYYGSRSFTYWGQGTLVTVSA (서열번호:77)
VL 서열:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPA
RFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPYTFGGGTKLEIK (서열번호:78)
항체 2L12 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTRYDIN
(서열
번호:79)		 GYTFTRYD
(서열
번호:85)		 RYDIN
(서열
번호:90)		 GYTFTRY
(서열
번호:91)		 TRYDIN
(서열
번호:96)		 GYTFTRYDIN
(서열
번호:79)
VH CDR2 WIYPGDDSTKYNEKFKG
(서열
번호:80)		 IYPGDDST
(서열
번호:86)		 WIYPGDDSTKYNEKFKG
(서열
번호:80)		 PGDD
(서열
번호:92)		 WIGWIYPGDDSTK
(서열
번호:97)		 WIYPGDDSTK
(서열
번호:102)
VH CDR3 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:81)		 ARSDYYGSRSFVY
(서열
번호:87)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:81)		 DYYGSRSFV
(서열
번호:93)		 ARSDYYGSRSFV
(서열
번호:98)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:81)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYSYLH
(서열
번호:82)		 KSVSTSGYSY
(서열
번호:88)		 RASKSVSTSGYSYLH
(서열
번호:82)		 SKSVSTSGYSY
(서열
번호:94)		 STSGYSYLHWY
(서열
번호:99)		 RASKSVSTSGYSYLH
(서열
번호:82)
VL CDR2 LASNLES
(서열
번호:83)		 LAS
(서열
번호:89)		 LASNLES
(서열
번호:83)		 LAS
(서열
번호:89)		 LLIYLASNLE
(서열
번호:100)		 LASNLES
(서열
번호:83)
VL CDR3 QHSGELPYT
(서열
번호:84)		 QHSGELPYT
(서열
번호:84)		 QHSGELPYT
(서열
번호:84)		 SGELPY
(서열
번호:95)		 QHSGELPY
(서열
번호:101)		 QHSGELPYT
(서열
번호:84)
VH 서열:
QVQLQQSGPELVKPGALVKISCKASGYTFTRYDINWVKKRPGQGLEWIGWIYPGDDSTKYNEKFK
GKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSENSAVYFCARSDYYGSRSFVYWGQGTLVTVSA (서열번호:103)
VL 서열:
DIVLTQSPASLPVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYLHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARF
SGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSGELPYTFGGGTKLEIK (서열번호:104)
항체 3L3 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTSYDIN
(서열
번호:105)		 GYTFTSYD
(서열
번호:111)		 SYDIN
(서열
번호:116)		 GYTFTSY
(서열
번호:117)		 TSYDIN
(서열
번호:122)		 GYTFTSYDIN
(서열
번호:105)
VH CDR2 WIYPGDGSPKYDEKFKG
(서열
번호:106)		 IYPGDGSP
(서열
번호:112)		 WIYPGDGSPKYDEKFKG
(서열
번호:106)		 PGDG
(서열
번호:118)		 WIGWIYPGDGSPK
(서열
번호:123)		 WIYPGDGSPK
(서열
번호:128)
VH CDR3 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:107)		 ARSDYYGSRSFVY
(서열
번호:113)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:107)		 DYYGSRSFV
(서열
번호:119)		 ARSDYYGSRSFV
(서열
번호:124)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:107)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYSYVH
(서열
번호:108)		 KSVSTSGYSY
(서열
번호:114)		 RASKSVSTSGYSYVH
(서열
번호:108)		 SKSVSTSGYSY
(서열
번호:120)		 STSGYSYVHWY
(서열
번호:125)		 RASKSVSTSGYSYVH
(서열
번호:108)
VL CDR2 LASNLES
(서열
번호:109)		 LAS
(서열
번호:115)		 LASNLES
(서열
번호:109)		 LAS
(서열
번호:115)		 LLIYLASNLE
(서열
번호:126)		 LASNLES
(서열
번호:109)
VL CDR3 QHSGELPYT
(서열
번호:110)		 QHSGELPYT
(서열
번호:110)		 QHSGELPYT
(서열
번호:110)		 SGELPY
(서열
번호:121)		 QHSGELPY
(서열
번호:127)		 QHSGELPYT
(서열
번호:110)
VH 서열:
QVQPQESGPELVKPGTLVKISCKASGYTFTSYDINWVKQRPGQGLEWIGWIYPG
DGSPKYDEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSENSAVYFCARSDYYGSRSFV
YWGQGTLVTVSA (서열번호:129)
VL 서열:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYVHWYQQKPGQPPKLLIYLAS
NLESGVPARFSGRGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSGELPYTFGGGTKLEIK
(서열번호:130)
항체 3N20 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYIFTNYGIS
(서열
번호:131)		 GYIFTNYG
(서열
번호:137)		 NYGIS
(서열
번호:142)		 GYIFTNY
(서열
번호:143)		 TNYGIS
(서열
번호:148)		 GYIFTNYGIS
(서열
번호:131)
VH CDR2 EIYPRSGNTYYNEKFKG
(서열
번호:132)		 IYPRSGNT
(서열
번호:138)		 EIYPRSGNTYYNEKFKG
(서열
번호:132)		 PRSG
(서열
번호:144)		 WIGEIYPRSGNTY
(서열
번호:149)		 EIYPRSGNTY
(서열
번호:154)
VH CDR3 HWDGVLDYFDY
(서열
번호:133)		 ARHWDGVLDYFDY
(서열
번호:139)		 HWDGVLDYFDY
(서열
번호:133)		 WDGVLDYFD
(서열
번호:145)		 ARHWDGVLDYFD
(서열
번호:150)		 HWDGVLDYFDY
(서열
번호:133)
VL CDR 서열 VL CDR1 KSSQSLLNSGNQKNYLA
(서열
번호:134)		 QSLLNSGNQKNY
(서열
번호:140)		 KSSQSLLNSGNQKNYLA
(서열
번호:134)		 SQSLLNSGNQKNY
(서열
번호:146)		 LNSGNQKNYLAWY
(서열
번호:151)		 KSSQSLLNSGNQKNYLA
(서열
번호:134)
VL CDR2 GASTRES
(서열
번호:135)		 GAS
(서열
번호:141)		 GASTRES
(서열
번호:135)		 GAS
(서열
번호:141)		 LLIYGASTRE
(서열
번호:152)		 GASTRES
(서열
번호:135)
VL CDR3 LNDHSYPFT
(서열
번호:136)		 LNDHSYPFT
(서열
번호:136)		 LNDHSYPFT
(서열
번호:136)		 DHSYPF
(서열
번호:147)		 LNDHSYPF
(서열
번호:153)		 LNDHSYPFT
(서열
번호:136)
VH 서열:
QVQLQESGAELARPGASVKLSCKVSGYIFTNYGISWVKQRTGQGLEWIGEIYPRS
GNTYYNEKFKGKATLTADMSSSTAYMDLRSLTSEDSAVYFCARHWDGVLDYFDY
WGQGTSLTVSS (서열번호:155)
VL 서열:
DIVMTQSPSSLSVSAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLI
YGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCLNDHSYPFTFGAGTK
LELK (서열번호:156)
항체 4P5 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTRYDIN
(서열
번호:157)		 GYTFTRYD
(서열
번호:163)		 RYDIN
(서열
번호:168)		 GYTFTRY
(서열
번호:169)		 TRYDIN
(서열
번호:174)		 GYTFTRYDIN
(서열
번호:157)
VH CDR2 WIYPGDDSTKYNEKFKG
(서열
번호:158)		 IYPGDDST
(서열
번호:164)		 WIYPGDDSTKYNEKFKG
(서열
번호:158)		 PGDD
(서열
번호:170)		 WIGWIYPGDDSTK
(서열
번호:175)		 WIYPGDDSTK
(서열
번호:180)
VH CDR3 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:159)		 ARSDYYGSRSFVY
(서열
번호:165)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:159)		 DYYGSRSFV
(서열
번호:171)		 ARSDYYGSRSFV
(서열
번호:176)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:159)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:160)		 KSVSTSGYSY
(서열
번호:166)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:160)		 SKSVSTSGYSY
(서열
번호:172)		 STSGYSYMHWY
(서열
번호:177)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:160)
VL CDR2 LASNLES
(서열
번호:161)		 LAS
(서열
번호:167)		 LASNLES
(서열
번호:161)		 LAS
(서열
번호:167)		 LLIYLASNLE
(서열
번호:178)		 LASNLES
(서열
번호:161)
VL CDR3 HHSGELPYT
(서열
번호:162)		 HHSGELPYT
(서열
번호:162)		 HHSGELPYT
(서열
번호:162)		 SGELPY
(서열
번호:173)		 HHSGELPY
(서열
번호:179)		 HHSGELPYT
(서열
번호:162)
VH 서열: QVQLQQSGPELVKPGALVKISCKASGYTFTRYDINWVKKRPGQGLEWIGWIYPGDDS
TKYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSENSAVYFCARSDYYGSRSFVYWGQG
TLVTVSA (서열번호:181)
VL 서열:
DILLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNL
ESGVPARFSGRGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCHHSGELPYTFGGGTKLEIK (서열번호:182)
항체 5C23 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTRYDIN
(서열
번호:183)		 GYTFTRYD
(서열
번호:189)		 RYDIN
(서열
번호:194)		 GYTFTRY
(서열
번호:195)		 TRYDIN
(서열
번호:200)		 GYTFTRYDIN
(서열
번호:183)
VH CDR2 WIYPGDGSTKYNEKFEG
(서열
번호:184)		 IYPGDGST
(서열
번호:190)		 WIYPGDGSTKYNEKFEG
(서열
번호:184)		 PGDG
(서열
번호:196)		 WIGWIYPGDGSTK
(서열
번호:201)		 WIYPGDGSTK
(서열
번호:206)
VH CDR3 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:185)		 ARSDYYGSRSFVY
(서열
번호:191)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:185)		 DYYGSRSFV
(서열
번호:197)		 ARSDYYGSRSFV
(서열
번호:202)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:185)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:186)		 KSVSTSGYSY
(서열
번호:192)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:186)		 SKSVSTSGYSY
(서열
번호:198)		 STSGYSYMHWY
(서열
번호:203)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:186)
VL CDR2 LASNLES
(서열
번호:187)		 LAS
(서열
번호:193)		 LASNLES
(서열
번호:187)		 LAS
(서열
번호:193)		 LLIYLASNLE
(서열
번호:204)		 LASNLES
(서열
번호:187)
VL CDR3 QHSRELPYT
(서열
번호:188)		 QHSRELPYT
(서열
번호:188)		 QHSRELPYT
(서열
번호:188)		 SRELPY
(서열
번호:199)		 QHSRELPY
(서열
번호:205)		 QHSRELPYT
(서열
번호:188)
VH 서열:
QVQPQESGPELVKPGALVKISCKASGYTFTRYDINWVKKRPGQGLEWIGWIYPG
DGSTKYNEKFEGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSENSAVYFCARSDYYGSRSFVY
WGQGTLVTVSA (서열번호:207)
VL 서열:
DIVLTQSPDSLTVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLAS
NLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPYTFGGGTKLEIK (서열번호:208)
항체 5F7 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYTFTRYDIN
(서열
번호:209)		 GYTFTRYD
(서열
번호:215)		 RYDIN
(서열
번호:220)		 GYTFTRY
(서열
번호:221)		 TRYDIN
(서열
번호:226)		 GYTFTRYDIN
(서열
번호:209)
VH CDR2 WIYPGDISTKYNEKFKG
(서열
번호:210)		 IYPGDIST
(서열
번호:216)		 WIYPGDISTKYNEKFKG
(서열
번호:210)		 PGDI
(서열
번호:222)		 WIGWIYPGDISTK
(서열
번호:227)		 WIYPGDISTK
(서열
번호:232)
VH CDR3 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:211)		 ARSDYYGSRSFVY
(서열
번호:217)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:211)		 DYYGSRSFV
(서열
번호:223)		 ARSDYYGSRSFV
(서열
번호:228)		 SDYYGSRSFVY
(서열
번호:211)
VL CDR 서열 VL CDR1 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:212)		 KSVSTSGYSY
(서열
번호:218)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:212)		 SKSVSTSGYSY
(서열
번호:224)		 STSGYSYMHWY
(서열
번호:229)		 RASKSVSTSGYSYMH
(서열
번호:212)
VL CDR2 LASNLES
(서열
번호:213)		 LAS
(서열
번호:219)		 LASNLES
(서열
번호:213)		 LAS
(서열
번호:219)		 LLIYLASNLE
(서열
번호:230)		 LASNLES
(서열
번호:213)
VL CDR3 QHSRELPYT
(서열
번호:214)		 QHSRELPYT
(서열
번호:214)		 QHSRELPYT
(서열
번호:214)		 SRELPY
(서열
번호:225)		 QHSRELPY
(서열
번호:231)		 QHSRELPYT
(서열
번호:214)
VH 서열:
QVQPQESGPELVKPGALVKISCKASGYTFTRYDINWVKQRPGQGLEWIGWIYPGDISTKYN
EKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLTSENSAVYFCARSDYYGSRSFVYWGQGTLVTVSA (서열번호:233)
VL 서열:
DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASKSVSTSGYSYMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESG
VPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHSRELPYTFGGGTKVEIK (서열번호:234)
항체 1G19 CDR 서열
예 IMGT Kabat Chothia Contact AbM
VH CDR 서열 VH CDR1 GYSITSGYYWN
(서열
번호:235)		 GYSITSGYY
(서열
번호:241)		 SGYYWN
(서열
번호:246)		 GYSITSGY
(서열
번호:247)		 TSGYYWN
(서열
번호:252)		 GYSITSGYYWN
(서열
번호:235)
VH CDR2 YINYGGSNNYNPSLKN
(서열
번호:236)		 INYGGSN
(서열
번호:242)		 YINYGGSNNYNPSLKN
(서열
번호:236)		 YGG
(서열
번호:248)		 WMGYINYGGSNN
(서열
번호:253)		 YINYGGSNN
(서열
번호:258)
VH CDR3 RGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:237)		 ARRGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:243)		 RGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:237)		 GAYYSNYDSFD
(서열
번호:249)		 ARRGAYYSNYDSFD
(서열
번호:254)		 RGAYYSNYDSFDV
(서열
번호:237)
VL CDR 서열 VL CDR1 KASQDINSYLS
(서열
번호:238)		 QDINSY
(서열
번호:244)		 KASQDINSYLS
(서열
번호:238)		 SQDINSY
(서열
번호:250)		 NSYLSWF
(서열
번호:255)		 KASQDINSYLS
(서열
번호:238)
VL CDR2 RANRLVD
(서열
번호:239)		 RAN
(서열
번호:245)		 RANRLVD
(서열
번호:239)		 RAN
(서열
번호:245)		 TLIYRANRLV
(서열
번호:256)		 RANRLVD
(서열
번호:239)
VL CDR3 LQYDEFPYT
(서열
번호:240)		 LQYDEFPYT
(서열
번호:240)		 LQYDEFPYT
(서열
번호:240)		 YDEFPY
(서열
번호:251)		 LQYDEFPY
(서열
번호:257)		 LQYDEFPYT
(서열
번호:240)
VH 서열:
QVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCSVTGYSITSGYYWNWIRQFPGNKLEWMGYINY
GGSNNYNPSLKNRISITRDTSKNQFFLKLTSVTTEDTATYYCARRGAYYSNYDSFD
VWGTGTTVTVSS (서열번호:259)
VL 서열:
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVD
GVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEEMGIYYCLQYDEFPYTFGGGTKLEIK (서열번호:260)
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 VH 영역 또는 VH 도메인을 포함한다. 기타 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 VL 영역 또는 VL 사슬을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 (i) VH 도메인 또는 VH 영역; 및/또는 (ii) VL 도메인 또는 VL 영역의 조합을 가진다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 표 1-10에서 확인되는 6개의 CDR, 예를 들면, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 6개 이하의 CDR을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는, 표 1-10에서 확인되는 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는, 본 발명에서 개시된 바와 같은 (a) 5H23으로 명명되는 항체; (b) 1C17로 명명되는 항체; (c) 1D19로 명명되는 항체; (d) 2L12로 명명되는 항체; (e) 3L3으로 명명되는 항체; (f) 3N20으로 명명되는 항체; (g) 4P5로 명명되는 항체; (h) 5C23으로 명명되는 항체; (i) 5F7로 명명되는 항체; (j) 1G19로 명명되는 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 쥣과 동물의 모노클로날 항체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 따라서, 일부 실시형태에서, 상기 항체는 표 1-10에서 확인되는 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3 중 임의의 것의 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 표 1-10에 열거된 하나 또는 그 이상의 (예를 들어, 1, 2 또는 3개의) VH CDR을 포함한다. 기타 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 표 1-10에 열거된 하나 또는 그 이상의 (예를 들어, 1, 2 또는 3개의) VL CDR을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 표 1-10에 열거된 하나 또는 그 이상의 (예를 들어, 1, 2 또는 3개의) VH CDR 및 표 1-10에 열거된 하나 또는 그 이상의 VL CDR을 포함한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 상기 항체는 서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 표 1-10에 도시된 아미노산 서열 중 임의의 하나에 도시된 바와 같은 것으로서, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3으로부터 독립적으로 선택되는 VH CDR1 및/또는 VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 항체는 서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상기 항체는 표 1-10에 도시된 아미노산 서열 중 임의의 하나에 도시된 바와 같은 것으로서, VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3으로부터 독립적으로 선택되는 VL CDR1 및/또는 VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, (1) (i) 서열번호:1, 27, 53, 79, 105, 131, 157, 183, 209, 및 또는 235, (ii) 서열번호:7, 33, 59, 85, 111, 137, 163, 189, 215 또는 241, (iii) 서열번호:12, 38, 64, 90, 116, 142, 168, 194, 220 또는 246, (iv) 서열번호:13, 39, 65, 91, 117, 143, 169, 195, 221 또는 247, 및 (v) 서열번호:18, 44, 70, 96, 122, 148, 174, 200, 226 또는 252로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1; (2) (i) 서열번호:2, 28, 54, 80, 106, 132, 158, 184, 210, 및 또는 236, (ii) 서열번호:8, 34, 60, 86, 112, 138, 164, 190, 216 또는 242, (iii) 서열번호:14, 40, 66, 92, 118, 144, 170, 196, 222 또는 248, (iv) 서열번호:19, 45, 71, 97, 123, 149, 175, 201, 227 또는 253, 및 (v) 서열번호:24, 50, 76, 102, 128, 154, 180, 206, 232 또는 258로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및 (3) (i) 서열번호: 3, 29, 55, 81, 107, 133, 159, 185, 211, 및 또는 237, (ii) 서열번호:9, 35, 61, 87, 113, 139, 165, 191, 217 또는 243, (iii) 서열번호:15, 41, 67, 93, 119, 145, 171, 197, 223 또는 249, 및 (iv) 서열번호:20, 46, 72, 98, 124, 150, 176, 202, 228 또는 254로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역; 및/또는 (1) (i) 서열번호:4, 30, 56, 82, 108, 134, 160, 186, 212, 및 또는 238, (ii) 서열번호:10, 36, 52, 88, 114, 140, 166, 192, 218 또는 244, (iii) 서열번호:16, 42, 68, 94, 120, 146, 172, 198, 224 또는 250, 및 (iv) 서열번호:21, 47, 73, 99, 125, 151, 177, 203, 229 또는 255로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1; (2) (i) 서열번호:5, 31, 57, 83, 109, 135, 161, 187, 213, 및 또는 239, (ii) 서열번호:11, 37, 63, 89, 115, 141, 167, 193, 219 또는 245, 및 (iii) 서열번호:22, 48, 74, 100, 126, 152, 178, 204, 230 또는 256로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및 (3) (i) 서열번호:6, 32, 58, 84, 110, 136, 162, 188, 214, 및 또는 240, (ii) 서열번호:17, 43, 69, 95, 121, 147, 173, 199, 225 또는 251, 및 (iii) 서열번호:23, 49, 75, 101, 127, 153, 179, 205, 231 또는 257로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, (1) (i) 서열번호:1, 27, 53, 79, 105, 131, 157, 183, 209, 및 또는 235, (ii) 서열번호:7, 33, 59, 85, 111, 137, 163, 189, 215 또는 241, (iii) 서열번호:12, 38, 64, 90, 116, 142, 168, 194, 220 또는 246, (iv) 서열번호:13, 39, 65, 91, 117, 143, 169, 195, 221 또는 247, 및 (v) 서열번호:18, 44, 70, 96, 122, 148, 174, 200, 226 또는 252로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1; (2) (i) 서열번호:2, 28, 54, 80, 106, 132, 158, 184, 210, 및 또는 236, (ii) 서열번호:8, 34, 60, 86, 112, 138, 164, 190, 216 또는 242, (iii) 서열번호:14, 40, 66, 92, 118, 144, 170, 196, 222 또는 248, (iv) 서열번호:19, 45, 71, 97, 123, 149, 175, 201, 227 또는 253, 및 (v) 서열번호:24, 50, 76, 102, 128, 154, 180, 206, 232 또는 258로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및 (3) (i) 서열번호: 3, 29, 55, 81, 107, 133, 159, 185, 211, 및 또는 237, (ii) 서열번호:9, 35, 61, 87, 113, 139, 165, 191, 217 또는 243, (iii) 서열번호:15, 41, 67, 93, 119, 145, 171, 197, 223 또는 249, 및 (iv) 서열번호:20, 46, 72, 98, 124, 150, 176, 202, 228 또는 254로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, (1) (i) 서열번호:4, 30, 56, 82, 108, 134, 160, 186, 212, 및 또는 238, (ii) 서열번호:10, 36, 52, 88, 114, 140, 166, 192, 218 또는 244, (iii) 서열번호:16, 42, 68, 94, 120, 146, 172, 198, 224 또는 250, 및 (iv) 서열번호:21, 47, 73, 99, 125, 151, 177, 203, 229 또는 255로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1; (2) (i) 서열번호:5, 31, 57, 83, 109, 135, 161, 187, 213, 및 또는 239, (ii) 서열번호:11, 37, 63, 89, 115, 141, 167, 193, 219 또는 245, 및 (iii) 서열번호:22, 48, 74, 100, 126, 152, 178, 204, 230 또는 256로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및 (3) (i) 서열번호:6, 32, 58, 84, 110, 136, 162, 188, 214, 및 또는 240, (ii) 서열번호:17, 43, 69, 95, 121, 147, 173, 199, 225 또는 251, 및 (iii) 서열번호:23, 49, 75, 101, 127, 153, 179, 205, 231 또는 257로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함한다.
또한, 본 발명에서는 표 1-10에 열거된 하나 또는 그 이상의 VH CDR 및 하나 또는 그 이상의 (예를 들어, 1, 2 또는 3개의) VL CDR을 포함하는 항체가 제공된다. 특히, 본 발명에서는 VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252) 및 VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255); VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252); VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VH CDR1 (서열번호 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252) VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257) 및 VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258); VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258); 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255); VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258) 및 VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255); VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR1 (서열번호: : 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257);a VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호: 1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR1 (서열번호: 4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호: 3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254) 및 VL CDR2 (서열번호: 5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호: 2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR3 (서열번호: 6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255); VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256), 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR1 (서열번호:1, 7, 12, 13, 18, 27, 33, 38, 39, 44, 53, 59, 64, 65, 70, 79, 85, 90, 91, 96, 105, 111, 116, 117, 122, 131, 137, 142, 143, 148, 157, 163, 168, 169, 174, 183, 189, 194, 195, 200, 209, 215, 220, 221, 226, 235, 241, 246, 247, 및 252), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256), 및 VL CDR3 (서열번호:6, 17, 23, 32, 43, 49, 58, 69, 75, 84, 95, 101, 110, 121, 127, 136, 147, 153, 162, 173, 179, 188, 199, 205, 214, 225, 231, 240, 251, 및 257); VH CDR2 (서열번호:2, 8, 14, 19, 24, 28, 34, 40, 45, 50, 54, 60, 66, 71, 76, 80, 86, 92, 97, 102, 106, 112, 118, 123, 128, 132, 138, 144, 149, 154, 158, 164, 170, 175, 180, 184, 190, 196, 201, 206, 210, 216, 222, 227, 232, 236, 242, 248, 253, 및 258), VH CDR3 (서열번호:3, 9, 15, 20, 29, 35, 41, 46, 55, 61, 67, 72, 81, 87, 93, 98, 107, 113, 119, 124, 133, 139, 145, 150, 159, 165, 171, 176, 185, 191, 197, 202, 211, 217, 223, 228, 237, 243, 249, 및 254), VL CDR1 (서열번호:4, 10, 16, 21, 30, 36, 42, 47, 56, 62, 68, 73, 82, 88, 94, 99, 108, 114, 120, 125, 134, 140, 146, 151, 160, 166, 172, 177, 186, 192, 198, 203, 212, 218, 224, 229, 238, 244, 250, 및 255), VL CDR2 (서열번호:5, 11, 22, 31, 37, 48, 57, 63, 74, 83, 89, 100, 109, 115, 126, 135, 141, 152, 161, 167, 178, 187, 193, 204, 213, 219, 230, 239, 245, 및 256) 또는 표 1-10에 열거된 VH CDR 및 VL CDR의 임의의 조합을 포함하는 항체가 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 발명에서 개시되는 CDR은 관련 항체의 그룹으로부터 유래하는 공통 서열을 포함한다 (예를 들어, 표 1-10 참조). 본 명에서에서 개시되는 바와 같이, "공통 서열"은, 다수의 서열 중 공통되는 보존 아미노산 및, 소정의 아미노산 서열 내에서 변화하는 가변 아미노산을 가지는 아미노산 서열을 지칭한다. 제공되는 CDR 공통 서열은, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및/또는 CDRL3에 해당하는 CDR을 포함한다. 항-베타 클로토 항체의 CDR의 공통 서열이 도 2에서 제시된다.
특정 실시형태에서, 본 발명에서 개시되는 그의 단편의 항체는, (1) 서열번호: 278, 279, 280 및 378로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR1; (2) 서열번호: 281, 282, 및 283으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 VH FR2; 3) 서열번호: 284, 285, 286, 287 및 379-381로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열번호: 288의 아미노산을 가지는 VH FR4를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는, 서열번호: 278, 279, 280 및 378로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR1을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는 서열번호: 281, 282, 및 283로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR2를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는 서열번호: 284, 285, 286, 287 및 379-381로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR3을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는 서열번호: 288의 아미노산 서열을 가지는 VH FR4를 포함하는 VH 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명에서 개시되는 그의 단편의 항체는 (1) 서열번호: 289, 290 및 382-384로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR1; (2) 서열번호: 291, 292 및 385-392로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR2; (3) 서열번호: 293, 294, 295 및 393-404로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열번호: 296 및 405-407의 아미노산을 가지는 VL FR4를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는, 서열번호: 289, 290 및 382-384로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR1을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는, 서열번호: 291, 292 및 385-392로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR2를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는, 서열번호: 293, 294, 295 및 393-404로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 인간화 항체는, 서열번호: 296 및 405-407의 아미노산 서열을 가지는 VL FR4를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명에서 개시되는 그의 단편의 항체는, VH 영역이 (1) 서열번호: 278, 279, 280 및 378로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR1; (2) 서열번호: 281, 282, 및 283으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR2; (3) 서열번호: 284, 285, 286, 287 및 379-381로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열번호: 288의 아미노산 서열을 가지는 VH FR4를 추가로 포함하고; VL 영역이 (1) 서열번호: 289, 290 및 382-384로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR1; (2) 서열번호: 291, 292 및 385-392로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR2; (3) 서열번호: 293, 294, 295 및 393-404로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열번호: 296 및 405-407의 아미노산을 가지는 VL FR4를 추가로 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다.
또한, 본 발명에서는, 표 19에 열거된 하나 또는 그 이상의 (예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개의) VH FR 및 하나 또는 그 이상의 VL FR을 포함하는 항체가 제공된다. 특히, 본 발명에서는, VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378) 및 VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404);a VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407);a VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); 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VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); 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VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR1 (서열번호:278, 279, 280 및 378), VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR4 (서열번호:288), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); VH FR2 (서열번호:281, 282, 및 283), VH FR3 (서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381), VH FR4 (서열번호:288), VL FR1 (서열번호:289, 290 및 382-384), VL FR2 (서열번호:291, 292 및 385-392), VL FR3 (서열번호:293, 294, 295 및 393-404) 및 VL FR4 (서열번호:296 및 405-407); 또는 표 19에 열거된 VH FR (서열번호: 278, 279, 280, 378, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 379-381 및 288) 및 VL FR (서열번호: 289, 290, 382-384, 291, 292, 385-392, 293, 294, 295, 393-404, 296, 405-407)의 임의의 조합을 포함하는 항체가 제공된다.
또 다른 측면에서, (i) 베타 클로토 또는 (ii) FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, 및 FGFR4 중 하나 및 베타 클로토를 포함하는 복합체와의 결합에 있어서, 예시 항체 또는 기능성 단편 중 하나와 경쟁하는 항체가 제공된다. 이러한 항체는 또한, 본 발명의 예시 항체 중 하나와 동일한 에피토프 또는 중첩 에피토프에 결합할 수 있다. 예시 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 그와 경쟁하는 항체 및 단편은 유사한 기능적 특성을 나타낼 것으로 예상된다. 예시 항원 결합 단백질 및 단편에는, 표 1-10의 것들을 포함하여, 본 발명에서 제공되는 VH 및 VL 영역 및 CDR을 가지는 것들이 포함된다. 따라서, 특정 예와 같이, 제공되는 항체에는, (a) 표 1-10에 열거된 항체에 대해 열거된 CDR 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 전부; (b) 항체 5H23 (표 1)에 대한 것과 같은 것으로서, 표 1-10에 열거된 항체에 대해 열거된 VH 및 VL 영역으로부터 선택되는 VH 및 VL 또는 (c) 표 1-10에 열거된 항체에 대해 명시된 바와 같은 VH 및 VL을 포함하는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 항체와 경쟁하는 것들이 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명에서는, 인간 베타 클로토 또는 시아노 베타 클로토의 에피토프를 포함하는 영역에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들면, 일부 실시형태에서, 본 발명에서는, 서열번호:297의 아미노산 잔기 509 내지 1044를 포함하는 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인에 결합하는 항체가 제공된다. 또 다른 예로서, 일부 실시형태에서, 본 발명에서는 서열번호:297의 아미노산 잔기 517 내지 967을 포함하는 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인의 당류 가수분해 효소 1 영역에 결합하는 항체가 제공된다. 또 다른 예로서, 일부 실시형태에서, 본 발명에서는, 서열번호:297의 아미노산 잔기 657 내지 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 영역에 결합하는 항체가 제공된다. 또 다른 예로서, 일부 실시형태에서, 본 발명에서는, 서열번호:299의 아미노산 잔기 657 내지 703을 포함하는 시아노 베타 클로토의 영역에 결합하는 항체가 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 발명에서는, 인간 베타 클로토의 특정 에피토프에 결합하는 항체가 제공된다. 예를 들면, 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 인간 베타 클로토 (서열번호: 297)의 아미노산 잔기 657, 701 및/또는 703 중 적어도 하나를 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 701을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657 및 701을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657 및 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 701 및 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도, 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657, 701 및 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합한다. 일부 실시형태에서, 상기에서 제공된 이러한 항체는, 인간 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도할 수 있다. 또한, 일부 실시형태에서, 상기 항체는 인간화, 인간 또는 키메라 항체이다.
1. 폴리클로날 항체
본 발명의 항체에는 폴리클로날 항체가 포함될 수 있다. 폴리클로날 항체의 제조 방법은 당업자에 공지되어 있다. 폴리클로날 항체는, 예를 들면, 면역제 및, 바람직한 경우, 어주번트의 1회 또는 그 이상의 주입에 의해, 포유동물에서, 형성될 수 있다. 전형적으로, 면역제 및/또는 어주번트는, 다중 피하 또는 복강 내 주입에 의해, 포유동물에 주입될 것이다. 상기 면역제는 베타 클로토 폴리펩티드 또는 그의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 면역화되는 포유동물에서 면역원성인 것으로 알려진 단백질에 상기 면역제를 접합시키거나, 또는 상기 단백질 및 하나 또는 그 이상의 어주번트를 이용하여, 상기 포유동물을 면역화하는 것이 유용할 수 있다. 이러한 면역원성 단백질의 예에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 키홀 림펫 헤모시아닌 (keyhole limpet hemocyanin), 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 및 대두 트립신 억제제가 포함된다. 사용될 수 있는 어주번트의 예에는 Ribi, CpG, Poly 1C, 프로인트 완전 어주번트 및 MPL-TDM 어주번트 (모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로오스 디코리노미콜레이트 (synthetic trehalose dicorynomycolate))가 포함된다. 면역 프로토콜은 과도한 실험 없이 당업자에 의해 선택될 수 있다. 그후, 상기 포유동물은 사육될 수 있으며, 혈청을, 베타 클로토 항체 역가에 대해, 분석한다. 바람직한 경우, 상기 포유동물은, 항체 역가가 증가하거나 또는 안정한 상태에 도달할 때까지, 부스팅 (boosting)시킬 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 융합을 위한 면역화된 동물 및, 후술하는 바와 같은 하이브리도마로부터의 모노클로날 항체의 제조물로부터, 림프구를 얻을 수 있다.
2. 모노클로날 항체
본 발명의 항체는 대안적으로 모노클로날 항체일 수 있다. 모노클로날 항체는, 문헌 [Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 처음 개시된 하이브리도마 방법을 이용하여, 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법에 의해 제조할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 제 4,816,567호 참조).
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 햄스터와 같은 기타 적절한 숙주 동물을, 면역화에 이용되는 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 또는 생성할 수 있는 림프구의 도출을 위해, 전술된 바와 같이 면역화한다. 대안적으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화할 수 있다. 면역화 후, 림프구를 단리한 다음, 하이브리도마 세포의 형성을 위해, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 융합제를 사용하여 골수종 세포주와 융합시킨다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)).
이에 따라 제조된 하이브리도마 세포를 시딩 (seeding)한 후, 바람직하게는, 비융합 부모 골수종 세포 (또한, 융합 파트너로 지칭됨)의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 또는 그 이상의 물질을 포함하는 적절한 배양 배지에서 성장시킨다. 예를 들면, 부모 골수종 세포가 효소 히포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결핍된 경우, 하이브리도마의 선택적 배양 배지는 전형적으로, HPRT 결핍 세포의 성장을 억제하는 물질인 히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)을 포함한다.
*바람직한 융합 파트너인 골수종 세포는, 효율적으로 융합되고, 선택된 항체 생성 세포에 의한, 안정한 높은 수준의 항체 생성을 지원하며, 비융합 부모 세포에 대해 선택하는 선택 배지에 민감한 것들이다. 바람직한 골수종 세포주에는 쥣과 동물 골수종 주, 예를 들어 SP-2 및 유도체, 예를 들면, 미국, 버지니아, 매너서스의 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션으로부터 구할 수 있는 X63-Ag8-653 및 미국, 켈리포니아, 산디아고의 살크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터 (Salk Institute Cell Distribution Center)에서 구할 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것들이 있다. 인간 모노클로날 항체의 생성을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종 골수종 세포주 (heteromyeloma cell line)가 또한 문헌 [Kozbor, J., Immunol., 133:3001 (1984); and Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]에 개시된 바 있다.
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지를, 항원에 대해 유도된 모노클로날 항체의 생성에 대해 분석한다. 하이브리도마 세포에 의해 생성된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역 침전법 또는 시험관 내 결합 분석, 예를 들어 방사성 면역 측정법 (RIA), 또는 효소-연결면역흡수 측정검사 (enzyme-linked immunosorbent assay) (ELISA)에 의해 측정한다. 모노클로날 항체의 결합 친화성은, 예를 들면 문헌 [Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]에 개시된 스캐챠드 분석 (Scatchard analysis)에 의해 측정할 수 있다.
바람직한 특이성, 친화성 및/또는 활성의 항체를 생성하는 하이브리도마 세포의 확인시, 클론을 제한 희석 절차 (limiting dilution procedure)에 의해 서브 클로닝하고, 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)). 이러한 목적을 위한 적절한 배양 배지에는, 예를 들면, D-MEM 또는 RPMI-1640이 포함된다. 또한, 하이브리도마 세포를, 예를 들면, 마우스로의 세포의 복강 내 주입에 의해, 동물에서 복수 종양으로서 생체 내에서 성장시킬 수 있다.
서브 클론에 의해 분비된 모노클로날 항체를, 예를 들면, 친화성 크로마토그래피 (예를 들어, 단백질 A 또는 단백질 G 세파로스 사용) 또는 이온-교환 크로마토그래피, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 등과 같은 통상적인 항체 정제 과정에 의해 배양 배지, 복수 액 또는 혈청으로부터 적절하게 분리한다.
모노클로날 항체를 인코딩하는 DNA를 용이하게 단리한 후, 통상의 과정 (예를 들어, 쥣과 동물 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)을 사용하여, 서열 분석한다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 역할 한다. 단리 후, DNA는, 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체의 합성을 수득하기 위해, 그와 달리, 항체 단백질을 생성하지 않는 E. coli 세포, 시미안 COS 세포 (simian COS cell), 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포와 같은 숙주 세포 내로 형질감염되는 발현 벡터에 배치할 수 있다. 항체를 인코딩하는 DNA의 박테리아에서 재조합 발현에 대한 검토 논문에는 문헌 [Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) 및 Pluckthun, Immunol. Revs. 130:151-188 (1992)]이 포함된다.
일부 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프와 결합하는 항체는, 엄격한 조건 (예를 들어, 약 45℃에서, 6X 염화나트륨/시트르산 나트륨 (SSC)에서, 필터-결합 DNA와의 혼성화 후, 약 50-65℃에서, 0.2xSSC/0.1% SDS에서의 1회 또는 그 이상의 세척), 매우 엄격한 조건 (예를 들어, 약 45℃에서, 6xSSC에서, 필터-결합 핵산과의 혼성화 후, 약 68℃에서, 0.1xSSC/0.2% SDS에서의 1회 또는 그 이상의 세척), 또는 당업자에 공지된 다른 엄격한 혼성화 조건하에서, (1) 본 발명에서 개시된 바와 같은 VH 및/또는 VL 도메인 중 임의의 하나를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 보체와 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 VH 도메인의 아미노산 서열 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3] 참조).
일부 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프와 결합하는 항체는, 엄격한 조건 (예를 들어, 약 45℃에서, 6X SSC에서, 필터-결합 DNA와의 혼성화 후, 약 50-65℃에서, 0.2X SSC/0.1% SDS에서의 1회 또는 그 이상의 세척), 매우 엄격한 조건 (예를 들어, 약 45℃에서, 6X SSC에서, 필터-결합 핵산과의 혼성화 후, 약 68℃에서, 0.1X SSC/0.2% SDS에서의 1회 또는 그 이상의 세척), 또는 당업자에 공지된 다른 엄격한 혼성화 조건하에서, 표 1-10에 도시된 VH CDR 및/또는 VL CDR 중 임의의 하나를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 보체와 혼성화하는 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 VH CDR의 아미노산 서열 및/또는 VL CDR의 아미노산 서열을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Ausubel, F.M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3] 참조).
추가의 실시형태에서, 모노클로날 항체 또는 항체 단편은, 예를 들면 문헌 [Antibody Phage Display: Methods and Protocols, P.M. O'Brien and R. Aitken, eds, Humana Press, Totawa N.J., 2002]에 개시된 기술을 이용하여 생성된 항체 파아지 라이브러리로부터 단리할 수 있다. 원칙적으로, 파지 외피 단백질에 융합된 항체 가변 영역 (FV)의 다양한 단편을 디스플레이하는 파지를 포함하는 파지 라이브러리의 스크리닝에 의해, 합성 항체 클론을 선택한다. 이러한 파지 라이브러리를 원하는 항원에 대해 스크리닝한다. 원하는 항원에 결합할 수 있는 Fv 단편을 발현하는 클론을 상기 항원에 흡착시켜서, 상기 라이브러리에서, 비결합 클론으로부터 분리한다. 그 후, 결합 클론을 항원으로부터 용출하고, 항원 흡착/용출의 추가 사이클에 의해 추가로 농축 (enrichment) 될 수 있다.
예를 들면, 문헌 [Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 개시된 바와 같이, 가변 도메인은, VH 및 VL이 짧은 가요성 펩티드 (flexible peptide)를 통해 공유 결합된 단일 사슬 Fv (scFv) 단편으로서 또는, 각각 불변 도메인과 융합되고, 비공유적으로 상호작용하는 Fab 단편으로서, 파지에서, 기능적으로 디스플레이될 수 있다.
VH 및 VL 유전자 레퍼토리는 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 개별적으로 클로닝될 수 있으며, 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합될 수 있으며, 그 후, 문헌 [Winter et al., supra.]에 개시된 바와 같이, 항원-결합 클론에 대해 조사할 수 있다. 면역화된 공급원의 라이브러리는 하이브리도마 제작의 필요 없이, 면역원에 대한 고 친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 문헌 [Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 개시된 바와 같이, 상기 나이브 레퍼토리 (naive repertoire)는, 면역화 과정 없이, 광범위한 비자가 항원 (non-self antigen) 및 또한 자가 항원에 대한 인간 항체의 단일 공급원의 제공을 위해, 클로닝될 수 있다. 마지막으로, 예를 들면 문헌 [Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 개시된 바와 같이, 나이브 레퍼토리는 또한, 시험관 내 재배열 수립을 위해, 초가변 CDR3 영역을 인코딩하는 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 이용하여, 줄기 세포의 재배열되지 않은 V-유전자 절편의 클로닝에 의해 합성적으로 제조될 수 있다.
라이브러리의 스크리닝은 당 업계에 공지된 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 베타 클로토, (예를 들어, 베타 클로토 폴리펩티드, 단편 또는 에피토프)는, 흡착 플레이트 벽의 코팅에 이용되거나, 흡착 플레이트에 부착된 숙주 세포에서 발현되거나, 또는 세포 분류에 이용되거나, 또는 스트렙타비딘-코팅 비드를 이용한 포획을 위해, 비오틴에 접합되거나, 또는 기타 임의의 디스플레이 라이브러리 표시 방법에 이용될 수 있다. 저속 해리 동력학 (예를 들어, 적절한 결합 친화성)에 의한 항체 선택은, 장시간의 세척 및, 문헌 [Bass et al., Proteins, 8: 309-314 (1990) 및 WO 92/09690]에 개시된 바와 같은 1가 파지 디스플레이 및 문헌 [Marks et al., Biotechnol., 10: 779-783 (1992)]에 개시된 바와 같은 낮은 코팅 밀도 항원에 의해, 촉진될 수 있다.
항-베타 클로토 항체는, 관심 대상 파지 클론에 대한 선택을 위한 적절한 항원 스크리닝 과정의 설계 후, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에 개시된 관심 대상의 적절한 불변 영역 (예를 들어, Fc) 서열의 파지 클론의 VH 및 VL 서열의 다양한 CDR 서열 또는 VH 및/또는 VL 서열 (예를 들어, Fv 서열)을 이용한 전장의 항-베타 클로토 항체의 제작에 의해, 수득될 수 있다.
3. 항체 단편
본 발명은 베타 클로토에 결합하는 항체 및 항체 단편을 제공한다. 특정 상황에서, 전체 항체 보다는 항체 단편을 이용하는 것이 유리하다. 더욱 작은 크기의 단편이 신속한 제거를 가능하게 하며, 세포, 조직 또는 기관에 대한 접근성의 향상을 초래할 수 있다. 특정 항체 단편에 대한 검토를 위해, 문헌 [Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134]을 참조한다.
항체 단편의 생성을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질 분해 소화를 통해 유도하였다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); 및 Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 이들 단편은 현재, 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생성할 수 있다. Fab, Fv 및 ScFv 항체 단편은 모두 E. coli 또는 효모 세포에서 발현 및 분비될 수 있으며, 따라서, 다량의 이러한 단편의 용이한 생성이 가능하다. 항체 단편은 상기에서 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리할 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 E. coli로부터 직접 회수할 수 있으며, 화학적 커플링에 의해, F(ab')2 단편을 생성할 수 있다 (Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양으로부터 직접 단리할 수 있다. 샐비지 수용체 (salvage receptor) 결합 에피토프 잔기를 포함하는 것으로서, 생체 내 반감기가 증가된 Fab and F(ab')2 단편이, 예를 들면 미국 특허 제 5,869,046호에 개시되었다. 항체 단편의 생성을 위한 기타 기술이 당업자에 분명할 것이다. 특정 실시형태에서, 항체는 단일 사슬 Fv 단편 (scFv)이다 (예를 들어, WO 93/16185; 미국 특허 제 5,571,894호; 및 제 5,587,458호). Fv 및 scFv는 불변 영역이 결여된 무손상 조합 자리 (intact combining site)이다; 따라서, 이들은 생체 내 이용 과정 동안, 비특이적 결합의 감소로 인해, 적합할 수 있다. scFv 융합 단백질은, scFv의 아미노 말단 또는 카르복시 말단에서, 효과기 단백질의 융합이 유발되도록, 제작될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, supra] 참조). 항체 단편은 또한, 예를 들면 상기에서 인용된 참조에 개시된 바와 같이, "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체는 단일 특이적이거나 또는 다중 특이적, 예를 들어 이중 특이적일 수 있다.
더욱 작은 항체-유래 결합 구조는 또한 이른바 단일 가변 도메인 항체 (SdAb)로 불리는 개별 가변 도메인 (V 도메인)이다. 특정 형태의 유기체인 카멜리드 (camelid) 및 연골 어류는 그의 면역계의 일부로서, Fc 균등 도메인 구조에 장착된 고 친화성 단일 V-형 도메인을 보유한다. (Woolven et al., Immunogenetics 50: 98-101, 1999; Streltsov et al., Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-12449, 2004). V-형 도메인 (이른바, 카멜리드의 VhH 및 상어의 V-NAR)은 전형적으로, 표적 항원의 공동의 관통을 가능하게 하는 것으로서, 긴 표면 루프를 나타낸다. 이들은 또한, 소수성 표면 패치의 생성에 의해, 단리된 VH 도메인을 안정화한다.
이들 VhH 및 V-NAR 도메인은 sdAb의 엔지니어링에 이용되어 왔다. 인간 V 도메인 변이체는 파지 라이브러리로부터의 선택 및, 안정한 높은 결합 VL- 및 VH-유래 도메인을 초래하는 기타 접근법을 이용하여, 설계되었다.
본 발명에서 제공되는 바와 같은 베타 클로토에 결합하는 항체에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 합성 항체, 모노클로날 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 다중 특이적 항체 (이중 특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 카멜화 항체, 키메라 항체, 인트라바디, 항-유전자형 (항-Id) 항체 및 상기의 것 중 임의의 것의 기능성 단편 (예를 들어, 베타 클로토 결합 단편)이 포함된다. 기능성 단편 (예를 들어, 베타 클로토에 결합하는 단편)의 비제한 예에는 -사슬 Fvs (scFv) (예를 들어, 단일 특이성, 이중 특이성 등 포함), Fab 단편, F(ab') 단편, F(ab)2 단편, F(ab')2 단편, 이황화-결합 Fvs (sdFv), Fd 단편, Fv 단편, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 미니바디가 포함된다.
본 발명에서 제공되는 항체에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 면역글로불린 분자 및, 면역글로불린 분자의 면역적 활성 부분, 예를 들면, 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항원 결합 자리를 포함하는 분자가 포함된다. 본 발명에서 제공되는 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 종류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 종류일 수 있다.
항체의 변이체 및 유도체는, 베타 클로토 에피토프에 결합하는 능력을 유지하는 항체 기능성 단편을 포함한다. 예시적 기능성 단편에는 Fab 단편 (예를 들어, 항원-결합 도메인을 포함하고, 이황화 결합에 의해 연결된 중쇄의 일부 및 경쇄를 포함하는 항체 단편); Fab' (예를 들어, 힌지 영역을 통해, 중쇄의 추가 부분 및 Fab를 포함하는 단일 항-결합 도메인을 포함하는 항체 단편); F(ab')2 (예를 들어, 중쇄의 힌지 영역의 사슬내 이황화 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 분자; Fab' 분자는 동일하거나 또는 다른 에피토프를 지향할 수 있다); 이중 특이적 Fab (예를 들어, 각각 다른 에피토프를 지향할 수 있는 2개의 항원 결합 도메인을 가지는 Fab 분자); 또한, sFv로 알려진, 가변 영역을 포함하는 단일 사슬 Fab 사슬 (예를 들어, 10-25 아미노산 사슬에 의해 함께 결합된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변 항원-결합 결정 영역); 이황화-결합 Fv, 또는 dsFv (예를 들어, 이황화 결합에 의해 함께 결합된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변 항원-결합 결정 영역); 카멜화 VH (예를 들어, VH 인터페이스의 동일한 아미노산이 자연 발생 카멜 항체의 중쇄에서 발견되는 것인 항체의 단일 중쇄의 가변 항원-결합 결정 영역); 이중 특이적 sFv (예를 들어, 각각이 다른 에피토프를 지향할 수 있는 2개의 항원-결합 도메인을 가지는 sFv 또는 dsFv 분자); 디아바디 (예를 들어, 제1 sFv의 VH 도메인이 제2 sFv의 VL 도메인과 조립되고, 제1 sFv의 VL 도메인이 제2 sFv의 VH 도메인과 조립되는 경우, 생성되는 이량체 sFv; 상기 디아바디의 2개의 항원-결합 영역은 동일하거나 또는 다른 에피토프를 지향할 수 있다); 및 트리아바디 (예를 들어, 디아바디와 유사한 방식으로 생성되나, 3개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성되는 3량체 sFv; 상기 3개의 항원 결합 도메인이 동일하거나 또는 다른 에피토프를 지향할 수 있다)가 포함된다. 항체의 유도체는 또한 항체 조합 자리 (antibody combining site)의 하나 또는 그 이상의 CDR 서열을 포함한다. 2개 또는 그 이상의 CDR 서열이 존재하는 경우, CDR 서열은 스캐폴드 상에서, 함께 결합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 항체는 단일-사슬 Fv ("scFv")를 포함한다. scFv는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편으로서, 여기서, 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 서열에 존재한다. scFv 폴리펩티드는, scFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성할 수 있도록 하는 것으로서, VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 연결자 (polypeptide linker)를 추가로 포함할 수 있다. scFv에 대한 검토를 위해, 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.
4. 인간화 항체
본 발명은 인간 및/또는 시아노 베타 클로토를 비롯한 베타 클로토와 결합하는 인간화 항체를 제공한다. 본 발명의 인간화 항체는 표 1-10에 제시된 바와 같이, 하나 또는 그 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 비인간 항체의 다양한 인간화 방법이 당 업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 인간화 항체는, 비인간 공급원으로부터 상기 항체로 도입되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 종종, 전형적으로 "유입 (import)" 가변 도메인으로부터 채택되는 것으로서, "유입" 잔기로 지칭된다. 인간화는, 예를 들면 윈터와 그 동료들의 방법 (Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536)에 따라, 인간 항체의 해당 서열의 초가변 영역 서열의 치환에 의해, 수행될 수 있다.
일부 경우, 인간화 항체는 CDR 이식에 의해 제작되며, 여기서, 부모 비인간 항체 (예를 들어, 설치류)의 6개의 상보성 결정 영역 (CDR)의 아미노산 서열이 인간 항체 프레임워크로 이식된다. 예를 들면, Padlan 등 (FASEB J. 9:133-139, 1995)은, CDR의 단지 1/3의 잔기만이 항원과 실제 접촉한다는 것을 측정하고, 이들을 "특이성 결정 잔기" 또는 "SDR"로 명명하였다. SDR 이식 기술에서, 단지 SDR 잔기만이 인간 항체 프레임워크로 이식된다 (예를 들어, 문헌 [Kashmiri et al., Methods 36: 25-34, 2005] 참조).
인간화 항체의 제조에 이용되는 인간 가변 도메인, 경쇄 및 중쇄 양자의 선택은 항원성의 감소에 중요할 수 있다. 예를 들면, 이른바 "최적합 (best-fit)" 방법에 따르면, 비인간 (예를 들어, 설치류) 항체의 가변 도메인의 서열을 인지의 인간 가변-도메인의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 설치류에 가장 근접한 인간 서열이 상기 인간화 항체의 인간 프레임워크로서 선택될 수 있다 (Sims et al. (1993) J. Immunol. 151:2296; Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901). 또 다른 방법에서는, 경쇄 또는 중쇄의 특정 하위 그룹의 인간 항체 전부의 공통 서열로부터 유래된 특정 프레임워크가 이용된다 (Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285; Presta et al. (1993) J. Immunol., 151:2623). 일부 경우, 프레임워크는, 가장 많은 인간 하위 종류인 VL6 하위 그룹 I (VL6I) 및 VH 하위 그룹 III (VHIII)의 공통 서열로부터 유래한다. 또 다른 방법에서, 인간 생식 계열 유전자가 프레임워크 영역의 공급원에서 이용된다.
CDR의 비교를 기반으로 하는 대안적 패러다임, 이른바 초인간화 (Superhumanization)에서, FR 상동성은 중요하지 않다. 상기 방법은, 기능성 인간 생식 계열 유전자 레퍼토리와 비인간 서열의 비교로 구성된다. 그 후, 쥣과 동물 서열과 동일하거나 또는 매우 근접한 정규 구조를 인코딩하는 이들 유전자를 선택한다. 다음, 비인간 항체와 정규 구조를 공유하는 유전자에서, CDR 중 최고 상동성을 가지는 것을 FR 공여체로서 선택한다. 마지막으로, 비인간 CDR을 이들 FR에 이식한다 (예를 들어, 문헌 [Tan et al., J. Immunol. 169: 1119-1125, 2002] 참조).
일반적으로, 상기 항원에 대한 그의 친화성의 보유 및 기타 유리한 생물학적 특성에 의해, 항체를 인간화하는 것이 또한 바람직하다. 이러한 목표를 달성하기 위해, 한가지 방법에 따라, 부모 서열 및 인간화 서열의 3차원 모델을 이용한 다양한 개념적 인간화 생성물 및 부모 서열의 분석 과정에 의해, 인간화 항체를 제조한다. 3차원 면역글로불린 모델은 일반적으로 구할 수 있으며, 당업자에게 익숙한 것이다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 입체 구조를 도시 및 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 구할 수 있다. 이들에는, 예를 들면, WAM (Whitelegg and Rees, 단백질 Eng. 13: 819-824, 2000), Modeller (Sali and Blundell, J. Mol. Biol. 234: 779-815, 1993), 및 Swiss PDB Viewer (Guex and Peitsch, Electrophoresis 18: 2714-2713, 1997)이 포함된다. 이들 디스플레이에 대한 검사는, 그의 항원과 결합하는 후보 면역글로불린의 능력에 영향을 주는 잔기의 분석과 같은, 후보 면역글로불린 서열의 기능에서, 상기 잔기의 예상 역할의 분석을 가능하게 한다. 이러한 방식으로, FR 잔기를 선택하고, 표적 항원 (들)에 대한 친화성의 증가와 같은 바람직한 항체 특성이 획득될 수 있도록, 수용체와 유입 서열에서 조합할 수 있다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 항원 결합에 영향을 주는 것에 매우 실질적으로 직접 관여한다.
항체 인간화의 또 다른 방법은, Human String Content (HSC)로 불리는 것으로서, 항체 인간성 (항체 humanness)에 대한 측정을 기반으로 한다. 이러한 방법은, 인간 생식 계열 유전자 레퍼토리와 마우스 서열을 비교한 후, 그 차이를 HSC로 기록한다. 그 후, 전체 동일성 측정치를 이용하기 보다는, HSC를 최대화함으로써, 표적 서열을 인간화하여, 다양한 다중 인간화 변이체를 생성시킨다. (Lazar et al., Mol. Immunol. 44: 1986-1998, 2007).
전술된 방법 이외에, 경험적 방법들이 인간화 항체의 생성 및 선택에 이용될 수 있다. 이들 방법에는, 인간화 변이체의 거대 라이브러리의 생성 및, 농축 기술 또는 고처리율 스크리닝 기술을 이용한 최고 클론의 선택을 기반으로 한 것들이 포함된다. 항체 변이체는 박테리아 콜로니 스크리닝에 의해서 뿐만 아니라, 파지, 리보솜 및 효모 디스플레이로부터 단리될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Hoogenboom, Nat. Biotechnol. 23: 1105-1116, 2005; Dufner et al., Trends Biotechnol. 24: 523-529, 2006; Feldhaus et al., Nat. Biotechnol. 21: 163-70, 2003; Schlapschy et al., Protein Eng. Des. Sel. 17: 847-60, 2004] 참조).
FR 라이브러리 접근법에 있어서, 잔기 변이체 모음을 FR 내의 특정 위치에 도입시킨 후, 이식 CDR을 최대 지원하는 FR 선택을 위해, 라이브러리를 선택한다. 치환되는 잔기는, Baca 등 (J. Biol. Chem. 272: 10678-10684, 1997])에 의해 확인된 표적 잔기의 더욱 제한된 세트 또는, CDR 구조에 잠재적으로 기여하는 것으로 확인된 "Vernier" 잔기 (예를 들어, 문헌 [Foote and Winter, J. Mol. Biol. 224: 487-499, 1992] 참조)의 일부 또는 그 전부를 포함할 수 있다.
FR 셔플링 (shuffling)에 있어서, 선택된 잔기 변이체의 조합 라이브러리를 생성하는 대신에, 전체 FR을 비인간 CDR과 조합한다 (예를 들어, 문헌 [Dall'Acqua et al., Methods 36: 43-60, 2005] 참조). 상기 라이브러리를, 첫 번째 VL 인간화, 그후 VH 인간화의 2 단계 선택 과정으로, 결합에 대해 스크리닝할 수 있다. 대안적으로, 1 단계 FR 셔플링 과정을 이용할 수 있다. 이러한 과정은, 생성된 항체가 발현의 향상, 친화성의 증가 및 열적 안정성을 비롯한 개선된 행화학적 물리화학적 특성을 나타내었으므로, 2 단계 스크리닝 보다 더욱 효과적인 것으로 나타났다 (예를 들어, 문헌 [Damschroder et al., Mol. Immunol. 44: 3049-60, 2007] 참조).
"휴머니어링 (humaneering)" 방법은 필수 최소 특이성 결정 인자 (essential minimum specificity determinant) (MSD)의 실험적 확인을 기반으로 하며, 인간 FR 라이브러리로의 비인간 단편의 순차적 대체 및 결합 평가를 기반으로 한다. 이것은 비인간 VH 및 VL 사슬의 CDR3 영역으로 시작하여, VH 및 VL 양자의 CDR1 및 CDR2를 비롯한 인간 FR로 비인간 항체의 다른 영역을 점진적으로 대체한다. 이러한 방법론은 전형적으로, 개별적 인간 V-절편 CDR을 가지는 여러 하위 종류의 항체의 에피토프 보유 및 확인을 초래한다. 휴머니어링은 인간 생식 계열 유전자 항체에 대해 91-96% 상동인 항체의 단리를 가능하게 한다. (예를 들어, 문헌 [Alfenito, Cambridge Healthtech Institute's Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit, 2007] 참조).
"휴먼 엔지니어링 (human engineering)" 방법에는, 그럼에도 불구하고, 본래의 비인간 항체의 바람직한 결합 특성을 유지하는 것으로서, 인간에서, 감소된 면역원성을 가지는 변형 항체의 생성을 위해, 항체의 아미노산 서열에 특이적 변화를 유발시킴으로써, 마우스 또는 키메라 항체 또는 항체 단편과 같은 비인간 항체 또는 항체 단편을 변경시키는 단계가 포함된다. 일반적으로, 상기 기술에는, 비인간 (예를 들어, 마우스)의 아미노산 잔기를 "저 위험", "중 위험" 또는 "고 위험" 잔기로 분류하는 단계가 포함된다. 이러한 분류는, 인간 잔기에 의해 치환되고/거나 치환이 생성된 항체의 접힘에 영향을 줄 위험에 대해, (예를 들어, 인간에서의 면역원성에 있어서) 특정 치환 유발의 예상 이익을 평가하는 전체 위험/보상 계산을 이용하여 수행한다. 특이적 또는 공통 인간 항체 서열의 해당 영역으로 비인간 항체의 가변 영역의 아미노산 서열을 정렬함으로써, 비인간 (예를 들어, 마우스) 항체 서열의 소정의 위치 (예를 들어, 저 위험 또는 중 위험)에서 치환되는 특정 인간 아미노산 잔기를 선택할 수 있다. 비인간 서열의 저 위험 또는 중 위험 위치의 아미노산 잔기는, 상기 정렬에 따라, 인간 항체 서열의 해당 잔기로, 치환될 수 있다. 휴먼 엔지니어링 단백질의 제조 기술은 문헌 [Studnicka et al., Protein Engineering, 7: 805-814 (1994), 미국 특허 제 5,766,886호, 제 5,770,196호, 제 5,821,123호, 및 제 5,869,619호, 및 PCT 출원 공보 WO 93/11794]에 더욱 상세히 개시되어 있다.
5. 인간 항체
인간 항-베타 클로토 항체는, 인지의 인간 불변 도메인 서열 (들)과 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열 (들)을 조합함으로써, 제작할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 인간 모노클로날 항-베타 클로토 항체는 하이브리도마 방법에 의해 제조할 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생성을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종 골수종 세포주가, 예를 들면 문헌 [Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); and Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)]에 개시되어 있다.
내인성 면역글로불린 생성의 부재시, 면역화에서, 인간 항체의 완전한 레퍼토리를 생성할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들어, 마우스)의 생성이 또한 가능하다. 인간 항체 레퍼토리를 발현하는 트랜스제닉 마우스는, 광범위한 잠재적 약제 표적에 대한 고친화성 인간 서열 모노클로날 항체의 생성을 위해, 이용되어 왔다 (예를 들어, 문헌 [Jakobovits, A., Curr. Opin. Biotechnol. 1995, 6(5):561-6; Bruggemann and Taussing, Curr. Opin. Biotechnol. 1997, 8(4):455-8; 미국 특허 제 6,075,181호 및 제 6,150,584호; 및 Lonberg et al., Nature Biotechnol. 23: 1117-1125, 2005] 참조).
대안적으로, 인간 항체는, 표적 항원에 대해 유도되는 항체를 생성하는 인간 B 림프구의 불멸화 (immortalization)를 통해, 제조할 수 있다 (예를 들어, 이러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나, 또는 시험관 내에서 면역화될 수 있다) (예를 들어, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibody and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147 (1):86-95 (1991); and US Pat No. 5,750,373] 참조).
유전자 셔플링은 또한, 비인간, 예를 들면 설치류 항체로부터 인간 항체를 유도하는데 사용될 수 있으며, 여기서, 상기 인간 항체는 개시 비인간 항체와 유사한 친화성 및 특이성을 가진다. 또한, "에피토프 임프린팅 (epitope imprinting)" 또는 "가이드 선택 (guided selection)"으로 불리는 이러한 방법에 따르면, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 파지 디스플레이 기술에 의해 수득되는 비인간 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역은 인간 V 도메인 유전자 레퍼토리에 의해 대체되어, 비인간 사슬/인간 사슬 scFv 또는 Fab 키메라 집단을 생성시킨다. 항원에 의한 선택은, 비인간 사슬/인간 사슬 키메라 scFv 또는 Fab의 단리를 초래하며, 여기서, 인간 사슬은, 1차 파지 디스플레이 클론 (primary phage display clone)의 해당 비인간 사슬의 제거시, 파괴되는 항원 결합 자리를 복구시킨다 (예를 들어, 에피토프는 인간 사슬 파트너의 선택을 가이드 (임프링팅) 한다). 나머지 비인간 사슬의 대체를 위한 상기 과정의 반복시, 인간 항체가 수득된다 (예를 들어, 문헌 [PCT WO 93/06213; 및 Osbourn et al., Methods., 36, 61-68, 2005] 참조). CDR 이식에 의한 비인간 항체의 종래의 인간화와 달리, 이러한 기술은, 비인간 기원의 FR 또는 CDR 잔기를 가지지 않는 완전한 인간 항체를 제공한다. 세포 표면 항원에 대한 마우스 항체의 인간화를 위한 가이드 선택의 예에는, 난소암 세포에 존재하는 엽산-결합 단백질 (예를 들어, 문헌 [Figini et al., Cancer Res., 58, 991-996, 1998] 참조) 및 간세포 암종에서 고도로 발현되는 CD147 (예를 들어, 문헌 [Bao et al., Cancer Biol. Ther., 4, 1374-1380, 2005] 참조)이 포함된다.
상기 가이드 선택 접근법의 잠재적 단점은, 불변의 다른 것을 보유하는 하나의 항체 사슬의 셔플링이 에피토프 드리프트 (epitope drift)를 초래할 수 있다는 것이다. 비인간 항체에 의해 인식되는 에피토프의 유지를 위해, CDR 유지가 적용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Klimka et al., Br. J. Cancer., 83, 252-260, 2000; VH CDR2 Beiboer et al., J. Mol. Biol., 296, 833-49, 2000] 참조). 이 방법에서, 비인간 VH CDR3은, 이 CDR이 항원 결합 자리의 중심일 수 있고, 항원 인식을 위한 항체의 가장 중요한 영역이 될 수 있으므로, 공통으로 유지된다. 그러나, 일부 예에서, 비인간 항체의 VH CDR3, VL CDR3 및 VL CFR1뿐만 아니라, VH CDR3 및 VL CDR3이 유지될 수 있다.
6. 이중 특이적 항체
이중 특이적 항체는, 적어도 2개의 다른 항원에 대해 결합 특이성을 가지는 모노클로날 항체이다. 특정 실시형태에서, 이중 특이적 항체는 인간 또는 인간화 항체이다. 특정 실시형태에서, 상기 결합 특이성 중 하나는 베타 클로토에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 일부 실시형태에서, 상기 결합 특이성 중 하나는 베타 클로토에 대한 것이고, 다른 하나는 베타 클로토 및 FGF 수용체 (예를 들어, FGFR1c, FGFR2c, FGFR3c, FGFR4)를 발현하는 세포에서 발현되는 또 다른 표면 항원에 대한 것이다. 특정 실시형태에서, 이중 특이적 항체는 베타 클로토의 2개의 다른 에피토프에 결합할 수 있다. 이중 특이적 항체는 전장의 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중 특이적 항체)으로서, 제조될 수 있다.
이중 특이적 항체의 제조 방법은, 예를 들어, 2개의 중쇄가 다른 특이성을 가지는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동 발현에 의한 것과 같은 것으로서, 당 업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983)] 참조). 이중 특이적 항체의 생성에 대한 추가적 상세 정보를 위해, 예를 들면, 문헌 [Bispecific Antibodies, Kontermann, ed., Springer-Verlag, Hiedelberg (2011)]을 참조한다.
7. 다가 항체
다가 항체는, 항체가 결합하는 항원을 발현하는 세포에 의해, 2가 항체 보다 더욱 빨리 내재화 (및/또는, 이화 (catabolizing))될 수 있다. 본 발명의 항체는, 상기 항체의 폴리펩티드 사슬을 인코딩하는 핵산의 재조합적 발현에 의해 용이하게 생성될 수 있는 3개 또는 그 이상의 항원 결합 자리를 가지는 다가 항체 (예를 들어, 4가 항체) (IgM 종류 이외의 것)일 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 또는 그 이상의 항원 결합 자리를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다 (또는, 그로 구성된다). 이 시나리오에서, 상기 항체는 Fc 영역 및, Fc 영역의 아미노 말단에 3개 또는 그 이상의 항원 결합 자리를 포함할 것이다. 특정 실시형태에서, 다가 항체는 3개 내지 약 8개의 항원 결합 자리를 포함한다 (또는, 그로 구성된다). 이러한 일 실시형태에서, 다가 항체는 4개의 항원 결합 자리를 포함한다 (또는, 그로 구성된다). 상기 다가 항체는, 폴리펩티드 사슬 (들)이 2개 또는 그 이상의 가변 도메인을 포함하는 적어도 하나의 폴리펩티드 사슬 (예를 들면, 2개의 폴리펩티드 사슬)을 포함한다. 예를 들어, 상기 폴리펩티드 사슬 (들)은 VD1-(X1)n -VD2-(X2)n -Fc를 포함할 수 있으며, 여기서, VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이며, Fc는 Fc 영역의 하나의 폴리펩티드 사슬이고, X1및 X2는 아미노산 또는 폴리펩티드를 나타내며, n은 0 또는 1이다. 예를 들어, 상기 폴리펩티드 사슬 (들)은 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 사슬; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 사슬을 포함할 수 있다. 본 발명의 다가 항체는 적어도 2개 (예를 들면, 4개)의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드들을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 다가 항체는 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드들을 포함할 수 있다. 본 발명에서 고려되는 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드들은 경쇄 가변 도메인을 포함하며, 임의로, CL 도메인을 추가로 포함한다.
8. Fc 엔지니어링
예를 들면, 항체의 항원-의존적 세포-매개 세포 독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존적 세포 독성 (CDC)을 저하 또는 제거하기 위해, 효과기 기능에 대한 것을 포함하여, Fc 엔지니어링을 통해, 베타 클로토에 대한 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는, 항체의 Fc 영역에 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써, 획득될 수 있다. 예를 들면, 위치 233-236의 IgG2 잔기 및 위치 327, 330의 IgG4 잔기를 이용한 인간 IgG1로의 치환이 ADCC 및 CDC를 크게 감소시키는 것으로 밝혀졌다 (예를 들어, 문헌 [Armour et al., Eur. J. Immunol. 29:(8):2613-24 (1999); Shields et al., J. Biol..Chem. 276(9): 6591-604 (2001)] 참조).
예를 들면, 미국 특허 제 5,739,277호에 개시된 바와 같이, 항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 샐비지 수용체 결합 에피토프를 상기 항체 (특히, 항체 단편)에 혼입시킬 수 있다. 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는, IgG 분자의 생체 내 혈청 반감기의 증가의 원인이 되는 IgG 분자 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다.
9. 대안적 결합제( Alternative Binding Agent )
본 발명은, 본 발명에서 개시되는 항-베타 클로토 항체와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 비면역글로불린 결합제를 포괄한다. 일부 실시형태에서, 비면역글로불린 결합제는, 경쟁 결합 분석에서, 본 발명의 항-베타 클로토 항체를 대체하거나 또는 그에 의해 대체되는 것으로 확인된 제제이다. 이들 대안적 결합제는, 예를 들면, 당 업계에 공지된 엔지니어링된 단백질 스캐폴드 중 하나를 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는 표 1-10에 제시된 바와 같은 하나 또는 그 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는, 예를 들면, 리간드 결합 자리를 형성하는 4개의 초가변 루프를 지원하는 고정 베타-베럴 (rigid beta-barrel)을 특징으로 하는 단백질 구조인 리포칼린 스캐폴드를 기반으로 하는 안티칼린 (anticalin)을 포함한다. 기능성 디스플레이 및 가이드 선택의 조합으로, 루프 영역의 표적 무작위 돌연변이에 의해, 새로운 결합 특이성이 엔지니어링될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Skerra (2008) FEBS J. 275: 2677-2683] 참조). 기타 적절한 스캐폴드는, 예를 들면, 인간 피브로넥틴 III의 10번째 세포 외 도메인에 기초한 애드넥틴 또는 모노바디(예를 들어, 문헌 [Koide and Koide (2007) Methods Mol. Biol. 352: 95-109] 참조); 포도상구균 단백질 A의 Z 도메인에 기초한 아피바디(예를 들어, 문헌 [Nygren et al. (2008) FEBS J. 275: 2668-2676)] 참조); 안키린 반복 단백질 (ankyrin repeat protein)에 기초한 DARPin(예를 들어, 문헌 [Stumpp et al. (2008) Drug. Discov. Today 13: 695-701] 참조); 인간 Fyn 단백질 키나아제의 SH3 도메인에 기초한 파이노머(fynomer)(Grabulovski et al. (2007) J. Biol. Chem. 282: 3196-3204); 술폴로부스 액시돌라리우스 (Sulfolobus acidolarius)의 Sac7d에 기초한 아피틴(affitin) (예를 들어, 문헌 [Krehenbrink et al. (2008) J. Mol. Biol. 383: 1058-1068] 참조); 인간 y-B-크리스탈린에 기초한 아필린 (affilin) (예를 들어, 문헌 [Ebersbach et al. (2007) J. Mol. Biol. 372: 172-185] 참조); 막 수용체 단백질의 A 도메인에 기초한 아비머 (avimer) (예를 들어, 문헌 [Silverman et al. (2005) Biotechnol. 23: 1556-1561] 참조); 시스테인 풍부 노틴 펩티드 (knottin peptide) (예를 들어, 문헌 [Kolmar (2008) FEBS J. 275: 2684-2690] 참조); 및 엔지니어링된 쿠니츠(Kunitz)-유형 억제제 (예를 들어, 문헌 [Nixon and Wood (2006) Curr. Opin. Drug. Discov. Dev. 9: 261-268] 참조)를 포함할 수 있다. 검토를 위해, 예를 들면, 문헌 [Gebauer and Skerra (2009) Curr. Opin. Chem. Biol. 13: 245-255]을 참조한다.
항체 변이체
일부 실시형태에서, 본 발명에서 개시된 바와 같은 베타 클로토에 결합하는 항체의 아미노산 서열 변형 (들)이 고려된다. 예를 들면, 결합 친화성 및/또는, 이로 제한되는 것은 아니나, 특이성, 내열성, 발현 수준, 효과기 기능, 당화, 감소된 면역원성 또는 가용성을 비롯한 기타 항체의 생물학적 특성의 개선이 바람직할 수 있다. 본 발명에서 개시된 바와 같은 항-베타 클로토 항체 이외에, 항-베타 클로토 항체 변이체가 제조될 수 있다는 것이 고려된다. 예를 들면, 항-베타 클로토 항체 변이체는, 인코딩 DNA에 적절한 뉴클레오티드 변화의 도입 및/또는 원하는 항체 또는 폴리펩티드의 합성에 의해 제조될 수 있다. 당업자는, 아미노산 변화가, 당화 자리의 수 또는 위치의 변화 또는, 막 앵커링 특성 (membrane anchoring characteristic)의 변경과 같은 항-베타 클로토 항체의 번역 후 과정을 변경시킬 수 있다는 것을 이해할 것이다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는, 예를 들면 항체와 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해, 화학적으로 변형된다. 항체 유도체에는, 예를 들면, 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 인지의 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백질 분해성 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질과의 결합 등에 의해, 화학적으로 변형된 항체가 포함될 수 있다. 임의의 다양한 화학적 변형은, 이로 제한되는 것은 아니나, 튜니카마이신의 대사 합성, 특이적 화학적 절단, 아세틸화, 제형화 등을 비롯한 공지 기술에 의해, 수행할 수 있다. 또한, 상기 항체는 하나 또는 그 이상의 비전형적 아미노산을 포함할 수 있다.
변이는, 천연 서열 항체 또는 폴리펩티드와 비교하여, 아미노산 서열에 변화가 초래된 항체 또는 폴리펩티드를 인코딩하는 하나 또는 그 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은, 세린에 의한 류신의 대체, 예를 들어 보존적 아미노산 대체와 같은 것으로서, 유사한 구조 및/또는 화학적 특성을 가지는 또 다른 아미노산에 의한 하나의 아미노산의 대체의 결과일 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의로 약 1 내지 5개의 아미노산의 범위일 수 있다. 특정 실시형태에서, 치환, 결실 또는 삽입에는, 본래의 분자와 비교 상, 25개 이하의 아미노산 치환, 20개 이하의 아미노산 치환, 15개 이하의 아미노산 치환, 10개 이하의 아미노산 치환, 5개 이하의 아미노산 치환, 4개 이하의 아미노산 치환, 3개 이하의 아미노산 치환, 또는 2개 이하의 아미노산 치환이 포함된다. 특정 실시형태에서, 치환은 하나 또는 그 이상의 예상 비필수 아미노산 잔기에서 이루어지는 보존적 아미노산 치환이다. 허용 가능한 변이는, 서열에서, 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환을 체계적으로 유발시키고, 전장의 또는 성숙 천연 서열에 의해 발휘되는 활성에 대해 생성된 변이를 시험함으로써, 측정할 수 있다.
아미노산 서열 삽입에는, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열 내 삽입뿐만 아니라, 1개의 잔기 내지 100개 또는 그 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합이 포함된다. 말단 삽입의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 가지는 항체가 포함된다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체에는, 항체의 혈청 반감기가 증가된 폴리펩티드 또는 (예를 들어, 항체-매개 효소 전구 약물 치료법 (antibody-directed enzyme prodrug therapy)을 위한) 효소와 항체의 N- 또는 C-말단의 융합이 포함된다.
항체의 생물학적 특성의 실질적 변형은, (a) 예를 들면, 시트 또는 나선형 입체 구조로서, 치환 부위에서, 폴리펩티드 골격의 구조, (b) 표적 자리에서, 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄 대부분을 유지하면서, 그의 효과는 현저히 다른 치환을 선택함으로써, 획득될 수 있다. 대안적으로, 특성을 유지하거나 또는 현저히 변화되지 않게 하기 위해, 보존적 (예를 들어, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 가지는 아미노산 기 내) 치환이 이루어질 수 있다. 아미노산은, 그의 측쇄 특성의 유사성에 따라, 분류될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [A. L. Lehninger, in Biochemistry, 2nd Ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)] 참조): (1) 무극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 비전하성 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); 및 (4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His(H).
대안적으로, 자연 발생 잔기는 공통적 측쇄 특성을 기반으로 한 그룹으로 구분될 수 있다: (1) 소수성: Norleucine, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) acidic: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 방향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 치환은 이들 종류 중 하나의 멤버의 또 다른 종류로의 교체를 수반한다. 이러한 치환 잔기는 또한, 보존적 치환 자리 또는 나머지 (비보존) 자리로 도입될 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 단편은, 본 발명에서 개시된 바와 같은 쥣과 동물의 모노클로날 항체의 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 단편은, 표 1-10에 도시된 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 베타 클로토 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 단편은, 표 1-10에 도시된 VH CDR 아미노산 서열 및/또는 표 1-10에 도시된 VL CDR 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 VH CDR 및/또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함한다. 변이는 올리고뉴클레오티드-매개 (부위 특이적 (site-directed)) 돌연변이 유발, 알라닌 스캔, 및 PCR 돌연변이 유발과 같은 당 업계에 공지된 방법을 이용하여 이루어질 수 있다. 항-베타 클로토 항체 변이 DNA의 생성을 위해, 클로닝된 DNA에서, 부위 특이적 돌연변이 유발 (예를 들어, 문헌 [Carter et al., Nucl. Acids Res., 13:4331 (1986); Zoller et al., Nucl. Acids Res., 10:6487 (1987)] 참조), 카세트 돌연변이 유발 (예를 들어, 문헌 [Wells et al., Gene, 34:315 (1985)] 참조), 제한 선택 돌연변이 유발 (예를 들어, 문헌 [Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317:415 (1986)] 참조) 또는 기타 공지 기술을 수행할 수 있다.
분자의 산화 안정성을 향상시키고, 비정상적인 가교 결합을 방지하기 위해, 항-베타 클로토 항체의 적절한 입체 구조의 유지에 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 또한, 예를 들면 알라닌 또는 세린과 같은 또 다른 아미노산에 의해, 치환될 수 있다. 반대로, 그의 안정성의 향상을 위해, 시스테인 결합 (들)이 항-베타 클로토 항체에 첨가될 수 있다 (예를 들어, 여기서 상기 항체는 Fv 단편과 같은 항체 단편이다).
일부 실시형태에서, 본 발명의 항-베타 클로토 항체 분자는 "탈면역화된" 항체이다. "탈면역화된" 항-베타 클로토 항체는, 각각의 본래의 비탈면역화 항체와 비교하여, 상기 항체의 면역원성의 감소를 초래하는 것으로서, 아미노산 서열의 하나 또는 그 이상의 변경을 가지는 인간화 또는 키메라 항-베타 클로토 항체로부터 유래된 항체이다. 이러한 항체 돌연변이의 유발 절차 중 하나에는 상기 항체 분자의 T-세포 에피토프의 확인 및 제거가 포함된다. 제1 단계에서, 상기 항체 분자의 면역원성은, 예를 들어, 당 업계에 공지된 바와 같은 T-세포 에피토프의 시험관 내 측정 또는 이러한 에피토프의 인 실리코 예측 (in silico prediction)에 의한, 여러 가지 방법에 의해 측정될 수 있다. T-세포 에피토프 기능의 주요 잔기가 확인되면, 면역원성이 제거되고, 항체 활성을 보유하는 돌연변이가 제조될 수 있다. 검토를 위해, 예를 들면, 문헌 [Jones et al., Methods in Molecular Biology 525: 405-423, 2009]을 참조한다.
1. 시험관 내 친화성 성숙
일부 실시형태에서, 부모 항체에 비해서, 친화성, 안정성, 또는 발현 수준과 같은 특성이 향상된 항체 변이체를 시험관 내 친화성 성숙에 의해 제조할 수 있다. 자연 원형 (prototype)과 같이, 시험관 내 친화성 성숙은 돌연변이와 선택의 원칙을 기반으로 한다. 항체의 라이브러리는, 유기체 (예를 들어, 파지, 박테리아, 효모 또는 포유류 세포)의 표면 또는 그의 인코딩 mRNA 또는 DNA와의 (예를 들어, 공유 또는 비공유) 결합에서, Fab, scFv 또는 V 도메인 단편으로서 디스플레이된다. 디스플레이된 항체의 친화성 선택은 상기 항체를 인코딩하는 유전자 정보를 전달하는 유기체 또는 복합체의 단리를 가능하게 한다. 파지 디스플레이와 같은 디스플레이 방법을 이용한 돌연변이 및 선택의 2 또는 3 라운드는 일반적으로 낮은 나노몰 범위의 친화성을 가지는 항체 단편을 초래한다. 바람직한 친화성 성숙 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 가질 것이다.
파지 디스플레이는 광범위하게 이용되는 항체의 디스플레이 및 선택 방법이다. 항체는, 박테리오파지 외피 단백질에 대한 융합으로서 Fd 또는 M13 박테리오파지의 표면 상에 디스플레이된다. 선택에는, "패닝 (panning)"으로 지칭되는 과정으로서, 파지 디스플레이 항체가 그의 표적에 결합할 수 있도록 하는 항원에의 노출 단계가 포함된다. 항원 결합 파지는 회수하여, 선택의 추가 라운드를 위한 파지 생성을 위해, 박테리아에 감염시킨다. 검토를 위해, 예를 들면, 문헌 [Hoogenboom, Methods. Mol. Biol. 178: 1-37, 2002; Bradbury and Marks, J. Immuno. Methods 290: 29-49, 2004)]을 참조한다.
효모 디스플레이 시스템 (예를 들어, 문헌 [Boder et al., Nat. Biotech. 15: 553-57, 1997; Chao et al., Nat. Protocols 1:755-768, 2006] 참조)에서, 상기 항체는, 중쇄 및 경쇄가 가요성 링커에 의해 연결되어 있는 단일 사슬 가변 융합체 (scFv를)로 디스플레이될 수 있다. 이 scFv는, Aga1p에 이황화 결합을 통해 효모 세포벽에 부착된 효모 응집소 단백질 Aga2p의 접착 하위단위체에 융합된다. Aga2p를 통한 단백질의 디스플레이는, 효모 세포벽의 다른 분자와의 상호 작용 가능성을 최소화하는 것으로서, 상기 단백질을 세포 표면으로부터 돌출시킨다. 자기 분리 및 세포 계측법이, 친화성 또는 안정성이 향상된 항체의 선택을 위한 라이브러리의 스크리닝에 사용된다. 비오티닐화 항원 및, 형광단에 접합된 스트렙타비딘과 같은 이차 시약에 의한 효모의 표지에 의해, 관심 대상의 가용성 항원에 대한 결합을 측정한다. 항체의 표면 발현의 변이는, scFv를 플랭킹 (flanking)하는 C-Myc 에피토프 태그 또는 혈구 응집소 중 하나의 면역 형광 표지를 통해 측정할 수 있다. 발현은 디스플레이된 단백질의 안정성과 관련되는 것으로 알려져 있으며, 따라서, 항체는 친화성뿐만 아니라 안정성의 향상에 대해 선택될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Shusta et al., J. Mol. Biol. 292: 949-956, 1999] 참조). 효모 디스플레이의 또 다른 장점은, 소포체 샤페론 (endoplasmic reticulum chaperone)과 품질 제어 장치의 이점을 취하는 것으로서, 디스플레이된 단백질이 진핵 효모 세포의 소포체에서, 접혀있다는 것이다. 숙성이 완료되면, 각 클론의 발현 및 정제에 대한 필요성을 제거하는 것으로서, 효모의 표면에 디스플레이된 상태에서, 항체의 친화성을 간편하게 "적정"할 수 있다. 효모 표면 디스플레이의 이론적 한계는 다른 디스플레이 방법보다 잠재적으로 더 작은 기능성 라이브러리의 크기이나; 최근의 접근 방식은, 크기가 1014로 추정되는 조합의 다양성을 생성하기 위해, 효모 세포의 교배법 (mating system)을 사용한다 (예를 들어, 문헌 [미국 특허 공보 제 2003/0186,374호; Blaise et al., Gene 342: 211-218, 2004] 참조).
리보솜 디스플레이에서, 항체-리보솜-mRNA (ARM) 복합체를 세포-무함유 시스템의 선택을 위해 생성시킨다. 항체의 특정 라이브러리를 코딩하는 DNA 라이브러리를 종결 코돈이 결여된 스페이서 서열에 유전적으로 융합시킨다. 번역시, 스페이서 서열은, 여전히 펩티딜 tRNA에 부착된 상태로, 리보솜 터널을 점유하며, 따라서 관심 대상 단백질의 리보솜 밖으로의 돌출 및 접힘을 가능하게 한다. mRNA, 리보솜, 단백질의 생성 복합체는 표면 결합 리간드에 결합할 수 있으며, 이는 리간드와의 친화성 포획을 통해, 항체 및 그의 인코딩 mRNA의 동시 단리를 가능하게 한다. 리보솜-결합 mRNA는, 돌연변이 유발 과정에 적용할 수 있고, 다음 라운드의 선택에서 이용될 수 있는 cDNA로 다시 역전사시킨다 (예를 들어, 문헌 [Fukuda et al., Nucleic Acids Res. 34, e127, 2006] 참조). mRNA의 디스플레이에서, 어댑터 분자로서 퓨로마이신을 사용하여, 항체와 mRNA 사이의 공유 결합을 확립한다 (Wilson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 3750-3755, 2001).
이러한 방법은 전적으로 시험관 내에서 수행되기 때문에, 이들 방법은 다른 선택 기술에 비해 두 가지 주요 장점을 제공한다. 우선, 라이브러리 다양성이 박테리아 세포의 트랜스제닉 효율에 의해 제한되지 않으며, 단지 시험관 내에 존재하는 리보솜 및 다른 mRNA 분자의 수에 의해서만 제한된다는 것이다. 둘째, 임의의 다양화 단계 후, 라이브러리가 형질 전환되어야 할 필요가 없기 때문에, 예를 들면, 비-교정 폴리머라제 (non-proofreading polymerase)에 의해, 각각의 선택 라운드 후, 무작위 돌연변이가 용이하게 도입될 수 있다는 것이다.
다양성은 표적화 방식으로 또는 무작위 도입을 통해, CDR 또는 항체 라이브러리의 전체 V 유전자 내로 도입될 수 있다. 전자의 접근 방식은 고 수준 또는 저 수준의 돌연변이 유발을 통해, 항체의 모든 CDR을 순차적으로 표적화하는 단계 또는, 실험 기준 또는 구조적 원인으로 인해, 친화성에 영향을 미치는 것으로 의심되는 잔기 또는 체세포 초돌연변이 (somatic hypermutation) (예를 들어, 문헌 [Ho, et al., J. Biol. Chem. 280: 607-617, 2005] 참조)의 단리된 핫 스팟 (hot spot)을 표적으로 하는 단계를 포함한다. 무작위 돌연변이는, DNA 중합 효소 (예를 들어, 문헌 [Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226: 889-896, 1992] 참조) 또는 RNA 복제 효소에 의한 오류가 발생하기 쉬운 복제로서, E. coli 돌연변이유발유전자 균주 (mutator strain)를 이용하여, 전체 V 유전자를 통해 도입될 수 있다. 다양성은 또한, DNA 셔플링 또는 유사한 기술을 통해, 자연 발생적으로 다양한 영역의 교체에 의해 도입될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Lu et al., J. Biol. Chem. 278: 43496-43507, 2003; 미국 특허 제 5,565,332호; 미국 특허 제 6,989,250호] 참조). 프레임워크-영역 잔기로 확장되는 초가변 루프를 표적으로 하는 대안적 기술 (예를 들어, 문헌 [Bond et al., J. Mol. Biol. 348: 699-709, 2005] 참조)은 CDR의 루프 결실 및 삽입을 사용하거나 또는 혼성화-기반 다양화를 이용한다 (예를 들어, 문헌 [미국 특허 공보 2004/0005709] 참조). CDR의 다양성 생성을 위한 추가적 방법이, 예를 들면, 미국 특허 제 7,985,840호에 개시되어 있다.
라이브러리의 스크리닝은 당 업계에 공지된 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, 베타 클로토는 고체 지지체, 칼럼, 핀 (pin) 또는 셀룰로즈/폴리(비닐리덴 플루오라이드) 막/기타 필터 상에 고정될 수 있고, 흡착 플레이트에 부착된 숙주 세포에서 발현되거나 또는 세포 분류에 이용되거나 또는 스트렙타비딘-코팅 비드에 의한 포획을 위해, 비오틴에 접합되거나 또는 패닝 디스플레이 라이브러리를 위한 임의의 다른 방법에 이용될 수 있다.
시험관 내 친화성 성숙 방법에 대한 검토를 위해, 예를 들어, 문헌 [Hoogenboom, Nature Biotechnology 23: 1105-1116, 2005 and Quiroz and Sinclair, Revista Ingeneria Biomedia 4: 39-51, 2010] 및 그의 인용 문헌을 참조한다.
2. 항-베타 클로토 항체의 변형
항-베타 클로토 항체의 공유 변형 (Covalent modification)이 본 발명의 범위 내에 포함된다. 공유 변형은, 항-베타 클로토 항체의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 항-베타 클로토 항체의 표적 아미노산 잔기를 반응시키는 단계를 포함한다. 기타 변형에는, 각각의 해당 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 글루타미닐 및 아스파라지닐 잔기의 탈아미드화, 프롤린 및 리신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실 기의 인산화, 리신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 기의 메틸화 (예를 들어, 문헌 [T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)] 참조), N-말단 아민의 아세틸화 및 C-말단 카르복실 기의 아미드화가 포함된다.
본 발명의 범위 내에 포함되는 항-베타 클로토 항체의 기타 유형의 공유 변형에는, 상기 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴의 변경 (예를 들어, 문헌 [Beck et al., Curr. Pharm. Biotechnol. 9: 482-501, 2008; Walsh, Drug Discov. Today 15: 773-780, 2010] 참조) 및 예를 들면, 미국 특허 제 4,640,835호; 제 4,496,689호; 제 4,301,144호; 제 4,670,417호; 제 4,791,192호 또는 제 4,179,337호에서 제시되는 방식의 다양한 비 단백질성 중합체, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나와 상기 항체의 결합이 포함된다.
본 발명의 항-베타 클로토 항체는 또한 변형되어, 다른 이종 폴리펩티드 또는 아미노산 서열, 예를 들어, 에피토프 태그 (예를 들어, 문헌 [Terpe, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60: 523-533, 2003] 참조) 또는 IgG 분자의 Fc 영역((예를 들어, 문헌 [Aruffo, "Immunoglobulin fusion proteins" in Antibody Fusion Proteins, S.M. Chamow and A. Ashkenazi, eds., Wiley-Liss, New York, 1999, pp. 221-242] 참조)에 융합된 항-베타 클로토 항체를 포함하는 키메라 분자를 생성시킬 수 있다.
또한, 본 발명에서는, 베타 클로토 항원 및 이종 폴리펩티드에 결합하는 본 발명에서 제공되는 항체를 포함하는 융합 단백질이 제공된다. 일부 실시형태에서, 상기 항체가 융합되는 이종 폴리펩티드는 세포 표면에서 발현되는 베타 클로토를 가지는 세포에 상기 항체의 표적화에 유용하다.
또한, 본 발명에서는, 베타 클로토 항원에 결합하는 항체의 패널이 제공된다. 특정 실시형태에서, 항체의 패널은 상이한 결합 속도 상수, 상이한 해리 속도 상수, 베타 클로토 항원에 대한 상이한 친화성 및/또는 베타 클로토 항원에 대한 상이한 특이성을 가진다. 일부 실시형태에서, 상기 패널은 약 10개, 약 25개, 약 50개, 약 75개, 약 100개, 약 125개, 약 150개, 약 175개, 약 200개, 약 250개, 약 300개, 약 350개, 약 400개, 약 450개, 약 500개, 약 550개, 약 600개, 약 650개, 약 700개, 약 750개, 약 800개, 약 850개, 약 900개, 약 950개 또는 약 1000개 또는 그 이상의 항체를 포함하거나 또는 그로 구성된다. 항체의 패널은 ELISA와 같은 분석에서와 같이, 96 웰 또는 384 웰 플레이트에서 이용될 수 있다.
항-베타 클로토 항체의 제조
항-베타 클로토 항체는, 항-베타 클로토 항체-인코딩 핵산을 포함하는 벡터에 의해 형질전환 또는 형질감염된 세포의 배양에 의해 생성될 수 있다. 표준 재조합 기술을 이용하여, 본 발명의 항체의 폴리펩티드 성분을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 수득할 수 있다. 하이브리도마 세포와 같은 항체 생성 세포로부터 바람직한 폴리뉴클레오티드 서열을 단리 및 서열 분석할 수 있다. 대안적으로, 뉴클레오티드 합성기 또는 PCR 기술을 이용하여, 폴리뉴클레오티드를 합성할 수 있다. 수득시, 숙주 세포에서 이종 폴리뉴클레오티드를 복제 및 발현할 수 있는 재조합 벡터로, 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 삽입한다. 당 업계에 공지된 적용 가능한 많은 벡터가 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 주로, 벡터 내로 삽입되는 핵산의 크기 및, 벡터에 의해 형질 전환되는 특정 숙주 세포에 의존적일 것이다. 본 발명의 항체의 발현에 적합한 숙주 세포에는 그람 음성 또는 그람 양성 유기체를 비롯한 고세균 및 진정 세균과 같은 원핵생물, 사상 균류 또는 효모와 같은 진핵 미생물, 곤충 또는 식물 세포와 같은 무척추동물 세포 및 포유동물 숙주 세포주와 같은 척추동물 세포가 포함된다. 숙주 세포를 전술된 발현 벡터로 형질 전환하고, 프로모터의 유도, 형질전환체의 선택 또는 원하는 서열을 인코딩하는 유전자의 증폭에 적절하게 변형된 통상의 영양 배지에서 배양한다. 상기 숙주 세포에 의해 생성된 항체는 당 업계에 공지된 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 정제한다.
*벡터 제작, 발현 및 정제를 포함한 항체 생산 방법이 문헌 [Pluckthun et al., (1996) in Antibody Engineering: Producing antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation (McCafferty, J., Hoogenboom, H. R., and Chiswell, D. J., eds), 1 Ed., pp. 203-252, IRL Press, Oxford; Kwong, K. & Rader, C., E. coli expression and purification of Fab antibody fragments, Current protocols in protein science editorial board John E Coligan et al., Chapter 6, Unit 6.10 (2009); Tachibana and Takekoshi, "Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli," in Antibody Expression and Production, M. Al-Rubeai, Ed., Springer, New York, 2011; Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (ed Z. An), John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, USA]에 추가로 개시되어 있다.
항-베타 클로토 항체의 제조에 있어서, 당 업계에 잘 알려진 대안적 방법이 사용될 수 있다는 것이 물론 고려된다. 예를 들어, 적절한 아미노산 서열 또는 그의 부분이, 고상 기술을 이용한 직접적 펩티드 합성법에 의해 생성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)] 참조). 시험관 내 단백질 합성법을 자동으로 또는 수동 기술을 사용하여 수행할 수 있다. 항-베타 클로토 항체의 다양한 부분을 화학적으로 각각 합성할 수 있으며, 원하는 항-베타 클로토 항체의 생성을 위한 화학적 또는 효소적 방법을 이용하여 조합할 수 있다. 대안적으로, 예를 들면, 미국 특허 제 5,545,807호 및 미국 특허 제 5,827,690호에 개시된 바와 같이, 항체를 발현하도록 엔지니어링된 트랜스제닉 동물의 세포 또는 체액, 예를 들어 우유로부터 상기 항체를 정제할 수 있다.
면역접합체
본 발명은 또한, 합성 링커에 의해, 하나 또는 그 이상의 비-항체 제제에 공유 결합된 본 발명의 항-베타 클로토 항체 중 임의의 하나를 포함하는 접합체를 제공한다.
방사성 접합된 항체의 생성을 위해, 다양한 방사성 동위 원소가 적용가능하다. 예에는 At211, I4, I4, Y4, Re4, Re4, Sm4, Bi4, P4, Pb4 및 Lu의 방사성 동위 원소가 포함된다. 접합체가 검출에 이용되는 경우, 이에는 신티그래프 연구 (scintigraphic study)용 방사성 원소, 예를 들면 tc4 또는 I4, 핵자기 공명 (NMR) 영상화 (또는, 자기 공명 영상 MRI으로 알려짐)를 위한 스핀 표지 (spin label), 예를 들어 요오드-123, 다시, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철이 포함될 수 있다. 상기 방사성 동위원소는, 예를 들어 문헌 [Reilly, "The radiochemistry of monoclonal antibodies and peptides," in Monoclonal Antibody and Peptide-Targeted Radiotherapy of Cancer, R.M. Reilly, ed., Wiley, Hoboken N.J., 2010]에 개시된 바와 같은 공지 방식으로, 접합체로 혼입될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 항체는 진단, 검출 또는 치료제 또는 기타 임의의 분자에 접합되거나 또는 재조합적으로 융합된다. 상기 접합되거나 또는 재조합적으로 융합된 항체는, 예를 들면, 특정 치료법의 효능의 측정과 같이, 임상 시험 절차의 일부로서, 베타 클로토-매개 질환의 개시, 발달, 진행 및/또는 중증도의 모니터링 또는 진단에 유용할 수 있다.
이러한 진단 및 검출은, 이로 제한되는 것은 아니나, 다양한 효소, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 겨자무과산화효소, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제 또는 아세틸콜린에스테라제; 보철 그룹, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/비오틴; 형광 물질, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 움벨리페론, 플루오레세인 (fluorescein), 플루오레세인 이소티오시안산염 (fluorescein isothiocynate), 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인 (dichlorotriazinylamine fluorescein), 단실 클로라이드 또는 피코에리트린; 발광 물질, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 루미놀; 생물 발광 물질, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 루시페라제, 루시페린, 및 에쿼린 (aequorin); 화학 발광 물질, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 아크리디늄계 화합물 또는 HALOTAG; 방사성 물질, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, 요오드 (131I, 125I, 123I, 및 121I,), 탄소 ( 14C), 황 (35S), 삼중수소 (3H), 인듐 (115In, 113In, 112In, 및 111In,), 테크네튬 (99Tc), 탈륨 (201Ti), 갈륨 (68Ga, 67Ga), 팔라듐 (103Pd), 몰리브덴 (99Mo), 크세논 (133Xe), 플루오르 (18F), 153Sm, 177Lu, 159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru, 68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, and 117Sn; 및 다양한 양전자 방출 단층 촬영을 사용한 양전자 방출 금속, 및 비 방사성 상자성 금속 이온을 비롯한 검출성 물질에 상기 항체를 커플링시킴으로써, 달성될 수 있다.
또한, 본 발명에서는, 치료적 모이어티 (또는, 하나 또는 그 이상의 치료학적 모이어티들)에 접합되거나 또는 재조합적으로 융합된 항체뿐만 아니라, 그의 용도가 제공된다. 상기 항체는, 세포 증식 억제제 또는 세포파괴제와 같은 세포독소, 치료제 또는 알파 방출체와 같은 방사성 금속 이온을 비롯한 치료학적 모이어티에 접합되거나 또는 재조합적으로 융합될 수 있다. 세포 독소 또는 세포 독소제에는 세포에 유해한 임의의 제제가 포함된다.
또한, 본 발명에서 제공되는 항체는, 소정의 생물학적 반응을 변형시키는 치료학적 모이어티 또는 약제 모이어티에 접합되거나 또는 재조합적으로 융합될 수 있다. 치료학적 모이어티 또는 약제 모이어티가 전형적인 화학 치료제로 한정되는 것으로 이해되어서는 안된다. 예를 들면, 상기 약제 모이어티는 원하는 생물학적 활성을 가지는 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드일 수 있다. 이러한 단백질에는, 예를 들면, 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 콜레라 독소, 또는 디프테리아 독소와 같은 독소; 단백질, 예를 들어 종양 괴사 인자, γ 인터페론, α 인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성제, 사멸 제, 예를 들면, TNF-γ, TNF-γ, AIM I (예를 들어, 문헌 [국제 출원 공보 WO 97/33899] 참조), AIM II (예를 들어, 문헌 [국제 출원 공보 WO 97/34911] 참조), Fas 리간드 (예를 들어, 문헌 [Takahashi et al., 1994, J. Immunol., 6:1567-1574] 참조), 및 VEGF (예를 들어, 문헌 [국제 출원 공보 WO 99/23105] 참조), 예를 들면 안지오스타틴, 엔도스타틴 또는 응고 경로 성분 (예를 들어, 조직 인자)를 비롯한 항-혈관신생제; 또는 생물학적 반응 조절제, 예를 들면 림포카인 (예를 들어, 인터페론 감마, 인터루킨-1 ("IL-1"), 인터루킨-2 ("IL-2"), 인터루킨-5 ("IL-5"), 인터루킨-6 ("IL-6"), 인터루킨-7 ("IL-7"), 인터루킨-9 ("IL-9"), 인터루킨-10 ("IL-10"), 인터루킨-12 ("IL-12"), 인터루킨-15 ("IL-15"), 인터루킨-23 ("IL-23"), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 ("GM-CSF"), 및 과립구 콜로니 자극 인자 ("G-CSF")), 성장 인자 (예를 들어, 성장 호르몬 ("GH")), 응집제 (예를 들어, 칼슘, 비타민 K, 조직 인자, 예를 들어, 이로 제한되는 것은 아니나, Hageman 인자 (인자 XII), 고 분자량 키니노겐 (HMWK) 프리칼리크레인 (PK), 응고 단백질 인자 II (프로트롬빈), 인자 V, XIIa, VIII, XIIIa, XI, XIa, IX, IXa, X, 인지질 및 피브린 단량체)가 포함될 수 있다.
또한, 본 발명에서는, 융합 단백질의 생성을 위해, 이종 단백질 또는 폴리펩티드 (또는 그의 단편, 예를 들면, 약 10개, 약 20개, 약 30개, 약 40개, 약 50개, 약 60개, 약 70개, 약 80개, 약 90개 또는 약 100개의 아미노산의 폴리펩티드)에 재조합적으로 융합되거나 또는 화학적으로 접합 (공유 또는 비공유 접합)된 항체뿐만 아니라, 그의 용도가 제공된다. 특히, 본 발명에서는, 본 발명에서 제공되는 항체의 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab 단편, Fd 단편, Fv 단편, F(ab)2 단편, VH 도메인, VH CDR, VL 도메인 또는 VL CDR) 및 이종 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 포함하는 융합 단백질이 제공된다. 일 실시형태에서, 항체가 융합된 이종 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드는, 베타 클로토 또는 베타 클로토 수용체를 발현하는 세포와 같은 특정 세포 유형에의 항체의 표적화에 유용하다. 예를 들면, 특정 세포 유형 (예를 들어, 면역 세포)에 의해 발현되는 세포 표면 수용체에 결합하는 항체는, 본 발명에서 제공되는 변형 항체에 융합되거나 또는 접합될 수 있다.
또한, 본 발명에서 제공되는 항체는, 이로 제한되는 것은 아니나, 131In, 131LU, 131Y, 131Ho, 131Sm을 비롯한 라디오메탈 (radiometal) 이온의 폴리펩티드에의 접합에 유용한 거대 고리 킬레이트제 (macrocyclic chelator) 또는 213Bi와 같은 알파 방출체와 같은 방사성 금속 이온과 같은 치료학적 모이어티에 접합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 거대 고리 킬레이트제는, 링커 분자를 통해 항체에 부착될 수 있는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N'',N'''-테트라아세트산 (DOTA)이다. 이러한 링커 분자는 당 업계에 일반적으로 공지되어 있으며, 예를 들면 문헌 [Denardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483-90; Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7; and Zimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943-50]에 개시되어 있다.
또한, 본 발명에서 제공되는 항체는, 용이한 정제를 위해, 펩티드와 같은 마커 또는 "태그" 서열에 융합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 상기 마커 또는 태그 아미노산 서열은 상업적으로 구할 수 있는 많은 것 중, 헥사-히스티딘 펩티드, 예를 들어 pQE 벡터에서 제공하는 태그이다 (예를 들어, 문헌 [QIAGEN, Inc.] 참조). 예를 들면, 문헌 [Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824]에 개시된 바와 같이, 헥사-히스티딘에 의해, 상기 융합 단백질의 간편한 정제가 제공된다. 정제 단계에 유용한 기타 펩티드에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 인플루엔자 혈구응집소 단백질 (influenza hemagglutinin protein)로부터 유래된 에피토프에 상응하는 혈구응집소 ("HA") 태그 (Wilson et al., 1984, Cell 37:767) 및 "FLAG" 태그가 포함된다.
치료학적 모이어티 (폴리펩티드 포함)의 항체와의 융합 또는 접합 방법은 잘 알려져 있다 (예를 들어, 문헌 [Arnon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp.　243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58; 미국 특허 제 5,336,603호, 제 5,622,929호, 제 5,359,046호, 제 5,349,053호, 제 5,447,851호, 제 5,723,125호, 제 5,783,181호, 제 5,908,626호, 제 5,844,095호, 및 제 5,112,946호; EP 307,434; EP 367,166; EP 394,827; PCT 공보 WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631, 및 WO 99/04813; Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-10539, 1991; Traunecker et al., Nature, 331:84-86, 1988; Zheng et al., J. Immunol., 154:5590-5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337-11341, 1992] 참조).
융합 단백질은, 예를 들면 유전자-셔플링, 모티브-셔플링, 엑손-셔플링 및/또는 코돈-셔플링 ("DNA 셔플링"이라 총칭함)을 통해, 생성될 수 있다. DNA 셔플링은, 예를 들면 높은 친화성 및 저속 해리 속도를 가지는 항체를 비롯한, 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체의 활성의 변경에 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [미국 특허 제 5,605,793호, 제 5,811,238호, 제 5,830,721호, 제 5,834,252호 및 제 5,837,458호; Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82; Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76; 및 Lorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308- 313] 참조). 항체 또는 인코딩된 항체는, 재조합 전에, 오류가 발생하기 쉬운 PCR, 무작위 뉴클레오티드 삽입 또는 기타 방법에 의한 무작위 돌연변이 유발에의 적용에 의해, 변경될 수 있다. 본 발명에서 제공되는 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 하나 또는 그 이상의 이종 분자의 하나 또는 그 이상의 성분, 모티브, 절편, 일부분, 도메인, 단편 등에 의해 재조합될 수 있다.
본 발명에서 제공되는 항체는 또한, 예를 들어, 미국 특허 제 4,676,980호에 개시된 바와 같이, 제2 항체에 접합되어, 항체 이종 접합체를 생성할 수 있다.
베타 클로토 (예를 들어, 베타 클로토 폴리펩티드, 단편, 에피토프)에 결합하는 본 발명에서 제공되는 항체에 접합되거나 또는 재조합적으로 융합된 치료학적 모이어티 또는 약제는 원하는 예방 또는 치료 효과 (들)의 획득을 위해, 선택되어야 한다. 특정 실시형태에서, 상기 항체는 변형 항체이다. 임상의 또는 다른 의사료진은, 본 발명에서 제공되는 항체에 접합되거나 또는 재조합적으로 융합되는 치료학적 모이어티 또는 약제를 결정하는 경우, 예를 들어 질환의 특성, 질환의 중증도 및 대상체의 조건을 고려할 수 있다.
본 발명에서 제공되는 바와 같은 베타 클로토와 결합하는 항체는 또한, 표적 항원의 면역분석 또는 정제에 특히 유용한 것으로서, 고체 지지체에 부착될 수 있다. 이러한 고체 지지체에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 유리, 셀룰로즈, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드 또는 폴리프로필렌이 포함된다.
링커는 세포에서 접합제의 방출을 용이하게 하는 "절단성 링커"일 수 있지만, 비-절단성 링커 또한 본 발명에서 고려된다. 본 발명의 접합체에 사용하기위한 링커에는 제한 없이, 산 불안정성 링커 (예를 들어, 히드라존 링커), 이황화물-함유 링커, 펩티다제-민감성 링커 (예를 들어, 시트룰린-발린 또는 페닐알라닌-리신과 같은 아미노산, 예를 들면 발린 및/또는 시트룰린을 포함하는 펩티드 링커), 광 불안정성 링커, 디메틸 링커 (예를 들어, 문헌 [Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992); 미국 특허 제 5,208,020호] 참조), 티오에테르 링커, 또는 다중 약물 전달-매개 내성 (multidrug transporter-mediated resistance) 회피 설계된 친수성 링커 (예를 들어, 문헌 [Kovtun et al., Cancer Res. 70: 2528-2537, 2010] 참조)가 포함된다.
항체와 제제의 접합체는, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포 EMCS, 설포 GMBS, 설포 KMUS, 설포 MBS, 설포 SIAB, 설포 SMCC 및 설포 SMPB 및 SVSB (숙신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)와 같은 다양한 이중 기능성 단백질 커플링제를 이용하여, 제조할 수 있다. 본 발명에서는, 항체 및 제제의 접합체가 당 업계에 개시된 바와 같은 임의의 적절한 방법을 사용하여 제조될 수 있다는 것이 또한 고려된다 (예를 들어, 문헌 [in Bioconjugate Techniques, 2nd Ed., G.T. Hermanson, ed., Elsevier, San Francisco, 2008] 참조).
종래의 항체와 제제의 접합 전략은, 이종 접합체가 생성되는 것으로서, Lys 잔기ε-아미노기 또는 Cys 잔기의 티올 기를 포함하는 무작위 접합 화학을 기반으로 하였다. 최근 개발된 기술은, 항원 결합 또는 약물 동태가 변경된 접합체 하위집단을 피하고, 상동성 부하 (homogeneous loading)를 초래하는 것으로서, 항체와의 자리-특이적 접합을 가능하게 한다. 이에는, 반응성 티올 기를 제공하고, 면역글로불린 접힘을 파괴하지 않으며, 항원 결합을 조립 또는 변경하지 않는 중쇄 및 경쇄의 위치의 시스테인 치환을 포함하는 "thiomab"의 엔지니어링이 포함된다 (예를 들어, 문헌 [Junutula et al., J. Immunol. Meth. 332: 41-52 (2008); Junutula et al., Nat. Biotechnol. 26: 925-932, 2008] 참조). 또 다른 방법에서, 다른 천연 아미노산의 존재하에, 셀레노시스테인의 친핵성 셀레놀 기에서 자리 특이적 공유 접합을 가능하게 하는 것으로서, 종결 코돈 UGA를 종결로부터 셀레노시스테인 삽입으로 리코딩 (recoding)함으로써, 셀레노시스테인이 항체 서열로 공번역적으로 (cotranslationally) 삽입된다 (예를 들어, 문헌 [Hofer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 12451-12456 (2008); Hofer et al., Biochemistry 48(50): 12047-12057, 2009] 참조).
약제학적 제형물
본 발명의 항-베타 클로토 항체는, 치료되어야 하는 병증에 적절한 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 상기 항체는 전형적으로 비경구 투여, 예를 들면 주입, 피하, 근육 내, 정맥 내, 피내, 경막 내 및 경막 외 투여될 것이다. 상기 항체의 투여량은 대상체의 병증뿐만 아니라, 질환의 특성 및/또는 중증도에 따라 다를 것이며, 1mg 내지 100 mg의 투여량을 포함할 수 있다. 투여량은 또한 1 mg/kg 내지 15 mg/kg의 것을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 투여량은 약 5 mg/kg 내지 약 7.5 mg/kg이다. 일부 실시형태에서, 상기 투여량은 약 5 mg/kg이다. 일부 실시형태에서, 상기 투여량은 약 7.5 mg/kg이다. 일상적 투여량은 (a) 매 2주 마다 375-400 mg 및 (b) 매 3주 마다 550-600 mg로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 일상적 투여량은 매 2주 마다 375-400 mg이다. 일부 실시형태에서, 일상적 투여량은 매 3주 마다 550-600 mg이다. 일부 실시형태에서, 일상적 투여량은 매 2주 마다 400 mg이다. 일부 실시형태에서, 일상적 투여량은 매 3주 마다 600 mg이다. 순차적 투여의 일부 실시형태에서, 제1 투여량 및 제2 투여량은 각각 1 mg/kg 및 15 mg/kg이며, 제2 투여는 제1 투여 후 1 내지 4주 후에 이루어진다. 일부 실시형태에서, 제1 투여량 및 제2 투여량은 각각 5 mg/kg 및 7.5 mg/kg이며, 제2 투여는 제1 투여 후 2 내지 3주 후에 이루어진다. 일부 실시형태에서, 제1 투여량 및 제2 투여량은 각각 5 mg/kg이며, 제2 투여는 제1 투여 후 2주 후에 이루어진다. 일부 실시형태에서, 제1 투여량 및 제2 투여량은 각각 7.5 mg/kg이며, 제2 투여는 제1 투여 후 3주 후에 이루어진다.
질환, 장애 및 병증의 치료에 있어서, 일부 실시형태에서, 상기 항체는 정맥 내 주입을 통해 주입된다. 주입 투여되는 투여량은, 총 1, 2, 3 또는 4회의 투여 동안, 일반적으로 주당 1회 투여로서, 약 1 μg/m2 내지 약 10,000 μg/m2/투여의 범위이다. 대안적으로, 투여량 범위는 약 1 μg/m2 내지 약 1000 μg/m2, 약 1 μg/m2 내지 약 800 μg/m2, 약 1 μg/m2 내지 약 600 μg/m2, 약 1 μg/m2 내지 약 400 μg/m2; 대안적으로, 약 10 μg/m2 내지 약 500 μg/m2, 약 10 μg/m2 내지 약 300 μg/m2, 약 10 μg/m2 내지 약 200 μg/m2, 및 약 1 μg/m2 내지 약 200 μg/m2이다. 상기 투여는 하루에 한 번, 일주일에 한 번, 일주일에 여러 번 투여될 수 있으나, 하루에 한 번 이하로 투여되며, 한 달에 여러 번 투여될 수 있으나, 하루에 한 번 이하로 투여되며, 한 달에 여러 번 투여될 수 있으나, 일주일에 한 번 이하로 투여되며, 한 달에 한 번 또는 질환, 장애 또는 병증의 증상의 경감 또는 완화를 위해, 간헐적으로 투여될 수 있다. 치료되는 질환, 장애 또는 병증의 호전 또는 상기 질환, 장애 또는 병증의 증상의 호전시까지, 임의의 전술된 간격으로, 지속 투여될 수 있다. 지속적 투여에 의해, 이러한 차도 또는 경감이 연장되는 경우, 증상의 차도 또는 경감이 성취된 후에도, 지속 투여될 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 적어도 하나의 본 발명의 항-베타 클로토 항체를 포함하는 약제학적 제형물을 추가로 제공한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 제형물은 1) 항-베타 클로토 항체, 및 2) 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약제학적 제형물은 1) 항-베타 클로토 항체 및/또는 그의 면역접합체 및 임의로, 2) 적어도 하나의 추가 치료제를 포함한다.
항체를 포함하는 약학학적 제형물은, 수용액 또는 동결 건조되거나 또는 기타 건조 제형물의 형태로, 임의의 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)] 참조)와 원하는 순도를 가지는 항체를 혼합함으로써, 저장용으로 제조된다. 본 발명의 제형물은 또한, 특정 지시가 처리되기에 필요한 경우, 하나 이상의 활성 화합물, 바람직하게는, 서로 부정적 영향을 주지 않는 보완적 활성을 가지는 화합물을 포함할 수 있다. 예를 들면, 항-베타 클로토 항체에 더하여, 추가적 항체, 예를 들어, 베타 클로토 폴리펩티드 상의 다른 에피토프와 결합하는 제2의 항-베타 클로토 항체 또는 어떤 다른 표적에 대한 항체를 하나의 제형물로 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 상기 조성물은, 예를 들면 화학요법제, 세포독성제, 사이토카인, 성장 억제제, 항호르몬제 및/또는 심장 보호제를 비롯한 또 다른 제제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 제형물은 알킬화제 (예를 들면, 클로람부실 (chlorambucil), 벤다무스틴 하이드로클로라이드 (bendamustine hydrochloride) 또는 시클로포스파미드 (cyclophosphamide)), 뉴클레오시드 유사체 (예를 들면, 플루두라빈 (fludurabine), 펜토스타틴 (pentostatin), 클라드리빈 (cladribine) 또는 시타라빈 (cytarabine)), 코르티코스테로이드 (예를 들면, 프레드니손 (prednisone), 프레드니솔론 (prednisolone) 또는 메틸프레드니솔론), 면역조절제 (예를 들면, 레날리도미드 (lenalidomide)), 항생제 (예를 들면, 독소루비신 (doxorubicin), 다우노루비신 (daunorubicin) 이다루비신 (idarubicin) 또는 미톡센트론 (mitoxentrone)) 합성 플라본 (예를 들면, 플라보피리돌 (flavopiridol)), Bcl2 길항제 (예를 들면, 오블리머센 (oblimersen) 또는 ABT-263), 저메틸화작용제 (hypomethylating agent) (예를 들면, 아자시티딘 (azacytidine) 또는 데시타빈 (decitabine)), FLT3 억제제 (예를 들면, 미도스타우린 (midostaurin), 소라페닙 (sorafenib) 및 AC220)를 포함한다. 이러한 분자들은 의도한 목적에 효과적인 양의 조합으로 적절하게 존재한다.
본 발명의 항체는, 예를 들어 마이크로캡슐 또는 마이크로에멀젼 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. (1980); Park et al., Molecules 10: 146-161 (2005); Malik et al., Curr. Drug. Deliv. 4: 141-151 (2007)); 서방성 제형물 (Putney and Burke, Nature Biotechnol. 16: 153-157, (1998)) 또는 리포솜 (Maclean et al., Int. J. Oncol. 11: 235-332 (1997); Kontermann, Curr. Opin. Mol. Ther. 8: 39-45 (2006))으로, 표적 세포/조직에 전달하기에 적합한 임의의 형태로 제형화될 수 있다.
본 발명에서 제공되는 항체는 또한, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들면, 리포좀, 알부민 미소 구체, 마이크로 에멀젼, 나노 입자 및 나노 캡슐)으로, 각각 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합 (interfacial polymerization)에 의해 제조되는 마이크로캡슐, 예를 들면, 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로 캡슐 및 폴리-(메타메타크릴레이트) 마이크로 캡슐 또는 매크로 에멀젼 (macroemulsion)에 봉입될 수 있다. 이러한 기술은, 예를 들면 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA]에 개시되어 있다.
이로 제한되는 것은 아니나, 리포좀, 마이크로입자, 마이크로캡슐 내의 캡슐화, 항체를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개 엔도시토시스 (endocytosis) (예를 들어, 문헌 [Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)] 참조), 레트로 바이러스 또는 기타 벡터의 일부로서의 핵산의 제작 등을 비롯한 다양한 전달 시스템이 공지되어 있으며, 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 베타 클로토에 결합하는 항체)의 투여에 이용될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 본 발명에서 제공되는 조성물, 예방 또는 치료제는 제어 방출 또는 서방출 시스템으로 전달될 수 있다. 일 실시형태에서, 제어 또는 서방출의 달성을 위해, 펌프가 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574] 참조). 또 다른 실시형태에서, 예방 또는 치료제 (예를 들어, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 베타 클로토에 결합하는 항체) 또는 본 발명의 조성물의 제어 또는 서방출의 달성을 위해, 중합체 물질이 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; see also Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105); 미국 특허 제 5,679,377호; 미국 특허 제 5,916,597호; 미국 특허 제 5,912,015호; 미국 특허 제 5,989,463호; 미국 특허 제 5,128,326호; PCT 공보 WO 99/15154; 및 PCT 공보 WO 99/20253] 참조). 서방성 제형물로 이용되는 중합체의 예에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 폴리 (2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리 (메틸 메타크릴레이트), 폴리 (아크릴산), 폴리 (에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리 (메타크릴산), 폴리글리콜라이드 (PLG), 폴리 무수물, 폴리 (N-비닐 피롤리돈 ), 폴리 (비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리 (에틸렌 글리콜), 폴리락티드 (PLA), 폴리 (락티드-코-글리코라이드) (PLGA), 및 폴리오르토에스테르가 포함된다. 일 실시형태에서, 서방출 제형물에 사용되는 중합체는 비활성이며, 침출 불순물이 존재하지 않고, 저장시 안정하며, 멸균 상태이고, 생분해성이다.
또 다른 실시형태에서, 제어 또는 서방출 시스템은, 치료 표적, 예를 들면, 비강 또는 폐의 근위에 배치될 수 있으며, 따라서, 전신 투여량의 일부만이 필요하다 (예를 들어, 문헌 [Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)] 참조). 제어 방출 시스템은, 예를 들면 문헌 [Langer (1990, Science 249:1527-1533)]에서 논의된다. 본 발명에서 개시되는 바와 같은 베타 클로토에 결합하는 하나 또는 그 이상의 항체를 포함하는 서방출 제형물의 생성을 위해, 당업자에 공지된 임의의 기술이 사용될 수 있다. (예를 들어, 문헌 [미국 특허 제 4,526,938, PCT 공보 WO 91/05548, PCT 공보 WO 96/20698, Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39:179- 189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, and Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760] 참조).
치료법
본 발명의 항체는, 예를 들면 시험관 내, 생체 외 및 생체 내 치료법에서 사용될 수 있다. 일 측면에서, 본 발명은 생체 내 또는 시험관 내에서, 질환, 장애 또는 병증을 치료 또는 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 항-베타 클로토 항체에 세포를 노출시키는 단계를 포함한다.
일 측면에서, 본 발명의 항체는, 예를 들면 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환, 대사 증후군을 비롯한 질환, 장애 또는 병증 및, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과를 모방 또는 증대하는 것이 바람직한 광범위한 임의의 질환, 장애 또는 병증의 치료 또는 예방에 사용된다.
일 측면에서, 항-베타 클로토 항체 또는 그의 단편의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 질환, 장애 또는 병증의 치료 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 질환, 장애 또는 병증의 치료 방법은, 항-베타 클로토 항체 및, 임의로, 본 발명에서 개시된 것과 같은 적어도 하나의 추가적 치료제를 포함하는 약제학적 제형물의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
항-베타 클로토 항체 또는 그의 단편은 치료 목적을 위해, 인간에 투여될 수 있다. 또한, 항-베타 클로토 항체 또는 그의 단편은 수의과적 목적 또는 인간 질환의 동물 모델로서 항체가 교차 반응하는 베타 클로토를 발현하는 비인간 포유동물 (예를 들어, 영장류, 돼지, 랫트 또는 마우스)에 투여될 수 있다. 후자의 경우, 이러한 동물 모델은 본 발명의 항체의 치료 효능 (예를 들어, 투여량 시험 및 투여 시간 과정)의 평가에 유용할 수 있다.
본 발명의 항체는 치료법의 기타 조성물과 병용하여 또는 단독으로 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 항-베타 클로토 항체는 적어도 하나의 추가적 치료제 및/또는 어주번트와 공동 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 상기 추가적 화합물은 항-베타 클로토 항체 이외의 치료 항체이다.
상기에서 언급된 이러한 병용 치료는 병용 투여 (2개 또는 그 이상의 치료제가 동일 제형물 또는 별도 제형물에 포함됨) 및 개별 투여를 포괄하며, 이러한 경우, 본 발명의 항-베타 클로토 항체 또는 그의 단편의 투여는 추가적 치료제 및/또는 어주번트 투여 이전, 동시 및/또는 이후에 이루어질 수 있다. 본 발명의 항체는 또한, 제한 없이, 본 발명에서 개시된 바와 같은 것들을 포함하여, 추가적 치료 섭생에 의해, 병용 사용될 수 있다.
본 발명의 항체 (및 임의의 추가적 치료제 또는 어주번트)는 비경구, 피하, 복막 내, 폐내 및 비내 및 국소 처리를 위해, 바람직한 경우, 병변 내 투여 (intralesional administration)를 비롯한 임의의 적절한 수단에 의해, 투여될 수 있다. 비경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 또는 피하 투여가 포함된다. 또한, 상기 항체 또는 접합체는, 특히 상기 항체 또는 그의 단편의 감소된 투여량으로, 펄스 주입 (pulse infusion)에 의해, 적절하게 투여된다. 투여는, 투여가 단기간인지 또는 만성인지에 따라, 예를 들면 정맥 내 또는 피하 주입과 같은 주입에 의한 임의의 적절한 경로에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명의 항체는 양질의 의료 행위에 일관된 방식으로, 제형화, 복용 및 투여된다. 맥락상 고려 인자에는, 치료되는 특정 장애, 치료되는 특정 포유 동물, 각 환자의 임상 상태, 장애 원인, 상기 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 스케줄 및 의료진에 알려진 기타 인자가 포함된다. 항-베타 클로토 항체는 반드시 그럴 필요는 없으나, 문제의 장애를 예방 또는 치료하는데 현재 사용되는 하나 또는 그 이상의 제제와 함께, 임의로 제형화된다. 이러한 다른 제제의 유효량은, 제형물 내에 존재하는 항체 또는 면역접합체의 양, 장애 또는 치료 유형 및 전술된 기타 인자에 의존적이다. 이들은 일반적으로, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 투여 경로에 의해, 동일한 투여량으로 또는, 본 발명에서 개시되는 바와 같은 투여량의 약 1 내지 99% 또는, 경험적/임상적으로 적절한 것으로 측정된 임의의 투여량 및 임의의 경로에 의해, 사용된다.
질환, 장애 또는 병증의 예방 또는 치료에 있어서, (본 발명에서 개시된 바와 같은 제제와 같은 하나 또는 그 이상의 기타 추가적 치료제와 병용하여 또는 단독으로 사용되는 경우) 본 발명의 항-베타 클로토 항체의 적절한 투여량은, 치료되는 질환, 장애 또는 병증의 유형, 질환, 장애 또는 병증의 중증도 및 과정, 예방 또는 치료 목적의 상기 항체의 투여 여부, 이전 치료, 환자의 임상 병력 및 상기 항체에 대한 반응성 및 주치의의 재량에 의존적일 것이다. 항-베타 클로토 항체는 1회 또는 일련의 치료에 걸쳐, 환자에 적절하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg (예를 들어, 0.1mg/kg-20mg/kg, 1mg/kg-15mg/kg, 등)의 항체가, 예를 들면, 하나 또는 그 이상의 개별 투여에 의한 경우든 또는 지속적 주입에 의한 경우든지, 환자에게 투여되는 초기 후보 투여량일 수 있다. 1회의 전형적 일일 투여량은, 전술된 인자에 따라, 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상의 범위일 수 있다. 상태에 따라, 여러 날 또는 더 장기간 동안의 반복 투여의 경우, 치료는 일반적으로, 원하는 질환 증상의 억제가 발생할 때까지, 지속된다. 상기 항체의 예시적 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10.0 mg/kg의 범위일 수 있다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 3.0 mg/kg, 4.0 mg/kg, 5.0 mg/kg, 6.0 mg/kg, 7.0 mg/kg, 8.0 mg/kg, 9.0 mg/kg, 또는 10.0 mg/kg (또는 이들의 조합)의 하나 또는 그 이상의 투여가 상기 환자에 투여될 수 있다. 이러한 투여는 (예를 들어, 환자가 상기 항체를 약 2회 내지 약 20회 또는, 예를 들어 약 6회 투여 받을 수 있도록) 간헐적으로, 예를 들어, 매주 또는 매 3주 마다 투여될 수 있다. 초기 다량의 부하 투여 후, 1회 또는 그 이상의 소량 투여가 투여될 수 있다. 예시적 투여 섭생에는, 상기 항체의 초기 부하 투여 후, 유지 투여 (예를 들어, 매주)에 의한 투여가 포함된다. 초기 부하 투여는 유지 투여 보다 다량일 수 있다. 그러나, 다른 투여량 섭생이 유용할 수 있다. 이 치료법의 진행은 종래 기술 및 분석에 의해, 용이하게 모니터링된다.
진단 방법 및 검출 방법
일 측면에서, 본 발명의 항-베타 클로토 항체 및 그의 단편은 베타 클로토의 존재 검출에 유용하다. 이러한 항-베타 클로토 항체에는, 인간 및/또는 시아노 베타 클로토에 결합하나, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달 활성을 유도하지 않는 것들이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 바와 같은 용어 "검출"에는 정량적 또는 정성적 검출이 포괄된다. 특정 실시형태에서, 생체 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다.
일 측면에서, 본 발명은 생체 샘플에서, 베타 클로토의 존재를 검출하는 방법을 제공한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은, 항-베타 클로토 항체와 베타 클로토의 결합을 가능하게 하는 조건하에서, 생체 샘플을 항-베타 클로토 항체를 접촉시키는 단계 및, 항-베타 클로토 항체와 베타 클로토 사이에, 복합체가 생성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다.
일 측면에서, 본 발명은 베타 클로토의 발현과 관련된 장애를 진단하는 방법을 제공한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은, 시험 세포를 항-베타 클로토 항체와 접촉시키는 단계; 항-베타 클로토 항체와 베타 클로토의 결합을 검출함으로써, 상기 시험 세포에 의한 베타 클로토의 (정량적 또는 정성적) 발현 수준을 측정하는 단계; 및, 대조군 세포 (예를 들어, 시험 세포와 동일한 조직 기원의 정상 세포 또는, 이러한 정상 세포와 비교되는 수준에서, 베타 클로토를 발현하는 세포)에 의한 베타 클로토의 발현 수준과, 시험 세포에 의한 베타 클로토의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함하며, 여기서, 대조군 세포에 비해서, 시험 세포에 의한 더욱 높은 수준의 베타 클로토 발현은, 베타 클로토 발현의 증가와 관련된 장애의 존재를 시사한다. 특정 실시형태에서, 시험 세포는, 베타 클로토의 발현과 관련된 질환, 장애 또는 병증 및/또는, FGF19 및/또는 FGF21의 생체 내 효과를 모방 또는 증대시키는 것이 바람직한 질환, 장애 또는 병증을 가질 것으로 의심되는 개체로부터 수득된다. 특정 실시형태에서, 상기 질환, 장애 또는 병증은, 예를 들면, 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환, 또는 대사 증후군이다. 이러한 예시적 질환, 장애 또는 병증은 본 발명의 항-베타 클로토 항체를 이용하여 진단될 수 있다.
특정 실시형태에서, 전술된 것과 같은 진단 또는 검출 방법은, 그의 표면에서, 베타 클로토를 발현하는 세포로부터 수득된 막 제조물에서, 또는 세포의 표면에서 발현되는 베타 클로토와 항-베타 클로토 항체의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은, 항-베타 클로토 항체와 베타 클로토의 결합을 가능하게 하는 조건하에서, 항-베타 클로토 항체와 세포를 접촉시키는 단계 및, 세포 표면에서, 항-베타 클로토 항체와 베타 클로토 사이에, 복합체가 생성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 세포 표면에서, 발현되는 베타 클로토와 항-베타 클로토 항체의 결합을 검출하기 위한 예시적 분석에는 "FACS" 분석이 있다.
베타 클로토와 항-베타 클로토 항체의 결합을 검출하기 위해, 기타 특정 방법이 이용될 수 있다. 이러한 방법에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 웨스턴 블롯, 방사성 면역 측정법, ELISA (효소 결합 면역 분석법), "샌드위치" 면역 분석, 면역 침전 분석, 형광 면역 분석, 단백질 A 면역 분석 및 면역 조직 화학 (IHC)과 같은, 당 업계에 잘 알려진 항원 결합 분석이 포함된다.
특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체가 표지된다. 표지에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 예를 들면, 효소 반응 또는 분자 상호 작용을 통해, 간접적으로 검출되는 효소 또는 리간드와 같은 모이어티뿐만 아니라, 직접적으로 검출되는 표지 또는 모이어티 (예를 들어, 형광, 발색, 전자 밀도, 화학 발광, 및 방사성 표지)가 포함된다. 예시적 표지에는, 이로 제한되는 것은 아니나, 방사성 동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단, 예를 들어, 희토류 킬레이트 또는 플루오레세인 및 그의 유도체, 로다민 및 그 유도체, 단실 (dansyl), 움벨리페론 (umbelliferone), 루시퍼라아제, 예를 들면 파이어플라이 루시퍼라아제 및 박테리아 루시퍼라아제 (예를 들어, 미국 특허 제 4,737,456호 참조), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 겨자무과산화효소 (HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 리소자임, 당류 옥시다제, 예를 들어, 글루코오스 옥시다제, 갈락토오스 옥시다제 및 글루코오스-6-포스페이트 탈수소 효소, HRP, 락토페록시다제 또는 마이크로페록시다제와 같은 염료 전구 물질을 산화시키기 위해, 과산화수소를 사용하는 효소와 커플링된 헤테로사이클릭 옥시다제, 예를 들어 우리카아제 (uricase) 및 크산틴 옥시다제, 비오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파지 표지, 안정한 자유 라디칼 등이 포함된다.
특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는 불용성 메트릭스 상에 고정된다. 고정됨으로 해서, 용액 중에 유리되어 남아 있는 임의의 베타 클로토로부터 항-베타 클로토 항체의 분리가 수반된다. 이것은 통상적으로, 수 불용성 매트릭스 또는 표면에의 흡착 (예를 들어, 문헌 [Bennich et al., U.S. 3,720,760] 참조), 또는 공유 커플링 (예를 들면, 글루타르알데히드 가교 사용)에 의한 것으로서, 분석 절차 전에, 항-베타 클로토 항체를 불용화시키거나, 또는, 예를 들면 면역침전법에 의해, 항-베타 클로토 항체와 베타 클로토 사이의 복합체 형성 후, 항-베타 클로토 항체를 불용화시킴으로써, 달성된다.
진단 또는 검출의 임의의 상기 실시형태는 항-베타 클로토 항체에서 또는 그에 더하여, 본 발명의 면역 접합체 (immunoconjugate)를 사용하여, 수행할 수 있다.
분석
본 발명의 항-베타 클로토 항체는 당 업계에 공지된 다양한 분석에 의한 그의 물리/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성을 특징으로 할 수 있다.
1. 활성 분석
일 측면에서, 생물학적 활성을 가지는 그의 항-베타 클로토 항체를 확인하기 위한 분석이 제공된다. 생물학적 활성에는, 예를 들면, 글루코오스 및/또는 지질 대사에 대한 효과를 측정하는 분석이 포함될 수 있다. 예를 들면, 혈중 글루코오스 분석이 이용될 수 있다. (예를 들어, 마우스 꼬리 스닙 (snip) 또는 인간 혈액 샘플에서) 혈중 글루코오스는, 제조자의 지침에 ㄸ라, ACCU-CHEK Active 미터 (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)에 의해 판독되는 ACCU-CHEK Active 시험 스트립을 이용하여, 측정할 수 있다. 또한, 예를 들면, 지질 특성 분석이 이용될 수 있다. (예를 들어, 마우스 꼬리 스닙 또는 인간 혈액 샘플의) 전혈을 일반 모세관 (BD Clay Adams SurePrep, Becton Dickenson and Co. Sparks, MD)에 수집할 수 있다. Autocrit Ultra 3 (Becton Dickinson and Co. Sparks, MD)에서, 상기 튜브를 회전시킴으로써, 혈청과 혈액 세포를 분리할 수 있다. 제조자의 지침에 따라, Integra 400 Clinical Analyzer (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)를 사용하여, 지질 특성 (트리글리세리드, 총 콜레스테롤, HDL, 및 비-HDL)에 대해, 혈청 샘플을 분석할 수 있다.
2. 결합 분석 및 기타 분석
일 측면에서, 항-베타 클로토 항체는 그의 항원 결합 활성에 대해 시험된다. 예를 들면, 특정 실시형태에서, 항-베타 클로토 항체는, 세포 표면에서 발현되는 외인성 또는 내인성 베타 클로토에 결합하는 그의 능력에 대해 시험된다. 이러한 시험을 위해, FACS 분석이 이용될 수 있다.
베타 클로토에 대해 생성된 모노클로날 항체의 패널은, 에피토프 비닝으로 알려진 과정으로서, 그들이 인식하는 에피토프를 기반으로 하여, 분류할 수 있다. 에피토프 비닝은 전형적으로, 또 다른 항체의 존재하에, 한가지 항원에 결합하는 항체의 능력을 평가하는 경쟁 분석을 이용하여, 수행된다. 예시적 경쟁 분석에서, 면역화된 베타 클로토를, 베타 클로토에 결합하는 제1 표지 항체 및, 베타 클로토에 결합하는 제1 항체와 경쟁하는 그의 능력에 대해 시험되는 제2 비표지 항체를 포함하는 용액 중에서 인큐베이션한다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 면역화된 베타 클로토를, 제1 표지 항체를 포함하나, 제2 비표지 항체는 포함하지 않는 용액 중에 인큐베이션한다. 베타 클로토와 제1 항체의 결합을 가능하게 하는 조건하에서의 인큐베이션 후, 과량의 비결합 항체를 제거한 후, 면역화된 베타 클로토와 결합된 표지의 양을 측정한다. 면역화된 베타 클로토와 결합된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해서, 시험 샘플에서 대체로 감소한 경우, 이는, 베타 클로토와의 결합에 있어서, 제2 항체가 제1 항체와 경쟁한다는 것을 시사하는 것이다. 특정 실시형태에서, 면역화된 베타 클로토는, 세포의 표면 또는, 그의 표면에서 베타 클로토를 발현하는 세포로부터 수득되는 막 제조물에 존재한다.
예피토프 비닝의 고출력 방법이 또한 당 업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 모노클로날 항체의 특성화를 위한 다중 경쟁 항체 비닝 방법이 개진된 문헌 [Jia et al., J. Immunol. Methods 2004, 288(1-2):91-98] 및 다중 쌍 분석에 의한 쥣과 동물의 모노클로날 항체의 에피토프 비닝이 개진된 문헌 [Miller et al., J. Immunol. Methods 2011, 365(1-2):118-25] 참조).
*3. 에피토프 매핑 ( epitope mapping )
에피토프 매핑은, 표적 단백질 항원 상의 항체의 결합 자리 또는 에피토프를 확인하는 과정이다. 항체 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체 구조적 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프는 단백질에서, 연속 아미노산 서열에 의해 형성된다. 입체 구조적 에피토프는, 단백질 서열에서, 불연속이나, 단백질의 접힘으로, 함께 그의 3차원 구조로 되는 아미노산에 의해 형성된다.
표적 단백질 항원의 항체 에피토프의 매핑을 위한 다수의 방법이 당 업계에 공지되어 있다. 이에는, 돌연변이 유발 방법, 펩티드 스캔 방법, 디스플레이 방법, 관련 방법 및 질량 스펙트럼, 및 구조 결정법이 포함된다.
부위 특이적 돌연변이 유발 방법에는, 단백질 서열을 따라 치환을 체계적으로 도입시킨 후, 항체 결합에 대한 각각의 치환의 효과를 측정함으로써, 주요 아미노산이 확인되는 표적 부위 특이적 돌연변이 유발이 포함된다. 이것은, 예를 들면, 문헌 [Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085]에 개시된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발" 또는 인간 베타 클로토의 아미노산 잔기의 점 돌연변이 유발의 기타 형태에 의해, 수행될 수 있다. 그러나, 돌연변이유발 연구는, 베타 클로토의 모든 3차원 구조에 중요하나, 항체-항원 접촉에 직접 관여하지 않는 아미노산 잔기를 확인할 수 있으며, 다라서, 이 방법을 이용하여 측정되는 기능성 에피토프의 확인을 위해, 다른 방법이 필요할 수 있다.
샷건 돌연변이유발 매핑에는, 표적 단백질의 모든 아미노산을 포함하는 전체 라이브러리 및 고유의 아미노산 돌연변이를 가지는 라이브러리의 각각의 클론의 표적 유전자의 종합적 플라스미드-돌연변이 라이브러리 (comprehensive plasmid-mutation library)가 사용된다. 돌연변이 라이브러리를 구성하는 클론을 마이크로 플레이트에 각각 배치하고, 살아있는 포유 동물의 세포 내에서 발현시키고, 관심 대상 항체에 의한 면역 활성에 대해 시험한다. 항체 에피토프에 중요한 아미노산을 반응성의 손실에 의해 확인한 후, 단백질 구조 상에 매핑하여, 에피토프를 시각화한다. 분석을 자동화함으로써, 새로운 에피토프 지도를 수일 내지 수주 내에 유도할 수 있다. 포유 동물 세포 내 단백질의 기본 구조가 이용되므로, 이 기술은 선형 및 입체 구조적 에피토프 구조의 복잡체 단백질 상의 매핑을 가능하게 한다. (예를 들어, 문헌 [Paes et al., J. Am. Chem. Soc. 131(20): 6952-6954 (2009); Banik and Doranz, Genetic Engineering and Biotechnology News 3(2): 25-28 (2010)] 참조).
펩티드 스캐닝 방법을 이용하여, 항-베타 클로토 항체에 의해 결합된 에피토프를 또한 측정할 수 있다. 펩티드 스캐닝에서, 표적 단백질, 베타 클로토의 중첩 절편의 짧은 펩티드 서열의 라이브러리를 관심 대상 항체와 결합하는 그의 능력에 대해 시험한다. 펩티드를 합성한 후, "pepscan" 방법론 (예를 들어, 문헌 [WO 84/03564; WO 93/09872] 참조)에서와 같이, 고상 스크리닝의 임의의 여러 방법에 의해, 예를 들어, 칩 상에서, 또는 ELISA 또는 BIACORE를 이용하여, 결합에 대해 스크리닝한다 (예를 들어, 문헌 [Reineke et al., Curr. Opin. Biotechnol. 12: 59-64, 2001] 참조). 이러한 펩티드 스크리닝 방법은 일부 불연속 기능성 에피토프, 즉, 베타 클로토 폴리펩티드 사슬의 기본 서열에서 인접하지 않은 아미노산 잔기를 포함하는 기능성 에피토프를 검출할 수 없다.
CLIPS (스캐폴드 상의 펩티드의 화학적 결합)로 불리는 최근 개발된 기술이 입체 구조적에피토프의 매핑에 이용될 수 있다. 스캐폴드 펩티드에서, 무손상 단백질의 해당 서열과 동일한 공간 구조가 채택될 수 있도록, 상기 펩티드의 루프 말단이 합성 스캐폴드에 고정된다. CLIPS 기술은, 항체 결합에 대해 분석될 수 있는 입체 구조적 에피토프의 생성을 위해, 고리형 구조로 선형 펩티드를 고정시키고 ('단일-루프' 형식), 단백질 결합 자리의 다른 부분을 함께 제공하는데 ('더블-루프', '트리플-루프' 등의 형식), 이용된다 (예를 들어, 미국 특허 제 7,972,993호 참조).
본 발명의 항체에 의해 결합되는 에피토프는 또한, 예를 들면, 전술된 바와 같은 파지 디스플레이, 미생물 디스플레이 및 리보솜/mRNA 디스플레이를 비롯한 디스플레이 기술을 이용하여, 매핑될 수 있다. 이들 방법에서, 펩티드 단편의 라이브러리는 파지 또는 세포의 표면에 디스플레이한다. 그후, 선택적 결합 분석을 이용하여, 이들 단편에 대한 mAb를 스크리닝함으로써, 에피토프를 매핑한다. 파지 디스플레이를 이용하여 수득되는 선형 친화성-선택 펩티드를 기반으로 하는 입체 구조적 에피토프의 예측을 가능하게 하는 다수의 계산 도구가 개발되었다 (예를 들어, 문헌 [Mayrose et al., Bioinformatics 23: 3244-3246, 2007] 참조). 파지 디스플레이에 의한 입체 구조적 에피토프의 검출을 위한 방법이 또한 적용 가능하다. 입체 구조적 에피토프의 확인을 위해, 세포 표면에 적절하게 접힌 항원 단편이 발현되도록 하는데, 미생물 디스플레이 시스템이 또한 이용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Cochran et al., J. Immunol. Meth. 287: 147-158, 2004; Rockberg et al., Nature Methods 5: 1039-1045, 2008] 참조).
단백질 분해 및 질량 분석법을 포함하는 방법이 또한 항체 에피토프의 측정에 사용될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Baerga-Ortiz et al., Protein Sci. 2002 June; 11(6): 1300-1308] 참조). 제한된 단백질 분해에 있어서, 항체의 존재 및 부재하에, 다른 단백질 분해 효소에 의해, 항원을 절단한 후, 질량 분석법에 의해, 단편을 확인한다. 에피토프는, 항체의 결합시, 단백질 분해로부터 보호되는 항원의 영역이다 (예를 들어, 문헌 [Suckau et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:9848-9852, 1990] 참조). 추가적 단백질 분해를 기반으로 하는 방법에는, 예를 들면 선택성 화학적 변형 (예를 들어, 문헌 [Fiedler et al., Bioconjugate Chemistry 1998, 9(2): 236-234, 1998] 참조), 에피토프 절제 (epitope excision) (예를 들어, 문헌 [Van de Water et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 1997, 85(3): 229-235, 1997] 참조), 및 최근 개발된 수소-중수소 (H/D) 교환 방법 (예를 들어, 문헌 [Flanagan, N., Genetic Engineering and Biotechnology News 3(2): 25-28, 2010] 참조)이 포함된다.
구조적 방법, 예를 들어 X선 결정 구조 측정법 (예를 들어, WO 2005/044853 참조), 관심 대상 항체와의 복합체에서, 유리되는 경우 및 결합하는 경우, 불안정한 아미드 수소의 H-D 교환율의 NMR 측정을 비롯한 분자 모델링 및 핵자기 공명 (NMR) 분광법 (예를 들어, 문헌 [Zinn-Justin et al. (1992) Biochemistry 31:11335-11347; Zinn-Justin et al. (1993) Biochemistry 32:6884-6891] 참조)에 의해, 본 발명의 항체에 의해 결합되는 에피토프를 또한 측정할 수 있다.
예를 들면, 베타 클로토에 대해 유발된 항체의 에피토프와의 결합에 대한 스크리닝, 상기 에피토프 서열을 포함하는 인간 베타 클로토의 단편을 포함하는 펩티드에 의한 동물의 면역화 또는, 파지 디스플레이를 이용한, 상기 에피토프 서열과의 결합에 대한 항체의 선택에 의해, 본 발명의 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 추가적 항체를 수득할 수 있다. 동일한 기능성 에피토프에 결합하는 항체는, 베타 클로토의 생물학적 활성의 차단과 같은 유사한 생물학적 활성을 나타낼 것으로 예측되며, 이러한 활성은 상기 항체의 기능성 분석에 의해, 확인할 수 있다.
추가적 활성 분석
일 실시형태에서, 본 발명의 항-베타 클로토 항체는, 베타 클로토의 생물학적 활성을 억제하는 길항제 항체이다. 본 발명의 항-베타 클로토 항체는, 이들이 베타 클로토의 생물학적 활성을 억제하는지를 측정하기 위해, 분석할 수 있다.
일 측면에서, 정제된 항-베타 클로토 항체는, 이로 제한되는 것은 아니나, N 말단 서열 분석, 아미노산 분석, 비변성 크기 배제 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC), 질량 분광분석법, 이온 교환 크로마토그래피 및 파파인 분해 (papain digestion)를 비롯한 일련의 분석을 추가적 특징으로 한다.
일 실시형태에서, 본 발명에서는, 다양한 응용을 위한 바람직한 후보가 될 수 있도록 하는 효과기 기능의 일부를 가지나, 그 전부를 가지는 것은 아닌 변경된 항체로서, 상기 항체의 생체 내 반감기가 중요하나, (보체 및 ADCC와 같은) 특정 효과기 기능이 불필요하거나 유해한 항체가 고려된다. 특정 실시형태에서, 원하는 특성만이 유지된 것을 확실히 하기 위해, 상기 항체의 Fc 활성을 측정한다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해, 시험관 내 및/또는 생체 내 세포 독성 분석을 실행할 수 있다. 예를 들면, 상기 항체가 FcγR 결합이 결여되었으나 (따라서, ADCC 활성의 결여 가능성이 있음), FcRn 결합능은 보유하는 것을 확실히 하기 위해, Fc 수용체 (FcR) 결합 분석을 실행할 수 있다. 관심 대상 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관 내 분석이, 예를 들면, 미국 특허 제 5,500,362호 또는 제 5,821,337호에 개시되어 있다. 이러한 분석에 유용한 효과기 세포에는 말초혈 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포가 포함된다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 예를 들면, 문헌 [Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서, 관심 대상 분자의 ADCC 활성을 생체 내에서 평가할 수 있다. 상기 항체가 C1q와 결합할 수 없고, 따라서 CDC 활성이 결여되어 있다는 것을 확인하기 위해, C1q 결합 분석을 또한 실시할 수 있다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들면, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)]에 개시된 바와 같은 CDC 분석을 수행할 수 있다. 당 업계에 공지된 방법을 이용하여, FcRn 결합 및 생체 내 제거율/반감기 측정을 또한 수행할 수 있다.
전술한 본 발명이 명료한 이해를 위해, 예시 및 실시예에 의해 일정 정도 상세히 개시되었으나, 상기 설명 및 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시 내용은 그 전문이 명백히 참조로서 포함된다.
실시예
하기는 본 발명의 방법의 실시예 및 조성물이다.
실시예 1: 베타 클로토에 대한 항체의 생성
예를 들면, (i) 인간 베타 클로토 (HuKLB) 및 FGF 수용체 1c (FGFRIc 또는 RIc)를 발현하는 세포 및 (ii) 시아노몰거스 베타 클로토 (시아노 KLB) 단백질을 이용하여, 마우스를 면역화함으로써, 베타 클로토에 대한 항체를 생성시켰다.
예를 들면, 베타 클로토 발현 세포를 하기와 같이 제조하였다. 293EXPI (Invitrogen) 세포를, HuKLB (서열번호:297) 및, 아미노산 위치 623에 돌연변이를 가지는 FGFR1c의 변이체 (예를 들어, 서열번호:308, 그러나 돌연변이를 가짐 D623N)를 인코딩하는 핵산 서열을 이용하여, 일시적으로 동시 형질감염시켰다. FACS에 의해, 각각의 특이적 항체에 의한 R1c 및 HuKLB의 발현에 대해, 세포를 분석하였다. 세포를 PBS에서 2회 세척한 후, 원심분리에 의해 펠렛팅한 다음, 면역화를 위해, 6 x 107 세포에서 개별 바이알에 동결시켰다. 129/B6 동물을 어주번트와 함께, 1 x 107 세포로 면역화시켰다 (Ribi, CpG, and PolyIC). 적절한 역가의 유도에 필요한 기간 동안, 동물을 매 2주마다 부스팅시켰다. 동물을 R1c 및 HuKLB 과발현-293EXPI 세포로 4회 부스팅시킨 후, HuKLB 및 CyKLB 단백질로 부스팅시켰다. ELISA 및 FACS에 의해, 역가를 측정하였다. 림프구의 단일 세포 현탁액을 적합한 역가 동물의 비장 및 배수 림프절 (draining lymph node)로부터 수득하였다. 전기 융합에 의해, 1:2의 비율로 세포를 SP2/0 골수종 세포와 융합시켰다. 융합 세포를 HAT 선택의 존재하에, 24 X 384 웰 플레이트에 70 μL의 플레이트 당 2.5 ×106 세포에서 플레이팅하였다. 7일 후, 상청액 50 μL를 제거하고, 신선한 HAT 함유 배지로 교체하였다. 배양 10-14일 후, 상청액을 수집하고, 결합 확인을 위해, HuKLB 단백질을 이용한 Biacore 또는, R1c 및 HuKLB 과발현-293EXPI 세포를 이용한 FACS에 의해, 스크리닝에 적용하였다. 양성 클론은 추가로 선택한 후, 서브클로닝에 적용하였다.
면역화 및 융합의 첫 번째 작업으로, 적어도 25-30개의 384 웰 플레이트를 HuKLB (예를 들어, HuKLB 단백질 및/또는 세포 발현 HuKLB)와의 결합에 대해 스크리닝하였다. 면역화 및 융합의 두 번째 작업으로, 유사한 개수의 플레이트를 첫 번째 작업에서 개시된 바와 같이, 스크리닝하였다. 수 천개의 클론을 스크리닝하고, 실시예 2 및 3에서 개시되는 바와 같이, 결합, 친화성 및 에피토프 특이성에 대한 분석을 포함한 추가 연구를 위해, 수 백개의 클론을 선택하였다. FGF 수용체 리간드 FGF19 및/또는 FGF21과 유사한 작용제 활성 (예를 들어, FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달 활성)에 대한 것을 포함하여, 실시예 4 및 5에 개시되는 바와 같은 기능성 분석에서, 수 백개의 하이브리도마 상청액을 또한 시험하였다.
실시예 2: 베타 클로토에 대한 항체의 스크리닝 및 선택
예를 들면, 실시예 1에 개시된 바와 같이, 베타 클로토에 대한 항체를 하이브리도마로부터 생성시켰다. FACS-기반 및/또는 Biacore-기반 분석에서, 하이브리도마 상청액을 베타 클로토 (예를 들어, 인간 및/또는 시아노 베타 클로토)와의 결합에 대해 스크리닝하였다.
예를 들면, 배양 2주 후, FACS 기반 결합 스크린에 의해, 하이브리도마 상청액을 인간 베타 클로토와 결합하는 모노클로날 항체에 대해 스크리닝하였다. 요약하면, 하이브리도마 상청액을 4℃에서, 30분 동안 인간 베타 클로토 과발현 세포와 함께 인큐베이션하였다. PBS/1% BSA/0.1% 아지드로 세척한 후, 인간 베타 클로토 과발현 세포를 4℃에서, 30분 동안 표지 항-마우스 Fc (Jackson Immunoresearch)와 함께 인큐베이션하였다. PBS/1% BSA/0.1% 아지드로 세척한 후, 세포를 유동 세포 계수기 (FACS Calibur)에서 취득하여, 유세포 분석 소프트웨어 (FlowJo)로 분석 하였다. 결합 항체는 단지 표지 항-마우스 Fc와 인큐베이션된 세포로부터 변화를 나타내는 것이다.
예를 들면, 배양 2주 후, Biacore 기반 결합 스크린에 의해, 하이브리도마 상청액을 인간 베타 클로토와 결합하는 모노클로날 항체에 대해 스크리닝하였다. 요약하면, 항-마우스 Fc 항체 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 아민 커플링 시약 (GE Healthcare LifeSciences, Piscataway, NJ)을 이용하여, CM5 칩의 4개의 모든 유동 세포 상에 고정시켰다. 하이브리도마 상청액을 PBS-P 완충액 (PBS 함유 0.005% P20)로 3배 희석한 후, 항체의 포획을 위해, 유동 세포 2, 3 및 4에, 30초간 주입하였다 (유동 세포 1은 참조로서 사용됨). 그 후, 각각의 유동 세포에서, 포획 항체에 대한 결합을 시험하기 위해, 30 μL/min의 유동 속도에서, 60초간 인간 베타 클로토 (25 nM, R&D Systems, Minneapolis, MN)를 단시간 주입하였다.
실시예 1에서 개시된 바와 같은 2회의 면역 및 융합 작업으로부터, 하이브리도마 상청액의 56개의 384 웰 플레이트를 FACS 및/또는 Biacore에 의해 결합에 대해 분석하였다. 이들 분석에서, 대략 250개의 항체가 인간 베타 클로토에 결합하는 것으로서 확인되었다. 이들 항체를 정제한 후, Biacore에 의해, 인간 베타 클로토 및 시아노 베타 클로토와의 그의 결합 친화성과, 실시예 3에 개시되는 바와 같은 리포터 분석에 의해, 그의 기능성 활성에 대해 순차적으로 시험하였다.
추가적 Biacore-기반 결합/스크리닝 분석에서, 인간 및 시아노 베타 클로토에 대한 항체의 결합 친화성을 측정하였다. 예를 들면, Biacore에 의한 저 해상도 KD 측정에 의해, 항체를 인간 베타 클로토 및 시아노 베타 클로토에 대한 그의 결합 친화성을 기반으로 한 순서로 등급화하였다. 요약하면, 항-마우스 Fc 항체 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 아민 커플링 시약 (GE Healthcare LifeSciences, Piscataway, NJ)을 이용하여, CM5 칩의 4개의 모든 유동 세포에 고정시켰다. 정제된 항체를 유동 세포 2, 3 및 4에 포획하고 (~100 RU), 유동 세포 1은 참조로서 사용하였다. 그 후, 70μL/min의 유동 속도에서, 인간 또는 시아노 베타 클로토 (25 nM/PBS-P완충액)를 주입한 다음, 25℃에서 결합 동력학을 모니터링하였다.
또한, 추가적인 Biacore 기반 분석에서, 결합 친화성을 측정하였다. 예를 들면, 인간 베타 클로토 및 시아노 베타 클로토에 대한 그의 결합을 평가하기 위해, 정제 항체를 이용하여, 평형 해리 상수 (KD) 측정을 실시하였다. 전술된 바와 같이, 항-마우스 Fc 항체 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)를 아민 커플링 시약 (GE Healthcare LifeSciences, Piscataway, NJ)을 이용하여, CM5 칩의 4개의 모든 유동 세포에 고정시켰다. 정제된 항체를 유동 세포 2, 3 및 4에 포획하고 (~100 RU), 유동 세포 1은 참조로서 사용하였다. 그 후, 70μL/min의 유동 속도에서, 다른 농도의 인간 또는 시아노 베타 클로토 (1.56 nM 내지 25 nM, 2배 희석/PBS-P 완충액)를 주입한 다음, 25℃에서 결합 동력학을 평가하였다.
대표 결과는 하기 표 11에 제시된 바와 같이, KD (nM)으로 보고된다.
친화성 KD (nM)
HuKLB Cyno KLB
5H23 ~pM 0.72
1C17 0.89 3.1
1D19 1.25 2.9
2L12 0.22 1.42
3L3 1.14 2.2
3N20 3.3 3.52
4P5 0.26 0.44
5F7 1.7 2.5
1G19 N/A N/A
5C23 1.2 2.4
실시예 3: 베타 클로토에 대한 항체의 스크리닝 및 선택
예를 들면, 실시예 2에서 개시된 바와 같이, 베타 클로토에 대한 결합에 대해 선택된 항체를 경쟁 결합 분석 및 에피토프 비닝 실험에서 평가하였다.
예를 들면, FACS 분석에 의한 경쟁 결합 분석에 있어서, 제조자의 지침에 따라, A488 또는 A647 항체 표지 키트 (Invitrogen)를 이용하여, 형광 색소 (fluorochrome)에 접합된 항체 표준을 제조하였다. 접합된 항체 표준의 투여 적정을 HuKLB 과발현 세포를 이용하여 평가하였다. 결합 항체의 최대 신호의 안정기는 EC=100이며, 백그라운드 신호는 EC=0이다. 실온에서 15분 동안 하이브리도마 상청액을 이용하여, HuKLB 과발현 세포를 사전 인큐베이션함으로써, 형광 색소 표지 항체에 대한 FACS에 의한 경쟁을 수행하였다. 세척 단계 없이, EC=10 농도의 A488 또는 A647 표지 항체 표준을 첨가하였다. (100%)로서 최대 신호 및 (0%)로서 백그라운드 신호를 이용하여, 10%의 신호에 의해, 각각의 항체의 EC=10을 측정하였다. 4℃에서 30분 후, 세포를 세척한 후, FACS에 의해 분석하였다. 이들 분석에서, 경쟁 항체는, 5H23에 의한 경쟁과 대등한 신호를 나타내는 것이다. 비경쟁 항체는, 표지 항체 단독과 동일한 신호를 나타내는 것이다. 부분적 경쟁 항체는 백그라운드와 표지 항체 단독 사이에 신호를 나타내는 하나의 샘플이다. 동일한 표준 항체에 대해 완전 경쟁을 나타내는 항체는 동일한 빈으로 고려한다.
FACS에 의한 예시적 경쟁 결합 실험에서, 양성 대조군 (경쟁 항체) 또는 음성 대조군 (비경쟁 항체) 각각에 대한 항체 표준으로서, 항체 5H23 또는 3I13을 이용하였다. 대표 결과는 평균 형광 강도 (MFI)로서 보고된 것으로서, 표 12에 제시된다. 이들 실험에 있어서, 표지 항체 단독과 대등한 신호는 비경쟁 항체이며, 5H23에 의한 경쟁과 대등한 신호는 경쟁 항체이다.
항체 평균 형광 강도 (MFI)
5H23 - Alexa647 3I13 -
Alexa488
5H23 2.3 29.8
1C17 2.4 26.7
1D19 2.5 30.6
2L12 3.1 30.9
3L3 4.2 28.7
3N20 2.4 30.5
4P5 2.4 30.1
5C23 2.4 29.3
5F7 2.3 28.5
1G19 2.2 29.0
3I13 9.4 7.4
표지 항체 단독 10.8 32.4
인간 베타 클로토에 대한 상기 항체의 결합 자리를 추가로 평가하기 위해, Biacore에서, 경쟁 실험을 또한 설정하였다. 예를 들면, 2개의 항체를 CM5 칩의 2개의 유동 세포에 고정시켰다. 96 웰 마이크로 플레이트에서, 다른 항체 (베타 클로토의 농도를 5 nM에서 일정하게 유지하면서, 항체 농도를 0.1-50 nM로부터 적정함)를 이용하여, 인간 베타 클로토-항체 복합체를 제조한 후, 상기 항체 표면에 주입하였다. 측정 신호 (응답 단위 (Response Unit), RU)를 항체 용액 농도 [nM]에 대해 도시하였다. 용액 중의 항체가, 칩 표면에 고정된 항체와 동일한 에피토프를 인식하는 경우, 그 후, 용액 중의 항체의 농도가 증가함에 따라, RU의 감소가 관측되었다 (베타 클로토의 결합 자리에 대한 경쟁이 입증됨). 그러나, 용액 중의 항체가 고정된 항체와 비교하여 다른 에피토프를 인식하는 경우, RU의 증가가 관측되었다. 후자의 시나리오에서, 항체-클로토 복합체는 고정된 항체 표면에 결합할 수 있으며, 이는 신호 증가의 관측으로 이어진다.
Biacore에 의한 예시적 경쟁 결합 실험에서, 항체 5H23은 HuKLB와의 결합에 있어서, 그 자체와 경쟁하였으며, 추가적 항체 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 및 1G19는 5H23과 경쟁하였다. 이들 항체는 5H23 에피토프 빈의 멤버로 지정하였다. 이들 에피토프-관련 항체의 서열을 도 1 및 2에 정렬하여, 제시하였다. 도 2는 또한, 이들 관련 항체의 CDR의 보존 아미노산 서열을 제시한다.
실시예 4: 기능성 분석
예를 들면, 실시예 1에 개시된 바와 같이 생성된 베타 클로토에 대한 항체를 세포 기반 리포터 분석에서, 그의 기능성 활성에 대해 시험하였다.
예를 들면, 일시적으로 형질감염된 HEK293, HEK293T, 또는 L6 세포 (ATCC)를 이용하여, FGFRIc/베타 클로토 신호 전달을 측정하는 ELK1-루시퍼라아제 리포터 분석을 수행하였다. 형질감염 플라스미드는 2개의 리포터 플라스미드 Gal4-Elk1 and 5xUAS-Luc (Agilent Technologies PathDetect Elk1 trans-reporting system Cat# 219005) 및, 인간 베타 클로토 (GeneCopoeia Cat# EX-E1104-MO2) 또는 시아노몰거스 원숭이 베타 클로토 (시아노 베타 클로토) 및 인간 FGFR1c (GeneCopoeia Cat# EX-A0260-MO2)를 인코딩하는 플라스미드로 구성된다. 이들 분석에서, 세포에서, 재조합적으로 발현되는 FGFR1c/베타 클로토 수용체 복합체의 활성화는 세포 내 신호 전달 형질 도입을 유도하며, 이는 ERK 및 그 후 Elk1 인산화를 초래한다. Gal4-Elk1이 인산화되는 경우, Gal4-Elk1는 5xUAS 프로모터 영역에 결합하고, 루시퍼라아제 리포터 유전자 전사를 개시시킨다. 그 후, 루시퍼라아제 효소 분석에서, 루시퍼라아제의 활성을 측정한다.
이들 실험에서, FuGene6 또는 Fugene HD 형질감염 시약 (Promega)을 이용하여, 전술된 4개의 플라스미드 (예를 들어, 2개의 리포터 플라스미드, 베타 클로토, R1c)를 현탁액 중에 새로 수집된 세포로 형질감염시켰다. 세포 밀도 및 형질감염 시약의 양을 각각의 세포 유형 및 각각의 Fugene 배치 (batch)에 대해, 최적화하였다. 형질감염시, 베타 클로토 및 FGFR1c DNA의 비율을 각각의 세포주에 대해 최적화하였고, 6:1 내지 27:1에서 변동된다. 형질감염된 세포를 정상 성장 배지의 96-well (30,000 세포/100 μL/웰), 또는 384-웰 플레이트 (7500 세포/25 μL/웰)에 시딩하였다. 37℃에서 밤새 인큐베이션한 후, 베타 클로토에 대한 다양한 항체를 첨가하였다. 37℃에서 6시간 동안 상기 항체를 인큐베이션한 후, 동일한 용적의 Bright-Glo 시약 (Promega)을 첨가하고, Enspire 판독기 (Perkin Elmer)를 이용하여, 발광 신호를 판독하였다.
HEK 293 세포로 형질감염된 인간 베타 클로토 및 시아노 베타 클로토를 이용한 대표 결과를 각각 하기의 표 13 및 표 14에 제시된 바와 같이 EC50 값으로 보고한다.
실험 - A 실험 - B



mAb		 HEK293
huKLB/R1c 리포터 분석 EC50
(pM)		 HEK293
huKLB/R1c 리포터 분석 EC50
(pM)
대조군* 45.3 27.9
5H23 102 34.2
1D19 620
2L12 373
3L3 773
3N20 527
4P5 600 78.3
1G19 231 127
*대조군 mAB는 서열번호: 358 및 서열번호: 360을 포함한다.
실험 - A 실험 - B



mAb		 HEK293
cynoKLB/R1c 리포터 분석 EC50
(pM)		 HEK293
cynoKLB/R1c 리포터 분석 EC50
(pM)
대조군* 108
178		 227
5H23 165 218
1D19 954
2L12 260 410
3L3 3576 1672
3N20 2464 >10000
4P5 347 465
1G19 2354 2447
*대조군 mAB는 서열번호: 358 및 서열번호: 360을 포함한다.
L6 세포로 형질감염된 인간 베타 클로토를 이용한 대표 결과를 하기의 표 15에 제시된 바와 같이 EC50 값으로 보고한다.




mAb		 L6
huKLB/R1c
리포터 분석 EC50
(nM)		 L6
huKLB/R2c
리포터 분석 EC50
(nM)		 L6
huKLB/R3c
리포터 분석 EC50
(nM)		 L6
huKLB/R4
리포터 분석 EC50
(nM)
대조군 FGF19: 2.66 FGF19: 0.16 FGF19: 2.1 FGF19: 0.05
5H23 0.28 >67 >67 >67
2L12 4.65 >67 >67 >67
4P5 0.39 >67 >67 >67
L6 세포는 내인성 수용체가 결여되어 있으며, 종종 다양한 형질감염된 FGF 수용체 하위 유형에 대한 항체 특이성을 조사하는데 사용된다. 리간드 (예를 들어, FGF19 (예를 들어, 서열번호: 304) 또는 FGF21(예를 들어, 서열번호: 429))의 부재하에, 본 발명의 예시적 항-베타 클로토 항체에 의한, FGFR1c/베타 클로토 신호 전달을 통한 상기 수용체의 활성화를 FGFR1c (R1c)로 형질감염된 L6 세포에서 관측하였고, FGFR2c (R2c), FGFR3c (R3c), 또는 FGFR4 (R4)로 형질감염된 L6 세포의 경우, 그러하지 않았으며, FGF19 대조군에 의한 활성화를 R1c, R2c, R3c 및 R4로 형질감염된 L6 세포에서 관측하였다.
실시예 5: 추가적 기능성 분석
예를 들면, 실시예 1에 개시된 바와 같이 생성된 베타 클로토에 대한 항체를 세포 기반 리포터 분석, 예를 들어, 내인성 FGFR1c/베타 클로토 신호 전달을 측정하는 지방 세포 분석에서, 그의 기능성 활성에 대해 시험하였다. FGF19 또는 FGF21은 배양된 지방 세포에서, ERK 인산화를 자극하고, 글루코오스 흡수 및 지방 분해를 증가시킨다. 지방 세포는, 리간드의 기능을 모방하는 작용제 항체 또는 수용체 리간드의 기능성 활성 (예를 들어, 상기 리간드에 의한 상기 수용체의 신호 전달)의 입증과 생리적으로 관련된 것으로 여겨진다.
예를 들면, 동결된 인간 지방선구세포 (Lonza Cat# PT-5005)를 첫날 해동시킨 후, 3일째에 분화시키고, 실험 전 약 2주 동안 분화 배지에서 유지하였다 (예를 들어, 그 후, 17일째에 금식시킨 후, 18일째에 분석하였음). 시딩 배지는 1:1 DMEM/F12K + 10% FBS이다. 시딩 세포 밀도는 96 웰 플레이트에서, 25,000 세포/100 L/웰이다. 3일째에, 배지를 인간 지방 세포 분화 배지 (Cell Applications Inc)로 교체하였다. 그 후, 매 2-3일 마다 새로운 분화 배지를 세포에 첨가하였다. 17일째 (분석 전날)에, 세포를 2회 세정한 후, DMEM /0.1% BSA (Sigma cat# A3803 필수 지방산 부재 BSA)에 밤새 방치하였다. 다음 날, 세포를 37℃에서 15분 동안 시험 항-베타 클로토 항체로 처리하기 전에, 1시간 동안 새로운 DMEM /0.1% BSA 배지를 첨가하였다. ERK 인산화 수준의 분석에, Cis-bio Cellul'erk 분석 키트 (Cat# 64ERKPEH)를 제조자의 프로토콜에 따라 사용하였다.
인간 지방 세포를 이용한 대표 결과를 하기의 표 16에 제시된 바와 같이 EC50 값으로 보고한다:
실험 - A 실험 - B
mAb hAdip pERK 분석 hAdip pERK 분석 EC50 (nM)
대조군 +++ FGF19
5.49
5H23 +++ 1.66
1C17 ++ >>67
1D19 +++ >67
2L12 +++ 1.23
3L3 +++ ~30
3N20 +++ >67
4P5 +++ 0.89
5F7 ++ >67
5C23 ++ >>67
1G19 +++ 1.3
실시예 6: 리간드 경쟁
항체-인간 베타 클로토 상호작용이 그의 천연 리간드 FGF19 또는 FGF21와 베타 클로토의 결합에 영향을 주는지 여부를 평가하기 위해, 리간드 (FGF19 또는 FGF21) 경쟁 분석을 실행하였다.
*예를 들면, FGF19 (예를 들어, 서열번호: 304) 또는 FGF21(예를 들어, 서열번호: 429)이 CM5 칩의 유동 세포 (Fc2)에 고정되는 Biacore-기반 경쟁 분석을 설정하였다 (참조 표면으로서, Fc1 사용). 5H23 (예를 들어, VH 서열번호: 25 및 VL 서열번호: 26) 또는 인간화 5H23 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276))와 같은 본 발명의 예시적 항체를 이용하여, 인간 베타 클로토-항체 복합체를 제조하였다. 예를 들면, 96 웰 마이크로 플레이트에서, 베타 클로토의 농도를 5 nM에서 일정하게 유지하면서, 5H23 및 대조군 항체의 농도를 0.1-67 nM로부터 적정한 후, FGF19 표면에 주입하였다. 또 다른 실시예로서, 베타 클로토의 농도를 2.5 nM에서 일정하게 유지하면서, 인간화 5H23 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)의 농도를 0.001-67 nM로부터 적정한 후, FGF21 표면에 주입하였다. 측정 신호 (응답 단위, RU)를 항체 용액 농도 [nM]에 대해, 도시하였다. 용액 중의 항체가, 칩 표면에 고정된 FGF19 리간드 또는 FGF21 리간드와 동일한 에피토프를 인식하는 경우, 그 후, 용액 중의 항체의 농도가 증가함에 따라, RU의 감소가 관측되었고, 이는 베타 클로토의 결합 자리에 대한 FGF19 리간드 또는 FGF21 리간드의 경쟁을 입증하는 것이다. 그러나, 용액 중의 항체가 고정된 FGF19 리간드 또는 FGF21 리간드와 비교하여 다른 에피토프를 인식하는 경우, RU의 증가가 관측되었다. 후자의 시나리오에서, 항체-클로토 복합체는 고정된 FGF19 리간드 표면 또는 고정된 FGF21 리간드 표면에 결합할 수 있으며, 이는 신호 증가의 관측으로 이어진다. 하기 표 17A에 제시된 예시 데이터에서, 대조군 항체는 FGF19 리간드와 부분적으로 경쟁하였으며, 이는, RU 신호의 현저한 감소를 초래하였고, 5H23은 베타 클로토와의 결합에 있어서, FGF19 리간드와 경쟁하지 않았다. 하기 표 17B에 제시된 예시 데이터에서, 대조군 항체는 FGF21 리간드와 경쟁하였으며, 이는, RU 신호의 현저한 감소를 초래하였고, 인간화 5H23은 베타 클로토와의 결합에 있어서, FGF21 리간드와 경쟁하지 않았다.
표 17A
실험 1 RU 변화율 (%) 주석
5nM β-클로토의 RU 신호 (복합체 없음) 127 100% 대조군 항체*
클로토-대조군 항체 복합체의 RU 신호 60 47% 감소 β-클로토와의 결합에 있어서, 대조군 항체* 및 FGF19는 부분적으로 경쟁한다.
실험 1 RU 변화율 (%) 주석
5nM β-클로토의 RU 신호 (복합체 없음) 109 100% 대조군 항체*
클로토-5H23 복합체의 RU 신호 125 114% 증가 5H23-클로토 복합체는 FGF19에 결합한다. 따라서, 경쟁하지 않는다.
*대조군 항체는 서열번호:358 및 서열번호:360을 포함한다.



표 17B
실험 1 정규화 RU 변화율 (%) 주석
2.5nM β-클로토의 RU 신호 (복합체 없음) 1 100% 대조군 항체*
클로토-FGF21 복합체의 RU 신호 0.03 97% 감소 FGF21은 β-클로토와의 결합에 있어서, 그 자체와 경쟁한다.
실험 1 정규화 RU 변화율 (%) 주석
2.5nM β-클로토의 RU 신호 (복합체 없음) 1 100% 대조군 항체*
클로토-인간화 5H23 복합체의 RU 신호 1.1 110% 증가 인간화 5H23-클로토 복합체는 FGF21에 결합한다. 따라서, 경쟁하지 않는다.
*대조군 항체는 서열번호:358 및 서열번호:360을 포함한다.
5H23 및 인간화 5H23 항체가, FGF19 및 FGF21과 같은 내인성 리간드와 비교하여, 베타 클로토의 다른 에피토프에 결합하기 대문에, FGF21과 5H23 또는 인간화 5H23 항체 사이에, 상승적 효과가 존재하는지 여부를 시험하기 위한 실험을 실행하였다. HEK293 리포터 분석 (예를 들어, 실시예 4)에서, 1:1 몰비로 또는, 하나는 고정하고, 다른 하나의 농도를 적정하면서, FGF21 및 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)의 조합물을 시험하였다. 상승적 효과의 증거는 관측되지 않았으며; FGF21의 최고 효과는 인간화 5H23 항체에 의해 증강되지 않았고, 그 반대의 경우도 마찬가지였다.
실시예 7: 인간화
실시예 1-6에 개시된 바와 같이 선택된 항체를 포함하여, 인간화 항-베타 클로토 항체를 생성하였다.
다수의 항-베타 클로토 항체를 CDR을 비롯한 그의 VH 및 VL 영역의 서열 분석을 위해 선택하고, 표 1-10 및 도 1 및 2에 제시하였다. 예시적 항-베타 클로토 항체, 5H23을 인간화를 위해 선택하였다. 다수의 인간화 방법이 이용되었다. 일부 인간화 항체의 경우, 인간화 방법은 경험적인 것이며, 항체의 구조적 안정성의 요구 및 분자 모델을 비롯한 면역 글로불린 가변 영역과 관련된 일부 구조 정보를 기반으로 한다 (예를 들어, 문헌 [Ewert et al., 2004, Methods 34:184-199; Honegger, 2008, Handb. Exp. Pharmacol. 181:47-68; Kugler et al., 2009, Protein Eng. Des. Sel. 22: 135-147] 참조). 상기 방법은 항원 접촉 잔기 및/또는 프레임워크 안정성 잔기에 대한 일부 고려 사항 또한 기반으로 한다. 예를 들면, 전형적 항원 접촉 잔기에 대한 고려 사항은 항원의 크기 특히, 항원과 접촉할 수 있는 CDR 외의 잔기, 상부 핵심 (upper core), 중부 핵심 및 하부 핵심 분할, VH:VL 경계 잔기, 보존 Pro/Gly (양의 파이 각도) 및 VH 하위 유형 관련 잔기 일치에 의존적이다 (예를 들어, 문헌 [Ewert et al., supra; Honegger, supra; Kugler et al., supra] 참조).
*예를 들면, 5H23 VH 프레임워크 서열에 상동인 인간 VH 서열을 조사하고, 인간 생식 계열 IGHV1-3*01에 의해 인코딩되는 VH 서열 (예를 들어, 문헌 [Ehrenmann et al., 2011, Cold Spring Harbor Protoc. G:737-749] 참조)을 인간화를 위한 수용체로서 선택하였다. 일부 인간화 항체에 있어서, 처음에, 5H23 VH의 CDR 서열을 IGHV1-3*01의 해당 위치에 이동시켰다. 그 다음, 5H23 VH의 다수의 아미노산 잔기를 각각 또는 조합하여, 해당 인간 잔기로 치환시켰다.
또한, 예를 들면, 5H23 VL 프레임워크 서열에 상동인 인간 VL 서열을 조사하고, IGKV4-1*01에 의해 인코딩되는 인간 Vκ 영역 (예를 들어, 문헌 [Ehrennmann et al., supra] 참조)을 인간화를 위한 수용체로서 선택하였다. 일부 인간화 항체에 있어서, 처음에, 5H23 VL의 CDR 서열을 IGKV4-1*01의 해당 위치에 이동시켰다. 그 다음, 5H23 VL의 다수의 아미노산 잔기를 각각 또는 조합하여, 해당 인간 잔기로 치환시켰다.
일부 인간화 항체에 있어서, 인간화 방법에서, 마우스 가변 영역의 3차원 지도를 제작하기 위한 알고리즘이 사용되었다. 이 방법에서는 또한, 프레임워크 아미노산 및, 베타 클로토와의 결합에 필요하거나 또는 CDR 구조의 형식에 중요한 잔기가 확인되었다. 또한, 마우스 서열에 대한 상동성이 큰 인간 VH 및 VL 아미노산 서열을 인간화의 가능한 프레임워크 서열로 선택하였다. 전술된 바와 같이, 5H23 항체의 CDR 서열을 이러한 추가적 인간 프레임워크 서열로 이동시킬 수 있다. 생식 계열 (예를 들어, IGHV1-3, IGHV1-46, IGHV1-69, IGKV4-1, IGKV1-39 or IGKV3-20)을 비롯한 다수의 인간 프레임워크 서열 및 개별 성숙 서열이 상기 인간화 방법에 적합할 수 있다. 다음, 5H23 VH 및/또는 5H23 VL의 다수의 아미노산 잔기를 각각 또는 조합하여, 해당 인간 잔기로 치환시킬 수 있다.
일부 인간화 경쇄에 있어서, 5H23 VL의 서열에서 근접 일치하고/거나, 예를 들면, IGKV1-39 및 IGKV3-20을 비롯한 공통 이용 서열인 인간 생식 계열 서열을 확인하기 위해, IG BLAST 조사를 사용하였다. 일부 인간화 경쇄에 있어서, 처음에, 5H23 VL의 CDR 서열을 IGKV1-39 또는 IGKV3-20의 해당 위치로 이동시킨 후, 특정 아미노산을 치환을 위해, 경험적으로 선택하였다.
생성된 인간화 VH (vH1-vH9) 및 VL (vL1-vL5, v1-39a-v1-39p 및 v3-20a-v3-20j) 서열의 아미노산 서열은 5H23 VH 및 VL 서열과 함께, 도 3a-3d에 제시한다. 예를 들면, 본 실시예에서 개시된 다양한 인간화 방법을 이용하여, 도 3a-3d에 제시된 바와 같은 인간화 서열의 수득을 위해, 5H23 VH 및 VL의 다수의 아미노산 잔기를 해당 인간 잔기로 치환시켰다.
인간화 베타 클로토 항체는, 표 19의 임의의 프레임워크 서열과 조합된 표 18의 임의의 CDR 서열을 이용하여, 제조될 수 있다.

인간화 항-베타 클로토 항체의 CDR 서열
VH CDR1
서열번호:1 GYTFTSYDIN
서열번호:27 GYSITSGYYWN
서열번호:53 GYTFTRYDIN
서열번호:79 GYTFTRYDIN
서열번호:105 GYTFTSYDIN
서열번호:131 GYIFTNYGIS
서열번호:157 GYTFTRYDIN
서열번호:183 GYTFTRYDIN
서열번호:209 GYTFTRYDIN
서열번호:235 GYSITSGYYWN
VH CDR2
서열번호:2 WIYPGDGSTKYNEKFKG
서열번호:28 YINYDGNSNYTPSLKN
서열번호:54 WIYPGDSSTKFNENFKD
서열번호:80 WIYPGDDSTKYNEKFKG
서열번호:106 WIYPGDGSPKYDEKFKG
서열번호:132 EIYPRSGNTYYNEKFKG
서열번호:158 WIYPGDDSTKYNEKFKG
서열번호:184 WIYPGDGSTKYNEKFEG
서열번호:210 WIYPGDISTKYNEKFKG
서열번호:236 YINYGGSNNYNPSLKN
VH CDR3
서열번호:3 SDYYGSRSFAY
서열번호:29 KGAYYSNYDSFDV
서열번호:55 SDYYGSRSFTY
서열번호:81 SDYYGSRSFVY
서열번호:107 SDYYGSRSFVY
서열번호:133 HWDGVLDYFDY
서열번호:159 SDYYGSRSFVY
서열번호:185 SDYYGSRSFVY
서열번호:211 SDYYGSRSFVY
서열번호:237 RGAYYSNYDSFDV
VL CDR1
서열번호:4 RASKSVSTSGYVYMH
서열번호:30 KASQDINSYLS
서열번호:56 RASKSVSTSGYSYMH
서열번호:82 RASKSVSTSGYSYLH
서열번호:108 RASKSVSTSGYSYVH
서열번호:134 KSSQSLLNSGNQKNYLA
서열번호:160 RASKSVSTSGYSYMH
서열번호:186 RASKSVSTSGYSYMH
서열번호:212 RASKSVSTSGYSYMH
서열번호:238 KASQDINSYLS
VL CDR2
서열번호:5 LASYLES
서열번호:31 RANRLVD
서열번호:57 LASNLES
서열번호:83 LASNLES
서열번호:109 LASNLES
서열번호:135 GASTRES
서열번호:161 LASNLES
서열번호:187 LASNLES
서열번호:213 LASNLES
서열번호:239 RANRLVD
VL CDR3
서열번호:6 QHSRDLTFP
서열번호:32 LQYDEFPFT
서열번호:58 QHSRELPYT
서열번호:84 QHSGELPYT
서열번호:110 QHSGELPYT
서열번호:136 LNDHSYPFT
서열번호:162 HHSGELPYT
서열번호:188 QHSRELPYT
서열번호:214 QHSRELPYT
서열번호:240 LQYDEFPYT

인간화 항-베타 클로토 항체의 프레임워크 서열
VH
프레임워크 1 (FR1)
서열번호:278 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS
서열번호:279 QVQLQQSGAEVKKPGASVKVSCKAS
서열번호:280 QVQLVQSGPEVKKPGASVKVSCKAS
서열번호:378 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKAS
프레임워크 2 (FR2)
서열번호:281 WVRQAPGQGLEWMG
서열번호:282 WVRQAPGQGLEWIG
서열번호:283 WVKQAPGQGLEWIG
프레임워크 3 (FR3)
서열번호:284 RVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
서열번호:285 KATITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYFCAR
서열번호:286 KATLTADTSASTAYMELSSLRSENTAVYFCAR
서열번호:287 KATLTADKSARTAYMELSSLRSENTAVYFCAR
서열번호:379 RATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
서열번호:380 RATLTADKSTRTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
서열번호:381 RATITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
프레임워크 4 (FR4)
서열번호:288 WGQGTLVTVSS
VL
프레임워크 1 (FR1)
서열번호:289 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINC
서열번호:290 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC
서열번호:382 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC
서열번호:383 DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITC
서열번호:384 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC
프레임워크 2 (FR2)
서열번호:291 WNQQKPGQPPKLLIY
서열번호:292 WYQQKPGQPPKLLIY
서열번호:385 WYQQKPGKAPKLLIY
서열번호:386 WNQQKPGKAPKLLIY
서열번호:387 WYQQKPGKPPKLLIY
서열번호:388 WNQQKPGKPPKLLIY
서열번호:389 WYQQKPGQAPRLLIY
서열번호:390 WNQQKPGQAPRLLIY
서열번호:391 WYQQKPGQPPRLLIY
서열번호:392 WNQQKPGQPPRLLIY
프레임워크 3 (FR3)
서열번호:293 GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDAAIYYC
서열번호:294 GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYC
서열번호:295 GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAIYYC
서열번호:393 GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC
서열번호:394 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
서열번호:395 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYC
서열번호:396 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQEEDFATYYC
서열번호:397 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQEEDFATYYC
서열번호:398 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQEEDAATYYC
서열번호:399 GIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC
서열번호:400 GIPARFSGSGSGTDFTLTISRVEPEDFAVYYC
서열번호:401 GIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDAAVYYC
서열번호:402 GIPARFSGSGSGTDFTLTISRLEEEDFAVYYC
서열번호:403 GIPARFSGSGSGTDFTLTISRVEEEDFAVYYC
서열번호:404 GIPARFSGSGSGTDFTLTISRVEEEDAAVYYC
프레임워크 4 (FR4)
서열번호:296 FGGGTKLEIK
서열번호:405 FGGGTKVEIK
서열번호:406 FGQGTKLEIK
서열번호:407 FGGQTKLEIK
예를 들면, 인간화 항-베타 클로토 항체는 FR1 (예를 들어, 서열번호:278, 279, 280 또는 378); CDR1 (예를 들어, 서열번호:1, 27, 53, 79, 105, 131, 157, 183, 209, 235); FR2 (예를 들어, 서열번호:281, 282 또는 283); CDR2 (예를 들어, 서열번호:2, 28, 54, 80, 106, 132, 158, 184, 210, 또는 236); FR3 (예를 들어, 서열번호:284, 285, 286, 287, 379, 380 또는 381); CDR3 (예를 들어, 서열번호:3, 29, 55, 81, 107, 133, 159, 185, 211 또는 237); 및/또는 FR4 (예를 들어, 서열번호:288)를 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및/또는 FR1 (예를 들어, 서열번호:289, 290, 382, 383 또는 384); CDR1 (예를 들어, 서열번호:4, 30, 56, 82, 108, 134, 160, 186, 212 또는 238); FR2 (예를 들어, 서열번호:291, 292 또는 385-392); CDR2 (예를 들어, 서열번호:5, 31, 57, 83, 109, 135, 161, 187, 213 또는 239); FR3 (예를 들어, 서열번호:293, 294, 295 또는 393-404); CDR3 (예를 들어, 서열번호:6, 32, 58, 84, 110, 136, 162, 188, 214, 240); 및/또는 FR4 (예를 들어, 서열번호:296, 405, 406 또는 407)를 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함할 수 있다.
이 실시예에서 개시되는 바와 같이, 인간화 항-베타 클로토 항체를 경험적으로 설계하고, 생성된 항체 5H23의 VH 영역의 9개의 인간화 변이체 및 항체 5H23의 VL 영역의 31개의 인간화 변이체를 비롯한 베타 클로토 결합 단백질로서 발현시켰다. 이들 예시적 인간화 5H23 VH 및 VL 영역의 서열은 도 3a-3d에 제시된다.
도 3a-3d에 제시된 바와 같은 서열을 가지는 인간화 VH 및 인간화 VL 영역을 가지는 인간화 항체를 제조하였다. 예를 들면, 도 3a-3d에 제시된 바와 같은 서열을 가지는 IgG1 (ala-ala) 불변 영역 (서열번호:316) 및 카파 불변 영역 (서열번호:318): vH1-VL1, vH1-vL2, vH1-vL3, vH2-vL1, vH2-vL2, vH2-vL3, vH3-vL1, vH3-vL2, vH3-vL3, vH4-vL1, vH4-vL2, vH4-vL3, vH5-vL1, vH5-vL2, vH5-vL3, vH6-vL1, vH6-vL2, vH6-vL3을 이용하여, vH 1-6 및 VL1-3의 18개 (6 X 3)의 조합물을 제작하였다. 또한, 도 3a-3d에 제시된 바와 같은 서열을 가지는 예시적 인간화 VH 영역 (예를 들어, vH3) 및 26개의 인간화 VL 영역 (v1-39a 내지 v1-39p 및 v3-20a 내지 v3-20j)을 가지는 인간화 항체를 제작하였다.
실시예 2-6에 개시되는 바와 같은 것을 포함하여, 상기 인간화 항체를 다수의 분석에서, 그의 활성에 대해 시험하였다. vL3 또는 v1-39c를 포함하는 경쇄를 가지는 인간화 항체의 발현은 저조하였으며, 이들 항체는 추가로 시험하지 않았다. 다수의 인간화 항-베타 클로토 항체의 예시적 결과는 하기 표 20A 및 20B에서 제시된다.
표 20a
Figure pct00082
표 20b
Figure pct00083
Prep 1 = LC 변이체와 동시에 발현된 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276) 제조물; Prep 2 = 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276) 정제 제조물. 대조군 항체 = VH 서열번호: 358 및 VL 서열번호: 360.
추가 분석에서, 예를 들면, 실시예 4에 개시된 바와 같은 HEK293T 세포를 이용한 리포터 분석으로서, 여기서, 세포를 마우스 베타 클로토 (예를 들어, 서열번호: 301), 랫트 베타 클로토 (예를 들어, 서열번호: 356), 햄스터 베타 클로토 (예를 들어, 서열번호: 408), 토끼 베타 클로토 (예를 들어, 서열번호: 410) 또는 개 베타 클로토 (예를 들어, 서열번호: 412)를 인코딩하는 플라스미드로 형질감염시키고, 또한, 각각 키메라 마우스 FGFR1-βIIIc 수용체 (예를 들어, 서열번호: 416), 키메라 랫트 FGFR1-βIIIc 수용체 (예를 들어, 서열번호: 419), 키메라 햄스터 FGFR1-βIIIc 수용체 (예를 들어, 서열번호: 417), 키메라 토끼 FGFR1-βIIIc 수용체 (예를 들어, 서열번호: 420) 또는 개 FGFR1-βIIIc 수용체 (예를 들어, 서열번호: 418)를 인코딩하는 플라스미드로 형질감염시켰으며, 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)와 같은 항-베타 클로토 항체로 처리시, 각각 키메라 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼 또는 개 베타 클로토-FGFR1c 수용체 복합체를 활성화시키지 않았다. 표 1-10에서 제시된 바와 같은 CDR 서열을 가지는 5H23 (예를 들어, 실시예 3에 개시된 바와 같은 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 및 1G19)과 경쟁하는 항체뿐만 아니라, 5H23 및 인간화 5H23 항체를 비롯한 본 발명에서 개시되는 바와 같은 항-베타 클로토 항체는 인간 및 시아노 베타 클로토/FGF 수용체 복합체를 활성화시키나, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼 또는 개 베타 클로토/FGF 수용체 복합체는 활성화시키지 않으며, 이는 전술된 리포터 분석에 의해 입증된 바와 같다. 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)와 같은 항-베타 클로토 항체의 파파인 분해로부터 제조되는 항-베타 클로토 항체의 1가 Fab를, 그의 인간 FGFR1c/KLB 수용체 복합체의 활성화 능력에 대한 HEK293 리포터 분석에서, 시험하는 경우, Fab는 최대 67 nM까지 항체 활성을 나타내지 않으며, 인간화 5H23 항체는 표 20B에 제시된 것과 유사한 낮은 몰 농도에서, 활성을 나타내었다.
실시예 8: 동물 연구
시아노몰거스 원숭이에 의한 것을 비롯한 동물 연구에서, 항-베타 클로토 항체의 효과를 평가한다. 비만 시아노몰거스 원숭이 연구에서, 표 1에 제시된 바와 같은 5H23의 하나 또는 그 이상의 CDR을 포함하는 항체뿐만 아니라, 인간 베타 클로토 및 시아노 베타 클로토 (예를 들어, 항체 5H23 또는 그의 인간화 변이체)에 결합하는 예시적 항-베타 클로토 항체 또는 대안적으로, 실시예 3에 개시된 바와 같은 인간 베타 클로토에 대한 5H23의 결합에 있어서, 경쟁하는, 표 2-10에 제시된, 항체 또는 그의 인간화 변이체의 하나 또는 그 이상의 CDR을 포함하는 항체를 투여한다. 다양한 대사 파라미터에 대한 효과를 측정할 수 있다. 예시적 파라미터에는, 식품 섭취량, 체중, 체 질량 지수 (BMI), 복부둘레비율 (AC), 피하 지방 두께 (SFT), 경구 글루코오스 내성 시험 (OGTT), 단식 및/또는 비단식 (예를 들어, 식후) 혈액 (예를 들어, 혈청) 글루코오스 수준, 인슐린 수준, 및/또는 트리글리세리드 수준이 포함된다.
실제 연구에서, 체 질량 지수가 40 또는 그 이상인 20마리의 자발적 비만 시아노몰거스 원숭이를 선택하고, 비히클 (n = 10) 및 항체 처리 (n =10) 그룹으로 무작위화한다. 첫 날 및 14일째에, 동물에 비히클 또는 항-베타 클로토 항체 중 하나를 피하 주입한다. 각 끼니의 사료 섭취량을 기록하고, 매주 체중을 측정한다. 혈장 (대안적으로, 혈청) 혈당, 인슐린, 지질 및 관심 파라미터의 측정을 위해, 7주 동안, 매주 혈액 샘플을 채혈한다. 14, 28 및 49일째에, 경구 글루코오스 내성 시험을 실행한다.
예시적 처리 효과에는 사료 섭취량의 감소, 체중 감소, BMI, AC 및/또는 SFT의 증가, 글루코오스 내성의 개선, 인슐린 수준의 감소, 단식 및/또는 비단식 (예를 들어, 식후) 혈장 (대안적으로, 혈청) 글루코오스 수준, 인슐린 수준의 감소 및/또는 트리글리세리드 수준의 저하가 포함될 수 있다. 이들 효과는 항-베타 클로토 항체 처리에 의한 개선된 대사 파라미터를 시사한다.
예를 들면, 20마리의 수컷 시아노몰거스 원숭이를 그의 BMI (> 40)를 기반으로 하여, 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276) 또는 비히클 대조군의 처리를 위해, 선택하고, 의자 강박 (chair restraint), 피하 주입, 채혈 및 경구 위관 영양법 (oral gavage)을 위해, 훈련시켰다. 규칙적인 식사 스케줄을 수립하였다.
다양한 관심 파라미터의 기준 값을 치료 전에 측정하였다. 예를 들면, -7일째에, 기준 체중, BMI, 복부둘레비율 및 피하 지방 두께를 측정하고, 골밀도 측정을 위해, 이중에너지 X-선 흡수계측 ("DEXA") 스캔을 케타민 마취하의 시아노몰거스 원숭이에 실행하였다. -3일째에, 밤새 단식 후, 혈액 샘플을 채혈하였다. 혈청 글루코오스, 인슐린, 총 콜레스테롤, LDL, HDL, 트리글리세리드 및 혈액 및 임상 화학 패널의 파라미터를 측정 및 분석하였다. 기준 샘플 직후, 4 g/kg 글루코오스의 위관 영양의 제공에 의해, 동물을 경구 글루코오스 내성 시험 (OGTT)에 적용하고, 글루코오스 유발검사 (glucose challenge) 후, 5, 15, 30, 60, 120, 및 180분에 샘플링한 후, 혈청 글루코오스 및 인슐린을 측정하였다. 다양한 파라미터, 예를 들어, 체중, BMI 및 혈청 글루코오스, 인슐린 및 트리글리세리드 수준의 유사한 기준 수준을 수립하기 위해, 기준 데이터를 기반으로 하여, 동물들을 각 그룹 당 10마리의 동물의 2개 그룹 (예를 들어, 항체 처리를 위한 한 그룹 및 비히클 대조군 그룹으로서, 다른 한 그룹)으로 배정하였다
0일에 시작하여, 한 그룹의 동물 (n=10)에, 4회 투여 동안, 격주로 (예를 들어, 0, 14, 28, 및 42일째에), 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)와 같은 항-베타 클로토 항체 10　mg/kg의 피하 주입 투여를 제공하였다. 같은 날, 비히클 대조군 그룹에 상응하는 비히클을 제공하였다. 오전 식사 30분 전에, 상기 처리를 실시하였으며, 투여 용적은 0.1 내지 0.2 mL/kg이었다.
본 연구 과정 전반에 걸쳐, 관심 파라미터, 예를 들어 사료 섭취량, 체중, 임상 화학 및 OGTT를 모니터링하였다. 예를 들면, 사료 섭취량을 매일 측정하였다. 체중, BMI, 복부둘레비율, 및 피하 지방 두께를 매주, 예를 들면 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 91, 및 98일째에 측정하였다. 글루코오스, 인슐린 및 트리글리세리드와 같은 지질의 측정을 위해, 매주, 예를 들면 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 및 70일째에, 밤새 단식 후, 혈액 샘플을 채혈하였다. 98일째에, 밤새 단식 후, 추가 혈액 샘플을 채혈하였다. 본 연구 개시 후, 예를 들어, 14, 28, 및 56일째에, OGTT를 실행하였으며, 이때, 동물에, 4 g/kg의 글루코오스의 위관 영양을 제공하였고, 글루코오스 유발검사 후, 5, 15, 30, 60, 120 및 180분에, 샘플링한 후, 혈청 글루코오스 및 인슐린을 측정하였다. 30 및 72일째에, DEXA 스캔을 실행하였다. 또한, 28 및 70일째에, 혈액 및 임상 화학 패널을 분석하였다. 비히클 그룹 중 2마리 동물 및 항-베타 클로토 항체 그룹 중 2마리 동물을 희생시킨 후, 안전성 평가를 위해, 50일째에, 부검을 수행하였다. 본 연구 과정 동안, 모든 동물을 그들의 건강 상태에 대해, 근접 모니터링하였다.
본 연구의 예시적 결과가 하기 표 21 내지 25에 제시된다. 표 21에 제시된 바와 같이, 비히클 처리된 동물의 체중은 일정하게 유지되었으나 (본 과정에 걸쳐, 다소 증가함); 항-베타 클로토 항체 처리된 동물의 체중은 점진적으로 감소하였으며, 8-14주 (예를 들어, 회복 단계) 동안, 체중이 기준 수준으로 복귀되지 않았다. 이와 유사하게, 표 22에 제시된 바와 같이, 비히클 처리 동물은 본 연구 전반에 걸쳐, 비교적 안정한 BMI를 나타내었으나, 항-베타 클로토 항체 처리 동물은 본 연구 과정에 걸쳐, BMI 수준의 감소를 나타내었다. 또한, BMI 수준은 기준치로 복귀되지 않았다 (예를 들어, 회복 단계 동안). 이들 결과는, 항-베타 클로토 항체 처리가 지방량의 저하를 초래한다는 것을 시사한다.
표 23에 제시된 바와 같이, 비히클 처리 동물의 혈청 인슐린 수준은 본 연구 과정에 걸쳐, 증가하였으나, 항-베타 클로토 항체 처리 동물의 혈청 인슐린 수준은 현저히 감소하였다. 표 24에서 제시된 바와 같이, 항-베타 클로토 항체 처리 동물에서, 혈청 글루코오스 수준이 또한 저하하였다. 이와 유사하게, 표 25에 제시된 바와 같이, 비히클 처리 동물의 트리글리세리드 수준이 본 연구 과정에 걸쳐 증가하였으나, 항-베타 클로토 항체 처리 동물의 트리글리세리드 수준은 현저히 저하하였다.
OGTT 결과는, 처리 전, 인슐린의 기준 수준이 비히클 그룹 및 항-베타 클로토 항체 그룹 사이에, 현저히 다르지 않았다는 것을 입증한다. 반대로, 처리 후, 글루코오스 저하 경향이 있었으며, 인슐린 수준은 비히클 처리 동물과 비교하여, 항-베타 클로토 항체 처리 동물의 경우, 저하하였다.
표 21
Figure pct00084
BMI
주수
 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
비히클 평균 57.
59 		57.
06 		56.
59 		56.
44 		56.
33 		57.
08 		56.
63 		56.
59 		57.
06 		58.
27 		58.
17 		58.
76 		58.
86 		59.
00 		59.
60 		59.
33
sem 2.
41 		2.
45 		2.
45 		2.
33 		2.
31 		2.
28 		2.
30 		2.
23 		2.
25 		2.
55 		2.
52 		2.
60 		2.
60 		2.
53 		2.
46 		2.
51
h5H23 평균 57.
52 		57.
32 		56.
03 		55.
24 		54.
28 		53.
95 		52.
82 		52.
07 		51.
54 		48.
85 		48.
56 		48.
24 		48.
09 		48.
07 		47.
94 		47.
28
sem 2.
53 		2.
61 		2.
50 		2.
51 		2.
44 		2.
50 		2.
52 		2.
54 		2.
48 		2.
29 		2.
30 		2.
32 		2.
44 		2.
54 		2.
46 		2.
60
인슐린 (uU/mL)
주 수 -1 내지 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
비히클 평균 114.85 100.09 91.06 124.79 187.36 159.20 226.53 145.78 186.75 204.96 181.32
sem 32.75 19.94 26.33 37.48 62.09 51.60 130.94 34.74 39.85 52.63 52.28
h5H23 평균 89.18 34.73 36.19 38.11 46.75 48.28 35.42 37.95 57.29 63.23 55.30
sem 9.51 4.91 4.14 7.24 6.54 6.80 4.98 5.03 12.99 12.43 13.62
글루코오스 (mg/dL)
주 수
 -1 내지 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
비히클 평균 90.81 93.69 95.41 90.21 94.51 98.31 97.70 95.78 94.73 93.53 90.06
sem 10.00 9.07 9.73 7.93 9.17 10.46 13.12 10.21 11.62 12.09 12.49
h5H23 평균 90.85 87.37 83.19 84.92 85.62 80.52 80.97 79.60 81.90 78.20 76.60
sem 11.67 6.61 6.92 8.02 6.75 5.67 6.32 4.30 4.97 7.07 5.49
트리글리세리드 (mmol/L)
주 수
 -1 내지 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
비히클 평균 0.93 0.76 0.92 0.70 1.36 0.90 1.15 1.20 1.54 1.35 1.26
sem 0.25 0.08 0.16 0.10 0.27 0.14 0.38 0.22 0.35 0.38 0.37
h5H23 평균 1.05 0.65 0.65 0.59 0.70 0.59 0.56 0.70 0.90 0.73 0.71
sem 0.17 0.09 0.12 0.08 0.10 0.05 0.07 0.12 0.13 0.08 0.10
또 다른 예시적 연구에서, 40마리의 자발적 비만 수컷 시아노몰거스를 선택하고, 전술된 바와 같이, 훈련시키고, 사료를 제공하였다.
전술된 바와 같이, 처리 전에, 다양한 파라미터의 기준 수준을 측정하였다. 예를 들면, -4일째에, 기준 체중, BMI, 복부둘레비율 및 피하 지방 두께를 측정하고, 혈청 글루코오스, 인슐린, 총 콜레스테롤, LDL, HDL 및 트리글리세리드의 측정을 위해, -3일째에, 밤새 단식 후, 기준 혈액 샘플을 채혈하였다. 이들의 기준 데이터를 기반으로 하여, 동물들을 5개의 그룹 (8마리의 동물/각 그룹)에 배정하고, 4개의 그룹에는 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)와 같은 항-베타 클로토 항체의 다양한 투여를 제공하고, 1개의 그룹에는 비히클 대조군을 제공하였다.
0일째에, 첫 번째 그룹의 동물 (n=8)에, 0.1 mg/kg의 항-베타 클로토 항체의 피하 주입 투여를 제공하고; 두 번째 그룹의 동물 (n=8)에, 1 mg/kg의 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 단일 투여를 제공하고; 세 번째 그룹의 동물 (n=8)에, 10 mg/kg의 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 단일 투여를 제공하였다. 0일에 시작하여, 네 번째 그룹의 동물 (n=8)에, 12주 동안 매 4주 마다 한 번, 0.1 mg/kg의 항-베타 클로토 항체의 피하 주입 투여를 제공하였다. 대조군으로서, 다섯 번째 그룹의 동물 (n=8)에, 12주 동안 매 4주 마다 한 번, 비히클 투여를 제공하였다. 오전 식사 30분 전에, 상기 처리를 실시하였으며, 투여 용적은 0.2 mL/kg이었다.
*본 연구 과정 전반에 걸쳐, 관심 파라미터를 모니터링하였다. 예를 들면, 사료 섭취량을 각 끼니에 측정하였다. 체중, BMI, 복부둘레비율, 및 피하 지방 두께를 매주 측정하였다. 투여 (들) 후, 예를 들어 3, 6, 12 및 24시간 및 3, 4, 7, 10, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56, 63, 70, 77, 84, 및 112일째에, 혈액 예를 채혈하고, 관심 파라미터, 예를 들어 혈청 글루코오스, 인슐린, 총 콜레스테롤, LDL, HDL 및 트리글리세리드를 측정하였다. 본 연구 과정 동안, 전술된 바와 같이, 모든 동물을 그들의 건강 상태에 대해, 근접 모니터링하였다.
본 투여-반응 연구의 예시적 결과가 하기 표 26-29에 제시된다. 표 26은, 비히클 처리 동물의 체중 변화와 비교한, 항-베타 클로토 항체 처리 동물의 상대적 체중 변화를 제시한다. 제시된 바와 같이, 0.1mg/kg, 1mg/kg 또는 10mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 단일 투여 또는 1mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 4회 투여에 의해, 체중이 현저히 저하되었다. 또한, 비히클과 비교하여, 10 mg/kg 항-베타 클로토 항체의 단일 투여가 제공된 동물 또는 1mg/kg 항-베타 클로토 항체의 4회 투여가 제공된 동물에서, 112일째에, 저하된 체중이 유지되었다.
표 27에 제시된 바와 같이, 비히클 대조군 그룹과 비교하여, 0.1mg/kg, 1mg/kg 또는 10mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 단일 투여 또는 1mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 4회 투여에 의해, 혈청 인슐린 수준이 저하되었다. 또한, 표 28에 제시된 바와 같이, 1mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 4회 투여에 의해, 혈청 인슐린 수준이 현저히 저하되었다. 또한, 표 29에 제시된 바와 같이, 비히클 처리 동물과 비교하여, 1mg/kg 또는 10mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 단일 투여 또는 1mg/kg 항-베타 클로토 항체의 피하 주입의 4회 투여로 처리된 동물에서, 혈청 트리글리세리드 수준이 저하되었다.
표 26A 체중
일 수 -4 4 10 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 112
비히클
 평균 10.17 10.07 9.89 9.87 9.91 9.83 9.82 9.73 9.71 9.63 9.61 9.57 9.53 9.45 9.24
sem 0.48 0.80 0.77 0.79 0.81 0.81 0.82 0.82 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.81
5H23 (0.1 mg/kg SD) 평균 10.00 9.92 9.70 9.62 9.52 9.47 9.37 9.28 9.27 9.36 9.34 9.27 9.34 9.34 9.21
sem 0.67 0.71 0.69 0.71 0.73 0.76 0.76 0.79 0.79 0.81 0.83 0.85 0.86 0.87 0.85
5H23 (1 mg/kg SD) 평균 9.84 9.69 9.49 9.36 9.28 9.19 9.05 8.92 8.90 8.85 8.85 8.83 8.89 8.93 9.24
sem 0.54 0.55 0.54 0.53 0.54 0.55 0.55 0.55 0.55 0.54 0.55 0.55 0.55 0.55 0.56
5H23 (10 mg/kg SD) 평균 10.07 9.95 9.73 9.61 9.49 9.33 9.20 9.07 8.98 8.88 8.80 8.73 8.74 8.67 8.51
sem 0.58 0.56 0.57 0.57 0.59 0.59 0.58 0.58 0.56 0.56 0.58 0.55 0.55 0.54 0.50
5H23 (1 mg/kg q4w) 평균 10.05 9.86 9.66 9.51 9.40 9.31 9.14 8.92 8.84 8.74 8.63 8.53 8.45 8.41 8.29
sem 0.42 0.45 0.43 0.42 0.44 0.44 0.43 0.43 0.42 0.41 0.42 0.40 0.40 0.39 0.38

표 26B 체중 변화 (kg)
일 수 -4 4 10 14 21 28 35 42 49 56 63 70 77 84 112
비히클 평균 0.00 -0.09 -0.28 -0.30 -0.26 -0.34 -0.35 -0.44 -0.45 -0.53 -0.56 -0.60 -0.64 -0.71 -0.93
sem 0.00 0.05 0.05 0.04 0.06 0.08 0.10 0.13 0.14 0.16 0.18 0.19 0.22 0.23 0.27
5H23 (0.1 mg/kg SD) 평균 0.00 -0.08 -0.30 -0.38 -0.49 -0.54 -0.64 -0.72 -0.74 -0.65 -0.66 -0.74 -0.66 -0.66 -0.80
sem 0.00 0.08 0.06 0.09 0.11 0.15 0.17 0.20 0.22 0.24 0.26 0.28 0.30 0.31 0.28
5H23 (1 mg/kg SD) 평균 0.00 -0.16 -0.35 -0.48 -0.56 -0.65 -0.79 -0.93 -0.95 -0.99 -1.00 -1.01 -0.95 -0.91 -0.60
sem 0.00 0.03 0.04 0.04 0.05 0.07 0.08 0.09 0.11 0.13 0.15 0.19 0.21 0.22 0.20
5H23 (10 mg/kg SD) 평균 0.00 -0.12 -0.34 -0.47 -0.59 -0.74 -0.88 -1.00 -1.10 -1.20 -1.27 -1.35 -1.34 -1.40 -1.56
sem 0.00 0.05 0.07 0.08 0.10 0.12 0.12 0.11 0.15 0.15 0.16 0.17 0.15 0.16 0.23
5H23 (1 mg/kg q4w) 평균 0.00 -0.18 -0.38 -0.54 -0.65 -0.74 -0.90 -1.13 -1.20 -1.30 -1.41 -1.52 -1.60 -1.64 -1.75
sem 0.00 0.08 0.06 0.05 0.05 0.06 0.08 0.10 0.11 0.13 0.15 0.15 0.16 0.17 0.26
인슐린
일 수 -3 d 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d 56 d 70 d 84 d 112 d
비히클 평균 78.
96 		75.
44 		85.
96 		98.
23 		90.
35 		80.
65 		71.
70 		76.
54 		80.
11 		80.
61 		70.
61 		51.
41
sem 17.
16 		16.
65 		15.
18 		23.
76 		21.
01 		15.
17 		13.
01 		12.
82 		16.
32 		20.
81 		17.
91 		11.
05
5H23
(0.1 mg/kg
SD)		 평균 118.
28 		64.
70 		65.
09 		65.
83 		61.
15 		62.
26 		84.
34 		68.
17 		85.
20 		82.
99 		95.
31 		57.
32
sem 62.
16 		20.
06 		22.
84 		20.
26 		22.
41 		19.
93 		37.
61 		24.
82 		41.
19 		45.
77 		46.
91 		20.
74
5H23
(1 mg/kg
SD)		 평균 74.
75 		54.
52 		51.
50 		54.
88 		42.
31 		46.
42 		46.
28 		38.
83 		56.
57 		40.
89 		51.
84 		64.
91
sem 14.
42 		15.
27 		10.
80 		15.
55 		13.
92 		11.
97 		10.
53 		7.
93 		16.
04 		7.
15 		14.
73 		21.
66
5H23
(10 mg/kg
SD)		 평균 84.
03 		51.
57 		46.
50 		54.
45 		53.
42 		38.
67 		37.
25 		34.
70 		32.
83 		25.
49 		33.
33 		22.
38
sem 18.
06 		10.
75 		7.
19 		14.
43 		15.
43 		7.
95 		5.
16 		5.
04 		6.
61 		3.
18 		7.
10 		2.
46
5H23
(1 mg/kg
q4w)		 평균 133.
82 		52.
88 		61.
67 		109.
20 		49.
94 		38.
83 		37.
60 		47.
85 		40.
18 		32.
42 		30.
58 		22.
14
sem 57.
35 		18.
45 		14.
30 		40.
07 		13.
96 		9.
93 		12.
32 		13.
85 		11.
96 		8.
21 		10.
73 		4.
17
글루코오스
일 수 -3 d 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d 56 d 70 d 84 d 112 d
비히클 평균 90.95 76.41 69.57 68.60 63.90 59.94 68.27 70.79 58.12 70.16 73.60 71.46
sem 8.29 9.37 5.55 7.89 6.31 3.46 6.14 7.93 4.42 7.37 7.52 11.33
5H23
(0.1 mg/kg SD)		 평균 92.54 72.59 67.10 63.23 54.14 58.19 62.37 62.53 62.46 64.24 79.27 73.80
sem 15.41 5.49 4.54 4.52 4.82 3.37 3.69 3.39 5.17 3.60 10.90 6.91
5H23
(1 mg/kg SD)		 평균 97.67 73.82 64.51 57.74 54.72 67.07 62.39 62.96 65.25 65.88 68.56 70.02
sem 11.08 4.64 2.69 3.29 4.38 4.98 3.91 2.36 2.59 8.34 5.21 6.84
5H23
(10 mg/kg SD)		 평균 89.71 73.24 68.74 61.13 58.93 60.55 66.49 61.11 63.14 59.11 69.59 66.49
sem 11.76 5.56 3.10 5.11 1.92 2.68 2.14 3.56 2.21 2.52 3.98 3.11
5H23
(1 mg/kg q4w)		 평균 130.01 87.28 81.11 77.56 71.89 67.82 67.79 66.98 65.34 63.23 72.56 69.50
sem 21.21 15.15 10.15 13.41 6.83 7.05 7.56 4.99 6.98 3.75 6.66 4.98
트리글리세리드
일 수 -3 d 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d 49 d 56 d 70 d 84 d 112 d
비히클 평균 0.90 0.61 1.00 1.45 1.04 1.51 1.03 1.30 0.99 1.10 1.12 0.79
sem 0.18 0.12 0.19 0.33 0.23 0.32 0.17 0.23 0.19 0.25 0.30 0.13
5H23
(0.1 mg/kg SD)		 평균 0.69 0.54 0.57 0.67 0.59 0.70 0.78 0.85 1.09 0.89 1.18 0.98
sem 0.13 0.10 0.11 0.17 0.15 0.14 0.22 0.20 0.40 0.25 0.39 0.27
5H23
(1 mg/kg SD)		 평균 1.27 0.58 0.76 0.91 0.73 0.59 0.59 0.72 0.83 0.95 1.33 1.61
sem 0.37 0.06 0.20 0.22 0.21 0.06 0.14 0.17 0.27 0.30 0.36 0.24
5H23
(10 mg/kg SD)		 평균 1.12 0.61 0.64 0.68 0.54 0.97 0.55 0.64 0.65 0.59 0.65 0.71
sem 0.18 0.09 0.12 0.15 0.09 0.38 0.09 0.13 0.12 0.12 0.11 0.12
5H23
(1 mg/kg q4w)		 평균 1.24 0.65 0.68 0.77 0.65 0.57 0.56 0.55 0.57 0.49 0.53 0.53
sem 0.36 0.18 0.19 0.28 0.11 0.11 0.09 0.13 0.14 0.10 0.08 0.07
이들 동물 연구의 결과는, 예를 들면, 체중, 체질량 지수, 복부둘레비율, 피하 지방 두께, 글루코오스 (예를 들어, 혈청 글루코오스), 인슐린 (예를 들어, 혈청 인슐린) 및/또는 트리글리세리드 (예를 들어, 혈청 트리글리세리드)의 감소와 같은, 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체의 처리에 의한 대사 파라미터의 개선을 입증하는 것이다.
실시예 9: 에피토프 및 도메인 매핑
인간화 5H23 항체(예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)와 같은 5H23 에피토프 빈의 인간 항-베타 클로토 항체 및 표 1-10 및 도 1-3에 제시된 서열을 가지는 실시예 3에 개시된 바와 같은 5H23을 비롯한 5H23 에피토프 빈의 항-베타 클로토 항체의 인간 KLB의 결합 자리를 국소화하기 위한 연구를 수행하였다. 예를 들면, 마우스 KLB (M1-F506)의 KL1 도메인 서열이 인간 KLB (M1-F508)의 KL1 도메인을 대체하여, 마우스-인간 KLB (서열번호: 376)이 생성되고, 인간 KL1 서열 (M1-F508)이 마우스 KLB (M1-F506)의 KL1 도메인을 대체하여, 인간-마우스 KLB (서열번호: 374)가 생성된 KLB: 인간, 마우스, 시아노몰거스, 키메라 버전의 변이체를 인코딩하는 플라스미드에 의해 일시적으로 형질감염된 Expi293 세포 (Life Technologies, A14635)에서, 도메인 매핑을 위한 FACS-기반 결합 분석을 수행하였다. 또한, KLB 서열을 보유하지 않는 발현 벡터 pYD7을 음성 대조군으로서 형질감염시켰다.
일부 연구에서, KLB 변이체에 대한 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)의 정제 샘플의 결합을 FACS 분석에 의해 측정하였다. 형질감염 2일 후 세포를 정제 항체: 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276), 대조군 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 358 및 VL 서열번호: 360)로 함께 인큐베이션하고, 음성 대조군 항체 (예를 들어, 서열번호: 424 및 425를 포함하는 작제물로부터 발현되는 항-키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH) 항체)를 4℃에서 30분 동안 PBS/1%BSA/0.1% 아지드 중에서 1 μg/ml로 희석하였다. PBS/1% BSA/0.1% 아지드로 세척 후, 형질감염 세포를 4℃에서 30분 동안 표지 항-인간 Fc (Jackson Immunoresearch)와 함께 인큐베이션하였다. PBS/1% BSA/0.1% 아지드로 세척 후, 세포를 유동 세포계측기 (FACS Calibur)에서 수득한 후, 세포계측 소프트웨어 (FlowJo)에 의해 분석하였다. 생성된 데이터를 표시하기 위해, 형광 강도의 함수로서, 세포의 수를 도시하는 그래프를 생성하고, 표 30에 제시된 바와 같이, 중앙 형광 강도 (MFI)를 각각의 샘플에서 측정하였다.
항체 마우스
KLB		 마우스-인간 키메라 KLB 인간-마우스 키메라 KLB 인간 KLB 시아노몰거스 KLB 빈 벡터
(-대조군)
h5H23 14.2 26.1 9.29 865 1909 8.29
대조군 10.6 5.6 71.9 620 1757 6.82
음성
대조군		 9.59 5.44 6.01 6.2 9.26 5.41
* FlowJo 분석 소프트웨어를 이용하여, FACS 데이터로부터 계산된 평균 형광 강도; 음성 대조군은 항-KLH 항체이다.
예시적 인간화 5H23 항체가 아닌, 항-KLH 음성 대조군 항체로 처리된 세포에 비해서, 고-형광 강도를 가지는 세포의 고 비율에 의해 시사되는 바와 같이, 인간 KLB 및 시아노몰거스 KLB에 결합하는 예시적 인간화 5H23 항체 (예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)는 마우스 KLB에 결합하지 않았다. 예시적 인간화 5H23 항체는 또한, 인간-마우스 KLB 키메라 단백질이 아닌, 마우스-인간 KLB 키메라 단백질에 결합하였으며, 이는, 표 1-10 및 도 1-3에서 제시된 서열을 가지는 것으로서, 실시예 3에서 개시되는 바와 같은 5H23을 비롯한 5H23 에피토프 빈의 항-베타 클로토 항체 및, 인간화 5H23 항체(예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276)와 같은 5H23 에피토프 빈의 인간 항-베타 클로토 항체가 인간 KLB의 KL2 도메인에 결합한다는 것을 시사한다. 반대로, 마우스-인간 KLB 키메라 단백질이 아닌, 인간-마우스 KLB 키메라 단백질에 의해 형질감염된 세포와의 결합에 의해 입증된 바와 같이, 대조군 항체는 인간 KLB의 KL1 도메인에 결합하였다.
인간 베타 클로토 KL2 도메인 내의 특이적 결합 잔기를 추가로 확인하기 위해, 인간 베타 클로토의 KL2 도메인의 각각의 잔기를 알라닌 (예를 들어, 잔기 F508A-L1008A)으로 개별적으로 돌연변이시키는데, 샷건 돌연변이 유발 (shotgun mutagenesis)을 이용하였다. HEK-293T 세포에서, 생성된 베타 클로토 돌연변이 단백질을 발현시킨 후, 형광-활성 세포 분류법 (FACS)에 의해, 표 1-10 및 도 1-3에서 제시된 서열을 가지는 것으로서, 실시예 3에서 개시되는 바와 같은 5H23을 비롯한 5H23 에피토프 빈의 항-베타 클로토 항체 및, 인간화 5H23 항체(예를 들어, VH 서열번호: 271 및 VL 서열번호: 276), 인간화 5H23 항체의 1가 Fab 단편과 같은 5H23 에피토프 빈의 인간 항-베타 클로토 항체와의 결합에 대해, 분석하였다. 예를 들면, 인간화 5H23 항체 0.5 μg/ml, Fab 단편 1.0 μg/ml 및 양성 대조군 폴리클로날 항-베타 클로토 항체 2.0 μg/ml의 농도에서, 베타 클로토 돌연변이 단백질의 스크리닝을 수행하였다.
결과적 매핑에 의해, 인간화 5H23 항체에 의한 결합에 대해서는 음성이며, 대조군 폴리클로날 항-베타 클로토 항체에 대해서는 양성인 3개의 특이적 결합 잔기 H657, Y701 및 R703이 확인되었다. 이들 잔기는, 표 31에 제시된 바와 같이, 그 측면 변화 (side change)가 항체-에피토프 상호작용에 대해 가장 강력한 원인을 제공하는 아미노산을 나타내었다. 도 6에서 제시되는 바와 같이, 2개의 단백질의 BLAST 정렬에 의해 확인되는 것으로서, 인간 시토졸 베타-글리코시다제의 균등한 위치에 이들 (흑색 네모)을 표시함으로써, 확인된 3개의 잔기의 위치를 모델링하였다 (PDB ID# 2JFE; Tribolo et al., J. Mol. Biol. 370, 964-975 (2007)). 상기 구조는 베타 클로토 잔기 521-963의 균등물을 제시한다. 인간화 5H23 항체와 Y701A 및 R703A 돌연변이의 낮은 반응성은, Y701 및 R703이 결합에 대한 강력한 주요 원인 제공 인자라는 것을 시사한다.
결합 반응성 (%WT)
단백질 돌연변이 인간화 5H23 항체 대조군 폴리클로날 항체
H657A 16.88 (±11.93) 120.35 (±55.21)
Y701A 0.64 (±0.09) 43.37 (±5.78)
R703A 1.64 (±1.69) 131.59 (±19.98)
따라서, 5H23 에피토프 빈의 항체 및 5H23을 비롯한 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체는, 잔기 H657, Y701 및/또는 R703을 포함하는 KLB2 도메인의 에피토프를 인식한다. 실시예 3에 개시된 바와 같이, 표 1-10 및 도 1-3의 CDR 서열을 포함하며, 이에 의해 재배열된 이러한 항체는, 예를 들면, 체중, 사료 섭취량, BMI, 인슐린, 글르코오스 및/또는 트리글리세리드의 저하를 비롯한 FGF19-매개 및/또는 FGF21-매개 신호 전달을 유도하는 작용제 항체로서 유용하다.
또한, 본 발명에서 제공되는 항-베타 클로토 항체는 베타 클로토의 결합에 있어서, 서로 경쟁하는 공통의 특성을 공유한다 (예를 들어, 5H23 에피토프 빈의 항체에 대해 개시하는 실시예 3 참조). 이러한 경쟁적 억제는, 각각의 항체베타 클로토의 동일한 영역 (예를 들어, 동일한 에피토프)에 결합하여, 유사한 효과를 발휘한다는 것을 시사한다. 본 명세서에서 추가로 예시된 바와 같이, 항-베타 클로토 항체에는, 인간 베타 클로토의 특정 도메인 (예를 들어, 전술된 바와 같은 KL2 (잔기 S509-S1044))에 결합하는 인간화 항-베타 클로토 항체를 비롯하여, 항-베타 클로토 항체와 같은, 표 1-10 또는 도 1-3에 개시된 바와 같은 CDR 서열을 가지는 5H23, 1C17, 1D19, 2L12, 3L3, 3N20, 4P5, 5C23, 5F7 및/또는 1G19로부터 유래하거나 또는 이를 기반으로 하는 인간화 항-베타 클로토 항체를 비롯한 인간화 항-베타 클로토 항체가 포함된다. 또한, 이러한 결합은 주로, 본 발명에서 개시된 바와 같은 항-베타 클로토 항체에 의해 인식되는 에피토프를 포함하는 KL2 영역 (예를 들어, 전술된 바와 같은 H657, Y701 및 R703) 내의 특정 아미노산 잔기에 의한 것일 수 있다. 종합하면, 이들 결과는, 표 1-10 또는 도 1-3에 개시된 하나 또는 그 이상의 CDR을 가지는 항체를 비롯한, 5H23 에피토프 빈의 항체 또는 5H23으로부터 유래하거나 또는 이를 기반으로 하는 항-베타 클로토 항체에서 관측되는 효과가, 동일하거나 또는 유사한 에피토프 특이성 (예를 들어, 동일하거나 또는 유사한 CDR)을 가지는 본 발명에서 개시된 바와 같은 다른 항-베타 클로토 항체에 대해 추론될 수 있다는 것을 입증한다. 예를 들면, 예시적 인간화 항-베타 클로토 항체에 있어서, 실시예 8에서 입증된 생체 내 효과뿐만 아니라, 상기의 실시예 4-7에서 제시된 항체의 시험관 내 활성은, 본 발명에서 개시된 바와 같은 항-베타 클로토 항체의 대표 활성 및 효과이다.
전술된 본 발명의 실시형태들은 단지 예시 목적이며, 당업자는, 일상적인 실험만을 이용하여, 본 발명에서 개시되는 특정 절차에 대한 다수의 균등물을 인지하거나 또는 인식할 수 있을 것이다. 이러한 모든 균등물은 본 발명의 범위 내로 고려되며, 하기 첨부되는 특허청구범위에 의해, 포괄된다. 또한, 본 명세서 및 특허청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태 "하나 (a, an)" 및 "상기 (the)"는, 내용상 별도로 명백히 적시되지 않는 한, 복수 형태를 포함하는 것이다. 따라서, 예를 들면, "하나의 항체"에 대한 인용구에는 2개 또는 그 이상의 이들 항체 등의 혼합물이 포함될 수 있다. 또한, 당업자는, 설명 및 청구 목적을 위해, 작업 시퀀스가 일정한 특정 순서로 제시되어야 하나, 본 발명에서는 이러한 특정 순서 이상의 다양한 변화가 고려된다.
본 발명에서 개시된 모든 참조의 내용은 본 발명에서 참조로서 포함된다.
기타 실시형태들이 하기 첨부되는 특허청구범위 내에 있다.
SEQUENCE LISTING <110> NGM BIOPHARMACEUTICALS, INC. <120> BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF <130> 13370-011-228 <140> TBA <141> On evendate herewith <150> 61/931,531 <151> 2014-01-24 <160> 431 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR1 - Exemplary <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR2- Exemplary <400> 2 Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR3- Exemplary <400> 3 Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR1- Exemplary <400> 4 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Val Tyr Met His 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR2- Exemplary <400> 5 Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR3- Exemplary <400> 6 Gln His Ser Arg Asp Leu Thr Phe Pro 1 5 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR1 - IMGT <400> 7 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR2 - IMGT <400> 8 Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr 1 5 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR3 - IMGT <400> 9 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala Tyr 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR1- IMGT <400> 10 Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 11 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR2- IMGT <400> 11 Leu Ala Ser 1 <210> 12 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR1 - Kabat <400> 12 Ser Tyr Asp Ile Asn 1 5 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR1 - Chothia <400> 13 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 1 5 <210> 14 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR2 - Chothia <400> 14 Pro Gly Asp Gly 1 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR3 - Chothia <400> 15 Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala 1 5 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR1- Chothia <400> 16 Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VL CDR3- Chothia <400> 17 Ser Arg Asp Leu Thr Phe 1 5 <210> 18 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR1 - Contact <400> 18 Thr Ser Tyr Asp Ile Asn 1 5 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR2 - Contact <400> 19 Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys 1 5 10 <210> 20 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23 VH CDR3 - Contact <400> 20 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala 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Artificial Sequence <220> <223> consensus CDR1 sequence of anti-beta klotho antibodies VL domain <220> <221> VARIANT <222> 14 <223> Xaa = Met, Leu or Val <400> 266 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Xaa His 1 5 10 15 <210> 267 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus CDR3 sequence of anti-beta klotho antibodies VL domain <220> <221> VARIANT <222> 1 <223> Xaa = Gln or His <220> <221> VARIANT <222> 4 <223> Xaa = Arg or Gly <400> 267 Xaa His Ser Xaa Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 268 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> consensus CDR3 sequence of anti-beta klotho antibodies VL domain <220> <221> VARIANT <222> 8 <223> Xaa = Phe or Tyr <400> 268 Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Xaa Thr 1 5 <210> 269 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> vH1 <400> 269 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val 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Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Ala Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 273 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> vH5 <400> 273 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asn Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 274 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> vH6 <400> 274 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Arg Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asn Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 275 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> vL1 <400> 275 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Tyr Val Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 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gggtattggg actggagcat tgcaagtgga agggagttgg 300 aagaaggatg gaaaaggacc ttctatatgg gatcatttca tccacacaca ccttaaaaat 360 gtcagcagca cgaatggttc cagtgacagt tatatttttc tggaaaaaga cttatcagcc 420 ctggatttta taggagtttc tttttatcaa ttttcaattt cctggccaag gcttttcccc 480 gatggaatag taacagttgc caacgcaaaa ggtctgcagt actacagtac tcttctggac 540 gctctagtgc ttagaaacat tgaacctata gttactttat accactggga tttgcctttg 600 gcactacaag aaaaatatgg ggggtggaaa aatgatacca taatagatat cttcaatgac 660 tatgccacat actgtttcca gatgtttggg gaccgtgtca aatattggat tacaattcac 720 aacccatatc tagtggcttg gcatgggtat gggacaggta tgcatgcccc tggagagaag 780 ggaaatttag cagctgtcta cactgtggga cacaacttga tcaaggctca ctcgaaagtt 840 tggcataact acaacacaca tttccgccca catcagaagg gttggttatc gatcacgttg 900 ggatctcatt ggatcgagcc aaaccggtcg gaaaacacga tggatatatt caaatgtcaa 960 caatccatgg tttctgtgct tggatggttt gccaacccta tccatgggga tggcgactat 1020 ccagagggga tgagaaagaa gttgttctcc gttctaccca ttttctctga agcagagaag 1080 catgagatga gaggcacagc tgatttcttt 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ttcaaactgg ctgaagagaa atctaaaccc 2820 agatttggat tcttcacatc tgattttaaa gctaaatcct caatacaatt ttacaacaaa 2880 gtgatcagca gcaggggctt cccttttgag aacagtagtt ctagatgcag tcagacccaa 2940 gaaaatacag agtgcactgt ctgcttattc cttgtgcaga agaaaccact gatattcctg 3000 ggttgttgct tcttctccac cctggttcta ctcttatcaa ttgccatttt tcaaaggcag 3060 aagagaagaa agttttggaa agcaaaaaac ttacaacaca taccattaaa gaaaggcaag 3120 agagttgtta gc 3132 <210> 299 <211> 1044 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <220> <223> cynomolgus monkey (cyno) beta klotho <400> 299 Met Lys Pro Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp Ile Phe 1 5 10 15 Phe Ser Thr Asp Glu Ile Thr Ile Arg Tyr Arg Asn Thr Met Ser Asn 20 25 30 Gly Gly Leu Gln Arg Ser Val Ile Leu Ser Ala Leu Thr Leu Leu Arg 35 40 45 Ala Val Thr Gly Phe Ser Gly Asp Gly Arg Ala Val Trp Ser Lys Asn 50 55 60 Pro Asn Phe Thr Pro Val Asn Glu Ser Gln Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 75 80 Phe Pro Lys Asn Phe Phe Trp Gly Val Gly Thr Gly Ala Leu Gln Val 85 90 95 Glu Gly Ser Trp Lys Lys Asp 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tacatctttc tggaaaaaga cttgttggct 420 ctggattttt taggagtttc tttttatcag ttctcaatct cctggccacg gttgtttccc 480 aatggaacag tagcagcagt gaatgcgcaa ggtctccggt actaccgtgc acttctggac 540 tcgctggtac ttaggaatat cgagcccatt gttaccttgt accattggga tttgcctctg 600 acgctccagg aagaatatgg gggctggaaa aatgcaacta tgatagatct cttcaacgac 660 tatgccacat actgcttcca gacctttgga gaccgtgtca aatattggat tacaattcac 720 aacccttacc ttgttgcttg gcatgggttt ggcacaggta tgcatgcacc aggagagaag 780 ggaaatttaa cagctgtcta cactgtggga cacaacctga tcaaggcaca ttcgaaagtg 840 tggcataact acgacaaaaa cttccgccct catcagaagg gttggctctc catcaccttg 900 gggtcccatt ggatagagcc aaacagaaca gacaacatgg aggacgtgat caactgccag 960 cactccatgt cctctgtgct tggatggttc gccaacccca tccacgggga cggcgactac 1020 cctgagttca tgaagacggg cgccatgatc cccgagttct ctgaggcaga gaaggaggag 1080 gtgaggggca cggctgattt ctttgccttt tccttcgggc ccaacaactt caggccctca 1140 aacaccgtgg tgaaaatggg acaaaatgta tcactcaact taaggcaggt gctgaactgg 1200 attaaactgg aatacgatga ccctcaaatc ttgatttcgg agaacggctg gttcacagat 1260 agctatataa agacagagga caccacggcc atctacatga tgaagaattt cctaaaccag 1320 gttcttcaag caataaaatt tgatgaaatc cgcgtgtttg gttatacggc ctggactctc 1380 ctggatggct ttgagtggca ggatgcctat acgacccgac gagggctgtt ttatgtggac 1440 tttaacagtg agcagaaaga gaggaaaccc aagtcctcgg ctcattacta caagcagatc 1500 atacaagaca acggcttccc tttgaaagag tccacgccag acatgaaggg tcggttcccc 1560 tgtgatttct cttggggagt cactgagtct gttcttaagc ccgagtttac ggtctcctcc 1620 ccgcagttta ccgatcctca cctgtatgtg tggaatgtca ctggcaacag attgctctac 1680 cgagtggaag gggtaaggct gaaaacaaga ccatcccagt gcacagatta tgtgagcatc 1740 aaaaaacgag ttgaaatgtt ggcaaaaatg aaagtcaccc actaccagtt tgctctggac 1800 tggacctcta tccttcccac tggcaatctg tccaaagtta acagacaagt gttaaggtac 1860 tataggtgtg tggtgagcga aggactgaag ctgggcgtct tccccatggt gacgttgtac 1920 cacccaaccc actcccatct cggcctcccc ctgccacttc tgagcagtgg ggggtggcta 1980 aacatgaaca cagccaaggc cttccaggac tacgctgagc tgtgcttccg ggagttgggg 2040 gacttggtga agctctggat caccatcaat gagcctaaca ggctgagtga catgtacaac 2100 cgcacgagta atgacaccta ccgtgcagcc cacaacctga tgatcgccca tgcccaggtc 2160 tggcacctct atgataggca gtataggccg gtccagcatg gggctgtgtc gctgtcctta 2220 cattgcgact gggcagaacc tgccaacccc tttgtggatt cacactggaa ggcagccgag 2280 cgcttcctcc agtttgagat cgcctggttt gcagatccgc tcttcaagac tggcgactat 2340 ccatcggtta tgaaggaata catcgcctcc aagaaccagc gagggctgtc tagctcagtc 2400 ctgccgcgct tcaccgcgaa ggagagcagg ctggtgaagg gtaccgtcga cttctacgca 2460 ctgaaccact tcactacgag gttcgtgata cacaagcagc tgaacaccaa ccgctcagtt 2520 gcagacaggg acgtccagtt cctgcaggac atcacccgcc taagctcgcc cagccgcctg 2580 gctgtaacac cctggggagt gcgcaagctc cttgcgtgga tccggaggaa ctacagagac 2640 agggatatct acatcacagc caatggcatc gatgacctgg ctctagagga tgatcagatc 2700 cgaaagtact acttggagaa gtatgtccag gaggctctga aagcatatct cattgacaag 2760 gtcaaaatca aaggctacta tgcattcaaa ctgactgaag agaaatctaa gcctagattt 2820 ggatttttca cctctgactt cagagctaag tcctctgtcc agttttacag caagctgatc 2880 agcagcagtg gcctccccgc tgagaacaga agtcctgcgt gtggtcagcc tgcggaagac 2940 acagactgca ccatttgctc atttctcgtg gagaagaaac cactcatctt cttcggttgc 3000 tgcttcatct ccactctggc tgtactgcta tccatcaccg tttttcatca tcaaaagaga 3060 agaaaattcc agaaagcaag gaacttacaa aatataccat tgaagaaagg ccacagcaga 3120 gttttcagc 3129 <210> 303 <211> 651 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> full length FGF19 (NM_005117.2) <400> 303 atgcggagcg ggtgtgtggt ggtccacgta tggatcctgg ccggcctctg gctggccgtg 60 gccgggcgcc ccctcgcctt ctcggacgcg gggccccacg tgcactacgg ctggggcgac 120 cccatccgcc tgcggcacct gtacacctcc ggcccccacg ggctctccag ctgcttcctg 180 cgcatccgtg ccgacggcgt cgtggactgc gcgcggggcc agagcgcgca cagtttgctg 240 gagatcaagg cagtcgctct gcggaccgtg gccatcaagg gcgtgcacag cgtgcggtac 300 ctctgcatgg gcgccgacgg caagatgcag gggctgcttc agtactcgga ggaagactgt 360 gctttcgagg aggagatccg cccagatggc tacaatgtgt accgatccga gaagcaccgc 420 ctcccggtct ccctgagcag tgccaaacag cggcagctgt acaagaacag aggctttctt 480 ccactctctc atttcctgcc catgctgccc atggtcccag aggagcctga ggacctcagg 540 ggccacttgg aatctgacat gttctcttcg cccctggaga ccgacagcat ggacccattt 600 gggcttgtca ccggactgga ggccgtgagg agtcccagct ttgagaagta a 651 <210> 304 <211> 194 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> full length FGF19 (NP_005108.1) <400> 304 Arg Pro Leu Ala Phe Ser Asp Ala Gly Pro His Val His Tyr Gly Trp 1 5 10 15 Gly Asp Pro Ile Arg Leu Arg His Leu Tyr Thr Ser Gly Pro His Gly 20 25 30 Leu Ser Ser Cys Phe Leu Arg Ile Arg Ala Asp Gly Val Val Asp Cys 35 40 45 Ala Arg Gly Gln Ser Ala His Ser Leu Leu Glu Ile Lys Ala Val Ala 50 55 60 Leu Arg Thr Val Ala Ile Lys Gly Val His Ser Val Arg Tyr Leu Cys 65 70 75 80 Met Gly Ala Asp Gly Lys Met Gln Gly Leu Leu Gln Tyr Ser Glu Glu 85 90 95 Asp Cys Ala Phe Glu Glu Glu Ile Arg Pro Asp Gly Tyr Asn Val Tyr 100 105 110 Arg Ser Glu Lys His Arg Leu Pro Val Ser Leu Ser Ser Ala Lys Gln 115 120 125 Arg Gln Leu Tyr Lys Asn Arg Gly Phe Leu Pro Leu Ser His Phe Leu 130 135 140 Pro Met Leu Pro Met Val Pro Glu Glu Pro Glu Asp Leu Arg Gly His 145 150 155 160 Leu Glu Ser Asp Met Phe Ser Ser Pro Leu Glu Thr Asp Ser Met Asp 165 170 175 Pro Phe Gly Leu Val Thr Gly Leu Glu Ala Val Arg Ser Pro Ser Phe 180 185 190 Glu Lys <210> 305 <211> 630 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> A full length FGF21 <400> 305 atggactcgg acgagaccgg gttcgagcac tcaggactgt gggtttctgt gctggctggt 60 cttctgctgg gagcctgcca ggcacacccc atccctgact ccagtcctct cctgcaattc 120 gggggccaag tccggcagcg gtacctctac acagatgatg cccagcagac agaagcccac 180 ctggagatca gggaggatgg gacggtgggg ggcgctgctg accagagccc cgaaagtctc 240 ctgcagctga aagccttgaa gccgggagtt attcaaatct tgggagtcaa gacatccagg 300 ttcctgtgcc agcggccaga tggggccctg tatggatcgc tccactttga ccctgaggcc 360 tgcagcttcc gggagctgct tcttgaggac ggatacaatg tttaccagtc cgaagcccac 420 ggcctcccgc tgcacctgcc agggaacaag tccccacacc gggaccctgc accccgagga 480 ccagctcgct tcctgccact accaggcctg ccccccgcac ccccggagcc acccggaatc 540 ctggcccccc agccccccga tgtgggctcc tcggaccctc tgagcatggt gggaccttcc 600 cagggccgaa gccccagcta cgcttcctga 630 <210> 306 <211> 209 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A full length FGF21 <400> 306 Met Asp Ser Asp Glu Thr Gly Phe Glu His Ser Gly Leu Trp Val Ser 1 5 10 15 Val Leu Ala Gly Leu Leu Leu Gly Ala Cys Gln Ala His Pro Ile Pro 20 25 30 Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg 50 55 60 Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu 65 70 75 80 Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val 85 90 95 Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly 100 105 110 Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu 115 120 125 Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu 130 135 140 His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly 145 150 155 160 Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Pro Pro Glu 165 170 175 Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp 180 185 190 Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Ala 195 200 205 Ser <210> 307 <211> 2469 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR1c NM_023110.2 (also designated FGFR alpha-IIIc) <400> 307 atgtggagct ggaagtgcct cctcttctgg gctgtgctgg tcacagccac actctgcacc 60 gctaggccgt ccccgacctt gcctgaacaa gcccagccct ggggagcccc tgtggaagtg 120 gagtccttcc tggtccaccc cggtgacctg ctgcagcttc gctgtcggct gcgggacgat 180 gtgcagagca tcaactggct gcgggacggg gtgcagctgg cggaaagcaa ccgcacccgc 240 atcacagggg aggaggtgga ggtgcaggac tccgtgcccg cagactccgg cctctatgct 300 tgcgtaacca gcagcccctc gggcagtgac accacctact tctccgtcaa tgtttcagat 360 gctctcccct cctcggagga tgatgatgat gatgatgact cctcttcaga ggagaaagaa 420 acagataaca ccaaaccaaa ccgtatgccc gtagctccat attggacatc accagaaaag 480 atggaaaaga aattgcatgc agtgccggct gccaagacag tgaagttcaa atgcccttcc 540 agtgggacac caaacccaac actgcgctgg ttgaaaaatg gcaaagaatt caaacctgac 600 cacagaattg gaggctacaa ggtccgttat gccacctgga gcatcataat ggactctgtg 660 gtgccctctg acaagggcaa ctacacctgc attgtggaga atgagtacgg cagcatcaac 720 cacacatacc agctggatgt cgtggagcgg tcccctcacc ggcccatcct gcaagcaggg 780 ttgcccgcca acaaaacagt ggccctgggt agcaacgtgg agttcatgtg taaggtgtac 840 agtgacccgc agccgcacat ccagtggcta aagcacatcg aggtgaatgg gagcaagatt 900 ggcccagaca acctgcctta tgtccagatc ttgaagactg ctggagttaa taccaccgac 960 aaagagatgg aggtgcttca cttaagaaat gtctcctttg aggacgcagg ggagtatacg 1020 tgcttggcgg gtaactctat cggactctcc catcactctg catggttgac cgttctggaa 1080 gccctggaag agaggccggc agtgatgacc tcgcccctgt acctggagat catcatctat 1140 tgcacagggg ccttcctcat ctcctgcatg gtggggtcgg tcatcgtcta caagatgaag 1200 agtggtacca agaagagtga cttccacagc cagatggctg tgcacaagct ggccaagagc 1260 atccctctgc gcagacaggt aacagtgtct gctgactcca gtgcatccat gaactctggg 1320 gttcttctgg ttcggccatc acggctctcc tccagtggga ctcccatgct agcaggggtc 1380 tctgagtatg agcttcccga agaccctcgc tgggagctgc ctcgggacag actggtctta 1440 ggcaaacccc tgggagaggg ctgctttggg caggtggtgt tggcagaggc tatcgggctg 1500 gacaaggaca aacccaaccg tgtgaccaaa gtggctgtga agatgttgaa gtcggacgca 1560 acagagaaag acttgtcaga cctgatctca gaaatggaga tgatgaagat gatcgggaag 1620 cataagaata tcatcaacct gctgggggcc tgcacgcagg atggtccctt gtatgtcatc 1680 gtggagtatg cctccaaggg caacctgcgg gagtacctgc aggcccggag gcccccaggg 1740 ctggaatact gctacaaccc cagccacaac ccagaggagc agctctcctc caaggacctg 1800 gtgtcctgcg cctaccaggt ggcccgaggc atggagtatc tggcctccaa gaagtgcata 1860 caccgagacc tggcagccag gaatgtcctg gtgacagagg acaatgtgat gaagatagca 1920 gactttggcc tcgcacggga cattcaccac atcgactact ataaaaagac aaccaacggc 1980 cgactgcctg tgaagtggat ggcacccgag gcattatttg accggatcta cacccaccag 2040 agtgatgtgt ggtctttcgg ggtgctcctg tgggagatct tcactctggg cggctcccca 2100 taccccggtg tgcctgtgga ggaacttttc aagctgctga aggagggtca ccgcatggac 2160 aagcccagta actgcaccaa cgagctgtac atgatgatgc gggactgctg gcatgcagtg 2220 ccctcacaga gacccacctt caagcagctg gtggaagacc tggaccgcat cgtggccttg 2280 acctccaacc aggagtacct ggacctgtcc atgcccctgg accagtactc ccccagcttt 2340 cccgacaccc ggagctctac gtgctcctca ggggaggatt ccgtcttctc tcatgagccg 2400 ctgcccgagg agccctgcct gccccgacac ccagcccagc ttgccaatgg cggactcaaa 2460 cgccgctga 2469 <210> 308 <211> 822 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR1c NP_075598.2 (also designated FGFR alpha-IIIc) <400> 308 Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln 20 25 30 Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly 35 40 45 Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile 50 55 60 Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser 85 90 95 Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110 Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125 Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140 Lys Pro Asn Arg Met Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 145 150 155 160 Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe 165 170 175 Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys 180 185 190 Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val 195 200 205 Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp 210 215 220 Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn 225 230 235 240 His Thr Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile 245 250 255 Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn 260 265 270 Val Glu Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln 275 280 285 Trp Leu Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn 290 295 300 Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp 305 310 315 320 Lys Glu Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala 325 330 335 Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His 340 345 350 Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val 355 360 365 Met Thr Ser Pro Leu Tyr Leu Glu Ile Ile Ile Tyr Cys Thr Gly Ala 370 375 380 Phe Leu Ile Ser Cys Met Val Gly Ser Val Ile Val Tyr Lys Met Lys 385 390 395 400 Ser Gly Thr Lys Lys Ser Asp Phe His Ser Gln Met Ala Val His Lys 405 410 415 Leu Ala Lys Ser Ile Pro Leu Arg Arg Gln Val Thr Val Ser Ala Asp 420 425 430 Ser Ser Ala Ser Met Asn Ser Gly Val Leu Leu Val Arg Pro Ser Arg 435 440 445 Leu Ser Ser Ser Gly Thr Pro Met Leu Ala Gly Val Ser Glu Tyr Glu 450 455 460 Leu Pro Glu Asp Pro Arg Trp Glu Leu Pro Arg Asp Arg Leu Val Leu 465 470 475 480 Gly Lys Pro Leu Gly Glu Gly Cys Phe Gly Gln Val Val Leu Ala Glu 485 490 495 Ala Ile Gly Leu Asp Lys Asp Lys Pro Asn Arg Val Thr Lys Val Ala 500 505 510 Val Lys Met Leu Lys Ser Asp Ala Thr Glu Lys Asp Leu Ser Asp Leu 515 520 525 Ile Ser Glu Met Glu Met Met Lys Met Ile Gly Lys His Lys Asn Ile 530 535 540 Ile Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Gln Asp Gly Pro Leu Tyr Val Ile 545 550 555 560 Val Glu Tyr Ala Ser Lys Gly Asn Leu Arg Glu Tyr Leu Gln Ala Arg 565 570 575 Arg Pro Pro Gly Leu Glu Tyr Cys Tyr Asn Pro Ser His Asn Pro Glu 580 585 590 Glu Gln Leu Ser Ser Lys Asp Leu Val Ser Cys Ala Tyr Gln Val Ala 595 600 605 Arg Gly Met Glu Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Cys Ile His Arg Asp Leu 610 615 620 Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr Glu Asp Asn Val Met Lys Ile Ala 625 630 635 640 Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile His His Ile Asp Tyr Tyr Lys Lys 645 650 655 Thr Thr Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ala Leu 660 665 670 Phe Asp Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val 675 680 685 Leu Leu Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro Tyr Pro Gly Val 690 695 700 Pro Val Glu Glu Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Gly His Arg Met Asp 705 710 715 720 Lys Pro Ser Asn Cys Thr Asn Glu Leu Tyr Met Met Met Arg Asp Cys 725 730 735 Trp His Ala Val Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys Gln Leu Val Glu 740 745 750 Asp Leu Asp Arg Ile Val Ala Leu Thr Ser Asn Gln Glu Tyr Leu Asp 755 760 765 Leu Ser Met Pro Leu Asp Gln Tyr Ser Pro Ser Phe Pro Asp Thr Arg 770 775 780 Ser Ser Thr Cys Ser Ser Gly Glu Asp Ser Val Phe Ser His Glu Pro 785 790 795 800 Leu Pro Glu Glu Pro Cys Leu Pro Arg His Pro Ala Gln Leu Ala Asn 805 810 815 Gly Gly Leu Lys Arg Arg 820 <210> 309 <211> 374 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> example of extracellular region of FGFR1c <400> 309 Met Trp Ser Trp Lys Cys Leu Leu Phe Trp Ala Val Leu Val Thr Ala 1 5 10 15 Thr Leu Cys Thr Ala Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln 20 25 30 Pro Trp Gly Ala Pro Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly 35 40 45 Asp Leu Leu Gln Leu Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile 50 55 60 Asn Trp Leu Arg Asp Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg 65 70 75 80 Ile Thr Gly Glu Glu Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser 85 90 95 Gly Leu Tyr Ala Cys Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr 100 105 110 Tyr Phe Ser Val Asn Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp 115 120 125 Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr 130 135 140 Lys Pro Asn Arg Met Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 145 150 155 160 Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe 165 170 175 Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys 180 185 190 Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val 195 200 205 Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp 210 215 220 Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn 225 230 235 240 His Thr Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile 245 250 255 Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn 260 265 270 Val Glu Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln 275 280 285 Trp Leu Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn 290 295 300 Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp 305 310 315 320 Lys Glu Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala 325 330 335 Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His 340 345 350 Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val 355 360 365 Met Thr Ser Pro Leu Tyr 370 <210> 310 <211> 2466 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Coding sequence of human FGFR2c (NM_000141.4) <400> 310 atggtcagct ggggtcgttt catctgcctg gtcgtggtca ccatggcaac cttgtccctg 60 gcccggccct ccttcagttt agttgaggat accacattag agccagaaga gccaccaacc 120 aaataccaaa tctctcaacc agaagtgtac gtggctgcgc caggggagtc gctagaggtg 180 cgctgcctgt tgaaagatgc cgccgtgatc agttggacta aggatggggt gcacttgggg 240 cccaacaata ggacagtgct tattggggag tacttgcaga taaagggcgc cacgcctaga 300 gactccggcc tctatgcttg tactgccagt aggactgtag acagtgaaac ttggtacttc 360 atggtgaatg tcacagatgc catctcatcc ggagatgatg aggatgacac cgatggtgcg 420 gaagattttg tcagtgagaa cagtaacaac aagagagcac catactggac caacacagaa 480 aagatggaaa agcggctcca tgctgtgcct gcggccaaca ctgtcaagtt tcgctgccca 540 gccgggggga acccaatgcc aaccatgcgg tggctgaaaa acgggaagga gtttaagcag 600 gagcatcgca ttggaggcta caaggtacga aaccagcact ggagcctcat tatggaaagt 660 gtggtcccat ctgacaaggg aaattatacc tgtgtagtgg agaatgaata cgggtccatc 720 aatcacacgt accacctgga tgttgtggag cgatcgcctc accggcccat cctccaagcc 780 ggactgccgg caaatgcctc cacagtggtc ggaggagacg tagagtttgt ctgcaaggtt 840 tacagtgatg cccagcccca catccagtgg atcaagcacg tggaaaagaa cggcagtaaa 900 tacgggcccg acgggctgcc ctacctcaag gttctcaagg ccgccggtgt taacaccacg 960 gacaaagaga ttgaggttct ctatattcgg aatgtaactt ttgaggacgc tggggaatat 1020 acgtgcttgg cgggtaattc tattgggata tcctttcact ctgcatggtt gacagttctg 1080 ccagcgcctg gaagagaaaa ggagattaca gcttccccag actacctgga gatagccatt 1140 tactgcatag gggtcttctt aatcgcctgt atggtggtaa cagtcatcct gtgccgaatg 1200 aagaacacga ccaagaagcc agacttcagc agccagccgg ctgtgcacaa gctgaccaaa 1260 cgtatccccc tgcggagaca ggtaacagtt tcggctgagt ccagctcctc catgaactcc 1320 aacaccccgc tggtgaggat aacaacacgc ctctcttcaa cggcagacac ccccatgctg 1380 gcaggggtct ccgagtatga acttccagag gacccaaaat gggagtttcc aagagataag 1440 ctgacactgg gcaagcccct gggagaaggt tgctttgggc aagtggtcat ggcggaagca 1500 gtgggaattg acaaagacaa gcccaaggag gcggtcaccg tggccgtgaa gatgttgaaa 1560 gatgatgcca cagagaaaga cctttctgat ctggtgtcag agatggagat gatgaagatg 1620 attgggaaac acaagaatat cataaatctt cttggagcct gcacacagga tgggcctctc 1680 tatgtcatag ttgagtatgc ctctaaaggc aacctccgag aatacctccg agcccggagg 1740 ccacccggga tggagtactc ctatgacatt aaccgtgttc ctgaggagca gatgaccttc 1800 aaggacttgg tgtcatgcac ctaccagctg gccagaggca tggagtactt ggcttcccaa 1860 aaatgtattc atcgagattt agcagccaga aatgttttgg taacagaaaa caatgtgatg 1920 aaaatagcag actttggact cgccagagat atcaacaata tagactatta caaaaagacc 1980 accaatgggc ggcttccagt caagtggatg gctccagaag ccctgtttga tagagtatac 2040 actcatcaga gtgatgtctg gtccttcggg gtgttaatgt gggagatctt cactttaggg 2100 ggctcgccct acccagggat tcccgtggag gaacttttta agctgctgaa ggaaggacac 2160 agaatggata agccagccaa ctgcaccaac gaactgtaca tgatgatgag ggactgttgg 2220 catgcagtgc cctcccagag accaacgttc aagcagttgg tagaagactt ggatcgaatt 2280 ctcactctca caaccaatga ggaatacttg gacctcagcc aacctctcga acagtattca 2340 cctagttacc ctgacacaag aagttcttgt tcttcaggag atgattctgt tttttctcca 2400 gaccccatgc cttacgaacc atgccttcct cagtatccac acataaacgg cagtgttaaa 2460 acatga 2466 <210> 311 <211> 800 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR2c (NP_000132.3) <400> 311 Arg Pro Ser Phe Ser Leu Val Glu Asp Thr Thr Leu Glu Pro Glu Glu 1 5 10 15 Pro Pro Thr Lys Tyr Gln Ile Ser Gln Pro Glu Val Tyr Val Ala Ala 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Glu Val Arg Cys Leu Leu Lys Asp Ala Ala Val 35 40 45 Ile Ser Trp Thr Lys Asp Gly Val His Leu Gly Pro Asn Asn Arg Thr 50 55 60 Val Leu Ile Gly Glu Tyr Leu Gln Ile Lys Gly Ala Thr Pro Arg Asp 65 70 75 80 Ser Gly Leu Tyr Ala Cys Thr Ala Ser Arg Thr Val Asp Ser Glu Thr 85 90 95 Trp Tyr Phe Met Val Asn Val Thr Asp Ala Ile Ser Ser Gly Asp Asp 100 105 110 Glu Asp Asp Thr Asp Gly Ala Glu Asp Phe Val Ser Glu Asn Ser Asn 115 120 125 Asn Lys Arg Ala Pro Tyr Trp Thr Asn Thr Glu Lys Met Glu Lys Arg 130 135 140 Leu His Ala Val Pro Ala Ala Asn Thr Val Lys Phe Arg Cys Pro Ala 145 150 155 160 Gly Gly Asn Pro Met Pro Thr Met Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu 165 170 175 Phe Lys Gln Glu His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Asn Gln His 180 185 190 Trp Ser Leu Ile Met Glu Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr 195 200 205 Thr Cys Val Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr His 210 215 220 Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly 225 230 235 240 Leu Pro Ala Asn Ala Ser Thr Val Val Gly Gly Asp Val Glu Phe Val 245 250 255 Cys Lys Val Tyr Ser Asp Ala Gln Pro His Ile Gln Trp Ile Lys His 260 265 270 Val Glu Lys Asn Gly Ser Lys Tyr Gly Pro Asp Gly Leu Pro Tyr Leu 275 280 285 Lys Val Leu Lys Ala Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Ile Glu 290 295 300 Val Leu Tyr Ile Arg Asn Val Thr Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr 305 310 315 320 Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Ile Ser Phe His Ser Ala Trp Leu 325 330 335 Thr Val Leu Pro Ala Pro Gly Arg Glu Lys Glu Ile Thr Ala Ser Pro 340 345 350 Asp Tyr Leu Glu Ile Ala Ile Tyr Cys Ile Gly Val Phe Leu Ile Ala 355 360 365 Cys Met Val Val Thr Val Ile Leu Cys Arg Met 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Ser Val Lys Thr 785 790 795 800 <210> 312 <211> 2421 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR3c (NM_000142.4) <400> 312 atgggcgccc ctgcctgcgc cctcgcgctc tgcgtggccg tggccatcgt ggccggcgcc 60 tcctcggagt ccttggggac ggagcagcgc gtcgtggggc gagcggcaga agtcccgggc 120 ccagagcccg gccagcagga gcagttggtc ttcggcagcg gggatgctgt ggagctgagc 180 tgtcccccgc ccgggggtgg tcccatgggg cccactgtct gggtcaagga tggcacaggg 240 ctggtgccct cggagcgtgt cctggtgggg ccccagcggc tgcaggtgct gaatgcctcc 300 cacgaggact ccggggccta cagctgccgg cagcggctca cgcagcgcgt actgtgccac 360 ttcagtgtgc gggtgacaga cgctccatcc tcgggagatg acgaagacgg ggaggacgag 420 gctgaggaca caggtgtgga cacaggggcc ccttactgga cacggcccga gcggatggac 480 aagaagctgc tggccgtgcc ggccgccaac accgtccgct tccgctgccc agccgctggc 540 aaccccactc cctccatctc ctggctgaag aacggcaggg agttccgcgg cgagcaccgc 600 attggaggca tcaagctgcg gcatcagcag tggagcctgg tcatggaaag cgtggtgccc 660 tcggaccgcg gcaactacac ctgcgtcgtg gagaacaagt ttggcagcat ccggcagacg 720 tacacgctgg acgtgctgga gcgctccccg caccggccca tcctgcaggc ggggctgccg 780 gccaaccaga cggcggtgct gggcagcgac gtggagttcc actgcaaggt gtacagtgac 840 gcacagcccc acatccagtg gctcaagcac gtggaggtga atggcagcaa ggtgggcccg 900 gacggcacac cctacgttac cgtgctcaag acggcgggcg ctaacaccac cgacaaggag 960 ctagaggttc tctccttgca caacgtcacc tttgaggacg ccggggagta cacctgcctg 1020 gcgggcaatt ctattgggtt ttctcatcac tctgcgtggc tggtggtgct gccagccgag 1080 gaggagctgg tggaggctga cgaggcgggc agtgtgtatg caggcatcct cagctacggg 1140 gtgggcttct tcctgttcat cctggtggtg gcggctgtga cgctctgccg cctgcgcagc 1200 ccccccaaga aaggcctggg ctcccccacc gtgcacaaga tctcccgctt cccgctcaag 1260 cgacaggtgt ccctggagtc caacgcgtcc atgagctcca acacaccact ggtgcgcatc 1320 gcaaggctgt cctcagggga gggccccacg ctggccaatg tctccgagct cgagctgcct 1380 gccgacccca aatgggagct gtctcgggcc cggctgaccc tgggcaagcc ccttggggag 1440 ggctgcttcg gccaggtggt catggcggag gccatcggca ttgacaagga ccgggccgcc 1500 aagcctgtca ccgtagccgt gaagatgctg aaagacgatg ccactgacaa ggacctgtcg 1560 gacctggtgt ctgagatgga gatgatgaag atgatcggga aacacaaaaa catcatcaac 1620 ctgctgggcg cctgcacgca gggcgggccc ctgtacgtgc tggtggagta cgcggccaag 1680 ggtaacctgc gggagtttct gcgggcgcgg cggcccccgg gcctggacta ctccttcgac 1740 acctgcaagc cgcccgagga gcagctcacc ttcaaggacc tggtgtcctg tgcctaccag 1800 gtggcccggg gcatggagta cttggcctcc cagaagtgca tccacaggga cctggctgcc 1860 cgcaatgtgc tggtgaccga ggacaacgtg atgaagatcg cagacttcgg gctggcccgg 1920 gacgtgcaca acctcgacta ctacaagaag acaaccaacg gccggctgcc cgtgaagtgg 1980 atggcgcctg aggccttgtt tgaccgagtc tacactcacc agagtgacgt ctggtccttt 2040 ggggtcctgc tctgggagat cttcacgctg gggggctccc cgtaccccgg catccctgtg 2100 gaggagctct tcaagctgct gaaggagggc caccgcatgg acaagcccgc caactgcaca 2160 cacgacctgt acatgatcat gcgggagtgc tggcatgccg cgccctccca gaggcccacc 2220 ttcaagcagc tggtggagga cctggaccgt gtccttaccg tgacgtccac cgacgagtac 2280 ctggacctgt cggcgccttt cgagcagtac tccccgggtg gccaggacac ccccagctcc 2340 agctcctcag gggacgactc cgtgtttgcc cacgacctgc tgcccccggc cccacccagc 2400 agtgggggct cgcggacgtg a 2421 <210> 313 <211> 784 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR3c (NP_000133.1) <400> 313 Glu Ser Leu Gly Thr Glu Gln Arg Val Val Gly Arg Ala Ala Glu Val 1 5 10 15 Pro Gly Pro Glu Pro Gly Gln Gln Glu Gln Leu Val Phe Gly Ser Gly 20 25 30 Asp Ala Val Glu Leu Ser Cys Pro Pro Pro Gly Gly Gly Pro Met Gly 35 40 45 Pro Thr Val Trp Val Lys Asp Gly Thr Gly Leu Val Pro Ser Glu Arg 50 55 60 Val Leu Val Gly Pro Gln Arg Leu Gln Val Leu Asn Ala Ser His Glu 65 70 75 80 Asp Ser Gly Ala Tyr Ser Cys Arg Gln Arg Leu Thr Gln Arg Val Leu 85 90 95 Cys His Phe Ser Val Arg Val Thr Asp Ala Pro Ser Ser Gly Asp Asp 100 105 110 Glu Asp Gly Glu Asp Glu Ala Glu Asp Thr Gly Val Asp Thr Gly Ala 115 120 125 Pro Tyr Trp Thr Arg Pro Glu Arg Met Asp Lys Lys Leu Leu Ala Val 130 135 140 Pro Ala Ala Asn Thr Val Arg Phe Arg Cys Pro Ala Ala Gly Asn Pro 145 150 155 160 Thr Pro Ser Ile Ser Trp Leu Lys Asn Gly Arg Glu Phe Arg Gly Glu 165 170 175 His Arg Ile Gly Gly Ile Lys Leu Arg His Gln Gln Trp Ser Leu Val 180 185 190 Met Glu 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Ala Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Val His Asn Leu Asp 610 615 620 Tyr Tyr Lys Lys Thr Thr Asn Gly Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala 625 630 635 640 Pro Glu Ala Leu Phe Asp Arg Val Tyr Thr His Gln Ser Asp Val Trp 645 650 655 Ser Phe Gly Val Leu Leu Trp Glu Ile Phe Thr Leu Gly Gly Ser Pro 660 665 670 Tyr Pro Gly Ile Pro Val Glu Glu Leu Phe Lys Leu Leu Lys Glu Gly 675 680 685 His Arg Met Asp Lys Pro Ala Asn Cys Thr His Asp Leu Tyr Met Ile 690 695 700 Met Arg Glu Cys Trp His Ala Ala Pro Ser Gln Arg Pro Thr Phe Lys 705 710 715 720 Gln Leu Val Glu Asp Leu Asp Arg Val Leu Thr Val Thr Ser Thr Asp 725 730 735 Glu Tyr Leu Asp Leu Ser Ala Pro Phe Glu Gln Tyr Ser Pro Gly Gly 740 745 750 Gln Asp Thr Pro Ser Ser Ser Ser Ser Gly Asp Asp Ser Val Phe Ala 755 760 765 His Asp Leu Leu Pro Pro Ala Pro Pro Ser Ser Gly Gly Ser Arg Thr 770 775 780 <210> 314 <211> 2409 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR4 (NM_002011.4) <400> 314 atgcggctgc tgctggccct gttgggggtc ctgctgagtg tgcctgggcc tccagtcttg 60 tccctggagg cctctgagga agtggagctt gagccctgcc tggctcccag cctggagcag 120 caagagcagg agctgacagt agcccttggg cagcctgtgc gtctgtgctg tgggcgggct 180 gagcgtggtg gccactggta caaggagggc agtcgcctgg cacctgctgg ccgtgtacgg 240 ggctggaggg gccgcctaga gattgccagc ttcctacctg aggatgctgg ccgctacctc 300 tgcctggcac gaggctccat gatcgtcctg cagaatctca ccttgattac aggtgactcc 360 ttgacctcca gcaacgatga tgaggacccc aagtcccata gggacccctc gaataggcac 420 agttaccccc agcaagcacc ctactggaca cacccccagc gcatggagaa gaaactgcat 480 gcagtacctg cggggaacac cgtcaagttc cgctgtccag ctgcaggcaa ccccacgccc 540 accatccgct ggcttaagga tggacaggcc tttcatgggg agaaccgcat tggaggcatt 600 cggctgcgcc atcagcactg gagtctcgtg atggagagcg tggtgccctc ggaccgcggc 660 acatacacct gcctggtaga gaacgctgtg ggcagcatcc gctataacta cctgctagat 720 gtgctggagc ggtccccgca ccggcccatc ctgcaggccg ggctcccggc caacaccaca 780 gccgtggtgg gcagcgacgt ggagctgctg tgcaaggtgt acagcgatgc ccagccccac 840 atccagtggc tgaagcacat cgtcatcaac ggcagcagct tcggagccga cggtttcccc 900 tatgtgcaag tcctaaagac tgcagacatc aatagctcag aggtggaggt cctgtacctg 960 cggaacgtgt cagccgagga cgcaggcgag tacacctgcc tcgcaggcaa ttccatcggc 1020 ctctcctacc agtctgcctg gctcacggtg ctgccagagg aggaccccac atggaccgca 1080 gcagcgcccg aggccaggta tacggacatc atcctgtacg cgtcgggctc cctggccttg 1140 gctgtgctcc tgctgctggc cgggctgtat cgagggcagg cgctccacgg ccggcacccc 1200 cgcccgcccg ccactgtgca gaagctctcc cgcttccctc tggcccgaca gttctccctg 1260 gagtcaggct cttccggcaa gtcaagctca tccctggtac gaggcgtgcg tctctcctcc 1320 agcggccccg ccttgctcgc cggcctcgtg agtctagatc tacctctcga cccactatgg 1380 gagttccccc gggacaggct ggtgcttggg aagcccctag gcgagggctg ctttggccag 1440 gtagtacgtg cagaggcctt tggcatggac cctgcccggc ctgaccaagc cagcactgtg 1500 gccgtcaaga tgctcaaaga caacgcctct gacaaggacc tggccgacct ggtctcggag 1560 atggaggtga tgaagctgat cggccgacac aagaacatca tcaacctgct tggtgtctgc 1620 acccaggaag ggcccctgta cgtgatcgtg gagtgcgccg ccaagggaaa cctgcgggag 1680 ttcctgcggg cccggcgccc cccaggcccc gacctcagcc ccgacggtcc tcggagcagt 1740 gaggggccgc tctccttccc agtcctggtc tcctgcgcct accaggtggc ccgaggcatg 1800 cagtatctgg agtcccggaa gtgtatccac cgggacctgg ctgcccgcaa tgtgctggtg 1860 actgaggaca atgtgatgaa gattgctgac tttgggctgg cccgcggcgt ccaccacatt 1920 gactactata agaaaaccag caacggccgc ctgcctgtga agtggatggc gcccgaggcc 1980 ttgtttgacc gggtgtacac acaccagagt gacgtgtggt cttttgggat cctgctatgg 2040 gagatcttca ccctcggggg ctccccgtat cctggcatcc cggtggagga gctgttctcg 2100 ctgctgcggg agggacatcg gatggaccga cccccacact gccccccaga gctgtacggg 2160 ctgatgcgtg agtgctggca cgcagcgccc tcccagaggc ctaccttcaa gcagctggtg 2220 gaggcgctgg acaaggtcct gctggccgtc tctgaggagt acctcgacct ccgcctgacc 2280 ttcggaccct attccccctc tggtggggac gccagcagca cctgctcctc cagcgattct 2340 gtcttcagcc acgaccccct gccattggga tccagctcct tccccttcgg gtctggggtg 2400 cagacatga 2409 <210> 315 <211> 781 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> human FGFR4 (NP_002002.3) <400> 315 Leu Glu Ala Ser Glu Glu Val Glu Leu Glu Pro Cys Leu Ala Pro Ser 1 5 10 15 Leu Glu Gln Gln Glu Gln Glu Leu Thr Val Ala 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gttaccttat accattggga tttgcctttg 600 acgctacagg aagaatatgg gggctggaaa aatgcaacta tgatagatct cttcaatgac 660 tatgccacat actgcttcca gacctttgga gaccgtgtca aatattggat tacaattcac 720 aacccttacc tcgttgcttg gcatgggttt ggcacaggta tgcatgcgcc aggagagaag 780 ggaaatttaa cagctgtcta cactgtggga cacaacctga tcaaggcgca ttcgaaagtg 840 tggcataact acgacaaaaa cttccgccct catcagaagg gttggctctc catcaccttg 900 gggtcccatt ggatagaacc aaacagaaca gaaaacatgg aggacgtgat caactgccag 960 cactccatgt cttctgtgct cggatggttt gccaacccca tccacggaga cggcgactac 1020 cccgagttca tgaagacgag ctccgtaatc cctgagttct ctgaggcaga gaaggaggag 1080 gtgcggggca ctgctgactt ctttgccttt tccttcgggc ccaacaattt caggccctcg 1140 aacaccgtgg taaaaatggg acaaaatgta tcactcaact taagacaggt gctgaactgg 1200 attaaactag aatatgacaa ccctcgaatc ttgatttcgg agaacggctg gttcacagat 1260 agttatataa agacggaaga taccacggcc atctacatga tgaagaattt cctcaaccag 1320 gttcttcaag caataaagtt tgatgaaata caagtgtttg gttatacggc ttggactctc 1380 ctggatggct ttgagtggca ggatgcctac acgacccgac gagggctgtt ttatgtggac 1440 tttaatagtg agcagaaaga gaggaaaccc aagtcctccg ctcattacta caaacagatt 1500 atacaagaca acggtttccc tttgcaagaa tccacaccag acatgaaggg tcagtttccc 1560 tgtgacttct cctggggagt cactgagtct gttcttaagc cggagtttac ggtgtcctcc 1620 ccacagttta ctgatcctca cctgtatgtg tggaatgtca ctggcaacag attgctatac 1680 cgagtggaag gagtcaggct aaaaacaaga ccgtcccaat gcacagatta tgtgagcatc 1740 aaaaaacgag ttgaaatgtt ggccaaaatg aaagtcaccc actaccagtt tgctctggac 1800 tggacctcta tcctccctac cggaaatctg tctaaaatta atagacaagt gttgaggtac 1860 tataggtgtg tggtgagcga aggactgaag ctgggcatct cccctatggt gacgttgtac 1920 cacccgaccc actcccatct aggcctcccc atgccacttc tgagcagtgg gggatggcta 1980 aacaccaaca cagccaaggc cttccaggac tacgcaggcc tgtgcttcaa ggagctgggg 2040 gacttggtaa agctctggat caccatcaat gaacccaata ggctgagtga catgtacaac 2100 cgcacgagta acgacaccta ccgtgcggcc cacaacctga tgatcgccca tgcccaggtc 2160 tggcacctct atgataggca gtataggccg gtccagcacg gggctgtgtc gctgtcctta 2220 cattccgact gggcagaacc tgccaacccc tatgtggagt ctcactggaa ggcagccgag 2280 cgcttcctcc agtttgagat cgcctggttt gcggatccac tcttcaagac tggtgactac 2340 ccgctggcca tgaaggaata catcgcctcc aagaagcagc gagggctgtc tagctcagtc 2400 ctgccgcgct ttaccttgaa ggagagcagg ctggtgaagg ggaccatcga cttttacgca 2460 ctgaaccact tcactactag attcgtgata cacaagcagt tgaataccaa ctgctcagtg 2520 gcagacaggg acgtccagtt cctgcaggac atcacccgcc tgagctcgcc cagtcgccta 2580 gccgtaacgc cctggggaat gcgcaagctc cttgggtgga tccggaggaa ctacagagac 2640 atggatatct acgtcacagc caatggcatt gatgatcttg ctctagagga cgatcagatt 2700 agaaagtact acttggagaa gtacgtccag gaggctctga aagcatatct gattgacaag 2760 gtcaaaatca aaggctacta tgcattcaaa ctgactgaag agaaatctaa gcctagattt 2820 ggatttttca catctgactt caaagctaaa tcttctgtac agttttatag caagctgatc 2880 agcagcagcg gcttctcctc tgagaacaga agtcctgcct gtggtcagcc tccagaagac 2940 acagaatgcg ccatttgctc cttccttaca cagaagaaac cactcatctt ctttggttgt 3000 tgcttcatct ccactctggc tgcactgcta tcaatcacta tttttcatca tcggaagaga 3060 agaaaattcc agaaagcaag gaacttacaa aatataccat tgaagaaagg gcacagcaga 3120 gtttttagct aa 3132 <210> 358 <211> 472 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy Chain SEQ ID NO: 32 in U.S. Publication US20110135657 <400> 358 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val 20 25 30 Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly 35 40 45 Phe Ser Leu Asn Asn Ala Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro 50 55 60 Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu 65 70 75 80 Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp 85 90 95 Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Ile Met Thr Asn Met Asp Pro Val 100 105 110 Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr 115 120 125 Tyr Tyr Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val 130 135 140 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys 145 150 155 160 Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 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ctactgtgcg 360 aggagcgtcg tgaccggtgg ctactactac gacggcatgg atgtgtgggg tcagggtacg 420 acggtgaccg tcagcagcgc gagcaccaag ggtccgtccg tgtttccgct cgccccttgt 480 agccggagca cctcagagtc tactgccgca ctaggctgcc tggtgaagga ctacttccct 540 gaacccgtga cagtgagctg gaactccgga gcactgacta gcggcgtgca caccttcccc 600 gctgtcttgc agtctagcgg cctgtattcg ctctccagcg tggtcactgt accgtccagc 660 aatttcggaa cccagaccta cacatgtaac gtcgatcata aaccgtccaa cactaaggta 720 gacaaaaccg tggaaaggaa atgctgcgtg gagtgtcccc cctgcccagc tccgccagtg 780 gcaggcccca gcgtgttcct gttcccccca aagccaaaag acaccctgat gatctcgaga 840 acccccgagg tgacttgcgt cgtcgtcgat gtctcccatg aggatccaga agtacagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaagtgcac aatgcaaaaa cgaagccccg agaagagcag 960 ttcaactcca cattccgggt ggtatcagtc ctgactgtgg tccaccagga ttggctgaac 1020 gggaaggaat acaaatgtaa agtgagcaat aagggtctgc ccgcaccgat cgagaaaact 1080 atctcaaaaa ctaagggtca gcctcgcgag cctcaagtgt atacgctgcc gccaagtagg 1140 gaggagatga ccaaaaacca ggtgtcactg acatgtctgg tgaaaggctt ctaccccagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gtcaaatggc cagccggaga acaactacaa gaccacaccg 1260 ccgatgctgg actcagacgg gtcctttttc ctctattcca agctcaccgt cgacaaaagc 1320 cgttggcagc agggaaacgt attctcatgc tctgtgatgc acgaggccct tcacaaccat 1380 tacactcaga aatcgttgtc cctttctccc ggaaaatga 1419 <210> 360 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light Chain SEQ ID No: 14 in U.S. Publication US20110135657 <400> 360 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val 20 25 30 Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn 35 40 45 Ile Gly Ser Glu Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 50 55 60 Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro 65 70 75 80 Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile 85 90 95 Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp 100 105 110 Asp Gly Asn Ser Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 115 120 125 Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile 145 150 155 160 Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly 165 170 175 Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser 180 185 190 Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln 195 200 205 Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser 210 215 220 Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 235 <210> 361 <211> 711 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Coding sequence for Light Chain SEQ ID No: 14 in U.S. Publication US20110135657 <400> 361 atggacatga gggtccccgc tcagctcctg gggctcctgc tactctggct ccgaggtgcc 60 agatgttcat acgtgctgac tcagccccca tccgtgtctg tggcacccgg acaaactgcc 120 aggatcactt gcggagggaa taacatcggt agcgagagcg tccactggta ccagcaaaaa 180 ccaggccagg caccggtcct cgtggtatac gacgattctg accgaccgtc cggcatccca 240 gaaagattct cgggtagcaa ctctggcaac acggctaccc tgaccatcag ccgtgtcgag 300 gccggtgacg aggcggatta ctactgccag gtgtgggacg ggaactccga tcatgtggtg 360 ttcggcggag gcactaagct gaccgtattg ggtcagccca aagcaaatcc caccgtgacg 420 ctctttcccc ctagctccga ggagctgcag gcgaacaagg caactcttgt ctgtctcatc 480 tcggacttct atccgggagc ggtgaccgtc gcatggaaag cagatggttc tccggtcaaa 540 gcaggcgtgg aaacgaccaa gccttccaaa cagagtaaca acaagtatgc tgccagctcc 600 tacctaagcc tgacaccgga gcagtggaag agccaccggt catacagctg ccaggtaact 660 catgaaggct caacagtgga gaaaaccgtg gcgccaaccg agtgttcctg a 711 <210> 362 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHV1-3 <400> 362 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Ala Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 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ttagaaacat tgaacctata gttactttat accactggga tttgcctttg 600 gcactacaag aaaaatatgg ggggtggaaa aatgatacca taatagatat cttcaatgac 660 tatgccacat actgtttcca gatgtttggg gaccgtgtca aatattggat tacaattcac 720 aacccatatc tagtggcttg gcatgggtat gggacaggta tgcatgcccc tggagagaag 780 ggaaatttag cagctgtcta cactgtggga cacaacttga tcaaggctca ctcgaaagtt 840 tggcataact acaacacaca tttccgccca catcagaagg gttggttatc gatcacgttg 900 ggatctcatt ggatcgagcc aaaccggtcg gaaaacacga tggatatatt caaatgtcaa 960 caatccatgg tttctgtgct tggatggttt gccaacccta tccatgggga tggcgactat 1020 ccagagggga tgagaaagaa gttgttctcc gttctaccca ttttctctga agcagagaag 1080 catgagatga gaggcacagc tgatttcttt gccttttctt ttggacccaa caacttcaag 1140 cccctaaaca ccatggctaa aatgggacaa aatgtttcac ttaatttaag agaagcgctg 1200 aactggatta aactggaata caacaaccct cgaatcttga ttgctgagaa tggctggttc 1260 acagacagtc gtgtgaaaac agaagacacc acggccatct acatgatgaa gaatttcctc 1320 agccaggtgc ttcaagcaat aaggttagat gaaatacgag tgtttggtta tactgcctgg 1380 tctctcctgg atggctttga atggcaggat gcttacacca tccgccgagg attattttat 1440 gtggatttta acagtaaaca gaaagagcgg aaacctaagt cttcagcaca ctactacaaa 1500 cagatcatac gagaaaatgg ttttcctttg aaagagtcca cgccagacat gaagggtcgg 1560 ttcccctgtg atttctcttg gggagtcact gagtctgttc ttaagcccga gtttacggtc 1620 tcctccccgc agtttaccga tcctcacctg tatgtgtgga atgtcactgg caacagattg 1680 ctctaccgag tggaaggggt aaggctgaaa acaagaccat cccagtgcac agattatgtg 1740 agcatcaaaa aacgagttga aatgttggca aaaatgaaag tcacccacta ccagtttgct 1800 ctggactgga cctctatcct tcccactggc aatctgtcca aagttaacag acaagtgtta 1860 aggtactata ggtgtgtggt gagcgaagga ctgaagctgg gcgtcttccc catggtgacg 1920 ttgtaccacc caacccactc ccatctcggc ctccccctgc cacttctgag cagtgggggg 1980 tggctaaaca tgaacacagc caaggccttc caggactacg ctgagctgtg cttccgggag 2040 ttgggggact tggtgaagct ctggatcacc atcaatgagc ctaacaggct gagtgacatg 2100 tacaaccgca cgagtaatga cacctaccgt gcagcccaca acctgatgat cgcccatgcc 2160 caggtctggc acctctatga taggcagtat aggccggtcc agcatggggc tgtgtcgctg 2220 tccttacatt gcgactgggc 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gttaccttgt accattggga tttgcctctg 600 acgctccagg aagaatatgg gggctggaaa aatgcaacta tgatagatct cttcaacgac 660 tatgccacat actgcttcca gacctttgga gaccgtgtca aatattggat tacaattcac 720 aacccttacc ttgttgcttg gcatgggttt ggcacaggta tgcatgcacc aggagagaag 780 ggaaatttaa cagctgtcta cactgtggga cacaacctga tcaaggcaca ttcgaaagtg 840 tggcataact acgacaaaaa cttccgccct catcagaagg gttggctctc catcaccttg 900 gggtcccatt ggatagagcc aaacagaaca gacaacatgg aggacgtgat caactgccag 960 cactccatgt cctctgtgct tggatggttc gccaacccca tccacgggga cggcgactac 1020 cctgagttca tgaagacggg cgccatgatc cccgagttct ctgaggcaga gaaggaggag 1080 gtgaggggca cggctgattt ctttgccttt tccttcgggc ccaacaactt caggccctca 1140 aacaccgtgg tgaaaatggg acaaaatgta tcactcaact taaggcaggt gctgaactgg 1200 attaaactgg aatacgatga ccctcaaatc ttgatttcgg agaacggctg gttcacagat 1260 agctatataa agacagagga caccacggcc atctacatga tgaagaattt cctaaaccag 1320 gttcttcaag caataaaatt tgatgaaatc cgcgtgtttg gttatacggc ctggactctc 1380 ctggatggct ttgagtggca ggatgcctat acgacccgac 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gttaccggat tgtctggaga cgggaaagcg atatgggata aaaaacagta cgtgagtccg 120 gtgaatgcaa gtcagctgtt tctctatgac actttcccta aaaacttttt ctggggtgtt 180 ggaactggag catttcaagt ggaagggaat tggcaggcag acggaagagg accctcgatt 240 tgggatcgtt tcatctacac acacctgaga gatgtcagca tcacagagaa atccgccgac 300 agttacattt ttctggaaaa agatttgttg gctctggatt ttttaggagt ttctttttat 360 cagttctcaa tctcctggcc acggttgttc cccaatggaa cagtagcatc cgtgaatgca 420 aaaggtctcc aatactacaa caaacttctg gactcgctga tacttaggaa tattgagccc 480 gttgttacct tataccattg ggatttgcct ttggcgctac aggaagacta tgggggttgg 540 aaaaatgcaa ctatgataga tctcttcaat gactatgcca catactgctt ccagaccttt 600 ggagaccgtg tcaagtattg gattacaatt cacaaccctt acctggttgc ttggcatggg 660 tttgccacag gtatgcatgc gccaggagag acgggaaatt taacagctgt ctacattgtg 720 ggacacaacc tgatcaaggc tcattcgaaa gtgtggcata actacgacaa aaacttccgc 780 ccccatcaga agggtttgct gtccattacc ttggggtccc actggataga accaaacaaa 840 acagaaaaca tggccgatac aatcagctgc cagcactcta tggcttttgt gcttgggtgg 900 tttgccaacc ccatccatgc agacggcgac taccctgagt tcatgaaaac attgtccacc 960 atgccagtgt tctctgaggc agagaaggag gaggtgaggg gcacagctga cttctttgcc 1020 ttttcctttg ggcccaacaa tttcaggccc tcgaacactg tagtgaaaat gggacaaaat 1080 gtatcactca acttaagaca ggtgctgaac tggattaaat tagaatatga caaccctcga 1140 atcttgattt cggagaatgg ctggttcaca gatagtgaca taaagacaga ggacaccaca 1200 gccatctaca tgatgaagca tttcctcaac caggttcttc aagcaataca gtttgatgaa 1260 atacgagtgt ttggttacac ggcctggtct ctcctggatg gctttgaatg gcagtatgcc 1320 tacacgtctc gccgaggact gttttatgtg gactttaata gtgaacagaa agaaaggaaa 1380 cccaagacct cggcacatta ctacaaacag atcatacaag aaaatggttt ccctttgaaa 1440 gagtccacgc cagacatgca gggtcagttt ccctgtgact tctcctgggg ggtcaccgag 1500 tctgttctta agccggagtt tatggtttcc tccccacagt ttaccgaccc tcacctgtat 1560 gtgtggaatg ccactggcaa cagattgcta cagcgagtag aaggagtaag gctaaaaaca 1620 aaaccatccc actgcacaga ctatgttagc atcaaaaaac gagttgagat gttggccaaa 1680 atgaaagtca cccactacca gtttgctctg gactgggcca ccatccttcc cactggcaat 1740 ctgtctgaag ttaatagaca agtactaagg tactataggt gtgtggtgag cgaaggactg 1800 aagctgggcg tctctcccat ggtgacgttg taccacccca cccactccca tctaggcctc 1860 cctgagccgc ttcttaacag tgggggatgg ctaaacactt acaccgccaa ggccttccag 1920 gactacgcag gactgtgctt ccaggaacta ggggacttgg tgaagctctg gatcaccatc 1980 aatgagccta ataggctgag tgacatgtac aaccgcacga gtaatgacac ctaccgtgca 2040 gcccataacc tgatgattgc ccatgcccag gtctggcgtc tctacgacag gcagtatagg 2100 ccagtccagc atggagctgt gtcgctgtcc ctacattctg actgggtgga acctgccaac 2160 ccctatgtgg actcacactg gaaggcagcg gagcgcttcc tcctgtttga gatcgcctgg 2220 ttcgctgatc cgctcttcaa gactggcgac tatccactgg ccatgaagga gtacatcgcc 2280 tccaagaacc agcaagggct gtcccgctca gtcctgccgc gcttcacccc agaggagagc 2340 aggctggtga agggcaccat cgacttctac gcactgaacc acttcactac taggttcgtg 2400 atacacaaac agctcaacag cagccgctct atggcagaca gggacgtcca gttcctgcag 2460 gacatcaccc gcctgagctc gcccagccgc ctggctgtta tgccctgggg agcacgcaag 2520 ctgcttgggt ggatccagag gaactatggg gacatggaca tctacatcac agccaatggc 2580 atcgatgatc tggctctgga gaatgatggg atccgaaagt actacttgga gaagtacatc 2640 caggaggctc tgaaagcata cctcattgac aaagtcaaaa tcaaaggcta ttatgcattc 2700 aaactgactg aagagaaatc taagcctaga tttggatttt tcacatctga cttcaaagct 2760 aagtcatctg tagagtttta tagcaagttg atcagcagaa gtggcttccc ctctgagact 2820 agcaatcccg catgtggtca gcctccagaa gacacagact gcaccatctg ctcatttttc 2880 actcagaaga aatctctgat cttctttggt tgttgcttca tctccactct ggctgtactg 2940 ctgtcaatca ccatttttca tcatcgaaag agaagatttc ataaatcaaa gaacttagaa 3000 aatataccat tgaaggaagg ccacagtaga gttcttagct aa 3042 <210> 410 <211> 1044 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <220> <223> Rabbit beta klotho <400> 410 Met Lys Pro Gly Cys Ala Ala Gly Ser Pro Gly Asn Glu Trp Val Ser 1 5 10 15 Phe Cys Thr Asp Glu Arg Asn Arg Arg Cys Arg Glu Thr Met Ser Ser 20 25 30 Gly Arg Leu Arg Arg Ser Val Met Leu Ser Ala Phe Ile Leu Leu Arg 35 40 45 Ala Val Thr Gly Phe Pro Gly Asp Gly Arg Ala Val Trp Ser Gln Asn 50 55 60 Pro Asn Leu Ser Pro Val Asn Glu Ser Gln Leu Phe Leu Tyr Asp Thr 65 70 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cgccagtact acctggagaa 2760 gtacgtccag gaggctctga aagcatatct gatagataaa ataaaaatca aaggctatta 2820 tgcattcaaa ctgactgaag aaaaatctaa acccaggttt ggattcttca cctctgattt 2880 caaagccaag tcttcaatac agttttacaa caaactaatt accagcaacg gcttcccgtc 2940 tgagaacggc ggtcctagat gcaatcagac tcaaggaaat cccgagtgca ccgtctgctt 3000 actcctcctg cagaagaagc cgctgatatt ctttagctgc tgcttcttct gcaccctggt 3060 tctactctca tcaattacca tctttcacag acggaagaga agaaaatttt ggaaagcaaa 3120 ggacttacaa cacataccat taaagaaagg ccacaagaga gtccttagct aaagtgaact 3180 tatttctctc tgaagagttt agaaattcac tccagttcca tatgctggta acacaaaaga 3240 catacccgta ttgtacacag agtatttgag atactgtgct aaccaaggcg atgacaatca 3300 aaacctctgc catgtggttg aatgcatttt cccttaagcg gtgacaatca gcgaactcag 3360 ttcttggttc taaaggaggc ttcgcactgc cactaggcta tgagtattac ctgacgcatt 3420 gctttgtcaa gtttgatgag ctgtttcgca tcattctcta gctttcttta gataccaata 3480 gctactatgg taaaagttgt ttttaaaagt caaactctgt aaggcttcac agcagattta 3540 aaactattct ttacactgga tctgtgattt tgtcactcgt 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gtgctcgggt ggtttgccaa ccccatccat gggaatggag actatccaga 1080 agtgatgaaa aagaagttgc tctccactct accccttttc tctgaagcag agaagaatga 1140 agtgaggggc acagctgact tctttgcctt ttcctttgga cccaacaatt tcaagcccca 1200 gaacaccatg gctaaaatgg gacaaaatgt gtcactcaat ttaagagaag tgctgaattg 1260 gattaaactg gaatatggca acccccgaat cttgattgct gagaatggct ggttcacaga 1320 cagtcatgtg aaaacagaag ataccacagc catttacatg atgaagaatt tcctcaacca 1380 ggttcttcaa gcaataaggt ttgacgaaat acaagtgttt ggctacactg cttggtctct 1440 cctggatggc tttgaatggc aggatgctta ctccactcgc cgaggattat tttatgtgga 1500 ttttaatagt aaacaaaaag aaagaaagcc caagtcttcg gcatattact ataaacagat 1560 catacaagaa aatggtttta ctttcaaaga gtccacccca gatgtgcagg gtcagtttcc 1620 ctgtgacttc tcatggggtg tcaccgaatc tgtccttaag cccaaagtcg tggcttcctc 1680 cccacagttc agcgaccctc acctgtacgt gtggaatgtg acaggcaaca gactgttgca 1740 ccgagtggaa ggggtgaggc tgaagacacg gccggctcaa tgcacagatt ttgtcagcat 1800 caaaagacaa cttgagatgt tggcgaggat gaacgtcact cactacaggt ttgctctgga 1860 ctggccctcc atccttccca ccggcaacct gtccacggtt aaccgacaag ccctgaggta 1920 ctacaggtgt gtggtcagcg agtcgctgaa gctcagcatc tccccgatgg tcacgctgta 1980 ctacccgacc cacgcccacc tgggcctccc ctcgccgctg ctgcacagcg ggggctggct 2040 gaacgcgtcc accgcccgcg ccttccagga ctatgccggg ctgtgcttcc aggagctggg 2100 ggacctggtg aagctctgga tcaccatcaa tgagcccaac cggctgagtg acgtctacag 2160 ccacaccagc agcgacacct accgggcagc gcacaacctg ctgatcgccc acgccctggt 2220 gtggcacctg tacgaccggc ggtaccggcc ggcgcagcgc ggggccgtgt cgctgtccct 2280 gcactcggac tgggcggagc ccgccaaccc ctacgccgac tcgcactgga aggcggccga 2340 gcgcttcctg cagttcgaaa tcgcctggtt cgccgagccg ctcttcaaga ccggggacta 2400 cccgccggcc atgagggagt acatcgcctc caagaacagg caggggctct cgcgctccac 2460 cctgccccgc ttcaccgacg aggagaggag gctggtcaag ggcgccgccg acttctacgc 2520 gctgaaccac ttcaccacca ggttcgtgat gcacgcgcgc cagaacggca gccgctacga 2580 cgcggaccgc gacgtccagt tcctgcagga catcacctgc ctgagctccc ccagccgcct 2640 ggccgtcctg ccctgggggg agcgcaaggt gctcaggtgg atccagaaga actacggaga 2700 cgtggacgtg tacatcacgg ccagtggcat cgatgaccag tctctggaaa atgatgagct 2760 cagaaaatac tacttggaga aatacatcca ggaggctctg aaagcacacc taattgataa 2820 agtcaaagtc aaaggctatt atgcattcaa actgactgaa gaaaaatcta aacccagatt 2880 tggattcttc acgtctgaat tcaaagctaa atcctcagtt cagctttaca acaaactgat 2940 cagcaacagt ggcttccctt ctgagaacag gagtcctaga tgcagtgaga ctcaaagaaa 3000 cacagagtgc atggtctgct tatttcttgt gcaaaagaaa ccactgatat tctttagttg 3060 ttgcttcttc tctaccctgg ttctactttc atcgattacc attcttcata agcgaaagag 3120 aagaaaaatt tggaaagcaa agaacttaca acatatacca ttaaagtgag gccacagaaa 3180 gttcttagtg aaactgatcc tatttctgtc tgcatgatag aaagtctaaa aattcactcc 3240 agtcccaaat actggtaaca tagaagacaa tttgaaacac tagtagtaac caaggtgatg 3300 acaatcaagg tctctgctgt gtggtccaaa tgaattttcc attaggtgtt gacatcactg 3360 aatacagttt ttagatctga agactaagat ctagagagta agctaggatt atctgataca 3420 atgcttcatt aagtttaata agctgttatc catcattctt ctctggcttc cttctagaaa 3480 taccaatagc taattatagc aacttagaaa aaagtgcaac ttttgctaga ctccatagca 3540 gaaatctaaa actcttaaca ctggatattc agtgattatt ctatcacttc taacaaggtg 3600 cttttcccct ttagaagata tacaataggg taaatagtgc tcctttatca tccattccag 3660 cacttttttt ttccagcata gactcttaaa cacattgatc ctagtttttc tcaatagaaa 3720 taaaaaatca tttagaaaac atggaatttt gtgaggtctc tccttgcatt agatctgagt 3780 tttttttaaa aaaaagactt aacttccata acccatctca tgggaagatc acaggactaa 3840 gattaaggag agttagaccc atcaactgcc tgaggagaca gcactcaacc tcacagtaca 3900 gcaaattcct tgggacaaac tgacagcaat cttccgcact tggattgttg aggcagcaca 3960 caagatctta acatacttag gaaagttaaa tattctaaaa agatgtaaag ttttattttt 4020 attatcaagt cttcaaagga ccatattatt ccataagact tgctctctcc tgagttccac 4080 tcttctgaca ctatgtgtat atggggacac tcaaactgca ccttgacatt gcaactttgg 4140 atacaattca gaatgtaaat gtttgaagga cttaaaactt tctccactgc accttttgaa 4200 gctgggatta agtaaatacg aactgggagt ttgacttttt tgaactctgt gcttgattta 4260 ttcactgtat tctaaatttt aaggaaaacc tgaatgtaaa cccattcata ccctttcttt 4320 gggttagtaa acatttaacc acccatttca 4350 <210> 414 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 5H23v1-69 <400> 414 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Arg Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 415 <211> 710 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human FGFR1 beta-IIIc, NP_075594.1 <400> 415 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp 20 25 30 Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 35 40 45 Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe 50 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Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 100 105 110 His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser 130 135 140 Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu 165 170 175 Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr 195 200 205 Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr 210 215 220 Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 225 230 235 <210> 424 <211> 471 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hIgK-KLH-(VH)-hIgG1(E233A)(L235A) <400> 424 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 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Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 225 230 235 240 Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 245 250 255 Ala Leu Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 260 265 270 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 275 280 285 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 290 295 300 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 305 310 315 320 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 325 330 335 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 340 345 350 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 355 360 365 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 370 375 380 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 385 390 395 400 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 405 410 415 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 420 425 430 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 435 440 445 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 450 455 460 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 425 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hIgK-KLH-(VL)-hIgK <400> 425 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 100 105 110 His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 426 <211> 264 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Example of extracellular region of FGFR1c (beta-IIIc, NP_075594) <400> 426 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp 20 25 30 Asn Thr Lys Pro Asn Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys 35 40 45 Met Glu Lys Lys Leu His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe 50 55 60 Lys Cys Pro Ser Ser Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys 65 70 75 80 Asn Gly Lys Glu Phe Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val 85 90 95 Arg Tyr Ala Thr Trp Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp 100 105 110 Lys Gly Asn Tyr Thr Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn 115 120 125 His Thr Tyr Gln Leu Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile 130 135 140 Leu Gln Ala Gly Leu Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn 145 150 155 160 Val Glu Phe Met Cys Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln 165 170 175 Trp Leu Lys His Ile Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn 180 185 190 Leu Pro Tyr Val Gln Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp 195 200 205 Lys Glu Met Glu Val Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala 210 215 220 Gly Glu Tyr Thr Cys Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His 225 230 235 240 Ser Ala Trp Leu Thr Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val 245 250 255 Met Thr Ser Pro Leu Tyr Leu Glu 260 <210> 427 <211> 354 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Example of extracellular region of FGFR1c (Alpha-IIIc, NP_056934) <400> 427 Arg Pro Ser Pro Thr Leu Pro Glu Gln Ala Gln Pro Trp Gly Ala Pro 1 5 10 15 Val Glu Val Glu Ser Phe Leu Val His Pro Gly Asp Leu Leu Gln Leu 20 25 30 Arg Cys Arg Leu Arg Asp Asp Val Gln Ser Ile Asn Trp Leu Arg Asp 35 40 45 Gly Val Gln Leu Ala Glu Ser Asn Arg Thr Arg Ile Thr Gly Glu Glu 50 55 60 Val Glu Val Gln Asp Ser Val Pro Ala Asp Ser Gly Leu Tyr Ala Cys 65 70 75 80 Val Thr Ser Ser Pro Ser Gly Ser Asp Thr Thr Tyr Phe Ser Val Asn 85 90 95 Val Ser Asp Ala Leu Pro Ser Ser Glu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Asp 100 105 110 Ser Ser Ser Glu Glu Lys Glu Thr Asp Asn Thr Lys Pro Asn Arg Met 115 120 125 Pro Val Ala Pro Tyr Trp Thr Ser Pro Glu Lys Met Glu Lys Lys Leu 130 135 140 His Ala Val Pro Ala Ala Lys Thr Val Lys Phe Lys Cys Pro Ser Ser 145 150 155 160 Gly Thr Pro Asn Pro Thr Leu Arg Trp Leu Lys Asn Gly Lys Glu Phe 165 170 175 Lys Pro Asp His Arg Ile Gly Gly Tyr Lys Val Arg Tyr Ala Thr Trp 180 185 190 Ser Ile Ile Met Asp Ser Val Val Pro Ser Asp Lys Gly Asn Tyr Thr 195 200 205 Cys Ile Val Glu Asn Glu Tyr Gly Ser Ile Asn His Thr Tyr Gln Leu 210 215 220 Asp Val Val Glu Arg Ser Pro His Arg Pro Ile Leu Gln Ala Gly Leu 225 230 235 240 Pro Ala Asn Lys Thr Val Ala Leu Gly Ser Asn Val Glu Phe Met Cys 245 250 255 Lys Val Tyr Ser Asp Pro Gln Pro His Ile Gln Trp Leu Lys His Ile 260 265 270 Glu Val Asn Gly Ser Lys Ile Gly Pro Asp Asn Leu Pro Tyr Val Gln 275 280 285 Ile Leu Lys Thr Ala Gly Val Asn Thr Thr Asp Lys Glu Met Glu Val 290 295 300 Leu His Leu Arg Asn Val Ser Phe Glu Asp Ala Gly Glu Tyr Thr Cys 305 310 315 320 Leu Ala Gly Asn Ser Ile Gly Leu Ser His His Ser Ala Trp Leu Thr 325 330 335 Val Leu Glu Ala Leu Glu Glu Arg Pro Ala Val Met Thr Ser Pro Leu 340 345 350 Tyr Glu <210> 428 <211> 630 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> A full length FGF21, NM_019113.2 <400> 428 atggactcgg acgagaccgg gttcgagcac tcaggactgt gggtttctgt gctggctggt 60 cttctgctgg gagcctgcca ggcacacccc atccctgact ccagtcctct cctgcaattc 120 gggggccaag tccggcagcg gtacctctac acagatgatg cccagcagac agaagcccac 180 ctggagatca gggaggatgg gacggtgggg ggcgctgctg accagagccc cgaaagtctc 240 ctgcagctga aagccttgaa gccgggagtt attcaaatct tgggagtcaa gacatccagg 300 ttcctgtgcc agcggccaga tggggccctg tatggatcgc tccactttga ccctgaggcc 360 tgcagcttcc gggagctgct tcttgaggac ggatacaatg tttaccagtc cgaagcccac 420 ggcctcccgc tgcacctgcc agggaacaag tccccacacc gggaccctgc accccgagga 480 ccagctcgct tcctgccact accaggcctg ccccccgcac tcccggagcc acccggaatc 540 ctggcccccc agccccccga tgtgggctcc tcggaccctc tgagcatggt gggaccttcc 600 cagggccgaa gccccagcta cgcttcctga 630 <210> 429 <211> 209 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A full length FGF21, NP_061986.1 <400> 429 Met Asp Ser Asp Glu Thr Gly Phe Glu His Ser Gly Leu Trp Val Ser 1 5 10 15 Val Leu Ala Gly Leu Leu Leu Gly Ala Cys Gln Ala His Pro Ile Pro 20 25 30 Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His Leu Glu Ile Arg 50 55 60 Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser Pro Glu Ser Leu 65 70 75 80 Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln Ile Leu Gly Val 85 90 95 Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly Ala Leu Tyr Gly 100 105 110 Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg Glu Leu Leu Leu 115 120 125 Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His Gly Leu Pro Leu 130 135 140 His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro Ala Pro Arg Gly 145 150 155 160 Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro Ala Leu Pro Glu 165 170 175 Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val Gly Ser Ser Asp 180 185 190 Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser Pro Ser Tyr Ala 195 200 205 Ser <210> 430 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH SEQ ID NO: 68 in U.S. Patent Publication 20110135657 <400> 430 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala 20 25 30 Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Ile Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Val Val Thr Gly Gly Tyr Tyr Tyr Asp Gly Met Asp 100 105 110 Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 431 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH SEQ ID NO: 50 in U.S. Patent Publication 20110135657 <400> 431 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Glu Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr 35 40 45 Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Gly Asn Ser Asp His 85 90 95 Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105

Claims (158)

  1. (i) 서열번호:25의 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:26의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체에 의해 인식되는 인간 베타 클로토 및 시아노몰거스 원숭이 베타 클로토의 에피토프와 결합하거나, 또는 (ii) 인간 베타 클로토와의 결합에 있어서, 서열번호:25의 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 영역 및 서열번호:26의 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하는 항체 또는 그의 단편.
  2. 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체 또는 그의 결합 단편이:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR1:
    (i) 서열번호:1, 27, 53, 79, 105, 131, 157, 183, 209, 또는
    235,
    (ii) 서열번호:7, 33, 59, 85, 111, 137, 163, 189, 215 또는
    241,
    (iii) 서열번호:12, 38, 64, 90, 116, 142, 168, 194, 220 또는
    246,
    (iv) 서열번호:13, 39, 65, 91, 117, 143, 169, 195, 221 또는
    247, 및
    (v) 서열번호:18, 44, 70, 96, 122, 148, 174, 200, 226 또는
    252;
    (2) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2:
    (i) 서열번호:2, 28, 54, 80, 106, 132, 158, 184, 210, 또는
    236,
    (ii) 서열번호:8, 34, 60, 86, 112, 138, 164, 190, 216 또는
    242,
    (iii) 서열번호:14, 40, 66, 92, 118, 144, 170, 196, 222 또는
    248,
    (iv) 서열번호:19, 45, 71, 97, 123, 149, 175, 201, 227 또는
    253, 및
    (v) 서열번호:24, 50, 76, 102, 128, 154, 180, 206, 232 또는
    258; 및
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR3:
    (i) 서열번호: 3, 29, 55, 81, 107, 133, 159, 185, 211, 또는
    237,
    (ii) 서열번호:9, 35, 61, 87, 113, 139, 165, 191, 217 또는
    243,
    (iii) 서열번호:15, 41, 67, 93, 119, 145, 171, 197, 223 또는
    249, 및
    (iv) 서열번호:20, 46, 72, 98, 124, 150, 176, 202, 228 또는
    254; 및/또는
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1:
    (i) 서열번호:4, 30, 56, 82, 108, 134, 160, 186, 212, 또는
    238,
    (ii) 서열번호:10, 36, 52, 88, 114, 140, 166, 192, 218 또는
    244,
    (iii) 서열번호:16, 42, 68, 94, 120, 146, 172, 198, 224 또는
    250, 및
    (iv) 서열번호:21, 47, 73, 99, 125, 151, 177, 203, 229 또는
    255;
    (2) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR2:
    (i) 서열번호:5, 31, 57, 83, 109, 135, 161, 187, 213, 또는
    239,
    (ii) 서열번호:11, 37, 63, 89, 115, 141, 167, 193, 219 또는
    245, 및
    (iii) 서열번호:22, 48, 74, 100, 126, 152, 178, 204, 230 또
    는 256; 및
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR3:
    (i) 서열번호:6, 32, 58, 84, 110, 136, 162, 188, 214, 또는
    240,
    (ii) 서열번호:17, 43, 69, 95, 121, 147, 173, 199, 225 또는
    251, 및
    (iii) 서열번호:23, 49, 75, 101, 127, 153, 179, 205, 231 또
    는 257
    을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  3. 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체 또는 그의 결합 단편이:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR1:
    (i) 서열번호:1, 27, 53, 79, 105, 131, 157, 183, 209, 또는
    235,
    (ii) 서열번호:7, 33, 59, 85, 111, 137, 163, 189, 215 또는
    241,
    (iii) 서열번호:12, 38, 64, 90, 116, 142, 168, 194, 220 또는
    246,
    (iv) 서열번호:13, 39, 65, 91, 117, 143, 169, 195, 221 또는
    247, 및
    (v) 서열번호:18, 44, 70, 96, 122, 148, 174, 200, 226 또는
    252;
    (2) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2:
    (i) 서열번호:2, 28, 54, 80, 106, 132, 158, 184, 210, 또는
    236,
    (ii) 서열번호:8, 34, 60, 86, 112, 138, 164, 190, 216 또는
    242,
    (iii) 서열번호:14, 40, 66, 92, 118, 144, 170, 196, 222 또는
    248,
    (iv) 서열번호:19, 45, 71, 97, 123, 149, 175, 201, 227 또는
    253, 및
    (v) 서열번호:24, 50, 76, 102, 128, 154, 180, 206, 232 또는
    258; 및
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR3:
    (i) 서열번호: 3, 29, 55, 81, 107, 133, 159, 185, 211, 또는
    237,
    (ii) 서열번호:9, 35, 61, 87, 113, 139, 165, 191, 217 또는
    243,
    (iii) 서열번호:15, 41, 67, 93, 119, 145, 171, 197, 223 또는
    249, 및
    (iv) 서열번호:20, 46, 72, 98, 124, 150, 176, 202, 228 또는
    254
    을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  4. 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체 또는 그의 결합 단편이:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1:
    (i) 서열번호:4, 30, 56, 82, 108, 134, 160, 186, 212, 또는
    238,
    (ii) 서열번호:10, 36, 52, 88, 114, 140, 166, 192, 218 또는
    244,
    (iii) 서열번호:16, 42, 68, 94, 120, 146, 172, 198, 224 또는
    250, 및
    (iv) 서열번호:21, 47, 73, 99, 125, 151, 177, 203, 229 또는
    255;
    (2) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR2:
    (i) 서열번호:5, 31, 57, 83, 109, 135, 161, 187, 213, 또는
    239,
    (ii) 서열번호:11, 37, 63, 89, 115, 141, 167, 193, 219 또는
    245, 및
    (iii) 서열번호:22, 48, 74, 100, 126, 152, 178, 204, 230 또
    는 256; 및
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR3:
    (i) 서열번호:6, 32, 58, 84, 110, 136, 162, 188, 214, 또는
    240,
    (ii) 서열번호:17, 43, 69, 95, 121, 147, 173, 199, 225 또는
    251, 및
    (iii) 서열번호:23, 49, 75, 101, 127, 153, 179, 205, 231 또
    는 257
    을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  5. 제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 결합 단편이:
    (a) 하기를 추가로 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:278, 279, 280 및 378로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 FR1;
    (2) 서열번호:281, 282, 및 283으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 FR2;
    (3) 하기 서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381로 이루어진 그룹
    으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR3; 및
    (4) 서열번호:288의 아미노산 서열을 가지는 FR4; 및/또는
    (b) 하기를 추가로 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:289, 290 및 382-384로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 FR1;
    (2) 서열번호:291, 292 및 385-392로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 FR2;
    (3) 서열번호:293, 294, 295 및 393-404로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 FR3; 및
    (4) 서열번호:296 및 405-407로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미
    노산 서열을 가지는 FR4
    을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  6. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 결합 단편이, 서열번호:269, 270, 271, 272, 273, 274, 320, 321 또는 322인 VH 서열 및/또는 서열번호:275, 276, 277, 또는 325-352인 VL 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  7. 서열번호:25인 VH 서열 및 서열번호:26인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 5H23으로 명명되는 항체;
    서열번호:51인 VH 서열 및 서열번호:52인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 1C17로 명명되는 항체;
    서열번호:77인 VH 서열 및 서열번호:78인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 1D19로 명명되는 항체;
    서열번호:103인 VH 서열 및 서열번호:104인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 2L12으로 명명되는 항체;
    서열번호:129인 VH 서열 및 서열번호:130인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 3L3으로 명명되는 항체;
    서열번호:155인 VH 서열 및 서열번호:156인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 3N20으로 명명되는 항체;
    서열번호:181인 VH 서열 및 서열번호:182인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 4P5로 명명되는 항체;
    서열번호:207인 VH 서열 및 서열번호:208인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 5C23으로 명명되는 항체;
    서열번호:233인 VH 서열 및 서열번호:234인 VL 서열을 포함하는 것으로서, 5F7로 명명되는 항체; 또는
    서열번호:259인 VH 서열 및 서열번호:260인 VL 서열을 포함하는 것으로서, IG19로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편.
  8. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 5H23으로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  9. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 1C17로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  10. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 1D19로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  11. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 2L12로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  12. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 3L3으로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  13. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 3N20으로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  14. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 4P5로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  15. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 5C23으로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  16. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, 5F7로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  17. 제7항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이, IG19로 명명되는 항체의 3개의 모든 중쇄 CDR 및/또는 3개의 모든 경쇄 CDR을 포함하는 것인 항체.
  18. 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR1:
    (i) GYTFTX1YDIN (서열번호:261), 여기서 X1 은 자연 발생 아미
    노산임,
    (ii) GYSITSGYYWN (서열번호:27), 및
    (iii) GYIFTNYGIS (서열번호:131);
    (2) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2:
    (i) WIYPGDX1STKYNEKFKG (서열번호:262), 여기서 X1은 자연 발생
    아미노산임,
    (ii) YINYX1GX2X3NYX4PSLKN (서열번호:264), 여기서 X1, X2, X3,
    및 X4는 자연 발생 아미노산임, 및
    (iii) EIYPRSGNTYYNEKFKG (서열번호:132);
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR3:
    (i) SDYYGSRSFX1Y (서열번호:263), 여기서 X1은 자연 발생 아미
    노산임,
    (ii) X1GAYYSNYDSFDV (서열번호:265), 여기서 X1은 자연 발생 아
    미노산임, 및
    (iii) HWDGVLDYFDY (서열번호:133); 및/또는
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1:
    (i) RASKSVSTSGYSYX1H (서열번호:266), 여기서 X1은 자연 발생
    아미노산임,
    (ii) KASQDINSYLS (서열번호:30), 및
    (iii) KSSQSLLNSGNQKNYLA (서열번호:134);
    (2) 하기의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2:
    (i) LASNLES (서열번호:57),
    (ii) RANRLVD (서열번호:31), 및
    (iii) GASTRES (서열번호:135);
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR3:
    (i) X1HSX2ELPYT (서열번호:267), 여기서 X1 및 X2 는 자연 발생
    아미노산임,
    (ii) LQYDEFPX1T (서열번호:268), 여기서 X1은 자연 발생 아미노
    산임, 및
    (iii) LNDHSYPFT (서열번호:136)
    을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  19. 제18항에 있어서, 상기 항체 그의 단편이:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR1:
    (i) GYTFTX1YDIN (서열번호:261), 여기서 X1은 자연 발생 아미노
    산임,
    (ii) GYSITSGYYWN (서열번호:27), 및
    (iii) GYIFTNYGIS (서열번호:131);
    (2) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2:
    (i) WIYPGDX1STKYNEKFKG (서열번호:262), 여기서 X1은 자연 발생
    아미노산임,
    (ii) YINYX1GX2X3NYX4PSLKN (서열번호:264), 여기서 X1, X2, X3,
    및 X4는 자연 발생 아미노산임, 및
    (iii) EIYPRSGNTYYNEKFKG (서열번호:132); 및
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR3:
    (i) SDYYGSRSFX1Y (서열번호:263), 여기서 X1은 자연 발생 아미
    노산임,
    (ii) X1GAYYSNYDSFDV (서열번호:265), 여기서 X1 은 자연 발생
    아미노산임, 및
    (iii) HWDGVLDYFDY (서열번호:133)
    을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  20. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이:
    (1) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1:
    (i) RASKSVSTSGYSYX1H (서열번호:266), 여기서 X1은 자연 발생
    아미노산임,
    (ii) KASQDINSYLS (서열번호:30), 및
    (iii) KSSQSLLNSGNQKNYLA (서열번호:134);
    (2) 하기의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2:
    (i) LASNLES (서열번호:57),
    (ii) RANRLVD (서열번호:31), 및
    (iii) GASTRES (서열번호:135); 및
    (3) 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR3:
    (i) X1HSX2ELPYT (서열번호:267), 여기서 X1 및 X2는 자연 발생
    아미노산임,
    (ii) LQYDEFPX1T (서열번호:268), 여기서 X1은 자연 발생 아미노
    산임, 및
    (iii) LNDHSYPFT (서열번호:136)
    을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  21. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) GYTFTX1YDIN (서열번호:261)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    여기서 X1은 자연 발생 아미노산임;
    (2) WIYPGDX1STKYNEKFKG (서열번호:262)의 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2, 여기서 X1은 자연 발생 아미노산임; 및
    (3) SDYYGSRSFX1Y (서열번호:263)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3,
    여기서 X1은 자연 발생 아미노산임; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) RASKSVSTSGYSYX1H (서열번호:266)의 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1, 여기서 X1은 자연 발생 아미노산임;
    (2) LASNLES (서열번호:57)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) X1HSX2ELPYT (서열번호:267)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3,
    여기서 X1 및 X2는 자연 발생 아미노산임
    을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  22. 제21항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) GYTFTX1YDIN (서열번호:261)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    여기서 X1은 R 또는 S임;
    (2) WIYPGDX1STKYNEKFKG (서열번호:262)의 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2, 여기서 X1은 G, D, S, 또는 I임; 및
    (3) SDYYGSRSFX1Y (서열번호:263)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3, 여기서 X1은 V, T, 또는 A임; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) RASKSVSTSGYSYX1H (서열번호:266)의 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1, 여기서 X1 은 M, L, 또는 V임;
    (2) LASNLES (서열번호:57)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) X1HSX2ELPYT (서열번호:267)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3,
    여기서 X1은 Q 또는 H이고, X2는 R 또는 G임
    을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  23. 제22항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:1, 및 서열번호:53으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    (2) 서열번호:2, 서열번호:80, 서열번호:54, 및 서열번호:210으로 이
    루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2,
    (3) 서열번호:81, 서열번호:55, 서열번호:3으로 이루어진 그룹으로부
    터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:4, 서열번호:82, 서열번호:108로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1,
    (2) LASNLES (서열번호:57)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:6, 서열번호:84로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미
    노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  24. 제18항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) GYSITSGYYWN (서열번호:27)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    (2) YINYX1GX2X3NYX4PSLKN (서열번호:264)의 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2, 여기서 X1, X2, X3, 및 X4는 자연 발생 아미노산임, 및
    (3) X1GAYYSNYDSFDV (서열번호:265)의 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR3, 여기서 X1은 자연 발생 아미노산임, 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) KASQDINSYLS (서열번호:30)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1,
    (2) RANRLVD (서열번호:31)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2, 및
    (3) LQYDEFPX1T (서열번호:268)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3, 여
    기서 X1 은 자연 발생 아미노산임
    을 포함하는 것인 항체.
  25. 제24항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) GYSITSGYYWN (서열번호:27)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    (2) YINYX1GX2X3NYX4PSLKN (서열번호:264)의 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR2, 여기서 X1은 D 또는 G이고, X2는 N 또는 S이고, X3은 S 또는 N
    이고, X4는 T 또는 N임,
    (3) X1GAYYSNYDSFDV (서열번호:265)의 아미노산 서열을 가지는
    VH CDR3, 여기서 X1 은 K 또는 R임; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) KASQDINSYLS (서열번호:30)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1,
    (2) RANRLVD (서열번호:31)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2, 및
    (3) LQYDEFPX1T (서열번호:268)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3, 여
    기서 X1은 F 또는 Y임
    을 포함하는 것인 항체.
  26. 제25항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) GYSITSGYYWN (서열번호:27)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    (2) 서열번호:28, 서열번호:263으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR2,
    (3) 서열번호:29, 서열번호:237로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) KASQDINSYLS (서열번호:30)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1,
    (2) RANRLVD (서열번호:31)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2, 및
    (3) 서열번호:32, 서열번호:240으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  27. 제18항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) GYIFTNYGIS (서열번호:131)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1,
    (2) EIYPRSGNTYYNEKFKG (서열번호:132)의 아미노산 서열을 가지는 VH
    CDR2, 및
    (3) HWDGVLDYFDY (서열번호:133)의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3,
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) KSSQSLLNSGNQKNYLA (서열번호:134의 아미노산 서열을 가지는
    VL CDR1,
    (2) GASTRES (서열번호:135)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2, 및
    (3) LNDHSYPFT (서열번호:136)의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  28. 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가:
    (a) 표 1-10에 도시된 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역;
    및/또는
    (b) 표 1-10에 도시된 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  29. 제28항에 있어서, 상기 항체가 표 1-10에 도시된 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역을 포함하는 것인 항체.
  30. 제28항에 있어서, 상기 항체가 표 1-10에 도시된 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역을 포함하는 것인 항체.
  31. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:1, 7, 12, 13, 및 18로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:2, 8, 14, 19 및 24로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:3, 9, 15 및 20으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:4, 10, 16 및 21로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:5, 11, 및 22로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노
    산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:6, 17, 및 23으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미
    노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  32. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 2의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 3의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 4의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 5의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 6의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  33. 제31항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 7의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 8의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 9의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 10의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 11의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 6의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  34. 제31항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 12의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 2의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 3의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 4의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 5의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 6의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  35. 제31항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 13의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 14의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 15의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 16의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 11의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 17의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  36. 제31항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 18의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 19의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 20의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 21의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 22의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 23의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
  37. 제31항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 24의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 3의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 4의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 5의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 6의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  38. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:27, 33, 38, 39 및 44로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:28, 34, 40, 45 및 50으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:29, 35, 41 및 46으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:30, 36, 42, 및 47로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:31, 37 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노
    산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:32, 43 및 49로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미
    노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  39. 제38항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 27의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 28의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 29의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 30의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 31의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 32의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  40. 제38항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 33의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 34의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 35의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 36의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 37의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 32의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  41. 제38항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 38의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 28의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 29의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 30의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 31의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 32의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  42. 제38항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 39의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 40의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 41의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 42의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 37의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 43의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  43. 제38항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 45의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 46의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 47의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 47의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 48의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 49의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  44. 제38항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 27의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 50의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 29의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 30의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 31의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 32의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  45. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:53, 59, 64, 65, 및 70으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:54, 60, 66, 71, 및 76으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:55, 61, 67, 및 72로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:56, 62, 68, 및 73으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:57, 63 및 74로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노
    산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:58, 59, 및 75로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미
    노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  46. 제45항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 53의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 54의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 55의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 56의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 57의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 58의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  47. 제45항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 59의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 60의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 61의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 62의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 63의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 58의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  48. 제45항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 64의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 54의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 55의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 56의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 57의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 58의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  49. 제45항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 65의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 66의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 67의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 68의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 63의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 69의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  50. 제45항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 70의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 71의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 72의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 73의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 74의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 75의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  51. 제45항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 53의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 76의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 55의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 56의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 57의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 58의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  52. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:79, 85, 90, 91 및 96으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:80, 86, 92, 97 및 102로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호:81, 87, 93 및 98로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:82, 88, 94 및 99로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:83, 89 및 100으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:84, 95 및 101로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미
    노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  53. 제52항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 79의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 80의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 81의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 82의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 83의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 84의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  54. 제52항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 85의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 86의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 87의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 88의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 89의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 84의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  55. 제52항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 90의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 80의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 81의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 82의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 83의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 84의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  56. 제52항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 91의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 92의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 93의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 94의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 89의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 95의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  57. 제52항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 96의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 97의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 98의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 99의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 100의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 101의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  58. 제52항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 79의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 102의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 81의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 82의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 83의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 84의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  59. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:105, 111, 116, 117 및 122로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:106, 112, 118, 123 및 128로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:107, 113, 119, 및 124로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:108, 114, 120 및 125로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:109, 115, 및 126으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:110, 121, 및 127로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  60. 제59항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 105의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 106의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 107의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 108의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 109의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 110의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  61. 제59항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 111의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 112의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 113의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 114의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 115의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 110의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  62. 제59항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 116의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 106의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 107의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 108의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 109의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 110의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  63. 제59항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 117의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 118의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 119의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 120의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 115의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 121의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  64. 제59항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 122의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 123의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 124의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 125의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 126의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 127의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  65. 제59항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 105의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 128의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 107의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 108의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 109의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 110의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  66. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:131, 137, 142, 143 및 148로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:132, 138, 144, 149 및 154로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:133, 139, 145, 및 150으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:134,140, 146, 및 151로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:135, 141 및 152로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:136, 147 및 153으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  67. 제66항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 131의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 132의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 133의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 134의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 135의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 136의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  68. 제66항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 137의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 138의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 139의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 140의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 141의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 136의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  69. 제66항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 142의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 132의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 133의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 134의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 135의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 136의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  70. 제66항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 143의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 144의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 145의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 146의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 141의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 147의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  71. 제66항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 148의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 149의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 150의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 151의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 152의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 153의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  72. 제66항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 131의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 154의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 133의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 134의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 135의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 136의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  73. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:157, 163, 168, 169 및 174로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:158, 164, 170, 175 및 180으로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:159, 165, 171 및 176으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:160, 166, 172 및 177로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:161, 167, 및 178로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:162, 173, 및 179로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  74. 제73항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 157의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 158의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 159의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 160의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 161의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 162의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  75. 제73항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 163의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 164의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 165의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 166의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 167의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 162의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  76. 제73항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 168의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 158의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 159의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 160의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 161의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 162의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  77. 제73항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 169의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 170의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 171의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 172의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 167의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 173의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  78. 제73항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 174의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 175의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 176의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 177의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 178의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 179의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  79. 제73항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 157의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 180의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 159의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 160의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 161의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 162의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  80. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:183, 189, 194, 195, 및 200으로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:184, 190, 196, 201 및 206으로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:185, 191, 197 및 202로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:186, 192, 198 및 203으로 이루어진 그룹으로부터 선택
    되는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:187, 193 및 204로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:188, 199, 및 205로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  81. 제80항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 183의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 184의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 185의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 186의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 187의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 188의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  82. 제80항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 189의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 190의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 191의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 192의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 193의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 188의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  83. 제80항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 194의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 184의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 185의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 186의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 187의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 188의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  84. 제80항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 195의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 196의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 197의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 198의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 193의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 199의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  85. 제80항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 200의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 201의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 202의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 203의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 204의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 205의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  86. 제80항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 183의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 206의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 185의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 186의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 187의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 188의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  87. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:209, 215, 220, 221 및 226으로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:210, 216, 222, 227 및 232로 이루어진 그룹으로부터 선
    택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:211, 217, 223 및 228로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:212, 218, 224 및 229로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:213, 219, 및 230으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:214, 225, 및 231로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  88. 제87항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 209의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 210의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 211의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 212의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 213의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 214의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  89. 제87항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 215의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 216의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 217의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 218의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 219의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 214의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  90. 제87항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 220의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 210의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 211의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 212의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 213의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 214의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  91. 제87항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 221의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 222의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 223의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 224의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 219의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 225의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  92. 제87항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 226의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 227의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 228의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 229의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 230의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 231의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  93. 제87항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 209의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 232의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 211의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 212의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 213의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 214의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  94. 제28항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:235, 241, 246, 247, 및 252로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호:236, 242, 248, 253, 및 258로 이루어진 그룹으로부터
    선택되는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2;
    (3) 서열번호:237, 243, 249, 및 254로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3; 및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:238, 244, 250, 및 255로 이루어진 그룹으로부터 선택되
    는 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호:239, 245, 및 256으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는
    아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호:240, 251, 및 257로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아
    미노산 서열을 가지는 VL CDR3
    을 포함하는 것인 항체.
  95. 제94항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 235의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 236의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 237의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 238의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 239의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 240의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  96. 제94항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 241의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 242의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 243의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 244의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 245의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 240의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  97. 제94항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 246의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 236의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 237의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 238의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 239의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 240의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  98. 제94항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 247의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 248의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 249의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 250의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 245의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 251의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  99. 제94항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 252의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 253의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 254의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 255의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 256의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 257의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  100. 제94항에 있어서, 상기 항체가:
    (a) 하기의 것을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호: 235의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR1;
    (2) 서열번호: 258의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR2; 및
    (3) 서열번호: 237의 아미노산 서열을 가지는 VH CDR3;
    및
    (b) 하기의 것을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호: 238의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR1;
    (2) 서열번호: 239의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR2; 및
    (3) 서열번호: 240의 아미노산 서열을 가지는 VL CDR3;
    을 포함하는 것인 항체.
  101. 제28항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, VH 영역 및/또는 VL 영역이 인간 프레임워크 서열을 추가로 포함하는 것인 항체.
  102. 제28항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, VH 영역 및/또는 VL 영역이 프레임워크 1 (FR1), 프레임워크 2 (FR2), 프레임워크 3 (FR3) 및/또는 프레임워크 4 (FR4) 서열을 추가로 포함하는 것인 항체.
  103. 제28항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 결합 단편이:
    (a) 하기의 것을 추가로 포함하는 중쇄 가변 (VH) 영역:
    (1) 서열번호:278, 279, 280 및 378로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR1;
    (2) 서열번호:281, 282, 및 283으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR2;
    (3) 서열번호:284, 285, 286, 287 및 379-381로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR3; 및
    (4) 서열번호:288의 아미노산 서열을 가지는 FR4;
    및/또는
    (b) 하기의 것을 추가로 포함하는 경쇄 가변 (VL) 영역:
    (1) 서열번호:289, 290 및 382-384로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR1;
    (2) 서열번호:291, 292 및 385-392로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR2;
    (3) 서열번호:293, 294, 295 및 393-404로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR3; 및
    (4) 서열번호:296 및 405-407로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 FR4
    을 포함하는 것인 항체.
  104. 제1항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 모노클로날 항체인 항체 또는 단편.
  105. 제104항에 있어서, 상기 모노클로날 항체가 인간화, 인간 또는 키메라 항체인 항체 또는 단편.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, (scFv)2, 단일 사슬 항체 분자, 이중 가변 영역 항체, 단일 가변 영역 항체, 선형 항체, V 영역, 항체 단편으로부터 형성되는 다중특이적 항체인 항체 또는 그의 단편.
  107. 제1항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편이 검출성 마커와 접합되는 것인 항체 또는 단편.
  108. 제107항에 있어서, 상기 검출성 마커가 방사성 동위 원소, 금속 킬레이트제, 효소, 형광 화합물, 생체 발광 화합물 및 화학 발광 화합물로부터 선택되는 것인 항체 또는 단편.
  109. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체와 필수적으로 동일한 에피토프와 결합하는 결합제.
  110. 제109항에 있어서, 상기 결합제가, 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, FGF19- 및/또는 FGF21-매개 신호 전달을 유도하는 것인 결합제.
  111. 제109항에 있어서, 항체 또는 그의 단편인 결합제.
  112. 제109항에 있어서, 안티칼린 (anticalin), 아넥틴 (adnectin), 애피바디 (affibody), DARPin, 피노머 (fynomer), 아피틴 (affitin), 아필린 (affilin), 아비머 (avimer), 시스테인-풍부 노틴 펩티드 (cysteine-rich knottin peptide), 또는 엔지니어링된 Kunitz 형 저해제 (engineered Kunitz-type inhibitor)인 결합제.
  113. 베타 클로토와 결합할 수 있는 결합제로서, 경쟁적 결합 분석에서, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체가 상기 결합제를 대체하는 것인 결합제.
  114. 베타 클로토와 결합할 수 있는 결합제로서, 경쟁적 결합 분석에서, 상기 결합제가 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체를 대체하는 것인 결합제.
  115. 제114항에 있어서, 상기 결합제가 항체 또는 그의 단편인 결합제.
  116. 제114항에 있어서, 상기 결합제가 항체 또는 그의 단편인 결합제.
  117. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 모노클로날 항체를 생성하는 트랜스제닉 동물.
  118. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 모노클로날 항체를 생성하는 하이브리도마.
  119. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편을 인코딩하는 폴리펩티드를 포함하는 벡터.
  120. 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  121. 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, FGF19-형 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하는 방법으로서, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 단편과 상기 세포들을 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  122. 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, 베타 클로토/FGF 수용체 복합체를 활성화하는 방법으로서, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 단편과 상기 세포들을 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  123. 제121항 또는 제122항에 있어서, 상기 세포들이 인간 베타 클로토 및 인간 FGF 수용체 IC를 발현하는 것인 방법.
  124. 대상체에서, 글루코오스 대사를 개선시키는 방법으로서, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편 또는 제120항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  125. 제124항에 있어서, 상기 글루코오스 대사의 개선이 글루코오스 수준의 감소, 인슐린 감도의 증가, 인슐린 저항성의 감소, 글루카곤의 감소, 글루코오스 내성의 개선 및/또는 췌장 기능의 개선인 방법.
  126. 제124항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편과 병용하여, 하나 또는 그 이상의 치료제가 상기 대상체에 투여되고, 상기 치료제가 진통제, 마취제, 항생 물질, 또는 면역조절제인 방법.
  127. 제126항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 치료제가 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 프로피온산 유도체, 아세트산 유도체, 페남산 유도체, 비페닐카르복실산 유도체, 옥시캄, 살리실레이트 또는 피라졸론으로부터 선택되는 것인 방법.
  128. 제126항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 치료제가 비구아니드 (biguanide) 및 설포닐우레아, 티아졸리딘디온, GLP-1 유사체, PPAR 감마 작용제, 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 저해제, 브로모크립틴 제형물, 담즙산 격리제 (bile acid sequestrant), 인슐린, 알파 글루코시다제 저해제, 메트포르민, SGLT-2 저해제, 식욕 억제 또는 체중 감소 약제로부터 선택되는 것인 방법.
  129. 제124항에 있어서, 상기 글루코오스 대사의 개선이 혈중 글루코오스 수준의 저하와 관련되는 것인 방법.
  130. 생체 샘플에서, 베타 클로토의 존재를 검출하는 방법으로서, 베타 클로토와 상기 항체의 결합을 가능하게 하는 조건하에, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체와 상기 생체 샘플을 접촉시키는 단계 및 상기 항체와 베타 클로토 사이에, 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함하는 방법.
  131. 제130항에 있어서, 상기 생체 샘플이 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환 및 대사 증후군을 가지거나 또는 가질 것으로 의심되는 포유동물의 것인 방법.
  132. 의약품 제조에 있어서, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편의 용도로서, 상기 의약품이 대상체의 질환, 장애 또는 병증에 사용하기 위한 것이며, 상기 대상체에 상기 항체 또는 단편을 투여하는 단계가 포함되는 것인 용도.
  133. 상기 의약품 제조에 있어서, 제120항의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 의약품이 대상체의 질환, 장애 또는 병증에 사용하기 위한 것이며, 상기 방법이 상기 대상체에 상기 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 것인 용도.
  134. 조성물 제조에 있어서, 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편의 용도로서, 상기 조성물이 생체 샘플에서, 베타 클로토의 존재를 검출하기 위한 방법에서 사용하기 위한 것이며, 상기 방법이, 베타 클로토와 상기 항체의 결합을 가능하게 하는 조건하에, 상기 항체와 상기 생체 샘플을 접촉시키는 단계 및 상기 항체와 베타 클로토 사이에, 복합체가 형성되는지 여부를 검출하는 단계를 포함하는 것인 용도.
  135. 인간 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가, 서열번호:297의 아미노산 잔기 509 내지 1044를 포함하는 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인과 결합하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  136. 인간 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가, 서열번호:297의 아미노산 잔기 517 내지 967을 포함하는 인간 베타 클로토의 KLB2 도메인의 당류 가수분해 효소 1 영역과 결합하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  137. 인간 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가, 서열번호:297의 아미노산 잔기 657 내지 703을 포함하는 인간 베타 클로토의 영역과 결합하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  138. 시아노 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가, 서열번호:299의 아미노산 잔기 657 내지 703을 포함하는 시아노 베타 클로토의 영역과 결합하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  139. 인간 베타 클로토와 결합하는 항체 또는 그의 단편으로서, 상기 항체가, 서열번호:297의 아미노산 잔기 657, 701 및/또는 703 중 적어도 하나를 포함하는 인간 베타 클로토의 에피토프와 결합하며, 상기 항체가, 인간 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하거나, 또는 상기 항체가, 인간 베타 클로토 및 FGF 수용체를 발현하는 세포에서, 베타 클로토/FGF 수용체 복합체를 활성화하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  140. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  141. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 701을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  142. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 703을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  143. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657 및 701을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  144. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657 및 703을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  145. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 701 및 703을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  146. 제139항에 있어서, 상기 인간 베타 클로토의 에피토프가 적어도 서열번호: 297의 아미노산 잔기 657, 701 및 703을 포함하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  147. 제135항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 모노클로날 항체인 항체 또는 그의 단편.
  148. 제135항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 인간화, 인간 또는 키메라 모노클로날 항체인 항체 또는 그의 단편.
  149. 제135항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편이 작용제 항체인 항체 또는 그의 단편.
  150. 제149항에 있어서, 상기 작용제 항체 또는 그이 단편이 FGF 수용체의 FGF19-형 신호 전달 및/또는 FGF21-형 신호 전달을 유도하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  151. 제149항에 있어서, 상기 작용제 항체가 베타 클로토/FGF 수용체 복합체를 활성화하는 것인 항체 또는 그의 단편.
  152. 제135항 내지 제151항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  153. 대상체의 제2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, NASH, 심혈관 질환 또는 대사 증후군의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제108항 및 제135항 내지 제151항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편 또는 제120항 또는 제152항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  154. 대사 파라미터의 개선 방법으로서, 제1항 내지 제108항 및 제135항 내지 제151항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 단편 또는 제120항 또는 제152항의 약제학적 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  155. 제154항에 있어서, 상기 대사 파라미터의 개선이 체중, 체질량 지수, 복부둘레비율, 피하 지방 두께, 글루코오스, 인슐린 및/또는 트리글리세리드의 감소인 방법.
  156. 제153항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 단편과 병용하여, 하나 또는 그 이상의 치료제가 상기 대상체에 투여되고, 상기 치료제가 진통제, 마취제, 항생 물질, 또는 면역조절제인 방법.
  157. 제153항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 치료제가 비스테로이드성 항염증제 (NSAID), 프로피온산 유도체, 아세트산 유도체, 페남산 유도체, 비페닐카르복실산 유도체, 옥시캄, 살리실레이트 또는 피라졸론으로부터 선택되는 것인 방법.
  158. 제153항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하나 또는 그 이상의 치료제가 비구아니드 및 설포닐우레아, 티아졸리딘디온, GLP-1 유사체, PPAR 감마 작용제, 디펩티딜 펩티다제-4 (DPP-4) 저해제, 브로모크립틴 제형물, 담즙산 격리제, 인슐린, 알파 글루코시다제 저해제, 메트포르민, SGLT-2 저해제, 식욕 억제 또는 체중 감소 약제로부터 선택되는 것인 방법.
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