KR20150128879A - 항­ｌａｇ­3 결합 단백질 - Google Patents

항­ｌａｇ­3 결합 단백질 Download PDF

Info

Publication number
KR20150128879A
KR20150128879A KR1020157027994A KR20157027994A KR20150128879A KR 20150128879 A KR20150128879 A KR 20150128879A KR 1020157027994 A KR1020157027994 A KR 1020157027994A KR 20157027994 A KR20157027994 A KR 20157027994A KR 20150128879 A KR20150128879 A KR 20150128879A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
val
leu
thr
pro
Prior art date
Application number
KR1020157027994A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101763352B1 (ko
Inventor
폴 앤드류 햄블린
알란 피터 루이스
토마스 매튜 웹
Original Assignee
글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 filed Critical 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드
Publication of KR20150128879A publication Critical patent/KR20150128879A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101763352B1 publication Critical patent/KR101763352B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/01—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C12Y204/01068—Glycoprotein 6-alpha-L-fucosyltransferase (2.4.1.68), i.e. FUT8
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 림프구 활성화 유전자 3 (LAG-3)에 결합하는 항원 결합 단백질, 및 보다 구체적으로, LAG-3+ 활성화 T 세포의 고갈을 일으키는 항원 결합 단백질에 관한 것이다.

Description

항­ＬＡＧ­3 결합 단백질{ANTI-LAG-3 BINDING PROTEINS}
본 발명은 항원 결합 단백질, 특히 림프구 활성화 유전자 (LAG-3)에 결합하여 LAG-3을 발현시키는 활성화 T 세포의 고갈을 일으키는 항체, 그러한 항원 결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 항원 결합 단백질을 함유하는 약학적 조성물, 및 병원성 T 세포의 개입과 관련된 질병의 치료 및/또는 예방에서의 상기 항원 결합 단백질의 용도에 관한 것이다.
림프구 활성화 유전자-3 (LAG-3)은 T 세포 항상성, 증식 및 활성화를 조절하는 음성 공-자극성 수용체이다 (Sierro S et al; Expert Opin. Ther. Targets (2010) 15: 91-101). 면역글로불린 슈퍼패밀리 구성원인 LAG-3은 CD4와 같이, MHC 클래스 II 분자에 결합하지만, CD4와 별개의 부위에 2배 높은 친화성으로 결합하는 CD4-유사 단백질이다 (Huard B et al., (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94: 5744-9). 두 수용체는 매우 다른 기능을 발휘하는 것 외에 (CD4는 양성 공-자극성 분자이다), 또한 차별적으로 조절된다. CD4는 모든 성숙 CD4+ T 세포의 표면에서 구조적으로 발현되며, 단지 소량 분획만이 세포내에 존재하는 반면, LAG-3 분자의 대부분은 미세소관-조직 중심에 가까운 세포에 유지되고, 단지 항원 특이적 T 세포 활성화 다음에 유도된다 (Woo SR et al., (2010) Eur J Immunol 40: 1768-77). T 세포 반응의 음성 조절제로서의 LAG-3의 역할은 LAG-3 녹아웃 마우스를 이용한 연구 및 시험관내 및 생체내 시스템 모델에서 차단성 항-LAG-3 항체의 이용에 기반한다 (Sierro S et al., Expert Opin. Ther. Targets (2010) 15: 91-101; Hannier S et al (1998), J Immunol 161: 4058-65; Macon-Lemaitre L et al (2005), Immunology 115: 170-8; Workman CJ et al (2003), Eur J Immunol 33:970-9).
세포 표면에서, LAG-3은 이합체로서 발현되는데, 이는 안정한 MHC 클래스 II 결합 부위의 형성에 필요하다 (Huard B et al. (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94: 5744-9). 가용성 형태의 LAG-3은 또한 건강한 도너 및 결핵과 암을 갖는 환자의 혈청에서 발생하고 (Lienhardt C et al. (2002), Eur J Immunol 32: 1605-13; Triebel F et al (2006). Cancer Lett 235: 147-53), 이러한 형태는 LAG-3+ T 세포의 수와 관련될 수 있다 (Siawaya J et al. (2008). J of Infection 56: 340-7). 향상된 림프구 고갈제에 대한 표적 항원으로서 LAG-3의 주요 속성은 현재 임상에서의 다른 작용제, 즉 Campath™ (T/B 세포), 아메바이브(Amevive)(대부분 CD45RO+ T-세포) 또는 리툭산(Rituxan) (B-세포)에 비해 이의 비교적 선택적인 발현 프로파일이다. 인간에서 생체내 T 세포 활성화의 지속 마커로서 소수의 분자가 확인되었다. 이는 LAG-3, OX40, MHC 클래스 II, CD69, CD38, ICOS 및 CD40L을 포함한다. 그러나, LAG-3 및 OX40와 별개로 이러한 분자 중 대부분은 또한 인간 천연 T reg 또는 그 밖의 세포 유형에서 구조적으로 발현된다. LAG-3은 건강한 인간에서 적은 비율의 T-세포에서 발현되고 (약 1-4%), 유사한 비율의 NK 세포에서 발현된다 (Baixeras E et al. (1992), J Exp Med 176: 327-37; Huard B et al (1994), Immunogenetics 39: 213-7). 항-CD3로의 활성화시에 CD4+ 및 CD8+ T 세포 둘 모두의 약 30-80%는 24 내지 48 h 내에 LAG-3을 발현시킨다; 이러한 비율은 IL2, IL7 및 IL12의 존재 하에 증가한다 (Sierro S et al, Expert Opin. Ther. Targets (2010) 15: 91-101; Bruniquel D et al (1998), Immunogenetics 48: 116-24). 리콜 항원 (즉 CMV 또는 파상풍 톡소이드)으로의 항원-특이적 자극 후에 대부분의 활성화 T 세포는 LAG-3+이다. 또한, 인간에서, LAG-3은 건강한 인간 혈액의 CD4+ CD25+ FoxP3+ T reg의 서브-집단 (1-10%)에서 발현된다. 이러한 집단은 세포 접촉 및 IL10 의존성 메커니즘에 의해 시험관내에서 기능적으로 억제되는 것으로 보이므로, 최근에 활성화된 자연 또는 유도된 T reg의 집단을 나타낼 수 있다 [Camisaschi C, Casati C, Rini F et al. (2010). LAG-3 expression defines a subset of CD4+CD25highFox3P + regulatory T cells that are expanded at tumour sites. J. Immunol 184: 6545-51). LAG-3은 형질세포모양 수지상 세포, B-세포, 및 NKT-세포와 같은 조혈 계통의 다른 세포 유형에서 검출되었으나, 단지 마우스에서만, 대부분 활성화 이후에 검출되었다 (Sierro S, Romero P & Speiser D; Expert Opin. Ther. Targets (2010) 15: 91-101).
LAG-3+ T 세포의 고갈을 이용하여 T 세포 유도된 면역-염증성 질병을 치료하거나 예방할 수 있다. 대부분의 자가-반응성 세포가 질병 부위에서 자기 항원에 의해 만성적으로 활성화되고/거나 주변으로 재순환되는 자가면역 질환에서, 짧은 코스의 고갈성 항원 결합 단백질은 이러한 자가면역 T 세포 레퍼토리를 선택적으로 고갈시켜 장기 완화를 제공할 수 있다. 이러한 접근법의 우선순위는 pan-림프구 고갈성 항체 Campath™으로 입증되었는데, 이 때 단일 12mg 주입은 다발경화증 시험에서 표준 치료에 비해 재발율을 74%만큼 감소시켰다 (The CAMMS223 Trial Investigators (2008), N Engl J Med. 359:1786-801). Campath™에 대한 표적인, CD52에 비해 LAG-3의 더욱 선택적인 발현으로 인해, 나이브 및 휴지 기억 T 세포 및 자연 T reg 레퍼토리에 미치는 영향이 감소되었다. 이는 효능을 유지하면서, 감염과 악성종양 뿐만 아니라 Campath™과 관련된 자가-면역성의 개시의 위험을 감소시키는 개선된 치료 지수를 제공할 것으로 예상된다. 추가로, 개코원숭이 튜베르쿨린 피부 챌린지 모델에서, LAG-3 표적화 키메라 항체 IMP731은 주변부 및 피부 챌린지 부위 둘 모두에서 LAG-3+ T-세포의 고갈을 매개하여, 튜베르쿨린 피부 챌린지 반응의 감소를 발생시켰다 (Poirier N et al. (2011), Clin Exp Immunol 164: 265-74). 추가 연구에서, LAG-3 폴리클로날 항체는 래트 심장 동종이식으로부터 LAG-3+ 침윤성 T-세포를 고갈시켜 이러한 이식편의 생존을 연장시켰다 (Haudebourg T et al. (2007), Transplantation 84: 1500-1506).
LAG-3에 결합하여 LAG-3+ 활성화 T 세포의 결실을 초래하고, 자가면역 질환, 예컨대 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, 전신홍반루푸스 (SLE), 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 궤양성 대장염 및 자가면역 간염; 감염성 질환, 알레르기성 질환 및 암의 치료에서 용도를 지닐 수 있는 항원 결합 단백질, 특히 인간화 항체에 대한 요구가 당 분야에 존개한다.
발명의 개요
본 발명은 넓게 말해 항원 결합 단백질, 예컨대 림프구 활성화 유전자 3 (LAG-3)에 결합하여 LAG-3+ 활성화 T 세포의 고갈을 일으킬 수 있는 인간화 항체에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명의 항원 결합 단백질은 SEQ ID No: 5의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 항원 결합 단백질은 병원성 T 세포의 개입과 관련된 질환, 예를 들어 자가면역 질환, 예컨대 건선(psoriasis), 크론병(Crohn's disease), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 원발성 담즙성 간경변(primary biliary cirrhosis), 전신홍반루푸스(systemic lupus erythematosus)(SLE), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 다발경화증(multiple sclerosis), 궤양성 대장염(ulcerative colitis) 및 자가면역 간염(autoimmune hepatitis); 감염성 질환, 알레르기성 질환 및 암의 치료 및 예방에서 용도를 지닐 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 본 발명에 따른 항원 결합 단백질 및 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
도 1: EL4 (A) 및 활성화 인간 CD3+ T 세포 (B)를 발현하는 LAG-3에 결합하는 항체. 관련이 없는 표적에 대한 모노클로날 항체인 Synagis를 음성 대조군으로서 이용하였다.
도 2: 주입 24시간 후 복강으로부터 회수된 공동-투여된 활성화 인간 PBMC에 대한 복강내 투여된 아푸코실화된 항체 H5L7BW의 효과. A) 1 x 107 활성화 인간 PBMC 및 5mg/kg의 대조군 항체, H5L7BW 또는 Campath™의 공동-투여 24시간 후 인간 CD4+LAG-3+ 및 CD8+LAG-3+ T 세포의 정량 (도너 A: 대조군 n=2; H5L7BW n=2, MabCampath n=1; 도너 B: 대조군 n=2; H5L7BW n=3, Campath™ n=2). B) 총 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정량. (*p<0.001).
도 3: 복강내 공동-투여되고 주입 5시간 후 복강으로부터 회수된 활성화 인간 PBMC에 대한 아푸코실화된 항체 H5L7BW 및 이의 비-ADCC 향상된 변이체 H5L7의 효과. A) 1 x 107 활성화 인간 PBMC 및 5mg/kg의 대조군 항체, H5L7BW 또는 H5L7의 공동-투여 5시간 후 인간 CD4+LAG-3+ 및 CD8+LAG-3+ T 세포의 정량 (그룹 당 n=3). B) 총 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정량. (*p<0.001).
도 4: SCID의 마우스의 복막에 인간 활성화 PBMC의 투여 18시간 전에 정맥내 투여된 아푸코실화된 항체 H5L7BW의 효과. A) 5 x 106 (그룹 당 n=1) 또는 1 x 107 O/N (그룹 당 n=4) 활성화 인간 PBMC의 i.p. 주입 5시간 후 인간 CD4+LAG-3+ 및 CD8+LAG-3+ T 세포의 정량. B) 총 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정량. 5mg/kg의 H5L7BW 또는 대조군 항체를 활성화 인간 PBMC의 주입 18시간 전에 정맥내 주입하였다. (*p<0.001, # p=0.0052).
도 5: SCID의 마우스의 복막에 활성화 인간 PBMC의 투여 18시간 전에 정맥내 투여된 H5L7BW, H5L7 또는 IMP731 (5mg/kg)의 효과. A) 1 x 107 (그룹 당 n=4) 활성화 인간 PBMC의 i.p. 주입 5시간 후 인간 CD4+LAG-3+ 및 CD8+LAG-3+T 세포의 정량. 5mg/kg의 H5L7BW, H5L7, IMP731 또는 대조군 항체를 인간 PBMC의 주입 18시간 전에 정맥내 주입하였다. B) 총 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 정량. 5mg/kg의 LAG-3 고갈 항체 또는 대조군 항체를 활성화 인간 PBMC의 주입 18시간 전에 정맥내 주입하였다. (*p<0.001).
발명의 상세한 설명
본 발명은 넓게 말해 림프구 활성화 유전자 3 (LAG-3)에 결합하는 항원 결합 단백질, 및 보다 구체적으로, LAG-3+ 활성화 T 세포의 고갈을 일으킬 수 있는 항원 결합 단백질에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "항원 결합 단백질"은 LAG-3에 결합할 수 있는 항체 및 이의 단편을 의미한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "LAG-3"은 림프구 활성화 유전자 3을 의미한다. 용어 "LAG-3"은, 예를 들어, 활성화 T 세포, NK 세포 및 B 세포의 표면에서 이합체로서 발현되는 LAG-3 (당 분야에서, 예를 들어 CD223으로도 공지됨) 및 본원에서 "sLAG-3"으로서 언급되는, 예를 들어 인간 혈청에서 발견되는 LAG-3의 가용성 형태를 그 범위내에 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에서 "sLAG-3" 및 "LAG-3"에 대한 언급은 인간 폴리펩티드에 대한 것이다. 특정 구체예에서, 본 발명은, 예를 들어, 활성화 T 세포, NK 세포 및 B 세포의 표면에서 이합체로서 발현되는 LAG-3의 형태 (당 분야에서, 예를 들어 CD223으로도 공지됨)에 결합할 수 있는 항원 결합 단백질을 제공한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 활성화 T-세포에서 발현되는 LAG-3에 결합하여 상기 활성화 T 세포의 고갈을 야기할 수 있는 항원 결합 단백질에 관한 것이다.
한 양태에서, 본 발명은 LAG-3에 결합할 수 있고 SEQ ID No: 5로부터의 CDRL1을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 위치 27E은 프롤린이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No: 1의 CDRL1을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 LAG-3에 결합할 수 있고 SEQ ID No: 5로부터의 CDRL1을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 항원 결합 단백질은 SEQ ID No: 5로부터의 CDRL2 및/또는 CDRL3, 또는 이의 CDR 변이체를 추가로 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No: 2의 CDRL2 및/또는 SEQ ID No: 3의 CDRL3 또는 이의 CDR 변이체를 추가로 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 LAG-3에 결합할 수 있고 SEQ ID No: 5로부터의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 10으로부터의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 하나 이상, 또는 이의 CDR 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 5로부터의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3, 및 SEQ ID NO: 10으로부터의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 SEQ ID No: 6의 CDRH1, SEQ ID No: 7의 CDRH2 및 SEQ ID No: 8의 CDRH3을 포함하는 군으로부터 선택되는, 하나 이상의 CDR, 또는 이의 CDR 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 하기 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다:
CDRL1: SEQ ID No: 1
CDRL2: SEQ ID No: 2
CDRL3: SEQ ID No: 3
CDRH1: SEQ ID No: 6
CDRH2: SEQ ID No: 7
CDRH3: SEQ ID No: 8.
또 다른 양태에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 5로부터의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 가변 경쇄, 및 SEQ ID NO: 10으로부터의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 가변 중쇄를 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
특정 양태에서, 항원 결합 단백질은 인간화 항체, 임의로 IgG이다.
본원에서 사용되는 용어 "CDR"은 항원 결합 단백질의 상보성 결정 영역 아미노산 서열을 의미한다. 이들은 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 과가변 영역이다. 면역글로불린의 가변 부분에는 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR (또는 CDR 영역)이 존재한다.
CDR 서열에 대한 다양한 넘버링 규칙이 존재함이 당업자에게 자명할 것이다; 코티아 (Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883), 카바트 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed., U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)), AbM (University of Bath) 및 콘택트 (University College London). 카바트, 코티아, AbM 및 콘택트 방법 중 적어도 2개를 이용한 최소 중첩 영역은 "최소 결합 단위"를 제공하기 위해 결정될 수 있다. 최소 결합 단위는 CDR의 서브-부분일 수 있다. 항체의 구조 및 단백질 폴딩은 그 밖의 잔기가 CDR 서열의 일부로 간주되고 당업자에게 그렇게 이해될 것임을 의미할 수 있다.
달리 언급되지 않는 한 및/또는 구체적으로 확인된 서열의 부재 하에, 본원에서 "CDR", "CDRL1", "CDRL2", "CDRL3", "CDRH1", "CDRH2", "CDRH3"에 대한 언급은 표 1에서 확인되는 임의의 공지된 규칙에 따라 넘버링된 아미노산 서열을 의미한다. 특정 구체예에서, 활용된 넘버링 규칙은 카바트 규칙이다. 본원에서 "위치 27E"에 대한 언급은 카바트 넘버링 규칙을 이용하여 정의된 경쇄 가변 도메인에서 위치 27E에 존재하는 아미노산에 대한 언급이다. 당업자는 이러한 위치가, 예를 들어 위치 27E가 위치 30B와 동등한 코티아와 같은 다른 공지된 규칙 하에 등가물을 지님을 이해할 것이다.
하기 표 1은 각각의 CDR 또는 결합 단위에 대해 각각의 넘버링 규칙을 이용한 하나의 정의를 나타낸다. CDR 정의 중 일부는 사용된 개개 간행물에 따라 달라질 수 있음에 유의해야 한다.
표 1
Figure pct00001
본원에서 사용되는 용어 "CDR 변이체"는 적어도 하나, 예를 들어 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환(들), 결실(들) 또는 첨가(들)에 의해 변형된 CDR을 의미하고, 여기서 CDR 변이체를 포함하는 변형된 항원 결합 단백질은 변형-전 항원 결합 단백질의 생물학적 특징을 실질적으로 유지한다. 변형될 수 있는 각각의 CDR은 단독으로 또는 다른 CDR과 함께 변형될 수 있음이 이해될 것이다. 한 양태에서, 변형은 치환, 특히 예를 들어 표 2에 제시된 바와 같은 보존적 치환이다.
표 2
Figure pct00002
예를 들어, 변이체 CDR에서, 최소 결합 단위의 아미노산 잔기는 동일하게 유지될 수 있지만, 카바트 또는 코티아 정의(들)의 일부로서 CDR을 포함하는 측면 잔기는 보존적 아미노산 잔기로 치환될 수 있다.
상기 기재된 변형된 CDR 또는 최소 결합 단위를 포함하는 그러한 항원 결합 단백질은 본원에서 "기능성 CDR 변이체" 또는 "기능성 결합 단위 변이체"로 언급될 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 sLAG-3에 결합할 수 있다. 한 양태에서, 항원 결합 단백질-sLAG-3 상호작용의 평형 해리 상수(KD)는 10nM 또는 그 미만, 예컨대 1nM 또는 그 미만, 예를 들어 1pM 내지 300, 400, 500pM 또는 500pM 내지 1nM이다. 당업자는 KD 수치가 작을수록, 결합이 강해짐을 이해할 것이다. KD의 역수 (즉, 1/KD)는 단위 M-1을 갖는 평형 결합 상수(KA)이다. 당업자는 KA 수치가 클수록, 결합이 강해짐을 이해할 것이다.
한 양태에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO: 51 및 52의 재조합 인간, 또는 시노몰구스 마카쿠 LAG-3 세포외 도메인 (ECD)을 이용한 Biacore™ 표면 플라스몬 공명 분석에 의해 측정시, 1nM 미만, 예를 들어 1pM 내지 300pM의 KD로 재조합 LAG-3에 결합할 수 있는 항원 결합 단백질을 제공한다.
더욱이, 본 발명의 항원 결합 단백질은 또한, 예를 들어, EL4 세포 또는 활성화 인간 CD3+ T 세포에서 발현되는 LAG-3에 결합할 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 또한 LAG-3+ 활성화 T 세포, 특히, CD4+LAG-3+ 및 CD8+LAG-3+ T 세포를 고갈시킬 수 있다. LAG-3+ T 세포의 고갈은, 예를 들어, 항체 의존성 세포 매개된 세포독성 활성(ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 활성(CDC)에 의해 일어날 수 있다.
한 양태에서, 본 발명은 일차 인간 T 세포를 이용한 시험관내 검정에서 ADCC에 의해 항원 특이적 CD4 및/또는 CD8 LAG-3+ 인간 T 세포의 40% 초과의 고갈을 야기할 수 있는 항원 결합 단백질을 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 0.1μg/mL의 농도에서, 표적 세포로서 유로퓸-표지된 LAG-3 발현 EL4 세포 및 이펙터 세포로서 인간 PBMC를 이용한 시험관내 ADCC 검정에서 50% 초과의 고갈을 야기할 수 있는 항원 결합 단백질을 제공하고, 이 때 이펙터 : 표적 비는 50:1 보다 크지 않고 검정은 2시간의 기간 동안 진행된다. % 세포 용해는 LAG-3 발현 EL4 세포로부터 유로퓸 방출에 기반하여 계산된다.
항원 결합 단백질의 불변 영역 및 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)을 포함하는 다양한 Fc 수용체 (FcR) 간의 상호작용은 ADCC 및 CDC와 같은 항원 결합 단백질의 이펙터 기능을 매개하는 것으로 여겨진다. 현저한 생물학적 효과는 이펙터 기능성의 결과일 수 있다. 일반적으로, 이펙터 기능을 매개하는 능력은 항원에 대한 항원 결합 단백질의 결합을 요구하지만 모든 항원 결합 단백질이 모든 이펙터 기능을 매개하는 것은 아닐 것이다.
이펙터 기능은 ADCC 이펙터 기능에 대한 측정을 위해, 예를 들어 본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체의 FcγRIII을 통한 자연 살해 세포로의 결합 또는 FcγRI을 통한 단핵구/대식세포로의 결합에 의한 것을 포함하는 다수의 방법으로 측정될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항원 결합 단백질은 자연 살해 세포 검정에서 ADCC 이펙터 기능에 대해 평가될 수 있다. 그러한 검정의 예는 문헌[Shields et al, 2001 The Journal of Biological Chemistry, Vol. 276, p6591-6604; Chappel et al, 1993 The Journal of Biological Chemistry, Vol 268, p25124-25131; Lazar et al, 2006 PNAS, 103; 4005-4010]에서 찾아볼 수 있다.
CDC 기능을 결정하기 위한 검정의 예는 문헌[1995 J Imm Meth 184:29-38]에 기재된 것을 포함한다.
본 발명의 한 양태에서, 항원 결합 단백질은 항체이다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 면역글로불린-유사 도메인을 갖는 분자를 의미하고 모노클로날 (예를 들어, IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE), 재조합, 폴리클로날, 키메라, 인간화, 이중특이적 및 헤테로컨쥬게이트 항체; 단일 가변 도메인 (예컨대, VL), 도메인 항체 (dAb®), 항원 결합 단편, 면역학적으로 효과적인 단편, Fab, F(ab')2, Fv, 디설파이드 연결된 Fv, 단일쇄 Fv, 폐쇄된 형태의 다중특이적 항체, 디설파이드-연결된 scFv, 디아보디, TANDABS™ 등 및 상기 중 임의의 변형된 형태 (대안적인 "항체" 포맷의 개요에 대해서는, 문헌[Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, 2005, Vol 23, No. 9, 1126-1136]을 참조하라)를 포함한다. 대안적인 항체 포맷은 설명에 따른 임의의 분자의 하나 이상의 CDR이 아피보디(affibody), SpA 골격, LDL 수용체 클래스 A 도메인, 아비머(avimer)(예컨대, 미국특허출원공개 2005/0053973, 2005/0089932, 2005/0164301을 참조하라) 또는 EGF 도메인과 같이, 적합한 비-면역글로불린 단백질 골격 또는 뼈대 상에 배열될 수 있는 대안적인 골격을 포함한다.
추가의 양태에서, 항원 결합 단백질은 인간화 항체이다.
"인간화 항체"는 비-인간 도너 면역글로불린으로부터 유래되는 CDR을 갖는 조작된 항체의 유형을 의미하며, 분자의 나머지 면역글로불린-유래 부분은 하나 (또는 그 초과)의 인간 면역글로불린(들)에서 유래된다. 또한, 프레임워크 지원 잔기는 결합 친화성을 보존하도록 변경될 수 있다 (예컨대, 문헌[Queen et al., Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)]을 참조하라). 적합한 인간 억셉터 항체는 도너 항체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대한 상동성에 의해, 통상적인 데이터베이스, 예컨대 KABAT® 데이터베이스, Los Alamos 데이터베이스, 및 Swiss Protein 데이터베이스로부터 선택된 것일 수 있다. 도너 항체 (아미노산 기준)의 프레임워크 영역에 대한 상동성을 특징으로 하는 인간 항체는 도너 CDR의 삽입을 위한 중쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 가변 프레임워크 영역을 제공하는데 적합할 수 있다. 경쇄 불변 또는 가변 프레임워크 영역을 제공할 수 있는 적합한 억셉터 항체는 유사한 방식으로 선택될 수 있다. 억셉터 항체 중쇄 및 경쇄는 동일한 억셉터 항체에서 비롯될 필요가 없음에 유의해야 한다. 종래 기술은 그러한 인간화 항체를 생성하는 여러 방법을 기재하고 있다 - 예를 들어 EP-A-0239400 및 EP-A-054951을 참조하라.
또한 추가의 양태에서, 인간화 항체는 IgG1인 인간 항체 불변 영역, 예를 들어 SEQ ID No: 46의 중쇄 불변 영역을 갖는다.
본 발명은 a) SEQ ID No: 5의 경쇄 서열 또는 SEQ ID No: 5의 임의의 것과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 경쇄 서열 및 b) SEQ ID No: 10의 중쇄 서열 또는 SEQ ID No: 10의 임의의 것과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체를 추가로 제공함이 이해될 것이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 a) SEQ ID No: 5와 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열, 및 b) SEQ ID No: 10과 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체를 제공한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 a) SEQ ID No: 5와 적어도 95% 동일성을 갖는 경쇄 서열, 및 b) SEQ ID No: 10과 적어도 95% 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체를 제공한다.
또한 추가의 양태에서, 본 발명은 a) SEQ ID No: 5와 적어도 97% 동일성을 갖는 경쇄 서열, 및 b) SEQ ID No: 10과 적어도 97% 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체를 제공한다.
또한 추가의 양태에서, 본 발명은 a) SEQ ID No: 5의 경쇄 서열, 및 b) SEQ ID No: 10의 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체를 제공한다.
본 발명은 a) SEQ ID No: 35의 경쇄 서열 또는 SEQ ID No: 35의 임의의 것과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 경쇄 서열 및 b) SEQ ID No: 36의 중쇄 서열 또는 SEQ ID No: 36의 임의의 것과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체를 추가로 제공함이 이해될 것이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO: 35 및 36의 CDRL1-L3 및 CDRH1-H3을 포함하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
뉴클레오티드 및 아미노산 서열에 대해, 용어 "동일한" 또는 "동일성"은 최적으로 정렬하고 적절한 삽입 또는 결실에 대해 비교할 때 2개의 핵산 또는 2개의 아미노산 서열 간의 동일성 정도를 나타낸다.
2개의 서열 간의 퍼센트 동일성은 2개 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭의 수, 및 각 갭의 길이를 고려하여, 서열들이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/위치의 총 수 × 100). 서열의 비교 및 2개 서열 간의 퍼센트 동일성의 결정은 하기 기재된 대로, 수학적 알고리듬을 이용하여 수행될 수 있다.
쿼리 핵산 서열과 해당 핵산 서열 간의 퍼센트 동일성은 한 쌍 방식의(pair-wise) BLASTN 정렬을 수행한 후 해당 핵산 서열이 쿼리 핵산 서열과 100% 쿼리 범위를 가질 때 BLASTN 알고리듬에 의해 계산되는, 백분율로서 표시되는 "동일성" 값이다. 쿼리 핵산 서열과 해당 핵산 서열 간의 그러한 한 쌍 방식의 BLASTP 정렬은 낮은 복잡성 영역에 대한 필터가 꺼져 있는 더 내셔널 센터 포 바이오테크놀로지 인스티튜트의 웹사이트 상에서 이용가능한 BLASTN 알고리듬의 디폴트 설정을 이용함에 의해 수행된다. 중요하게는, 쿼리 핵산 서열은 본원의 하나 이상의 청구항에서 확인되는 핵산 서열에 의해 기재될 수 있다.
쿼리 아미노산 서열과 해당 아미노산 서열 간의 퍼센트 동일성은 한 쌍 방식의 BLASTP 정렬을 수행한 후 해당 아미노산 서열이 쿼리 아미노산 서열과 100% 쿼리 범위를 가질 때 BLASTP 알고리듬에 의해 계산되는, 백분율로서 표시되는 "동일성" 값이다. 쿼리 아미노산 서열과 해당 아미노산 서열 간의 그러한 한 쌍 방식의 BLASTP 정렬은 낮은 복잡성 영역에 대한 필터가 꺼져 있는 더 내셔널 센터 포 바이오테크놀로지 인스티튜트의 웹사이트 상에서 이용가능한 BLASTP 알고리듬의 디폴트 설정을 이용함에 의해 수행된다. 중요하게는, 쿼리 아미노산 서열은 본원의 하나 이상의 청구항에서 확인되는 아미노산 서열에 의해 기재될 수 있다.
생성
본 발명의 항원 결합 단백질, 예를 들어 항체, 예컨대 인간화 항체는 본 발명의 항원 결합 단백질에 대한 코딩 서열(들)을 포함하는 발현 벡터로 숙주 세포를 트랜스펙션시킴에 의해 생성될 수 있다. 발현 벡터 또는 재조합 플라스미드는 항원 결합 단백질에 대한 이러한 코딩 서열을 숙주 세포에서의 복제 및 발현 및/또는 숙주 세포로부터의 분비를 조절할 수 있는 통상적인 조절 대조군 서열과 연동하게 배치함으로써 생성된다. 조절 서열은 프로모터 서열, 예컨대, CMV 프로모터, 및 다른 공지된 항체로부터 유래될 수 있는 신호 서열을 포함한다. 유사하게, 상보적인 항원 결합 단백질 경쇄 또는 중쇄를 인코딩하는 DNA 서열을 갖는 제 2 발현 벡터가 생성될 수 있다. 특정 구체예에서, 이러한 제 2 발현 벡터는, 코딩 서열 및 선별 마커과 관련되는 한에 있어서는 예외로 하고, 가능한 한 각각의 폴리펩티드 사슬이 기능적으로 발현됨을 보장하기 위해, 제 1 발현 벡터와 동일하다. 대안적으로, 항원 결합 단백질에 대한 중쇄 및 경쇄 코딩 서열은 단일한 벡터 상에 존재할 수 있다.
선택된 숙주 세포는 제 1 및 제 2 벡터 둘 모두로 통상적인 기법에 의해 공-트랜스펙션되어(또는 단순히 단일한 벡터에 의해 트랜스펙션되어) 재조합 또는 합성 경쇄 및 중쇄 둘 모두를 포함하는 본 발명의 트랜스펙션된 숙주 세포를 생성한다. 그 후 트랜스펙션된 세포를 통상적인 기법에 의해 배양하여 본 발명의 조작된 항원 결합 단백질을 생성한다. 재조합 중쇄 및/또는 경쇄 둘 모두의 군집을 포함하는 항원 결합 단백질은 ELISA 또는 RIA와 같은 적절한 검정에 의해 배양물로부터 스크리닝된다. 다른 항원 결합 단백질을 작제하기 위해 유사한 통상적인 기법이 이용될 수 있다.
본 발명의 방법 및 조성물의 작제에 이용되는 클로닝 및 서브클로닝 단계에 적합한 벡터는 당업자에 의해 선택될 수 있다. 예를 들어, 통상적인 pUC 계열의 클로닝 벡터를 사용할 수 있다. 한 벡터, pUC19는 Amersham (Buckinghamshire, United Kingdom) 또는 Pharmacia (Uppsala, Sweden)와 같은 공급업체에서 시판된다. 추가로, 용이하게 복제가능한 임의의 벡터는 풍부한 클로닝 부위 및 선별 유전자 (예컨대, 항생제 내성)를 지니며, 클로닝에 사용될 수 있도록 용이하게 조작된다. 따라서, 클로닝 벡터의 선택은 본 발명에서 제한 인자가 아니다.
발현 벡터는 또한 이종성 DNA 서열, 예컨대, 포유동물 디하이드로폴레이트 리덕타제 유전자(DHFR)의 발현을 증폭하기에 적합한 유전자를 특징으로 할 수 있다. 그 밖의 바람직한 벡터 서열은 폴리 A 신호 서열, 예컨대 소 성장 호르몬(BGH)으로부터의 폴리 A 신호 서열 및 베타글로빈 프로모터 서열 (betaglopro)을 포함한다. 본원에서 유용한 발현 벡터는 당업자에게 널리 공지된 기법에 의해 합성될 수 있다.
상기 벡터의 구성요소, 예컨대 레플리콘, 선택 유전자, 인핸서, 프로모터, 신호 서열 등은 시판원 또는 자연원으로부터 수득되거나 선택된 숙주에서 재조합 DNA 생성물의 발현 및/또는 분비를 지시하는데 이용되는 공지된 절차에 의해 합성될 수 있다. 포유동물, 박테리아, 곤충, 효모, 및 진균 발현을 위해 다수의 유형이 당 분야에 공지되어 있는 그 밖의 적절한 발현 벡터가 또한 이러한 목적을 위해 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 항원 결합 단백질의 코딩 서열을 함유하는 재조합 플라스미드로 트랜스펙션된 세포주를 포함한다. 이러한 클로닝 벡터의 클로닝 및 다른 조작에 유용한 숙주 세포 또한 통상적이다. 그러나, 다양한 균주의 E. 콜리(E. coli)로부터의 세포가 본 발명의 항원 결합 단백질의 작제에서 클로닝 벡터의 복제 및 다른 단계에 이용될 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질의 발현에 적합한 숙주 세포 또는 세포주는 포유동물 세포, 예컨대 NS0, Sp2/0, CHO (예컨대 DG44), COS, HEK, 섬유모 세포 (예컨대, 3T3), 및 골수종 세포를 포함하고, 예를 들어 이는 CHO 또는 골수종 세포에서 발현될 수 있다. 인간 세포를 이용할 수 있으므로, 분자가 인간 당화 패턴으로 변형되는 것이 가능할 수 있다. 대안적으로, 다른 진핵생물 세포주가 이용될 수 있다. 적합한 포유동물 숙주 세포의 선택 및 형질전환, 배양, 증폭, 스크리닝 및 생성물 생산 및 정제 방법은 당 분야에 공지되어 있다. 예컨대, 상기 인용된 Sambrook et al.을 참조하라.
박테리아 세포는 재조합 Fab의 발현 또는 본 발명의 다른 구체예에 적합한 숙주 세포로 유용한 것이 입증될 수 있다(예를 들어, 문헌[Pluckthun, A., Immunol. Rev., 130:151-188 (1992)]을 참조하라). 그러나, 폴딩되지 않거나 부적절하게 폴딩된 형태 또는 당화되지 않은 형태로 박테리아 세포에서 발현되는 단백질의 경향으로 인해, 박테리아 세포에서 생성되는 임의의 재조합 Fab는 항원 결합 능력의 보유에 대해 스크리닝되어야 한다. 박테리아 세포에 의해 발현된 분자가 적절하게 폴딩된 형태로 생성된 경우, 박테리아 세포는 요망되는 숙주일 것이거나, 대안적인 구체예에서, 분자는 박테리아 숙주에서 발현될 수 있고, 이후 재폴딩될 수 있다. 예를 들어, 발현에 사용되는 E. 콜리의 다양한 균주는 생물공학 분야에서 숙주 세포로 널리 공지되어 있다. B. 서브틸리스(B. subtilis), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 다른 바실러스 등의 다양한 균주가 또한 상기 방법에서 이용될 수 있다.
요망되는 경우, 당업자에게 공지된 효모 세포의 균주, 뿐만 아니라 곤충 세포, 예를 들어, 드로소필라(Drosophila) 및 레피돕테라(Lepidoptera) 및 바이러스 발현 시스템이 숙주 세포로서 또한 이용가능하다. 예컨대 문헌[Miller et al., Genetic Engineering, 8:277-298, Plenum Press (1986)] 및 이에 인용된 참고문헌을 참조하라.
벡터가 작제될 수 있는 일반적 방법, 본 발명의 숙주 세포를 생성시키는데 필요한 트랜스펙션 방법, 및 상기 숙주 세포로부터 본 발명의 항원 결합 단백질을 생성시키는데 필요한 배양 방법은 모두 통상적인 기법일 수 있다. 통상적으로, 본 발명의 배양 방법은 보통 현탁액 중에서 혈청-비함유로 세포를 배양함에 의한 혈청 비함유 배양 방법이다. 마찬가지로, 생성된 후, 본 발명의 항원 결합 단백질은 암모늄 설페이트 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 겔 전기영동 등을 포함하는 당 분야의 표준 절차에 따라 세포 배양 내용물로부터 정제될 수 있다. 이러한 기법은 당 분야의 기술 범위 내이고, 본 발명을 제한하지 않는다. 예를 들어, 변경된 항체의 제조가 WO 99/58679 및 WO 96/16990에 기재되어 있다.
항원-결합 단백질의 또 다른 발현 방법은 미국 특허 번호 4,873,316호에 기재된 바와 같이 트랜스제닉 동물에서의 발현을 이용할 수 있다. 이는 포유동물로 트랜스제닉으로 통합되는 경우 암컷이 이의 모유에서 요망되는 재조합 단백질을 생성하는 것을 가능케 하는 동물 카세인 프로모터를 이용하는 발현 시스템에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 양태에서, 본 발명의 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 인코딩하는 벡터로 형질전환되거나 트랜스펙션된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 이에 의해 생성된 항원 결합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명의 항원 결합 단백질 (예컨대 인간화 항체)를 생성하는 방법이 제공된다.
본 발명에 따르면,
(a) 항체의 중쇄를 인코딩하는 제 1 벡터를 제공하는 단계;
(b) 항체의 경쇄를 인코딩하는 제 2 벡터를 제공하는 단계;
(c) 상기 제 1 및 제 2 벡터를 이용하여 포유동물 숙주 세포(예를 들어, CHO)를 형질전환시키는 단계;
(d) 상기 숙주 세포로부터 상기 배양 배지로 항체가 분비되도록 하는 조건하에서 단계 (c)의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
(e) 단계 (d)의 분비된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 인간 LAG-3에 결합하는 본 발명의 항-LAG-3 항원 결합 단백질 (예컨대 인간화 항체)을 생성시키는 방법이 제공된다.
요망되는 방법에 의한 발현 후, 항원 결합 단백질은 적절한 검정, 예컨대 Biacore™ 표면 플라스몬 공명 분석의 사용에 의해 시험관내 활성에 대해 시험되어, LAG-3에 대한 항원 결합 단백질의 결합을 평가할 수 있다. 추가로, 그 밖의 시험관내 및 생체내 검정을 또한 이용하여 활성화 인간 T 세포 집단과 같이, LAG-3을 발현시키는 세포의 고갈을 일으키는 항원 결합 단백질의 능력을 확인할 수 있다.
당업자는, 항체와 같은 항원 결합 단백질의 생성시에, 특히 사용된 세포주 및 항원 결합 단백질의 특정한 아미노산 서열에 따라서, 번역-후 변형이 일어날 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 이는 특정 리더 서열의 절단, 다양한 당화 및 포스포릴화 패턴의 다양한 당 모이어티의 첨가, 탈아미드화, 산화, 디설파이드 결합 스크램블링(disulfide bond scrambling), 이성질체화, C-말단 리신 클립핑(C-terminal lysine clipping), 및 N-말단 글루타민 고리화를 포함할 수 있다. 본 발명은 하나 이상의 번역-후 변형을 겪었거나, 수행한 항원 결합 단백질의 이용을 포함한다. 따라서, 본 발명의 "항원 결합 단백질" 또는 "항체"는 예컨대 본원에 기재된 대로 번역-후 변형을 겪은 이전에 정의된 바와 같은 "항원 결합 단백질" 또는 "항체"를 각각 포함한다.
항체의 불변 영역에서 보존된 위치에서의 항체의 당화는 항체 기능, 특히 이펙터 기능에 큰 효과를 갖는 것으로 알려져 있다. 예를 들어 문헌[Boyd et al. (1996) Mol. Immunol. 32: 1311-1318]을 참조하라. 하나 이상의 탄수화물 모이어티가 첨가, 치환, 결실 또는 변형된 본 발명의 항원 결합 단백질의 당화 변이체가 고려된다. 아스파라긴-X-세린 또는 아스파라긴-X-트레오닌 모티프의 도입은 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 잠재적인 부위를 생성하고, 이에 따라 항체의 당화를 조작하기 위해 이용될 수 있다. 문헌[Raju et al. (2001) Biochemistry 40: 8868-8876]에서 TNFR-IgG 면역부착소의 말단 시알릴화는 베타-1,4-갈락토실트랜스퍼라제 및/또는 알파, 2,3 시알릴트랜스퍼라제를 이용한 재갈락토실화 및/또는 재시알릴화의 과정을 통해 증가되었다. 말단 시알릴화의 증가는 면역글로불린의 반감기를 증가시키는 것으로 여겨진다. 대부분의 당단백질과 공통적으로, 항체는 글리코형의 혼합물로서 전형적으로 생성된다. 이러한 혼합물은 항체가 진핵생물, 특히 포유동물 세포에서 생성될 때 특히 명백하다. 정의된 글리코형을 제작하기 위한 다양한 방법이 개발되었다. 문헌[Zhang et al. (2004) Science 303: 371: Sears et al. (2001) Science 291: 2344; Wacker et al. (2002) Science 298: 1790; Davis et al. (2002) Chem. Rev. 102: 579; Hang et al. (2001) Acc. Chem. Res 34: 727]을 참조하라. 본원에 기재된 항체 (예를 들어, IgG 아이소형의 항체, 예컨대 IgG1)는 규정된 수 (예컨대 7개 이하, 예를 들어 5개 이하, 예컨대 2개 또는 1개)의 글리코형(들)을 포함할 수 있다.
탈아미드화는 아스파라긴 (N)을 약 3:1 비의 이소-아스파르트산 및 아스파르트산(D)으로 주로 전환시키는 효소적 반응이다. 훨씬 적은 정도로, 탈아미드화는 유사한 방식으로 글루타민 잔기에서 발생할 수 있다. CDR에서의 탈아미드화는 분자의 전하에 있어서 변화를 발생시키지만, 통상적으로 항원 결합에서의 변화를 발생시키지 않고 PK/PD에도 영향을 주지 않는다.
산화는 생성 및 저장 동안 발생할 수 있고 (즉, 산화 조건의 존재 하에) 반응성 산화 종에 의해 직접적으로 또는 산화 스트레스의 이차 부산물과의 반응에 의해 간접적으로 유도되는, 단백질의 공유 변형을 발생시킨다. 산화는 주로 메티오닌 잔기에서 일어나지만, 때로 트립토판 및 유리 시스테인 잔기에서 발생할 수 있다.
디설파이드 결합 스크램블링은 생성 및 염기성 저장 조건 동안 발생할 수 있다. 특정 환경 하에, 디설파이드 결합은 끊어지거나 잘못 형성되어, 쌍을 이루지 않은 시스테인 잔기(-SH)를 생성한다. 이러한 유리 (쌍을 이루지 않은) 설프하이드릴(-SH)은 셔플링(shuffling)을 촉진할 수 있다.
이성질체화는 통상적으로 생성, 정제, 및 저장 (산성 pH에서) 동안 발생하고 아스파르트산이 화학 공정을 통해 이소아스파르트산으로 전환될 때 일반적으로 발생한다.
중쇄 및/또는 경쇄의 N-말단 글루타민은 피로글루타메이트(pGlu)를 형성할 것이다. 대부분의 pGlu 형성은 생산 생물반응기에서 일어나지만, pH 및 공정 온도 및 저장 조건에 따라서, 이것은 비-효소적으로 형성될 수 있다. pGlu 형성은 재조합 mAb에 대한 주요 분해 경로 중 하나로서 고려된다.
C-말단 리신 클립핑은 카르복시펩티다제에 의해 촉매화되는 효소적 반응이고, 보통 재조합 mAb에서 관찰된다. 이러한 공정의 변이체는 하나 또는 둘 모두의 중쇄로부터의 리신의 제거를 포함한다. 리신 클립핑은 생물활성에 영향을 나타내지 않으며 mAb 이펙터 기능에 아무런 영향을 주지 않는다.
이펙터 기능 향상
항원 결합 단백질의 불변 영역 및 FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)을 포함하는 다양한 Fc 수용체 (FcR) 간의 상호작용은 ADCC 및 CDC와 같은 항원 결합 단백질의 이펙터 기능을 매개하는 것으로 여겨진다.
본원에서 사용되는 용어 "이펙터 기능"은 항체 의존성 세포 매개된 세포독성 활성(ADCC), 보체-의존성 세포독성 활성(CDC) 매개된 반응, Fc-매개된 식작용 또는 항체 의존성 세포 식작용 (ADCP) 및 FcRn 수용체를 통한 항체 재사용 중 하나 이상을 나타내는 것을 의미한다.
본 발명의 항원 결합 단백질의 ADCC 또는 CDC 특성은 다양한 방법으로 향상될 수 있다.
잔기 Asn297 상에 특이적 돌연변이 또는 변경된 당화를 함유하는 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 수용체에 대한 결합을 향상시키는 것으로 나타났다. 일부 경우에, 이러한 돌연변이는 또한 ADCC 및 CDC를 향상시키는 것으로 나타났다 (Lazar et al. PNAS 2006, 103; 4005-4010; Shields et al. J Biol Chem 2001, 276; 6591-6604; Nechansky et al. Mol Immunol, 2007, 44; 1815-1817).
본 발명의 한 구체예에서, 상기 돌연변이는 239, 332 및 330 (IgG1)으로부터 선택되는 위치 중 하나 이상, 또는 다른 IgG 아이소형의 동등한 위치에 존재한다. 적합한 돌연변이의 예는 S239D 및 I332E 및 A330L이다. 한 구체예에서, 본원에 기재된 본 발명의 항원 결합 단백질은 위치 239 및 332에서 돌연변이되고, 예를 들어 S239D 및 I332E이거나 추가의 구체예에서 이는 239 및 332 및 330으로부터 선택되는 3개 이상의 위치에서 돌연변이되고, 예를 들어 S239D 및 I332E 및 A330L이다 (EU 인덱스 넘버링).
본 발명의 한 구체예에서, 키메라 중쇄 불변 영역을 포함하는 항원 결합 단백질, 예를 들어 항원 결합 단백질이 향상된 이펙터 기능을 갖도록 IgG3으로부터의 적어도 하나의 CH2 도메인을 갖는 키메라 중쇄 불변 영역을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공되고, 예를 들어, 항원 결합 단백질은 향상된 ADCC 또는 향상된 CDC, 또는 향상된 ADCC 및 CDC 기능을 갖는다. 상기 한 구체예에서, 항원 결합 단백질은 IgG3으로부터의 하나의 CH2 도메인을 포함할 수 있거나 둘 모두의 CH2 도메인이 IgG3에서 유래될 수 있다.
a) 본원에 기재된 분리된 핵산을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계로서, 발현 벡터가 인간 생식계열(germline) IgG1 및 IgG3 서열로부터 유래된 Fc 영역 함유 도메인을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단계; 및
b) 항원 결합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질을 생성시키는 방법이 또한 제공된다.
항원 결합 단백질의 생성을 위한 상기 방법은, 예를 들어, BioWa, Inc. (La Jolla, CA, USA) 및 Kyowa Hakko Kogyo (현재, Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.) Co., Ltd.로부터 이용가능한 COMPLEGENT™ 기법 시스템을 이용하여 수행될 수 있고, 여기서 재조합 숙주 세포는 인간 생식계열 IgG1 alc IgG3 서열로부터 유래된 Fc 영역 함유 도메인을 인코딩하는 핵산 서열이 발현되는 발현 벡터를 포함하여 그러한 키메라 Fc 도메인이 결여된 다른 동일한 항원 결합 단백질에 비해 증가된 향상된 보체 의존성 세포독성 (CDC) 활성을 갖는 항원 결합 단백질을 생성한다. COMPLEGENT™ 기법 시스템의 양태는 WO2007011041 및 US20070148165에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참조로서 포함된다. 대안적인 구체예에서 CDC 활성은 서열 특이적 돌연변이를 IgG 사슬의 Fc 영역에 도입시킴에 의해 증가될 수 있다. 당업자는 또한 다른 적절한 시스템을 인지할 것이다.
본 발명의 대안적인 구체예에서, 항원 결합 단백질이 향상된 이펙터 기능을 갖도록 변경된 당화 프로파일을 지닌 중쇄 불변 영역을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공된다. 예를 들어, 항원 결합 단백질은 향상된 ADCC 또는 향상된 CDC를 갖거나 향상된 ADCC 및 CDC 이펙터 기능 둘 모두를 갖는다. 변경된 당화 프로파일을 지닌 항원 결합 단백질을 생성하는 적합한 방법의 예는 WO2003011878, WO2006014679 및 EP1229125에 기재되어 있고, 이들 모두는 본 발명의 항원 결합 단백질에 이용될 수 있다.
본 발명은 또한,
a) 본원에 기재된 분리된 핵산을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 항원 결합 단백질을 발현시키기에 적합한 조건 하에 배양시키는 단계로서, 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 인코딩하는 FUT8 유전자가 재조합 숙주 세포에서 불활성화된 단계; 및
b) 재조합 숙주 세포에 의해 생성된 항원 결합 단백질을 분리시키는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질을 생성하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한,
a) 본 발명에 따른 항원 결합 단백질을 재조합 숙주 세포에서 발현시키는 단계로서, 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 인코딩하는 FUT8 유전자가 재조합 숙주 세포에서 불활성화된 단계; 및
b) 재조합 숙주 세포에 의해 생성된 항원 결합 단백질을 분리시키는 단계를 포함하는, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질을 생성하는 방법을 제공한다.
항원 결합 단백질을 생성하기 위한 상기 방법은, 예를 들어, FUT8 유전자의 기능성 복사체가 결여된 CHOK1SV 세포가 기능성 FUT8 유전자를 지닌 세포에서 생성된 동일한 모노클로날 항체에 비해 증가된 향상된 항체 의존성 세포 매개된 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는 모노클로날 항체를 생성하는 BioWa, Inc. (La Jolla, CA, USA)로부터 이용가능한 POTELLIGENT™ 기법 시스템을 이용하여 수행될 수 있다. POTELLIGENT™ 기법 시스템의 양태는 US7214775, US6946292, WO0061739 및 WO0231240에 기재되어 있고, 이들 모두는 본원에 참조로서 포함된다. 당업자는 또한 다른 적절한 시스템을 인지할 것이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 비-푸코실화된 항체를 제공한다. 본원에서 "비-푸코실화된" 또는 "아푸코실화된" 항체에 대한 언급은 푸코스 잔기가 없는 Fc의 복합-형 N-글리칸의 트리-만노실 코어 구조를 갖는 항체를 의미한다. 본 발명의 비-푸코실화된 또는 아푸코실화된 항체는 Asn297에 부착된 코어 탄수화물 구조 상에 푸코스를 포함하지 않는다. 이렇게 글리코조작된(glycoengineered) Fc N-글리칸으로부터의 코어 푸코스 잔기가 결여된 항체는 FcγRIIIa 결합능의 향상으로 인해 푸코실화된 등가물보다 강한 ADCC를 나타낼 수 있다.
이러한 변형은 단독으로 이용될 수 있을 뿐만 아니라 이펙터 기능을 추가로 향상시키기 위해 서로 조합하여 이용될 수 있음이 당업자에게 자명할 것이다.
본 발명의 상기 한 구체예에서 돌연변이된 중쇄 불변 영역 및 키메라 중쇄 불변 영역을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공된다. 예를 들어, 항원 결합 단백질은 인간 IgG3으로부터의 적어도 하나의 CH2 도메인 및 인간 IgG1로부터의 하나의 CH2 도메인을 포함하고, IgG1 CH2 도메인은 항원 결합 단백질이 향상된 이펙터 기능을 지니도록 239 및 332 및 330으로부터 선택되는 위치에 하나 이상의 돌연변이를 갖는다 (예를 들어, 돌연변이는 S239D 및 I332E 및 A330L로부터 선택될 수 있다). 이러한 문맥에서, 향상된 이펙터 기능은, 예를 들어, 향상된 ADCC 또는 향상된 CDC를 갖는 것과 동일시될 수 있고, 예를 들어, 이는 향상된 ADCC 및 향상된 CDC를 갖는다. 한 구체예에서, IgG1 CH2 도메인은 돌연변이 S239D 및 I332E를 갖는다.
본 발명의 대안적인 구체예에서, 키메라 중쇄 불변 영역을 포함하고 변경된 당화 프로파일을 갖는 항원 결합 단백질이 제공된다. 상기 한 구체예에서 중쇄 불변 영역은 IgG3으로부터의 적어도 하나의 CH2 도메인 및 IgG1로부터의 하나의 CH2 도메인을 포함하고 푸코스 대 만노스의 비가 0.8:3 또는 그 미만이 되도록 변경된 당화 프로파일을 지니며, 예를 들어 항원 결합 단백질은 상기 항원 결합 단백질이 상기 돌연변이 및 변경된 당화 프로파일이 결여된 면역글로불린 중쇄 불변 영역을 갖는 동등한 항원 결합 단백질에 비해 향상된 이펙터 기능을 갖도록 탈푸코실화되고, 예를 들어 이는 다음 기능들, 향상된 ADCC 또는 향상된 CDC 중 하나 이상을 갖고, 예를 들어 이는 향상된 ADCC 및 향상된 CDC를 갖는다.
대안적인 구체예에서 항원 결합 단백질은 적어도 하나의 인간 IgG3 CH2 도메인 및 인간 IgG1로부터의 적어도 하나의 중쇄 불변 도메인을 갖고, 둘 모두의 IgG CH2 도메인은 본원에 기재된 제한에 따라 돌연변이된다.
본 발명의 한 양태에서,
a) 본원에 기재된 분리된 핵산을 함유하는 발현 벡터를 함유하는 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계로서, 상기 발현 벡터가 인간 생식계열 IgG1 및 IgG3 서열로부터 유래된 Fc 영역 함유 도메인을 인코딩하는 Fc 핵산 서열을 추가로 포함하고, 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 인코딩하는 FUT8 유전자가 재조합 숙주 세포에서 불활성화된 단계; 및
b) 항원 결합 단백질을 회수하는 단계를 포함하는, 본원에 기재된 본 발명에 따른 항원 결합 단백질을 생성하는 방법이 제공된다.
항원 결합 단백질을 생성하기 위한 상기 방법은, 예를 들어, 키메라 Fc 도메인이 결여되고 올리고사카라이드 상에 푸코스를 지닌 다른 동일한 모노클로날 항체에 비해 증가된 ADCC 및 CDC 향상된 활성 둘 모두를 갖는 항원 결합 단백질을 생성하기 위해 POTELLIGENT™ 및 COMPLEGENT™ 기법 시스템을 조합시킨 BioWa, Inc. (La Jolla, CA, USA)로부터 이용가능한 AccretaMab™ 기법 시스템을 이용하여 수행될 수 있다.
또한 본 발명의 다른 구체예에서, 돌연변이된 중쇄 불변 영역 및 키메라 중쇄 불변 영역을 포함하는 항원 결합 단백질이 제공되고, 상기 항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질이 향상된 이펙터 기능을 갖도록 변경된 당화 프로파일을 지니며, 예를 들어 이는 다음 기능들, 향상된 ADCC 또는 향상된 CDC 중 하나 이상을 갖는다. 한 구체예에서 돌연변이는 위치 239 및 332 및 330으로부터 선택되고, 예를 들어 돌연변이는 S239D 및 I332E 및 A330L로부터 선택된다. 추가 구체예에서, 중쇄 불변 영역은 인간 IgG3으로부터의 적어도 하나의 CH2 도메인 및 인간 IgG1로부터의 하나의 Ch2 도메인을 포함한다. 한 구체예에서 중쇄 불변 영역은 푸코스 대 만노스의 비가 0.8:3 또는 그 미만이 되도록 변경된 당화 프로파일을 지니며, 예를 들어 항원 결합 단백질은 동등한 비-키메라 항원 결합 단백질 또는 상기 돌연변이 및 변경된 당화 프로파일이 결여된 면역글로불린 중쇄 불변 영역에 비해 향상된 이펙터 기능을 갖도록 탈푸코실화된다.
반감기 연장
증가된 반감기, 또는 반감기 연장은 항원 결합 단백질, 특히 항체 및 가장 특히 작은 크기의 항체 단편의 생체내 적용에 유용할 수 있다. 상기 단편(Fv, 디설파이드 결합된 Fv, Fab, scFv, dAb)은 일반적으로 신체에서 빠르게 제거된다. 본 발명에 따른 항원 결합 단백질은 증가된 생체내 혈청 반감기 및 결과적으로 체내에서 항원 결합 단백질의 더 긴 잔류, 또는 체류, 기능성 활성 시간을 제공하기 위해 적합화되거나 변형될 수 있다. 적합하게는, 그러한 변형된 분자는 비-적합화된 분자에 비해 감소된 제거율을 갖고 증가된 평균 체류 시간을 갖는다. 증가된 반감기는 치료 분자의 약동학 및 약력학 특성을 개선시킬 수 있고 또한 개선된 환자 순응성에 중요할 수 있다.
어구 "반감기" ("t1/2") 및 "혈청 반감기"는, 예를 들어 자연 메커니즘에 의한 항원 결합 단백질의 분해 및/또는 항원 결합 단백질의 제거 또는 격리로 인해, 본 발명의 항원 결합 단백질의 혈청 (또는 혈장) 농도가 생체내에서 50%만큼 감소하는데 걸리는 시간을 의미한다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 생체내에서 안정화될 수 있고 이들의 반감기는 분해 및/또는 제거 또는 격리에 저항하는 분자 ("반감기 연장 모이어티" 또는 "반감기 연장 분자")에 결합함에 의해 증가될 수 있다. 반감기 연장 전략은, 예를 들어, 문헌["Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives", Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-3-527-32849-9]에서 검토된다. 적합한 반감기 연장은 페길화(PEGylation), 폴리시알릴화, 헤실화(HESylation), 재조합 PEG 미메틱, N-당화, O-당화, Fc 융합, 조작된 Fc, IgG 결합, 알부민 융합, 알부민 결합, 알부민 커플링 및 나노입자를 포함한다.
한 구체예에서, 반감기 연장 모이어티 또는 분자는 폴리에틸렌 글리콜 모이어티 또는 PEG 미메틱이다. 한 구체예에서, 항원 결합 단백질은 폴리에틸렌 글리콜 모이어티에 연결된 본 발명의 단일 가변 도메인을 포함한다(임의로 구성된다)(임의로, 상기 모이어티는 약 20 내지 약 50 kDa, 임의로 약 40 kDa 크기의 선형 또는 분지형 PEG를 갖는다). 더욱 상세한 도메인 항체 및 결합 모이어티의 페길화에 대해서는 WO04081026을 참조한다. 한 구체예에서, 길항제는 PEG에 연결된 도메인 항체 모노머로 구성되며, 도메인 항체 모노머는 본 발명에 따른 단일 가변 도메인이다. 적합한 PEG 미메틱은, 예를 들어 문헌[Chapter 4, pages 63-80, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-3-527-32849-9]에서 검토된다.
항체의 Fc 영역 및 다양한 Fc 수용체 (FcγR) 간의 상호작용은 항체 또는 항체 단편의 식작용 및 반감기/제거를 매개하는 것으로 여겨진다. 신생아 FcRn 수용체는 항체 청소 및 조직을 가로지르는 통과세포외배출 둘 모두에 관여하는 것으로 여겨진다 (문헌[Junghans (1997) Immunol. Res 16: 29-57; and Ghetie et al. (2000) Annu. Rev. Immunol. 18: 739-766]을 참조하라). 한 구체예에서, 반감기 연장 모이어티는 항체로부터의 Fc 영역일 수 있다. 그러한 Fc 영역은 요망되는 특성에 따라 다양한 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 구제 수용체 결합 에피토프는 혈청 반감기를 증가시키기 위해 항체에 혼입될 수 있다. US 5,739,277을 참조하라.
인간 FcRn과 직접 상호작용하는 것으로 확인된 인간 IgG1 잔기는 Ile253, Ser254, Lys288, Thr307, Gln311, Asn434 및 His435를 포함한다. 따라서, 본 섹션에 기재된 임의의 위치에서의 치환은 항체의 증가된 혈청 반감기 및/또는 변경된 이펙터 특성을 가능케 할 수 있다.
Fc 영역으로의 융합에 의한 반감기 연장은, 예를 들어, 문헌[Chapter 9, pages 157-188, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-3-527-32849-9]에서 검토된다.
전형적으로, 생체내 혈청 반감기를 향상시키는 폴리펩티드, 즉 반감기 연장 분자는 자연적으로 생체내 발생하고 유기체(예컨대, 인간)로부터 원치 않는 물질을 제거하는 내인성 메커니즘에 의한 분해 또는 제거에 저항하는 폴리펩티드이다. 전형적으로, 그러한 분자는 자체가 긴 생체내 반감기를 갖는 자연적으로 발생한 단백질이다.
예를 들어, 생체내 혈청 반감기를 향상시키는 폴리펩티드는 세포외 매트릭스로부터의 단백질, 혈액에서 발견되는 단백질, 혈뇌장벽 또는 신경 조직에서 발견되는 단백질, 신장, 간, 근육, 폐, 심장, 피부 또는 골에 국소화된 단백질, 스트레스 단백질, 질병-특이적 단백질, 또는 Fc 수송에 관련된 단백질로부터 선택될 수 있다. 적합한 폴리펩티드는, 예를 들어 WO2008/096158에 기재되어 있다.
상기 접근은 또한 본 발명에 따른 항원 결합 단백질, 예컨대 단일 가변 도메인의 관심 조직으로의 표적화된 전달에 이용될 수 있다. 한 구체예에서 본 발명에 따른 고 친화성 단일 가변 도메인의 표적화된 전달이 제공된다.
한 구체예에서, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질, 예컨대 단일 가변 도메인은 혈청 알부민, 단편, 및 이의 유사체에 연결, 즉 컨쥬게이션되거나 결합될 수 있다. 알부민으로의 융합에 의한 반감기 연장은, 예를 들어 문헌[Chapter 12, pages 223-247, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-3-527-32849-9]에서 검토된다.
적합한 알부민, 알부민 단편 또는 알부민 변이체의 예는, 예를 들어 WO2005077042 및 WO2003076567에 기재되어 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명에 따른 단일 가변 도메인, 폴리펩티드 또는 리간드는 트랜스페린, 단편 및 이의 유사체에 연결, 즉 컨쥬게이션되거나 결합될 수 있다.
한 구체예에서, 반감기 연장은 생체내 반감기를 증가시키는 항원 또는 에피토프를 표적화함에 의해 달성될 수 있다. 항원 결합 단백질의 유체역학적 크기 및 이의 혈청 반감기는 자연 발생 분자에 결합하여 생체내 반감기를 증가시키는 결합 도메인에 본 발명의 항원 결합 단백질을 컨쥬게이션하거나 결합시킴에 의해 증가될 수 있다.
예를 들어, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질은 항-혈청 알부민 또는 항-신생아 Fc 수용체 항체 또는 항체 단편, 예컨대 항-SA 또는 항-신생아 Fc 수용체 dAb, Fab, Fab' 또는 scFv, 또는 항-SA 아피보디 또는 항-신생아 Fc 수용체 아피보디 또는 항-SA 아비머, 또는 비제한적으로 CTLA-4, 리포칼린, SpA, 아피보디, 아비머, GroEl 및 피브로넥틴으로 구성된 군으로부터 선택되는 골격을 포함하는 항-SA 결합 도메인에 컨쥬게이션되거나 연결될 수 있다 (이러한 결합 도메인의 설명에 대해서는 WO2008096158을 참조하라). 컨쥬게이팅은 혈청 알부민에 결합하는 결합 도메인과 같은 결합 도메인에 결합하는 (공유적으로 또는 비공유적으로) 본 발명의 폴리펩티드, dAb 또는 길항제를 포함하는 조성물을 의미한다.
또 다른 구체예에서, 결합 도메인은 알부민 결합 도메인 (ABD)과 같은 폴리펩티드 도메인 또는 알부민에 결합하는 소분자일 수 있다 (예를 들어, 문헌[Chapter 14, pages 269-283 and Chapter 15, pages 285-296, "Therapeutic Proteins: Strategies to Modulate Their Plasma Half-Lives" Edited by Roland Kontermann, Wiley-Blackwell, 2012, ISBN: 978-3-527-32849-9]에서 검토된다).
한 구체예에서, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질 및 항-혈청 알부민 또는 항-신생아 Fc 수용체 항체 또는 항체 단편을 포함하는 융합 단백질이 제공된다.
IgG 항체의 긴 반감기는 FcRn에 대한 이의 결합에 의존하는 것으로 보고된다. 따라서, 불변 영역을 조작함에 의해 상호작용의 pH 의존성을 유지하면서 pH 6.0에서 FcRn에 대한 IgG의 결합 친화성을 증가시키는 치환이 광범하게 연구되고 있다 (Ghetie et al., Nature Biotech. 15: 637-640, 1997; Hinton et al., JBC 279: 6213-6216, 2004; Dall'Acqua et al., 10 J Immunol 117: 1129-1138, 2006). 본 발명의 항원 결합 단백질을 변형시키는 또 다른 수단은 면역글로불린 불변 도메인 또는 FcRn (신생아 Fc 수용체) 결합 도메인의 변형에 의해 그러한 단백질의 생체내 반감기를 증가시키는 것을 포함한다.
성체 포유동물에서, 신생아 Fc 수용체로도 공지된 FcRn은 IgG 아이소형의 항체에 결합하여 분해로부터 IgG 아이소형의 항체를 구제하는 보호성 수용체로서 작용함에 의해 혈청 항체 수준을 유지하는 역할을 담당한다. IgG 분자는 내피 세포에 의해 세포내섭취되고(endocytosed), 만약 이들이 FcRn에 결합하는 경우, 순환으로 재활용된다. 대조적으로, FcRn에 결합하지 않은 IgG 분자는 세포로 들어가서 이들을 분해시키는 리소솜 경로에 표적화된다.
신생아 FcRn 수용체는 항체 제거 및 조직을 가로지르는 통과세포외배출 둘 모두에 관여하는 것으로 여겨진다 (문헌[Junghans R.P (1997) Immunol.Res 16. 29-57 and Ghetie et al (2000) Annu.Rev.Immunol. 18, 739-766]을 참조하라). 인간 FcRn과 직접 상호작용하는 것으로 확인된 인간 IgG1 잔기는 Ile253, Ser254, Lys288, Thr307, Gln311, Asn434 및 His435를 포함한다. 본 섹션에 기재된 임의의 이러한 위치에서의 스위치는 본 발명의 항원 결합 단백질의 증가된 혈청 반감기 및/또는 변경된 이펙터 특성을 가능케 할 수 있다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 FcRn에 대한 불변 도메인 또는 이의 단편의 친화성을 증가시키는 아미노산 변형을 가질 수 있다. 치료용 및 진단용 IgG들 및 다른 생물활성 분자의 반감기를 증가시키는 것은 이러한 분자의 양 및/또는 투여 빈도를 감소시키는 것을 포함하는 많은 이점을 지닌다. 한 구체예에서, 따라서 하나 이상의 상기 아미노산 변형을 갖는 IgG 불변 도메인의 전부 또는 일부 (FcRn 결합 부분) 및 그러한 변형된 IgG 불변 도메인에 컨쥬게이션된 비-IgG 단백질 또는 비-단백질 분자를 포함하는 본원에 제공된 본 발명에 따른 항원 결합 또는 융합 단백질이 제공되며, 이 때 변형된 IgG 불변 도메인의 존재는 항원 결합 단백질의 생체내 반감기를 증가시킨다.
PCT 공개 WO 00/42072는 변경된 FcRn 결합 친화성을 갖는 변이체 Fc 영역을 포함하는 폴리펩티드를 기재하며, 상기 폴리펩티드는 Fc 영역의 아미노산 위치 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 386, 388, 400, 413, 415, 424,433, 434, 435, 436, 439, 및 447 중 임의의 하나 이상에 아미노산 변형을 포함하고, 이 때 Fc 영역에서 잔기의 넘버링은 EU 인덱스의 넘버링이다 (Kabat et al).
PCT 공개 WO 02/060919 A2는 야생형 IgG 불변 도메인에 비해 하나 이상의 아미노산 변형을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함하는 변형된 IgG를 기재하며, 변형된 IgG는 야생형 IgG 불변 도메인을 갖는 IgG의 반감기에 비해 증가된 반감기를 갖고, 여기서 하나 이상의 아미노산 변형은 위치 251, 253, 255, 285-290, 308-314, 385-389, 및 428-435 중 하나 이상에 존재한다.
Shields 등 (2001, J Biol Chem; 276:6591-604)은 인간 IgG1 항체의 Fc 영역에서 잔기를 변경시키기 위해 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 이용한 후 인간 FcRn에 대한 결합을 평가하였다. 알라닌으로 변화될 때 FcRn에 대한 결합을 효과적으로 폐지한 위치는 I253, S254, H435, 및 Y436을 포함한다. 다른 위치는 하기와 같은 결합에서 덜 뚜렷한 감소를 보였다: E233-G236, R255, K288, L309, S415, 및 H433. 여러 아미노산 위치는 알라닌으로 변화될 때 FcRn 결합에서 개선을 나타내었다; 그 중 현저한 것은 P238, T256, E272, V305, T307, Q311, D312, K317, D376, E380, E382, S424, 및 N434이다. 많은 다른 아미노산 위치가 FcRn 결합에서 약간의 개선 (D265, N286, V303, K360, Q362, 및 A378)을 나타내거나 변화가 없었다 (S239, K246, K248, D249, M252, E258, T260, S267, H268, S269, D270, K274, N276, Y278, D280, V282, E283, H285, T289, K290, R292, E293, E294, Q295, Y296, N297, S298, R301, N315, E318, K320, K322, S324, K326, A327, P329, P331, E333, K334, T335, S337, K338, K340, Q342, R344, E345, Q345, Q347, R356, M358, T359, K360, N361, Y373, S375, S383, N384, Q386, E388, N389, N390, K392, L398, S400, D401, K414, R416, Q418, Q419, N421, V422, E430, T437, K439, S440, S442, S444, 및 K447).
가장 뚜렷한 효과는 FcRn에 대해 개선된 결합을 지닌 조합 변이체에서 발견되었다. pH 6.0에서, E380A/N434A 변이체는, E380A의 경우 2배 및 N434A의 경우 3.5배와 비교하여, 천연 IgG1에 비해 FcRn에 대해 8배 이상 더 양호한 결합을 나타내었다. 여기에 T307A을 첨가하는 것은 천연 IgG1에 비해 결합에 있어서 12배 개선을 초래하였다. 한 구체예에서 본 발명의 항원 결합 단백질은 E380A/N434A 돌연변이를 포함하고 FcRn에 대한 증가된 결합을 지닌다.
Dall'Acqua 등 (2002, J Immunol.;169:5171-80)은 무작위 돌연변이유발 및 마우스 FcRn에 대한 인간 IgG1 힌지-Fc 단편 파지 디스플레이 라이브러리의 스크리닝을 기재하였다. 이들은 위치 251, 252, 254-256, 308, 309, 311, 312, 314, 385-387, 389, 428, 433, 434, 및 436의 무작위 돌연변이유발을 기재하였다. IgG1-인간 FcRn 복합 안정성에서의 주요 개선은 Fc-FcRn 계면에 걸친 밴드에 위치한 잔기 (M252, S254, T256, H433, N434, 및 Y436)를 치환함에 있어서 그리고 덜한 정도로 V308, L309, Q311, G385, Q386, P387, 및 N389와 같은 주변부에서의 잔기의 치환에 있어서 발생한다. 인간 FcRn에 가장 높은 친화성을 지닌 변이체는 M252Y/S254T/T256E 및 H433K/N434F/Y436H 돌연변이를 조합시킴에 의해 수득되었고 야생형 IgG1에 비해 친화성에서 57배 증가를 나타내었다. 상기 돌연변이된 인간 IgG1의 생체내 거동은 시노몰구스 원숭이에서 야생형 IgG1에 비해 혈청 반감기의 거의 4배 증가를 나타내었다.
따라서 본 발명은 FcRn에 최적화된 결합을 갖는 항원 결합 단백질의 변이체를 제공한다. 바람직한 구체예에서, 항원 결합 단백질의 상기 변이체는 상기 항원 결합 단백질의 Fc 영역에 적어도 하나의 아미노산 변형을 포함하고, 상기 변형은 상기 부모 폴리펩티드에 비해 Fc 영역의 226, 227, 228, 230, 231, 233, 234, 239, 241, 243, 246, 250, 252, 256, 259, 264, 265, 267, 269, 270, 276, 284, 285, 288, 289, 290, 291, 292, 294, 297, 298, 299, 301, 302, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 315, 317, 320, 322, 325, 327, 330, 332, 334, 335, 338, 340, 342, 343, 345, 347, 350, 352, 354, 355, 356, 359, 360, 361, 362, 369, 370, 371, 375, 378, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 390, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401 403, 404, 408, 411, 412, 414, 415, 416, 418, 419, 420, 421, 422, 424, 426, 428, 433, 434, 438, 439, 440, 443, 444, 445, 446 및 447로 구성된 군으로부터 선택되며, Fc 영역에서 아미노산의 넘버링은 EU 인덱스의 카바트의 넘버링이다.
본 발명의 추가의 양태에서, 변형은 M252Y/S254T/T256E이다.
추가로, 다양한 공보는 FcRn-결합 폴리펩티드를 분자에 도입시킴에 의해 (WO 97/43316; U.S. Patent N° 5,869,046; U.S. Patent N° 5,747,035; WO 96/32478; WO 91/14438) 또는 분자를 FcRn-결합 친화성은 보존되지만 다른 Fc 수용체에 대한 친화성은 크게 감소한 항체와 융합시키거나 (WO 99/43713) 항체의 FcRn 결합 도메인과 융합시킴에 의해 (WO 00/09560; U.S. Patent N°4,703,039) 반감기가 변형된 생리학적 활성 분자를 수득하는 방법을 기재한다.
비록 불변 영역에서의 치환이 치료용 IgG 항체의 기능을 현저하게 개선시킬 수 있으나, 엄격하게 보존된 불변 영역에서의 치환은 인간에서 면역원성의 발생 위험이 있고 (Presta, supra, 2008; De Groot and Martin, Clin Immunol 131: 189-201, 2009) 매우 다양한 가변 영역 서열에서의 치환은 덜 면역원성일 수 있다. 가변 영역에 관한 레포트는 항원에 대한 결합 친화성을 개선시키기 위한 CDR 잔기의 조작 (Rothe et al., Expert Opin Biol Ther 6: 177-187,2006; Bostrom et al., Methods Mol Bioi 525: 353-376,2009; Thie et al., Methods Mol Biol 525: 309-322, 2009) 및 안정성을 개선시키고 (Worn and Pluckthun, J Mol Biol 305: 989-1010, 2001; Ewert et al., Methods 34: 184-199, 2004) 면역원성 발생 위험을 감소시키기 위한 (De Groot and Martin, supra, 2009; Jones et al., Methods Mol Biol 525: 405-423, xiv, 2009) CDR 및 프레임워크 잔기에 대한 조작을 포함한다. 보고된 대로, 항원에 대한 개선된 친화성은 랜덤화된 라이브러리의 파지 또는 리보솜 디스플레이를 이용한 친화성 성숙에 의해 달성될 수 있다.
개선된 안정성은 서열- 및 구조-기반 합리적 설계로부터 합리적으로 얻을 수 있다. 감소된 면역원성 위험 (탈면역화)은 다양한 인간화 방법 및 T-세포 에피토프의 제거에 의해 달성될 수 있는데, 이는 인 실리코 기법을 이용하여 예측될 수 있거나 시험관내 검정에 의해 결정될 수 있다. 추가로, 가변 영역은 더 낮은 pI로 조작되었다. 유사한 FcRn 결합에도 불구하고 야생형 항체에 비해 이러한 항체에서 보다 긴 반감기가 관찰되었다. 항원에 결합할 때 항원-매개된 제거 메커니즘이 일반적으로 항체를 분해하는 경우, 항체 및/또는 항원 반감기, 예컨대 IgG2 항체 반감기를 변형시키기 위해 pH 의존적 항원 결합하는 항체를 조작하거나 선별하는 것은 단축될 수 있다. 유사하게, 항원:항체 복합체는 항원의 반감기에 영향을 미쳐, 전형적인 분해 공정으로부터 항원을 보호함에 의해 반감기를 연장시키거나, 항체-매개된 분해를 통해 반감기를 단축시킬 수 있다. 한 구체예는 pH5.5/pH 7.4 또는 pH 6.0/pH 7.4에서의 KD 비가 2 이상이 되도록 엔도솜 pH (즉, pH 5.5-6.0)에 비해 pH 7.4에서 항원에 대해 더 높은 친화성을 갖는 항체에 관한 것이다. 예를 들어 항체의 약동학 (PK) 및 약력학 (PD) 특성을 향상시키기 위해, 히스티딘을 CDR 잔기에 도입시킴에 의해 항체에 대한 pH-민감성 결합을 조작할 수 있다.
약학적 조성물
본 발명의 항원 결합 단백질은 환자에게 투여되기 전에 일반적으로 약학적 조성물로 제형화될 것이나 반드시 필수적인 것은 아니다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명에 따른 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
상기 약학적 조성물을 제조하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다 (예컨대, Remingtons Pharmaceutical Sciences, 16th edition (1980) Mack Publishing Co and Pharmaceutical Biotechnology; Plenum publishing corporation; Volumes 2, 5 and 9).
본 발명의 항원 결합 단백질은 임의의 편리한 방식으로의 투여를 위해 제형화될 수 있다. 약학적 조성물은, 예를 들어 주사 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다 (예는, 비제한적으로, 정맥내, 복강내, 피내, 피하, 근내 및 문맥내를 포함한다). 한 구체예에서, 조성물은 피하 주사에 적합하다.
약학적 조성물은 국소 투여 (피내(epicutaneous), 흡입, 비내 또는 안내 투여를 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아님) 또는 장관 투여 (경구 또는 직장 투여를 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아님)에 적합할 수 있다.
약학적 조성물은 0.0001 mg/kg 내지 10 mg/kg의 항원 결합 단백질, 예를 들어 0.1 mg/kg 내지 5 mg/kg의 항원 결합 단백질을 포함할 수 있다. 대안적으로, 조성물은 1.0 mg/kg 내지 3.0 mg/kg을 포함할 수 있다.
약학적 조성물은 본 발명의 항원 결합 단백질 외에, 하나 이상의 다른 치료제를 포함할 수 있다. 본 발명의 항원 결합 단백질과 조합될 수 있는 추가의 치료제는 항-CTLA-4 (예컨대 이필리무맙(ipilimumab) 및 트레멜리무맙(tremelimumab)), 항-TIM-3, 항-OX40, 항-OX40L, 항-PD1 (예컨대 니볼루맙(nivolumab), 람브롤리주맙(lambrolizumab)), 항-PD1L, 항-GITR, 항-IL-5 (예컨대 메폴리주맙(mepolizumab)), 항-B-림프구 세포 활성화 (BLyS) 인자 (예컨대 벨리무맙(belimumab)), 항-GITRL, 항-IL-7, 항-IL-7R, 항-CD20, 항-CCL20, 항-TNFα, 항-OSM 및 항-IL-6 항체, 뿐만 아니라 JAK의 억제제, CCR9, RIP 키나제, BET 단백질, RORγ1 및 티오퓨린도 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다.
조합 치료를 위한 본 발명의 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 다른 치료제는 동일한 조성물에 함께 제형화될 수 있거나 별도의 조성물에 제공될 수 있다. 별도로 제공된 조성물들은 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
사용 방법
본원에 기재된 항원 결합 단백질은 치료에서의 용도를 지닐 수 있다. 림프구 활성화 유전자 3 (LAG-3)에 결합하여 LAG-3+ 활성화 T 세포의 고갈을 일으키는 본 발명의 항원 결합 단백질은 병원성 T 세포의 개입과 관련된 질환, 예컨대 자가면역 질환, 감염성 질환, 알레르기성 질환 및 암의 치료 또는 예방에서 용도를 지닐 수 있다.
항원 결합 단백질이 잠재적으로 유익한 효과를 갖는 질병 상태의 예는 비제한적으로 건선, 염증성 장 질환 (예를 들어, 크론병 및/또는 궤양성 대장염), 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, 전신홍반루푸스 (SLE), 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 자가면역 간염, 포도막염(uveitis), 타입 I 당뇨병, 강직성 척추염(ankylosing spondylitis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis), 그레이브병(Grave's disease), 이식편대숙주병(graft versus host disease), 장기 이식 거부의 치료 및/또는 예방, 예컨대 신장 또는 간 이식 거부, 원발 경화성 담관염(primary sclerosing cholangitis), 사르코이드증(sarcoidosis), 혈관염(vasculitis), 신염(nephritis), 자가면역 혈손판감소성자반병(autoimmune thrombocytopenic purpura), 경피증(systemic sclerosis), 셀리악병(celiac disease), 항-인지질 항체 증후군, 원형 탈모증(alopecia areata) 및 중증 근무력증(myasthenia gravis)을 포함하는 자가면역 질환; 비제한적으로 C형 간염, B형 간염, HIV, 결핵(tuberculosis) 및 말라리아(malaria)를 포함하는 감염성 질환; 및 비제한적으로 천식(asthma), 아토피 피부염(atopic dermatitis) 및 COPD를 포함하는 알레르기 질환을 포함한다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 또한 난소암, 흑색종 (예컨대 전이성 악성 흑색종), 전립선암, 대장암 (예컨대 결장암 및 소장암), 위암, 식도암, 유방암, 폐암, 신장암 (예컨대 투명 세포 암종), 췌장암, 자궁암, 간암, 방광암, 자궁경부암, 구강암, 뇌암, 고환암, 피부암, 갑상선암, 및 골수종, 만성 및 급성 백혈병을 포함하는 혈액학적 악성 종양을 비제한적으로 포함하는 암의 치료에서 용도를 지닐 수 있다.
당업자는 본원에서 "치료" 또는 "요법"에 대한 언급이 질환에 따라 확립된 질환의 치료 외에 예방까지 확대될 수 있음을 이해할 것이다.
따라서 본 발명의 추가의 양태로서 요법에 사용하기 위한 본 발명의 항원 결합 단백질이 제공된다.
또한 이에 따라 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, SLE, 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 궤양성 대장염 또는 자가면역 간염의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항원 결합 단백질이 제공된다.
추가의 구체예에서, 건선의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항원 결합 단백질이 제공된다.
추가의 구체예에서, 크론병의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항원 결합 단백질이 제공된다.
추가의 구체예에서, 궤양성 대장염의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항원 결합 단백질이 제공된다.
건선, 크론병, 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, 전신홍반루푸스 (SLE), 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 궤양성 대장염 또는 자가면역 간염을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항원 결합 단백질의 용도가 추가로 제공된다.
추가의 구체예에서, 건선을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항원 결합 단백질의 용도가 제공된다.
추가의 구체예에서, 크론병을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항원 결합 단백질의 용도가 제공된다.
추가의 구체예에서, 궤양성 대장염을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 본 발명의 항원 결합 단백질의 용도가 제공된다.
인간 또는 동물 피검체를 치료하는 방법이 추가로 제공되며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다.
치료적 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 투여하는 것을 포함하는, 인간 또는 동물 피검체에서 병원성 T 세포의 개입과 관련된 질환을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
치료적 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 이를 필요로 하는 인간 피검체에 투여하는 것을 포함하는, 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, 전신홍반루푸스 (SLE), 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 궤양성 대장염 또는 자가면역 간염을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
추가의 구체예에서, 치료적 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 이를 필요로 하는 인간 피검체에 투여하는 것을 포함하는, 건선을 치료하는 방법이 제공된다.
추가의 구체예에서, 치료적 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 이를 필요로 하는 인간 피검체에 투여하는 것을 포함하는, 크론병을 치료하는 방법이 제공된다.
추가의 구체예에서, 치료적 유효량의 본 발명의 항원 결합 단백질을 이를 필요로 하는 인간 피검체에 투여하는 것을 포함하는, 궤양성 대장염을 치료하는 방법이 제공된다.
본원에서 사용되는 어구 "치료적 유효량"은 질환의 하나 이상의 증상을 개선 또는 감소시키거나, 질환을 예방 또는 치유하는데 필요한 본 발명의 항원 결합 단백질의 양이다.
실시예
하기 실시예는 본 발명을 예시하며, 제한하는 것이 아니다.
실시예 1: 정제된 항-LAG-3 인간화 항체의 Biacore™ SPR 분석
WO 2008/132601에 기재된 A9H12 (IMP731)는 뮤린 CDR을 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 인간 억셉터 프레임워크 상에 그래프팅시킴에 의해 인간화되었다. 인간에서 뮤린으로의 복귀 돌연변이 및 CDR 변형을 함유하는 다수의 중쇄 및 경쇄 인간화 항-LAG-3 변이체가 제조되었다. 중쇄 변이체는 H0에서 H8, 및 J0, J7에서 J13으로 넘버링되었고 경쇄 변이체는 L0에서 L10 및 M0에서 M1로 넘버링되었다. 중쇄 및 경쇄 인간화 항_LAG-3 변이체의 모든 조합물을 함유하는 조직 배양 상청액을 Fc-태깅된 재조합 가용성 LAG-3 (IMP321)와의 결합에 대해 분석하였다. 데이터를 Biacore™ 4000 소프트웨어에 고유한 1:1 모델을 사용하여 분석하였다. 항체는 계산된 친화성에 기반하여 그리고 또한 키메라 항체 IMP731와 결합 센서그램의 시각적 비교에 의해 선택되었다. IMP321에 대해 동등하거나 개선된 결합을 나타낸 총 54개의 작제물이 Biacore™ 3000을 이용한 재분석을 위해 확인되었다. 데이터를 BiaCore 3000 분석 소프트웨어에 고유한, 1:1 및 2가 모델 둘 모두에 핏팅시켰고, 최대 결합에서 결합 곡선을 표준화하고 IMP731에 대해 오프-레이트를 시각적으로 비교함에 의해 결합 데이터를 비교하였다. 이는 IMP731에 비해 개선된 오프-레이트를 나타내는 항체가 식별될 수 있게 하였다. IMP731에 비해 재조합 sLAG-3에 대한 동등하거나 개선된 결합 동역학을 기준으로 하여 총 18개의 인간화 항-LAG-3 항체가 추가 분석을 위해 선택되었다. 이러한 18개의 인간화 항체는 재발현되고 다음과 같이 분석되었다:
항-LAG-3 인간화 항체를 다음과 같이 HEK 293 6E 세포에서 발현시키고 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다:
100ml 규모 HEK 293 6E 발현
표 3에서 확인된 인간화 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 발현 플라스미드를 HEK 293 6E 세포로 일시적으로 공-트랜스펙션시키고 100ml 규모로 발현시켜 항체를 생성하였다.
인간화 항체의 정제
발현된 항체 분자를 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 단백질 A 세파로스 비드 (GE Healthcare Cat No 17-5280-04)를 세포 배양 상청액에 첨가하고 실온에서 30-60분 동안 혼합시켰다. 그 후 단백질 A 세파로스 비드를 원심분리시키고 PBS에서 세척하였다. 이어서 혼합물을 10ml 일회용 컬럼 (Pierce Cat No: 29924)에 첨가하고 PBS가 배수되게 하였다. 컬럼을 10ml의 PBS로 3회 세척한 후 IgG 용리 완충제 (Pierce Cat No: 21009)로 항체를 용리시켰다. 용리된 항체를 1M Trizma® 하이드로클로라이드 완충제(T2819)를 이용하여 즉시 중화시킨 다음 Vivaspin 6 mwco 5000 컬럼 (Cat. No.: FDP-875-105D)을 이용하여 PBS로 완충제 교환하였다. 수율은 280nm에서 흡광도 측정에 의해 결정되었다. 정제된 샘플 중 응집된 단백질의 수준을 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정하였다.
결합 동역학
sLAG-3 분자에 대한 정제된 항체의 결합 동역학은 Biacore™ 3000을 이용하여 SPR에 의해 평가되었다. 염소 항-인간 카파 항체 (Southern Biotech, Catalogue No. 2060-01)를 일차 아민 커플링에 의해 CM5 칩 상에 고정시켰다. 인간화 항-LAG3 항체는 이러한 표면 위에 포집되었고 LAG3-Ig 분자 IMP321 (Chrystelle Brignone, Caroline Grygar, Manon Marcu, Knut Schakel, Frederic Triebel, The Journal of Immunology, 2007, 179: 4202-4211)는 결합 곡선을 이중 참조하는데 사용되는 완충제 주입 (즉 0nM)과 함께 64nM의 분석물로서 사용되었다. 재생은 10mM 글리신, pH1.5를 이용하였다. 진행은 진행 완충제로서 HBS-EP를 이용하여 25℃에서 Biacore™ 3000 상에서 수행되었다. 센서그램은 센서그램 프로파일의 육안 검사에 의해 IMP731에 비해 최대 결합 및 오프-레이트에서의 결합에 대해 표준화되었다.
결과는, 정제된 인간화 항-LAG-3 항체가 3 그룹으로 분류될 수 있음을 나타낸다; 키메라 IMP731 보다 IMP321과의 결합에 더 양호한 것으로 나타난 인간화 변이체를 갖는 그룹 1, IMP731과 매우 유사한 방식으로 결합하는 것으로 나타난 변이체를 갖는 그룹 2 및 IMP731 보다 나쁜 결합을 나타낸 변이체를 갖는 그룹 3.
10개의 인간화 변이체는 그룹 1에 속하며 Biacore™ 센서그램의 육안 검사에 의해 IMP731과 비교시 개선된 (즉 감소된) 오프-레이트를 나타낸다. 이러한 모든 분자는 L7 경쇄를 함유하였고, 상기 경쇄는 경쇄 CDR1의 위치 27e에 글리신에서 프롤린으로의 치환을 함유한다. 이러한 데이터는 위치 27e의 프롤린이 다수의 인간화 중쇄와 쌍을 이룰 때 인간화 항-LAG-3 항체의 IMP321에 대한 오프-레이트를 개선시킴을 나타낸다.
시험된 나머지 항체 중에서, 4개의 분자는 그룹 2에 속하며 키메라 IMP731 항체와 유사한 오프-레이트를 갖는 한편, 4개의 다른 분자는 그룹 3에 속하며 IMP731 보다 좋지 않은 오프-레이트를 나타낸다. 표 3은 IMP731에 비해 상기 분자의 대략적인 순위를 제공한다. H5L7은 이러한 실험에서 Biacore™ 센서그램의 육안 검사에 의해 최선의 오프-레이트 (즉, 가장 낮음)를 나타낸다.
표 3: IMP731과 오프-레이트의 비교
Figure pct00003
실시예 2: Biacore™T100을 이용한 재조합 인간 LAG-3-His와의 결합에 대한 야생형 푸코실화된 및 아푸코실화된 인간화 항-LAG-3 항체의 결합 분석
아푸코실화된 항체 H5L7BW는 BioWa POTELLIGENT® (FUT8 녹아웃 CHO) 세포주에서 H5L7을 인코딩하는 플라스미드의 발현에 의해 생성되었다. POTELLIGENT® 기법을 이용하여 생성된 아푸코실화된 항체는 FcγRIIIa (CD16)에 대한 증가된 친화성을 통해 동등한 고도로-푸코실화된 통상적인 항체에 비해 증가된 항체 의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC)을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
야생형 푸코실화된 및 아푸코실화된 항체는 Biacore™ T100 (GE Healthcare™)을 이용하여 C-말단 His6을 지닌 재조합 인간 LAG-3 ECD (SEQ ID NO: 51)에 결합하는 이들의 능력에 대해 비교되었다. 단백질 A를 일차 아민 커플링에 의해 CM5 칩에 고정시켰다. 그 후 이러한 표면을 이용하여 인간화 항체를 포집하였다. 그 후 재조합 인간 LAG-3 ECD-His6을 포집된 항체 위에서 32, 8, 2, 0.5 및 0.125nM으로 통과시키고 50mM NaOH를 이용하여 재생시켰다. 결합 곡선을 완충제 주입 (즉 0nM)으로 이중 참조하고 데이터를 1:1 모델을 이용하여 T100 분석 소프트웨어에 핏팅시켰다. 25℃에서, 진행 완충제로서 HBS-EP를 이용하여 진행시켰다.
이러한 동역학 데이터의 통계적 유의성을 조사하기 위해, 상기 실험을 동일한 배치의 4개 항체 및 키메라 대조군으로 3회 반복하였다. KD, ka 및 kd 파라메터는 통계적 분석을 분리하기 전에 각각 로그 (base 10) 전환되었다. 각각의 파라메터에 대해, 분산의 혼합 모델 분석('Anova')은 실행(Run)(랜덤 블록 효과) 및 항체에 대한 항을 포함하는 전환된 데이터에 대해 수행되었다.
Anova로부터, 기하 평균은 각 평균에 대한 통계적으로 그럴듯한 범위 (95% 신뢰 구간)와 함께, 각각의 항체에 대해 예측되었다. 항체의 계획된 비교는 Anova 내에서 수행되었다. 비교는, 다시 95% 신뢰 구간 및 p 값으로, 비교된 2개의 항체의 비로서 제시된다. 상기 비는 또한 배수 변화로서 해석될 수 있고, 예컨대 0.1의 비는 90% 감소에 해당한다.
기하 평균은 표 4에 제시된, 결합 친화성 (KD)에 대해 각각의 인간화 항체 및 키메라 대조군 IMP731에 대해 유래되었다. H5L7의 경우, 평균 KD는 IMP731와 비교시 p<0.0001로 92%의 현저한 감소인 (즉 10배 감소) 0.2075nM였다. IMP731은 2.76nM의 평균 KD를 나타내었다. 아푸코실화된 H5L7BW는 유의한 차이 없이 (p=0.1790), 0.2179nM의 기하 KD로, 푸코실화된 H5L7와 동등한 결합을 나타낸다.
IMP731에 비해 H5L7에서 관찰된 친화성의 개선은 표 5에 도시된, LAG-3-ECD-His6에 대한 항체의 오프-레이트의 차이에 의해 주로 유도된다. IMP731에 비해 H5L7의 kd에 있어서 통계적으로 고도로 현저한 약 85% 감소 (즉 거의 10배 감소)가 존재한다. 아푸코실화된 H5L7BW 및 H5L7 간에 현저한 차이는 없다 (p=0.4408).
표 4: 재조합 인간 LAG-3-His에 결합하는 푸코실화된 및 아푸코실화된 항-LAG-3 변이체의 KD에 대한 통계적 평가
Figure pct00004
표 5: 재조합 인간 LAG-3-His에 결합하는 푸코실화된 및 아푸코실화된 항-LAG-3 변이체의 kd에 대한 통계적 평가
Figure pct00005
실시예 3: ProteOn™을 이용한 키메라 항체 IMP731에 비해 항-LAG-3 인간화 변이체의 LAG-3-His 결합 에피토프의 평가
IMP731이 결합하는 LAG-3 에피토프가 인간화시에 보존되었는 지를 평가하기 위해 에피토프 결합 실험을 H5L7로 수행하였다. 또한, 푸코실화된 및 아푸코실화된 인간화 변이체의 결합 에피토프도 비교하였다.
에피토프 결합은 ProteOn™ XPR36 (BioRad™) 바이오센서 기계를 이용하여, 항-LAG-3 항체가 ProteOn™ 칩 표면 상에 포집된 항체와 복합체화된 LAG-3-His에 동시에 결합할 수 있는 지를 평가함에 의해 평가되었다. 본 검정에서 IMP731 및 비-경쟁적 뮤린 항체 17B4가 대조군으로서 이용되었다.
시험되는 항체는 Ez-Link-설포-NHS 바이오티닐화 키트를 이용하여 바이오티닐화되었다. 각각의 바이오티닐화된 항체는 수직 주입을 이용하여 뉴트라비딘 NLC 칩 상의 분리된 흐름 세포에 포집되었다. 항체 포집 후에, 표면을 2.5mg/ml의 바이오시틴으로 차단하였다. ProteOn 실행 소프트웨어에 고유한 공-주입 설비를 이용하여, LAG-3 ECD-His6을 100nM의 커플링된 항체 위에 주입한 다음, 100nM의 바이오티닐화되지 않은 항체 위에 주입하였고, 두 주입은 수평이어서 LAG-3-His 및 항체는 6개 모두의 뉴트라비딘 포집된 항체를 가로지른다. 상기 검정은 ProteOn XPR36 단백질 상호작용 어레이 시스템 상의 HBS-EP에서 25℃로 진행되었다.
데이터 분석은 LAG-3-His 주입 후에 취해진 레포트 포인트 및 바이오티닐화되지 않은 항체 분석물 주입 후에 취해진 레포트 포인트를 이용하여 수행되었다. 전체 반응은 LAG-3 ECD-His6 결합으로 나타난 반응에서 항체 결합으로 나타난 반응을 공제하여 계산되었다. 양성 공명 단위 (RU) 값은 주입된 항체 분석물이 뉴트라비딘 포집 표면 상의 바이오티닐화된 항체와 복합체화된 LAG-3 ECD-His6에 결합하였음을 의미하고, 이는 비-경쟁적 에피토프에서의 결합을 나타낸다. 반응이 없거나 음성 반응은 주입된 항체 분석물이 뉴트라비딘 포집 표면 상의 바이오티닐화된 항체와 복합체화된 LAG-3 ECD-His6에 결합하지 않았음을 의미하고, 이는 항체가 경쟁적 에피토프에서 결합함을 나타낸다.
항-LAG-3 인간화 변이체 (푸코실화된 및 아푸코실화된)는 IMP731과 복합체화된 인간 LAG-3 ECD-His6에 결합할 수 없고, 이는 LAG-3 ECD-His6에 대한 에피토프가 공유되어 보존됨을 나타낸다. 뮤린 항체 17B4는 IMP731과 복합체화된 인간 LAG-3 ECD-His6에 결합할 수 있고, 이는 이러한 항체가 LAG-3 ECD-His6 결합에 대해 IMP731과 비-경쟁적임을 입증한다. 역으로, 인간화 항체는 17B4와 복합체화된 인간 LAG-3 ECD-His6에 결합할 수 있다.
상기 결과는 본 실험에서 시험된 키메라 IMP731 및 키메라 IMP731의 인간화 변이체 간에 에피토프에서 아무런 변화가 없었음을 확인시켜 준다. 상기 실험은 또한 결합에 대해 푸코실화된 항체와 아푸코실화된 항체 간에 차이가 없음을 나타낸다.
실시예 4: Biacore™T100을 이용하여 재조합 시노몰구스 마카쿠 및 개코원숭이 LAG-3 ECD-His6에 대한 항-LAG-3 인간화 항체의 결합 분석
시노몰구스 마카쿠 (cyno) 및 개코원숭이 둘 모두의 재조합 LAG-3 ECD-His6 (각각 SEQ ID NO: 52 및 53)에 대한 항-LAG-3 인간화 항체의 결합 교차 반응성을 Biacore™ T100 (GE HealthcareTM)을 이용하여 평가하였다.
단백질 A를 일차 아민 커플링에 의해 CM5 칩 상에 고정시켰다. 그 후 이러한 표면을 이용하여 인간화 항체를 포집하였다. 이어서 사내 생산된 재조합 시노몰구스 마카쿠 및 개코원숭이 LAG-3 ECD-His6을 포집된 항체 위로 통과시키고 50mM NaOH를 이용하여 재생시켰다. 16, 4, 1, 0.25 및 0.0625nM의 LAG-3 ECD-His6을 위로 통과시켰다. 결합 곡선을 완충제 주입 (즉 0nM)으로 이중 참조하고, 데이터를 1:1 모델을 이용하여 T100 분석 소프트웨어에 핏팅시켰다. 37℃에서 진행 완충제로서 HBS-EP를 이용하여 진행시켰다.
H5L7, H5L7BW 및 IMP731은 유사한 친화성으로 둘 모두의 시노몰구스 마카쿠 및 개코원숭이 재조합 LAG-3 ECD-His6에 결합한다. 데이터는 분리된 실험으로부터 생성되었으나, 키메라 항체 IMP731이 실험 사이에서 대조군으로서 사용되었다.
이러한 데이터는 둘 모두의 비-인간 영장류 재조합 LAG-3 오르톨로그가 인간 재조합 LAG-3 ECD-His6 (SEQ ID NO: 51)에 비해 10배 개선된 친화성으로 H5L7 유래된 항체에 결합함을 나타낸다 (H5L7: 인간 LAG-3 0.208nM, cyno LAG-3 0.017nM 및 개코원숭이 LAG-3 0.022nM; H5L7BW 인간 LAG-3 0.218nM, cyno LAG-3 0.021nM 및 개코원숭이 LAG-3 0.024nM). 한편 둘 모두의 비-인간 영장류 재조합 LAG-3 오르톨로그는 인간 재조합 LAG-3 ECD-His6 (SEQ ID NO: 51)에 비해 약 100배 개선된 친화성으로 IMP731 유래된 항체에 결합한다 (IMP731: 인간 LAG-3 2.76nM, cyno LAG-3 0.021nM 및 개코원숭이 LAG-3 0.019nM).
실시예 5: 인간 LAG-3 발현 EL4 세포, 및 인간 일차 활성화 CD3+ T 세포에 대한 H5L7BW, H5L7 및 IMP731의 결합 프로파일
인간 LAG-3 발현 EL4 세포를 50μg/ml 이하의 다양한 농도의 IMP731, H5L7 또는 H5L7BW Alexa647-컨쥬게이션된 항체와 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 세포를 FACS 완충제 (PBS+0.5% BSA)로 세척하여 결합하지 않은 항체를 제거하였다.
CD3+ T 세포를 본래 그대로의(Untouched) 인간 T 세포 Dynal 비드를 이용하여 음성 선택에 의해 PBMC로부터 제조하였다. 고정된 항-CD3 및 항-CD28 및 가용성 재조합 인간 IL-12와 3일 동안 37℃에서 인큐베이션시킴에 의해 CD3+ T 세포를 활성화시켰다. 활성화 세포를 3μg/ml 이하의 다양한 농도의 Alexa 647-컨쥬게이션된 항체와 실온에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 세포를 FACS 완충제 (PBS+0.5% BSA)로 세척하였다.
EL4 세포 및 CD3+ T 세포를 Beckman Coulter FC 500 흐름세포측정기를 이용하여 FACS에 의해 분석하였다. FACS 원 데이터를 CXP 분석 소프트웨어 (Beckman Coulter)를 이용하여 분석하였다. 데이터는 초기에 전방-산란 대 측면-산란 플롯 상에 플롯팅되었고 관심 세포 집단이 게이팅되었다. 게이팅된 이러한 집단은 이후 형광 세기를 나타내는 히스토그램으로서 플롯팅되었고 평균 형광 세기 (MFI)가 계산되었다. 이어서 MFI 값을 GraphPad Prism 5 소프트웨어에 플롯팅하여 용량 반응 곡선을 생성하였다.
인간 LAG-3 발현 EL4 세포, 및 인간 일차 활성화 CD3+ T 세포에 대한 H5L7BW, H5L7 및 IMP731의 결합 프로파일을 도 1에 제시한다. 3개의 항체는 인간 LAG-3 발현 EL4 세포 (도 1A) 및 활성화 인간 CD3+ T 세포 (도 1B)에 대해 유사한 결합 특성을 나타내었다.
실시예 6: 일차 인간 T 세포에서 항체 의존성 세포 세포독성 (ADCC)에 의한 H5L7BW 및 H5L7의 고갈 활성의 평가
이러한 실험에 이용된 도너는 Revaxis(디프테리아, 파상풍 및 소아마비)에 존재하는 CD4 항원 및 CMV, EBV 및 인플루엔자에 대한 펩티드 에피토프를 함유한 CMVpp65 펩티드 푸울 또는 CD8 펩티드 푸울에 대한 리콜 반응에 대해 스크리닝되었다. 초기 연구를 수행하는데 이용된 항원은 CMVpp65 펩티드 푸울이었다. 그러나, 이러한 항원에 대해 리콜 반응을 나타낸 제한된 수의 도너로 인해, Revaxis 및 CD8 펩티드 푸울이 항-LAG3 항체에 대한 효능 데이터의 대부분을 생성하기 위해 이용된 항원이었다.
0일 (25mL) 및 5일 (75mL)에 본 실험의 건강한 인간 지원자로부터 말초혈을 수집하고, 이를 이용하여 ficollplaque 밀도 구배 원심분리에 의해 단핵 세포를 제조하였다. 0일에 제조된 PBMC를 CellTrace™ Violet 세포 증식 키트를 이용하여, 제조업체의 지시에 따라 표지한 후, 이들을 세척하고, 24-웰 편평 바닥 조직 배양 플레이트에 배지 중 2x106/mL의 밀도로 시딩하고, 항원을 자극하였다 (Revaxis 및 CD8 펩티드 푸울을 1000분의 1의 희석율로 이용하였다; CMVpp65 펩티드를 100분의 1의 희석율로 이용하였다). PBMC를 5% CO2 가습된 인큐베이터에서 5일 동안 37℃로 인큐베이션하였다.
자가 도너 NK 세포를 Invitrogen 또는 Miltenyi Biotec으로부터의 키트를 이용하여 각 제조업체의 특정 지침에 따라 음성 선택에 의해 실험 5일차에 제조된 PBMC로부터 정제하였다. 정제된 NK 세포를 계수하고 배지 중 1.3x106/mL의 밀도로 희석시켰다.
5일 동안 항원으로 자극된 세포를 세척하고, 계수하고, 배지 중 2x106/생육가능한 세포/mL의 밀도로 희석시켰다.
자가 도너 NK 세포 (80μL) 및 항원 활성화 세포 (100μL)를 시험 항체 또는 배지 (20μL)를 지닌 둥근 바닥 5mL 폴리스티렌 FACS 튜브로 피펫팅하였다. 시험된 항-LAG-3 항체의 최종 농도는 1000 내지 0.015ng/mL의 범위였다. 샘플을 5% CO2 가습된 인큐베이터에서 18 h 동안 37℃로 인큐베이션하였다. 18 h 후 ADCC 검정 샘플을 항원 특이적 LAG-3 양성 T 세포의 존재에 대해 흐름세포측정기를 이용하여 분석하였다. 간단히 말해, 샘플을 FACS 완충제로 세척하고, 인간 IgG (3μg/튜브)로 차단하고, 마우스 항-인간 CD4, CD8, CD337, CD25 및 LAG-3 플루오로크롬 컨쥬게이션된 항체와 함께 30분 동안 암실에서 실온으로 인큐베이션하였다. PBS에서 추가의 세척 단계 후에, 세포를 고정시킬 수 있는 녹색 죽은 세포의 존재 하에 30분 동안 암실에서 실온으로 인큐베이션시켰다. 샘플을 마지막으로 PBS로 세척하고, 고정시키고, 60초 수집 시간을 이용하여 초 당 1μL의 유량으로 흐름세포측정기에 의해 분석하였다.
모든 샘플 데이터는 FACS Diva 소프트웨어 버젼 6.1.3을 갖는 BD FACSCanto II 흐름세포측정기 (BD BioSciences)를 이용하여 수집되었다. 살아 있는/죽은 고정가능한 녹색 죽은 세포 균주를 죽은 세포 배제 마커로서 이용하고 적절한 아이소형 및 FMO-1 대조군을 이용하여 음성 집단을 정의하였다. 간단히 말해 죽은 세포는 FL1 (녹색 죽은 세포 균주)에서의 형광에 대해 전방 산란의 플롯을 이용하여 (FSC-A) 분석으로부터 생략되었다. 그 후 FSC-H에 대한 FSC-W의 플롯을 이용하여 이중항을 분석에서 제외시켰다. 이어서 생육가능한 단일한 림프구를 확인하고 측면 산란 (SSC-A)에 대한 전방 산란 (FSC-A)의 플롯을 이용하여 게이팅시켰다. CD4 항원 특이적 T 세포를, 각각 SSC-A에 대한 CD4 형광 및 CD4 형광에 대한 보라색 염료 형광의 플롯을 이용하여 세포의 이러한 게이팅된 집단으로부터 확인하였다. 항원 특이적 CD4 T 세포는 보라색 염료 형광의 감소에 의해 확인되었다. 이러한 세포 집단의 활성화 상태 및 이들이 LAG-3을 발현했는 지를 확인하기 위해 LAG-3 형광에 대한 CD25 형광의 추가의 플롯이 그려졌다. 항원 특이적 CD8 T 세포를 확인하기 위해 유사한 플롯이 그려졌다.
각각의 샘플에 존재하는 항원 특이적 CD4 및 CD8 T 세포의 백분율 (생육가능한 림프구 집단의 백분율로서)이 기록되었다. 이러한 데이터의 비선형 가변 경사 곡선-핏을 플롯팅하고, GraphPad Prism 소프트웨어 (v5.03)를 이용하여 EC50 값을 생성하였다.
검정에서 관찰된 고갈의 최대 수준을 계산하기 위해, 시험된 항체의 최고 농도에서, 다음 식을 이용하였다: (1-(항체 처리 후 남아 있는 항원 특이적 T 세포 %)/(항체의 부재 하에 남아 있는 항원 특이적 T 세포 %))*100.
H5L7BW 및 H5L7에 의한 LAG3 양성 항원 특이적 CD8 및 CD4 T 세포의 고갈에 대한 효능 데이터가 상기 설명된 시험관내 검정 시스템을 이용하여 생성되었다. H5L7BW은 개개 세포 유형의 소멸에 대해 연구된 7개의 도너 중 6개에서 ADCC에 의해 LAG3 양성 항원 특이적 CD4 및 CD8 T 세포의 고갈을 유도하였다. EC50 값에 의해 정량된, 항원 특이적 CD4 T 세포에서 H5L7BW의 효능은 14pg/mL 내지 3.4ng/mL의 범위였고 최대 고갈 수준은 44 내지 78%의 범위였다. 항원 특이적 LAG-3 양성 CD8 T 세포에서 이러한 항체의 효능은 122pg/mL 내지 17.5ng/mL의 범위였고, 최대 고갈 수준은 39 내지 87%의 범위였다. H5L7은 낮은 수준의 고갈을 매개하거나, 연구된 도너에서 불활성이었다.
실시예 7: 생체내 인간 PBMC/마우스 SCID 이종이식 모델에서 H5L7BW 및 H5L7의 고갈 활성의 평가
이러한 검정은 활성화 인간 T 세포 상에서 모노클로날, 완전한 인간화, 아푸코실화된 LAG-3 고갈성 항체 H5L7BW의 생체내 고갈 효능을 평가하기 위해 인간 PBMC/마우스 SCID 이종이식 모델의 이용을 기재한다. 건강한 지원자 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 분리하고 밤새 자극하여 (항-CD3, IL-12) 면역손상된 SCID 마우스의 복막에 주입하기 전에 LAG-3 발현을 유도하였다. LAG-3 고갈성 또는 대조군 항체를 복막에 공동-투여하거나 정맥내 주입하였다.
LAG-3 양성 세포의 고갈은 세포 주입 5 또는 24시간 후에 복막 세척 샘플에서 흐름세포측정기에 의해 평가하였다.
복강내 경로에 의해 마우스에 활성화 huPBMC (0.4ml의 PBS 중 4 x 106- 2 x 107 세포)를 주입하였다. 특정 연구 경로에 따라서, LAG-3 항체 또는 huIgG1 BioWa 대조군을 huPBMC와 함께 i.p. 공동-투여하거나 huPBMC를 주입하기 18시간 전에 마우스를 미리 정맥내 처리하였다. 세포 주입 5 또는 24시간 후에, 마우스를 희생시키고, 복막 세척을 수행하고, 세척 완충제의 세포 함량을 흐름세포측정기에 의해 분석하였다. 간단히 말해, 복막 세척은 3mM EDTA를 함유하는 냉 PBS를 이용한 무손상 복강의 3 x 5ml 세척을 포함하였다.
모든 샘플 데이터는 FACS Diva 소프트웨어 버젼 6.1.3을 지닌 BD FACSCanto II 흐름세포측정기 (BD BioSciences)를 이용하여 수집되었다. FACS 튜브 당 약 1 x 106 세포 (가능한 경우)를 첨가하고, 세포 현탁액을 1500 rpm에서 10분 동안 원심분리한 다음, 펠렛을 3ml의 PBS에 재현탁시켰다. 이어서 상청액을 조심스럽게 디캔팅하고 세포 펠렛을 100μl의 냉 FACS 세척 완충제에 재현탁시켰다. 그 후 튜브 당 15μl의 FcR 차단 시약을 첨가하고, 세포를 10분 동안 실온에서 인큐베이션시켰다. 그 다음, 5μl의 각각의 염색 항체 (10μl의 1:100 미리-희석된 항-LAG-3 차단/검출 항체 17B4-PE) 또는 아이소형 대조군을 각각 첨가하고 광으로부터 보호된 실온에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 후속하여 세포를 튜브 당 4 ml의 FACS 완충제의 첨가에 의해 세척하고 1500 rpm에서 5분 동안 원심분리시킨 후 상청액을 조심스럽게 디캔팅하였다. 이러한 세척 단계를 반복하였다. 마지막으로, 세포를 300μl의 FACS 완충제에 재현탁시키고 흐름세포측정기에서 분석하였다. 형광 표지된 LAG-3 차단 항체 17B4-PE의 사용에 의한 LAG-3 검출에 추가하여, 다음 T 세포 및 활성화 마커를 T 세포 표현형에 이용하였다: CD45, CD4, CD8, 및 CD25. CD4 및 CD8 T 세포의 백분율은 CD45 양성 세포의 백분율로서 표현되었다. LAG-3 양성 T 세포 집단은 이들의 모집단 CD4 및 CD8의 백분율로서 표현되었다.
FACS Diva 소프트웨어 버젼 6.1.3을 이용하여 개개의 세포 계수/사건 및 세포 집단 백분율의 배치 분석을 생성하였다. 데이터는 이항 데이터에 대해 일반화 된 선형 모델을 이용하여 SAS 버젼 9.2.2 소프트웨어로 분석되었다. 이러한 분석은 직접 모집단의 비율로서 세포 계수의 모델을 만든다. 이러한 방식으로, 모집단의 크기가 분석 동안 고려된다. 평균은, 95% 신뢰 구간으로, 각 치료에 대한 표적 세포 유형의 비율에 대해 계산되었다. 이를 백분율로 표현하였다.
확률 비를 사용하여 치료 대 대조군의 계획된 비교가 이루어졌다. 이것은 대조군 치료에 대한 표적 세포 유형을 가질 확률의 비로서 하나의 치료에서 표적 세포 유형을 가진 확률을 표현한다. < 1의 확률 비는 대조군에 비해 관심 치료에서 세포 유형을 가질 감소된 확률을 나타낸다. < 1의 확률 비는 대조군에 비해 관심 치료에서 세포 유형을 가질 감소된 확률을 나타낸다.
모든 실험은 개개의 건강한 혈액 도너로부터의 PBMC를 이용하여 수행되었고 실험마다 많은 혈액 부피가 요구됨에 따라, 도너는 한 번 이상 이용되지 않았다. 밤새 자극 후 LAG-3 발현 수준은 도너 간에 크게 달랐지만 (2-73% 범위의 세포 표면 발현) 발현 수준에서의 이러한 차이는 시험된 항체의 고도로 현저한 고갈 효능에 영향을 주지 않았다.
생체내 인간 PBMC/마우스 SCID 모델을 성공적으로 이용하여 면역손상된 SCID 마우스의 복막에서 활성화 인간, LAG-3 발현 T 세포의 고갈을 나타내었다. 도너, 투여 경로 및 분석 시점에 따라서, LAG-3 양성 인간 CD4 T 세포 중 84.22-99.71% 및 LAG-3 양성 인간 CD8 T 세포 중 84.64-99.62%는 고갈되었다. 도 2에 도시된 대로, SCID 마우스의 복막에서 활성화 인간 PBMC에 5mg/kg의 H5L7BW의 공동-투여는 대조군 IgG 주입된 동물에 비해 주입 24시간 후 LAG-3 양성 CD4 및 CD8 양성 T 세포의 매우 현저한 고갈을 발생시켰다.
도 3은 앞서 기재한 대로 활성화 인간 PBMC에 공동-i.p. 투여 5시간 후 5mg/kg의 H5L7BW 및 H5L7 간의 비교를 강조한 것이다. 두 항체 모두는 LAG-3 양성 CD4 및 CD8 T 세포의 매우 현저한 고갈을 유도하였다 (도 3A).
도 4에 도시한 대로, 정맥내 경로를 통한 5mg/kg의 H5L7BW의 투여는, i.p. 공동-투여되는 LAG-3 고갈 항체를 이용한 실험에서 관찰된 것과 유사하게, 5시간 후 LAG-3 양성 T 세포의 통계적으로 매우 현저한 고갈을 발생시켰다 (도 4A). 활성화 인간 PBMC의 i.p. 투여 5시간 후 i.v. 투여되는 H5L7BW, H5L7 및 IMP731 (모두 5mg/kg) 간의 비교는 대조군 처리된 동물에 비해 3분자 간에 매우 유사한 고갈 효능을 나타내었다 (도 5). 시험된 3개의 LAG-3 고갈성 항체는 각각 LAG-3 양성 CD4 및 CD8 T 세포의 수에서 매우 현저한 감소를 발생시켰고 (도 5A), H5L7BW가 H5L7 또는 IMP731에 비해 큰 고갈능을 나타내었다.
실시예 8: ProteOn™을 이용하여 재조합 가용성 인간 Fc 감마 수용체에 대한 항-LAG-3 인간화 항체의 결합 분석
항체 의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC)을 유도하는 H5L7 및 H5L7BW의 능력을 평가하기 위해 인간 FcγRIIIa 결합을 조사하였다. H5L7 및 H5L7BW 항-LAG-3 항체는 FcγRI 및 FcγRII 수용체 외에 재조합 가용성 인간 FcγRIIIa으로의 결합에 대해 ProteOn™ XPR36 (BioRad™) 바이오센서 기계를 이용하여 평가되었고, 키메라 항체 IMP731에 대해 비교되었다.
염소 항-폴리-히스티딘 IgG를 일차 아민 커플링에 의해 GLM 바이오센서 칩에 고정시켰다. 이러한 표면을 폴리-히스티딘 태깅된 인간 Fc 감마 수용체에 대한 포집 표면으로서 이용하였다. 시험되는 항체를 분석물로서 이용하여 이중 참조 결합 곡선에 이용된 0nM (즉 완충제 단독)의 주입과 함께 2048nM, 512nM, 128nM, 32nM 및 8nM으로 통과시켰다. 염소 항-폴리-히스티딘 IgG 표면은 상호작용 사이에 100mM 인산으로 재생되었다. 진행은 25℃에서 진행 완충제로서 HBS-EP를 이용하여 ProteOn XPR36 단백질 어레이 상호작용 시스템 상에서 수행되었다. 글로벌 R-max를 설정하고 ProteOn의 분석 소프트웨어에 고유한 평형 모델을 이용하여, 각각의 수용체에 대해 별도로 데이터를 분석하였다. 대조군 분자는 시험되는 샘플 세트의 처음과 끝에서 진행시켜 결과의 비교가능성을 보장하였다. 데이터를 2개의 실험으로부터 비교하고 하이브리드 대조군 항체를 실험 간에 대조군으로서 이용하였다.
결과는 H5L7BW가 FcγRIIIa의 둘 모두의 다형태 (발린 V158 및 페닐알라닌 F158)에 H5L7에 비해 약 10배의 개선된 친화성으로 결합하였음을 나타낸다 (표 6을 참조하라). 푸코실화된 항체 H5L7은 키메라 항체 IMP731과 유사한 친화성으로 FcγRIIIa에 결합하였다.
FcγRI 또는 FcγRIIa 수용체에 대한 인간화 푸코실화된 및 아푸코실화된 항-LAG-3 항체의 결합 간에 어떠한 현저한 변화도 관찰되지 않았다.
표 6: 인간 Fc gamma 수용체에 대한 H5L7 및 H5L7BW의 결합
Figure pct00006
서열
표 7: 서열 개요
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
SEQUENCE LISTING <110> GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited <120> Antigen Binding Proteins <130> PB65397P <160> 112 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L7, CDRL1 (Kabat defined) <400> 1 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Murine <400> 2 Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Murine <400> 3 Leu Gln His Phe Gly Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 4 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L7, VL <400> 4 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 5 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L7, light chain humanised construct <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Murine <400> 6 Ala Tyr Gly Val Asn 1 5 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L7, CDRH2 (Kabat defined) <400> 7 Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Murine <400> 8 Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr 1 5 <210> 9 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L7, VH <400> 9 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L7, heavy chain humanised construct <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 11 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H1L7, light chain humanised construct <400> 11 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 12 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H1L7, heavy chain humanised construct <400> 12 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 13 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J7L7, light chain humanised construct <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 14 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J7L7, heavy chain humanised construct <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 15 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H4L7, light chain humanised construct <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 16 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H4L7, heavy chain humanised construct <400> 16 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 17 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J11L7, light chain humanised construct <400> 17 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 18 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J11L7, heavy chain humanised construct <400> 18 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 19 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H2L7, light chain humanised construct <400> 19 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 20 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H2L7, heavy chain humanised construct <400> 20 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 21 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J13L7, light chain humanised construct <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 22 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J13L7, heavy chain humanised construct <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 23 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H7L7, light chain humanised construct <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 24 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H7L7, heavy chain humanised construct <400> 24 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 25 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J0L7, light chain humanised construct <400> 25 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 26 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J0L7, heavy chain humanised construct <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 27 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H0L7, light chain humanised construct <400> 27 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Pro 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 28 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H0L7, heavy chain humanised construct <400> 28 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 29 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H1L1, light chain humanised construct <400> 29 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 30 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H1L1, heavy chain humanised construct <400> 30 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 31 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L1, light chain humanised construct <400> 31 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 32 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H5L1, heavy chain humanised construct <400> 32 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 33 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J7L1, light chain humanised construct <400> 33 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 34 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J7L1, heavy chain humanised construct <400> 34 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 35 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J11L1, light chain humanised construct <400> 35 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 36 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J11L1, heavy chain humanised construct <400> 36 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 37 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J13L1, light chain humanised construct <400> 37 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 38 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J13L1, heavy chain humanised construct <400> 38 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 39 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H7L1, light chain humanised construct <400> 39 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 40 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H7L1, heavy chain humanised construct <400> 40 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asp Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 41 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J0L1, light chain humanised construct <400> 41 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 42 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> J0L1, heavy chain humanised construct <400> 42 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80 Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 43 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H0L1, light chain humanised construct <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 44 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> H0L1, heavy chain humanised construct <400> 44 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 45 <211> 106 <212> PRT <213> Human <400> 45 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 1 5 10 15 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 20 25 30 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 35 40 45 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 50 55 60 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 65 70 75 80 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 85 90 95 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 46 <211> 330 <212> PRT <213> Human <400> 46 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 47 <211> 116 <212> PRT <213> Murine <400> 47 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 48 <211> 114 <212> PRT <213> Murine <400> 48 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 49 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMP731, heavy chain sequence <400> 49 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ala Tyr 20 25 30 Gly Val Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Met Ile Trp Asp Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Arg Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Glu Gly Asp Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 50 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMP731, light chain sequence <400> 50 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly 1 5 10 15 Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Gly 20 25 30 Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Gln 85 90 95 His Phe Gly Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 51 <211> 417 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Recombinant human LAG-3-ECD-His6 <400> 51 Leu Gln Pro Gly Ala Glu Val Pro Val Val Trp Ala Gln Glu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile Pro Leu Gln Asp Leu Ser 20 25 30 Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln His Gln Pro Asp Ser Gly 35 40 45 Pro Pro Ala Ala Ala Pro Gly His Pro Leu Ala Pro Gly Pro His Pro 50 55 60 Ala Ala Pro Ser Ser Trp Gly Pro Arg Pro Arg Arg Tyr Thr Val Leu 65 70 75 80 Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly Arg Leu Pro Leu Gln Pro 85 90 95 Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln Arg Gly Asp Phe Ser Leu 100 105 110 Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Tyr Arg Ala Ala 115 120 125 Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys Arg Leu Arg Leu Arg Leu 130 135 140 Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro Gly Ser Leu Arg Ala Ser 145 150 155 160 Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser Arg Pro Asp Arg Pro Ala 165 170 175 Ser Val His Trp Phe Arg Asn Arg Gly Gln Gly Arg Val Pro Val Arg 180 185 190 Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser Phe Leu Phe Leu Pro Gln 195 200 205 Val Ser Pro Met Asp Ser Gly Pro Trp Gly Cys Ile Leu Thr Tyr Arg 210 215 220 Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn Leu Thr Val Leu Gly Leu 225 230 235 240 Glu Pro Pro Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala Gly Ala Gly Ser Arg Val 245 250 255 Gly Leu Pro Cys Arg Leu Pro Ala Gly Val Gly Thr Arg Ser Phe Leu 260 265 270 Thr Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly Pro Asp Leu Leu Val Thr 275 280 285 Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu Glu Asp Val Ser Gln Ala 290 295 300 Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys His Ile His Leu Gln Glu Gln Gln Leu 305 310 315 320 Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr Val Thr Pro Lys Ser Phe 325 330 335 Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu Cys Glu Val Thr Pro Val 340 345 350 Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Ser Leu Asp Thr Pro Ser Gln 355 360 365 Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala Gln Glu Ala Gln Leu Leu 370 375 380 Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Gln Gly Glu Arg Leu Leu Gly 385 390 395 400 Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser Pro His His His His His 405 410 415 His <210> 52 <211> 417 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Recombinant cynomolgus macaque LAG-3 ECD-His6 <400> 52 Pro Gln Pro Gly Ala Glu Ile Ser Val Val Trp Ala Gln Glu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile Pro Leu Gln Asp Leu Ser 20 25 30 Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln His Gln Pro Asp Ser Gly 35 40 45 Pro Pro Ala Pro Ala Pro Gly His Pro Pro Ala Pro Gly His Arg Pro 50 55 60 Ala Ala Pro Tyr Ser Trp Gly Pro Arg Pro Arg Arg Tyr Thr Val Leu 65 70 75 80 Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly Arg Leu Pro Leu Gln Pro 85 90 95 Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln Arg Gly Asp Phe Ser Leu 100 105 110 Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Tyr Arg Ala Thr 115 120 125 Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys Arg Leu Arg Leu Arg Val 130 135 140 Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro Gly Ser Leu Arg Thr Ser 145 150 155 160 Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser Arg Pro Asp Arg Pro Ala 165 170 175 Ser Val His Trp Phe Arg Ser Arg Gly Gln Gly Arg Val Pro Val Gln 180 185 190 Gly Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser Phe Leu Phe Leu Pro His 195 200 205 Val Gly Pro Met Asp Ser Gly Leu Trp Gly Cys Ile Leu Thr Tyr Arg 210 215 220 Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn Leu Thr Val Leu Gly Leu 225 230 235 240 Glu Pro Ala Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala Gly Ala Gly Ser Arg Val 245 250 255 Glu Leu Pro Cys Arg Leu Pro Pro Ala Val Gly Thr Gln Ser Phe Leu 260 265 270 Thr Ala Lys Trp Ala Pro Pro Gly Gly Gly Pro Asp Leu Leu Val Ala 275 280 285 Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu Glu Asp Val Ser Gln Ala 290 295 300 Gln Ala Gly Thr Tyr Ile Cys His Ile Arg Leu Gln Gly Gln Gln Leu 305 310 315 320 Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr Val Thr Pro Lys Ser Phe 325 330 335 Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu Cys Glu Val Thr Pro Ala 340 345 350 Ser Gly Gln Glu His Phe Val Trp Ser Pro Leu Asn Thr Pro Ser Gln 355 360 365 Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala Gln Glu Ala Gln Leu Leu 370 375 380 Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu His Gln Gly Glu Arg Leu Leu Gly 385 390 395 400 Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser Pro His His His His His 405 410 415 His <210> 53 <211> 417 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Recombinant baboon LAG-3 ECD-His6 <400> 53 Pro Gln Pro Gly Ala Glu Ile Ser Val Val Trp Ala Gln Glu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile Pro Leu Gln Asp Leu Ser 20 25 30 Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln His Gln Pro Asp Ser Gly 35 40 45 Pro Pro Ala Pro Ala Pro Gly His Pro Pro Ala Pro Gly His Arg Pro 50 55 60 Ala Ala Pro Tyr Ser Trp Gly Pro Arg Pro Arg Arg Tyr Thr Val Leu 65 70 75 80 Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly Arg Leu Pro Leu Gln Pro 85 90 95 Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln Arg Gly Asp Phe Ser Leu 100 105 110 Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala Gly Glu Tyr Arg Ala Thr 115 120 125 Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys Arg Leu Arg Leu Arg Val 130 135 140 Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro Gly Ser Leu Arg Thr Ser 145 150 155 160 Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser Arg Pro Asp Arg Pro Ala 165 170 175 Ser Val His Trp Phe Arg Ser Arg Gly Gln Gly Gln Val Pro Val Gln 180 185 190 Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser Phe Leu Phe Leu Pro His 195 200 205 Val Gly Pro Met Asp Ser Gly Leu Trp Gly Cys Ile Leu Thr Tyr Arg 210 215 220 Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn Leu Thr Val Leu Gly Leu 225 230 235 240 Glu Pro Thr Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala Gly Ala Gly Ser Arg Val 245 250 255 Glu Leu Pro Cys Arg Leu Pro Pro Ala Val Gly Thr Gln Ser Phe Leu 260 265 270 Thr Ala Lys Trp Ala Pro Pro Gly Gly Gly Pro Asp Leu Leu Val Val 275 280 285 Gly Asp Asn Gly Asn Phe Thr Leu Arg Leu Glu Asp Val Ser Gln Ala 290 295 300 Gln Ala Gly Thr Tyr Ile Cys His Ile Arg Leu Gln Gly Gln Gln Leu 305 310 315 320 Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr Val Thr Pro Lys Ser Phe 325 330 335 Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu Cys Glu Val Thr Pro Ala 340 345 350 Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Pro Leu Asn Thr Pro Ser Gln 355 360 365 Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala Gln Glu Ala Gln Leu Leu 370 375 380 Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu His Gln Gly Glu Arg Leu Leu Gly 385 390 395 400 Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser Pro His His His His His 405 410 415 His <210> 54 <211> 19 <212> PRT <213> Murine <400> 54 Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser <210> 55 <211> 20 <212> PRT <213> Murine <400> 55 Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Leu Met Phe Leu Leu Leu Trp Val Ser 1 5 10 15 Gly Ala Cys Ala 20 <210> 56 <211> 16 <212> PRT <213> Human <400> 56 Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala 1 5 10 15 <210> 57 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L7, CDRL1 (Kabat defined) <400> 57 aagagcagcc agagcctgct gaaccccagc aaccagaaga actacctggc c 51 <210> 58 <211> 21 <212> DNA <213> Murine <400> 58 ttcgcctcta ccagggattc c 21 <210> 59 <211> 27 <212> DNA <213> Murine <400> 59 ctgcagcact tcggcacccc tcccact 27 <210> 60 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L7, VL <400> 60 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gt 342 <210> 61 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L7, light chain humanised construct <400> 61 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 62 <211> 15 <212> DNA <213> Murine <400> 62 gcctacggcg tcaac 15 <210> 63 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L7, CDRH2 (Kabat defined) <400> 63 atgatctggg acgacggcag caccgactac gacagcgccc tgaagagc 48 <210> 64 <211> 24 <212> DNA <213> Murine <400> 64 gagggcgacg tggccttcga ttac 24 <210> 65 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L7, VH <400> 65 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagc 348 <210> 66 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L7, heavy chain humanised construct <400> 66 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 67 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H1L7, light chain humanised construct <400> 67 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 68 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H1L7, heavy chain humanised construct <400> 68 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 69 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J7L7, light chain humanised construct <400> 69 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 70 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J7L7, heavy chain humanised construct <400> 70 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt ctctctcact gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 71 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H4L7, light chain humanised construct <400> 71 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 72 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H4L7, heavy chain humanised construct <400> 72 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gctggggatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcaggct gaccatcagc aaggacaaca gcaagaacca ggtgagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 73 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J11L7, light chain humanised construct <400> 73 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 74 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J11L7, heavy chain humanised construct <400> 74 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt ctctctcact gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 75 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H2L7, light chain humanised construct <400> 75 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 76 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H2L7, heavy chain humanised construct <400> 76 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc aaggacaaca gcaagaacca ggtgagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 77 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J13L7, light chain humanised construct <400> 77 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 78 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J13L7, heavy chain humanised construct <400> 78 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 79 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H7L7, light chain humanised construct <400> 79 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 80 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H7L7, heavy chain humanised construct <400> 80 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggcgg ctccatcagc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 81 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J0L7, light chain humanised construct <400> 81 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 82 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J0L7, heavy chain humanised construct <400> 82 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 83 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H0L7, light chain humanised construct <400> 83 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aaccccagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 84 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H0L7, heavy chain humanised construct <400> 84 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggcgg ctccatcagc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 85 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H1L1, light chain humanised construct <400> 85 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 86 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H1L1, heavy chain humanised construct <400> 86 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 87 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L1, light chain humanised construct <400> 87 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 88 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H5L1, heavy chain humanised construct <400> 88 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggctt ctccctgacc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 89 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J7L1, light chain humanised construct <400> 89 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 90 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J7L1, heavy chain humanised construct <400> 90 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt ctctctcact gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 91 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J11L1, light chain humanised construct <400> 91 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 92 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J11L1, heavy chain humanised construct <400> 92 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggctt ctctctcact gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 93 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J13L1, light chain humanised construct <400> 93 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 94 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J13L1, heavy chain humanised construct <400> 94 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 95 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H7L1, light chain humanised construct <400> 95 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 96 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H7L1, heavy chain humanised construct <400> 96 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggcgg ctccatcagc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacgac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 97 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J0L1, light chain humanised construct <400> 97 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 98 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> J0L1, heavy chain humanised construct <400> 98 caggtgcagc tcgtgcagag cggggccgaa gtcaagaaac ccggcagctc cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc gcctacggcg tgaactgggt gaggcaggct 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcacc gccgacaaga gcaccagcac cgcctacatg 240 gaactgagca gcctgaggag cgaggacacc gccgtgtact attgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 99 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H0L1, light chain humanised construct <400> 99 gacatccaga tgacccagag cccctctagc ctcagcgcca gcgtgggcga cagggtgacc 60 atcacctgca agagcagcca gagcctgctg aacggcagca accagaagaa ctacctggcc 120 tggtaccagc agaaacccgg caaggccccc aagctgctgg tctacttcgc ctctaccagg 180 gattccggcg tccccagcag gttcagcggc agcggcagcg gcaccgactt cacactgacc 240 atcagcagcc tgcagcccga ggacttcgcc acctactact gcctgcagca cttcggcacc 300 cctcccactt ttggccaggg caccaagctg gagattaagc gtacggtggc cgcccccagc 360 gtgttcatct tcccccccag cgatgagcag ctgaagagcg gcaccgccag cgtggtgtgt 420 ctgctgaaca acttctaccc ccgggaggcc aaggtgcagt ggaaggtgga caatgccctg 480 cagagcggca acagccagga gagcgtgacc gagcaggaca gcaaggactc cacctacagc 540 ctgagcagca ccctgaccct gagcaaggcc gactacgaga agcacaaggt gtacgcctgt 600 gaggtgaccc accagggcct gtccagcccc gtgaccaaga gcttcaaccg gggcgagtgc 660 <210> 100 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> H0L1, heavy chain humanised construct <400> 100 caggtgcagc tccaggagag cggccccggc ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acctgcaccg tgagcggcgg ctccatcagc gcctacggcg tcaactggat caggcagccc 120 cccggcaaag gcctggagtg gattgggatg atctgggacg acggcagcac cgactacaac 180 agcgccctga agagcagggt gaccatcagc gtggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgagca gcgtgactgc cgccgacacc gccgtctatt actgcgccag ggagggcgac 300 gtggccttcg attactgggg ccagggcaca ctagtgaccg tgtccagcgc cagcaccaag 360 ggccccagcg tgttccccct ggcccccagc agcaagagca ccagcggcgg cacagccgcc 420 ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gaaccggtga ccgtgtcctg gaacagcgga 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agagcagcgg cctgtacagc 540 ctgagcagcg tggtgaccgt gcccagcagc agcctgggca cccagaccta catctgtaac 600 gtgaaccaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gagctgtgac 660 aagacccaca cctgcccccc ctgccctgcc cccgagctgc tgggaggccc cagcgtgttc 720 ctgttccccc ccaagcctaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg atgtgagcca cgaggaccct gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc acaatgccaa gaccaagccc agggaggagc agtacaacag cacctaccgg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgagaaaa ccatcagcaa ggccaagggc 1020 cagcccagag agccccaggt gtacaccctg ccccctagca gagatgagct gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccctgtgct ggacagcgat 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccc ctggcaag 1338 <210> 101 <211> 318 <212> DNA <213> Human <400> 101 acggtggccg cccccagcgt gttcatcttc ccccccagcg atgagcagct gaagagcggc 60 accgccagcg tggtgtgtct gctgaacaac ttctaccccc gggaggccaa ggtgcagtgg 120 aaggtggaca atgccctgca gagcggcaac agccaggaga gcgtgaccga gcaggacagc 180 aaggactcca cctacagcct gagcagcacc ctgaccctga gcaaggccga ctacgagaag 240 cacaaggtgt acgcctgtga ggtgacccac cagggcctgt ccagccccgt gaccaagagc 300 ttcaaccggg gcgagtgc 318 <210> 102 <211> 990 <212> DNA <213> Human <400> 102 gccagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 60 ggcacagccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgaaccggt gaccgtgtcc 120 tggaacagcg gagccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 180 ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 240 tacatctgta acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 300 aagagctgtg acaagaccca cacctgcccc ccctgccctg cccccgagct gctgggaggc 360 cccagcgtgt tcctgttccc ccccaagcct aaggacaccc tgatgatcag cagaaccccc 420 gaggtgacct gtgtggtggt ggatgtgagc cacgaggacc ctgaggtgaa gttcaactgg 480 tacgtggacg gcgtggaggt gcacaatgcc aagaccaagc ccagggagga gcagtacaac 540 agcacctacc gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaag 600 gagtacaagt gtaaggtgtc caacaaggcc ctgcctgccc ctatcgagaa aaccatcagc 660 aaggccaagg gccagcccag agagccccag gtgtacaccc tgccccctag cagagatgag 720 ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccctgtg 840 ctggacagcg atggcagctt cttcctgtac agcaagctga ccgtggacaa gagcagatgg 900 cagcagggca acgtgttcag ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa tcactacacc 960 cagaagagcc tgagcctgtc ccctggcaag 990 <210> 103 <211> 348 <212> DNA <213> Murine <400> 103 caggtgcagc tgaaggagtc aggtcctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60 acatgcaccg tctcagggtt ctcattaacc gcctatggtg taaactgggt tcgccagcct 120 ccaggaaagg gtctggagtg gctgggaatg atatgggatg atggaagcac agactataat 180 tcagctctca aatccagact gagcatcagt aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccaggtact actgtgccag agaaggggac 300 gtagcctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348 <210> 104 <211> 342 <212> DNA <213> Murine <400> 104 gacattgtga tgacacagtc tccctcctcc ctggctgtgt cagtaggaca gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagcctttta aatggtagca atcaaaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaacttctgg tatactttgc atccactagg 180 gattctgggg tccctgatcg cttcataggc agtggatctg ggacagattt cactcttacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gattacttct gtctgcaaca ttttggcact 300 cctccgacgt tcggtggagg caccaaactg gaaatcaaac gg 342 <210> 105 <211> 1338 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> IMP731, heavy chain sequence <400> 105 caggtgcagc tgaaggagtc aggtcctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60 acatgcaccg tctcagggtt ctcattaacc gcctatggtg taaactgggt tcgccagcct 120 ccaggaaagg gtctggagtg gctgggaatg atatgggatg atggaagcac agactataat 180 tcagctctca aatccagact gagcatcagt aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccaggtact actgtgccag agaaggggac 300 gtagcctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctcagc tagcaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600 gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660 aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 720 ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780 gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840 gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900 gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960 aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020 cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1080 caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140 gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200 ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1260 gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320 tccctgtctc cgggtaaa 1338 <210> 106 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> IMP731, light chain sequence <400> 106 gacattgtga tgacacagtc tccctcctcc ctggctgtgt cagtaggaca gaaggtcact 60 atgagctgca agtccagtca gagcctttta aatggtagca atcaaaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg acagtctcct aaacttctgg tatactttgc atccactagg 180 gattctgggg tccctgatcg cttcataggc agtggatctg ggacagattt cactcttacc 240 atcagcagtg tgcaggctga agacctggca gattacttct gtctgcaaca ttttggcact 300 cctccgacgt tcggtggagg caccaaactg gaaatcaaac ggaccgtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagttcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660 <210> 107 <211> 1251 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Recombinant human LAG-3-ECD-His6 <400> 107 ctccagccag gggctgaggt cccggtggtg tgggcccagg agggggctcc tgcccagctc 60 ccctgcagcc ccacaatccc cctccaggat ctcagccttc tgcgaagagc aggggtcact 120 tggcagcatc agccagacag tggcccgccc gctgccgccc ccggccatcc cctggccccc 180 ggccctcacc cggcggcgcc ctcctcctgg gggcccaggc cccgccgcta cacggtgctg 240 agcgtgggtc ccggaggcct gcgcagcggg aggctgcccc tgcagccccg cgtccagctg 300 gatgagcgcg gccggcagcg cggggacttc tcgctatggc tgcgcccagc ccggcgcgcg 360 gacgccggcg agtaccgcgc cgcggtgcac ctcagggacc gcgccctctc ctgccgcctc 420 cgtctgcgcc tgggccaggc ctcgatgact gccagccccc caggatctct cagagcctcc 480 gactgggtca ttttgaactg ctccttcagc cgccctgacc gcccagcctc tgtgcattgg 540 ttccggaacc ggggccaggg ccgagtccct gtccgggagt ccccccatca ccacttagcg 600 gaaagcttcc tcttcctgcc ccaagtcagc cccatggact ctgggccctg gggctgcatc 660 ctcacctaca gagatggctt caacgtctcc atcatgtata acctcactgt tctgggtctg 720 gagcccccaa ctcccttgac agtgtacgct ggagcaggtt ccagggtggg gctgccctgc 780 cgcctgcctg ctggtgtggg gacccggtct ttcctcactg ccaagtggac tcctcctggg 840 ggaggccctg acctcctggt gactggagac aatggcgact ttacccttcg actagaggat 900 gtgagccagg cccaggctgg gacctacacc tgccatatcc atctgcagga acagcagctc 960 aatgccactg tcacattggc aatcatcaca gtgactccca aatcctttgg gtcacctgga 1020 tccctgggga agctgctttg tgaggtgact ccagtatctg gacaagaacg ctttgtgtgg 1080 agctctctgg acaccccatc ccagaggagt ttctcaggac cttggctgga ggcacaggag 1140 gcccagctcc tttcccagcc ttggcaatgc cagctgtacc agggggagag gcttcttgga 1200 gcagcagtgt acttcacaga gctgtctagc ccacaccacc atcatcacca t 1251 <210> 108 <211> 1251 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Recombinant cynomolgus macaque LAG-3 ECD-His6 <400> 108 ccccagccag gggctgagat ctcggtggtg tgggcccagg agggggctcc tgcccagctc 60 ccctgcagcc ccacaatccc cctccaggat ctcagccttc tgcgaagagc aggggtcact 120 tggcagcatc aaccagacag tggcccgccc gctcccgccc ccggccaccc cccggccccc 180 ggccatcgcc cggcggcgcc ctactcttgg gggcccaggc cccgccgcta cacagtgctg 240 agcgtgggtc ctggaggcct gcgcagcggg aggctgcccc tgcagccccg cgtccagctg 300 gatgagcgcg gccggcagcg cggggacttc tcgctgtggc tgcgcccagc ccggcgcgcg 360 gacgccggcg agtaccgcgc cacggtgcac ctcagggacc gcgccctctc ctgccgcctt 420 cgtctgcgcg tgggccaggc ctcgatgact gccagccccc cagggtctct caggacctct 480 gactgggtca ttttgaactg ctccttcagc cgccctgacc gcccagcctc tgtgcattgg 540 ttccggagcc gtggccaggg ccgagtccct gtccaggggt ccccccatca ccacttagcg 600 gaaagcttcc tcttcctgcc ccatgtcggc cccatggact ctgggctctg gggctgcatc 660 ctcacctaca gagatggctt caatgtctcc atcatgtata acctcactgt tctgggtctg 720 gagcccgcaa ctcccttgac agtgtacgct ggagcaggtt ccagggtgga gctgccctgc 780 cgcctgcctc ctgctgtggg gacccagtct ttccttactg ccaagtgggc tcctcctggg 840 ggaggccctg acctcctggt ggctggagac aatggcgact ttacccttcg actagaggat 900 gtaagccagg cccaggctgg gacctacatc tgccatatcc gtctacaggg acagcagctc 960 aatgccactg tcacattggc aatcatcaca gtgactccca aatcctttgg gtcacctggc 1020 tccctgggga agctgctttg tgaggtgact ccagcatctg gacaagaaca ctttgtgtgg 1080 agccccctga acaccccatc ccagaggagt ttctcaggac catggctgga ggcccaggaa 1140 gcccagctcc tttcccagcc ttggcaatgc cagctgcacc agggggagag gcttcttgga 1200 gcagcagtat acttcacaga actgtctagc ccacaccacc atcatcacca t 1251 <210> 109 <211> 1251 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Recombinant baboon LAG-3 ECD-His6 <400> 109 ccccagccag gggctgagat ctcggtggtg tgggcccagg agggggctcc tgcccagctc 60 ccctgcagcc ccacaatccc cctccaggat ctcagccttc tgcgaagagc aggggtcact 120 tggcagcatc aaccagacag tggcccgccc gctcccgccc ccggccaccc cccggccccc 180 ggccatcgcc cggcggcgcc ctactcttgg gggcccaggc cccgccgcta cacagtgctg 240 agcgtgggtc ctggaggcct gcgcagcggg aggctgcccc tgcagccccg cgtccagctg 300 gatgagcgcg gccggcagcg cggggacttc tcgctgtggc tgcgcccagc ccggcgcgcg 360 gacgccggcg agtaccgcgc cacggtgcac ctcagggacc gcgccctctc ctgccgcctt 420 cgtctgcgcg tgggccaggc ctcgatgact gccagccccc cagggtctct caggacctct 480 gactgggtca ttttgaactg ctccttcagc cgccctgacc gcccagcctc tgtgcattgg 540 ttccggagcc gtggccaggg ccaagtccct gtccaggagt ccccccatca ccacttagcg 600 gaaagcttcc tcttcctgcc ccatgtcggc cccatggact ctgggctctg gggctgcatc 660 ctcacctaca gagatggctt caatgtctcc atcatgtata acctcactgt tctgggtctg 720 gagcccacaa ctcccttgac agtgtacgct ggagcaggtt ccagggtgga gctgccctgc 780 cgcctgcctc ctgctgtggg gacccagtct ttccttactg ccaagtgggc tcctcctggg 840 ggaggccctg acctcctggt ggttggagac aatggcaact ttacccttcg actagaggat 900 gtaagccagg cccaggctgg gacctacatc tgccatatcc gtctacaggg acagcagctc 960 aatgccactg tcacattggc aatcatcaca gtgactccca aatcctttgg gtcacctggc 1020 tccctgggga agctgctttg tgaggtgact ccagcatctg gacaagaacg ctttgtgtgg 1080 agccccctga acaccccatc ccagaggagt ttctcaggac cgtggctgga ggcccaggaa 1140 gcccagctcc tttcccagcc ttggcaatgc cagctgcacc agggggagag gcttcttgga 1200 gcagcagtat acttcacaga actgtctagc ccacaccacc atcatcacca t 1251 <210> 110 <211> 57 <212> DNA <213> Murine <400> 110 atgggctgga gctgcatcat cctgttcctg gtggccaccg ctaccggagt gcacagc 57 <210> 111 <211> 60 <212> DNA <213> Murine <400> 111 atggaatcac agacccaggt cctcatgttt cttctgctct gggtatctgg tgcctgtgca 60 <210> 112 <211> 48 <212> DNA <213> Human <400> 112 atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg cgctagct 48

Claims (34)

  1. 림프구 활성화 유전자 3 (LAG-3)에 결합할 수 있고 SEQ ID No: 5로부터의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 항원 결합 단백질.
  2. 제 1항에 있어서, SEQ ID No: 1의 CDRL1을 포함하는 항원 결합 단백질.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, SEQ ID No: 2의 CDRL2 및/또는 SEQ ID No: 3의 CDRL3, 또는 이의 CDR 변이체를 포함하는 항원 결합 단백질.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 10으로부터의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 중 하나 이상을 포함하는 항원 결합 단백질.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID No: 6의 CDRH1, SEQ ID No: 7의 CDRH2 및 SEQ ID No: 8의 CDRH3을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질:
    CDRL1: SEQ ID No: 1
    CDRL2: SEQ ID No: 2
    CDRL3: SEQ ID No: 3
    CDRH1: SEQ ID No: 6
    CDRH2: SEQ ID No: 7
    CDRH3: SEQ ID No: 8.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, a) SEQ ID No: 4의 가변 경쇄 (VL) 및 b) SEQ ID No: 9의 가변 중쇄 (VH)를 포함하는 항원 결합 단백질.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, Biacore™ 표면 플라스몬 공명 분석에 의해 측정시, 1nM 미만의 KD로 SEQ ID No: 51의 재조합 인간 LAG-3 His에 결합할 수 있는 항원 결합 단백질.
  9. Biacore™ 표면 플라스몬 공명 분석에 의해 측정시, 1nM 미만의 KD로 SEQ ID No: 51의 재조합 인간 LAG-3 His에 결합할 수 있는 항원 결합 단백질.
  10. 제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 활성화 T-세포 상에서 발현된 LAG-3에 결합할 수 있는 항원 결합 단백질.
  11. 제 1항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 LAG-3+ 활성화 인간 T 세포를 고갈시킬 수 있는 항원 결합 단백질.
  12. 제 11항에 있어서, 항원 결합 단백질이 일차 인간 T 세포를 이용한 시험관내 검정에서 ADCC에 의해 항원 특이적 CD4 및/또는 CD8 LAG-3+ 인간 T 세포의 40% 초과의 고갈을 야기할 수 있는 항원 결합 단백질.
  13. 제 1항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단백질이 인간화 항체인 항원 결합 단백질.
  14. 인간화 항체가 인간 IgG1 불변 영역을 포함하는 제 13항에 따른 인간화 항체.
  15. 제 14항에 있어서, a) SEQ ID No: 5와 적어도 97% 동일성을 갖는 경쇄 서열, 및 b) SEQ ID No: 10과 적어도 97% 동일성을 갖는 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체.
  16. 제 15항에 있어서, a) SEQ ID No: 5의 경쇄 서열, 및 b) SEQ ID No: 10의 중쇄 서열을 포함하는 인간화 항체.
  17. 제 14항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 있어서, 비-푸코실화된 인간화 항체.
  18. SEQ ID No: 4의 가변 경쇄 (VL) 및 SEQ ID No: 9의 가변 중쇄 (VH)를 포함하는 인간화 항체로서, 상기 항체가 Asn297에 부착된 코어 탄수화물 구조 상에 푸코스를 포함하지 않는, 인간화 항체.
  19. 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 따른 인간화 항체를 인코딩하는 분리된 핵산 분자.
  20. 제 19항에 따른 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
  21. 제 20항에 따른 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  22. 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 인코딩하는 FUT8 유전자가 숙주 세포에서 불활성화된 제 20항에 따른 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  23. 제 21항 또는 제 22항의 숙주 세포에 의해 생성되는 항원 결합 단백질.
  24. a) 제 21항에 따른 숙주 세포를 항원 결합 단백질 또는 항체를 발현시키기에 적합한 조건 하에 배양하는 단계 및 b) 항원 결합 단백질 또는 항체를 분리하는 단계를 포함하는, 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 16항 중 어느 한 항에 따른 인간화 항체를 생성하는 방법.
  25. a) 제 22항에 따른 숙주 세포를 항원 결합 단백질 또는 항체를 발현시키기에 적합한 조건 하에 배양하는 단계로서, 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제를 인코딩하는 FUT8 유전자가 재조합 숙주 세포에서 불활성화된 단계, 및 b) 항체를 분리하는 단계를 포함하는, 제 17항 또는 제 18항에 따른 인간화 항체를 생성하는 방법.
  26. a) 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 따른 항체, 및 b) 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  27. 요법에서의, 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 정의된 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 정의된 인간화 항체의 용도.
  28. 병원성 T 세포의 개입과 관련된 질환의 치료에서의, 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 정의된 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 정의된 인간화 항체의 용도.
  29. 제 28항에 있어서, 질환이 자가면역 질환, 감염성 질환, 알레르기성 질환 또는 암인 항원 결합 단백질의 용도.
  30. 제 29항에 있어서, 자가면역 질환이 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, 전신홍반루푸스 (SLE), 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 궤양성 대장염 및 자가면역 간염으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
  31. 치료적 유효량의 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 정의된 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 정의된 인간화 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간 또는 동물 피검체를 치료하는 방법.
  32. 치료적 유효량의 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 정의된 항원 결합 단백질 또는 제 14항 내지 제 18항 중 어느 한 항에 정의된 인간화 항체를 투여하는 것을 포함하는, 인간 또는 동물 피검체에서 병원성 T 세포의 개입과 관련된 질환을 치료하는 방법.
  33. 제 32항에 있어서, 질환이 자가면역 질환, 감염성 질환, 알레르기성 질환 또는 암인 치료 방법.
  34. 제 33항에 있어서, 자가면역 질환이 건선, 크론병, 류마티스 관절염, 원발성 담즙성 간경변, 전신홍반루푸스 (SLE), 쇼그렌 증후군, 다발경화증, 궤양성 대장염 및 자가면역 간염으로 구성된 군으로부터 선택되는 치료 방법.
KR1020157027994A 2013-03-15 2014-03-13 항­ｌａｇ­3 결합 단백질 KR101763352B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361789325P 2013-03-15 2013-03-15
US61/789,325 2013-03-15
PCT/EP2014/054967 WO2014140180A1 (en) 2013-03-15 2014-03-13 Anti-lag-3 binding proteins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150128879A true KR20150128879A (ko) 2015-11-18
KR101763352B1 KR101763352B1 (ko) 2017-07-31

Family

ID=50272641

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157027994A KR101763352B1 (ko) 2013-03-15 2014-03-13 항­ｌａｇ­3 결합 단백질

Country Status (35)

Country Link
US (6) US10344088B2 (ko)
EP (2) EP2970464B1 (ko)
JP (3) JP6224739B2 (ko)
KR (1) KR101763352B1 (ko)
CN (1) CN105209494B (ko)
AR (1) AR095432A1 (ko)
AU (1) AU2014230741B2 (ko)
CA (1) CA2902831C (ko)
CL (1) CL2015002517A1 (ko)
CR (1) CR20150492A (ko)
CY (1) CY1123220T1 (ko)
DK (1) DK2970464T3 (ko)
DO (1) DOP2015000243A (ko)
EA (1) EA037554B1 (ko)
ES (1) ES2808654T3 (ko)
HK (1) HK1219966A1 (ko)
HR (1) HRP20201113T1 (ko)
HU (1) HUE049957T2 (ko)
IL (1) IL240838B (ko)
LT (1) LT2970464T (ko)
MA (1) MA38498B1 (ko)
ME (1) ME03796B (ko)
MX (1) MX351349B (ko)
NZ (1) NZ711355A (ko)
PE (1) PE20151530A1 (ko)
PH (1) PH12015502039A1 (ko)
PL (1) PL2970464T3 (ko)
PT (1) PT2970464T (ko)
RS (1) RS60538B1 (ko)
SG (1) SG11201506807RA (ko)
SI (1) SI2970464T1 (ko)
TW (1) TWI658051B (ko)
UA (1) UA118750C2 (ko)
UY (1) UY35415A (ko)
WO (1) WO2014140180A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190045208A (ko) * 2016-09-08 2019-05-02 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 자기 면역 질환 치료용 항체

Families Citing this family (166)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2630328T3 (es) 2010-08-23 2017-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Anticuerpos anti-OX40 y procedimientos de uso de los mismos
WO2013013188A1 (en) 2011-07-21 2013-01-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic protein kinase inhibitors
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
KR101763352B1 (ko) * 2013-03-15 2017-07-31 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 항­ｌａｇ­3 결합 단백질
RS58705B1 (sr) 2013-09-20 2019-06-28 Bristol Myers Squibb Co Kombinacija anti-lag-3 antitela i anti-pd-1 antitela za lečenje tumora
JOP20200094A1 (ar) 2014-01-24 2017-06-16 Dana Farber Cancer Inst Inc جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
MA41463A (fr) * 2015-02-03 2017-12-12 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre le gène d'activation 3 des lymphocytes (lag-3)
MA53355A (fr) 2015-05-29 2022-03-16 Agenus Inc Anticorps anti-ctla-4 et leurs procédés d'utilisation
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
KR20180063881A (ko) 2015-07-16 2018-06-12 바이오카인 테라퓨틱스 리미티드 암 치료용 조성물 및 방법
PL3328419T3 (pl) 2015-07-30 2021-12-27 Macrogenics, Inc. Cząsteczki wiążące pd-1 i sposoby ich zastosowania
ES2842306T3 (es) * 2015-09-02 2021-07-13 Immutep Sas Anticuerpos anti LAG-3
UA124925C2 (en) 2015-10-02 2021-12-15 Hoffmann La Roche Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3
TWI756187B (zh) * 2015-10-09 2022-03-01 美商再生元醫藥公司 抗ｌａｇ３抗體及其用途
JP6945456B2 (ja) * 2015-11-13 2021-10-06 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｌａｇ‐３結合分子及びその使用方法
EP3377533A2 (en) * 2015-11-19 2018-09-26 Sutro Biopharma, Inc. Anti-lag3 antibodies, compositions comprising anti-lag3 antibodies and methods of making and using anti-lag3 antibodies
KR102424513B1 (ko) 2015-12-14 2022-07-25 마크로제닉스, 인크. Pd-1 및 ctla-4과의 면역반응성을 가진 이중특이적 분자, 및 이것의 사용 방법
BR112018012352A2 (pt) 2015-12-16 2018-12-11 Merck Sharp & Dohme Corp. anticorpos anti-lag3 e fragmentos de ligação ao antígeno
SG10201601719RA (en) * 2016-03-04 2017-10-30 Agency Science Tech & Res Anti-LAG-3 Antibodies
EP3848393A1 (en) 2016-05-18 2021-07-14 Boehringer Ingelheim International GmbH Antibody molecules for cancer treatment
JP7185530B2 (ja) 2016-06-13 2022-12-07 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫細胞機能を促進するための方法および組成物
EP3471753A1 (en) 2016-06-20 2019-04-24 Kymab Limited Anti-pd-l1 and il-2 cytokines
AU2017283181B2 (en) 2016-06-20 2024-08-15 F-Star Therapeutics Limited Binding molecules binding PD-L1 and LAG-3
RU2018142573A (ru) 2016-06-20 2020-07-21 Ф-Стар Бета Лимитед Партнеры по связыванию lag-3
PT3476399T (pt) * 2016-06-23 2022-05-31 Jiangsu Hengrui Medicine Co Anticorpo lag-3, fragmento de ligação a antigénio deste e aplicação farmacêutica deste
GB201612520D0 (en) 2016-07-19 2016-08-31 F-Star Beta Ltd Binding molecules
EA039718B1 (ru) * 2016-07-21 2022-03-03 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Антитела к lag3 и их применения
DK3347379T5 (da) 2016-08-17 2020-06-15 Compugen Ltd Anti-tigit-antistoffer, anti-pvrig-antistoffer og kombinationer deraf
AU2017343621B2 (en) 2016-10-11 2021-12-02 Agenus Inc. Anti-LAG-3 antibodies and methods of use thereof
MA46525A (fr) * 2016-10-13 2019-08-21 Symphogen As Anticorps anti-lag-3 et compositions
WO2018094275A1 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Tolero Pharmaceuticals, Inc. Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors
PT3551660T (pt) 2016-12-07 2023-11-30 Ludwig Inst For Cancer Res Ltd Anticorpos anti-ctla-4 e métodos de uso dos mesmos
CN118557758A (zh) 2017-02-10 2024-08-30 瑞泽恩制药公司 用于免疫-pet成像的放射性标记的抗-lag3抗体
JP6929951B2 (ja) * 2017-02-22 2021-09-01 アイ−エムエービー バイオファーマ （ハンジョウ） カンパニー リミテッド 抗ｌａｇ−３抗体およびその使用
PE20191494A1 (es) 2017-04-03 2019-10-21 Hoffmann La Roche Inmunoconjugados de un anticuerpo anti-pd-1 con un il-2 mutante o con il-15
TWI690538B (zh) 2017-04-05 2020-04-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 特異性結合至pd1至lag3的雙特異性抗體
CA3058960C (en) 2017-04-05 2023-08-29 Symphogen A/S Combination therapies targeting pd-1, tim-3, and lag-3
CA3053360A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-lag3 antibodies
EP3615572A1 (en) * 2017-04-27 2020-03-04 Tesaro Inc. Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
CA3060989A1 (en) 2017-05-30 2018-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
MX2019012032A (es) 2017-05-30 2019-10-30 Bristol Myers Squibb Co Tratamiento de tumores positivos a gen 3 de activacion de linfocitos (lag-3).
MX2019012076A (es) 2017-05-30 2019-12-09 Bristol Myers Squibb Co Composiciones que comprenden un anticuerpo anti gen-3 de activacion del linfocito (lag-3) o un anticuerpo anti-lag-3 y un anticuerpo anti muerte celular programada 1 (pd-1) o anti ligando 1 de muerte celular programada (pd-l1).
WO2018229715A1 (en) 2017-06-16 2018-12-20 Novartis Ag Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof
WO2018235056A1 (en) 2017-06-22 2018-12-27 Novartis Ag IL-1BETA BINDING ANTIBODIES FOR USE IN THE TREATMENT OF CANCER
US20190048072A1 (en) 2017-06-22 2019-02-14 Novartis Ag USE OF IL-1beta BINDING ANTIBODIES
SG11201912473PA (en) 2017-06-22 2020-01-30 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
WO2019006007A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Novartis Ag POSOLOGICAL REGIMES FOR ANTI-TIM3 ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2019011306A1 (en) * 2017-07-13 2019-01-17 Nanjing Leads Biolabs Co., Ltd. LAG-3 BINDING ANTIBODIES AND USES THEREOF
US20200172617A1 (en) 2017-07-20 2020-06-04 Novartis Ag Dosage regimens of anti-lag-3 antibodies and uses thereof
CN111372934B (zh) 2017-08-18 2024-04-26 科瑞华生物技术有限公司 Tg02的多晶型形式
EP3675898A4 (en) * 2017-08-30 2021-09-01 Phanes Therapeutics, Inc. ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND THEIR USES
US11497756B2 (en) 2017-09-12 2022-11-15 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib
US20200262917A1 (en) * 2017-10-05 2020-08-20 Daiichi Sankyo Company, Limited Composition for cytotoxic t cell depletion
US20210040205A1 (en) 2017-10-25 2021-02-11 Novartis Ag Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof
CN111655288A (zh) 2017-11-16 2020-09-11 诺华股份有限公司 组合疗法
WO2019108900A1 (en) 2017-11-30 2019-06-06 Novartis Ag Bcma-targeting chimeric antigen receptor, and uses thereof
CA3086098A1 (en) 2017-12-19 2019-06-27 F-Star Beta Limited Fc binding fragments comprising a pd-l1 antigen-binding site
AU2018391217A1 (en) 2017-12-22 2020-07-09 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. LAG-3 antibody pharmaceutical composition and use thereof
CN109970856B (zh) 2017-12-27 2022-08-23 信达生物制药(苏州)有限公司 抗lag-3抗体及其用途
US20200368268A1 (en) 2018-01-08 2020-11-26 Novartis Ag Immune-enhancing rnas for combination with chimeric antigen receptor therapy
AU2019215031A1 (en) 2018-01-31 2020-08-20 Novartis Ag Combination therapy using a chimeric antigen receptor
CN111655730A (zh) 2018-01-31 2020-09-11 豪夫迈·罗氏有限公司 包含与lag3结合的抗原结合位点的双特异性抗体
US20200399383A1 (en) 2018-02-13 2020-12-24 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
WO2019179365A1 (en) * 2018-03-20 2019-09-26 WuXi Biologics Ireland Limited Novel anti-lag-3 antibody polypeptide
WO2019192432A1 (zh) 2018-04-02 2019-10-10 上海博威生物医药有限公司 结合淋巴细胞活化基因-3(lag-3)的抗体及其用途
US20210147547A1 (en) 2018-04-13 2021-05-20 Novartis Ag Dosage Regimens For Anti-Pd-L1 Antibodies And Uses Thereof
AR126019A1 (es) 2018-05-30 2023-09-06 Novartis Ag Anticuerpos frente a entpd2, terapias de combinación y métodos de uso de los anticuerpos y las terapias de combinación
US20210214459A1 (en) 2018-05-31 2021-07-15 Novartis Ag Antibody molecules to cd73 and uses thereof
US11492409B2 (en) 2018-06-01 2022-11-08 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
CN110615840A (zh) * 2018-06-19 2019-12-27 信达生物制药(苏州)有限公司 全人源的抗lag-3抗体及其应用
JOP20210001A1 (ar) 2018-07-10 2021-01-05 Novartis Ag مشتقات 3-(5- هيدروكسي -1- أوكسو أيزو إندولين -2- يل) بيبريدين -2، 6- دايون واستخدامها لمعالجة أمراض مرتبطة ببروتين ذات أصبع الزنك من عائلة (ikaros 2 (ikzf2
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
GB201811408D0 (en) 2018-07-12 2018-08-29 F Star Beta Ltd CD137 Binding Molecules
WO2020021465A1 (en) 2018-07-25 2020-01-30 Advanced Accelerator Applications (Italy) S.R.L. Method of treatment of neuroendocrine tumors
EP3826660A1 (en) 2018-07-26 2021-06-02 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 combination therapy for the treatment of cancer
US20210338813A1 (en) 2018-10-19 2021-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Combination Therapy for Melanoma
EP3873532A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Novartis AG Dc-sign antibody drug conjugates
US11034710B2 (en) 2018-12-04 2021-06-15 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. CDK9 inhibitors and polymorphs thereof for use as agents for treatment of cancer
KR20210106437A (ko) 2018-12-20 2021-08-30 노파르티스 아게 3-(1-옥소이소인돌린-2-일)피페리딘-2,6-디온 유도체를 포함하는 투약 요법 및 약학적 조합물
WO2020128613A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
AU2019408408A1 (en) 2018-12-21 2021-06-03 Valerio Therapeutics New conjugated nucleic acid molecules and their uses
KR20210107730A (ko) 2018-12-21 2021-09-01 노파르티스 아게 골수 형성이상 증후군의 치료 또는 예방에서의 il-1 베타 항체의 용도
US20220056123A1 (en) 2018-12-21 2022-02-24 Novartis Ag Use of il-1beta binding antibodies
WO2020128637A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Use of il-1 binding antibodies in the treatment of a msi-h cancer
MX2021009371A (es) 2019-02-12 2021-09-10 Sumitomo Pharma Oncology Inc Formulaciones que comprenden inhibidores de proteina cinasa heterociclicos.
CN113490528A (zh) 2019-02-15 2021-10-08 诺华股份有限公司 3-(1-氧代-5-(哌啶-4-基)异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
EP3924055B1 (en) 2019-02-15 2024-04-03 Novartis AG Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EP3935581A4 (en) 2019-03-04 2022-11-30 Iocurrents, Inc. DATA COMPRESSION AND COMMUNICATION USING MACHINE LEARNING
US11793802B2 (en) 2019-03-20 2023-10-24 Sumitomo Pharma Oncology, Inc. Treatment of acute myeloid leukemia (AML) with venetoclax failure
MX2021011289A (es) 2019-03-22 2021-11-03 Sumitomo Pharma Oncology Inc Composiciones que comprenden moduladores de isoenzima m2 muscular de piruvato cinasa pkm2 y metodos de tratamiento que usan las mismas.
MX2021011753A (es) 2019-03-26 2022-01-31 Univ Michigan Regents Degradadores de moleculas peque?as de stat3.
WO2020205467A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 The Regents Of The University Of Michigan Stat3 protein degraders
EP3950375A4 (en) 2019-03-29 2022-12-21 Nitto Denko Corporation METHOD FOR MANUFACTURING LAMINATED BODY, METHOD FOR MANUFACTURING PAINTING OBJECT, JOINT STRUCTURE MANUFACTURING METHOD, THERMAL TRANSFER FILM AND LAMINATED BODY
JP2022532490A (ja) 2019-05-13 2022-07-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 癌の治療における有効性の増強のためのｐｄ－１阻害剤とｌａｇ－３阻害剤の組み合わせ
EP3976832A1 (en) 2019-05-30 2022-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
WO2020243570A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
WO2020243563A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
CN112010972B (zh) * 2019-05-31 2023-01-10 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 与人lag-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
JPWO2020250940A1 (ko) * 2019-06-11 2020-12-17
CN114269715A (zh) 2019-06-12 2022-04-01 范德比尔特大学 作为氨基酸转运抑制剂的二苄基胺
CA3141405A1 (en) 2019-06-12 2020-12-17 H. Charles Manning Amino acid transport inhibitors and the uses thereof
CA3145864A1 (en) 2019-07-03 2021-01-07 Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. Tyrosine kinase non-receptor 1 (tnk1) inhibitors and uses thereof
CA3138560A1 (en) 2019-07-16 2021-01-21 Shaomeng Wang Imidazopyrimidines as eed inhibitors and the use thereof
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
CN114641337A (zh) 2019-08-27 2022-06-17 密歇根大学董事会 Cereblon e3连接酶抑制剂
EP4031578A1 (en) 2019-09-18 2022-07-27 Novartis AG Entpd2 antibodies, combination therapies, and methods of using the antibodies and combination therapies
JP2022548775A (ja) 2019-09-19 2022-11-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン スピロ環式アンドロゲン受容体タンパク質分解剤
WO2021055994A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
KR20220103947A (ko) 2019-10-21 2022-07-25 노파르티스 아게 베네토클락스 및 tim-3 억제제를 사용한 조합 요법
AU2020370832A1 (en) 2019-10-21 2022-05-19 Novartis Ag TIM-3 inhibitors and uses thereof
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
AU2020380384A1 (en) 2019-11-08 2022-05-26 Bristol-Myers Squibb Company LAG-3 antagonist therapy for melanoma
MX2022007759A (es) 2019-12-20 2022-07-19 Novartis Ag Combinacion del anticuerpo anti tim-3 mbg453 y anticuerpo anti tgf-beta nis793, con o sin decitabina o el anticuerpo anti pd-1 spartalizumab, para el tratamiento de mielofibrosis y sindrome mielodisplasico.
KR20220128389A (ko) 2020-01-17 2022-09-20 노파르티스 아게 골수이형성 증후군 또는 만성 골수단핵구성 백혈병을 치료하는데 사용하기 위한 tim-3 억제제 및 저메틸화제를 포함하는 조합물
JP2023514152A (ja) 2020-02-06 2023-04-05 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｉｌ－１０およびその使用
US20230159573A1 (en) 2020-03-26 2023-05-25 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule stat protein degraders
TW202214857A (zh) 2020-06-19 2022-04-16 法商昂席歐公司 新型結合核酸分子及其用途
CN115916199A (zh) 2020-06-23 2023-04-04 诺华股份有限公司 包含3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物的给药方案
MX2023000197A (es) 2020-07-07 2023-02-22 BioNTech SE Arn terapeutico para el cancer positivo para vph.
WO2022011205A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Androgen receptor protein degraders
WO2022011204A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule androgen receptor protein degraders
EP4188549A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Novartis AG Heteroaryl substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
AU2021331476A1 (en) 2020-08-28 2023-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
JP2023538955A (ja) 2020-08-31 2023-09-12 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 細胞局在シグネチャーおよび免疫療法
WO2022043558A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
WO2022043557A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Advanced Accelerator Applications International Sa Method of treating psma-expressing cancers
MX2023004493A (es) 2020-10-23 2023-05-10 Bristol Myers Squibb Co Terapia de agonista del gen-3 de activacion del linfocito (lag-3) para cancer de pulmon.
WO2022097060A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022117572A2 (en) 2020-12-02 2022-06-09 Oncurious Nv An ltbr agonist in combination therapy against cancer
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
KR20220082558A (ko) 2020-12-10 2022-06-17 재단법인 의약바이오컨버젼스연구단 면역 증진 활성이 있는 신규 crs 단편 펩타이드 및 이의 용도
TW202237119A (zh) 2020-12-10 2022-10-01 美商住友製藥腫瘤公司 Ａｌｋ﹘５抑制劑和彼之用途
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022146947A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2022146948A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Subcutaneous administration of pd1/pd-l1 antibodies
US20240190874A1 (en) 2021-03-03 2024-06-13 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule degraders of androgen receptor
US20240166647A1 (en) 2021-03-03 2024-05-23 The Regents Of The University Of Michigan Cereblon Ligands
US20240181052A1 (en) 2021-03-29 2024-06-06 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment with a combination of a checkpoint inhibitor therapy and a car t cell therapy
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
PE20240327A1 (es) 2021-04-13 2024-02-22 Nuvalent Inc Heterociclos con sustitucion amino para tratar canceres con mutaciones de egfr
WO2022240741A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lag3 and gal3 inhibitory agents, xbp1, cs1, and cd138 peptides, and methods of use thereof
AR125874A1 (es) 2021-05-18 2023-08-23 Novartis Ag Terapias de combinación
KR20240046323A (ko) 2021-07-13 2024-04-08 비온테크 에스이 암에 대한 병용 요법에 있어서 cd40 및 cd137에 대한 다중특이 결합제
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
MX2024005053A (es) 2021-10-29 2024-05-10 Bristol Myers Squibb Co Terapia con antagonista del gen de activacion de linfocitos 3 (lag-3) para cancer hematologico.
IL313439A (en) 2021-12-16 2024-08-01 Valerio Therapeutics New conjugated nucleic acid molecules and their uses
MX2024008831A (es) 2022-01-26 2024-07-25 Bristol Myers Squibb Company Terapia combinada para carcinoma hepatocelular.
AU2023226078A1 (en) 2022-02-25 2024-08-22 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for colorectal carcinoma.
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
AU2023236289A1 (en) 2022-03-15 2024-08-15 Compugen Ltd. Il-18bp antagonist antibodies and their use in monotherapy and combination therapy in the treatment of cancer
WO2023178329A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Bristol-Myers Squibb Company Methods of isolating polypeptides
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023235847A1 (en) 2022-06-02 2023-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
WO2024116140A1 (en) 2022-12-01 2024-06-06 Medimmune Limited Combination therapy for treatment of cancer comprising anti-pd-l1 and anti-cd73 antibodies
WO2024126457A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors
WO2024137776A1 (en) 2022-12-21 2024-06-27 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy for lung cancer
US20240299601A1 (en) 2023-02-17 2024-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-lag3 antibodies for immuno-pet imaging
WO2024192033A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Combination of pd-1 inhibitors and lag-3 inhibitors for enhanced efficacy in treating melanoma
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57106673A (en) 1980-12-24 1982-07-02 Chugai Pharmaceut Co Ltd Dibenzo(b,f)(1,4)oxazepin derivative
US4666884A (en) 1984-04-10 1987-05-19 New England Deaconess Hospital Method of inhibiting binding of von Willebrand factor to human platelets and inducing interaction of platelets with vessel walls
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
US5976877A (en) 1990-01-08 1999-11-02 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Proteins produced by human lymphocytes DNA sequence encoding these proteins and their pharmaceutical and biological uses
WO1991014438A1 (en) 1990-03-20 1991-10-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Chimeric antibodies with receptor binding ligands in place of their constant region
GB9424449D0 (en) 1994-12-02 1995-01-18 Wellcome Found Antibodies
US5739277A (en) 1995-04-14 1998-04-14 Genentech Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US5747035A (en) 1995-04-14 1998-05-05 Genentech, Inc. Polypeptides with increased half-life for use in treating disorders involving the LFA-1 receptor
DK0843557T3 (da) 1995-07-21 2003-03-10 Inst Nat Sante Rech Med Fremgangsmåder til detektion, identifikation, isolation og selektiv mærkning og målsøgning af Th1-lymfocytter ved hjælp af LAG-3 protein
CA2249998A1 (en) 1996-03-27 1997-10-02 Crc For Biopharmaceutical Research Pty. Ltd. The use of antibodies against cd48 for the treatment of t and b cell lymphomas and leukemias
WO1997043316A1 (en) 1996-05-10 1997-11-20 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Physiologically active molecules with extended half-lives and methods of using same
US7259247B1 (en) 1997-09-23 2007-08-21 Bundersrespublik Deutschaland Letztvertreten Durch Den Direktor Des Robert-Koch-Institutes Anti-human T-cell costimulating polypeptide monoclonal antibodies
HUP0100813A3 (en) 1998-02-25 2003-08-28 Lexigen Pharmaceuticals Corp L Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
GB9809839D0 (en) 1998-05-09 1998-07-08 Glaxo Group Ltd Antibody
AU770555B2 (en) 1998-08-17 2004-02-26 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
KR20060067983A (ko) 1999-01-15 2006-06-20 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
EP2275541B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
JP4210454B2 (ja) 2001-03-27 2009-01-21 日本たばこ産業株式会社 炎症性腸疾患治療剤
US7504256B1 (en) 1999-10-19 2009-03-17 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for producing polypeptide
JP3597140B2 (ja) 2000-05-18 2004-12-02 日本たばこ産業株式会社 副刺激伝達分子ａｉｌｉｍに対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途
US6374470B1 (en) 2000-10-06 2002-04-23 Milliken & Company Face plate for spun-like textured yarn
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
ATE489395T1 (de) 2000-12-12 2010-12-15 Medimmune Llc Moleküle mit längeren halbwertszeiten, zusammensetzungen und deren verwendung
US20050089932A1 (en) 2001-04-26 2005-04-28 Avidia Research Institute Novel proteins with targeted binding
US20050053973A1 (en) 2001-04-26 2005-03-10 Avidia Research Institute Novel proteins with targeted binding
NZ592087A (en) 2001-08-03 2012-11-30 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
EP1572936A2 (en) 2002-03-05 2005-09-14 Eli Lilly And Company Heterologous g-csf fusion proteins
US9321832B2 (en) 2002-06-28 2016-04-26 Domantis Limited Ligand
FI1897548T4 (fi) 2003-02-28 2024-09-03 The Johns Hopkins University T-solujen säätely
PT1639011E (pt) 2003-06-30 2009-01-20 Domantis Ltd Anticorpos (dab) de domínio único peguilados
EP1675878A2 (en) 2003-10-24 2006-07-05 Avidia, Inc. Ldl receptor class a and egf domain monomers and multimers
SI1729795T1 (sl) 2004-02-09 2016-04-29 Human Genome Sciences, Inc. Albuminski fuzijski proteini
EP1740617B1 (en) 2004-04-23 2013-10-16 BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND letztvertreten durch das Robert Koch-Institut vertreten durch seinen Präsidenten Method for the treatment of t cell mediated conditions by depletion of icos-positive cells in vivo
AU2005269759A1 (en) 2004-07-21 2006-02-09 Glycofi, Inc. Immunoglobulins comprising predominantly a GlcNAc2Man3GlcNAc2 glycoform
CA2573359A1 (en) 2004-07-22 2006-02-02 Genentech, Inc. Method of treating sjogren's syndrome
JP4997108B2 (ja) 2005-07-22 2012-08-08 協和発酵キリン株式会社 遺伝子組換え抗体組成物
US7923538B2 (en) 2005-07-22 2011-04-12 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Recombinant antibody composition
US9244059B2 (en) 2007-04-30 2016-01-26 Immutep Parc Club Orsay Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
EP1987839A1 (en) * 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
WO2009033161A1 (en) * 2007-09-07 2009-03-12 The John Hopkins University Adenosine receptor agonists and antagonists to modulate t cell responses
AR072999A1 (es) * 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
KR101763352B1 (ko) 2013-03-15 2017-07-31 글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 디벨로프먼트 리미티드 항­ｌａｇ­3 결합 단백질

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190045208A (ko) * 2016-09-08 2019-05-02 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 자기 면역 질환 치료용 항체

Also Published As

Publication number Publication date
EP3712177A1 (en) 2020-09-23
WO2014140180A1 (en) 2014-09-18
HUE049957T2 (hu) 2020-11-30
EA201591467A1 (ru) 2016-04-29
US20190382482A1 (en) 2019-12-19
US20190276535A1 (en) 2019-09-12
BR112015022593A2 (pt) 2017-10-24
NZ711355A (en) 2020-06-26
MA38498A1 (fr) 2017-07-31
JP2016516681A (ja) 2016-06-09
DOP2015000243A (es) 2015-12-31
US20230295295A1 (en) 2023-09-21
JP6224739B2 (ja) 2017-11-01
ME03796B (me) 2021-04-20
MA38498B1 (fr) 2018-11-30
PT2970464T (pt) 2020-08-05
PE20151530A1 (es) 2015-11-06
AU2014230741B2 (en) 2017-04-13
CN105209494A (zh) 2015-12-30
UA118750C2 (uk) 2019-03-11
JP6833798B2 (ja) 2021-02-24
EP2970464B1 (en) 2020-05-06
CL2015002517A1 (es) 2016-07-08
AU2014230741A1 (en) 2015-10-08
DK2970464T3 (da) 2020-08-03
PL2970464T3 (pl) 2020-10-05
UY35415A (es) 2014-10-31
CA2902831A1 (en) 2014-09-18
CA2902831C (en) 2023-04-25
CR20150492A (es) 2015-11-20
SI2970464T1 (sl) 2020-08-31
SG11201506807RA (en) 2015-09-29
RS60538B1 (sr) 2020-08-31
HRP20201113T1 (hr) 2020-10-30
US10280221B2 (en) 2019-05-07
CY1123220T1 (el) 2021-10-29
LT2970464T (lt) 2020-08-25
MX351349B (es) 2017-10-11
US20230242642A1 (en) 2023-08-03
EA037554B1 (ru) 2021-04-13
MX2015012987A (es) 2015-12-15
TWI658051B (zh) 2019-05-01
IL240838B (en) 2022-09-01
IL240838A0 (en) 2015-10-29
JP2018007668A (ja) 2018-01-18
TW201525000A (zh) 2015-07-01
PH12015502039B1 (en) 2016-01-18
EP2970464A1 (en) 2016-01-20
JP2019068826A (ja) 2019-05-09
HK1219966A1 (zh) 2017-04-21
PH12015502039A1 (en) 2016-01-18
AR095432A1 (es) 2015-10-14
US20160017037A1 (en) 2016-01-21
KR101763352B1 (ko) 2017-07-31
US20140286935A1 (en) 2014-09-25
CN105209494B (zh) 2019-04-09
ES2808654T3 (es) 2021-03-01
US10344088B2 (en) 2019-07-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101763352B1 (ko) 항­ｌａｇ­3 결합 단백질
TWI817974B (zh) 細胞毒性誘導治療劑
TWI731861B (zh) FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
KR101797248B1 (ko) 최적화된 ｆｃ 변이체
KR20200037886A (ko) St2l 길항제 및 사용 방법
US20140286957A1 (en) ANTIBODIES TO CD1d
KR20210045442A (ko) 항-il1rap 항체 및 이의 사용 방법
US20240327530A1 (en) Antibodies that bind to il1rap and uses thereof
TW202035460A (zh) 抗ｉｌ－３６抗體及其使用方法
CN114728171A (zh) 抗tigit抗体及其应用
WO2017204277A1 (ja) 抗ＴＧＦ－ｂｅｔａ３抗体およびその使用
KR20230087552A (ko) Cd45를 다량체화하는 결합 분자
BR112015022593B1 (pt) Proteína de ligação de antígeno, anticorpo humanizado, molécula de ácido nucleico isolada, vetor de expressão, célula hospedeira microbiana e métodos de produção de uma proteína de ligação de antígeno e de um anticorpo humanizado, composição farmacêutica

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant