KR20140139122A - 고순도 고리형 펩티드 화합물 및 그 제조방법과 용도 - Google Patents

고순도 고리형 펩티드 화합물 및 그 제조방법과 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 구조식 I으로 표시되는 고순도 고리형 펩티드 화합물을 공개하였고, 여기서 R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내며, 순도는 99.0%보다 크거나 같다. 본 발명은 상기 고순도 고리형 펩티드 화합물의 제조방법 및 용도를 더 공개하였다.
Figure pct00041

식 I

Description

고순도 고리형 펩티드 화합물 및 그 제조방법과 용도{HIGH PURITY CYCLOPEPTIDE COMPOUND AS WELL AS PREPARATION METHOD AND USE THEREOF}
본 발명은 고순도 고리형 펩티드 화합물 및 그 제조방법에 관한 것인 바, 고순도 고리형 펩티드 화합물의 용도에 관한 것이기도 하다.
진균 감염은 면역 결함 환자 발병율과 사망율이 내려가지 않는 주요한 원인이다. 지난 20년간, 곰팡이 감염의 발병율은 현저히 증가되었는 바, 진균 감염의 고위험 군은 중증환자, 외과환자 및 인체 면역 결핍증 바이러스(HIV) 감염, 백혈병과 기타 종양 질병을 앓고 있는 환자이다. 기관 이식을 받은 환자도 마찬가지로 진균 감염의 고위험 군에 속한다.
에치노칸딘(Echinocandin)은 새로운 항진균 약물로서, 모닐리아(Monilia) 또는 누룩곰팡이가 초래한 감염 방면에서 효과가 양호하다. 이런 약물은 또한 카스포펀진(caspofungin)과 미카펀진(Micafungin)을 대표로 한다. 에치노칸딘계 약물은 1, 3-β글리코시드 결합의 형성을 억제하는 것을 통하여 진균을 억제함으로써 인체에 대한 손상을 진일보 감소하고, 효과적인 동시에 부작용을 최대한 감소한다. 이로써 이들은 사용과정에서 기존의 항진균 약보다 더욱 안전하다.
FK463은 미카펀진 나트륨이라고도 하며, 식 II로 표시되는 화합물(R는 나트륨 이온)이다. 일본 후지사와 회사(Japan Fujisawa Toyama Co., Ltd, Takaoka Plant)에서 개발하고, 그 상품명은 미카민(Mycamine)이며, 현재 정맥 투여의 항진균 약으로 많은 국가에서 판매되고 있다. 이는 식 III로 표시되는 화합물(R는 나트륨 이온 또는 수소 이온) FR901379을 전구체로 하고, 효소분해를 통하여 측쇄를 제거한 후 식 I로 표시되는 화합물(R는 나트륨 이온 또는 수소 이온) FR179642를 얻은 후(구체적인 방법은 미국 특허 US5376634, EP0431350 및 중국 특허 CN1161462C를 참조 바람), 화학 수식을 거쳐 얻은 것이다. 구체적인 제조 및 정제 방법은 특허 공개 WO9611210, WO9857923, WO2004014879를 참조하기 바란다.
Figure pct00001
I
Figure pct00002
II
Figure pct00003
III
구체적인 경로는 하기와 같다.
Figure pct00004
본 발명인은 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 통하여 기존의 미카펀진 제제에 대하여 분석을 진행하였는 바, 제제는 주요하게 불순물 6a, 불순물 7a, 불순물 8a, 불순물 9a와 불순물 10a를 함유한다는 것을 발견하였고, 제조 컬럼을 통하여 상기 불순물 6a, 불순물 7a, 불순물 8a, 불순물 9a와 불순물 10a에 대하여 소량 제조를 진행하였다. MS(질량 스펙트럼) 및 1H-NMR(핵자기공명)을 거쳐 구조를 확정하였는 바, 그 구조는 식 Ⅳa, Ⅴa, Ⅵa, Ⅶa, Ⅷa에 표시된 바와 같다.
불순물 6a의 화학명은 5-[(1S, 2S, 3S)-4-[(1S, 2R)-4-아미노-1-[[(2S, 3S, 4S)-2-카복스아마이드-3-히드록시-4-메틸-1-피롤]카르보닐]-2-히드록시-4-부티릴]아미노]-3-[[[(2S, 4R)-1-[(2S, 3R)-2-[[[(2S, 4R)-4, 5-디히드록시-1-[4-[5-[4-(페틸옥시)페닐기]-3-이소옥사졸]벤조일]-2-피롤]카르보닐]아미노]-3-히드록시 부틸]-4-히드록시-2-피롤]카르보닐]아미노]-1, 2-디히드록시-4-부티릴]-2-히드록시 벤젠 황산나트륨이고,
Figure pct00005
Ⅳa(불순물 6a)
불순물 6a의 MS와 1H-NMR 데이터는 하기와 같다.
MS: 1314.5[M+Na]+
1H-NMR(DMSO-d6): 0.81-1.03(6H, m), 1.12(3H, d), 1.3-1.7(4H, m), 1.7-2.1(5H, m), 2.11-2.41(3H, m), 2.52-2.62(lH, m), 3.03-3.14(lH, m), 3.62-4.65(15H, m), 4.70-5.22(10H, m), 5.24(lH, d), 5.53(lH, d), 6.53-6.71(3H, m), 7.12-7.70(7H, m), 7.82(2H, d), 7.83-8.24(5H, m), 8.61-9.11(2H, m)
불순물 7a의 화학명은 5-[(1S, 2S )-2-[(3S, 6S, 9S, 11R, 15S, 18S, 20R, 21R, 24S, 25S)-3-[(R)-2-카르바모일-1-히드록시 에틸]-11, 20, 21, 25-테트라히드록시-15-[(R)-1-히드록시 에틸]-2, 5, 8, 14, 17, 23-헥사카르보닐-18-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈아마이드]-1, 4, 7, 13, 16, 22-헥사니트로겐 헤테로트리시클릭[22.3.0.09, 13]헵타코산-6-기]-1, 2-디에탄올아민]-2-히드록시 벤젠 황산나트륨이고,
Figure pct00006
Ⅴa(불순물 7a)
불순물 7a의 MS와 1H-NMR 데이터는 하기와 같다.
MS: 1300.5[M+Na]+
1H-NMR(DMSO-d6): 0.87(3H, t), 1.12(3H, d), 1.42-1.65(4H, m), 1.62-2.16(6H, m), 2.11-2.43(3H, m), 2.51-2.65(lH, m), 3.04-3.11(lH, m), 3.62-4.63(15H, m), 4.71-5.23(10H, m), 5.24(lH, d), 5.69(lH, d), 6.51-6.72(3H, m), 7.11-7.74(7H, m), 7.83(2H, d), 7.84-8.11(4H, m), 8.26(lH, d), 8.61-9.12(2H, m)
불순물 8a의 화학명은 5-[(1S, 2S)-2-[(3S, 6S, 9S, 11R, 15S, 18S, 20R, 21R, 24S, 25S, 26S)-3-[(R)-2-카르바모일-1-히드록시 에틸]-11, 20, 21, 25-테트라히드록시-15-[(R)-1-히드록시메틸]-26-메틸-2, 5, 8, 14, 17, 23-헥사카르보닐-18-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈아마이드]-1, 4, 7, 13, 16, 22-헥사니트로겐 헤테로트리시클릭[22.3.0.09, 13]헵타코산-6-기]-1, 2-디히드록시 에틸]-2-히드록시 벤젠 황산나트륨이고,
Figure pct00007
Ⅵa (불순물 8a)
불순물 8a의 MS와 1H-NMR 데이터는 하기와 같다.
MS: 1300.4[M+Na]+
1H-NMR(DMSO-d6): 0.83-1.02 (6H, m), 1.32-1.72(4H, m), 1.75-2.14(6H, m), 2.13-2.46(3H, m), 2.52-2.64(lH, m), 3.01-3.13(lH, m), 3.62-4.64(15H, m), 4.72-5.22(10H, m), 5.24(lH, d), 5.53(lH, d), 6.52-6.73(3H, m), 7.11-7.75(7H, m), 7.85(2H, d), 7.85-8.17(4H, m), 8.27(lH, d), 8.65-9.12(2H, m)
불순물 9a의 화학명은 5-[(1S, 2S )-2-[(3S, 6S, 9S, 11R, 15S, 18S, 20R, 21S, 24S, 25S, 26S )-3-[(R)-2-카르바모일-1-히드록시 에틸]-11, 20, 21, 25-테트라히드록시-15-[(R)-1-히드록시 에틸]-26-메틸-2, 5, 8, 14, 17, 23-헥사카르보닐-18-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈아마이드]-1, 4, 7, 13, 16, 22-헥사니트로겐 헤테로트리시클릭[22.3.0.09, 13]헵타코산-6-기]-1, 2-디히드록시 에틸]-2-히드록시 벤젠 황산나트륨이고,
Figure pct00008
Ⅶa (불순물 9a)
불순물 9a의 MS와 1H-NMR 데이터는 하기와 같다.
MS: 1314.4[M+Na]+
1H-NMR(DMSO-d6): 0.87-1.11 (6H, t), 1.13(3H, d), 1.41-1.61(4H, m), 1.62-2.17(6H, m), 2.11-2.43(3H, m), 2.53-2.65(lH, m), 3.05-3.11(lH, m), 3.62-4.63(15H, m), 4.71-5.23(10H, m), 5.26(lH, d), 5.69(lH, d), 6.53-6.72(3H, m), 7.11-7.72(7H, m), 7.81(2H, d), 7.86-8.11(4H, m), 8.28(lH, d), 8.62-9.12(2H, m)
불순물 10a의 화학명은 5-[(1S, 2S )-2-[(3S, 6S, 9S, 11R, 15S, 18S, 20R, 21R, 24S, 25S, 26S )-3-[(R)-2-카르바모일-1-히드록시 에틸]-11, 21, 25-三히드록시-15-[(R)-1-히드록시 에틸]-26-메틸-2, 5, 8, 14, 17, 23-헥사카르보닐-18-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈아마이드]-1, 4, 7, 13, 16, 22-헥사니트로겐 헤테로트리시클릭[22.3.0.09, 13]헵타코산-6-기]-1, 2-디히드록시 에틸]-2-히드록시 벤젠 황산나트륨이고,
Figure pct00009
Ⅷa(불순물 10a)
불순물 10a의 MS와 1H-NMR 데이터는 하기와 같다.
MS: 1298.4[M+Na]+
1H-NMR(DMSO-d6 ): 0.87-1.11 (6H, t), 1.13(3H, d), 1.41-1.61(4H, m), 1.62-2.17(8H, m), 2.11-2.43(3H, m), 2.53-2.65(lH, m), 3.05-3.11(lH, m), 3.62-4.63(14H, m), 4.71-5.23(10H, m), 5.26(lH, d), 5.69(lH, d), 6.53-6.72(3H, m), 7.11-7.72(7H, m), 7.81(2H, d), 7.86-8.11(4H, m), 8.28(lH, d), 8.62-9.12(2H, m)
여기서, 불순물 6a의 함량은 0.3%보다 높고, 불순물 7a와 8a의 총함량은 0.6%보다 높으며, 불순물 9a의 함량은 0.2%보다 높고, 불순물 10a의 함량은 0.2%보다 높으며, 미카펀진의 함량은 단지 98.0% 좌우이다. 그러나, 미국 식품의약국(FDA)은 API가 최대한 불순물을 함유하지 말도록 요구하는 바, 그래야만 임상에 더욱 안전하게 응용될 수 있기 때문이다. 예를 들면, 미국 식품의약국은 일부 불순물의 함량은 0.1% 이하로 요구한다. 상세한 내용은 ICH Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical Ingredients, Q7A, Current Step 4 Version(November 10, 2000)를 참조하기 바란다.
WO03018615에서는 일정한 정제효과를 구비하는 미카펀진 나트륨(예를 들면, 식 II로 표시되는 화합물)의 결정화 방법에 대하여 설명하였다. 그러나 그 출원인 일본후지사와제약회사가 이 방법을 이용하여 얻은 미카펀진으로 생산하고 판매하는 미카펀진 나트륨 제제의 순도는 단지 98.0% 좌우로서 임상에 응용하기에는 일정한 위험성이 있다.
본 기술분야에 공지된 바와 같이, 약물 중간체의 순도가 높을 수록 화학 수식을 거친 최종 제품의 순도도 높다. 마찬가지로, 중간체인 식 I의 화합물의 순도가 높을 수록, 화학 수식을 거쳐 얻은 반응 후의 식 II의 화합물(FK463)의 순도도 높다. 만약 화학 수식을 거쳐 얻은 식 II의 화합물(FK463)의 순도가 높으면, 식 II의 화합물의 정제 단계의 공법 압력을 크게 감소할 수 있고, 이로써 간단한 정제 공법을 이용하여 고순도의 최종 약물 제품인 식 II의 화합물(FK463)을 얻을 수 있다. 미카펀진 구조유사물로부터, 예를 들면 불순물 6, 불순물 7, 불순물 8, 불순물 9, 불순물 10의 구조로부터 판단할 수 있는 바와 같이, 상기 미카펀진의 이런 구조유사물은 기본적으로 식 I의 화합물의 구조유사물이 화학 수식 반응을 거쳐 얻은 것이다.
Figure pct00010
IV 불순물 6
Figure pct00011
V 불순물 7
Figure pct00012
VI 불순물 8
Figure pct00013
VII 불순물 9

Figure pct00014
VIII 불순물 10
그러나, 식 I의 화합물의 구조유사물은 분리 정제 난이도가 아주 큰 바, 특히 정제 과정에서 순도와 수율을 동시에 고려해야 하므로 난이도가 더욱 커진다. CN91104847에서는 식 I의 화합물의 정제 분리에 대하여 설명하였고, 여기서 주요한 정제수단으로는 YMC GEL ODS-AM 120을 첨가제로 사용하고 고압제조액상을 이용하여 식 I의 화합물의 정제분리를 진행하는 것이다. 식 I의 화합물의 구조식으로부터 보아낼 수 있는 바와 같이, 식 I의 화합물은 극성이 아주 강하고 친수성이 우수하며, YMC GEL ODS-AM 120 첨가제 상에서의 유지성이 아주 약하다. 따라서, 식 I의 화합물이 YMC GEL ODS-AM 120를 첨가제로 사용하는 고압제조액상에서도 아주 좋은 정제효과를 얻을 수 없다. CN91104847에서 설명한 정제방법을 이용하여 얻은 식 I의 화합물의 순도는 단지 97.51%이다.
이 밖에, 발명인은 여러가지 본 기술분야에서 흔히 사용되는 정제방법을 시도하였는 바, 이온교환수지, 매크로포러스(macroporous) 흡착수지 및 C18 실리카 겔 결합 역상 제조 크로마토그래피와 구형 실리카의 정상 제조 크로마토그래피를 사용하여 식 I의 화합물에 대하여 크로마토그래피 정제를 진행하였지만 모두 총순도가 99.0% 이상인 식 I의 화합물을 얻지 못하였다.
본 발명인은 결정화 및/또는 재결정화 등 정제수단을 통하여 순도 97% 좌우의 식 I의 화합물을 총순도 990.% 이상까지 향상시켰고(바람직하게는 총순도 99.8% 이상), 단일 불순물은 모두 0.25%보다 작았다. 결정 정제 과정에서 수율이 높았기에 공업화 생산에 아주 적합하다.
WO9611210, WO03018615와 WO2004014879는 미카펀진의 합성 및 정제공법에 관한 내용을 보고하였다. 여기서, WO9611210는 제조컬럼을 사용하여 분리제조하였지만, 해당 방법은 대량의 유기 용매를 필요로 하기에 환경에 엄중한 오염을 초래하고 확대 생산이 어려우며 얻은 산물의 순도도 높지 않다. WO03018615, WO2004014879는 결정화 방법을 사용하여 정제를 진행하였지만 결정화의 결과는 불순물 6, 불순물 7, 불순물 8, 불순물 9와 불순물 10을 효과적으로 제거할 수 없다.
따라서, 본 발명인은 약물 중간체 단계에서 특정된 정제수단을 이용하여 약물 중간체 즉 식 I의 화합물을 고순도 중간체로 제조한 다음 화학 수식을 거쳐 고순도 식 II의 화합물(FK463) 얻고 미국 식품의약국의 요구에 부합되는 고순도 미카펀진을 제조할 필요성을 느꼈다.
본 발명의 목적은 식 I의 화합물과 같은 고순도 물질을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 고순도 물질(식 I의 화합물)의 제조방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 세번째 목적은 상기 고순도 물질(식 I의 화합물)의 용도를 제공하는데 있다.
본 발명의 네번째 목적은 다른 상기 고순도 물질(식 II의 화합물)을 제공하는데 있다.
본 발명의 다섯번째 목적은 다른 상기 고순도 물질(식 II의 화합물)의 제조방법을 제공하는데 있다.
고순도 식 I의 화합물
본 발명은 순도가 99.0%보다 크거나 같은 고순도 식 I의 화합물을 제공하는 바, 여기서 R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨이온 또는 디이소프로필에틸아민(diisopropylethylamine) 이온이다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 식 I의 화합물의 순도는 99.2%보다 크거나 같다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 식 I의 화합물의 순도는 99.5%보다 크거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 식 I의 화합물의 순도는 99.8%보다 크거나 같다.
여기서, 상기 식 I의 화합물의 순도는 고성능 액체크로마토그래피로 측정한다.
여기서, 상기 식 I의 화합물의 순도 및/또는 불순물 함량의 계산 방법은 고성능 액체크로마토그램에서 식 I의 화합물 및/또는 불순물의 피크 곡선하 면적을 고성능 액체크로마토그램의 총곡선하 면적으로 나누는 것이다.
여기서, 상기 고성능 액체크로마토그래피의 측정방법은 하기와 같다.
크로마토그래픽 컬럼: ACE 3 AQ, 150×4.6mm, 3μm
이동상: A: 1000ml의 물, 10ml메탄올, 100μl트리플루오로 아세트산(trifluoroacetic acid)
B: 600 ml의 물, 400ml 메탄올, 100μl트리플루오로 아세트산
유속: 0.55ml/min
컬럼 온도: 50℃
구배:
Figure pct00015
인젝터 온도: 5℃
검출 파장: 225nm
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 불순물 A의 함량은 0.25%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 A의 상대 보류시간(약칭: RRT)은 약 0.45, 즉 0.45±0.02이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 A의 함량은 0.10%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 A의 함량은 0.05%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 불순물 B의 함량은 0.25%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 B의 상대 보류시간(약칭: RRT)은 약 0.65, 즉 0.65±0.02이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 B의 함량은 0.15%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 B의 함량은 0.10%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 B의 함량은 0.03%~0.10%이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 B의 함량은 0.03%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 불순물 C의 함량은 0.25%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 C의 상대 보류시간(약칭: RRT)은 약 0.88, 즉 0.88±0.02。
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 C의 함량은 0.15%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 C의 함량은 0.10%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 C의 함량은 0.02%~0.10%이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 C의 함량은 0.02%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 불순물 D의 함량은 0.20%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 D의 상대 보류시간(약칭: RRT)은 약 1.08, 즉 1.08±0.02이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 D의 함량은 0.15%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 D의 함량은 0.10%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 D의 함량은 0.04%~0.10%이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 D의 함량은 0.04%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 불순물 E의 함량은 0.15%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 E의 상대 보류시간(약칭: RRT)은 약 1.29, 즉1.29±0.02이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 E의 함량은 0.10%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 E의 함량은 0.05%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 불순물 F의 함량은 0.15%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 F의 상대 보류시간(약칭: RRT) 약 1.92, 즉1.92±0.02이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 F의 함량은 0.10%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 불순물 F의 함량은 0.05%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 I의 화합물 중 임의의 기타 관련 불순물 함량은 0.10%보다 작거나 같고, 상기 기타 관련 불순물은 A~F를 제외한 존재가능한 불순물이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 임의의 기타 관련 불순물 함량은 0.05%보다 작거나 같다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 기타 관련 불순물 함량은 0%이다.
고순도 식 I의 화합물의 제조
발명인은 연구를 거쳐 식 I의 화합물이 물 또는 물 혼화성 저급 알코올의 혼합 용액에 용해되고, 식 I의 화합물을 함유하는 용해액이 포화용해도 부근에서 유지된다는 것을 발견하였다. 이때, 용해액의 pH를 규정된 범위 내로 유지하면 식 I의 화합물은 형태가 우월한 결정체를 형성한다. 이 결정화 과정은 아주 좋은 정제효과를 가지기에 이로써 고순도 식 I의 화합물을 제조해낼 수 있다. 이밖에, 식 I의 화합물은 고리형 펩티드 화합물이기에 아미노산이 축합될 때 형성된 펩티드 결합이 고온 용액에서 가수분해되어 분열된다. 따라서, 식 I의 화합물은 결정화 화정에서 일정한 온도로 제어하여 고리형 펩티드 물질이 고리 열림 분해되지 않도록 확보하여야 한다. 본 제조방법은 결정화 용매의 선별 측면에서 대량의 세밀한 작업을 진행하였는 바, 여기서 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 혼합용액에서 결정화되어 식 I의 화합물이 형태가 우월한 결정체를 형성하고, 결정화 과정은 괜찮은 정제효과를 구비한다. 그러나 아세톤, 아세토니트릴, 초산 에테르 등과 같은 용매에서 결정화되면, 식 I의 화합물은 무정형 침전을 형성하고, 상기 침전과정은 불순물을 제거하는 정제효과에 도달하지 못한다.
본 발명의 상기 제조방법은 하기와 같은 단계를 포함한다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물 조생성물을 물 또는 유기 용매(i)의 수성용액에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 온도 강하 및/또는 유기 용매(i)를 첨가하는 것을 통하여 상기 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃이고, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 유기 용매(i)의 수성용액에서 유기 용매(i)와 물의 체적비는 0.01 내지 100이고, 바람직하게는 0.1 내지 10이며, 보다 바람직하게는 0.5~3.0이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총 체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물은 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 100 내지 400mg/ml 함유한다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0로 제어되고, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 강하 온도는 -40 내지 35℃이고, 바람직하게는 -10 내지 35℃이며, 보다 바람직하게는 -5 내지 30℃이며, 가장 바람직하게는 5 내지 10℃이다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)와 단계 (a)의 상기 용해액의 체적비는 0.1 내지 50이고, 바람직하게는 0.1 내지 10이며, 가장 바람직하게는 1 내지 5이다.
여기서, 단계 (a) 및/또는 (b)에서 상기 유기 용매(i)는 C1-C4의 저급 알코올이고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택된다.
여기서, 단계 (b)에서 얻은 고순도 식 I의 화합물은 결정체이다.
여기서, 단계 (b) 이후에 하기와 같은 단계를 더 진행할 수 있다.
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 용매와 대부분의 물을 제거하여(건조) 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)~(b)는 1회 또는 그 이상 반복되어 재결정화를 진행하며, 바람직하게는 1회~4회 반복된다.
본 발명의 일 실시형태에서, 하기의 단계를 사용하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물을 물에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 용해액의 온도를 강하시켜 식 I의 화합물 결정체를 얻는 단계;
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 건조를 진행하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총 체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물을 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 100 내지 400mg/ml 함유한다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 강하 온도는 -10 내지 35℃, 바람직하게는 -5 내지 30℃, 가장 바람직하게는 5 내지 10℃이다.
본 발명의 다른 일 실시형태에서, 하기의 단계를 사용하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물을 물에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 유기 용매(i)를 첨가하여 식 I의 화합물 결정체를 완전히 석출시키는 단계;
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 결정체를 건조시켜 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총 체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물을 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 50 내지 300mg/ml 함유한다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)는 C1-C4의 저급 알코올이고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)와 단계 (a) 상기 용해액의 체적비는 0.1 내지 50, 바람직하게는 0.1 내지 10, 가장 바람직하게는 1 내지 5이다.
본 발명의 다른 일 실시형태에서, 하기의 단계를 사용하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물을 물에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 용액 온도를 강하시키는 동시에 유기 용매(i)를 첨가하여 식 I의 화합물 결정체를 완전히 석출시키는 단계;
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 결정체를 건조시켜 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물은 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 50 내지 300mg/ml 함유된다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)는 C1-C4의 저급 알코올이고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 강하 온도는 -40 내지 35℃이고 바람직하게는 -10 내지 35℃이며, 보다 바람직하게는 -5 내지 30℃이고, 가장 바람직하게는 5 내지 10℃이다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)와 단계 (a) 상기 용해액의 체적비는 0.1 내지 50, 바람직하게는 0.1 내지 10, 가장 바람직하게는 1 내지 5이다.
본 발명의 다른 일 실시형태에서, 하기의 단계를 사용하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물을 유기 용매(i)의 수성용액에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 용액 온도를 강하시켜 식 I의 화합물 결정체를 완전히 석출시키는 단계;
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 결정체를 건조시켜 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 유기 용매(i)의 수성용액 중 유기 용매(i)와 물의 체적비는 0.01 내지 100, 바람직하게는 0.1 내지 10, 더욱 바람직하게는 0.5~3.0이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물은 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 100 내지 400mg/ml 함유된다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 유기 용매(i)는 C1-C4의 저급 알코올이고 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 강하 온도는 -40 내지 35℃, 바람직하게는 -10 내지 35℃, 더욱 바람직하게는 -5 내지 30℃, 가장 바람직하게는 5 내지 10℃。
본 발명의 다른 일 실시형태에서, 하기의 단계를 사용하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물을 유기 용매(i)의 수성용액에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 유기 용매(i)를 첨가하여 식 I의 화합물 결정체를 완전히 석출시키는 단계;
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 결정체를 건조시켜 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 유기 용매(i)의 수성용액 중 유기 용매(i)와 물의 체적비는 0.01 내지 100, 바람직하게는 0.1 내지 10, 더욱 바람직하게는 0.5~3.0이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물은 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 100 내지 400mg/ml 함유된다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)와 단계 (a) 상기 용해액의 체적비는 0.1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 5이다.
여기서, 단계 (a)와 (b)에서 상기 유기 용매(i)는 C1-C4의 저급 알코올이고 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택된다.
본 발명의 다른 일 실시형태에서, 하기의 단계를 사용하여 고순도 식 I의 화합물을 얻는다.
(a) 식 I로 표시되는 화합물을 유기 용매(i)의 수성용액에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계;
(b) 온도를 강하시키는 동시에 유기 용매(i)를 첨가하여 식 I의 화합물 결정체를 완전히 석출시키는 단계;
(c) 원심 또는 여과 단계;
(d) 결정체를 건조시켜 고순도 식 I의 화합물을 얻는 단계.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해 온도는 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 40℃이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 유기 용매(i)의 수성용액 중 유기 용매(i)와 물의 체적비는 0.01 내지 100, 바람직하게는 0.1 내지 10, 더욱 바람직하게는 0.5~3.0이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 총체적에 대하여 식 I로 표시되는 화합물은 10 내지 500mg/ml, 바람직하게는 100 내지 400mg/ml 함유된다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 용해액의 pH는 2.0~5.0, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어된다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 강하 온도는 -40 내지 35℃, 바람직하게는 -10 내지 35℃, 보다 바람직하게는 -5 내지 30℃, 가장 바람직하게는 5 내지 10℃이다.
여기서, 단계 (b)에서 상기 유기 용매(i)와 단계 (a) 상기 용해액의 체적비는 0.1 내지 10, 바람직하게는 1 내지 5이다.
여기서, 단계 (a)에서 상기 유기 용매(i)는 C1-C4의 저급 알코올이고 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택된다.
본 발명이 제공한 방법으로 제조된 식 I의 화합물은 순도가 높기에 식 II의 화합물을 제조하기 더욱 좋다.
고순도 식 II의 화합물
본 발명의 일 측면은 고순도 식 II의 화합물을 제공하는 바, 그 고성능 액체크로마토그래피 순도는 98.8%보다 크거나 같고, 바람직하게는 99.0%보다 크거나 같고, 더욱 바람직하게는 99.5%보다 크거나 같고; 여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
여기서, 상기 식 II의 화합물의 순도는 고성능 액체크로마토그래피로 측정한다.
여기서, 상기 식 II의 화합물 순도 및/또는 불순물 함량의 계산 방법은 고성능 액체크로마토그램에서 식 II의 화합물 및/또는 불순물의 피크 곡선하 면적을 고성능 액체크로마토그램의 총곡선하 면적으로 나누는 것이다.
상기 식 Ⅱ 화합물의 액상 순도는 고성능 액체크로마토그래피 방법을 통하여 측정하고, 고성능 액체크로마토그래피 방법은 하기와 같다.
고성능 액체크로마토그래피 분석 컬럼: YMC-ODS 250*4.6mm, 5μm
이동상: 아세토니트릴: 인산염 완충액=70:45
용출 모드: 등용매
유속:1.15ml/min
컬럼 온도:35℃
검출 파장: 210nm
운행시간: 45min
희석액: 물의 인산염 완충액
본 발명의 바람직한 일 실시예에서, 상기 고순도 식 II의 화합물 중 불순물 6(구조는 식 IV에 표시된 바와 같음)의 함량은 0.2%보다 작고, 바람직하게는 0.1%보다 작으며, 보다 바람직하게는 0.05%보다 작고; 여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
Figure pct00016
IV 불순물 6
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 II의 화합물 중 불순물 7(구조는 식 V에 표시된 바와 같음)과 불순물 8(구조는 식 VI에 표시된 바와 같음)의 총함량은 0.5%보다 작고, 바람직하게는 0.3%보다 작으며, 보다 바람직하게는 0.1%보다 작고; 여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
Figure pct00017
V 불순물 7
Figure pct00018
VI 불순물 8
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 II의 화합물 중 불순물 9(구조는 식 VII에 표시된 바와 같음)의 함량은 0.2%보다 작고 바람직하게는 0.1%보다 작으며, 여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
Figure pct00019
VII 불순물 9
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 II의 화합물 중 불순물 10(구조는 식 VIII에 표시된 바와 같음)의 함량은 0.2%보다 작고, 바람직하게는 0.1%보다 작으며, 여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
Figure pct00020
VIII 불순물 10
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 II의 화합물 중 불순물 11의 함량은 0.15%보다 작거나 같고, 바람직하게는 0.1%보다 작거나 같으며, 가장 바람직하게는 0.05%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물 11의 상대 보류시간(약칭: RRT)은 약 0.96, 즉0.96±0.02이다.
본 발명의 다른 일 실시예에서, 상기 고순도 식 II의 화합물 중 기타 관련 불순물의 함량은 모두 0.02%보다 작거나 같고, 바람직하게는 0.01%보다 작거나 같으며, 가장 바람직하게는 0%이고, 상기 기타 관련 불순물은 불순물 6~11를 제외한 존재가능한 불순물이다.
고순도 식 II의 화합물의 제조방법
고순도 식 II의 화합물의 제조방법은 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 II의 화합물을 원료로 사용하여 식 Ⅱ로 표시되는 화합물을 제조하되, R는 H, 디이소프로필에틸아민 또는 기타 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하는 것을 특징으로 한다.
Figure pct00021
II
합성 경로는 WO9611210, 9857923, 2604014879 등과 같은 다수의 특허에서 모두 이미 보고되었다.
고순도 식 I의 화합물의 용도 및 그 조성물
본 발명에서는 고순도 식 I의 화합물의 용도를 제공한다. 일 측면에 따르면, 본 발명은 고순도 식 II의 화합물을 편리하게 제조하는데 사용될 수 있고, 여기서 R는 H, 디이소프로필에틸아민 또는 기타 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시한다.
다른 일 측면에 따르면, 본 발명이 제공하는 고순도 식 I의 화합물은 진균 감염을 치료하는 약물 제조하는데 직접 사용될 수도 있다. 본 발명은 고순도 식 I의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약물 조성물을 제공할 수 있다.
고순도 식 II의 화합물의 용도 및 그 조성물
본 발명에서는 고순도 식 II의 화합물의 용도를 제공한다. 본 발명이 제공하는 고순도 식 II의 화합물은 진균 감염을 치료하는 약물 제조하는데 직접 사용될 수도 있다. 본 발명은 고순도 식 II의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약물 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에서, 본 발명의 고순도 식 II의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 혼합하여 고순도 식 II의 화합물을 함유하는 약물 조성물을 얻는 고순도 식 II의 화합물을 포함하는 약물 조성물의 제조방법을 제공한다.
본문에 사용된 바와 같이, “식 I로 표시되는 화합물” 또는 “식Ⅰ 화합물”은 서로 바뀌어 사용될 수 있는 바, 모두 하기의 구조식을 가진 화합물 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 나타낸다.
Figure pct00022
I
여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
약학적으로 허용가능한 염은 바람직하게는 예를 들면 알칼리 금속염(예를 들면, 나트륨염, 칼륨염), 알칼리 토류금속염(예를 들면, 칼슘염, 마그네슘염 등), 암모늄염, 유기염기와 형성된 염(예를 들면, 트리메틸아민염, 트리에틸아민염, 피리딘염, 메틸피리딘염, 디사이클로헥실아민염, N, N, -벤질에틸렌디아민, 디이소프로필에틸아민염 등) 등, 유기산 첨가염(예를 들면, 포름산염, 초산염, 트리플루오로 아세트산염, 말레인산 염, 타르타르산염, 메틸황산염, 벤젠황산염, 메틸벤젠황산염 등), 무기산 첨가염(예를 들면, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 황산염, 인산염 등), 아미노산(예를 들면, 아르기닌, 아스파라긴산, 글루타민산 등)과 형성된 염 등과 같은 금속염을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, “식 II로 표시되는 화합물” 또는 “식 II의 화합물”은 서로 바뀌어 사용될 수 있는 바, 모두 하기의 구조식을 가진 화합물 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 나타낸다.
Figure pct00023
II
여기서, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 표시하고, 바람직하게는 H, 나트륨 이온 또는 디이소프로필에틸아민 이온이다.
약학적으로 허용가능한 염은 바람직하게는 예를 들면 알칼리 금속염(예를 들면, 나트륨염, 칼륨염), 알칼리 토류금속염(예를 들면, 칼슘염, 마그네슘염 등), 암모늄염, 유기염기와 형성된 염(예를 들면, 트리메틸아민염, 트리에틸아민염, 피리딘염, 메틸피리딘염, 디사이클로헥실아민염, N, N, -벤질에틸렌디아민, 디이소프로필에틸아민염 등) 등, 유기산 첨가염(예를 들면, 포름산염, 초산염, 트리플루오로 아세트산염, 말레인산 염, 타르타르산염, 메틸황산염, 벤젠황산염, 메틸벤젠황산염 등), 무기산 첨가염(예를 들면, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 황산염, 인산염 등), 아미노산(예를 들면, 아르기닌, 아스파라긴산, 글루타민산 등)과 형성된 염 등과 같은 금속염을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, “식 I로 표시되는 화합물의 순도”, “화합물I의 순도” 또는 “화합물I의 고성능 액체크로마토그래피 순도”는 서로 바뀌어 사용될 수 있는 바, 모두 본 발명에 의해 제공되는 고성능 액체크로마토그래피(HPLC) 검출 조건하에서 측정된 화합물I의 피크 면적과 모든 피크의 피크 면적의 합의 백분비를 의미한다.
본문에 사용된 바와 같이, “식 II로 표시되는 화합물의 순도”, “화합물 II의 순도” 또는 “화합물 II의 고성능 액체크로마토그래피 순도”는 서로 바뀌어 사용될 수 있는 바, 모두 본 발명에 의해 제공되는 고성능 액체크로마토그래피(HPLC) 검출 조건하에서 측정된 화합물II의 피크 면적과 모든 피크의 피크 면적의 합의 백분비를 의미한다.
본문에 사용된 바와 같이, “식 I로 표시되는 화합물의 조생성물” 또는 “화합물Ⅰ의 조생성물”은 서로 바뀌어 사용될 수 있는 바, 모두 본 발명에 의해 제공되는 고성능 액체크로마토그래피(HPLC) 검출 조건하에서, 화합물Ⅰ의 함량＜98％인 혼합물을 의미한다. 본 기술분야의 기존바법을 사용하여 화합물 I의 조생성물을 얻을 수 있다. 예를 들면, 미생물 발효산물 식 III 화합물을 시재료(starting material)로 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 아실이탈효소를 통하여 아실화를 제거하여 반합성 유도체(예를 들면, 식 I의 화합물)를 생성한 다음 다시 분리 정제를 거쳐 화합물 I의 조생성물을 얻는다. US5376634, EP0431350 및 CN1161462C에 공개된 화합물Ⅰ 조생성물의 제조방법을 참조하면, 일본 후지사와 회사와 같은 상업적인 경로를 통하여 얻을 수도 있지만 이에 한정되는 것은 아니다.
본문에 사용된 용어 “상대 보류시간(RRT)”은 일정한 고성능 액체크로마토그래피 조건하에서 어느 피크가 메인 피크에 대한 보류시간의 비를 의미하는 바, 예를 들면, 일정한 고성능 액체크로마토그래피 조건하에서 메인 피크의 보류시간이 1분이고, 다른 하나의 피크의 보류시간이 2분이라면 후자의 상대 보류시간(RRT)은 2이다.
본문에 사용된 용어 “상대 보류시간(RRT)”은 규정된 범위 내에서 오르내릴 수 있다. 알려진 바와 같이, 고성능 액상은 시스템 적응성 문제로 인해 일정한 시스템 편차가 존재할 수 있어 상대 보류시간(RRT)에 편이를 가져온다. 일반적으로 허용가능한 범위는 ±0.02이다. 예를 들면, 국가식약품감독관리국의 수입약품등록표준이 주사용 미카펀진 나트륨 및 관련 불순물에 대하여 규정된 상대 보류시간(RRT)의 범위이다.
본문에 사용된 바와 같이, “C1-C4의 저급 알코올”은 탄소 원자 개수가 1~4인 알코올류 물질을 의미한다.
약학적으로 허용가능한 염은 바람직하게는 예를 들면 알칼리 금속염(예를 들면, 나트륨염, 칼륨염), 알칼리 토류금속염(예를 들면, 칼슘염, 마그네슘염 등), 암모늄염, 유기염기와 형성된 염(예를 들면, 트리메틸아민염, 트리에틸아민염, 피리딘염, 메틸피리딘염, 디사이클로헥실아민염, N, N, -벤질에틸렌디아민, 디이소프로필에틸아민염 등) 등, 유기산 첨가염(예를 들면, 포름산염, 초산염, 트리플루오로 아세트산염, 말레인산 염, 타르타르산염, 메틸황산염, 벤젠황산염, 메틸벤젠황산염 등), 무기산 첨가염(예를 들면, 염산염, 브롬화수소산염, 요오드화수소산염, 황산염, 인산염 등), 아미노산(예를 들면, 아르기닌, 아스파라긴산, 글루타민산 등)과 형성된 염 등과 같은 금속염을 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “약학적으로 허용가능한 담체”는 치료제를 투여하기 위한 담체를 의미하는 바, 여러가지 부형제 및 희석제를 포함한다. 해당 용어는 자체는 필요한 유효성분고 사용 후 과도한 독성이 없는 약제 담체를 의미한다. 적합한 담체는 본 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 숙지된 것이다. Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Pub. Co., N.J. 1991)에서 약학적으로 허용가능한 부형제에 관한 충분한 토론을 찾아볼 수 있다. 조성물 중 약학적으로 허용가능한 담체는 물, 염수, 글리세린과 에탄올과 같은 액체를 포함한다. 이밖에, 이런 담체에는 붕해제, 습윤제, 유화제, pH 완충물질 등과 같은 보조성의 물질이 더 포함될 수 있다.
본 발명의 주요한 장점은 하기와 같다.
1. 본 발명은 식 I의 화합물의 순도를 크게 향상시키고, 그 중의 불순물을 크게 감소하여 순도가 아주 높은 식 I의 화합물을 얻어 선행기줄 중 해결하고자 하는 기술적 과제를 해결한다.
2. 본 발명은 제조조건에 대한 여러번의 반복적인 실험을 거쳐 특정된 제조조건을 선택하여 예기치 못한 기술적 효과를 발생하였는 바, 고순도 식 I의 화합물의 제조방법을 제공하였고 상기 방법은 대규모 생산에 아주 잘 적용되고 수율이 높다.
3. 본 발명은 고순도 식 II의 화합물의 새로운 제조방법을 제공하는 바, 고순도의 전구체 식 I의 화합물을 이용하여 식 II의 화합물을 제조함으로써 식 II의 화합물의 정제 단계의 공법 압력을 크게 감소하였고, 간단한 정제 공법을 이용하여 고순도의 최종약물 제품 - 식 II의 화합물을 얻는 동시에 수율도 대폭적으로 향상되어 예기치 못한 기술적 효과를 발생한다.
도 1은 식 I의 화합물 조생성물의 고성능 액체크로마토그래피 분석도이고, 여기서
Figure pct00024

이다.
도 2는 실시예 5에 의해 얻은 고순도 식 I의 화합물의 고성능 액체크로마토그래피 분석도이고, 여기서
Figure pct00025

이다.
도 3은 실시예 17에 의해 얻은 고순도 식 II의 화합물의 고성능 액체크로마토그래피 분석도이고, 여기서
Figure pct00026

이다.
도 4는 비교예 3에 의해 얻은 식 II의 화합물의 고성능 액체크로마토그래피 분석도이고, 여기서
Figure pct00027

이다.
도 5는 실시예 22에 의해 얻은 고순도 식 II의 화합물의 고성능 액체크로마토그래피 분석도이고, 여기서
Figure pct00028

이다.
도 6은 비교예 8에서 시판 미카펀진 나트륨 제제의 고성능 액체크로마토그래피 분석도이고, 여기서
Figure pct00029

이다.
이하, 구체적인 실시예를 결부하여 본 발명에 대해 진일보로 설명하기로 한다. 이런 실시예는 단지 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다. 하기의 실시예에서 구체적인 조건을 밝히지 않은 실험방법은 일반적으로 일반적인 조건 또는 제조상이 권장하는 조건에 따라 진행한다. 별도의 설명이 없는 한 모든 백분수, 비율, 비례 또는 분수는 중량에 따라 계산한다.
본 발명에서 중량 체적 백분비 중의 단위는 본 기술분야의 통상의 지식을 가진 자들이 숙지하고 있는 것인 바, 예를 들면 100ml의 용액 중 용질의 중량이다.
별도의 정의가 없는 한, 본문에서 사용된 모든 전업 및 과학 용어는 본 기술분야의 통상의 지식을 가진 자가 숙지하고 있는 의의와 동일하다. 이밖에, 임의의 기재된 내용과 동일하거나 동등한 방법 및 재료는 모두 본 발명의 방법에 응용될 수 있다. 본문에서 상기의 바람직한 실시방법과 잴는 단지 예시적인 것이다.
상기 식 I의 화합물의 액상 순도는 고성능 액체크로마토그래피 방법을 통하여 측정하고, 고성능 액체크로마토그래피 방법은 하기와 같다.
크로마토그래픽 컬럼: ACE 3 AQ, 150×4.6mm, 3μm
이동상: A: 1000ml의 물, 10ml메탄올, 100μl트리플루오로 아세트산
B: 600 ml의 물, 400ml 메탄올, 100μl트리플루오로 아세트산
유속: 0.55ml/min
컬럼 온도: 50℃
구배:
Figure pct00030
인젝터 온도: 5℃
검출 파장: 225nm
상기 식 Ⅱ 화합물의 액상 순도는 고성능 액체크로마토그래피 방법을 통하여 측정하고, 고성능 액체크로마토그래피 방법은 하기와 같다.
고성능 액체크로마토그래피분석 컬럼: YMC-ODS 250*4.6mm, 5μm
이동상: 아세토니트릴: 인산염 완충액=70:45
용출 모드: 등용매
유속:1.15ml/min
컬럼 온도:35℃
검출 파장: 210nm
운행시간: 45min
희석액: 물의 인산염 완충액
여기서, 식 Ⅱ 화합물 및 그 관련 불순물 상대 보류시간
Figure pct00031
실시예 1
화합물I 조생성물의 제조
미국 특허5376634 실시예 1의 방법을 참조하여 화합물I의 고체분말76g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 통하여 측정한 함량은 97.51%이다. 도 1의 고성능 액체크로마토그래피 분석도를 참조하기 바란다.
불순물의 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.42 0.49 0.67 0.28 0.30 0.20
실시예 2
고순도 식 I의 화합물의 제조
30℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 조생성물 3.6g을 25ml의 물과 20ml n-프로판올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.5로 조절하고, 용액을 15℃까지 냉각시켜, 화합물Ⅰ의 결정체가 석출되도록 한다. 15℃에서 계속하여 5시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 점점 커지게 한다. n-프로판올 90ml를 적가하고, 적가가 완료된 후, 15℃에서 1시간 교반한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 3.5g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.00%이다. 여기서 주요한 관련 불순물 함량은 표 2를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.16 0.22 0.20 0.19 0.13 0.04
실시예 3
고순도 식 I의 화합물의 제조
40℃의 온도에서 실시예 2에 의해 제조된 화합물Ⅰ(실시예 2에 의해 제조된 화합물Ⅰ의 고성능 액체크로마토그래피 순도는 99.00%이다) 3.5g을 19ml의 물과 16ml n-프로판올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 2.0로 조절하고, 용액을 15℃까지 냉각시켜, 화합물Ⅰ의 결정체가 석출되도록 한다. 15℃에서 계속하여 5시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 점점 커지게 한다. n-프로판올70ml를 적가하고, 적가가 완료된 후, 15℃에서 1시간 교반한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 3.4g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.23%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 3를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.12 0.19 0.17 0.16 0.10 0.03
실시예 4
고순도 식 I의 화합물의 제조
40℃의 온도에서 8ml의 물과 7ml n-프로판올의 혼합용액을 사용하고, 빙초산으로 pH를 5.0으로 조절한 다음 계속하여 화합물Ⅰ(실시예 3에 의해 제조된 화합물Ⅰ의 고성능 액체크로마토그래피 순도는 99.23%이다) 를 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 용액을 15℃까지 냉각시켜, 화합물Ⅰ의 결정체가 석출되도록 한다. 15℃에서 계속하여 5시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 점점 커지게 한다. n-프로판올30ml를 적가하고, 적가가 완료된 후, 15℃에서 1시간 교반한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 3.3g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.57%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 4를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.06 0.13 0.06 0.10 0.05 0.03
실시예 5
고순도 식 I의 화합물의 제조
40℃의 온도에서 8ml의 물과 7ml n-프로판올의 혼합용액을 사용하고, 빙초산으로 pH를 4.0으로 조절한 다음 계속하여 화합물Ⅰ(실시예 4에 의해 제조된 화합물Ⅰ의 고성능 액체크로마토그래피 순도는 99.57%이다) 를 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 용액을 15℃까지 냉각시켜, 화합물Ⅰ의 결정체가 석출되도록 한다. 15℃에서 계속하여 5시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 점점 커지게 한다. n-프로판올30ml를 적가하고, 적가가 완료된 후, 15℃에서 1시간 교반한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 3.2g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.81%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 5 및 도2의 고성능 액체크로마토그래피 분석도를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0 0.03 0.08 0.05 0.03 0
실시예 6
고순도 식 I의 화합물의 제조
30℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 2.6g을 8ml의 물에 용해시키고 빙초산을 사용하여 pH를 3.8로 조절하며 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. n-프로판올10ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 화합물Ⅰ을 함유하는 용해액의 온도를 천천히 15℃ 강하시키고 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과를 진행하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 30℃의 온도에서 다시 8ml의 물을 사용하고 빙초산으로 pH를 3.8로 조절한 다음 계속하여 화합물Ⅰ의 젖은 고체를 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 용액을 15℃까지 냉각시키고 n-프로판올10ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 상기 재결정화 단계를 반복하되, 3회의 재결정화 단계를 거친다. 감암 여과하여 식 I의 화합물을 얻고, 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 2.4g을 얻는다. 총 수율은 92.3%이고, 화합물 I가 고성능 액체크로마토그래피를 거쳐 검출된 순도는 99.81%이다.
실시예 7
고순도 식 I의 화합물의 제조
30℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.6g을 80ml의 물과 80ml의 에탄올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 2.8로 조절한 다음 온도를 천천히 -20℃까지 강하시키고 -20℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 에탄올 450ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.5g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.89%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 6을 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.24 0.23 0.21 0.19 0.14 0.10
실시예 8
고순도 식 I의 화합물의 제조
30℃의 온도에서 실시예 7에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.5g을 80ml의 물과 80ml의 에탄올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.0으로 조절한 다음 온도를 천천히 -20℃까지 강하시키고 -20℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 에탄올 450ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.4g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.36%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 7을 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.16 0.12 0.12 0.13 0.06 0.05
실시예 9
고순도 식 I의 화합물의 제조
30℃의 온도에서 실시예 8에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.4g을 80ml의 물과 80ml의 에탄올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.0으로 조절한 다음 온도를 천천히 -20℃까지 강하시키고 -20℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 에탄올 450ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.3g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.68%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 8을 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.10 0.04 0.10 0.04 0.02 0.02
실시예 10
고순도 식 I의 화합물의 제조
10℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.8g을 10ml의 물에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.5으로 조절한 다음 온도를 천천히 2℃까지 강하시키고 2℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 이소프로판올 40ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.5g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 98.89%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 9를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.20 0.24 0.23 0.15 0.14 0.15
실시예 11
고순도 식 I의 화합물의 제조
10℃의 온도에서 실시예 10에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.5g을 10ml의 물에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.5으로 조절한 다음 온도를 천천히 2℃까지 강하시키고 2℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 이소프로판올 40ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.4g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.41%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 10을 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.09 0.15 0.14 0.09 0.06 0.06
실시예 12
고순도 식 I의 화합물의 제조
10℃의 온도에서 실시예 11에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.4g을 10ml의 물에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.5으로 조절한 다음 온도를 천천히 2℃까지 강하시키고 2℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 이소프로판올 40ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.3g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.73%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 11을 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.03 0.07 0.06 0.07 0.02 0.02
실시예 13
고순도 식 I의 화합물의 제조
10℃의 온도에서 실시예 12에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.3g을 10ml의 물에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 3.5으로 조절한 다음 온도를 천천히 2℃까지 강하시키고 2℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 이소프로판올 40ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과 및 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.2g을 얻고, 고성능 액체크로마토그래피를 사용하여 측정한 순도는 99.90%이다. 여기서 관련 불순물 함량은 표 12를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.0 0.04 0.02 0.04 0.0 0.0
실시예 14
고순도 식 I의 화합물의 제조
20℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 2.0g을 5ml의 물과 15ml의 메탄올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 4.5으로 조절한 다음 용액을 10℃까지 냉각시켜 화합물Ⅰ의 결정체가 석출되도록 한 다음 온도를 천천히 -40℃까지 강하시키고 -40℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 메탄올 80ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과를 진행하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 20℃의 온도에서 5ml의 물과 16ml의 메탄올의 혼합용액을 사용하고 빙초산으로 pH를 4.5로 조절한 다음 계속하여 화합물Ⅰ의 젖은 고체를 용해시키고 30분간 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 용액을 10℃까지 냉각시켜 화합물 I의 결정체가 석출되도록 한 다음 온도를 천천히 -40℃까지 강하시키고 -40℃의 온도하에서 계속하여 2시간 교반한다. 메탄올 80ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 화합물Ⅰ의 결정체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과를 진행하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 상기 재결정화 단계를 반복하되, 3회의 재결정화를 거친다. 감암 여과하여 식 I의 화합물을 얻고, 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.5g을 얻는다. 총 수율은 89.0%이고, 화합물 I가 고성능 액체크로마토그래피를 거쳐 검출된 순도는 99.83%이다. 여기서 관련 불순물의 함량은 표 13을 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.01 0.03 0.02 0.10 0.01 0
실시예 15
고순도 식 I의 화합물의 제조
50℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 5.0g을 10ml의 물에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 빙초산을 사용하여 pH를 5.0으로 조절한 다음 용액을 30℃까지 냉각시켜 화합물Ⅰ의 결정체가 석출되도록 한 다음 온도를 천천히 2℃까지 강하시키고 2℃의 온도하에서 계속하여 10시간 교반한다. 감암 여과를 진행하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 50℃의 온도에서 9ml의 물을 사용하고 빙초산으로 pH를 5.0으로 조절한 다음 계속하여 화합물Ⅰ의 젖은 고체를 용해시키고 30분간 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 용액을 30℃까지 냉각시켜 화합물 I의 결정체가 석출되도록 한 다음 온도를 천천히 2℃까지 강하시키고 2℃의 온도하에서 계속하여 10시간 교반한다. 감암 여과하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 상기 재결정화 단계를 반복하되, 3회의 재결정화를 거친다. 감암 여과하여 식 I의 화합물을 얻고, 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 3.0g을 얻는다. 총 수율은 85.0%이고, 화합물 I가 고성능 액체크로마토그래피를 거쳐 검출된 순도는 99.85%이다. 여기서 관련 불순물의 함량은 표 14를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.02 0.05 0.01 0.01 0.02 0.04
비교예 1
pH 가 고순도 식 I의 화합물의 제조에 대한 영향
40℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 1.8g을 8ml의 물과 6ml의 이소프로판올의 혼합용액에 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. pH를 6.5로 조절하고 용액을 20℃로 냉각시켜 화합물 I의 고체가 석출되도록 한 다음 20℃하에서 계속하여 2시간 교반한다. 이소프로판올 35ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 식 I의 화합물의 고체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과를 진행하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 40℃의 온도에서 8ml의 물과 6ml의 이소프로판올의 혼합용액을 사용하고 pH를 6.5로 조절한 다음 계속하여 화합물Ⅰ의 젖은 고체를 용해시키고 교반하여 화합물Ⅰ이 완전히 용해되도록 한다. 용액을 20℃까지 냉각시켜 화합물 I의 고체가 석출되도록 한 다음 20℃의 온도에서 계속하여 2시간 교반한다. 이소프로판올 35ml를 천천히 적가하고 적가가 완료된 후, 다시 2시간 교반하여 식 I의 화합물의 고체가 완전히 석출되도록 한다. 감암 여과를 진행하여 식 I의 화합물의 젖은 고체를 얻는다. 상기 “재결정화” 단계를 반복하되, 4회의 ?怜甦ㅘ?를 거친다. 감암 여과하여 화합물 I을 얻고, 진공 건조를 진행하여 화합물Ⅰ 1.5g을 얻는다. 총 수율은 83.6%이고, 화합물 I가 고성능 액체크로마토그래피를 거쳐 검출된 순도는 98.90%이다. 여기서 관련 불순물의 함량은 표 15를 참조하기 바란다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.07 0.27 0.03 0.23 0.30 0.20
비교예 2
상이한 용매가 고순도 식 I의 화합물의 제조에 대한 영향
30℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 2.4g을 7ml의 물에 용해시키고 빙초산을 사용하여 pH를 3.8로 조절하고 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되도록 한다. 아세토니트릴15ml를 천천히 적가하고 2시간 교반하면 고체가 석출되는데, 현미경으로 관찰하면 거의 규칙적이지 않은 고정된 고체인 미시구조가 관찰된다. 감암 여과하여 얻은 화합물 I에 대하여 진공 건조를 진행한다. 고성능 액체크로마토그래피로 화합물Ⅰ 고체의 순도를 분석하면 97.57%이고, 여기서 관련 주요 불순물의 함량은 표 16을 참조하면 거의 변화가 없다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.42 0.48 0.64 0.26 0.40 0.23
18℃의 온도에서 실시예 1에 의해 제조된 화합물Ⅰ 2.1g을 7ml의 물에 용해시키고 빙초산을 사용하여 pH를 3.8로 조절하고 교반하여 화합물 I이 완전히 용해되도록 한다. 아세톤 20ml를 천천히 적가하고 2시간 교반하면 고체가 석출되는데, 현미경으로 관찰하면 거의 규칙적이지 않은 고체인 고정된 미시구조가 관찰된다. 감암 여과하여 얻은 화합물 I에 대하여 진공 건조를 진행한다. 고성능 액체크로마토그래피로 화합물Ⅰ 고체의 순도를 분석하면 97.79%이고, 여기서 관련 주요 불순물의 함량은 표 17을 참조하면 거의 변화가 없다.
불순물 명칭 불순물 A 불순물 B 불순물 C 불순물 D 불순물 E 불순물 F
상대 보류시간 0.45 0.65 0.88 1.08 1.29 1.92
함량 % 0.40 0.41 0.60 0.30 0.31 0.19
실시예 16
고순도 식 I의 화합물로 고순도 식 Ⅱ 화합물을 제조
WO2004014879 중의 미카펀진 합성 공법을 참조하여 식 I의 화합물로 식 Ⅱ 화합물의 합성을 진행한다.
본 발명의 실시예 2에 의해 얻은 식 I의 화합물(고성능 액체크로마토그래피 측정 순도는 99.00% (1.00g, 1.07mmol))을 DMF(디메틸포름아미드) 12ml에 용해시키고, 아이스 배쓰(ice bath)로 0℃ 이하까지 냉각시키며, 디이소프로필에틸아민(0.22g, 1.67mmol)을 첨가하고 온도를 0℃로 유지하며, MKC-8(1-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈옥시]-1H-1, 2, 3-벤조트리아졸)(0.53g, 1.14mmol)을 천천히 첨가하고, 온도를 2~6℃까지 상승시키며 4시간 동안 반응시키고, 반응이 완료 된 후 60ml초산 에테르를 직접 반응액에 첨가하고 계속하여 1시간 교반한다. 여과를 거쳐 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 얻는다. 상기 염을 아세톤 30ml과 초산 에테르 30ml에 용해시키고, 세척하고 풀이 먹인 후(wash and starch) 여과시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 진공 건조시켜 잔류 유기용매를 제거하고, 고성능 액체크로마토그래피로 측정한 미카펀진디이소프로필에틸아민염의 순도는 98.81%이고, 수율은 90.6%이다. 고성능 액체크로마토그래피 분석도 상에서 5분 이전의 크로마토그래피 피크는 용매피크와 반응 부산물 1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)이고, WO2004014879에서 소개된 정제 공법에서 간단히 제거된다. 여기서, 관련 주요 불순물의 함량은 표 18을 참조하기 바란다.
불순물 미지(unknown) 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.92 0.96 1.09
함량 % 0.02 0.03 0.04 0.03 0.21 0.20 0.08 0.13
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.13 1.26 1.35 1.63
함량 % 0.23 0.13 0.05 0.04
실시예 17
고순도 식 I의 화합물로 고순도 식 Ⅱ 화합물을 제조
WO2004014879 중의 미카펀진 합성 공법을 참조하여 식 I의 화합물로 식 Ⅱ 화합물의 합성을 진행한다.
본 발명의 실시예 3에 의해 얻은 식 I의 화합물(고성능 액체크로마토그래피 측정 순도는 99.23% (1.00g, 1.07mmol))을 DMF 12ml에 용해시키고, 아이스 배쓰(ice bath)로 0℃ 이하까지 냉각시키며, 디이소프로필에틸아민(0.22g, 1.67mmol)을 첨가하고 온도를 0℃로 유지하며, MKC-8(1-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈옥시]-1H-1, 2, 3-벤조트리아졸)(0.53g, 1.14mmol)을 천천히 첨가하고, 온도를 2~6℃까지 상승시키며 4시간 동안 반응시키고, 반응이 완료 된 후 60ml초산 에테르를 직접 반응액에 첨가하고 계속하여 1시간 교반한다. 여과를 거쳐 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 얻는다. 상기 염을 아세톤 30ml과 초산 에테르 30ml에 용해시키고, 세척하고 풀이 먹인 후 여과시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 진공 건조시켜 잔류 유기용매를 제거하고, 고성능 액체크로마토그래피로 측정한 미카펀진디이소프로필에틸아민염의 순도는 99.15%이고, 수율은 91.6%이다. 도 3의 고성능 액체크로마토그래피 분석도를 참조하면, 고성능 액체크로마토그래피 분석도 상에서 5분 이전의 크로마토그래피 피크는 용매피크와 반응 부산물 1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)이고, WO2004014879에서 소개된 정제 공법에서 간단히 제거된다. 여기서, 관련 주요 불순물의 함량은 표 19를 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.92 0.96 1.09
함량 % 0.03 0.05 0.04 0.05 0.0 0.17 0.08 0.0
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.13 1.26 1.35 1.63
함량 % 0.21 0.13 0.05 0.04
참고예 1
식 II의 화합물 조생성물 중 불순물 6~10의 제조
실시예 1에서 제조된 화합물 I의 조생성물을 원료료 사용하고, WO2004014879 실시예 중의 미카펀진 합성과 정제 공법을 참조하여 미카펀진의 나트륨염 23g을 제조하여 얻는다.
미카펀진의 나트륨염 약 5g을 50ml순수에 용해시키고,10회로 나누어 인젝터하며 제조 컬럼(Prep Nova-Pak?R 7.8*300mm)을 통하여 제조한다. 아세토니트릴:물=70:45로 용출하고, 각각 상대 보류시간이 0.71~0.74, 0.90~0.93, 1.08~1.10, 1.11~1.13인 유출액을 수집하고, 각각 농축, 건조를 진행하며, MS와 1H-NMR를 거쳐 분석하면, 상기 상대 보류시간에 대응되는 불순물은 각각 불순물 6, 불순물 7과8의 혼합물, 불순물 9 및 불순물 10이다. 구조식은 각각 식 IV, 식V, 식VI, 식VII와 식VIII에 표시된 바와 같다.
제조조건은 하기와 같다.
고성능 액체크로마토그래피 제조칼럼: Prep Nova-Pak?R 7.8*300mm
이동상: 아세토니트릴:물=70:45
용출 모드: 등용매
유속:4ml/min
컬럼 온도:35℃
운행시간: 40min
희석액: 순수
실시예 18
고순도 식 I의 화합물로 고순도 식 Ⅱ 화합물을 제조하고 단일 불순물 은 모두 0.1%보다 작다
WO2004014879 중의 미카펀진 합성 공법을 참조하여 식 I의 화합물로 식 Ⅱ 화합물의 합성을 진행한다.
본 발명의 실시예 4에 의해 얻은 식 I의 화합물(고성능 액체크로마토그래피 측정 순도는 99.57% (1.00g, 1.07mmol))을 DMF 12ml에 용해시키고, 아이스 배쓰(ice bath)로 0℃ 이하까지 냉각시키며, 디이소프로필에틸아민(0.22g, 1.67mmol)을 첨가하고 온도를 0℃로 유지하며, MKC-8(1-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈옥시]-1H-1, 2, 3-벤조트리아졸)(0.53g, 1.14mmol)을 천천히 첨가하고, 온도를 2~6℃까지 상승시키며 4시간 동안 반응시키고, 반응이 완료 된 후 60ml초산 에테르를 직접 반응액에 첨가하고 계속하여 1시간 교반한다. 여과를 거쳐 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 얻는다. 상기 염을 아세톤 30ml과 초산 에테르 30ml에 용해시키고, 세척하고 풀이 먹인 후 여과시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 진공 건조시켜 잔류 유기용매를 제거하고, 고성능 액체크로마토그래피로 측정한 미카펀진디이소프로필에틸아민염의 순도는 99.49%이고, 수율은 95.1%이다. 여기서, 관련 주요 불순물의 함량은 표 20을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.92 0.96 1.09
함량 % 0.01 0.02 0.02 0.05 0.0 0.09 0.06 0.0
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.13 1.26 1.35 1.63
함량 % 0.09 0.08 0.05 0.04
실시예 19
고순도 식 I의 화합물로 고순도 식 Ⅱ 화합물을 제조하고 단일 불순물 은 모두 0.1%보다 작다
WO2004014879 중의 미카펀진 합성 공법을 참조하여 식 I의 화합물로 식 Ⅱ 화합물의 합성을 진행한다.
본 발명의 실시예 5에 의해 얻은 식 I의 화합물(고성능 액체크로마토그래피 측정 순도는 99.81% (1.00g, 1.07mmol))을 DMF 12ml에 용해시키고, 아이스 배쓰(ice bath)로 0℃ 이하까지 냉각시키며, 디이소프로필에틸아민(0.22g, 1.67mmol)을 첨가하고 온도를 0℃로 유지하며, MKC-8(1-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈옥시]-1H-1, 2, 3-벤조트리아졸)(0.53g, 1.14mmol)을 천천히 첨가하고, 온도를 2~6℃까지 상승시키며 4시간 동안 반응시키고, 반응이 완료 된 후 60ml초산 에테르를 직접 반응액에 첨가하고 계속하여 1시간 교반한다. 여과를 거쳐 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 얻는다. 상기 염을 아세톤 30ml과 초산 에테르 30ml에 용해시키고, 세척하고 풀이 먹인 후 여과시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 진공 건조시켜 잔류 유기용매를 제거하고, 고성능 액체크로마토그래피로 측정한 미카펀진디이소프로필에틸아민염의 순도는 99.80%이고, 수율은 97.5%이다. 여기서, 관련 주요 불순물의 함량은 표 21을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.92 0.96 1.09
함량 % 0.0 0.0 0.0 0.03 0.0 0.05 0.04 0.0
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.13 1.26 1.35 1.63
함량 % 0.05 0.02 0.01 0.0
비교예 3
식 I의 화합물 조생성물로 식 Ⅱ 화합물을 제조
WO2004014879 중의 미카펀진 합성 공법을 참조하여 식 I의 화합물로 식 Ⅱ 화합물의 합성을 진행한다.
본 발명의 실시예 1에 의해 얻은 식 I의 화합물(고성능 액체크로마토그래피 측정 순도는 97.51% (10.07mmol))을 DMF 12ml에 용해시키고, 아이스 배쓰(ice bath)로 0℃ 이하까지 냉각시키며, 디이소프로필에틸아민(2.2g, 16.7mmol)을 첨가하고 온도를 0℃로 유지하며, MKC-8(1-[4-[5-(4-페틸옥시페닐기)이소옥사졸-3-기]벤즈옥시]-1H-1, 2, 3-벤조트리아졸)(5.3g, 11.4mmol)을 천천히 첨가하고, 온도를 2~6℃까지 상승시키며 4시간 동안 반응시키고, 반응이 완료 된 후 600ml초산 에테르를 직접 반응액에 첨가하고 계속하여 1시간 교반한다. 여과를 거쳐 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 얻는다. 상기 염을 아세톤 300ml과 초산 에테르 300ml에 용해시키고, 세척하고 풀이 먹인 후 여과시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 진공 건조시켜 잔류 유기용매를 제거하고, 고성능 액체크로마토그래피로 측정한 미카펀진디이소프로필에틸아민염의 순도는 95.75%이고, 수율은 75.2%이다. 도 4의 고성능 액체크로마토그래피 분석도를 참조하면, 고성능 액체크로마토그래피 분석도 상에서 5분 이전의 크로마토그래피 피크는 용매피크와 반응 부산물 1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)이고, WO2004014879에서 소개된 정제 공법에서 간단히 제거된다. 여기서, 관련 주요 불순물의 함량은 표 22를 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.44 0.54 0.61 0.64 0.73 0.92 0.96 1.09
함량 % 0.21 0.18 0.04 0.03 0.07 0.29 0.26 0.81
불순물 불순물 10 미지 미지 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.13 1.17 1.27 1.39 1.49 1.78
함량 % 1.43 0.17 0.28 0.38 0.06 0.04
실시예 20
고순도 미카펀진디이소프로필에틸아민 염으로 고순도 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 실시예 16에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(0.97mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 75%의 메탄올 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 정제물로 수집액을 메탄올의 농도가 35%가 될 때까지 희석시키고, 인젝터하여, 전처리된 50ml HP20ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 35%의 메탄올 수용액을 사용하여 100ml를 용출한 다음 80%의 메탄올 수용액을 사용하여 용출하되, 80%의 메탄올 수용액의 사용량은 200ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.90mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 93%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 99.00%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 23을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.0 0.0 0.02 0.02 0.19 0.20 0.08 0.13
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.20 1.26 1.35
함량 % 0.23 0.04 0.09 0.0
비교예 4
비교예 3에 의해 제조된 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 비교예 3에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(0.97mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 75%의 메탄올 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 정제물로 수집액을 메탄올의 농도가 35%가 될 때까지 희석시키고, 인젝터하여, 전처리된 50ml HP20ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 35%의 메탄올 수용액을 사용하여 100ml를 용출한 다음 80%의 메탄올 수용액을 사용하여 용출하되, 80%의 메탄올 수용액의 사용량은 200ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.88mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 91%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 96.17%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 24를 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.62 0.64 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.15 0.12 0.03 0.03 0.05 0.30 0.26 0.81
불순물 불순물 10 미지 미지 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.19 1.26 1.38 1.49 1.78
함량 % 1.43 0.16 0.29 0.20 0.0 0.0
실시예 20과 비교예 4로부터 현저하게 보아낼 수 있는 바, 고순도 식 I의 화합물(순도99.0%)을 이용하여 제조된 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염은 간단한 정제단계를 거쳐 순도가 98.99%의 미카펀진 나트륨을 얻을 수 있다. 미국 특허5376634의 실시예 1를 이용하여 제조된 식 I의 화합물(순도97.51%)을 이용하여 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염과 동일한 정제단계를 거쳐 얻은 미카펀진 나트륨 순도는 단지 96.16%이다. 고순도 식 I의 화합물로 제조된 미카펀진 나트륨은 순도 상에서 현저한 우세를 구비한다.
실시예 21
고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 고순도 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 실시예 17에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(0.98mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 정제 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 인젝터하고, 전처리된 40ml SP-207ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 35%의 에탄올 수용액을 사용하여 120ml를 용출한 다음 80%의 에탄올 수용액을 사용하여 용출하되, 80%의 메탄올 수용액의 사용량은 150ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.92mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 93.9%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 99.40%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 25를 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.0 0.02 0.02 0.04 0.0 0.15 0.07 0.0
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.20 1.26 1.35
함량 % 0.21 0.02 0.07 0.0
비교예 5
비교예 3에 의해 제조된 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 비교예 3에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(0.98mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 정제 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 인젝터하고, 전처리된 40ml SP-207ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 35%의 에탄올 수용액을 사용하여 120ml를 용출한 다음 80%의 에탄올 수용액을 사용하여 용출하되, 80%의 메탄올 수용액의 사용량은 150ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.84mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 86.1%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 96.16%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 26을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.62 0.64 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.13 0.10 0.02 0.04 0.09 0.30 0.26 0.81
불순물 불순물 10 미지 미지 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.19 1.26 1.38 1.49 1.78
함량 % 1.43 0.16 0.29 0.20 0.01 0.0
실시예 21과 비교예 5로부터 현저하게 보아낼 수 있는 바, 고순도 식 I의 화합물(순도99.23%)을 이용하여 제조된 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염은 간단한 정제단계를 거쳐 순도가 99.40%의 미카펀진 나트륨을 얻을 수 있다. 미국 특허5376634의 실시예 1를 이용하여 제조된 식 I의 화합물(순도97.51%)을 이용하여 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염과 동일한 정제단계를 거쳐 얻은 미카펀진 나트륨 순도는 단지 96.16%이다. 고순도 식 I의 화합물로 제조된 미카펀진 나트륨은 순도 상에서 현저한 우세를 구비한다.
실시예 22
고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 단일 불순물 이 모두 0.1%보다 작은 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 실시예 18에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(1.01mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 정제 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 인젝터하고, 전처리된 40ml SP-207ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 30%의 아세톤 수용액을 사용하여 100ml를 용출한 다음 80%의 아세톤 수용액을 사용하여 용출하되, 80%의 메탄올 수용액의 사용량은 150ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.92mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 91.1%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 99.79%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 고성능 액체크로마토그램은 도 5를 참조하고, 관련 주요 불순물의 함량은 표 27을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 불순물 11 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.09 0.03 0.0
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.20 1.26 1.35
함량 % 0.05 0.04 0.0 0.0
비교예 6
비교예 3에 의해 제조된 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 비교예 3에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(1.01mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 정제 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 인젝터하고, 전처리된 40ml SP-207ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 30%의 아세톤 수용액을 사용하여 100ml를 용출한 다음 80%의 아세톤 수용액을 사용하여 용출하되, 80%의 메탄올 수용액의 사용량은 150ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.83mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 82.1%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 96.29%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 28을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 미지 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.62 0.64 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.13 0.10 0.02 0.04 0.09 0.28 0.25 0.80
불순물 불순물 10 미지 미지 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.19 1.26 1.38 1.49 1.78
함량 % 1.40 0.16 0.29 0.15 0.00 0.0
실시예 22와 비교예 6으로부터 현저하게 보아낼 수 있는 바, 고순도 식 I의 화합물(순도99.57%)을 이용하여 제조된 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염은 간단한 정제단계를 거쳐 순도가 99.79%의 미카펀진 나트륨을 얻을 수 있다. 미국 특허5376634의 실시예 1를 이용하여 제조된 식 I의 화합물(순도97.51%)을 이용하여 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염과 동일한 정제단계를 거쳐 얻은 미카펀진 나트륨 순도는 단지 96.29%이다. 고순도 식 I의 화합물로 제조된 미카펀진 나트륨은 순도 상에서 현저한 우세를 구비한다.
실시예 23
고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 단일 불순물 이 모두 0.1%보다 작은 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 실시예 19에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(1.04mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 정제 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 인젝터하고, 전처리된 40ml SP-207ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 30%의 에탄올 수용액을 사용하여 200ml를 용출한 다음 70%의 에탄올 수용액을 사용하여 용출하되, 70%의 메탄올 수용액의 사용량은 200ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.92mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 88.5%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 99.88%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 29를 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 미지 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.57 0.62 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.04 0.03 0.0
불순물 불순물 10 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.20 1.26 1.35
함량 % 0.05 0.0 0.0 0.0
비교예 7
비교예 3에 의해 제조된 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨을 제조
WO2004014879 중의 실시예 6의 제조공법을 참조하여 미카펀진 디이소프로필에틸아민염으로 미카펀진 나트륨염을 제조한다.
본 발명 비교예 3에 의해 제조된 미카펀진 디이소프로필에틸아민염 고체(1.04mmol)를 모두 15ml, 75%의 메탄올 수용액에 용해시킨다. 미카펀진 디이소프로필에틸아민염을 함유하는 용해액을 30ml UBK510L 이온교환수지에 인젝터하고, 정제 수용액으로 용출시키며, 미카펀진 나트륨이 1.0g/L보다 낮을 때까지 용출되면 수집을 중지한다. 0.1mol/L의 수산화나트륨으로 수집액의 pH를 6.0으로 제어한다. 인젝터하고, 전처리된 40ml SP-207ss의 매크로포러스 흡착수지를 사용하여 흡착을 진행한다. 우선, 30%의 에탄올 수용액을 사용하여 200ml를 용출한 다음 70%의 에탄올 수용액을 사용하여 용출하되, 70%의 메탄올 수용액의 사용량은 200ml이다. 미카펀진 나트륨이 0.5g/L보다 크면 수집을 시작하고, 테일이 0.5g/l보다 작을 때까지 용출되면 수집을 중지하여, 농도 규정에 부합되는 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분을 수집하고, 고성능 액체크로마토그래피로 미카펀진 나트륨(0.86mmol)에 대하여 정량 분석을 진행하면, 수율은 82.7%이다. 빛을 피하고, 미카펀진 나트륨을 함유하는 조성성분 병합액을 직접 감암 증류시켜 고체를 얻고, 진공 건조를 진행하며, 고성능 액체크로마토그래피로 분석한 미카펀진 나트륨의 순도는 96.29%이다. 여기서 반응 부산물1-히드록시벤조트리아졸(HOBT)은 완전히 제거된다. 관련 주요 불순물의 함량은 표 30을 참조하기 바란다.
불순물 미지 미지 미지 미지 불순물 6 불순물 7과 8 미지 불순물 9
상대 보류시간 0.4 0.54 0.62 0.64 0.72 0.91 0.95 1.09
함량 % 0.13 0.10 0.02 0.04 0.09 0.28 0.25 0.80
불순물 불순물 10 미지 미지 미지 미지 미지
상대 보류시간 1.12 1.19 1.26 1.38 1.49 1.78
함량 % 1.40 0.16 0.29 0.15 0.00 0.0
실시예 23과 비교예 7로부터 현저하게 보아낼 수 있는 바, 고순도 식 I의 화합물(순도99.81%)을 이용하여 제조된 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염은 간단한 정제단계를 거쳐 순도가 99.88%의 미카펀진 나트륨을 얻을 수 있다. 미국 특허5376634의 실시예 1를 이용하여 제조된 식 I의 화합물(순도97.51%)을 이용하여 고순도 미카펀진 디이소프로필에틸아민염과 동일한 정제단계를 거쳐 얻은 미카펀진 나트륨 순도는 단지 96.29%이다. 고순도 식 I의 화합물로 제조된 미카펀진 나트륨은 순도 상에서 현저한 우세를 구비한다.
비교예 8
시판 제제 제품과 불순물 함량 비교
시판 제제 제품: 상품명칭: 미카민
통용명: 주사용 미카펀진 나트륨
제조상: 아스텔라스토요마주식회사(Astellas Toyama Co.,Ltd)
로트번호: 0901
표 31은 본 발명에 의해 제조된 고순도 식 II의 화합물과 시판 제제 제품의 불순물 함량 비교이다.
산물 상대 보류시간 고성능 액체크로마토그래피 순도/고성능 액체크로마토그래피함량
시판 제제 제품 실시예 22
미카펀진
(식 II의 화합물)		 1.0 98.01% 99.79
불순물 6 0.71-0.74 0.34% -
불순물 7 0.90-0.93 0.71% 0.09
불순물 8 0.90-0.93
불순물 9 1.08-1.10 0.28 -
불순물 10 1.11-1.13 0.21 0.05
불순물 11 0.94-0.98 0.18 0.03
-: 해당 불순물이 검출되지 않았음을 표시함
표 31로부터 보아낼 수 있는 바, 본 발명에 의해 제조된 고순도 미카펀진 나트륨의 순도는 시판 제제 제품보다 현저히 높고, 그중 불순물 6, 불순물 7, 불순물 8, 불순물 9, 불순물 10 및 불순물 11의 함량은 모두 시판 제제 제품보다 크게 낮다. 그 고성능 액체크로마토그램은 도 5를 참조하고, 시판 제제 제품의 성능액체크로마토그램은 도 6을 참조하기 바란다.
실시예 24
화합물Ⅰ 약물 조성물의 제조
Figure pct00032
유당을 50℃보다 낮은 온도로 가열하면서 순수(200ml)에 용해시킨다. 20℃에 냉각시킨 후 유당 용액에 실시예 3에 의해 제조된 고순도 화합물 I를 첨가하고, 온화하게 교반하면서 기포가 산생되는 것을 방지한다. 2%의 구연산 수용액(0.95ml)을 첨가한 후 용액에 0.4%의 수산화나트륨 수용액(약 24ml)을 넣어 pH를 5.5로 조절한 다음 순수를 사용하여 희석함으로써 예정된 체적(250ml)에 도달한다. 얻은 용액을 100개의 10ml 체적의 관형 병에 나누어 담고, 각 관형 병은 2.5ml이다. 통상적인 방법을 사용하고, 동결건조기를 사용하여 각 관형 병 중의 용액을 동결건조시켜 각각 25mg의 화합물 I를 함유하는 동결건조 조성물을 얻는다.
이상의 내용은 단지 본 발명의 바람직한 실시예일 뿐, 이로써 본 발명의 실질적인 기술내용 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실질적인 기술내용은 본 발명의 특허청구범위에 의해 광범위하게 정의되며, 임의의 타인이 완성한 기술실체 또는 방법이 만약 본 발명의 특허청구범위에 정의된 내용과 완전히 동일하거나 등가적인 변경이면 모두 해당 특허청구범위에 포함되는 것으로 보아야 할 것이다.

Claims (32)

  1. 구조식 I로 표시되는 고순도 고리형 펩티드 화합물에 있어서, 상기 고리형 펩티드 화합물의 순도가 99.0%보다 크거나 같고, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내는 것인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
    Figure pct00033

    식 I
  2. 제1항에 있어서,
    상기 식 I로 표시되는 화합물의 순도는 고성능 액체크로마토그래피(HPLC)로 측정한 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 고성능 액체크로마토그래피의 측정 방법은
    크로마토그래픽 컬럼: 안지오텐신전환효소(ACE) 3 AQ, 150×4.6mm, 3μm;
    이동상: A: 1000ml의 물, 10ml의 메탄올, 100μl의 트리플루오로 아세트산(trifluoroacetic acid);
    B: 600 ml의 물, 400ml의 메탄올, 100μl의 트리플루오로 아세트산;
    유속: 0.55ml/min;
    컬럼 온도: 50℃;
    구배:
    Figure pct00034

    희석제: 순수;
    인젝터 온도: 5℃;
    검출 파장: 225nm인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 불순물A의 함량은 0.25%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물A의 상대 보류시간은 약 0.45인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 불순물B의 함량은 0.25%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물B의 상대 보류시간은 약 0.65인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 불순물C의 함량은 0.25%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물C의 상대 보류시간은 약 0.88인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 불순물D의 함량은 0.20%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물D의 상대 보류시간은 약 1.08인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 불순물E의 함량은 0.15%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물E의 상대 보류시간은 약 1.29인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 불순물F의 함량은 0.15%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물F의 상대 보류시간은 약 1.92인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 고순도 고리형 펩티드 화합물 중 임의의 기타 관련 불순물의 함량은 0.10%보다 작거나 같고, 상기 기타 관련 불순물은 A~F를 제외한 존재 가능한 불순물인 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 I의 화합물의 순도 및/또는 불순물함량의 계산 방법은, 고성능 액체크로마토그램에서 식 I의 화합물 및/또는 불순물의 피크 곡선하 면적을 고성능 액체크로마토그램의 총곡선하 면적으로 나누는 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  12. 식 I으로 표시되는 화합물의 조생성물(crude product)을 물 또는 유기용매(i)의 수성용액에 용해시켜 용해액의 pH를 제어하는 단계 (a);
    온도 강하 및/또는 유기용매(i)를 첨가하는 것을 통하여 상기 고순도 고리형 펩티드 화합물을 얻는 단계 (b)를 포함하는 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 고리형 펩티드 화합물의 제조방법.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 단계 (a)에서 용해액의 pH 는 2.0~5.0로 제어되고, 바람직하게는 3.5~4.5로 제어되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  14. 제12항에 있어서,
    상기 단계 (a)의 용해액 중 식 I의 화합물의 농도는 10~500mg/ml인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  15. 제12항에 있어서,
    상기 단계 (a) 및/또는 단계 (b)에서, 유기 용매(i)는 C1~C4의 저급 알코올로 이루어진 군에서 선택되고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올 또는 그의 혼합물에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  16. 제12항에 있어서,
    상기 단계 (a)~단계 (b)는 1회 또는 그 이상 반복될 수 있는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  17. 고순도의 식 II의 화합물을 제조하기 위한 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 I의 화합물의 용도.
    Figure pct00035
    식 II
  18. 진균 감염을 치료하는 약물을 제조하기 위한 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 I의 화합물의 용도.
  19. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 I의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
  20. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 I의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 혼합하여 제19항에 따른 약물 조성물을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제19항에 따른 약물 조성물의 제조방법.
  21. 구조식 II으로 표시되는 고순도 고리형 펩티드 화합물에 있어서, 상기 고리형 펩티드 화합물의 순도가 98.8%보다 크거나 같고, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내는 것을 특징으로 하는 고순도 고리형 펩티드 화합물.
  22. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물의 순도는 고성능 액체크로마토그래피로 측정한 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
  23. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물 중 불순물6의 함량은 0.3%보다 작고, 그 구조는 식 IV으로 표시되며, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내는 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
    Figure pct00036

    IV 불순물6
  24. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물 중 불순물7과 불순물8의 총함량은 0.5%보다 작고, 그 구조는 식 V, 식 VI으로 표시되며, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내는 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
    Figure pct00037

    V 불순물7
    Figure pct00038

    VI 불순물8
  25. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물 중 불순물9의 함량은 0.2%보다 작고, 그 구조는 식 VII으로 표시되며, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내는 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
    Figure pct00039

    VII 불순물9
  26. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물 중 불순물10의 함량은 0.2%보다 작고, 그 구조는 식 VIII으로 표시되며, R는 H 또는 약학적으로 허용가능한 염을 형성할 수 있는 양이온을 나타내는 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
    Figure pct00040

    VIII 불순물10
  27. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물 중 불순물11의 함량은 0.15%보다 작거나 같고, 고성능 액체크로마토그래피에서 상기 불순물11의 상대 보류시간은 약 0.96인 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
  28. 제21항에 있어서,
    상기 식 II의 화합물 중 임의의 기타 관련 불순물의 함량은 0.02%보다 작거나 같고, 상기 기타 관련 불순물은 불순물6~불순물11을 제외한 존재 가능한 불순물인 것을 특징으로 하는 식 II의 화합물.
  29. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 II의 화합물을 원료로 사용하여 식 Ⅱ로 표시되는 화합물을 제조하는 것을 특징으로 하는 제21항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 II의 화합물의 제조방법.
  30. 진균 감염을 치료하는 약물을 제조하기 위한 것을 특징으로 하는 제21항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 II의 화합물의 용도.
  31. 제21항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 II의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 약물 조성물.
  32. 제21항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 고순도 식 II의 화합물과 약학적으로 허용가능한 담체를 혼합하여 제31항에 따른 약물 조성물을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 제31항에 따른 약물 조성물의 제조방법.

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