KR20140048308A - Ｈｃｖ 프로티아제 억제제 - Google Patents

Ｈｃｖ 프로티아제 억제제 Download PDF

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KR20140048308A
KR20140048308A KR1020147005119A KR20147005119A KR20140048308A KR 20140048308 A KR20140048308 A KR 20140048308A KR 1020147005119 A KR1020147005119 A KR 1020147005119A KR 20147005119 A KR20147005119 A KR 20147005119A KR 20140048308 A KR20140048308 A KR 20140048308A
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요-친 류
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첸-푸 류
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Abstract

본 발명은 상세한 설명에서 보인 식 (I) 또는 (II)의 마크로사이클릭화합물에 관한 것이다. 이들 화합물은 간염 C 바이러스 감염을 치료하는데 사용될 수 있다.

Description

ＨＣＶ 프로티아제 억제제{HCV PROTEASE INHIBITORS}
<상호 참조>
본 출원은 2008년 5월 16일 출원된 미국가출원 시리얼 번호 61/053,857의 우선권을 주장하며, 그 내용은 참조로서 본 발명에 결합된다.
<기술분야>
본 발명은 HCV프로티아제 억제제에 관한 것이다.
간염 C 바이러스 (HCV), (+)-센스 단일-가닥 RNA 바이러스는, 비A, 비B 간염의 대부분 경우에서 주요 원인물질(causative agent)이다. HCV에 의한 감염은 인류건강의 중대한 문제이다. WO 05/007681; WO 89/04669; EP 381216; Alberti et al., J. Hepatology, 31 (Suppl. 1), 17-24 (1999); Alter, J. Hepatology, 31 (Suppl. 1), 88-91 (1999); 및 Lavanchy, J. Viral Hepatitis, 6, 35-47 (1999) 참조.
HCV 감염에 기인한 간염은 바이러스가 빠르게 변화하고(mutate) 자연 면역반응을 피하기 때문에 치료하기 어렵다. 현재 사용가능한 유일한 항-HCV 요법은 인터페론-α, 인터페론-α/리바비린 조합 및 페그(pegylated) 인터페론-α이다. 그러나, 인터페론-α 또는 인터페론-α/리바비린 조합의 지연반응율(sustained reaction rate)은 < 50% 인 것으로 밝혀졌고 환자는 이들 치료제의 부작용으로 크게 고통받는다. Walker, DDT, 4, 518-529 (1999); Weiland, FEMS Microbial.Rev., 14, 279-288 (1994); 및 WO 02/18369 참조. 따라서, 더 효과적이고 내성이 좋은(better-tolerated) 치료약의 개발이 필요하다.
바이러스 증식(viral replication)을 위해 필요한 HCV 프로테아제(protease)는 약 3000개 아미노산을 포함한다. 이는 뉴클레오캡시드 단백질(C), 엔벨롭 단백질(E1 및 E2), 및 수개의 비구조(non-structural) 단백질(NS2, NS3, NS4a, NS5a 및 NS5b)을 포함한다.
NS3 단백질은 세린 프로티아제 활성을 가지고 있으며 바이러스 증식 및 전염성(infectivity)에 필수적인 것으로 간주된다. 프로티아제의 필수성은 황열병 바이러스 NS3 프로티아제의 변형(mutation)이 바이러스 감염(viral infectivity)을 감소시킨 사실로부터 추측되었다. Chamber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 8898-8902 (1990) 참조. 또한 침팬지 모델에서 HCV NS3 프로티아제의 활성 사이트에서의 변형이 HCV 감염을 완전히 억제했다는 것도 보여졌다. Rice et al., J. Virol. 74 (4) 2046-51 (2000) 참조. 나아가, HCV NS3 프로티아제는 NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a, NS5a/NS5b 정션에서 단백질 가수분해를 촉진하며 따라서 바이러스 증식 동안 네 개의 바이러스 단백질 생성의 원인임이 밝혀졌다. US 2003/0207861참조. 결과적으로, HCV NS3 프로티아제 효소는 HCV 감염을 치료하는데 매력적인 타겟이다. 가능성있는 NS3 HCV 프로티아제 억제제는 WO 02/18369, WO 00/09558, WO 00/09543, WO 99/64442, WO 99/07733, WO 99/07734, WO 99/50230, WO 98/46630, WO 98/17679, WO 97/43310, US 5,990,276, Dunsdon et al., Biorg. Med. Chem. Lett. 10, 1571-1579 (2000); Llinas-Brunet et al., Biorg. Med. Chem. Lett. 10, 2267-2270 (2000); 및 S. LaPlante et al., Biorg. Med. Chem. Lett. 10, 2271-2274 (2000)에서 발견된다.
본 발명은 특정 마크로사이클릭 화합물이 HCV NS3 활성과 HCV RNA레벨을 억제하는데 효과적이라는 예기치 않은 발견에 기초한다.
일 측면에서, 본 발명은 식(I)의 화합물에 연관된다:
식 (I),
여기서 R1 및 R2각각은, 독립적으로, H, C1-6 알킬, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴; U는 -O-, -NH-, -NH(CO)-, -NHSO-, 또는 -NHSO2-; W 는 -(CH2)m-, -NH(CH2)n-, -(CH2)nNH-, -O(CH2)n-, -(CH2)nO-, -S(CH2)n-, -(CH2)nS-, -SO-, -SO(CH2)n-, -(CH2)nSO-, -SO2(CH2)n-, 또는 -(CH2)nSO2-, m 은 1, 2 또는 3 이고 n은 0, 1 또는 2; X는 -O-, -S-, -NH- 또는 -OCH2-; Y는 또는 여기서 V 및 T 각각은, 독립적으로, -CH- 또는 -N-; R은 H, 할로, 니트로, 시아노, 아미노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴; 그리고 A1 및 A2각각은, 독립적으로, C4-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이고, 이들 각각은 선택적으로 할로, 니트로, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 치환된다; 또는 선택적으로 다른 C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴과 융합(fuse) 되며, 이들 각각은 선택적으로 할로, 니트로, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 치환된다; 그리고 Z는 -C(O), -OC(O)-, -NR’C(O)-, -OC(S)-, -NR’-C(S)-, 또는 -OC(NH)-; 여기서 R’는 H, C1-6 알킬, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴. 변수(variable) U, W, X 및 Z에 지정된 그룹은 물론 이가(bi-valent)이다.각 그룹은 변수가 식에서 나타낸 것과 동일한 배열(orientation)으로 나타내어져 있다. 변수 U에 배정된 그룹 -NHSO-를 예로 들며, 식에서 보이는 바와 같이, C=O 및 R1사이에 위치한다. NHSO- 그룹의 N원자는 C=O에 붙고 S원자는 R1에 붙는다.
식 (I)을 참조하면, 위에서 기재한 화합물의 서브세트는 다음 특징 중 하나를 가진 것이다: R1은 사이클로프로필; R2는 C1-5 알킬 또는 C3-8 사이클로알킬; W는 -CH2CH2-, -OCH2-, -SCH2- 또는 -SOCH2-; U는 -NHSO2-; Z는 -OC(O)-; X는 O; 그리고 Y는 , 또는, 여기서 Ri, Rii, Riii, Riv, Rv, Rvi, Rvii 및 Rviii 각각은, 독립적으로, H, 할로, 니트로, 시아노, 아미노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴.
다른 측면에서, 본 발명은 식 (II)의 화합물에 연관된다:
식 (II),
여기서 R1 및 R2각각은 독립적으로, H, C1-6 알킬, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴; R3, R4, R5, R6및 R7각각은, 독립적으로, H, 할로, 니트로, 시아노, 아미노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴; U는 -O-, -NH-, -NH(CO)-, -NHSO- 또는 -NHSO2-; W는 -(CH2)m-, -NH(CH2)n-, -(CH2)nNH-, -O(CH2)n-, -(CH2)nO-, -S(CH2)n-, -(CH2)nS-, -SO-, -SO(CH2)n-, -(CH2)nSO-, -SO2(CH2)n- 또는 -(CH2)nSO2-, m은 1, 2 또는 3이고 n은 0, 1 또는 2; X는 -O-, -S-, -NH- 또는 -OCH2-; T는 , 여기서 A1 및 A2각각은, 독립적으로, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴이고, 이들 각각은 선택적으로 할로, 니트로, 시아노, 아미노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 치환된다; 그리고 Z는 -C(O), -OC(O)-, -NR’-C(O)-, -OC(S)-, -NR’C(S)-또는 -OC(NH)-; 여기서 R’는 H, C1-6 알킬, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴. 변수 U, W, X 및 Z 각각에 지정된 그룹은 변수가 식에서 나타낸 것과 동일한 배열(orientation)로 나타내어져 있다.
식 (II)를 참조하면, 위에서 언급한 화합물의 서브세트는 다음 특징 중 하나를 가진다: R1은 사이클로프로필; R2는 C1-5 알킬 또는 C3-8 사이클로알킬; W는 -CH2CH2-, -OCH2-, -SCH2- 또는 -SOCH2-; U는 -NHSO2-; Z는 -OC(O)-; 그리고 T는
여기서 n은 1 또는 2.
“알킬” 용어는 -CH3 또는 -CH(CH3)2와 같은 포화, 선형 또는 분지형 탄화수소 성분(moiety)을 말한다. “알콕시”용어는 -O-(C1-6 알킬) 라디칼을 말한다. “알케닐”용어는 -CH=CH-CH3와 같이 적어도 하나의 이중결합을 가지는 선형 또는 분지형 탄화수소 성분을 말한다. “알키닐”용어는 CC-CH3와 같이 적어도 하나의 삼중결합을 가지는 선형 또는 분지형 탄화수소 성분을 말한다. “사이클로알킬”은 사이클로 헥실과 같이 포화, 사이클릭 탄화수소 성분을 말한다. “사이클로알케닐”용어는 사이클로헥세닐과 같이 적어도 하나의 이중결합을 포함하는 비방향족, 사이클릭 탄화수소 성분을 말한다. “헤테로사이클로알킬”용어는 4-테트라하이드로피라닐과 같이 적어도 하나의 링 헤테로원자원자 (예를 들어, N, O 또는 S)를 가지는 포화사이클릭 성분을 말한다. “헤테로사이클로알케닐”용어는 피라닐과 같이 적어도 하나의 링 헤테로원자 (예를 들어, N, O 또는 S)와 적어도 하나의 링이중결합을 가지는 비방향족, 사이클릭 성분을 말한다. “아릴” 용어는 하나 또는 그 이상의 방향족 링을 가지는 탄화수소 성분을 말한다. 아릴 성분의 예는 페닐 (Ph), 페닐렌, 나프틸, 나프틸렌, 피레닐, 안트릴(anthryl) 및 펜안트릴(phenanthryl)을 포함한다. “헤테로아릴” 용어는 적어도 하나의 헤테로원자 (즉, N, O 또는 S)를 가지는 방향족 링을 가지는 성분을 말한다. 헤테로아릴 성분의 예는 푸릴, 푸릴렌, 플루오레닐, 피롤일, 씨에닐(thienyl), 옥사졸일, 이미다졸일, 씨아졸일(thiazolyl), 피리딜, 피리미딘일, 퀴나졸린일(quinazolinyl), 퀴놀일(quinolyl), 이소퀴놀일(isoquinolyl) 및 인돌일(indolyl)을 포함한다. “아미노”용어는 -NH2, -NH-(C1-6 알킬) 또는 -N(C1-6 알킬)2의 라디칼을 말한다.
여기서 언급된 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴은, 다르게 언급되지 않는 한, 치환 및 비치환 성분을 모두 포함한다. 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴 상에 가능한 치환체는, 이에 한정되지 않으나, C1-C10 알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, C3-C20 사이클로알킬, C3-C20 사이클로알케닐, C1-C20 헤테로사이클로알킬, C1-C20 헤테로사이클로알케닐, C1-C10 알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 아미노, C1-C10 알킬아미노, C1-C20 디알킬아미노, 아릴아미노, 디아릴아미노, C1-C10 알킬설폰아미노, 아릴설폰아미노, C1-C10 알킬이미노, 아릴이미노, C1-C10 알킬설폰이미노, 아릴설폰이미노, 하이드록실, 할로, 씨오, C1-C10 알킬씨오, 아릴씨오, C1-C10 알킬설포닐, 아릴설포닐, 아실아미노, 아미노아실, 아미노씨오아실, 아미디노, 구아니딘, 우레이도(ureido), 시아노, 니트로, 니트로소, 아지도(azido), 아실, 씨오아실, 아실옥시, 카르복실 및 카르복실릭 에스터을 포함한다. 한편, 알킬, 알케닐 또는 알키닐 상에 가능한 치환체는 C1-C10 알킬을 제외하고 위에서 언급한 모든 치환체가 가능하다. 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알케닐, 아릴 및 헤테로아릴은 서로 융합될 수 있다.
아래 표에 본 발명의 60개의 예시적 화합물을 표시하였다.
화합물 1 화합물 2 화합물 3
화합물 4 화합물 5 화합물 6
화합물 7 화합물 8 화합물 9
화합물 10 화합물 11 화합물 12
화합물 13 화합물 14 화합물 15
화합물 16 화합물 17 화합물 18
화합물 19 화합물 20 화합물 21
화합물 22 화합물 23 화합물 24
화합물 25 화합물 26 화합물 27
화합물 28 화합물 29 화합물 30
화합물 31 화합물 32 화합물 33
화합물 34 화합물 35 화합물 36
화합물 37 화합물 38 화합물 39
화합물 40 화합물 41 화합물 42
화합물 43 화합물 44 화합물 45
화합물 46 화합물 47 화합물 48
화합물 49 화합물 50 화합물 51
화합물 52 화합물 53 화합물 54
화합물 55 화합물 56 화합물 57
화합물 58 화합물 59 화합물 60
다른 측면에서, 본 발명은 간염 C 바이러스 감염을 치료하기 위한 방법에 관련된다. 방법은 식 (I) 또는 (II)의 화합물 하나 또는 그 이상의 유효량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 HCV 감염의 치료에 사용하는 조제학적 조성물(composition)에 관련된다. 조성물은 식 (I) 또는 (II)의 화합물 하나 또는 그 이상의 유효량과 조제학적으로 수용가능한 캐리어를 포함한다. 이는 또한 HCV 라이프 사이클에서 HCV NS3프로티아제 외의 타겟, 예를 들어 NS5B 폴리머라제, NS5A, NS4B 또는 p7의 억제제도 포함할 수 있다. 이러한 억제제의 예로는, 이에 한정되지 않으나, N-[3-(1-사이클로부틸메틸-4-하이드록시-2-옥소-1,2-디하이드로-퀴놀린-3-일)-1,1-디옥소-1,4-디하이드로-1l6-벤조[1,2,4]씨아디아진(thiadiazin)-7-일]-메탄설폰아미드 (WO04041818), 트랜스-1,2-디-4-[(페닐아세틸-피롤리딘-2-(S)-카르보닐) 아미노]-페닐에틸렌 (WO0401413), 그리고 1-아미노아다만탄 (Amentadine, Griffin, 2004, J. Gen. Virol. 85: p451)을 포함한다. 조제학적 조성물은 면역조절제(immunomodulatory agent) 또는 제2의 항바이러스제( second antiviral agent)을 더 포함할 수 있다. 면역조절제는 면역반응을 매개(mediate)하는 활성제(active agent)를 말한다. 면역조절제의 예로는, 이에 한정되지 않으나 Nov-205 (Novelos Therapeutics Inc., WO02076490) 및 IMO-2125 (Idera Phamarceuticals Inc., WO05001055)을 포함한다. 항바이러스제는 바리러스를 죽이거나 그 복제를 억제하는 활성제를 말한다. 항바이러스제의 예로는, 이에 한정되지 않으나, 리바비린, α-인터페론, 페그 인터페론, 그리고 HCV 프로티아제 억제제를 포함하며, 2-(2-{2-사이클로헥실-2-[(피라진-2-카르보닐)-아미노]-아세틸아미노}-3,3-디메틸-부티릴)-옥타하이드로-사이클로펜타[c]피롤-1-카르복시산(1-사이클로프로필아미노옥사릴-부틸)-아미드 (Telaprevir, Vertex Phamaceuticals Inc., WO02018369), 3-[2-(3-터트-부틸-우레이도)-3,3-디메틸-부티릴]-6,6-디메틸-3-아자-바이사이클로[3.1.0]헥산-2-카르복시산(2-카바모일-1-사이클로부틸메틸-2-옥소-에틸)-아미드 (Boceprevir, Schering-Plough Research Institute, WO03062265), 그리고 4-플루오로-1,3-디하이드로-이소인돌-2-카르복시산14-터트-부톡시카르보닐아미노-4-사이클로프로판설포닐아미노카르보닐-2,15-디옥소-3,16-디아자-트리사이클로[14.3.0.04,6]노나덱-7-엔-18-일 에스터 (ITMN-191, InterMune Inc., US2005/0267018)가 있다.
위에서 언급한 치료를 위한 약제 제조를 위한 조성물의 사용도 본 발명의 범위에 속한다.
본 발명의 하나 또는 그 이상의 실시예의 상세를 아래 기재하였다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 기재와 청구범위에서 명확해 질 것이다.
본 발명의 화합물은 본 기술분야에서 잘 알려진 방법으로 상업적으로 입수가능한 출발물질로부터 합성될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 아래의 스킴 1을 통해 제조될 수 있다:
스킴 1
스킴 1에 표시한 바와 같이, 멀티사이클릭 화합물(i)은 먼저 N-(t-부톡시카르보닐)-L-프롤린(ii)과 결합하고, 이어 메틸화되어, 중간물(iii)을 형성한다. 중간물(iii)은 N-부톡시카르보닐 그룹을 제거하기 위해 탈보호(deprotect)되어 N-프리 화합물(iv)이 마련되며, N-프리 화합물(iv)은 카르복시산(v)과 결합하여 중간물(vi)이 제공된다. 중간물(vi)은 가수분해되어 산(vii)을 형성하며, 산(vii)은 아민 화합물(viii)과 결합되어 두개의 말단 알케닐 그룹을 가지는 피롤리딘 화합물(ix)을 제공한다. 중간물(ix)은 그루브(Grubb) 촉매 존재하에서 올레핀 복분해(metathesis)를 거쳐 원하는 마크로사이클릭 화합물(x)을 제공한다.
아래 스킴 2와 3은 본 발명 화합물의 다른 2개의 합성경로는 나타낸다.
스킴 2
스킴 3
궁극적으로 원하는 화합물의 합성을 위해, 위에서 설명한 방법은 스킴 1-3에서 구체적으로 기재한 단계의 전 또는 후에 적절한 보호그룹을 추가하거나 제거하기 위한 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 추가로, 원하는 화합물을 얻기 위해 다양한 합성 단계가 다른 순서(sequence 또는 order)로 수행될 수 있다. 적용가능한 식(I) 화합물의 합성에 유용한 합성화학변형(Synthetic chemistry transformations)과 보호그룹방법론 (보호 및 탈보호)은 기술분야에 알려져 있으며, 예를 들어, R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Ssynthesis 2nd Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); 및 L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) 및 이어지는 에디션에 기재되어 있다.
아래 실시예 1-60는 예시적 화합물 1-60이 어떻게 실제로 제조되는지에 대해 상세한 설명을 제공한다.
여기서 언급한 화합물은 비-방향적 이중결합과 비대칭적 중심을 가지고 있다. 따라서 라세믹 화합물과 라세믹 혼합물, 단일 거울상체(enantiomer), 개개의 입체이성질체(individual diastereomers), 입체이성질(diastereomeric) 혼합물, 호변체(tautomer) 및 시스-또는 트랜스-이성질 형태가 발생할 수 있다. 이러한 모든 이성질 형태는 감안되었다. 예를 들어, 위에서 보인 식(I) 및 식(II)의 화합물은 각각 다음의 입체 화학 구조(III) 및 (IV)를 가질 수 있다:
및.
(III)(IV)
위에서 설명한 화합물은 그 자체와, 적용가능하다면 그들의 염, 프로드러그 및 용매 화합물(solvate)을 포함한다. 염은, 예를 들어, 음이온과 식 (I)의 화합물 상의 양으로 대전된 그룹(예를 들어, 아미노) 사이에 형성될 수 있다. 알맞은 음이온은 클로라이드, 브로마이드, 이오다이드(iodide), 설페이트, 나이트레이트, 포스페이트, 시트레이트, 메탄설포네이트, 트리플로로아세테이트, 아세테이트, 말레이트(malate), 토실레이트(tosylate), 타르트레이트(tartrate), 푸마레이트(fumurate), 글루타메이트(glutamate), 글루쿠로네이트(glucuronate), 락테이트(lactate), 글루타레이트(glutarate) 및 말레이트(maleate)를 포함한다. 마찬가지로, 염은 양이온과 식 (I)의 화합물 상의 음으로 대전된 그룹 (예를 들어, 카르복실레이트) 사이에 형성될 수 있다. 알맞은 양이온은 소디움 이온, 포타슘 이온, 마그네슘 이온, 칼슘 이온 및 테트라메틸암모니움 이온과 같은 암모니움 양이온을 포함한다. 식 (I)의 화합물은 또한 4차(quaternary) 질소원자를 가지는 염도 포함한다. 프로드러그의 예는 에스터와 다른 조제학적으로 수용가능한 파생물을 포함하며, 이들은 환자에게 적용시 식 (I)의 활성 화합물을 제공할 수 있다. 용매화합물은 활성화합물과 조제학적으로 수용가능한 용매 사이에 형성된 콤플렉스를 말한다. 조제학적으로 수용가능한 용매는 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올 아민을 포함한다.
식 (I)의 화합물의 하나 또는 그 이상의 유효량을 환자에게 투여하여 HCV 감염을 치료하는 방법도 본 발명의 범위 내이다. “치료(treatment)” 또는 “치료함(treating)”은 HCV 감염, HCV 징후 또는 HCV로의 소인(predisposition)에 치료적(therapeutic) 영향, 즉, 치료(cure), 완화, 변화(alter), 작용(affect), 개선 또는 예방등을 가져오기 위해 하기 위해 HCV 감염, HCV 징후 또는 HCV로의 소인(predisposition)을 가진 환자에게 화합물을 투여하는 것을 말한다. “유효 량” 용어는 치료대상 환자에게 치료적 효과를 가져오기 위해 필요한 본 발명 활성화합물의 양을 말한다. 유효 도즈는, 당업자는 잘 인식하고 있듯이, 치료대상 질병 타입, 투여 루트, 첨가제(excipient) 및 다른 치료(therapeutic treatment)와의 병행사용 가능성에 따라서 달라진다.
본 발명을 실행하기 위해, 하나 또는 그 이상의 화합물을 가진 조성은 비경구로, 경구로(orally), 비강으로(nasally), 직장으로(rectally), 국소적으로(topically) 또는 구강으로(buccally) 투여될 수 있다. 여기서 사용된 “비경구” 라는 용어는 피하(subcutaneous), 피내(intracutaneous), 정맥내(intravenous), 근육내(intramuscular), 관절내(intraarticular), 동맥내(intraarterial), 활액내(intrasynovial), 흉골내(intrasternal), 척추내(intrathecal), 병소내(intralesional) 또는 두개골내(intracranial) 주입을 말하며, 다른 적절한 주입(infusion) 방법도 말한다.
주사가능한 무균 조성은 1,3부탄디올 내의 용액과 같이, 비독성의 비경구적으로 수용가능한 희석제 또는 용매내의 용액 또는 현탁액일 수 있다. 채용가능한 수용가능 비클과 용매에는 만니톨, 물, 링거 용액과 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 추가로, 불휘발성 오일(fixed oil)은 통상적으로 용매나 현탁 매개체로 채용되었다(예를 들어, 합성 모노- 또는 디글리세라이드). 올레익산과 그것의 글리세라이드 유도체와 같은 지방산은, 올리브 오일, 캐스터 오일 특히 이들의 폴리옥시에틸레이티드 버전과 같이 조제학적으로 수용가능한 천연 오일과 같이 주사제(injectable)의 제조에 유용하다. 이들 오일용액 또는 현탁액은 장쇄 알코올희석제 또는 분산제(dispersant), 카르복시메틸셀룰로스 또는 유사한 분산제(dispersing agent)를 포함할 수 있다. 흔히 사용되는 트윈(Tween) 또는 스팬스(Span) 같은 계면활성제 또는 조제학적으로 수용가능한 고체, 액체 또는 다른 투여 폼의 제조를 위해 흔히 사용되는 다른 유사한 유화제 또는 생물학적 이용가능성 향상제(bioavailability enhancer) 역시 포뮬레이션을 위해 사용될 수 있다.
경구 투여를 위한 조성은 캡슐, 태블렛, 에멀젼 및 수용성 현탁액, 분산(dipersion) 및 용액을 포함하는 어떠한 경구로 수용가능한 투여 형태일 수 있다. 태블릿의 경우, 흔히 사용되는 캐리어는 락토스와 옥수수 전분을 포함한다. 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제(Lubricating agent) 역시 일반적으로 추가될 수 있다. 캡슐형태의 경구 투여에 있어서, 유용한 희석제는 락토즈와 건조 옥수수 전분을 포함한다. 수용성 현탁액과 이멀젼이 경구로 투여될 때, 활성 성분은 유화제 또는 현탁화제(suspending agent)와 결합한 오일상에 현탁 또는 녹아 있을 수 있다. 원한다면 감미료, 향미료 또는 착색제가 추가될 수 있다.
비강용 에어로졸 또는 흡입 조성은 조제 포뮬레이션에서 잘알려진 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 이러한 조성은 벤질알콜 또는 다른 적절한 방부제, 생물학적 이용가능성을 향상시키기 위한 흡수 촉진제, 플로로탄소 및/또는 본 기술에서 알려진 용해화제 또는 분산제를 채용한 살린 중의 용액으로 제조될 수 있다.
하나 또는 그 이상의 활성 화합물을 가진 조성물은 직장 투여를 위한 좌약의 형태로 투여될 수 있다.
제약 조성물의 캐리어는 조성물의 활성 성분과 융합성(compatible)이라는 의미인 “수용가능”(바람직하게는 활성성분을 안정화시킨다)해야 하며 치료대상 환자에게 유해하지 않아야 한다. 하나 또는 그 이상의 용해화제는 본 발명의 활성 화합물 전달을 위한 제약학적 첨가제(excipient)로 사용될 수 있다. 다른 캐리어의 다른 예로는 콜로이달 실리콘 옥사이드, 마그네슘 스테아레이트, 셀룰로오스, 소디움라우릴설페이트과 D＆C 황색 # 10를 포함한다.
위에서 언급한 화합물은 시험관 내 분석(실시예 61 및 62 참조)으로 HCV 감염을 치료하는 효능이 예비적으로 걸러지고 이후 동물실험과 클리닉 시험을 통해 확인하였다. 다른 방법 역시 당업자에게 명확할 것이다.
아래 구체적인 실시예는 단순히 예시로 해석되어야 하며, 어떠한 방식으로도 다른 개시 부분을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 추가의 노력없이 당업자라면 여기의 기재에 기초하여 본 발명을 충분히 이용할 수 있을 것이다. 여기서 인용된 모든 공개내용은 온전한 참조로 본 발명에 결합된다.
실시예 1: {4-사이클로프로판설포닐아미노카르보닐-2,15-디옥소-18-[2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-벤조[4,5]푸로[3,2-d]피리미딘-4-일옥시]-3,16-디아자-트리사이클로[14.3.0.04,6]노나덱-7-엔-14-일}-카바믹 산 사이클로펜틸 에스터(화합물 1)의 합성
화합물 I-3은 상업적으로 입수가능한 1-t-부톡시카르보닐아미노-2-비닐-사이클로프로판카르복시산에틸에스터로부터 아래 루트를 통해 먼저 제조하였다:
THF(5 mL)과 메탄올(5 mL)내의 1-t-부톡시카르보닐아미노-2-비닐-사이클로프로판카르복시산에틸 에스터(0.34 g, 1.3 mmol)용액에 물(1.4 mL) 내의 LiOH(0.13 g, 5.3 mmol)의 현탁액을 가했다. 실온에서 오버나잇으로 교반한 후, 10% HCl(2 mL)로 반응을 켄칭시키고 진공하에서 용매를 제거하였다. 얻어진 고체 파우더를 물(10 mL)로 세척하여 화합물 I-1(0.27 g, 90%)을 얻었다. MS m/z 249.9 (M++23); 1H NMR (CDCl3) 10.35 (brs, 1H), 5.84-5.71 (m, 1H), 5.29 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 5.12 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 2.23-2.14 (m, 1H), 1.87-1.65 (m, 1H), 1.58-1.41 (m, 1H), 1.43 (s, 9H).
CH2Cl2(40 mL) 내의 화합물 I-1(0.52 g, 2.3 mmol), 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 우로니움 헥사플루오로-포스페이트 메탄아미니움(HATU, 1.74 g, 4.6mmol) 및 4-디메틸아미노피리딘 (1.39 g, 11.6 mmol)용액을 실온에서 1시간동안 교반한 후, 사이클로프로판설폰아미드(0.57 g, 4.7 mmol), 디이소프로필에틸아민(1.81 mL, 14.0 mmol) 및 1,8-디아자바이사이클로[5,4,0]운덱-7-엔(ene)(1.80 g, 11.7 mmol)을 15분에 거쳐 서서히 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 오버나잇으로 교반하고, 용매를 진공하에서 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 I-2(0.51 g, 66%)을 얻었다. MS m/z 353.1 (M++23); 1H NMR (CDCl3) 9.75 (brs, 1H), 5.64-5.51 (m, 1H), 5.30 (d, J = 17.4 H), 5.16 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 2.95-2.89 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 1H), 1.93-1.88 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.46-1.38 (m, 1H), 1.32-1.23 (m, 2H), 1.15-1.00 (m, 2H).
MeOH(8 mL) 내의 화합물 I-2(0.50 g, 1.5 mmol) 용액에 실온에서 SOCl2(0.26 g, 2.2 mmol)을 가하였다. 반응 혼합물을 1시간동안 환류한 후 MeOH 과 SOCl2을 진공하에서 제거하였다. 잔류물을 펜탄으로부터 분쇄(triturate)하고 필터링하여 오프-화이트 고체인 중간물 I-3(0.32 g, 91%)을 얻었다. MS m/z (M++1); 1H NMR (CD3COD) 5.77-5.65 (m, 1H), 5.43 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 5.32 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.06-2.97 (m, 1H), 2.45 (dd, J = 17.4 Hz, J = 7.8, 1H), 2.16 (dd, J = 8.0 Hz, J = 7.8 Hz, 1H), 1.75 (dd, J = 10.1 Hz, J = 7.8 Hz, 1H), 1.32-0.86 (m, 4H).
화합물 1은 아래와 같은 루트로 제조되었다:
THF(25 mL) 내의 3-아미노-벤조푸란-2-카르복시산아미드(1.00 g, 5.7 mmol)과 피리딘(1 mL, 12.26 mmol) 용액을 0℃에서 10분간 교반했다. 얻어진 용액에 4-트리플루오로메틸-벤조일 클로라이드(1.48 g, 7.1mmol)를 서서히 가했다. 그 후 온도를 실온까지 올리고 혼합물을 12시간동안 교반하였다. 용매를 감압하에서 제거한 후에, 얻어진 고체를 수집하고, 물로 세척하고 공기 건조하여 I-4(1.92 g, 96.0 %)을 얻었다. MS: m/z 349.0 (M++1).
EtOH (25mL) 내의 I-4(1.92 g, 5.5 mmol) 및 2N NaOH (13 mL)현탁액을 12시간동안 85℃로 가열하였다. 냉각 후에, 혼합물을 산성화시킨 후 EtOH를 제거하였다. 얻어진 고체를 수집하고, 필터링하고, 물로 세척하고 건조하여 I-5(1.71 g, 95.0%)를 얻었다. MS m/z 331 (M++1).
I-5(1.71 g, 5.2 mmol)와 과잉의 포스포러스 옥시클로라이드(POCl3)의 용액을 2시간동안 환류하였다. 냉각하고 완전히 농축시킨 후, 혼합물을 메틸렌 클로라이드와 10% 수산화 나트륨으로 추출했다. 유기층을 MgSO4로 건조하고, 농축하고 CH2Cl2과 n-헥산으로부터 결정화하여 화합물 I-6(1.49 g, 82%)을 얻었다. MS m/z 348.8, 350.9 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 8.70 (d, 2H), 8.34 (d, 1H), 7.82-7.75 (m, 4H), 7.57 (ddd, 1H).
DMSO(25 mL) 내의 boc-트랜스-4-하이드록시-L-프로린(0.53 g, 2.3 mmol)의 현탁액에 0℃에서 t-BuOK(0.82 g, 5.1 mmol)를 가하였다. 혼합물을 실온까지 오르도록 한 후 1시간 동안 교반하였고, 10℃에서 화합물 I-6(0.81 g, 2.3 mmol)을 천천히 가하였다. 오버나잇으로 교반하였다. 아이오도메탄(1.02 g, 6.9mmol)을 가하고 반응 혼합물을 실온에서 추가 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 10% 염산수용액으로 pH 6~7로 중화하고 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 유기층을 MgSO4로 건조하고, 진공하에서 증발시키고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 I-7(1.12 g, 86%)을 얻었다. MS m/z 557.8 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 8.63 (d, 2H), 8.28 (d, 1H), 7.80-7.74 (m, 2H), 7.70 (d, 2H), 7.51 (ddd, 1H).
MeOH(20 mL) 내의 화합물 I-7(1.13 g, 2.0 mmol) 용액에 실온에서 SOCl2(1.21 g, 9.8 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 1시간동안 환류하고 MeOH 와 SOCl2 를 제거하였다. 잔류물을 펜탄내에서 분쇄하였다. 현탁액을 필터링하여 오프-화이트 고체인 화합물 I-8(0.87 g, 95%)을 얻었다. MS m/z 458.1 (M++1).
CH2Cl2(40 mL)내의 HATU(1.12 g, 3.0 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBT, 0.41g, 3.0 mmol), I-8(0.86 g, 1.9 mmol) 및 2-t-부톡시카르보닐아미노-논-8-에노익산(1.21 g, 1.9 mmol) 용액에 실온에서 N-메틸모르폴린(NMM, 1.02 g, 9.9mmol)를 가하였다. 오버나잇으로 교반한 후, 혼합물을 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 I-9(1.03 g, 73%)을 얻었다. MS m/z 711.3 (M++1).
THF(20 mL) 내의 화합물 I-9(1.01 g, 1.4 mmol)의 용액에 실온에서 0.5M LiOH (5.7 mL, 2.9 mmol)를 가하였다. 오버나잇으로 교반한 후, 반응 혼합물을 10% HCl로 pH < 7로 중화하고 진공하에서 농축하였다. 얻어진 잔류물을 필터링하고 물로 세척하여 화합물 I-10(0.91 g, 92%)을 얻었다. MS: m/z 697.3 (M++1).
NMM (0.12 g, 1.2 mmol)을 실온에서 CH2Cl2(10 mL) 내의 화합물 I-3(0.28 g, 0.4mmol), HATU(0.31 g, 0.8 mmol), HOBT (0.08 g, 0.6 mmol) 및 화합물 I-10(0.09 g, 0.4 mmol)의 용액에 가하였다. 오버나잇으로 교반한 후, 반응 혼합물을 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 I-11(0.10 g, 85%)을 얻었다. MS m/z 921.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.24 (s, 1H), 8.61 (d, 2H), 8.26 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.73-7.64 (m, 2H), 7.54-7.47 (m, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.88-5.70 (m, 2H), 5.38-5.25 (m, 2H), 5.16 (d, 1H), 5.00-4.90 (m, 2H), 4.60 (dd, 1H), 4.88-4.34 (m, 2H), 4.18-4.10 (m, 1H), 2.98-2.89 (m, 1H), 2.68 (dd, 2H), 2.18-1.96 (m, 6H), 1.50-1.32 (m, 7H), 1.28 (s, 9H), 1.09-1.25 (m, 2H).
CH2Cl2(10 mL) 내의 화합물 I-11(0.10 g, 0.11 mmol)용액에 질소하에서 실온에서 호베이다-그럽스 2nd(35 mg, 0.056 mmol)를 가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 40℃에서 24 시간 동안 교반하여 복분해 고리생성(metathesis cyclization)을 수행하였다. 반응을 켄칭하고 반응 혼합물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1 (30 mg, 31%)을 얻었다.MS: m/z 881.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.39 (s, 1H), 8.59 (d, 2H), 8.21 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.69-7.57 (m, 2H), 7.46 (dd, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.12 (d, 1H), 4.97 (dd, 1H), 4.81-4.68 (m, 2H), 4.28-4.07 (m, 2H), 2.96-2.49 (m, 3H), 2.30 (q, 1H), 1.96-1.12 (m, 14H), 1.08 (s, 9H), 0.96-0.82 (m, 2H).
실시예 2: {4-사이클로프로판설포닐아미노카르보닐-2,15-디옥소-18-[2-(4-트리플루오로메틸-페닐)-벤조[4,5]푸로[3,2-d]피리미딘-4-일옥시]-3,16-디아자-트리사이클로[14.3.0.04,6]노나덱-7-엔-14-일}-카바믹산 사이클로펜틸 에스터(화합물 2)의 합성
화합물 2 는 아래 나타낸 루트로 제조되었다:
5mL CH2Cl2내의 화합물 I-11(0.11 g, 0.14 mmol)용액에 디옥산(2 mL)내의 4N HCl를 실온에서 4시간동안 가하였다. HCl, 디옥산 및 CH2Cl2을 증발시켜 제거하고 크루드 화합물 I-12을 얻었으며, 이는 추가 정제 없이 다음 단계에 사용되었다.
크루드 I-12를 아세토니트릴 2 mL에 녹이고 NaHCO3 포화수용액(1 mL)을 가하였다. 10분간 교반한 후, 사이클로펜틸클로로포르메이트 (0.02 g, 0.15 mmol)를 실온에서 반응 혼합물에 가하였다. 반응 혼합물을 추가로 2시간 동안 교반하였다. NaHCO3 포화수용액으로 켄칭한 후, 혼합물을 CH2Cl2로 추출하여 크루드 화합물 I-13(0.11 g, 83%)을 얻었다. MS: m/z 921.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.39 (s, 1H), 8.59 (d, 2H), 8.21 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.69-7.57 (m, 2H), 7.46 (dd, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.12 (d, 1H), 4.97 (dd, 1H), 4.81-4.68 (m, 2H), 4.28-4.07 (m, 2H), 2.96-2.49 (m, 3H), 2.30 (q, 1H), 1.96-1.12 (m, 15H), 1.08 (s, 9H), 0.96-0.82 (m, 2H).
화합물 I-13을 호베이다-그럽스 2nd (35 mg, 0.056 mmol)로 처리하여 실시예에 기재된 바와 같이 복분해 고리생성을 수행하여 화합물 2를 얻었다. MS: m/z 893.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.36 (s, 1H), 8.61 (d, 2H), 8.23 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.69-7.43 (m, 3H), 7.09 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.71 (q, 1H), 5.17 (d, 1H), 4.98 (dd, 1H), 4.77 (dd, 1H), 4.48 (brs, 1H), 4.63 (d, 1H), 4.30-4.07 (m, 2H), 2.97-2.46 (m, 3H), 2.29 (q, 1H), 1.96-1.06 (m, 22H), 0.96-0.82 (m, 2H).
실시예 3-52: 화합물 3-52의 합성
화합물 3-52의 각각은 실시예 1 및 실시예 2기재된 방법과 유사한 방법으로 제조되었다.
화합물 3: MS: m/z 857.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.42 (s, 1H), 8.41 (d, 2H), 7.97 (s, 1H), 7.51-7.35 (m, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.02 (d, 2H), 6.10 (s, 1H), 5.68 (q, 1H), 5.16 (d, 1H), 4.96 (dd, 1H), 4.75 (dd, 1H), 4.65 (d, 1H), 4.34-4.07 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.97-2.50 (m, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.30 (q, 1H), 2.05-0.81 (m, 25H).
화합물 4: MS: m/z 869.3 (M++1);
화합물 5: MS: m/z 803.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.31 (s, 1H), 8.29 (d, 1H), 7.67-7.54 (m, 3H), 7.44 (dd, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.58 (dd, 1H), 6.09 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.05 (d, 1H), 4.97 (dd, 1H), 4.74 (dd, 1H), 4.63 (d, 1H), 4.26-4.04 (m, 2H), 2.95-2.20 (m, 4H), 1.95-1.15 (m, 14H), 1.08 (s, 9H), 0.98-0.81 (m, 2H).
화합물 6: MS: m/z 815.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.38 (s, 1H), 8.29 (d, 1H), 7.67-7.38 (m, 4H), 7.28-7.21 (m, 2H), 6.58 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.30 (q, 1H), 5.26 (d, 1H), 5.02-4.86 (m, 1H), 4.80-4.68 (m, 1H), 4.57 (d, 1H), 4.53-4.46 (m, 1H), 4.31-4.18 (m, 1H), 4.08 (dd, 1H), 2.96-2.18 (m, 4H), 2.04-0.82 (m, 24H).
화합물 7: MS: m/z 845.3 (M++1);
화합물 8: MS: m/z 857.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.33 (s, 1H), 8.46 (dd, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.46 (dd, 2H), 7.18 (dd, 2H), 7.02 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.70 (q, 1H), 5.18-4.83 (m, 3H), 4.73 (dd, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.36-4.06 (m, 2H), 3.63 (brs, 1H), 2.95-2.46 (m, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.25 (q, 1H), 2.05-0.76 (m, 23H).
화합물 9: MS: m/z 813.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.44 (s, 1H), 8.48 (dd, 2H), 8.23 (d, 1H), 7.64-7.42 (m, 7H), 6.13 (s, 1H), 5.66 (q, 1H), 5.25 (d, 1H), 4.95 (dd, 1H), 4.75 (dd, 1H), 4.68 (d, 1H), 4.26-4.10 (m, 2H), 2.96-2.22 (m, 4H), 1.93-1.15 (m, 22H), 1.11 (s, 9H), 0.98-0.80 (m, 2H).
화합물 10: MS: m/z 825.3 (M++1);
화합물 11: MS: m/z 831.5 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.45 (s, 1H), 8.42 (d, 2H), 7.82 (d, 1H), 7.58-7.42 (m, 4H), 7.40-7.21 (m, 2H), 6.07 (s, 1H), 5.63 (q, 1H), 5.23 (d, 1H), 4.91 (dd, 1H), 4.82-4.70 (m, 1H), 4.67 (d, 1H), 4.24-4.02 (m, 2H), 2.94-2.36 (m, 3H), 2.34-2.18 (m, 1H), 1.94-1.18 (m, 14H), 1.08 (s, 9H), 0.98-0.78 (m, 2H).
화합물 12: MS: m/z 843.3 (M++1);
화합물 13: MS: m/z 877.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.38 (s, 1H), 8.51 (d, 2H), 8.19 (d, 1H), 7.78 (dd, 1H), 7.40-7.24 (m, 2H), 7.06 (d, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.70 (q, 1H), 5.10 (d, 1H), 4.98 (dd, 1H), 4.68 (brs, 1H), 4.58 (d, 1H), 4.32-4.12 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 2.98-0.78 (m, 30H).
화합물 14: MS: m/z 861.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.35 (s, 1H), 8.43 (d, 2H), 8.18 (dd, 1H), 7.76 (dd, 1H), 7.38-7.28 (m, 3H), 7.08 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.02 (d, 1H), 4.95 (dd, 1H), 4.67 (dd, 1H), 4.59 (d, 1H), 4.28-4.08 (m, 2H), 2.95-2.48 (m, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.32-2.16 (m, 1H), 1.94-0.78 (m, 25H).
화합물 15: MS: m/z 847.2, 849.2 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.40 (s, 1H), 8.42 (d, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.58-7.42 (m, 5H), 7.38 (s, 1H), 6.07 (s, 1H), 5.64 (q, 1H), 5.16 (d, 1H), 4.93 (dd, 1H), 4.75 (dd, 1H), 4.65 (d, 1H), 4.24-4.30 (m, 1H), 2.95-2.20 (m, 4H), 1.96-1.68 (m 5H), 1.60-1.20 (m, 10H), 1.09 (s, 9H), 0.98-0.80 (m, 2H).
화합물 16: MS: m/z 859.6, 861.6 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.29 (s, 1H), 8.46 (dd, 2H), 8.20 (s, 1H), 7.60-7.49 (m, 5H), 6.98 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.10 (d, 1H), 4.95 (dd, 1H), 4.73 (dd, 1H), 4.55 (d, 1H), 4.25-4.10 (m, 2H), 2.96-2.22 (m, 4H), 1.96-0.84 (m, 25H).
화합물 17: MS: m/z 843.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.41 (s, 1H), 8.44 (d, 2H), 8.23 (d, 1H), 7.68-7.42 (m, 3H), 7.19 (s, 1H), 7.04 (d, 2H), 6.14 (s, 1H), 5.68 (q, 1H), 5.15 (d, 1H), 4.97 (dd, 1H), 4.78-4.73 (m, 1H), 4.65 (d, 1H), 4.25 (dd, 1H), 4.12 (d, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.96-2.22 (m, 4H), 1.96-1.17 (m, 14H), 1.13 (s, 9H), 0.96-0.82 (m, 2H).
화합물 18: MS: m/z 855.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.37 (s, 1H), 8.45 (d, 2H), 8.25 (d, 1H), 7.70-7.53 (m, 2H), 7.45 (d, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.04 (d, 2H), 6.17 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.24 (d, 1H), 4.98 (dd, 1H), 4.75 (dd, 1H), 4.57 (d, 1H), 4.30-4.09 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 2.97-2.44 (m, 3H), 2.28 (q, 1H), 1.96-1.06 (m, 25H), 0.96-0.82 (m, 2H).
화합물 19: MS: m/z 848.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.48 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.55-46 (m, 2H), 7.19 (dd, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.70 (q, 1H), 5.05-4.94 (m, 2H), 4.70 (dd, 1H), 4.63 (d, 1H), 4.67-4.51 (m, 2H), 2.96-2.51 (m, 3H), 2.28 (q, 1H), 1.96-1.12 (m, 14H), 1.12 (s, 9H), 0.96-0.82 (m, 2H).
화합물 20: MS: m/z 846.3 (M++1);
화합물 21: MS: m/z 838.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.34 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.11 (dd, 1H), 7.82 (dd, 1H), 7.62-7.52 (m, 2H), 7.40 (ddd, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 5.65 (q, 1H), 5.06 (d, 1H), 4.93 (dd, 1H), 4.75 (d, 1H), 4.68 (dd, 1H), 4.26-4.16 (m, 1H), 4.07 (dd, 1H), 2.92-2.50 (m, 3H), 2.30 (q, 1H), 1.93-0.81 (m, 25H).
화합물 22: MS: m/z 850.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.34 (s, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.10 (dd, 1H), 7.92 (dd, 1H), 7.62-7.52 (m, 2H), 7.38 (ddd, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.11 (s, 1H), 5.64 (q, 1H), 5.19 (d, 1H), 4.97-4.83 (m, 2H), 4.76 (d, 1H), 4.66 (dd, 1H), 4.31-4.20 (m, 1H), 4.06 (dd, 1H), 2.94-2.48 (m, 3H), 2.28 (q, 1H), 1.90-0.82 (m, 24H).
화합물 23: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.41 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.13 (dd, 1H), 7.79 (dd, 1H), 7.67-7.56 (m, 2H), 7.46 (dd, 1H), 7.39 (ddd, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 5.66 (q, 1H), 5.07 (d, 1H), 4.94 (dd, 1H), 4.75 (d, 1H), 4.68 (dd, 1H), 4.27-4.17 (m, 1H), 4.08 (dd, 1H), 2.93-2.48 (m, 3H), 2.31 (q, 1H), 1.92-1.26 (m, 13H), 1.22 (s, 9H), 1.20-0.81 (m, 4H).
화합물 24: MS: m/z 816.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.33 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.11 (dd, 1H), 7.88 (dd, 1H), 7.67-7.56 (m, 2H), 7.46 (dd, 1H), 7.43-7.30 (m, 2H), 6.12 (s, 1H), 5.64 (q, 1H), 5.22 (d, 1H), 4.92 (dd, 1H), 4.77 (d, 1H), 4.66 (dd, 1H), 4.32-4.22 (m, 1H), 4.04 (dd, 1H), 2.93-2.46 (m, 3H), 2.31 (q, 1H), 1.92-0.80 (m, 25H).
화합물 25: MS: m/z 818.3 (M++1);
화합물 26: MS: m/z 830.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.40 (s, 1H), 8.18-8.00 (m, 2H), 7.85 (d, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.47-7.25 (m, 3H), 6.09 (s, 1H), 5.65 (q, 1H), 5.21 (d, 1H), 5.02-4.66 (m, 4H), 4.33-4.20 (m, 1H), 4.04 (d, 1H), 4.03 (s, 3H), 2.95-2.40 (m, 6H), 2.32 (q, 1H), 1.96-0.78 (m, 24H).
화합물 27: MS: m/z 786.3 (M++1);
화합물 28: MS: m/z 798.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.37 (s, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.22 (d, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.67-7.61 (m, 3H), 7.49-7.38 (m, 2H), 7.33 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 5.64 (q, 1H), 5.29 (d, 1H), 4.92 (dd, 1H), 4.83-4.64 (m, 2H), 4.33 (dd, 1H), 4.08 (d, 1H), 2.96-2.24 (m, 4H), 1.91-1.02 (m, 23H), 0.96-0.82 (m, 2H).
화합물 29: MS: m/z 834.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.31 (s, 1H), 8.20-8.09 (m, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.45-7.32 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.25 (s, 1H), 5.66 (q, 1H), 5.06 (d, 1H), 4.94 (dd, 1H), 4.77 (d, 1H), 4.72-4.62 (m, 1H), 4.29-4.14 (m, 1H), 4.09 (d, 1H), 4.03 (s, 3H), 2.93-2.24 (m, 4H), 1.96-0.78 (m, 25H).
*화합물 30: MS: m/z 847.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.37 (s, 1H), 8.13 (dd, 1H), 7.93-7.77 (m, 2H), 7.46-7.28 (m, 3H), 7.12 (d, 1H), 6.19 (s, 1H), 5.64 (q, 1H), 5.21 (d, 1H), 4.98-4.83 (m, 2H), 4.77 (d, 1H), 4.64 (dd, 1H), 4.34-4.05 (m, 2H), 4.02 (s, 3H), 2.92-2.24 (m, 4H), 1.94-0.76 (m, 24H).
화합물 31: MS: m/z 848.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.29 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.81 (dd, 1H), 7.48-7.34 (m, 2H), 7.20-7.06 (d, 2H), 6.27 (s, 1H), 5.69 (q, 1H), 5.05 (d, 1H), 4.96 (dd, 1H), 4.83 (d, 1H), 4.69 (dd, 1H), 4.36-4.16 (m, 3H), 4.10 (dd, 1H), 2.95-2.54 (m, 3H), 2.36 (q, 1H), 1.96-0.81 (m, 28H).
화합물 32: MS: m/z 860.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.41 (s, 1H), 8.10 (dd, 1H), 7.93-7.68 (m, 3H), 7.39-7.28 (m, 2H), 7.09 (d, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.58 (q, 1H), 5.38 (d, 1H), 4.96-4.76 (m, 3H), 4.68 (dd, 1H), 4.36-4.19 (m, 3H), 4.05 (dd, 1H), 2.92-2.30 (m, 4H), 1.94-0.76 (m, 27H).
화합물 33: MS: m/z 816.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.33 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.66-7.56 (m, 2H), 7.51-7.41 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 6.16 (s, 1H), 5.40 (q, 1H), 5.07 (d, 1H), 4.95 (dd, 1H), 4.76 (d, 1H), 4.64 (dd, 1H), 4.32-4.21 (m, 1H), 4.06 (dd, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.93-2.24 (m, 4H), 1.94-0.78 (m, 25H).
화합물 34: MS: m/z 828.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.41 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.67-7.55 (m, 3H), 7.46 (d, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.03 (dd, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.63 (q, 1H), 5.52-5.40 (m, 1H), 5.32 (d, 1H), 5.10-4.64 (m, 3H), 4.38-4.26 (m, 1H), 4.13-4.02, (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.93-2.24 (m, 4H), 2.04-0.81 (m, 24H).
화합물 35: MS: m/z 830.3 (M++1).
화합물 36: MS: m/z 842.4 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.37 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.54-7.38 (m, 4H), 7.02 (d, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.62 (q, 1H), 5.33 (d, 1H), 4.96-4.62 (m, 3H), 4.33 (dd, 1H), 4.06 (dd, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.96-2.62 (m, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.50-2.24 (m, 1H), 1.91-0.82 (m, 24H).
화합물 37: MS: m/z 846.4 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.35 (s, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.11-6.96 (m, 4H), 6.09 (s, 1H), 5.68 (q, 1H), 5.10-5.00 (m, 1H), 4.96 (dd, 1H), 4.75 (d, 1H), 4.68-4.57 (m, 1H), 4.34-4.22 (m, 1H), 4.05 (d, 1H), 3.94 (s, 6H), 2.95-2. 22 (m, 4H), 1.95-0.76 (m, 25H).
화합물 38: MS: m/z 858.3 (M++1).
화합물 39: MS: m/z 862.4 (M++1).
화합물 40: MS: m/z 874.4 (M++1);
화합물 41: MS: m/z 848.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.37 (s, 1H), 8.25 (dd, 1H), 7.75 (dd, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 7.25-7.14 (m, 3H), 6.15 (s, 1H), 5.62 (q, 1H), 5.17 (d, 1H), 4.90 (dd, 1H), 4.76 (d, 1H), 4.68 (dd, 1H), 4.29-4.02 (m, 4H), 2.92-2.45 (m, 3H), 2.29 (q, 1H), 1.92-0.81 (m, 28H).
화합물 42: MS: m/z 818.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.34 (s, 1H), 8.26 (dd, 1H), 7.82-7.18 (m, 3H), 7.51 (d, 1H), 7.26-7.14 (m, 2H), 6.18 (s, 1H), 5.66 (q, 1H), 5.21 (d, 1H), 4.94 (dd, 1H), 4.80-4.64 (m, 2H), 4.34-4.02 (m, 5H), 2.92-2.20 (m, 4H), 1.96-0.78 (m, 27H).
화합물 43: MS: m/z 834.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.40 (s, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.09 (dd, 1H), 7.77 (dd, 1H), 7.43-7.32 (m, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.10-7.01 (m, 2H), 6.11 (s, 1H), 5.68 (q, 1H), 5.09 (d, 1H), 4.96 (dd, 1H), 4.76 (d, 1H), 4.68 (dd, 1H), 4.32-4.02 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.94-2.28 (m, 4H), 1.96-0.79 (m, 25H).
화합물 44: MS: m/z 846.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.34 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.12 (dd, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.46-7.35 (m, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.05 (dd, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.71 (q, 1H), 5.12 (d, 1H), 4.02-4.93 (m, 2H), 4.80 (d, 1H), 4.65 (dd, 1H), 4.36-4.24 (m, 1H), 4.12-4.01 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.96-2.24 (m, 4H), 1.96-0.79 (m, 24H).
화합물 45: MS: m/z 862.3 (M++1).
화합물 46: MS: m/z 874.3 (M++1).
화합물 47: MS: m/z 834.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.45 (s, 1H), 8.28 (dd, 1H), 8.07-7.85 (m, 2H), 7.39 (dd, 1H), 7.23-7.13 (m, 3H), 6.40 (s, 1H), 5.66 (q, 1H), 5.02 (d, 1H), 4.93 (dd, 1H), 4.82 (d, 1H), 4.70 (dd, 1H), 4.24-4.14 (m, 1H), 4.09 (dd, 1H), 4.03 (s, 3H), 2.94-2.28 (m, 4H), 1.96-0.79 (m, 25H).
화합물 48: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.39 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.65 (dd, 1H), 7.56 (dd, 1H), 7.46-7.31 (m, 3H), 6.14 (s, 1H), 5.62 (q, 1H), 5.21 (d, 1H), 4.90 (dd, 1H), 4.76 (d, 1H), 4.70 (dd, 1H), 4.34-4.23 (m, 1H), 4.14-4.03 (m, 1H), 2.91-2.24 (m, 4H), 2.05-0.82 (m, 25H).
화합물 49: MS: m/z 816.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.40 (s, 1H), 8.22 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.98 (dd, 1H), 7.62 (dd, 1H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.43-7.28 (m, 2H), 6.10 (s, 1H), 5.57 (q, 1H), 5.36 (d, 1H), 4.96-4.82 (m, 1H), 4.80-4.64 (m, 3H), 4.36-4.01 (m, 2H), 2.91-2.22 (m, 4H), 2.10-0.81 (m, 24H).
화합물 50: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.01 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.75 (dd, 1H), 7.58 (d, 1H), 7.35-7.01 (m, 3H), 6.11 (s, 1H), 5.58-5.42 (m, 2H), 4.68 (dd, 1H), 4.19-4.03 (m, 3H), 3.94 (s, 3H), 2.91-2.24 (m, 4H), 2.05-0.82 (m, 25H).
화합물 51: MS: m/z 816.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.28 (s, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.01 (dd, 1H), 7.67 (dd, 1H), 7.58 (dd, 1H), 7.45 (dd, 1H), 7.35 (ddd, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 5.67 (q, 1H), 5.16 (d, 1H), 4.94 (dd, 1H), 4.98-4.61 (m, 2H), 4.35-4.24 (m, 1H), 4.08 (dd, 1H), 2.91-2.22 (m, 4H), 2.10-0.81 (m, 24H).
화합물 52: MS: m/z 846.3 (M++1).
실시예 53: {4-사이클로프로판설포닐아미노카르보닐-18-[2-(5,6-디하이드로-4H-사이클로펜타씨아졸-2-일)-7-메톡시-퀴놀린-4-일옥시]-2,15-디옥소-3,16-디아자-트리사이클로[14.3.0.04,6]노나덱-7-엔-14-일}-카바믹 산 터트-부틸 에스터의 합성
화합물 53은 아래의 루트를 통해 제조되었다:
톨루엔 내의 아미노-티옥소-아세트산 에틸에스터(6.00 g, 45.0 mmol)와 2-클로로-사이클로펜타논(5.60 g, 47.0 mmol)의 혼합물을 4시간 동안 가열환류하였다. 얻어진 갈색용액을 실온으로 식히고, EtOAc(50 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화수용액(50 mL) 및 브라인(50 mL)으로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조하고, 필터링하고, 진공하에서 농축하였다. 베이지색 고체를 실리카 겔 칼럼(헥산 내에 10 % EtOAc) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여 연한 갈색 점착성 오일인 5,6-디하이드로-4H-사이클로펜타씨아졸-2-카르복시산에틸 에스터 I-14(7.60 g, 86%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 198.3.
4:1:1 THF/MeOH/ H2O (30 mL)내의 5,6-디하이드로-4H-사이클로펜타씨아졸-2-카르복시산에틸 에스터 I-14(2.00 g, 10.0 mmol)용액을 실온에서 5시간동안 2 N NaOH 수용액(7.5 mL, 1.5 eq.)으로 처리하였다. 혼합물을 진공하에서 건조하여 5,6-디하이드로-4H-사이클로펜타씨아졸-2-카르복시산I-15을 얻었으며, 이는 추가 정제 없이 다른 단계에 바로 사용되었다. ESI-MS (M+H+) = 170.2.
피리딘(80 mL) 내의 4-메톡시-2-아미노-아세토페논(1.67 g, 10.0 mmol) 및 5,6-디하이드로-4H-사이클로펜타씨아졸-2-카르복시산I-15(1.69 g, 10.0 mmol)의 용액을 냉각 배스를 이용하여 -30℃로 냉각하였다. 그 다음 포스포러스 옥시클로라이드(2.8 mL, 30.0 mmol)를 15분에 걸쳐 드롭와이즈 방식으로 가하였다. 0.5시간동안 -30℃에서 교반한 후, 배스를 제거하고 반응혼합물을 실온으로 올라가도록 했다. 반응 혼합물을 2시간동안 교반한 후, 얼음물에 부었다. 혼합물의 pH를 2 N NaOH 수용액으로 11로 조절하고 CH2Cl2로 혼합물을 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4로 건조하고, 필터링하고, 진공하에서 농축하였다. 크루드 산물을 실리카 겔 칼럼(헥산 내에 30% EtOAc) 플래시 크로마토그래피로 정제하여 엷은 베이지색 고체인 아미드 화합물 I-16(1.10 g, 35%)을 얻었다: ESI-MS (M+H+) = 317.3.
t-BuOK(1.00 g, 8.8 mmol)를 무수 t-BuOH (10 mL)내의 아미드 화합물 I-16(0.71 g, 2.2 mmol)의 현탁액에 가하였다. 반응 혼합물을 2시간동안 가열환류하고, 실온으로 냉각하고 HCl(디옥산 내 4N, 3 mL)을 가하여 산성화했다. 혼합물을 진공하에서 농축하고 얻어진 잔류물을 10% KHSO4용액에 부었다. 필터링한 후, 고체를 에테르와 물로 세척하고, 진공에서 건조하여 베이지색 고체인 퀴놀린 화합물 I-17(0.41 g, 61%)을 얻었다. 1H NMR (CDCl3-CD3OD) 2.76-2.90 (m, 2H), 3.18 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.28 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.59 (s, 1H), 7.26-7.38 (m, 1H), 7.46-7.72 (m, 2H), 8.41 (d, J = 8.7 Hz, 1H). ESI-MS (M+H+) = 299.4.
DMF(30 mL) 내의 퀴놀린 화합물 I-17(0.66 g, 2.2 mmol), 프롤린 화합물 I-18(0.89 g, 2.2 mmol) 및 트리페닐포스핀(1.2 g, 4.5 mmol)용액을 0℃로 냉각시켰다. 디이소프로필 아조디카르복실레이트(DIAD, 0.9 mL, 4.5 mmol)를 15분간 드롭와이즈 방식으로 가하였다. 그 다음 반응 혼합물을 실온까지 천천히 올리고 오버나잇으로 계속하여 교반하였다. 진공하에서 용매를 제거한 후, 혼합물을 CH2Cl2(100 mL)로 희석하고, 물(100 mL)과 브라인(50 mL)으로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조하고, 필터링하고, 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼(헥산 내에 50% EtOAc)상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하여 에스터 화합물 I-19 (1.23 g, 82%)를 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 679.3.
2 N NaOH 수용액(10 mL)을 THF(40 mL) 내의 에스터 화합물 I-19(1.91 g, 트리페닐포스페이트옥사이드로 오염) 용액에 가하였다. 균일한(homogeneous)용액을 얻기 위해 추가로 MeOH를 10mL 더 가하고 얻어진 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1N HCl로 pH 3으로 산화시키고, 다음으로 CH2Cl2로 2번 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4로 건조하고, 필터링하고, 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼(CH2Cl2내의10 % MeOH) 플래시 크로마토그래피로 정제하여 노란색 고체인 산 화합물 I-20(0.94 g, 1.4 mmol, 2 단계에서 64%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 665.3.
CH2Cl2(30 mL) 내의 산 화합물 I-20(0.73 g, 1.1 mmol), HATU(0.91 g, 2.2 mmol) 및 DMAP(0.1 g, 1.1 mmol)의 용액을 실온에서 0.5시간동안 교반한 후, CH2Cl2(20 mL)내의 에틸 1-아미노-2-비닐사이클로프로판카르복실레이트(0.29 g, 1.1 mmol) 및 DIPEA(1.2 mL, 6.7 mmol)을 가하였다. 가함을 마친 후에, 반응 혼합물을 실온에서 추가 6시간동안 교반하고, CH2Cl2(100 mL)로 희석하고, 물(100 mL) 및 브라인(50 mL)으로 세척하고, 무수 MgSO4로 건조하고, 필터링하고, 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼(헥산 내의 50% EtOAc) 플래시 크로마토그래피로 정제하여 노란색 고체인 에스터 화합물 I-21(0.72 g, 82%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 802.3.
톨루엔 (70 mL)내의 에스터 화합물 I-21(0.68 g, 0.85 mmol)의 용액을 질소로 디가스하였다. 호베이다-그럽스 촉매 2nd 세대(0.05 g, 10% mol)를 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 50℃로 오버나잇으로 가열하였다. 농축된 용매와 잔류물을 실리카 겔 칼럼(1 % 에테르 내의 MeOH) 상의 플래시 크로마토그래피로 정제하여 산물 I-22 (0.33 g, 50%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 774.3.
2 N NaOH 수용액(6 mL)을 THF(30 mL) 내의 에스터 화합물 I-22 (0.33 g, 0.43 mmol)용액에 가하였다. 균일한 용액을 얻기 위해 추가의 MeOH 6mL를 더 가하고 얻어진 용액을 실온에서 2시간동안 교반하였다. 혼합물을 1N HCl로 pH 3으로 산화시키고, 그 다음으로 CH2Cl2로 2번 추출하였다. 유기층을 무수 MgSO4로 건조하고, 필터링하고, 진공하에서 농축하였다. 크루드 화합물 I-23은 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다. ESI-MS (M+H+) = 746.3.
THF(20 mL) 내의 산화합물 I-23(0.23 g, 0.3 mmol), HATU(0.23 g, 0.6 mmol) 및 DMAP(0.03 g, 0.3 mmol)의 용액을 실온에서 0.5시간동안 교반하였고, 사이클로프로판설포닉산 아미드(0.11 g, 0.9 mmol), DIPEA(0.3 mL, 2 mmol) 및 DBU(0.3 mL, 2 mmol)를 가하였다. 가함이 완료된 후, 반응 혼합물을 50℃로 6시간동안 가열하였고, CH2Cl2(100 mL)로 희석하고, 물(50 mL) 및 브라인(50 mL)으로 세척하고, 무수 MgSO4으로 건조하고 필터링하고 진공하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼(헥산 내의 50% EtOAc) 플래시 크로마토그래피로 정제하여 노란색 고체인 화합물 53(0.12 g, 47%)을 얻었다. MS: m/z 849.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.24 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.00 (dd, 1H), 5.62 (q, 1H), 5.45-5.38 (m, 1H), 5.24 (d, 1H), 4.91 (dd, 1H), 4.70 (d, 1H), 4.55 (dd, 1H), 4.32-4.22 (m, 1H), 4.04-3.95 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.20-2.20 (m, 4H), 1.88-1.34 (m, 17H), 1.31 (s, 9H), 1.26-0.82 (m, 5H).
실시예 54: {4-사이클로프로판설포닐아미노카르보닐-18-[6-(3-플루오로-페닐)-9-씨아(thia)-1,5,7-트리아자-플루오렌-8-일옥시]-2,15-디옥소-12-옥사-3,16-디아자-트리사이클로[14.3.0.04,6] 노나덱-7-엔-14-일}-카바믹 산 터트-부틸 에스터 (화합물 54)의 합성
화합물 54를 아래와 같은 루트로 제조하였다:
POCl3(5.66 mL, 61.6 mmol) 내의 6-(3-플루오로-페닐)-7H-9-씨아-1,5,7-트리아자-플루오렌-8-원(1.83 g, 6.16 mmol)의 용액을 3시간동안 가열환류하였다. 진공에서 POCl3를 제거한 후, 잔류물을 물에 붇고 포화 NaHCO3 로 pH > 7로 켄칭하고, 15분간 교반하고, 필터링하여 크루드 화합물 I-24(1.82 g, 93%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 316.0.
DMSO 내의 Boc-4R-하이드록시프롤린 (1.33 g, 5.76 mmol) (13.3 mL) 의 현탁액에 실온에서 t-BuOK(1.94 g, 17.28 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 1.5 시간동안 교반한 후, 화합물 I-24(1.82 g, 5.76 mmol)을 DMSO (18.2 mL)내에 녹이고 오버나잇동안 얼음물 배스에서 반응혼합물에 드롭와이즈로 가하였다. 얻어진 혼합물을 찬 물에 붇고, 수용액을 1N HCl로 pH < 2로 산화하고 필터링하여 크루드 화합물 I-25(2.77 g, 94%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 511.1.
NMM(3.67 mL, 33.4 mmol)을 CH2Cl2(33.4 mL)내의 화합물 I-25(3.41 g, 6.68 mmol), HATU(5.08 g, 13.36 mmol), HOBt(1.35 g, 10.02 mmol) 및 사이클로프로판설포닉산(1-아미노-2-비닐-사이클로프로판카르보닐)-아미드(1.69 g, 7.35 mmol)의 용액에 가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 오버나잇으로 교반하였다. 얻어진 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하고, 포화 NaHCO3 및 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하였다. 농축 후에, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 내의 50% EtOAc)로 정제하여 화합물 I-26(3.20 g, 66%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 723.2.
CH2Cl2(3.45 mL) 내의 I-26(0.51 g, 0.69 mmol)용액에 실온에서 CF3COOH(0.53 mL, 6.9 mmol)를 가하였다. 반응 혼합물을 오버나잇으로 교반한 후, 용액을 농축하여 크루드 화합물 I-27을 얻었으며, 이는 추가 정제 없이 다음 단계에 사용되었다. ESI-MS (M+H+) = 623.2.
NMM(0.3 mL, 2.76 mmol)을 CH2Cl2(3.45 mL) 내의 화합물 I-27(0.43 g, 0.69 mmol), HATU(0.34 g, 0.9 mmol) 및 (s)-2-(터트-부톡시카르보닐아미노)-3-(펜트-4-엔일옥시)프로피온산(0.25 g, 0.9 mmol) 용액에 가했다. 반응 혼합물을 실온에서 오버나잇으로 교반하였다. 얻어진 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, CH2Cl2로 추출하고, 포화 NaHCO3 및 브라인으로 세척하고, MgSO4로 건조하였다. 농축 후에, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 내에 50 % EtOAc)로 정제하여 화합물 I-28 (0.52 g, 85%)을 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 877.7
톨루엔(59 mL) 내의 I-28(0.52 g, 0.59 mmol) 용액을 질소로 디가스하였다. 호베이다-그럽스 촉매 2nd 세대(0.04 g, 10% mol)를 실온에서 가하였다. 반응 혼합물을 50℃로 오버나잇 가열하였다. 농축된 용매와 잔류물을 TLC(에테르 내 1 % MeOH)로 정제하여 화합물 54(0.07 g, 14%)를 얻었다. ESI-MS (M+H+) = 850.2; 1H NMR (CDCl3) 10.16 (s, 1H), 8.86-8.58 (m, 2H), 8.38 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.57-7.46 (m, 2H), 7.20 (dd, 1H), 6.28-6.20 (m, 1H), 5.64 (q, 1H), 5.31 (d, 1H), 5.21 (dd, 1H), 4.93 (dd, 1H), 4.68-4.58 (m, 1H), 4.39 (dd, 1H), 4.17-4.09 (m, 1H), 3.68 (dd, 1H), 3.50-3.32 (m, 2H), 3.10-2.88 (m, 2H), 2.61-2.46 (m, 2H), 2.26-2.10 (2H), 2.02-1.76 (m, 2H), 1.55-1.38 (m, 4H), 1.34 (s, 9H), 1.31-0.82 (m, 4H).
실시예 55-60: 화합물 55-60의 합성
화합물 55-60 각각은 실시예 54에 기재된 방법과 유사한 방법으로 제조되었다.
화합물 55: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.19 (s, 1H), 8.81 (d, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.60-7.16 (m, 5H), 6.25 (s, 1H), 5.65 (q, 1H), 5.45 (d, 1H), 5.21 (dd, 1H), 4.93 (brs, 1H), 4.74-4.61 (m, 1H), 4.43-4.34 (m, 1H), 4.13 (d, 1H), 3.75-3.34 (m, 4H), 3.08-2.88 (m, 2H), 2.63-2.45 (m, 2H), 2.27-0.81 (m, 19H).
화합물 56: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.06 (s, 1H), 8.21 (dd, 1H), 7.91 (d, 1H), 7.81 (dd, 1H), 7.39 (dd, 1H), 7.30-7.22 (m, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.24 (s, 1H), 5.63 (q, 1H), 5.39 (d, 1H), 5.18 (dd, 1H), 4.89 (dd, 1H), 4.68-4.58 (m, 1H), 4.43 (d, 1H), 4.13-4.06 (m, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.72 (dd, 1H), 3.52 (dd, 1H), 3.45-3.38 (m, 1H), 3.09-3.87 (m, 2H), 2.68 (dd, 1H), 2.53-1.91 (m, 4H), 1.57-1.41 (m, 6H), 1.37 (s, 9H), 1.28-0.82 (m, 3H).
화합물 57: MS: m/z 848.2 (M++1).
화합물 58: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.20 (s, 1H), 8.33 (d, 1H), 8.16 (dd, 1H), 7.77 (dd, 1H), 7.68-7.36 (m, 6H), 6.22 (s, 1H), 5.62 (q, 1H), 5.42 (d, 1H), 5.16 (dd, 1H), 4.99 (brs, 1H), 4.92 (dd, 1H), 4.68-4.60 (m, 1H), 4.37 (d, 1H), 4.16-4.08 (m, 1H), 3.73-3.35 (m, 4H), 3.08-2.87 (m, 2H), 2.69-2.40 (m, 2H), 2.32-0.81 (m, 17H).
화합물 59: MS: m/z 804.3 (M++1); 1H NMR (CDCl3) 10.18 (s, 1H), 8.34 (d, 1H), 8.17 (dd, 1H), 7.82 (dd, 1H), 7.73-7.40 (m, 4H), 7.35 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.63 (q, 1H), 5.48 (d, 1H), 5.17 (dd, 1H), 4.99 (brs, 1H), 4.91 (dd, 1H), 4.74-4.62 (m, 1H), 4.40 (d, 1H), 4.17-4.08 (m, 1H), 3.75-3.35 (m, 4H), 3.08-2.87 (m, 2H), 2.73-2.40 (m, 2H), 2.30-0.81 (m, 18H).
화합물 60: MS: m/z 838.4 (M++1).
실시예 61: NS3/4A 프로티아제 억제
단백질 발현 및 정제
N-터미널 His6-태그드-NS4A (21-32)-GSGS-NS3(3-181)를 암호화하는 유전자를 포함하는 플라스미드를 단백질 과발현을 위해 대장균스트레인 BL21(DE3) pLysS(Novagen)로 형질변환하였다. 형질변환된 BL21(DE3) pLysS의 단일 콜로니를 200 mL의 라우리아-베르타니(Lauria-Bertani, LB) 미디움 내에서 카나마이신(Kanamycin) 및 클로람페니콜(Chloramphenicol)와 함께 37℃에서 오버나잇으로 배양하였다. 세균배양을 항생물질(antibiotic)을 포함하는 6 L LB 미디움 (Difco)내로 옮기고 22C에서 흔들면서 배양(incubate)하였다. 600 nm에서의 흡수가 0.6에 이른 후, 22C에서 5시간동안 1 mM 이소프로필-1-씨오-β-D-갈락토피라노시드(IPTG)로 배양을 유도하였다. 이어서 배양물을 원심분리(6,000 xg 15분간, 4C)로 채취(harvest)하였다. 셀 펠렛은 150 mL 버퍼 A(50 mM HEPES, pH 7.4, 0.3 M NaCl, 0.1% (w/v) CHAPS, 10 mM 이미다졸, 10% (v/v) 글리세롤) 내에 재현탁(resuspend)되었다. 혼합물을 30 psi에서 동작하는 마이크로플루다이저를 통한 4 패스로 디스럽트(disrupt)한 후에, 세포잔사물을 원심분리(58,250 g 30분, 4℃)로 제거하였다. His6-태그드 단백질을 포함하는 세포 용해물을 그래디프렉 시스템(gradiFrac system, Pharmacia)을 이용하여 10 mM 이미다졸 존재하에서 25 mL Ni-NTA(Qiagen) 칼럼에 3 mL/min로 차지하였다. 칼럼은 10 칼럼볼륨의 라이시스(lysis)버퍼로 세척되었다. 바운드 NS4A(21-32)-GSGS-NS3(3-181)는 300 mM 이미다졸로 보충된 8 칼럼볼륨의 버퍼 A로 용출되었다. 모아진(pool) 프랙션은 버퍼 B(50 mM HEPES, pH 7.4, 0.1% (w/v) CHAPS, 10% (v/v) 글리세롤, 5 mM 디씨오쓰레이톨 (DTT) 및 1 M NaCl)로 평형된 Q-세파로스 칼럼로 추가 정제하였다. NS4A(21-32)-GSGS-NS3(3-181)를 포함하는 용출제를 수집하고 버퍼 C(50 mM HEPES, pH 7.4, 0.1% (w/v) CHAPS, 5 mM DTT, 10%(v/v) 글리세롤)로 미리 평형된 세파크릴(sephacryl)-75 칼럼(16 100 cm, Pharmacia)를 이용하여 0.5 mL/min 의 유속에서 크기-배제 크로마토그래피로 추가 정제하였다. 정제된 단백질을 얼렸고 사용전에 -80℃에 보관하였다.
HPLC 마이크로보어(Microbore) 측정
50 mM Tris, pH 7.4, 100 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.012% CHAPS, 10 mM DTT, 5 μM 서브스트레이트 Ac-Asp-Glu-Asp(EDANS)-Glu-Glu-Abu-ψ-[COOAla]-Ser-Lys(DABCYL)-NH2 (RET S1, ANASPEC) 및 10 μM 테스트 화합물을 포함하는 용액을 준비하였다. 80 μL의 용액을 96-웰 플레이트의 각 웰에 가하였다. 50 mM Tris 버퍼, pH 7.4, 100 mM NaCl, 20% 글리세롤 및 0.012% CHAPS를 포함하는 버퍼내에 20 μL의 10 nM NS3/4A 프로티아제를 가하여 반응을 개시하였다. NS3/4A 프로티아제의 최종 농도는 2 nM였는데, 이는 서브스트레이트 RET S1의 Km보다 낮은 것이다.
측정용액을 30℃에서 30분간 배양하였다. 그 다음 100μL 의 1% TFA를 가하여 반응을 종료시켰다. 200μL 앨리캣을 에질런트 96-웰 플레이트의 각 웰에 옮겼다.
반응산물을 아래 기재와 같이 역상HPLC를 이용하여 분석하였다. HPLC 시스템은 다음을 포함한다: 에질런트 1100, 디가서(Degasser) G1379A, 바이너리 펌프 G1312A, 오토샘플러 G1367A, 칼럼 써모스탯 챔버 G1316A, 다이오드 어레이 디텍터 G1315B, 칼럼: 에질런트, ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4.6 mm, 5 m, P/N 993967-902, 컬럼 써모스탯: 실온, 인젝션 볼륨: 100 L, 용매 A = HPLC 그레이트 물 + 0.09% TFA, 용매 B = HPLC 그레이드 아세토니트릴 + 0.09% TFA. 총 HPLC 러닝 시간은 7.6 분이었으며, 4분간 25 에서 50% 용매 B로 선형적 변화, 30초간 50% 용매 B, 추가 30초간 50 에서 25% 용매 B 변화가 있었다. 칼럼은 다음 샘플의 주입 전에 2.6분동안 25% 용매 B 로 재평형되었다. IC50 값 (NS3/4A 활성의 50% 억제가 관찰되는 농도)을 HPLC 결과에 기초하여 각 테스트 화합물에 대해 계산하였다.
상기 억제 실험에서 화합물 1-60을 테스트하였다. 그 결과, 54개 화합물이 20 nM보다 낮은 IC50 값을 나타냈으며 4개 화합물이 20-100 nM범위의 IC50 값을 보였다.
실시예 62: HCV 레플리콘 세포 측정 프로토콜
HCV 레플리콘을 포함하는 세포를 10% FBS(소태아혈청), 1.0 mg/ml 의 G418 및 적절한 보충제(supplements)를 포함하는 DMEM(미디어 A)내에서 유지(maintain)시켰다.
첫째날에, 레플리콘 세포 모노레이어를 트립신/EDTA혼합물로 처리하고, 제거하고, 48,000 cells/ml의 최종농도까지 미디어 A로 희석하였다. 용액(1 ml)을 24-웰 조직배양 플레이트의 각 웰에 가하고, 5% CO2, 37C에서 조직 배양 인큐베이터에서 오버나잇으로 배양하였다.
둘째날에, 테스트 화합물 (100% DMSO 내) 10% FBS와 적절한 보충제를 포함하는DMEM(미디어 B)로 시리얼하게 희석하였다. DMSO의 최종농도는 희석 시리즈 내내 0.2%로 유지하였다.
레플리콘 세포 모노레이어 상의 미디어를 제거하고, 다양한 농도의 화합물을 포함하는 미디어 B를 가하였다. 화합물이 없는 미디어 B는 화합물-프리 콘트롤로서 다른 웰에 가하였다.
세포는 화합물 또는 미디어 B내의 0.2% DMSO와 함께 5% CO2, 37℃에서 조직 배양 인큐베이터 내에서 72시간동안 배양하였다. 그 다음, 미디어를 제거하고 레플리콘 세포 모노레이어를 PBS로 한번 세척하였다. RNA의 퇴화를 막기위해 RNeasy 키트로부터의 RNA 추출 시약 또는 TRIZOL 시약을 세포에 바로 가하였다. 총 RNA는 추출효율과 일관성을 향상시키기 위해 변형하면서 제조자가 제공한 방법에 따라 추출되었다. 최종적으로, 총 세포 RNA를, HCV 레플리콘 RNA를 포함하여, 용출하고 다음 작업까지 -80℃에서 보관하였다.
TaqMan® 실시간 RT-PCR 정량분석을 구체적인 프라이머 2세트로 설정되었다: 하나는 HCV를 위한 것이고 다른 것은 ACTB (beta-actin)를 위한 것이다. 동일 PCR 웰 내에서 HCV 및 ACTB RNA모두의 정량을 위해 총 RNA을 PCR반응에 가하였다. 실험 실패를 플래그(flag)하였고 각 웰의 ACTB RNA레벨에 기초하여 리젝트하였다. 각 웰에서의 HCV RNA 레벨을 동일한 PCR플레이트 내에서 표준커브런(standard curve run)에 따라 계산하였다. 화합물 처리에 의한 HCV RNA억제 퍼센트는 DMSO 또는 화합물-프리 콘트롤을 억제 0%로 놓고 계산하였다. 주어진 화합물의 적정 커브로부터EC50(HCV RNA 레벨의 50% 억제가 얻어지는 농도)을 계산하였다.
HCV 레플리콘 세포 측정에서 화합물 1-60을 테스트하였다. 그 결과 52개 화합물은 20 nM보다 낮은 EC50 값을 보였으며 3개 화합물은 20-100 nM범위의 20 nM를 보였다.
다른 실시예
본 명세서에 개시된 모든 특징은 다양한 조합으로 결합될 수 있다. 본 명세서에 개시된 특징은 동일한, 동등한 또는 유사한 목적의 다른 특징으로 대체될 수 있다. 따라서, 다르게 기술되지 않았다면, 개시된 각 특징은 동등 또는 유사 특징의 제네릭 의약품(generis series) 중의 예에 불과하다.
위 기재로부터, 당업자라면 본 발명의 핵심적인 특징을 쉽게 확인할 수 있으며, 그 정신과 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 사용 형태와 상황에 맞추어 본 발명을 다양하게 변화하거나 변형시킬 수 있다. 따라서 다른 실시예 또한 다음 청구범위의 범위내에 속한다.

Claims (1)

  1. 식 (I)의 화합물:


    식 (I)
    여기서
    R1 및 R2각각은 독립적으로, H, C1-6 알킬, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴;
    U는 -O-, -NH-, -NH(CO)-, -NHSO- 또는 -NHSO2-;
    W는 -(CH2)m-, -NH(CH2)n-, -(CH2)nNH-, -O(CH2)n-, -(CH2)nO-, -S(CH2)n-, -(CH2)nS-, -SO-, -SO(CH2)n-, -(CH2)nSO-, -SO2(CH2)n- 또는 -(CH2)nSO2-, m은 1, 2 또는 3 이고 n은 0, 1 또는 2;
    X는 -O-, -S-, -NH- 또는 -OCH2-;
    Y는 또는 여기서 V 및 T 각각은, 독립적으로, -CH- 또는 -N-; R은 H, 할로, 니트로, 시아노, 아미노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴; 그리고 A1 및 A2각각은, 독립적으로, C4-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴, 이들 각각은 선택적으로 할로, 니트로, 시아노, 아미노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, 아릴 또는 헤테로아릴로 치환된다; 또는선택적으로 다른 C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴과 융합되고, 이들 각각은 선택적으로 할로, 니트로, 시아노, C1-6 알킬, C1-6 알콕실, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 치환된다;그리고
    Z는 -C(O), -OC(O)-, -NR’C(O)-, -OC(S)-, -NR’-C(S)- 또는 -OC(NH)-; 여기서 R’는 H, C1-6 알킬, C3-10 사이클로알킬, C1-10 헤테로사이클로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴.
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Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG175692A1 (en) 2008-04-15 2011-11-28 Intermune Inc Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
AR075584A1 (es) 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
US8232246B2 (en) 2009-06-30 2012-07-31 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
CN103380132B (zh) 2010-12-30 2016-08-31 益安药业 菲啶大环丙型肝炎丝氨酸蛋白酶抑制剂
CA2822556A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc Macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
CN102911254A (zh) * 2011-08-02 2013-02-06 上海唐润医药科技有限公司 Hcv蛋白酶抑制剂
US9346785B2 (en) 2012-01-11 2016-05-24 Abbvie Inc. Process for making HCV protease inhibitors
CN104822682A (zh) 2012-10-08 2015-08-05 艾伯维公司 用于制备hcv蛋白酶抑制剂的化合物
WO2014062196A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EP2914598B1 (en) 2012-11-02 2017-10-18 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014070964A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
WO2014070974A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9580463B2 (en) 2013-03-07 2017-02-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN104557954A (zh) * 2013-10-16 2015-04-29 上海唐润医药科技有限公司 抗hcv的大环化合物
WO2015103490A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 Abbvie, Inc. Solid antiviral dosage forms
CN104447952A (zh) * 2014-12-11 2015-03-25 上海唐润医药科技有限公司 丙肝病毒蛋白酶抑制剂及其合成方法
CN105859748B (zh) * 2015-02-05 2018-06-08 爱博新药研发(上海)有限公司 多环化合物钠盐及其多晶型、制备方法及应用
WO2016127859A1 (en) * 2015-02-13 2016-08-18 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Compounds as hepatitis c inhibitors and uses thereof in medicine
CN107074876B (zh) * 2016-04-08 2019-12-20 上海长森药业有限公司 一类抑制丙肝病毒的大环状杂环化合物及其制备和用途
TW201805289A (zh) * 2016-08-11 2018-02-16 廣東東陽光藥業有限公司 作為丙型肝炎病毒抑制劑的鹽
CN107722109B (zh) * 2016-08-11 2020-12-18 广东东阳光药业有限公司 作为丙型肝炎病毒抑制剂的晶型
CN110958880B (zh) * 2017-05-30 2023-08-08 东莞东阳光太景医药研发有限责任公司 固体分散制剂
CN113337624A (zh) * 2021-05-24 2021-09-03 温州医科大学 同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟氏球菌和解脲支原体的组合物及方法
CN114773302B (zh) * 2022-04-29 2024-04-02 中国药科大学 一种苯并呋喃衍生物及其医药用途

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4555508A (en) * 1984-03-02 1985-11-26 Usv Pharmaceutical Corp. Antihypertensive spiro-cyclic compounds
US5876984A (en) * 1996-09-25 1999-03-02 Shionogi & Co., Ltd Sequiterpene derivatives having antiviral activity
TW426516B (en) * 1996-12-06 2001-03-21 Fujisawa Pharmaceutical Co An oral pharmaceutical composition in solid dispersion containing water-insoluble tricyclic compounds
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
SV2003000617A (es) * 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
WO2003006490A1 (en) * 2001-07-11 2003-01-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Bridged bicyclic serine protease inhibitors
US6867185B2 (en) * 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
CN100352819C (zh) * 2002-01-23 2007-12-05 先灵公司 作为ns3－丝氨酸蛋白酶抑制剂的脯氨酸化合物用于制备治疗丙型肝炎病毒感染的药物
US7119072B2 (en) * 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
WO2004043339A2 (en) * 2002-05-20 2004-05-27 Bristol-Myers Squibb Company Substituted cycloalkyl p1' hepatitis c virus inhibitors
MY140680A (en) * 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
ATE422895T1 (de) * 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
US7176208B2 (en) * 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
ATE500264T1 (de) * 2003-09-22 2011-03-15 Boehringer Ingelheim Int Makrozyklische peptide mit wirkung gegen das hepatitis-c-virus
US7592419B2 (en) * 2003-09-26 2009-09-22 Schering Corporation Macrocyclic inhibitors of hepatitis C virus NS3-serine protease
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
WO2005051980A1 (en) * 2003-11-20 2005-06-09 Schering Corporation Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
WO2005058821A1 (en) * 2003-12-11 2005-06-30 Schering Corporation Inhibitors of hepatitis c virus ns3/ns4a serine protease
JP4682155B2 (ja) * 2004-01-21 2011-05-11 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎ウイルスに対して活性な大環状ペプチド
JP2008513454A (ja) * 2004-09-17 2008-05-01 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 大環状ｈｃｖプロテアーゼインヒビターの調製方法
US20070237818A1 (en) * 2005-06-02 2007-10-11 Malcolm Bruce A Controlled-release formulation of HCV protease inhibitor and methods using the same
US20070207949A1 (en) * 2005-06-02 2007-09-06 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
US8012939B2 (en) * 2005-07-29 2011-09-06 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Co Macrocyclic inhibitors of hepatitis C virus
WO2008022006A2 (en) * 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors
US7605126B2 (en) * 2006-08-11 2009-10-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors
US20080267917A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Deqiang Niu N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors
US20090005387A1 (en) * 2007-06-26 2009-01-01 Deqiang Niu Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c virus serine protease inhibitors
WO2009055335A2 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors

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