KR20140022618A - 흑인삼엽 추출물을 함유하는 아토피 질환 치료 또는 예방용 조성물 - Google Patents
흑인삼엽 추출물을 함유하는 아토피 질환 치료 또는 예방용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 질환의 예방, 치료 또는 개선을 위한 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 흑인삼엽 추출물은 THP-1 세포에서의 MCP-1, IL-6, IL-8 등의 아토피 유발 인자의 분비를 감소시키는 효능이 매우 탁월하므로 아토피 질환의 예방 또는 치료에 유용한 의약품 또는 아토피 피부의 개선에 매우 유용한 건강기능식품 또는 식품첨가물, 화장품으로 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 흑인삼엽 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 아토피 유발인자의 분비를 감소시키는 효과가 탁월하여 아토피 질환의 예방, 치료 또는 개선에 매우 효과적인 흑인삼엽 추출물 및 이를 함유하는 조성물에 관한 것이다.
아토피 피부염의 병인 기전은 아직 완전하게 밝혀지지 않았지만 환경 내에서 흔한 물질(알레르겐)에 대한 과민한 면역반응(알레르기반응)으로 인하여 피부에 만성적인 염증반응을 유발하여 아토피피부염이 발생한 것으로 알려져 왔다. 특히 그 근거로 집먼지진드기에 노출된 양과 아토피피부염의 발병 빈도 간의 상관성을 보이며 아토피성 피부염의 중증도와도 유의한 상관관계를 보인다고 알려져 있다. 또한 환경 내에서 집먼지진드기에 대한 노출을 줄임으로써 아토피피부염의 중증도를 감소시킬 수 있다고 알려져 있다.
스테로이드는 기관지천식 등의 염증성 질환에서 가장 널리 사용되는 효과적인 치료제이다. 최근 스테로이드에 대한 기전이 많이 밝혀지고 있으나 아직은 그 기전을 완전히 이해하지 못한 상태이며 기관지 천식이나 류마티스 관절염 등의 환자들 중 일부는 스테로이드에 반응하지 않는 스테로이드 저항성을 보인다. 이러한 스테로이드 저항성을 보이는 환자들은 많지는 않지만 대개는 중증이고 치료에 의한 합병증에 시달리며, 치료비용이 커 큰 문제이기 때문에 스테로이드 저항성의 기전을 밝히는 것은 조속히 해결하여야 할 숙제이다. 즉, 만성 염증성 반응에서는 다양한 세포를 통해 섬유화에 관련된 종양성장인자(tumor growth factor-β, TGF-β), IL-4, IL-13 등의 다양한 사이토카인을 분비한다. 이를 통해 섬유모세포(fibroblast)를 활성화시키는 IL-6의 분비를 증가시켜 많은 섬유모세포의 분화증식을 초래하며, 세포외 기질(extra cellular matrix)의 생산을 과생산하여 세포 및 조직의 변형과 섬유화를 야기시킨다.
아토피 피부염은 스테로이드 계통의 약제를 통해 치료가 되나, 만성화되면서 조직의 변성 및 섬유화로 스테로이드 제재에 대한 내성을 보이게 되는 것이 이러한 이유이다. 단핵구 화학유인물질 단백질-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)은 chemokine receptor(CCR2)에 결합하며 MCP-1 유전자가 제거된 생쥐는 monocytes에 대한 화학주성이 손상을 받고, 특정 균의 감염에 저항성이 약화되는 것이 관찰되었으며, 이러한 현상은 CCR2 유전자가 제거된 동물에서 관찰되는 증상과 유사하다. 이 밖에도 MCP-1은 시험관에서 Th0 cells을 Th2 cytokines 을 분비하는 세포로 전환시킨다는 보고가 있다. 그리고 MCP-1을 정맥주사 하였을 때 IL-12의 생성은 감소되고 IL-4의 생성이 증가한다. 이는 간접적으로 IgE-의존적 알레르기 염증을 악화시킬 수 있음을 의미한다.
IL-8은 초기염증반응에 중요하고 기도상피세포에서 분비되는 중요한 염증성 케모카인으로서 IL-8에 의해 기관지 과민성이 유발되고 알레르기 비염이나 기관지 천식에서 증가되며 IL-8은 스테로이드에 의해 억제된다.
한편, 인삼은 파낙스(Panax)속에 속하는 다년생 식물로, 파낙스속 식물은 식물 분류학상 오가과(Araliaceae)에 속하는 다년생 숙근초로서 지구상에 십여 종이 알려져 있다. 대표적인 종으로는 고려인삼(Panax ginseng), 화기삼(Panax quinquefolia), 전철삼(삼칠, Panax notoginseng), 죽절삼(Panax japonica), 삼엽삼(Panax trifolia), 히말라야삼(Panax pseudoginseng), 베트남삼(Panax vietnamensis) 등이 있다(고려삼의 이해, 고려인삼학회, p.9, 1995; Advances in Ginseng Research, 고려인삼학회, pp.127-137, 1998).
이러한 파낙스 속 식물에서 가장 중요한 성분은 사포닌이다. 특히 파낙스 속 식물에는 다른 식물과는 달리 담마란(dammarane) 골격에 1~4 개의 당이 결합되어 있는 사포닌을 공통으로 함유하고 있다. 특히 고려인삼에 함량이 높은 사포닌은 진세노사이드 Rb1, Rb2, Rc, Rd, Rg1, Re 등이다. 이러한 사포닌 성분들은 다양한 약효를 나타내는데 그 구조에 따라 약효의 종류와 강도가 매우 다르다(고려삼의 이해, 고려인삼학회, p.9, 1995).
그러나 지금까지의 인삼 및 가공인삼에 대한 연구가 뿌리에 대부분 국한되어 있다. 실제로 인삼의 주 효능을 나타내는 사포닌은 뿌리에 4-5% 존재하며 인삼잎에는 이보다 4배 가량 높은 18-20% 정도 존재한다고 알려져 있으나(인삼의 근, 엽 및 경의 사포닌함량 비교, 고려인삼학회, p.118, 1987), 인삼엽의 아토피 질환치료제로서의 용도에 대한 연구는 거의 없는 실정이다.
따라서 본 발명자들은 인삼의 활성성분 함량을 더욱 높이기 위한 노력의 결과로써 증숙법의 하나인 한약재의 가공방법 중 물과 불을 함께 사용하는 것으로 가장 대표적인 방법인 구증구포의 원리 및 이 방법에 비해서 시간적으로 단축되고 대량 생산이 가능한 표준화된 흑인삼엽의 제조방법 및 이 추출물의 항노화용 조성물에 대해서 특허를 등록받은바 있다(대한민국 특허등록 제10-0868249호).
그러나 상기 문헌의 어디에도 상기 본 발명자가 개발한 방법으로 제조된 흑인삼엽 추출물의 아토피질환에 대한 치료효과에 대하여 언급이 되거나 시사한 기재는 전혀 없다.
이에 따라, 본 발명자들은 흑인삼엽 추출물이 진드기 추출물을 처리한 EoL-1 및 THP-1 세포에서의 MCP-1, IL-6, IL-8 등의 염증인자의 분비를 감소시키는 효능을 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 천연 추출물을 소재로 하여 인체 안전성이 뛰어나고 부작용이 거의 없는 아토피 질환의 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 사포닌 함량이 매우 높은 흑인삼엽을 이용하여 아토피 질환의 예방, 치료 또는 개선에 매우 효과적인 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 기술적 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 식품조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명은 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징을 하는데, 여기서 흑인삼엽은 인삼엽에 건조 및 증숙 처리를 하여 수득한 가공인삼엽을 의미하는 것으로, 바람직하게는 인삼의 잎을 세척한 후, 25 ~ 65℃에서 12 ~ 36시간 동안 건조하는 1차 건조공정, 상기 건조된 인삼엽을 0.05 ~ 0.45MPa의 압력하에 95 ~ 155℃에서 3 ~ 9시간 동안 증숙하는 증숙공정 및 상기 증숙된 인삼엽을 40 ~ 80℃에서 8 ~ 16 시간 동안 수분함량이 14% 이하가 되도록 건조하는 2차 건조공정을 거쳐 수득된 것이다.
구체적으로는, 3 ~ 7년근, 바람직하게는 4 ~ 6년근 인삼엽을 초음파 세척기로 10분간 3회 세척 후, 25 ~ 65℃, 바람직하게는 40 ~ 60℃의 온도에서 12 ~ 36시간, 바람직하게는 20 ~ 28시간 건조하는 1차 건조공정; 분쇄기로 분쇄한 상기 건조 인삼엽을 0.05 ~ 0.45MPa, 바람직하게는 0.10 ~ 0.20MPa, 더욱 바람직하게는 0.10 ~ 0.14MPa의 압력하에 95 ~ 155℃, 바람직하게는 110 ~ 145℃의 온도에서 3 ~ 9시간, 바람직하게는 2 ~ 6시간 동안 증숙하는 증숙공정; 상기 증숙된 인삼엽을 40 ~ 80℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃의 온도에서 8 ~ 16시간, 바람직하게는 9 ~ 15시간 동안 건조하여 수분함량이 14% 이내가 되도록 건조하는 2차 건조공정을 포함하는 제조공정을 거쳐 수득된다. 이와 같이 본 발명은 고온·고압을 이용함으로써 단시간에 가공인삼엽을 대량 생산할 수 있다.
본 발명은 상기 공정을 거쳐 수득한 흑인삼엽을 추출한 흑인삼엽 추출물을 이용하는데, 여기서 흑인삼엽 추출물은 흑인삼엽 조추출물 또는 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물 중 하나 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 흑인삼엽 조추출물은 상기 흑인삼엽을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것으로, 구체적으로는 상기에서 얻은 흑인삼엽 건조분말을 분쇄한 후, 흑인삼엽 건조분말(BGL)의 약 1 ~ 5배, 바람직하게는 2 ~ 4배 질량의 물을 가하여, 0 ~ 50℃, 바람직하게는 실온에서 약 3 ~ 7시간 동안 방치한 후, 상기 용액의 1 ~ 20배 부피, 바람직하게는 10 ~ 15배 부피의 에탄올 수용액, 더욱 바람직하게는 50 ~ 90% 에탄올 수용액을 가하여, 1 ~ 6시간, 바람직하게는 2 ~ 4시간 동안 1 ~ 5회, 바람직하게는 약 3회 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류추출, 가열추출, 더욱 바람직하게는 환류 추출하여 실온까지 냉각시킨 후, 여과한 뒤 감압농축기를 이용하여 에탄올을 제거함으로써 본 발명의 흑인삼엽 조추출물(이하, BGLE이라 함)을 수득할 수 있다.
또한, 본 발명의 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물은 상기 흑인삼엽 조추출물을 비극성 용매로 분획하여 비극성 물질을 제거한 후, 남아 있는 수층에 극성용매를 가하여 추출한 것으로, 구체적으로는 상기에서 얻은 흑인삼엽 조추출물, 바람직하게는 흑인삼엽의 에탄올 조추출물을 건조 중량의 약 20 ~ 30배, 바람직하게는 25 ~ 28배 부피(v/v)의 물에 현탁시킨 후, 에테르, 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름, 메틸렌클로리드 등과 같은 비극성 용매, 바람직하게는, 에테르 용매로 분획을 수행하여 비극성 용매 가용성 분획을 제거하고, 남은 물 현탁액에 동량의 부탄올 등의 극성용매를 가하여 약 1 ~ 5회, 바람직하게는 2 ~ 4회 추출 분획함으로써 사포닌 성분이 다량 함유되며 부탄올, 물 등의 극성용매에 가용가능한 흑인삼엽 극성 용매 가용 추출물(이하 "BGLBE"이라 명명함)을 수득할 수 있다.
이와 같이 수득된 본 발명의 흑인삼엽 또는 흑인삼엽 추출물은 기존의 수삼이나 백삼, 또는 홍삼에는 없거나, 극미량으로 존재하던 활성 성분들인 진세노사이드 Rk1, Rg5, Rg3(S), Rg3(R), Rh2의 함량이 현격하게 증강되며, 구체적으로, 1g당 Rb1이 0.2 ~ 0.5mg, Rb2+Rb3가 1.4 ~ 2.1mg, Rc가 1.3 ~ 2.0mg, Rd가 2.1 ~ 2.5mg, Re가 1.0 ~ 1.5mg, Rg1이 0.4 ~ 0.9mg, Rk1+Rg5가 112 ~ 134mg, Rg3(S)+Rg3(R)가 17 ~ 26mg, Rh2가 30 ~ 38 mg 범위 내로 존재한다.
이와 같이 수득된 본 발명의 흑인삼엽 또는 흑인삼엽 추출물은 인체에 대한 부작용이나 독성이 없으며, 아토피를 유발하는 진드기 추출물을 처리한 EoL-1 및 THP-1 세포에서의 MCP-1, IL-6, IL-8 등의 아토피 유발인자의 분비를 탁월하게 감소시키는 효능을 나타내므로, 아토피 질환의 예방 또는 치료, 또는 아토피 피부의 개선에 매우 효과적이다. 여기에서 정의되는 아토피 질환은 이에 제한되지는 않으나, 아토피성 피부염, 습전, 또는 건선 등을 포함한다.
본 발명의 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 이에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 흑인삼엽 추출물이 1일 0.01mg/kg ~ 10g/kg으로, 바람직하게는 1mg/kg ~ 1g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 그러므로 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 및 직장, 또는 정맥 등의 방법을 통하여 투여할 수 있다.
본 발명의 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 식품 조성물은 아토피 피부의 개선을 위한 건강기능식품으로 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 다양하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 아토피 피부의 개선을 목적으로 각종 식품 또는 음료 등에 첨가될 수 있으며, 이때, 상기 식품 조성물의 양은 바람직하게는 전체 식품 또는 음료 중량에 대하여 0.01 ~ 15중량%(건조 고형분 기준)이며, 건강 음료 조성물인 경우 100ml를 기준으로 0.02 ~ 10g(건조 고형분 기준), 바람직하게는 0.3 ~ 1g(건조 고형분 기준)의 비율로 가할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물은 본 발명의 속하는 기술분야에서 통상 사용되는 식품첨가제를 더욱 함유할 수 있으며, 다만 본 발명이 해결하고자 하는 과제를 해치지 않는 범위 내에서 다양하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 음료 100㎖당 일반적으로 약 1~20g, 바람직하게는 약 5~12g이다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 바람직하다.
본 발명의 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물은 상기 흑인삼엽 추출물을 조성물 총중량에 대해 0.0001 ~ 90중량%, 바람직하게는 0.1 ~ 30중량% 함유하는 것이 좋은데, 0.0001중량% 미만으로 첨가하는 경우에는 그 효과를 기대하기 힘들고, 90중량%를 초과하여 첨가되는 경우에는 뚜렷한 효능 효과의 상승이 보이지 않는다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 흑인삼엽 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 예를 들면, 노화방지 성분, 주름개선 성분, 미백 성분, 보습 성분 및 항균 성분 등을 더욱 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제 예컨대 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제, 염료 등을 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조성물 총중량에 대해 0.0001 내지 30중량%이다. 다만, 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 특정의 종류에 한정되는 것은 아니나, 일예로 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형으로 이루어진 기초 화장료 제형과 수중유형 및 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이새도, 치크칼라 및 아이브로우 펜슬류로 이루어진 색조 화장료 제형 중에서 선택되는 어느 하나의 외관을 가질 수 있다. 또한, 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있다. 이는 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.
본 발명의 흑인삼엽 추출물은 인체에 대한 부작용이나 독성이 없으며, 아토피를 유발하는 진드기 추출물을 처리한 EoL-1 및 THP-1 세포에서의 MCP-1, IL-6, IL-8등의 아토피 유발인자의 분비를 감소시키는 효과가 매우 탁월하므로, 아토피 질환의 예방, 치료 또는 개선을 위한 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.
제조예
1 :
흑인삼엽의
제조
금산에서 재배된 5년근 인삼엽 1Kg을 초음파 세척기(JAC, 4020)에 넣고 3분간 총 3회 반복해서 세척하였다. 세척된 인삼엽을 건조기(Lab Tech-one, LTO-DO-150S))로 50℃에서 18시간 1차 건조하여 546g을 얻었다. 1차 건조된 인삼엽 중 300g을 취해 0.12 MPa하에 115 ~ 135℃에서 4시간 동안 증숙기(Sanyo, MLS-3780)에서 증숙한 후, 열선이 내장된 건조기에서 내부온도 60℃에서 12시간 동안 건조시켜 수분함량이 14% 이하이며 흑색으로 변한 흑인삼엽(이하, BGL이라 함) 285g을 제조하였다.
제조예
2 :
흑인삼엽
조추출물의
제조
상기의 제조예 1의 흑인삼엽(BGL) 100g을 취해 분쇄기(한일전자, HMF-1000A)로 50 내지 200 ㎛의 입자크기로 분쇄한 후, 200㎖의 물을 넣고 실온에서 5시간 방치한 뒤, 80% 에탄올 수용액 1.5ℓ를 가하여 3시간씩 3회 환류 추출한 용액을 실온까지 냉각시킨 후 여과한 다음, 감압 농축기를 이용하여 에탄올을 제거하여 흑인삼엽 조추출물(이하 BGLE라 함) 40.35g을 수득하였다.
제조예
3 :
흑인삼엽
부탄올
가용 추출물의 제조
상기 제조예 2의 흑인삼엽 조추출물(BGLE) 20g에 물 400㎖를 넣어 현탁시킨 후, 에테르 400㎖를 가하여 비극성 물질을 제거하였다. 남아있는 수층에 수포화 부탄올 1리터를 가하여 인삼에 존재하는 사포닌을 4회 추출한 후, 부탄올을 감압농축기로 제거하여 인삼 사포닌이 다량 함유된 흑인삼엽 부탄올 가용 추출물(이하 BGLBE라 명명함) 9.35g을 얻었다.
실시예
1 :
흑인삼엽
추출물의 사포닌 성분 분석
흑인삼엽 추출물에 존재하는 인삼 사포닌의 성분을 분석하기 위하여 상기 제조예 3에서 얻은 흑인삼엽 부탄올 가용 추출물(BGLBE) 20 ㎎을 메탄올 1 ㎖에 녹인 후 0.45 ㎛ 필터로 여과한 여액을 하기 표 1의 HPLC 분석 조건에서 성분을 분석하였다.
컬럼: Shiseido C18 column (5, 1504.6mm) | |
유량(Flow rate) | 1 /min |
디텍터(Detector) | ELSD-LT detector |
용매(Solvent) | A; CH3CN:H2O:5%CH3COOH = 15:80:5, B; CH3CN:H2O = 80:20 0분(0% B), 0-10분(30% B), 10-25분(50% B), 25-40(100% B), 40-50분(100% B), 50-55분(0% B), 55-58분(0% B) |
온도 | 40도 |
그 결과, 흑인삼엽 1g당 Rb1이 0.2 ~ 0.5mg, Rb2+Rb3가 1.4 ~ 2.1mg, Rc가 1.3 ~ 2.0mg, Rd가 2.1 ~ 2.5mg, Re가 1.0 ~ 1.5mg, Rg1이 0.4 ~ 0.9mg, Rk1+Rg5가 112 ~ 134mg, Rg3(S)+Rg3(R)가 17 ~ 26mg, Rh2가 30 ~ 38 mg이 존재함을 확인하였다.
실시예
2 :
흑인삼엽
추출물의 아토피 억제 활성
상기 제조예 2, 3에서 얻은 흑인삼엽 추출물을 대상으로 아토피 억제 활성을 측정하기 위하여 하기와 같이 문헌에 개시된 방법을 변형하여 THP-1 세포에 아토피를 유발한다고 알려진 진드기 추출물을 가하여 MCP-1, IL-6, IL-8의 분비를 촉진시킨 후 흑인삼엽 추출물을 가하여 얼마나 줄어드는지를 관찰하였다(Lee JS, Kim IS, Ryu JS, Yun CY., House dust mite, Dermatophagoides pteronissinus increases expression of MCP-1, IL-6, and IL-8 in human monocytic THP-1 cells. Cytokine. 2008, 42(3):365-71. 2008.).
아토피를 유발하는 집먼드기 추출물을 THP-1 세포에 처리하면 아토피를 유발하는 cytokine인 MCP-1, IL-6, IL-8의 양이 증가하게 된다. 따라서 이러한 병적인 상태에서 흑인삼엽을 처리했을 때 증가된 MCP-1, IL-6, IL-8의 양을 어느 정도 감소시키는지를 관찰하고자 하였다.
<THP-1 세포배양>
사람의 단핵구(monocyte)인 THP-1(human acute monocytic leukemia cell; 미국세포주 은행) 2.0x105/m로 RPMI 1640 배지, antibiotics(penicillinm 104U/㎖, streptomycin 10mg/㎖, amphotericin B 25㎍/㎖)과 10% FBS를 넣고, 37℃ CO2 배양기에서 3일간 배양하였다.
<MCP-1, IL-6, IL-8 측정>
THP-1세포를 0.5% FBS가 든 RPMI에 2.0x106/m로 24 well plate에 분주한 후 배양기(37℃, 5% CO2)에서 16시간 배양하였다. 배양 후 상기 제조예 2, 3의 흑인삼엽 추출물(최종 농도 100㎍/㎖)을 14시간 동안 처리한 후 HDE(1㎍/㎖)를 각각 24시간 동안 처리한 다음, ELISA를 이용하여 상층액에서 단핵구 화학유인물질 단백질-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1), IL-6, IL-8의 양을 측정하였다.
<MCP-1 분비 억제활성>
상기 제조예 2, 3의 흑인삼엽 추출물을 대상으로 MCP-1 분비 억제활성을 측정하기 위하여 하기와 같이 문헌에 개시된 방법을 변형하여 THP-1 세포에 아토피를 유발한다고 알려진 진드기 추출물을 가하여 MCP-1의 분비를 촉진시킨 후 제조예 2, 3의 흑인삼엽 추출물을 가하여 얼마나 줄어드는지를 관찰하였다(Lee JS, Kim IS, Ryu JS, Yun CY., House dust mite, Dermatophagoides pteronissinus increases expression of MCP-1, IL-6, and IL-8 in human monocytic THP-1 cells. Cytokine. 2008, 42(3):365-71. 2008.).
그 결과는 하기의 표 2에 나타내었는데, 이에 의하면 THP-1 세포에 아토피를 유발하는 진드기 추출물을 처리하면 MCP-1의 분비가 급격히 증가(685pg/ml)됨을 알 수 있었다. 이러한 병적인 상태에 본 제조예 2의 흑인삼엽 조추출물(BGLE)을 처리하면 MCP-1이 285pg/ml로 현격하게 감소되었다. 또한, 본 제조예 3의 흑인삼엽 사포닌이 다량 존재하는 흑인삼엽 부탄올 가용 추출물(BGLBE)을 처리하면 양성대조군으로 사용한 덱사메타손 보다는 약하지만 MCP-1이 39pg/ml 수준으로 거의 정상수준으로 감소됨을 알 수 있었다.
이에 흑인삼엽이 아토피 억제에 매우 유효할 것이라고 판단되었으며 주요한 활성을 나타내는 물질은 흑인삼엽 사포닌임을 알 수 있었다.
<IL-6 분비 억제활성>
상기 제조예 2, 3의 흑인삼엽 추출물을 대상으로 IL-6 분비 억제활성을 측정하기 위하여 하기와 같이 문헌에 개시된 방법을 변형하여 THP-1 세포에 아토피를 유발한다고 알려진 진드기 추출물을 가하여 IL-6의 분비를 촉진시킨 후 제조예 2, 3의 흑인엽 추출물을 가하여 얼마나 줄어드는지를 관찰하였다(Lee JS, Kim IS, Ryu JS, Yun CY., House dust mite, Dermatophagoides pteronissinus increases expression of MCP-1, IL-6, and IL-8 in human monocytic THP-1 cells. Cytokine. 2008, 42(3):365-71. 2008.).
그 결과는 하기의 표 2에 나타내었는데, 이에 의하면 THP-1 세포에 아토피를 유발하는 진드기 추출물을 처리하면 IL-6의 분비가 급격히 증가(965pg/ml)됨을 알 수 있었다. 이러한 병적인 상태에 본 제조예 2의 흑인삼엽 조추출물(BGLE)을 처리하면 IL-6이 395pg/ml으로 현격하게 감소되었다. 또한, 본 제조예 3의 흑인삼엽 사포닌이 다량 존재하는 흑인삼엽 부탄올 가용 추출물(BGLBE)을 처리하면 양성대조군으로 사용한 덱사메타손 보다는 약하지만 105pg/ml 수준으로 감소되어 85% 정도의 억제활성을 나타내었다.
이에 흑인삼엽이 아토피 억제에 매우 유효할 것이라고 판단되었으며 주요한 활성을 나타내는 물질은 흑인삼엽 사포닌임을 알 수 있었다.
<IL-8 분비 억제활성>
상기 제조예 2, 3의 흑인삼엽 추출물을 대상으로 IL-8분비 억제활성을 측정하기 위하여 하기와 같이 문헌에 개시된 방법을 변형하여 THP-1 세포에 아토피를 유발한다고 알려진 진드기 추출물을 가하여 IL-8의 분비를 촉진시킨 후 제조예 2, 3의 흑인삼엽 추출물을 가하여 얼마나 줄어드는지를 관찰하였다(Lee JS, Kim IS, Ryu JS, Yun CY., House dust mite, Dermatophagoides pteronissinus increases expression of MCP-1, IL-6, and IL-8 in human monocytic THP-1 cells. Cytokine. 2008, 42(3):365-71. 2008.).
그 결과는 하기 표 2에 나타내었는데, 이에 의하면 THP-1 세포에 아토피를 유발하는 진드기 추출물을 처리하면 IL-8의 분비가 급격히 증가(2596pg/ml)됨을 알 수 있었다. 이러한 병적인 상태에 본 제조예 2의 흑인삼엽 조추출물(BGLE)을 처리하면 IL-8이 1184pg/ml로 현격하게 감소되었다. 또한, 본 제조예 3의 흑인삼엽 사포닌이 다량 존재하는 흑인삼엽 부탄올 가용 추출물(BGLBE)을 처리하면 양성대조군으로 사용한 덱사메타손 보다는 약하지만 496pg/ml 수준으로 감소되어 80% 정도의 억제활성을 나타내었다.
이에 흑인삼엽이 아토피 억제에 매우 유효할 것이라고 판단되었으며 주요한 활성을 나타내는 물질은 흑인삼엽 사포닌임을 알 수 있었다.
물질 | MCP-1의 양(pg/ml) | IL-6 의 양(pg/ml) | IL-8 의 양(pg/ml) |
정상군 | 28 | 21 | 69 |
진드기처리군 | 685 | 965 | 2596 |
덱사메타손 처리군 | 29 | 24 | 79 |
흑인삼엽 조추출물(BGLE) | 285 | 395 | 1184 |
흑인삼엽 부탄올 가용 추출물(BGLBE) | 39 | 105 | 496 |
이상 종합하면, 흑인삼엽의 조사포닌(사포닌)이 매우 높은 아토피 억제활성을 나타낸다고 판단되며, 특히 MCP-1의 분비를 거의 정상수준으로 감소시킴을 알 수 있었다.
실시예
3 :
흑인삼엽
추출물의
급성독성실험
대한실험공급센터에서 공급받은 6주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 하기와 같이 실시하였다.
각 그룹 당 2마리씩의 동물에 상기 제조예 2의 흑인삼엽 조추출물을 1 g/㎏의 용량으로 1회 경구 투여 후, 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강 장기의 이상 여부를 관찰하였다.
실험결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특이할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
이상 종합하면, 본 발명의 흑인삼엽 추출물은 랫트에서 각각 1 g/㎏까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD50)은 1 g/㎏이상인 안전한 물질로 판단됨을 확인할 수 있었다.
제제예
1 :
산제의
제조
BGLE (제조예 2) 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
제제예
2 : 정제의 제조
BGLBE (제조예 3) 10 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
제제예
3 : 캅셀제의 제조
BGLE (제조예 2) 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예
4 : 주사제의 제조
BGLBE (제조예 3) 10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO412H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
제제예
5 :
액제의
제조
BGLE (제조예 2) 20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
제제예
6 : 건강 식품의 제조
BGLBE (제조예 3) 1000 ㎎
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 ㎍
비타민 E 1.0 ㎎
비타민 B1 0.13 ㎎
비타민 B2 0.15 ㎎
비타민 B6 0.5 ㎎
비타민 B12 0.2 ㎍
비타민 C 10 ㎎
비오틴 10 ㎍
니코틴산아미드 1.7 ㎎
엽산 50 ㎍
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 ㎎
산화아연 0.82 ㎎
탄산마그네슘 25.3 ㎎
제1인산칼륨 15 ㎎
제2인산칼슘 55 ㎎
구연산칼륨 90 ㎎
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예
7 : 건강 음료의 제조
BGLE (제조예 2) 100 ㎎
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 통상의 방법에 따라 건강음료 조성물 제조에 사용할 수 있다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예
8 : 로션의 제조
하기 표 3의 조성에 따라 정제수에 본 제조예 2의 BGLE가 포함된 나)항의 원료들을 가하고, 70℃로 가열하여 수상을 만들었다. 가)항의 원료들을 모두 혼합한 후 70℃로 가열하고 용해시켜서 유상을 만들었다. 수상에 유상을 서서히 가하여 예비 유화를 한 후 다시 호모믹서로 균일하게 유화한 다음, 28℃로 냉각하여 로션을 제조하였다.
원료명 | 중량 % | |
가 |
스테아린산 | 2.5 |
세로스테아릴알코올 | 5.0 | |
유동파라핀 | 6.0 | |
멀티 왁스 | 2.0 | |
카르릴릭/카르릭트리글리세라이드 | 1.5 | |
페닐디메치콘 | 0.5 | |
모노올레인산소르비탄 | 0.8 | |
모노오레인산폴리옥시에칠렌소르비탄 | 2.2 | |
향료 | 0.06 | |
파라옥시안식향산메칠 | 0.13 | |
나 |
색소 | 0.0002 |
농글리세린 | 3.5 | |
1,3-부틸렌글리콜 | 1.0 | |
디소디움히아루노네이트(5%) | 2.0 | |
제조예 2의 흑인삼엽 조추출물 | 1.5 | |
L-시스테인 염산염(1%)위치하젤 추출물 | 1.5 | |
정제수 | 적량 |
제제예
9 : 화장수의 제조
하기 표 4의 조성에 따라 정제수에 본 제조예 2의 BGLE가 포함된 가)항의 원료들을 가하고, 용해시켜서 수상을 만들었다. 에탄올에 나)항의 원료들을 모두 혼합하고 용해시켜서 알코올상을 만들었다. 수상에 알코올상을 서서히 가하면서 균일하게 교반하여 화장수를 제조하였다.
원료명 | 중량 % | |
가 |
농글리세린 | 2.0 |
1,3-부틸렌글리콜 | 1.0 | |
알란토인 | 0.05 | |
DL-판테놀 | 0.1 | |
폴리에칠렌글리콜 4000 | 0.2 | |
오이추출물 | 0.1 | |
녹차추출물 | 0.15 | |
L-글루타민 산(1%) | 2.0 | |
제조예 2의 흑인삼엽 조추출물 | 0.5 | |
카르복시비닐 폴리머 | 0.05 | |
나 |
에탄올(95%) | 10.0 |
파라옥시안식향산메칠 | 0.06 | |
트리에탄올아민 | 0.05 | |
폴리옥시에칠렌경화피마자유 | 0.25 | |
메칠페닐폴리실록산 | 0.1 | |
향 | 0.12 | |
색소 | 0.0005 | |
정제수 | 적량 |
Claims (16)
- 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 흑인삼엽은,
인삼의 잎을 세척한 후, 25 ~ 65℃에서 12 ~ 36시간 동안 건조하는 1차 건조공정;
상기 건조된 인삼엽을 0.05 ~ 0.45MPa의 압력하에 95 ~ 155℃에서 3 ~ 9시간 동안 증숙하는 증숙공정; 및
상기 증숙된 인삼엽을 40 ~ 80℃에서 8 ~ 16 시간 동안 수분함량이 14% 이하가 되도록 건조하는 2차 건조공정을 거쳐 수득된 것임을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 추출물은,
흑인삼엽 조추출물 또는 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제 3 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 조추출물은,
상기 흑인삼엽을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제 3 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물은,
상기 흑인삼엽 조추출물을 비극성 용매로 분획하여 비극성 물질을 제거한 후, 남아 있는 수층에 극성용매를 가하여 추출한 것임을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제 1항에 있어서,
상기 아토피 질환은 아토피성 피부염, 습진, 또는 건선으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 아토피 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 식품 조성물.
- 제 7 항에 있어서,
상기 흑인삼엽은,
인삼의 잎을 세척한 후, 25 ~ 65℃에서 12 ~ 36시간 동안 건조하는 1차 건조공정;
상기 건조된 인삼엽을 0.05 ~ 0.45MPa의 압력하에 95 ~ 155℃에서 3 ~ 9시간 동안 증숙하는 증숙공정; 및
상기 증숙된 인삼엽을 40 ~ 80℃에서 8 ~ 16 시간 동안 수분함량이 14% 이하가 되도록 건조하는 2차 건조공정을 거쳐 수득된 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 식품 조성물.
- 제 7 항 또는 제 8 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 추출물은,
흑인삼엽 조추출물 또는 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 식품 조성물.
- 제 9 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 조추출물은,
상기 흑인삼엽을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 식품 조성물.
- 제 9 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물은,
상기 흑인삼엽 조추출물을 비극성 용매로 분획하여 비극성 물질을 제거한 후, 남아 있는 수층에 극성용매를 가하여 추출한 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 식품 조성물.
- 흑인삼엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
- 제 12 항에 있어서,
상기 흑인삼엽은,
인삼의 잎을 세척한 후, 25 ~ 65℃에서 12 ~ 36시간 동안 건조하는 1차 건조공정;
상기 건조된 인삼엽을 0.05 ~ 0.45MPa의 압력하에 95 ~ 155℃에서 3 ~ 9시간 동안 증숙하는 증숙공정; 및
상기 증숙된 인삼엽을 40 ~ 80℃에서 8 ~ 16 시간 동안 수분함량이 14% 이하가 되도록 건조하는 2차 건조공정을 거쳐 수득된 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
- 제 12 항 또는 제 13 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 추출물은,
흑인삼엽 조추출물 또는 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물 중 하나 이상인 것을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
- 제 14 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 조추출물은,
상기 흑인삼엽을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
- 제 14 항에 있어서,
상기 흑인삼엽 극성용매 가용 추출물은,
상기 흑인삼엽 조추출물을 비극성 용매로 분획하여 비극성 물질을 제거한 후, 남아 있는 수층에 극성용매를 가하여 추출한 것임을 특징으로 하는 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
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CN105125408A (zh) * | 2015-09-30 | 2015-12-09 | 河南行知专利服务有限公司 | 一种根茎类中药材免煎剂的制备方法及其应用 |
WO2017074022A1 (ko) * | 2015-10-30 | 2017-05-04 | 주식회사 아모레퍼시픽 | 진세노사이드를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 |
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