KR20130081721A - 극대화된 Ｇａｇ 및 Ｎｅｆ를 수지상 세포에 표적화시킴을 기본으로 하는 ＨＩＶ 백신 - Google Patents

극대화된 Ｇａｇ 및 Ｎｅｆ를 수지상 세포에 표적화시킴을 기본으로 하는 ＨＩＶ 백신 Download PDF

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Abstract

본 발명은 가공된 Gag 항원이 부착되어 항체-항원 복합체를 형성하는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편(여기서, Gag 항원은 하나 이상의 단백질분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다) 또는 가공된 Nef 항원이 부착되어 항체-항원 복합체를 형성하는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편(여기서, Nef 항원은 항체-항원 복합체 분비를 증가시키는 하나 이상의 코돈 용법 최적화를 포함한다)을 포함하여, Gag p17, Gag p24, Nef 및/또는 사이클린 D1에 대한 HIV-특이적 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있는 백신을 제조하고 사용하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다.

Description

극대화된 Ｇａｇ 및 Ｎｅｆ를 수지상 세포에 표적화시킴을 기본으로 하는 ＨＩＶ 백신{HIV vaccine based on targeting maximized Gag and Nef to dendritic cells}
본 발명은 일반적으로, 바이러스 단백질을 수지상 세포에 표적화시키는 제제의 분야에 관한 것이다.
본 발명의 범위를 제한함 없이, 본 발명의 배경을 항원 제공과 연계하여 기재한다.
수지상 세포는 가용성 및 세포 상호간 시그날을 제공함에 이어서 병원체를 인지함에 의해 선천성 및 후천성 면역의 접속을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 이러한 DC(수지상 세포)의 기능은 대부분 특수화된 표면 수용체, 즉 가장 명백하게 톨(toll)형 수용체(TLR) 및 C형 렉틴 또는 렉틴형 수용체(LLR)에 의해 대표되는 "패턴 인지 수용체"(PRR)의 발현에 의존한다.
현재 전형적인 예로서, TLR의 주요 역할은 면역 반응을 개시하기 위해 인터류킨 12(IL-12) 및 다른 염증 사이토킨을 생성하도록 DC를 변화시키는 것이다. C-형 LLR은 대식세포 및 DC의 강력한 항원 포획 및 취득 기작의 구성요소로서 작용한다. 그러나 TLR과 비교하여, LLR은 세포 이동 및 세포간 상호작용을 포함하는 보다 광범위한 범위의 생물학적 기능들을 가질 수도 있다. 이러한 LLR의 다중 기능은 TLR과는 다르게 LLR이 자가 및 비자가를 인지할 수 있다는 사실 때문일 수 있다. 그러나, 면역 세포에서 발현되는 다수의 중복된 LLR을 포함하는 LLR의 복잡성이 개별 LLR의 세부적인 기능을 이해하는데 주요 장애중 하나였다. 또한, 당해 대부분의 수용체에 대한 천연 리간드는 미확인된 채로 남아있다. 그럼에도 불구하고 최근 연구로부터의 증거는 LLR이 TLR과 협력하여 미생물 감염 동안에 면역 세포의 활성화에 기여할 수 있음을 시사한다.
본원 발명은 바이러스 단백질을 수지상 세포에 표적화시키는 제제를 제공하고자 한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 가공된 Gag 항원(여기서, 상기 Gag 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 분리 정제하고; 항체-항원 복합체가 가공되고 T 세포 인지를 위해 제공되는 조건하에 항원 제공 세포를 접촉시킴에 의해, 항원 제공 세포에 의한 항원 제공의 효과를 증가시키기 위한 조성물 및 방법을 포함한다. 하나의 측면에서, 항원 제공 세포는 수지상 세포를 포함한다. 또 다른 측면에서 DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 코헤신(Cohesin)/도케린(Dockerin) 쌍의 반쪽에 결합되거나 DC 특이적 항체 또는 이의 단편은 코헤신/도케린 쌍의 반쪽에 결합하고 가공된 Gag 항원은 코헤신/도케린 쌍의 상보적인 반쪽에 결합하여 복합체를 형성한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 하나 이상의 새로운 글리코실화 부위를 추가로 포함하거나 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함하고 당해 유연성 링커는 항체와 항원간의 증가된 유연성, 상기 링커에서의 감소된 단백질 분해 및 증가된 분비를 제공하는 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 4 및 6으로부터 선택된 하나 이상의 링커를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 추가로 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 셀룰로스 분해 유기체로부터 유래된 링커 서열로부터 선택된 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 사람화된다. 하나의 특정 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 31 또는 32로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 복합체의 정제 또는 동정을 위해 사용되는 서열 태그를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD1, CD2, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD29, CD31, CD40, CD43, CD44, CD45, CD54, CD56, CD57, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR, DC-ASPGR, CLEC-6, CD40, BDCA-2, MARCO, DEC-205, 만노스 수용체, 랑게린(Langerin), DECTIN-1, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, Fcγ 수용체, LOX-1, 및 ASPGR에 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명은 가공된 Nef 항원(여기서, 상기 Nef 항원은 항체-항원 복합체 분비를 증가시키는 하나 이상의 코돈 용법 최적화를 포함한다)이 항원-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 분리 정제하고; 항체-항원 복합체가 가공되고 T 세포 인지를 위해 제공되는 조건하에 항원 제공 세포를 접촉시킴에 의해, 항원 제공 세포에 의한 항원 제공의 효과를 증가시키기 위한 조성물 및 방법을 포함한다. 하나의 측면에서, 항원 제공 세포는 수지상 세포를 포함한다. 또 다른 측면에서 DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 코헤신(Cohesin)/도케린(Dockerin) 쌍의 반쪽에 결합되거나 DC 특이적 항체 또는 이의 단편은 코헤신/도케린 쌍의 반쪽에 결합하고 가공된 Nef 항원은 코헤신/도케린 쌍의 상보적인 반쪽에 결합하여 복합체를 형성한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 하나 이상의 새로운 글리코실화 부위를 추가로 포함하거나 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함하고 당해 유연성 링커는 항체와 항원간의 증가된 유연성, 상기 링커에서의 감소된 단백질 분해 및 증가된 분비를 제공하는 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 4 및 6으로부터 선택된 하나 이상의 링커를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 셀룰로스 분해 유기체로부터 유래된 링커 서열로부터 선택된 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 사람화된다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 11, 12, 13, 14, 15, 16 및 17을 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 복합체의 정제 또는 동정을 위해 사용되는 서열 태그를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD1, CD2, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD29, CD31, CD40, CD43, CD44, CD45, CD54, CD56, CD57, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR, DC-ASPGR, CLEC-6, CD40, BDCA-2, MARCO, DEC-205, 만노스 수용체, 랑게린(Langerin), DECTIN-1, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, Fcγ 수용체, LOX-1, 및 ASPGR에 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태는 가공된 Gag 항원(여기서, 상기 Gag 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 포함하는 백신이다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 하나 이상의 새로운 글리코실화 부위를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함하고 당해 유연성 링커는 항체와 항원간의 증가된 유연성, 상기 링커에서의 감소된 단백질 분해 및 증가된 분비를 제공하는 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 4 및 6으로부터 선택된 하나 이상의 링커를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 셀룰로스 분해 유기체로부터 유래된 링커 서열로부터 선택된 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 사람화된다. 하나의 특정 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 31 또는 32로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 복합체의 정제를 위해 사용되는 서열 태그를 추가로 포함한다. 당업자는 항체-항원 복합체가 DC-특이적 항체 또는 단편과 항원 사이에 공유 결합 또는 비공유 결합에 의해 형성되거나 아미노 또는 카복시 말단의 부분중 하나에서 융합 단백질 형태로 또는 컨택타머(contactamer) 또는 상기 부분 중 하나 이상으로서 형성될 수 있음을 인지할 것이다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD1, CD2, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD29, CD31, CD40, CD43, CD44, CD45, CD54, CD56, CD57, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR, DC-ASPGR, CLEC-6, CD40, BDCA-2, MARCO, DEC-205, 만노스 수용체, 랑게린(Langerin), DECTIN-1, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, Fcγ 수용체, LOX-1, 및 ASPGR에 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태는 가공된 Nef 항원(여기서, 상기 Nef 항원은 항체-항원 복합체 분비를 증가시키는 하나 이상의 코돈 용법 최적화를 포함한다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 포함하는 백신이다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 하나 이상의 새로운 글리코실화 부위를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함하고 당해 유연성 링커는 항체와 항원간의 증가된 유연성, 상기 링커에서의 감소된 단백질 분해 및 증가된 분비를 제공하는 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 4 및 6으로부터 선택된 하나 이상의 링커를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 셀룰로스 분해 유기체로부터 유래된 링커 서열로부터 선택된 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Nef 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 특정 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 사람화된다. 또 다른 특정 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 31 또는 32로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 복합체의 정제를 위해 사용되는 서열 태그를 추가로 포함한다. 당업자는 항체-항원 복합체가 DC-특이적 항체 또는 단편과 항원 사이에 공유 결합 또는 비공유 결합에 의해 형성되거나 아미노 또는 카복시 말단 부분중 하나에서 융합 단백질 형태로 또는 컨택타머(contactamer) 또는 상기 부분 중 하나 이상으로서 형성될 수 있다. 또 다른 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD1, CD2, CD3, CD4, CD8, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD29, CD31, CD40, CD43, CD44, CD45, CD54, CD56, CD57, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR, DC-ASPGR, CLEC-6, CD40, BDCA-2, MARCO, DEC-205, 만노스 수용체, 랑게린(Langerin), DECTIN-1, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, Fcγ 수용체, LOX-1, 및 ASPGR에 특이적으로 결합하는 항체로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태는 가공된 Gag 항원(여기서, 상기 Gag 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편; 및 가공된 Nef 항원(여기서, 상기 Nef 항원은 항체-항원 복합체 분비를 증가시키는 하나 이상의 코돈 용법 최적화를 포함한다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 포함하는 백신이고, 이때 상기 백신은 Gag p17, Gag p24 및 Nef에 대해 HIV 특이적 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있다. 하나의 측면에서, Gag 및 Nef 항원은 융합 단백질을 포함한다. 또 다른 측면에서, Gag 및 Nef 항원은 하나 이상의 유연성 링커에 의해 분리된 융합 단백질을 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 서열번호 4 및 6으로부터 선택된 하나 이상의 링커를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 또는 Nef 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 셀룰로스 분해 유기체로부터 유래된 링커 서열로부터 선택된 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 Gag 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 사람화된다. 하나의 특정 측면에서, 백신은 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 31 또는 32로부터 선택된다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 복합체의 정제를 위해 사용되는 서열 태그를 추가로 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 가공된 Gag 항원(여기서, 상기 Gag 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편; 및 DC-특이적 항체 또는 이의 단편에 부착되거나 가공된 Gag 항원에 부착되어 항체-항원 복합체를 형성하는 가공된 Nef 항원(여기서, 상기 Nef 항원은 항체-항원 복합체 분비를 증가시키는 하나 이상의 코돈 용법 최적화를 포함한다)을 포함하는 백신이고, 이때 상기 백신은 Gag p17, Gag p24 및 Nef에 대해 HIV 특이적 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편, Gag 및 Nef 항원은 융합 단백질을 포함한다. 또 다른 측면에서, Gag 및 Nef 항원은 하나 이상의 유연성 링커에 의해 분리된 융합 단백질을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 환자 수지상 세포를 분리하고; 가공된 Gag 항원(여기서, 상기 Gag 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편; 및 DC-특이적 항체 또는 이의 단편에 부착되거나 가공된 Gag 항원에 부착되어 항체-항원 복합체를 형성하는 가공된 Nef 항원(여기서, 상기 Nef 항원은 DC-특이적 항체 또는 이의 단편 또는 항체-항원 복합체 분비를 증가시키는 하나 이상의 코돈 용법 최적화를 포함한다)을 포함하는 활성화량의 백신(여기서, 백신은 Gag p17, Gag p24 및 Nef에 대해 HIV 특이적 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있다)에 수지상 세포를 노출시키고; 항원 로딩된 활성화된 수지상 세포를 환자에게 재도입함에 의해 수지상 세포의 효과를 증가시키기 위한 방법을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 사이클린 D1을 포함하는 가공된 항원 또는 단편(여기서, 상기 사이클린 D1 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 포함하는 백신을 포함한다. 하나의 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 사이클린 D1 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 하나 이상의 새로운 글리코실화 부위를 추가로 포함한다. 또 다른 측면에서, 항체-항원 복합체는 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 사이클린 D1 항원 사이에 유연성 링커를 추가로 포함하고 당해 유연성 링커는 항체와 항원간의 증가된 유연성, 상기 링커에서의 감소된 단백질 분해 및 증가된 분비를 제공하는 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함한다. 예를 들어, 항체-항원 복합체는 셀룰로스 분해 유기체로부터 유래된 링커 서열로부터 선택된 하나 이상의 글리코실화 부위를 포함하는 유연성 링커를 DC-특이적 항체 또는 이의 단편과 사이클린 D1 항원 사이에 추가로 포함한다. 하나의 측면에서, DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 사람화된다. 또 다른 측면에서 DC-특이적 항체 또는 이의 단편은 코헤신/도케린 쌍의 반쪽에 결합하고 가공된 사이클린 D1 항원은 코헤신/도케린 쌍의 상보적인 반쪽에 결합하여 복합체를 형성한다. 본 발명은 또한 환자 수지상 세포를 분리하고; 사이클린 D1을 포함하는 가공된 항원 또는 이의 단편(들)(여기서, 상기 사이클린 D1 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 또는 글리코실화 부위가 도입됨에 의해 또는 발현을 개선시키는 하나 이상의 코돈을 선택하여 발현을 개선시킴에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된 DC-특이적 항체 또는 이의 단편을 포함하는 활성화량의 백신에 수지상 세포를 노출시키고; 항원 로딩된 활성화된 수지상 세포를 환자에게 재도입함에 의해 수지상 세포의 효과를 증가시키기 위한 방법을 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 31 또는 32로부터 선택된 폴리펩타이드를 암호화하는 분리되고 정제된 핵산을 포함한다. 본 발명의 또 다른 양태는 서열번호 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 31 또는 32로부터 선택된 분리되고 정제된 폴리펩타이드를 포함한다.
본원 발명은 바이러스 단백질을 수지상 세포에 표적화시키는 제제를 제공할 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 보다 완전하게 이해하기 위해 다음과 같이 첨부된 도면을 참조로 하여 본원 발명을 보다 상세하게 설명한다:
도 1은 작제물의 다이어그램 및 예상된 분자량과 함께 H쇄 - gag p24 융합체를 암호화하는 발현 벡터로 일시적으로 형질감염된 CHO-S 또는 293F 세포로부터 수득된 단백질 A 친화성 크로마토그래피 정제된 gag p24-항체 융합 단백질의 쿠마시 블루 염색된 환원된 SDS PAGE 분석을 보여준다.
도 2는 작제물의 다이어그램 및 예상된 글리코실화 부위 및 분자량과 함께, 셀룰로좀 앵커 스캐폴딘(scaffoldin) B 전구체[박테로이드 셀룰로솔벤스(Bacteroides cellulosolvens)]로부터 유래된 H쇄 - gag p24 링커와 H쇄 - gag p24 융합체를 암호화하는 발현 벡터 및 상응하는 경[L]쇄 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 CHO-S 또는 293F 세포로부터 수득된 단백질 A 친화성 크로마토그래피 정제된 gag p24 항체 융합 단백질의 쿠마시 블루 염색된 환원된 SDS PAGE 분석을 보여준다.
도 3a 내지 3c는 cipA에 대한 구조적 도메인의 개요를 보여준다.
도 4a 내지 4c는 셀룰로좀 앵커 스캐폴딘 B 전구체[박테로이드 셀룰로솔벤스]에 대한 구조적 도메인의 개요를 보여준다.
도 5는 작제물의 다이어그램 및 예상된 분자량과 함께, C535-암호화된 H쇄에 대해 예상된 대략적인 위치를 갖는 겔을 보여준다.
도 6은 작제물의 다이어그램 및 예상된 글리코실화 부위 및 분자량과 함께, 적당한 L쇄 발현 플라스미드로 동시 형질감염된 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-var1-Viralgag-p40-var1-6xHis] C601의 부분적으로 정제된 발현 생성물의 겔을 보여준다.
도 7은 작제물의 다이어그램 및 예상된 글리코실화 부위 및 분자량과 함께, 동일한 적당한 L쇄 발현 작제물로 293F 세포에 일시적으로 동시 형질감염된 다양한 H쇄-항원 작제물을 보여준다.
도 8은 CD40에 결합하여 이를 활성화시킬 수 있는 항-CD40 항체의 서브세트를 검출하기 위한 스크린으로부터의 그래프이다.
도 9는 10 ug/ml 내지 항-CD4012E12-hIgG4 도케린-코헤신 Flu M1 접합체 부재의 용량 범위에 의해 유발된 바와 같은 CD8+ 염색[수평축] 대 Flu M1-4량체 염색[수직축]의 FACS 분석을 보여준다.
도 10은 10 ug/ml 내지 대조군 hIgG4 도케린 - 코헤신 Flu M1 접합체 부재의 용량 범위에 의해 유발된 바와 같은 CD8+ 염색[수평축] 대 Flu M1-4량체 염색[수직축]의 FACS 분석을 보여준다.
도 11은 PBMC 배양에서 항원 특이적 T 세포의 증식을 유발하는 항-DC 수용체 - 항원 표적화 분자(TM)의 시험관내 효능을 분석하기 위해 사용되는 프로토콜을 도시한다.
도 12는 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신을 사용하여 DC[PBMC내]를 표적화하는 효과를 보여준다.
도 13은 백신이 모든 gag p24 펩타이드 클러스터에 대한 특이성을 갖는 CD4+ T 세포의 증식을 유발함을 보여준다.
도 14는 FACS 데이터이고 수직축은 IFNγ-생산 세포의 %를 보여준다[상부 패널]. 하부 패널은 PBMC 배양내에서 CD8+ T 세포에 대한 유사한 데이터를 보여주고 이러한 데이터는 또한 gag p17 서열을 포함하는 모든 펩타이드 클러스터가 비-펩타이드성 대조군보다 상당히 크게 IFNγ-생산 T 세포의 생성을 유발함을 보여준다.
도 15는 그래프 형태의 데이터로서 백신이 HIV nef 펩타이드 클러스터 대부분에 대해 특이성을 갖는 CD4+ T 세포의 증식을 유발함을 보여주고, 심지어 시험된 최저 백신 용량에서도 IFNγ-생성 CD4+ T 세포의 %는 세포가 펩타이드로 처리되지 않은 경우보다 훨씬 크다.
도 16은 백신이 HIV nef 펩타이드 클러스터 대부분에 대해 특이성을 갖는 CD4+ T 세포의 증식을 유발함을 보여주는 FACS 데이터이고, 심지어 시험된 최저 백신 용량에서도 IFNγ-생성 CD4+ T 세포의 %는 세포가 펩타이드로 처리되지 않은 경우보다 훨씬 크다.
도 17은 그래프 형태의 데이터를 보여주고 수직축은 IFNγ-생성 세포의 %를 보여준다[상부 패널]. 하부 패널은 PBMC 배양내 CD8+ T 세포에 대한 유사 데이터를 보여주고 당해 데이터는 또한 nef 서열을 포함하는 모든 펩타이드 클러스터가 비-펩타이드 대조군보다 크게 IFNγ-생성 T 세포의 생산을 유도함을 보여준다.
도 18은 광범위한 일련의 PSA 에피토프에 상응하는, 순수 T 세포 집단 PSA 특이적 CD4+ T 세포로부터의 증식을 유발하는 PSA[전립선-특이적 항원]에 연결된 항-CD40-12E12로 구성된 백신의 능력을 시험하기 위한 프로토콜의 개요를 보여준다.
도 19는 많은 PSA 펩타이드가 강력한 IFNγ-생성 반응을 유발함을 보여주고 이는 항-CD4012E12 및 유사 항CD40 제제가 항원을 DC로 효과적으로 전달하여 항원의 다중 에피토프에 대한 면역 반응의 프라이밍을 유도할 수 있음을 나타낸다.
도 20은 DC에 표적화된 항-CD40-PSA를 사용하여 표적화된 DC가 PSA-특이적 CD8+ T 세포 반응을 유도함을 보여준다. IFNDC는 PSA를 갖는 1 μg mAb 융합 단백질로 표적화된다. 정제된 자가 CD8+ T 세포는 10일 동안 동시 배양하였다. 세포는 항-CD8 및 PSA (KLQCVDLHV)-4량체로 염색시켰다. 세포는 HLA-A*0201 양성 건강한 공여자로부터 기원한 것이다. 당해 결과는 항-CD40이 PSA를 DC로 효과적으로 전달하고 이어서 PSA-특이적 CD8+ T 세포의 증식을 유발함을 입증한다.
도 21은 DC에 의한 표적화된 획득 및 이들의 세포 표면상에 항원 에피토프의 제공으로부터 비롯되는 항원-특이적 T 세포의 증식을 지시하는 능력에 대해, 항-DC 수용체 표적화 백신을 시험하기 위한 DC 표적화 프로토콜을 보여준다.
도 22 [상부 패널]은 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신 [환자 Aph002]의 효능 비교를 보여준다.
도 22 [하부 패널]는 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신[환자 Aph002]의 효능 비교를 보여준다.
도 23 [상부 패널]은 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신 [환자 Aph010]의 효능 비교를 보여준다.
도 23 [하부 패널]은 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신[환자 Aph002]의 효능 비교를 보여준다.
도 24는 항-DC 수용체-도케린 재조합 항체와 코헤신-사이클린 D1 융합 단백질의 상호작용 분석을 보여주는 겔이다.
도 25는 사이클린 D1 기원의 중첩 펩타이드에 대한 개요를 보여준다.
도 26은 사이클린 D1-특이적 CD4+ T 세포의 시험관내 증식을 유발하는 항-CD40-사이클린 D1 복합체의 능력을 시험하기 위한 연구 디자인(좌측) 및 이에 의해 수득된 FACS 결과(우측)의 개요를 보여준다.
도 27은 상이한 정상적인 공여자와 함께 도 26에 상세히 기재된 것과 유사한 FACS 분석이고 이 경우에 항-CD40-사이클린 D1 복합체는 사이클린 D1 펩타이드 P4, P43, 및 P70에 특이적인 IFNg 양성 증식 CD4+ T 세포의 증식을 유발하였다.
도 28은 CD8+ T 세포가 사용되는 것을 제외하고는 도 26에 나타낸 것과 유사한 개요(좌측) 및 분석(우측)을 보여준다.
도 29는 도 28과 동일한 공여자 기원의 유사 데이터이지만 펩타이드 풀(pool) 기원의 개별 펩타이드로 분석된 데이터를 보여준다.
본 발명의 다양한 구체예의 제조 및 사용은 이하에 상세하게 논의되지만, 본 발명은 다양한 특정 상황에서 구현될 수 있는 다수의 적용가능한 발명의 개념을 제공한다는 것은 이해하고 있어야 한다. 본원 명세서에서 논의되는 구체예는 단지 본 발명을 제조 및 사용하기 위한 특정 방식을 예시하는 것일 뿐이며, 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
본 발명의 이해를 촉진하기 위해, 다수 용어들의 정의는 다음과 같다. 본원 명세서에 정의된 용어들은 본 발명이 관련된 분야의 당업자라면 일반적으로 이해하고 있는 의미를 갖는 것이다. 단수적 표현은 단일 실체만을 언급하려는 것이 아니며, 예증을 위해 사용될 수 있는 특정 예의 일반적인 클래스를 포함하는 것이다. 본 발명의 용어들은 본 발명의 구체예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 청구의 범위에 개략된 것을 제외하고는, 그 용어들의 사용이 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
수지상 세포(DC)는 항원 특이적 면역성을 조절하는데 주요 역할을 하는 항원 제공 세포이다[문헌참조: (Mellman and Steinman 2001), (Banchereau, Briere et al. 2000), (Cella, Sallusto et al. 1997)]. DC는 항원들을 포획하여 이들을 펩타이드로 가공하고 이들을 T 세포에 제공한다. 따라서, 항원을 직접적으로 DC로 전달하는 것이 백신을 개선시키기 위한 관심 분야이다. 하나의 당해 예는 환자에게 재투여되는 자가 DC의 생체외 항원 로딩을 사용한 DC 계열 백신의 개발이다[참조: (Banchereau, Schuler-Thurner et al. 2001), (Steinman and Dhodapkar 2001)]. 백신 효능을 개선시키기 위한 또는 다른 전략은 내재화 DC 특이적 수용체에 대한 항체에 접합된 항원의 DC로의 표적화이다. 백신 접종을 위해 DC를 표적화하는 잠재력은 주요 마우스 연구에 의해 밝혀진다. 생체내에서, 난알부민(OVA)에 커플링된 항-LOX-1 mAb를 사용한 표적화는 MHC 클래스 I 경로에 대한 외인성 항원 교차 제공을 통해 보호성 CD8+ T 세포 반응을 유도하였다 (문헌참조: Delneste, Magistrelli et al. 2002). 또한, CD40L 성숙화 자극과 함께 항-DEC205 mAb로 접합된 OVA는 생체내에서 DC에 의한 MHC 클래스 I-제한된 제공을 증진시키고 이펙터 기억 CD8+ T 세포의 지속적인 형성을 유도하였다(문헌참조: Bonifaz, Bonnyay et al. 2004). 이들 연구 둘다는 급격한 용량-절약(즉, 매우 낮은 항원 용량에서 강한 면역 반응)을 보여주었고 통상적으로 OVA 면역화의 다른 유형에 나타나는 것보다 광범위한 반응을 시사하였다. DEC205를 통한 DC로의 HIV gag 항원의 표적화를 사용한 최근 연구는 이들 개념을 임상적으로 관련된 항원으로 확장시켰고 DC로의 항원 표적화가 단일 백신 접종기원의 급격한 용량 절약 보호 반응 및 CD8 및 CD4 구획 둘다에서 항원 특이적 T 세포의 증식을 확인시켜 주었다(문헌참조: Trumpfheller, Finke et al. 2006).
본 발명은 조절된 다중변화가능한 방식으로 하나의 단일 1차 재조합 mAb로의 다중 항원 또는 단백질(1차 mAb로부터 독립적으로 가공되고, 발현되고 정제된)의 복합체화를 제공한다. 현재, 하나의 1차 mAb로의 상이한 단백질(각각 스트렙타비딘으로 별도로 연결되어 가공된)의 첨가를 제공하는 부위 특이적 비오티닐화 부위를 가공하는 방법이 있다. 그러나, 본 발명은 별도로 가공된 단백질의 고정된 등몰 비 율 및 위치에서 다중 조합의 1차 mAb로의 부가를 제공한다.
본원 명세서에 사용된 용어 "항체 또는 이의 단편"은 표적 특이적 항체를 제공하도록 가공된 재조합 항체 시스템을 기재하기 위해 사용된다. 모노클로날 항체는 표준 하이브리도마 기술, 재조합 항체 디스플레이 및 사람화된 모노클로날 항체 등을 사용하여 제조하였다. 항체는 예를 들어, 수지상 세포(DC)로의 다중 항원 및/또는 항원 및 활성화 사이토킨을 표적화(내재화 수용체, 예를 들어, 사람 수지상 세포 수용체에 대한 하나의 1차 재조합 항체를 통해)하기 위해 사용될 수 있다.
항체의 항원 결합부는 하나 이상의 가변 도메인, 하나 이상의 가변 및 제1 불변 도메인, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab)2 단편, 및 Fv 단편, 및 Fabc 단편 및/또는 동족 모듈러 결합부가 아미노산 서열에 부가되고/되거나 결합된 Fc 도메인 부분을 갖는 Fab 단편을 포함할 수 있는 하나 이상의 단편(즉, 이의 단편)을 포함한다. 사용하기 위한 항체는 임의의 이소형 또는 부류, 아부류일 수 있거나 임의의 공급원(동물 및/또는 재조합) 기원일 수 있다. 특정 측면에서, 항원 결합 부위는 당업계에 널리 공지된 기술을 사용한 사람 항체 골격상으로 이식되어 항체를 "사람화"시키는 비-사람 모노클로날 항체로부터 기원한다.
본원 명세서에 사용된 용어 "항원"은 항원의 수용자에서 체액성 및/또는 세포성 면역 반응을 개시할 수 있는 분자를 언급한다. 항원은 본 발명에서 2개의 상이한 상태로 사용될 수 있다: 항체, 또는 가공되거나 재조합 항체(rAb)의 기타 항원 인지 도메인에 대한 표적으로서 또는 접합체(공유 결합 또는 비공유 결합) 또는 융합 단백질로서 rAb에 의해 세포 또는 표적으로 및/또는 표적내로 전달되는 분자로서 사용될 수 있다. 당해 항원은 통상적으로 백신 접종이 유리한 치료인 질환을 유발하는 제제이다. 항원이 MHC 상에 제공되는 경우, 펩타이드는 흔히 약 8개 내지 약 25개 아미노산이다. 항원은 임의의 유형의 생물학적 분자를 포함하고 예를 들어, 단순한 중간 대사물, 당, 지질 및 호르몬 및 복합 탄수화물, 인지질, 핵산 및 단백질과 같은 거대분자를 포함한다.
항원의 공통된 카테고리는 바이러스 항원, 세균 항원, 진균 항원, 원생동물 및 기타 기생충 항원, 종양 항원, 자가면역 질환에 관여하는 항원, 알레르기 및 이식 거부 및 기타 다양한 항원을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본 발명은 개선된 특징(예를 들어, 감소된 단백질용해, 증진된 분비 또는 안정성)을 갖고 항체 또는 이의 단편을 사용하여 항원 제공 세포 표적화된 바이러스 기원의 항원을 사용한다.
바이러스 항원의 예로는, 예컨대 레트로바이러스 항원, 예를 들어 gag, pol 및 env 유전자의 유전자 산물, Nef 단백질, 역전사효소 및 다른 HIV 성분과 같은 사람 면역결핍바이러스(HIV) 항원 유래의 레트로바이러스 항원; B형 간염 바이러스의 S, M 및 L 단백질과 같은 간염 바이러스 항원, B형 간염 바이러스의 전구-S 항원, 및 다른 간염, 예컨대 A형, B형 및 C형 간염 바이러스 성분, 예컨대 C형 간염 바이러스 RNA; 인플루엔자 바이러스 항원, 예컨대 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제 및 다른 인플루엔자 바이러스 성분; 홍역 바이러스 항원, 예컨대 홍역 바이러스 융합 단백질 및 다른 홍역 바이러스 성분; 풍진 바이러스 항원, 예컨대 E1 및 E2 단백질, 및 다른 풍진 바이러스 성분; 로타바이러스 항원, 예컨대 VP7sc 및 다른 로타바이러스 성분; 사이토메갈로바이러스 항원, 예컨대 엔벨로프 당단백질 B 및 다른 사이토메갈로바이러스 항원 성분; 호흡기 세포융합 바이러스, 예컨대 RSV 융합 단백질, M2 단백질 및 다른 호흡기 세포융합 바이러스 항원 성분; 헤르페스 단순 바이러스 항원, 예컨대 조기발현 단백질, 당단백질 D 및 여타 헤르페스 단순 바이러스 항원 성분; 수두대상포진 바이러스 항원, 예컨대 gpI, gpII, 및 다른 수두대상포진 바이러스 항원 성분; 일본 뇌염 바이러스 항원, 예컨대 단백질 E, M-E, M-E-NS1, NS1, NS1-NS2A, 80% E 및 다른 일본 뇌염 바이러스 항원 성분; 광견병 바이러스 항원, 예컨대 광견병 당단백질, 광견병 핵단백질 및 여타 광견병 바이러스 항원 성분을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. 바이러스 항원의 다른 예에 대해서는 문헌[Fundamental Virology, Second Edition, eds. Fields, B. N. and Knipe, D. M. (Raven Press, New York, 1991)]을 참조한다.
본 발명의 rAb-DC/DC-항원 백신을 사용하여 전달할 수 있는 항원성 표적으로는, 바이러스 항원, 세균 항원, 진균 항원 또는 기생충 항원과 같은 항원을 암호화하는 유전자를 포함한다. 바이러스로는 피코나바이러스, 코로나바이러스, 토가바이러스, 플라비바이러스, 랍도바이러스, 파라믹소바이러스, 오르토믹소바이러스, 부니아바이러스, 아레나바이러스, 레오바이러스, 레트로바이러스, 파필로마바이러스, 파르보바이러스, 헤르페스바이러스, 폭스바이러스, 헤파드나바이러스 및 해면상 바이러스를 포함한다. 다른 바이러스 표적으로는 인플루엔자, 헤르페스단순바이러스 1 및 2, 홍역, 뎅기, 마마, 폴리오 또는 HIV를 포함한다. 병원체로는 파동편모충, 촌충, 회충, 연충, 말라리아를 포함한다. 종양 마커, 예컨대 태아 항원 또는 전립선 특이적 항원은 이러한 방식으로 표적화될 수 있다. 다른 예로는 HIV env 단백질 및 B형 간염 표면 항원을 포함한다. 백신접종을 위한 본 발명에 따른 벡터의 투여는, 강한 면역반응이 필요할 수 있어 돌연변이유전자를 장기간 발현할 수 있도록 벡터 결합 항원이 충분히 비면역원성일 필요가 있을 수 있다. 일부 경우에는 개체의 백신접종을 단지 드물게, 예컨대 매년 또는 2년마다 필요로 할 수 있고, 감염 물질에 대해 장기간 면역학적 보호를 제공할 수 있다. 벡터에 사용되고 궁극적으로 본 발명에 항원으로서 사용되는 유기체, 알러지항원 및 핵산 및 아미노산 서열의 구체예는 미국 특허 6,541,011, 여기에 참고인용된 관련 부분, 특히 본 발명에 사용될 수 있는 유기체와 구체적 서열을 매치하는 표에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 rAb를 사용하여 표적화될 수 있는, 면역 세포, 예를 들어, 항원 제공 세포 또는 수지상 세포의 표면상의 항원은 일반적으로 내재화 가능성, 면역세포 특이성 수준, 표적화된 면역세포 종류, 면역세포 성숙도 및/또는 활성화 수준 등을 비롯한 다수의 요인을 기초로 하여 선택할 수 있다. 수지상 세포를 위한 세포 표면 마커의 예로는 MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, B7-2, CD18, CD29, CD31, CD43, CD44, CD45, CD54, CD58, CD83, CD86, CMRF-44, CMRF-56, DCIR 및/또는 ASPGR 등이 포함되지만, 이에 국한되지 않고; 몇몇 경우에는 CD2, CD3, CD4, CD8, CD14, CD15, CD16, CD 19, CD20, CD56 및/또는 CD57의 부재를 포함하기도 한다. 항원제공세포를 위한 세포 표면 마커의 예로는 MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, CD40, CD45, B7-1, B7-2, IFN-γ 수용체 및 IL-2 수용체, ICAM-1, Fcγ 수용체, LOX-1 또는 ASPGR을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다. T 세포를 위한 세포 표면 마커의 예로는 CD3, CD4, CD8, CD 14, CD20, CD11b, CD16, CD45 및 HLA-DR을 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본원 명세서에 사용된, "에피토프(들)"는 병원체 DNA 또는 RNA에 의해 암호화된 임의의 다수의 병원체 폴리펩타이드 내에 존재하는 에피토프와 유사한 1차, 2차 또는 3차 구조를 포함하는 펩타이드 또는 단백질 항원을 의미한다. 유사성 정도는 상기 폴리펩타이드에 대하여 유발된 모노클로날 또는 폴리클로날 항체가 또한 펩타이드 또는 단백질 항원에 결합하거나, 그 항원과 반응하거나, 또는 다른 방식으로 인식하는 정도인 것이 일반적이다. 이러한 항체와 함께 사용될 수 있는 면역분석법에는 다양한 종류가 있으며, 그 예로는 웨스턴 블로팅, ELISA, RIA 등이 있고, 이 모두는 당업자에게 공지되어 있다. 백신에 사용하기에 적합한 병원체 에피토프 및/또는 이의 기능성 등가물의 확인도 본 발명의 일부이다. 일단 분리 및 확인되면, 기능성 등가물은 쉽게 수득할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 참고 인용되고, 친수성을 기초로 하여 아미노산 서열들로부터 에피토프의 확인 및 제조에 대해 교시하는, 미국 특허 4,554,101에 교시된 호프(Hopp)법을 이용할 수 있다. 다른 여러 논문에 기술된 방법과 이를 기초로 한 소프트웨어 프로그램도 에피토프의 코어 서열을 확인하는데 사용될 수 있다(예컨대, Jameson and Wolf, 1988; Wolf et al., 1988; 미국 특허 4,554,101). 이러한 "에피토프 코어 서열"의 아미노산 서열은 펩타이드 합성이나 재조합 기술을 통해 펩타이드 내로 쉽게 혼입될 수 있다.
본원 명세서에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 균일한 항체 집단을 갖는 항체 조성물을 언급한다. 당해 용어는 항체의 종류 또는 공급원에 관한 것으로 제한되지 않거나 이는 이것이 제조되는 방식에 의해 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 당해 용어는 모 모노클로날 항체 분자의 면역학적 결합 성질을 나타내는 Fab, F(ab')2, Fv, 및 기타 단편과 같은 단편 뿐만 아니라 전체 면역글로불린을 포괄한다.
본원 명세서에 사용된 용어 "항원 결합 부위" 또는 "결합부"는 항원 결합에 관여하는 면역글로불린 분자의 일부를 언급한다. 항원 결합 부위는 중(H) 및 경(L) 쇄의 N-말단 가변(V) 영역의 아미노산 잔기에 의해 형성된다. 중쇄 및 경쇄의 V 영역내 3개의 고도로 분기된 스트레치는 "프레임워크 영역"(FR)으로서 공지된 보다 보존된 플랭킹 스트레치 사이에 위치한 "초가변 영역"으로서 언급된다. 본원 명세서에 사용된 용어 "FR"은 면역글로불린내 초가변 영역 사이에 및 이에 인접한 위치에 천연적으로 발견되는 아미노산 서열을 언급한다. 항체 분자에서 경쇄의 3개의 초가변 영역 및 중쇄의 3개의 초가변 영역은 3차원 공간에서 서로 상대적으로 배치되어 항원 결합 표면을 형성한다. 항원 결합 표면은 결합된 항원의 3차원 표면에 상보적이고 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역은 "상보성-결정 영역" 또는 "CDR"로서 언급된다.
본원 명세서에 사용된 용어 "사람화된" 항체는 비사람 면역글로불린으로부터 유래된 항원 결합 부위를 포함하는 분자가 사람 불변 도메인에 융합된 설치류 V 영역 및 이들의 연합된 CDR을 갖는 키메라 항체, 적당한 사람 항체 불변 도메인과의 융합전에 사람 지지 FR로 이식된 설치류 CDR 및 재조합적으로 베니어된 설치류 FR에 의해 지지된 설치류 CDR을 포함하는 것으로 기재된 것들을 언급한다. 이들 "사람화된" 분자는 사람 수용자에서 저들 잔기의 치료학적 적용의 지속성 및 효과를 제한하는, 설치류 항사람 항체 분자에 대한 원치않는 면역학적 반응이 최소화되도록 디자인된다.
활성성분으로서 본 발명의 항원을 암호화하는 핵산을 포함하는 백신 조성물의 제제는 액체 용액이나 현탁액으로서의 주사제; 주사 전에 액체 중의 용액 또는 현탁액으로 만들기에 적합한 고체 형태로도 제조할 수 있다. 이 제제는 유화되어 리포좀에 캡슐화될 수 있다. 활성 면역원성 성분은 종종 약제학적으로 허용되고 활성 성분과 화합성인 담체와 혼합되기도 한다.
"약제학적으로 허용되는 담체"란 용어는 이것이 투여된 피검체에서 알러지 반응이나 다른 부적합한 효과를 유도하지 않는 담체를 의미한다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체로는, 예컨대 1 이상의 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 또는 이의 유사물과 이의 조합을 포함한다. 또한, 필요하다면 백신은 함습제 또는 유화제, pH 완충화제, 및/또는 백신의 효과를 증강시키는 보강제와 같은 보조 물질을 소량 함유할 수 있다. 효과적일 수 있는 보강제의 예로는 수산화알루미늄, N-아세틸-뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르-뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민, MTP-PE 및 RIBI(세균에서 추출된 3가지 성분, 모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 디마이콜레이트 및 세포벽 골격(MPL+TDM+CWS)을 2% 스쿠알렌/Tween 80 에멀젼에 함유한다)를 포함하되, 이에 국한되지는 않는다. 보강제의 다른 예로는 DDA(디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드), 프로인트 완전 및 불완전 보강제 및 QuilA를 포함한다. 또한, 면역 조절 물질, 예컨대 림포카인(예: IFN-γ, IL-2 및 IL-12) 또는 합성 IFN-γ 유발물질, 예컨대 폴리 I:C가 본원 명세서에 기술된 보강제와 함께 사용될 수 있다.
의약품(pharmaceutical product)은 본 발명에 기술된 바와 같이 혈장 지단백질에 존재하는 아포지단백질의 특정 DNA 결합 부위에 결합하는 특정 뉴클레오타이드 서열의 단일 또는 다중 카피를 보유하는 나출형 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 이러한 폴리뉴클레오타이드는 생물학적 활성 펩타이드, 안티센스 RNA 또는 리보자임을 암호화할 수 있고, 생리학적으로 허용되는 투여형으로 제공될 것이다. 본 발명에서 유래될 수 있는 또 다른 의약품은 환자의 혈액이나 다른 근원으로부터 본원 명세서에 기술된 방법에 따라 분리된, 고도 정제된 혈장 지단백질 분획, 및 정제된 지단백질 분획에 사전결합시킨, 혈장 지단백질에 존재하는 아포지단백질의 특이적인 DNA 결합 부위에 결합하는 특이적인 뉴클레오타이드 서열의 단일 또는 다중 카피를 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 생리학적으로 허용되는 투여형으로 포함할 수 있다.
또 다른 의약품은 특이적인 뉴클레오타이드 서열의 단일 또는 다중 카피를 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 사전결합된, 특이적인 DNA 결합 모티프의 단일 또는 다중 카피를 함유하는 재조합 아포지단백질 단편을 함유하는 고도 정제된 혈장 지단백질 분획을 생리학적으로 허용되는 투여형으로 포함할 수 있다. 또 다른 의약품은 특이적인 뉴클레오타이드 서열의 단일 또는 다중 카피를 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 사전결합된, 특이적인 DNA 결합 모티프의 단일 또는 다중 카피를 함유하는 재조합 아포지단백질 단편을 함유하는 고도 정제된 혈장 지단백질 분획을 생리학적으로 허용되는 투여형으로 포함할 수 있다.
투여되는 투여량은 투여 경로 및 치료 빈도뿐만 아니라 치료받는 피검체의 체중 및 신체 상태에 따라 크게 달라진다. 고도 정제된 지단백질 분획에 사전결합된 나출형 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물은 폴리뉴클레오타이드 1㎍ 내지 1mg 및 단백질 1㎍ 내지 100mg의 양으로 투여할 수 있다.
환자에게의 백신의 투여는 벡터의 독성(존재한다면)을 고려하여 화학치료제의 일반적인 투여 프로토콜에 따른다. 필요하다면, 치료 사이클을 반복할 수 있을 것으로 생각한다. 또한, 수술적 중재뿐만 아니라 다양한 표준 치료법을 본원 명세서에 기술한 유전자 요법과 함께 적용할 수도 있을 것으로 생각한다.
유전자 요법의 임상적 적용이 고려되는 경우에는 상기 복합체를 의도된 적용에 적당한 약제학적 조성물로서 준비할 필요가 있을 수 있다. 일반적으로, 이것은 발열원 뿐만 아니라 사람이나 동물에게 유해할 수 있는 임의의 다른 불순물이 본질적으로 없는 약제학적 조성물을 제조하는 단계를 수반할 것이다. 또한, 복합체를 안정하게 하고 표적 세포에 의해 복합체가 흡수되도록 하기에 적당한 염 및 완충액을 이용하는 것이 바람직할 것이다.
본 발명의 수성 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 수성 매질에 용해 또는 분산된 유효량의 화합물을 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 접종물이라 불릴 수도 있다. 이러한 약제학적 활성 물질을 위한 매질과 제제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 활성 성분과 불화합성인 경우를 제외하고는, 임의의 통상의 매질 또는 제제는 치료 조성물에서의 사용이 고려된다. 또한, 보충적인 활성 성분도 상기 조성물에 첨가될 수 있다. 본 발명의 조성물은 통상적인 약제학적 제조물을 포함할 수 있다. 또한, 분산액은 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이의 혼합물, 및 오일로도 제조할 수 있다. 보관 및 사용의 일반적인 조건 하에서, 이들 제조물은 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 함유한다.
질병 상태. 치료하고자 하는 특정 질환에 따라서, 본 발명에 따른 치료 조성물의 투여는 임의의 일반적인 경로를 통해 이루어질 수 있으나, 단 표적 조직은 그 경로를 통해 최대 (또는 일부 경우에는 최소) 면역 반응을 위한 부위로 항원의 전달을 최대화할 수 있어야 한다. 투여는 일반적으로 동소이식, 피내, 피하, 근육내, 복강내 또는 정맥내 주사로 이루어질 것이다. 다른 전달 영역으로는, 구강, 비측, 협측, 직장, 질 또는 국소를 포함한다. 국소 투여는 피부암의 치료에 특히 유리할 것이다. 이러한 조성물은 보통 생리학적으로 허용되는 담체, 완충액 또는 다른 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용되는 조성물로 투여될 것이다.
본 발명의 백신 또는 치료 조성물은 주사에 의해 비경구로, 예컨대 피하 또는 근육내로 투여될 수 있다. 다른 투여 방식에 적합한 또 다른 제형으로는 좌약이 있고, 몇몇 경우에는 에어로졸로서 분산에 적합한 제형 또는 경구용 제형이 있다. 경구형 제형인 경우에, 보강제를 이용한 T-세포 서브세트의 처리, 항원 패키징 또는 다양한 제형에 각 사이토카인의 첨가는 최적화된 면역 반응을 나타내는 개량된 경구용 백신을 제공한다. 좌약인 경우에, 통상적인 결합제 및 담체로는 폴리알킬렌 글리콜 또는 트리글리세라이드를 포함할 수 있고, 이러한 좌약은 활성 성분을 0.5% 내지 10%, 바람직하게는 1% 내지 2% 범위로 함유하는 혼합물로 제조할 수 있다. 경구 제형은 보통 이용되는 부형제, 예컨대 약제학적 등급의 만니톨, 락토스, 전분 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 탄산마그네슘 등을 포함한다. 이러한 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 환제, 캡슐, 지속방출형 제형 또는 분말의 형태이며, 활성 성분을 10% 내지 95%, 바람직하게는 25 내지 70% 함유한다.
본 발명의 항원 암호화 핵산은 중성 형태 또는 염 형태로서 백신 또는 치료 조성물에 배합될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염으로는 산부가염(펩타이드의 유리 아미노기에 형성됨)을 포함하고 염산 또는 인산과 같은 무기산 또는 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 말레산 등의 유기산으로 제조된다. 또한, 유리 카르복시기에 제조된 염은 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 수산화칼슘 또는 수산화제2철과 같은 무기 염기 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기 염기로부터 유도될 수 있다.
백신 또는 치료 조성물은 투여 제형과 양립할 수 있는 방식으로, 예방학적 및/또는 치료학적으로 효과적일 수 있는 양으로 투여된다. 투여되는 양은 치료받는 피검체에 따라, 예컨대 항체를 합성하는 피검체의 면역계의 능력, 원하는 보호 또는 치료 정도 등에 따라 달라진다. 적당한 투여량 범위는 백신접종 1회당 활성성분 수백 마이크로그램 정도로서, 약 0.1mg 내지 1000mg 범위, 예컨대 약 1mg 내지 300mg 범위, 바람직하게는 약 10mg 내지 50mg 범위이다. 1차 투여 및 추가 용량에 적당한 요법도 역시 다양하지만, 1차 투여에 이어 후속 접종 또는 다른 투여 방식이 일반적이다. 투여되어야 하는 활성 성분의 정확한 양은 의사의 판단에 따라 달라지고 각 피검체 특유의 양일 수 있다. 당업자에게 자명한 것처럼, 본 발명의 핵산 분자 또는 융합 폴리펩타이드의 치료학적 유효량은 특히 투여 스케줄, 투여되는 항원의 단위 용량, 핵산 분자 또는 융합 폴리펩타이드의 다른 치료제와의 병용 투여 여부, 수용체의 면역 상태 및 건강, 및 특정 핵산 분자 또는 융합 폴리펩타이드의 치료 활성에 따라 달라질 것이다.
조성물은 1회 용량 스케줄 또는 수회 용량 스케줄로 제공될 수 있다. 수회 용량 스케줄은 백신접종의 1차 과정이 예컨대 1 내지 10회의 분리 용량을 포함할 수 있고, 이어서 다른 용량들이 면역 반응의 유지 및/또는 보강에 필요한 후속 시간 간격을 두고, 예컨대 2차 용량은 1 내지 4개월째, 그리고 필요하다면 후속 용량(들)은 수개월 후에 제공된다. 1 내지 5년마다, 보통 3년마다의 주기적인 추가 접종이 예방 면역의 바람직한 수준을 유지하는데 필요할 수 있다. 면역화 과정에 이어, ESAT6 또는 ST-CF와 공동배양한 말초혈액 림프구(PBL)의 시험관내 증식 분석, 및 초회항원자극된 림프구로부터 방출된 IFN-γ의 수준을 측정할 수 있다. 이 분석법들은 통상의 표지, 예컨대 방사능뉴클레오타이드, 효소, 형광 표지 등을 사용하여 수행할 수 있다. 이 기술들은 당업자에게 공지되어 있고, 관련 부분이 참고 인용된 미국 특허 3,791,932, 4,174,384 및 3,949,064에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 백신은 핵산 벡터의 사용 여부, 최종 정제된 단백질 또는 사용된 최종 백신 형태에 따라서 1 이상의 "단위 용량"으로 제공될 수 있다. 단위 용량은 적당한 경로 및 치료 요법과 같이, 그 투여와 관련하여 바람직한 반응을 나타내도록 계산된 치료 조성물의 소정의 양을 함유하는 것으로 정의된다. 투여되는 양, 및 특정 경로와 제형은 임상 분야의 숙련된 자의 기술 범위 내인 것이다. 치료받는 피검체, 특히 피검체의 면역계 상태 및 원하는 예방 효과가 평가될 수 있다. 단위 용량은 반드시 1회 주사로서 투여될 필요는 없고, 정해진 시간 기간 동안 연속 주입으로 투여될 수도 있다. 본 발명의 단위 용량은 편리하게 DNA/kg(또는 단백질/kg)체중 단위로 나타낼 수 있으며, 약 0.05, 0.10, 0.15, 0.20, 0.25, 0.5, 1, 10, 50, 100, 1,000 또는 그 이상의 mg/DNA 또는 단백질/kg체중 사이의 범위가 투여된다. 이와 유사하게, 전달되는 rAb-DC/DC-항원 백신의 양은 약 0.2 내지 약 8.0mg/kg 체중 범위에서 달라질 수 있다. 즉, 특정 구체예에 따르면, 생체내에서 0.4mg, 0.5mg, 0.8mg, 1.0mg, 1.5mg, 2.0mg, 2.5mg, 3.0mg, 4.0mg, 5.0mg, 5.5mg, 6.0mg, 6.5mg, 7.0mg 및 7.5mg의 백신이 개체에게 전달될 수 있다. 투여되는 백신의 투여량은 치료받는 피검체의 체중과 신체 상태 뿐만 아니라 투여 경로와 치료 빈도에 따라 크게 달라진다. 리포좀 또는 바이러스 전달 벡터에 사전결합된 나출형 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물은 1㎍ 내지 1mg 폴리뉴클레오타이드 범위 또는 1㎍ 내지 100mg 단백질 범위의 양으로 투여될 수 있다. 즉, 특정 조성물은 1㎍, 5㎍, 10㎍, 20㎍, 30㎍, 40㎍, 50㎍, 60㎍, 70㎍, 80㎍, 100㎍, 150㎍, 200㎍, 250㎍, 500㎍, 600㎍, 700㎍, 800㎍, 900㎍, 1mg, 1.5mg, 5mg, 10mg, 20mg, 30mg, 40mg, 50mg, 60mg, 70mg, 80mg, 90mg 또는 100mg 벡터에 독립적으로 결합된 약 1㎍, 5㎍, 10㎍, 20㎍, 30㎍, 40㎍, 50㎍, 60㎍, 70㎍, 80㎍, 100㎍, 150㎍, 200㎍, 250㎍, 500㎍, 600㎍, 700㎍, 800㎍, 900㎍ 또는 1,000㎍ 폴리뉴클레오타이드 또는 단백질을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 모듈식 rAb 운반체, 즉 예를 들어, 리신, 탄저 독소 및 스타필로코커스 B 장독소 기원의 보호 항원과 복합체화된 재조합 사람화된 mAb(특이적 사람 수지상 세포 수용체에 대해 지시됨)를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 이의 전체에 대한 잠재적인 시장은 모든 군인의 백신접종이고 저장된 백신을 이들 항원과 관련된 임의의 생명 위협에 대응하여 대형 집단 센터에 투여하기 위해 보관한다. 본 발명은 일반적으로 사람 및 동물 둘다에 사용하기 위한 백신의 디자인에 광범위하게 적용된다. 목적하는 산업은 약제학적 및 생물공학적 산업을 포함한다.
본 발명은 항원에 대해 지시된 잠재적이고 광범위한 면역 반응을 목적으로 항원을 항원 제공 세포(APC)에 특이적으로 표적화(전달)하는 백신을 포함하는 조성물 및 방법을 포함한다. 이들 조성물은 항원이 유래된 제제(병원체 또는 암)에 대한 보호 또는 치료학적 면역 반응을 유발한다. 또한 본 발명은 직접적으로 또는 항원 제공 세포와의 이들의 특이적 연계를 통한 치료제, 즉 또 다른 제제와 협력하는 제제를 생성한다.
Gag-Nef 백신. 하기에 나타낸 서열은 중쇄(H)-HIV gag p24 융합 단백질이고 여기서, p24 영역[이탤릭체]은 사람 주요 조직적합성 복합체 클래스 II, DR 알파 전구체의 유연성 루프 기원의 짧은 스페이서[볼드체]를 통해 hIgG4H의 C-말단에 연결되어 있다. 밑줄친 AS 잔기는 작제할 목적[이 경우에 Nhe I]으로 사용되는 제한 부위에 의해 암호화되어 있다. 이러한 유형의 항체-p24 융합 단백질은 과학 문헌에 기재되었다[예를 들어, 문헌참조: Antigen targeting to dendritic cells elicits long-lived T cell help for antibody responses (2006) Boscardin et al., JEM, Volume 203, Number 3, 599-606].
개선된 항체 항원 링커 서열. [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-Viralgag] C241 은 다음과 같다:
Figure pat00001
도 1, 레인 1 및 2는 H쇄-gag p24 융합체[예를 들어, 본래의 시그날 서열 뒤에 있는 상기 C241을 암호화하는]를 암호화하는 발현 벡터 및 상응하는 경쇄[L] 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 CHO-S 또는 293F 세포로부터 수득된 단백질 A 친화성 크로마토그래피 정제된 gag p24-항체 융합 단백질의 쿠마시 블루 염색된 환원된 SDS PAGE 분석을 보여준다. 전형적으로, 분비된 단백질 생산을 위해, 동시 형질감염 배양을 후속 정제를 위해 배양 상청액을 수거하기 전에 수일까지 진행한다. 전장[약 77 kDa] H쇄-gag p24 융합 쇄는 상부 화살표로 나타낸다. 또한 다른 단백질에 융합되지 않은 H쇄[약 50kDa 밴드로서 레인 4에 나타남]보다 약간 보다 느리게 이동하는 절단된 H쇄 생성물[하부 화살표]이 나타난다. 당해 결과는 H쇄 - p24 링커 서열이 단백질분해 절단에 민감하여, 생성된 분비된 항체-항원 융합 단백질의 온전성이 손상됨을 시사한다.
반대로, 항체 - 인플루엔자 HA1-1 융합 단백질은 H쇄 C-말단과 HA1-1 도메인 사이에 상당한 절단이 관찰되는 것 없이 분비되고 회수될 수 있다. [mAnti-LOX- 115C4H-LV-hIgG4H-C-Flex-FluHA1-1-6xHis] C114는 다음과 같다:
Figure pat00002
이 경우에, 셀룰로좀 앵커 스캐폴딘 B 전구체[클로스트리디움 써모셀룸(Clostridium thermocellum) ATCC 27405]로부터 유래된 짧은 링커[볼드체]를 H쇄 C 말단[밀출친 연결 서열을 통해]과 인플루엔자 HA1-1 도메인[이택릭체] 사이에 삽입하였다. H쇄 C-말단과 HA1-1 도메인 사이에는 명백한 단백질분해 절단이 전혀 없다[도 1 레인 3].
도 2 및 도 3은 셀룰로좀 앵커 스캐폴딘 B 전구체[박테로이드 셀룰로솔벤스Bacteroides cellulosolvens)]로부터 유래된 H쇄-gag p24 링커와의 H쇄-gag p24 융합체를 암호화하는 발현 벡터 및 상응하는 경[L] 쇄 발현 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 CHO-S 또는 293 F 세포로부터 수득된 단백질 A 친화성 크로마토그래피 정제된 gag p24 항체 융합 단백질의 쿠마시 블루 염색된 환원된 SDS PAGE 분석을 보여준다.
[mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-var1-Viralgag-var1-6xHis] C560은 하기에 나타낸다[밑줄친 잔기는 제한 부위 연결 서열로부터 기원한 것이고 볼드체는 유연성 링커 잔기이다]:
Figure pat00003
상기 항체-gag p24 융합 단백질은 H쇄 C-말단과 gag p24 도메인 사이에 어떠한 검출가능한 절단도 없이 온전한 상태로 제조된다. 따라서, QTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNP (서열번호 4) 링커 서열은 gag p24 백신 제조 목적을 위해 탁월하다.
스캐폴딘 및 관련 단백질로부터 유래된 바람직한 링커 서열. 하기 서열은 셀룰로스 분해 세균으로부터 기원하는 스캐폴딘으로서 CipA이다. 당해 단백질은 (i) 탄수화물-결합 도메인을 통한 셀룰로스 매트릭스[CBM-3, 도 3]로의 부착 및 (ii) 효소 연결된 도케린 도메인을 통한 엔도글루카나제 D와 같은 셀룰로스 분해 효소에 결합하는 것에 대한 당해 단백질의 역할을 반영하는, 유연하도록 명백히 진화된 링커 서열[이탤릭체]이 사이에 산재된 다중 코헤신 도메인을 포함한다.
>gi|2506991|sp|Q06851|CIPA_CLOTM 셀룰로좀 스캐폴딩 단백질 A 전구체(셀룰로좀 당단백질 S1/SL) (셀룰로스 통합 단백질 A) (코헤신) [클로스트리디움 써모셀룸 ATCC 27405]. 볼드체 잔기는 상기 C114 작제물에 사용되는 링커 서열이다.
Figure pat00004
도 3a 내지 3c는 cipA에 대한 구조적 도메인 도식을 보여준다. 도 3a는 구조적 도메인 도식이 고도로 예측된 O-연결된(도 3c) 및 N-연결된 글리코실화 부위(도 3c)를 보여주는 cipA에 대한 NetOGlyc 1.0 서버 및 NetNGlyc 1.0 서버 분석이다. 특히, O-연결된 부위는 대부분 링커 서열내에 있다.
cipA A와 유사한 또 다른 예는 하기에 나타낸다. C560으로 상기 제시된 링커 서열[QTPTNTISVTPTNNSTPTNTSTPKPNP] (서열번호 6)은 본 서열[N의 T로의 치환을 제외하고는 볼드 이택릴체로 하기에 나타냄]로부터 유래하고 2개의 잠재적인 N-연결된 글리코실화 부위[밑줄침]를 포함한다. 하기의 작제 및/또는 HIV 펩타이드 기재에서 사용되는 다른 링커 서열은 볼드체로 나타낸다.
>gi|50656899|gb|AAT79550.1| 셀룰로좀 앵커 스캐폴딘 B 전구체[박테로이드 셀룰로솔벤스]는 다음과 같다:
Figure pat00005
도 4a 내지 4c는 셀룰로좀 앵커 스캐폴딘 B 전구체[박테로이드 셀룰로솔벤스]에 대한 구조적 도메인 도식을 보여준다. 도 4a는 구조적 도메인 도식이 고도로 예측된 O-연결된(도 4b) 및 N-연결된 글리코실화 부위(도 4c)를 보여주는 cipA에 대한 NetOGlyc 1.0 서버 및 NetNGlyc 1.0 서버 분석이다. 특히, O-연결된 부위는 대부분 링커 서열내에 있다.
본 발명은 단백질 가공에서 바람직한 도메인 상호간 링커 서열로서 - 특히 진핵 발현 숙주에서 제조된 단백질을 가공하는데 사용하기 위한 고도로 예측된 글리코실화 부위를 갖는 것들에 대한 셀룰로스-분해 유기체로부터 유래된 구조 상호간 도메인 링커 서열을 사용하기 위한 조성물 및 방법을 포함한다. 이들 서열을 사용하여 수득된 개선된 성질 중에서도 i) 항원 형태 에피토프의 B 세포 수용체를 매칭시킴에 의해 합성 동안에 연결된 도메인의 올바른 폴딩을 조력해야만 하는 연결된 도메인의 분리를 촉진시키고 명백한 접근을 유지시키는 고유 유연성; ii) 생성물 융합 단백질의 분비 및 용해도를 도와주고 링커 서열을 프로테아제로부터 보호해주는 글리코실화가 있는 것으로 밝혀졌다.
gag 서열을 갖는 단백질분해 절단 부위의 제거. 도 5 레인 1[하기]은 적당한 L쇄 발현 플라스미드로 동시 형질감염된 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Viralgag-p40] C535의 정제된 발현 생성물을 보여준다. C535[gag 잔기는 이탤릭체이고 밑줄친 제한 부위 암호화된 잔기를 연결한다]의 성숙한 H쇄 서열은 다음과 같다:
Figure pat00006
도 5에서 상부 화살표는 C535-암호화된 H쇄에 대해 예상된 대략적인 위치를 보여주고, 생성물의 단지 작은 부분이 이 위치에서 밴드를 갖는다. 하부 화살표에 의해 나타낸 생성물 벌크는 크기가 짧은 H쇄이고 이는 대략적으로 gag p17-p24 경계선에서 프로테아제 민감성 부위의 존재를 시사한다.
도 6 레인 3 [하기]은 적당한 L쇄 발현 플라스미드로 동시 형질감염된 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-var1-Viralgag-p40-var1-6xHis] C601 발현의 부분적으로 정제된 생성물을 보여준다. C535의 성숙한 H쇄 서열[gag 잔기는 이탤릭체이고 연결 제한 부위 암호화된 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 잔기는 볼드체이다]은 다음과 같다:
Figure pat00007
상기 gag 서열은 KKK가 VDESF로의 서열 변화[상기 밑줄쳐 나타냄]를 가져 gag p17의 C-말단 방향의 잠재적인 프로테아제 민감성 부위가 제거되고 도 6은 당해 변이체 형태가 대부분 분해되지 않은 H쇄와 함께 제조됨을 보여준다[레인 3에서 저분자량 밴드는 "배경 오염물"이다 - 도 7 참조].
하나의 특정 양태에서, 본 발명은 분비된 연결된 gag p17 + p24 단백질의 단백질분해 절단을 차단하는 상기 정의된 KKK 서열에 대한 변화를 갖는 gag p40[p17 + p24]의 변이체를 포함한다.
바람직한 HIV nef 항원에 연결된 항체. 본 발명은 수지상 세포에 대한 HIV 항원을 표적화하는 하나의 바람직한 백신을 포함하지만 이에 제한되지 않고 여기서 최대량의 gag 항원이 최대량의 nef 항원과 연결되어 있다. 도 7 레인 4 [하기]는 적당한 L쇄 발현 플라스미드로 동시 형질감염된 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-ViralNef] C757의 발현의 부분 정제된 생성물을 보여준다. C757의 성숙한 H쇄 서열[nef 컨센서스 클레이드(Consensus Clade) B 잔기는 이탤릭체이고 연결 제한 부위 암호화된 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커는 볼드체이다]은 다음과 같다:
Figure pat00008
도 7에 나타낸 항체-항원 생성물 분석은 동일한 적당한 L쇄 발현 작제물과 함께 293F 세포로 일시적으로 동시 형질감염된 다양한 H쇄-항원 작제물을 보여준다. 각각의 레인은 과량의 단백질 A 비드에 결합되고, PBS + 1M NaCl로 2회 세척되고 20mM HCl로 용출되고 건조되고 환원 SDS PAGE 샘플 완충액에 용해되고 쿠마시 블루 염색과 함께 환원 SDS PAGE에 의해 분석된 5ml의 형질감염 세포 상청액[3일 생산]으로부터의 생성물을 나타낸다. 당해 기술은 예상된 H쇄 생성물의 온전성에 대한 평가를 가능하게 할 뿐만 아니라 항체-항원 생성물의 상대적 생산 수준의 평가를 허용한다. 상대적 생산 수준의 문제는 백신 생산 비용이 주로 대규모 포유동물 세포 발효 시스템에서 온전하게 분비된 백신의 수율에 의존하기 때문에 매우 중요하다. 발현 수준이 대안적인 벡터 시스템을 통해 크게 증가될 수 있지만 당해 벡터는 특히 포유동물 세포 게놈내 통합되는 경우 증진된 전사 및 고생성 형질감염된 세포 클론의 선별을 유리하게 하는 DNA 요소를 함유하고 이들 방법은 이들 추가의 방법을 적용하는 것 없이 우수한 수율로 온전한 상태로 분비되는 생성물을 발현하는 출발 작제물에 의해 크게 보조된다. 형질감염된 포유동물 세포로부터 분비된 항체-항원 융합체 생산의 거대 변화는 이전의 특허 문헌[코헤신-도케린 및 DCIR]에 널리 보고되었고 이들 데이터는 생산 수준이 항체 비히클[가변 및 불변 영역]과는 대부분 무관하고 오히려 항원 자체의 고유 성질이다. 따라서 도 7 레인 4는 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-ViralNef]의 매우 효율적인 생성을 보여주고 이는 QTPTNTISVTPTNNSTPTNNSNPKPNP를 통해 연결된 nef 컨센서스 클레이드 B 항원에 융합된 항체의 상기 배위가 매우 유리한 것임을 보여준다.
특정 바람직한 HIV gag 및 nef 항원에 연결된 항체. [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-Viralgag-p40-ViralNef] C758은 상기 제시된 변이체 gag p40 항원에 직접적으로 인접하여 첨부된 nef 컨센서스 클레이드 B 항원을 갖는다[연결 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 서열은 볼드체이다]:
Figure pat00009
도 7 레인 5는 발현 플라스미드가 분비된 생성물로서 매우 불량하게 발현되는 적당한 L쇄와 동시 형질감염되는 경우 당해 H쇄 항원 융합체의 합성을 지시함을 보여준다. 레인 6-9는 인접하고/하거나 원거리 유연성 링커 서열과 연합된 nef 컨센서스 클레이드 B 항원 암호화 서열 삽입부를 갖는 L쇄 발현 플라스미드 및 H쇄-gag 발현 작제물로 동시 형질감염된 293F 세포로부터 분비된 생성물을 보여준다. 유연성 링커 서열의 부가는 온전한 항체-gag/nef 융합체 백신의 분비를 촉진시킨다. 고수준의 백신 제조를 위해 바람직한 하나의 작제물은 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-p17-f3-nef-f4-p24-6xHis] C791 [레인 9 참조]이다. 당해 포유동물 발현 시스템에서 항체-항원 융합체의 상대적 수준은 항체 V-영역과 대부분 무관하기 때문에, 상이한 DC 수용체를 표적화하는 항체-gag/nef 항원 백신은 [-Flex-v1-p17-f3-nef-f4-p24-6xHis]가 이들의 H쇄 C-말단에 부착되는 경우 생성에 유사한 이점을 가져야만 한다.
레인 6 H쇄는 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-Viralgag-p40-f4-nef] C767이다[연결 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 서열은 볼드체이고 항원 잔기는 이탤릭체이다]:
Figure pat00010
레인 7 H쇄는 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-p17-nef-f4-p24-6xHis] C790 C767이다[연결 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 잔기는 볼드체이고 항원 잔기는 이탤릭체이다]:
Figure pat00011
레인 8 H쇄는 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-p17-f3-nef-p24-6xHis] C797 C767이다[연결 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 서열은 볼드체이고 항원 잔기는 이탤릭체이다]:
Figure pat00012
레인 9 H쇄는 [mAnti-DCIR_9E8_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-p17-f3-nef-f4-p24-6xHis] C791 C767이다[연결 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 잔기는 볼드체이고 항원 잔기는 이탤릭체이다]:
Figure pat00013
상기 단백질의 CHO-S 세포 생산에서 격심한 발효 조건하에 검출된 잔기 분해를 제거하기 위해 시험된 추가의 변형은 밑줄치고 볼드체이며 이탤릭체로 강조하여 보여지는 KKK의 NKQ로의 변화로 하기에 나타낸다:
Figure pat00014
최대 항원 에피토프와의 특정 gag-nef 항원 융합체는 효율적인 분비/생성 성질을 갖는 것으로 밝혀졌다. 바람직한 유연성 링커 서열로 플랭킹된 nef 항원이 삽입 또는 부착된 gag p40의 변이체는 특히 양호하게 생성되고 분비되는 것으로 밝혀졌다. 본원 명세서에 기재되고 셀룰로스 분해 유기체로부터 수득가능한 유연성 링커 서열이 온전한 항원 및/또는 항체-항원 융합 단백질로서 연결된 항원의 분비를 촉진시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다.
항원 암호화 서열:C757 항원 영역의 DNA 서열은 다음과 같다[볼드체 서열은 연결 부위 또는 종료 코돈이다]:
Figure pat00015
C791 링커 및 항원 암호화 서열은 다음과 같다[볼드체 서열은 연결 부위 또는 종료 코돈이다]:
Figure pat00016
하기의 실시예는 본 발명이 HIV 및 다른 항원을 CD40을 통해 사람 DC로 표적화시킬 수 있음을 보여준다. 강력한 활성화 항-CD40 모노클로날 항체의 생성. 마우스를 마우스 IgG2b-사람 CD40 융합 단백질로 면역화시키고 이어서 주입부로부터 유출된 림프절 기원의 B 세포는 하이브리도마로서 불멸화시킨다. CD40 CDNA로 형질감염된 293F 세포에 대한 FACS에 의해 검출되는 바와 같은 항-CD40 반응성 항체를 분비하는 35개 하이브리도마 기원의 상청액은 사이토킨 분비 유도를 위한 사람 수지상 세포의 밤새 배양에서 시험하였다. 도 8은 CD40과 결합하고 활성화시킬 수 있는 항-CD40 항체의 서브세트를 검출하도록 디자인된 상기 유형의 스크린의 예를 보여준다. 당해 데이터 세트는 특히, 2개의 하이브리도마 12E12 및 9A11이 DC를 분비된 IL-12p40으로 지시하는데 강력하다. 12E12 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 cDNA는 표준 클로닝을 사용하여 유래되고 서열분석 기술 및 가변 영역은 사람 IgG4 불변 영역상으로 이식된 마우스 12E12 가변 영역을 발현하는 벡터내로 유전자조작된다.
C269 rAB-pIRES2[manti-CD40_12E12.3F3_K-V-hIgGK-C] 하기 DNA 서열은 키메라 경쇄 암호화 영역 및 아미노산 서열, 이탤릭체로 나타낸 마우스 가변 영역을 갖는 예측된 분비된 성숙한 경쇄를 보여준다
Figure pat00017
C230 rAB-pIRES2[manti-CD40_12E12.3F3_H-V-hIgG4H-C] 하기 DNA 서열은 키메라 중쇄 암호화 영역 및 아미노산 서열, 이탤릭체로 나타낸 마우스 가변 영역을 갖는 예측된 분비된 성숙한 경쇄를 보여준다.
Figure pat00018
C230의 변이체는 사람 IgG4 C-말단에 융합된 항원을 갖는 CD4012E12 H쇄를 암호화하도록 조작되고, 예를 들어, C291 rAB-pIRES2[manti-CD40_12E12.3F3_H-V-hIgG4H-C-Flex-FluHA1-1-6xHis]는 하기에 이탤릭체의 인플루엔자 HA1-1 항원 영역 및 볼드체로 나타낸 유연성 링커 서열 및 C-말단 폴리 히스티딘 태그와 함께 하기에 나타낸 서열을 갖는 H쇄를 암호화한다:
Figure pat00019
또 다른 유형의 변이체 H쇄 작제물은 C450 rAB-pIRES2[manti-CD40_12E12.3F3_H-LV-hIgG4H-C-Dockerin-var1]이고 이는 이탤릭체로 나타낸 C-말단 도케린 도메인 항원 영역을 갖는 하기에 나타낸 서열을 갖는 H쇄를 암호화한다:
Figure pat00020
따라서, 상기 및 유사한 변이체 H쇄를 암호화하는 발현 벡터는 293F 또는 CHO-S 세포에 동시형질감염시켜 단백질 A 친화성 크로마토그래피에 의해 용이하게 정제될 수 있는 항-CD4012E12-hIgG4 항체 융합 단백질을 분비할 수 있게 한다.
당해 항체-항원 단백질은 시험관내 또는 생체내에서 사람 수지상 세포로 고효율로 항원을 전달하기 위한 벡터로서 사용될 수 있다. 항-CD4012E12-hIgG4 도케린 단백질은 또한 코헤신-항원 융합 단백질을 전달하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어: C32 Ecoli-pET28[코헤신-FluM1-6xHis]은 하기에 나타낸 서열을 암호화하고 여기서, 인플루엔자 M1 단백질은 이탤릭체로 나타낸다:
Figure pat00021
상기 단백질은 이.콜라이에서 가용성 단백질로서 발현될 수 있고 이온 교환 및 금속 친화성 크로마토그래피에 의해 순수한 생성물로서 제조될 수 있다. 항-CD4012E12-hIgG4 도케린 융합 단백질과 코헤신 Flu M1 융합 단백질간의 고도로 안정한 복합체 또는 접합체는 고친화성 도케린-코헤신 상호작용을 통해 어셈블리될 수 있다.
투여 범위의 당해 항-CD4012E12-hIgG4 도케린 - 코헤신 Flu M1 접합체를 1일 동안 사람 수지상 세포로 항온처리하고 이어서 동형 CD8+ T 세포를 첨가하고 항온처리는 수일 이상 동안 계속하였다. 이어서 세포를 면역우성 Flu M1 에피토프 58-66에 상응하는 TCR 함유 T 세포에 특이적인 HLA-A2 4량체 시약 및 항-CD8 항체로 염색시켰다. 4량체 양성 세포는 박스 게이트로 나타낸다. 당해 데이터는 0.001 ug/ml 정도로 낮은 항-CD4012E12-hIgG4 도케린 코헤신 Flu M1 접합체의 농도가 어떠한 접합체가 부가되지 않은 것보다 또는 [다음 도면 패널] 일련의 투여 범위의 대조군 IgG4 도케린 코헤신 Flu M1 접합체보다 상당히 높은 수준에서 Flu M1-특이적 CD8+ T 세포의 증식을 유발함을 보여준다. 이들 데이터는 항-CD4012E12 항체가 항원을 DC로 전달하여 항원 특이적 T 세포의 증식에 의해 나타나는 바와 같이 항원을 프로세싱하고 제공하는데 매우 능함을 입증한다.
도 9는 10 ug/ml의 투여 범위 내지 항-CD4012E12-hIgG4 도케린 - 코헤신 Flu M1 접합체의 부재에 의해 유발되는 바와 같은 Flu M1-4량체 염색[수직축]에 대한 CD8+ 염색[수평축]의 FACS 분석을 보여준다.
도 10은 10ug/ml의 투여 범위 내지 대조군 hIgG4 도케린 - 코헤신 Flu M1 접합체 부재에 의해 유발되는 바와 같은 Flu M1-4량체 염색[수직축]에 대한 CD8+ 염색[수평축]의 FACS 분석을 보여준다.
CD40 결합을 보유하고 사람 경쇄 가변 서열과의 유사성을 증진시키도록 조작된(분비된 생성물의 발현을 증진시키기 위해 바람직한 코돈을 포함함에 의해) 변이체와 C269 (seqA) 항-CD4012E12 경쇄 서열의 정렬.
Figure pat00022
CD40 결합을 보유하고 사람 경쇄 가변 서열과의 유사성을 증진시키도록 조작된(분비된 생성물의 발현을 증진시키기 위해 바람직한 코돈을 포함함에 의해) 변이체와 C268 (seqA) 항-CD4012E12 중쇄 서열의 정렬.
Figure pat00023
도 11은 PBMC 배양에서 항원 특이적 T 세포의 증식을 유발하기 위한 항-DC 수용체-항원 표적화 분자(TM)의 시험관내 효능을 분석하기 위해 사용되는 프로토콜을 나타낸다. 간략히 설명하면, HIV 환자의 성분 채집으로부터 2E6 PBMC는 표적화 백신의 용량 범위 및 100U/ml IL-2로 항원처리한다. 배지는 2일 마다 갈아준다. 7일째에 항원에 상응하는 펩타이드 클러스터를 각각의 클러스터 내에 펩타이드 서열에 대해 TCR 특이성을 갖는 T 세포에 의한 IFNγ 생성을 유도하기 위해 첨가한다. 사이토킨 분비를 차단하는 펩타이드 제제와 펩타이드 클러스터와의 4시간 항온처리 후, 세포를 항-CD4, 항-CD8, 항-IL-13, 및 항-IFNγ 시약으로 염색시키고 FACS로 분석하였다.
도 12 및 13은 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신과 함께 DC[PBMC내]를 표적화하는 효과를 보여준다 - H쇄 조성물은 하기에 나타낸다: C818 rAB-cetHS-puro[manti-CD40_12E12.3F3_H-LV-hIgG4H-C-Flex-v1-Viralgag-p17-f3-nef-f4-p24-6xHis] 연결 잔기는 밑줄쳐져 있고 유연성 링커 잔기는 볼드체이며 항원 잔기는 이탤릭체이다:
Figure pat00024
도 12는 백신이 모든 gag p24 펩타이드 클러스터에 특이성을 갖는 CD4+ T 세포의 증식을 유발함을 보여주고 - 시험된 심지어 최저의 백신 용량에서도 IFNγ-생산 CD4+ T 세포의 백분율이, 세포가 펩타이드로 처리되지 않은 경우보다 상당히 컸다. 도 13 [상부 패널]은 그래프 형태의 상기 데이터를 보여주고 - 수직축은 IFNγ-생산 세포의 백분율(%)을 보여준다. 하부 패널은 PBMC 배양 내 CD8+ T 세포와 유사한 데이터를 보여주고 당해 데이터는 또한 gag p24 서열을 포함하는 모든 펩타이드 클러스터가 비펩타이드 대조군보다 IFNγ-생산 T 세포의 생성을 크게 유발시킴을 보여준다. 따라서, 당해 백신은 HIV gag p24 내에 다중 에피토프에 대해 강력한 반응을 유발하였다.
도 14는 백신이 모든 gag p17 펩타이드 클러스터에 특이성을 갖는 CD4+ T 세포의 증식을 유발함을 보여주고 - 시험된 심지어 최저의 백신 용량에서도 IFNγ-생산 CD4+ T 세포의 백분율이, 세포가 펩타이드로 처리되지 않은 경우보다 상당히 컸다. 도 15는 그래프 형태의 상기 데이터를 보여주고 - 수직축은 IFNγ-생산 세포의 백분율을 보여준다[상부 패널]. 하부 패널은 PBMC 배양 내 CD8+ T 세포와 유사한 데이터를 보여주고 당해 데이터는 또한 gag p17 서열을 포함하는 모든 펩타이드 클러스터가 비펩타이드 대조군보다 IFNγ-생산 T 세포의 생성을 크게 유발시킴을 보여준다. 따라서, 당해 백신은 HIV gag p17 내에 다중 에피토프에 대해 강력한 반응을 유발하였다.
도 16은 백신이 대부분의 HIV nef 펩타이드 클러스터에 특이성을 갖는 CD4+ T 세포의 증식을 유발함을 보여주고 - 시험된 심지어 최저의 백신 용량에서도 IFNγ-생산 CD4+ T 세포의 백분율이, 세포가 펩타이드로 처리되지 않은 경우보다 상당히 컸다. 도 17은 그래프 형태의 상기 데이터를 보여주고 - 수직축은 IFNγ-생산 세포의 백분율(%)을 보여준다[상부 패널]. 하부 패널은 PBMC 배양 내 CD8+ T 세포와 유사한 데이터를 보여주고 당해 데이터는 또한 nef 서열을 포함하는 모든 펩타이드 클러스터가 비펩타이드 대조군보다 IFNγ-생산 T 세포의 생성을 크게 유발시킴을 보여준다. 따라서, 당해 백신은 HIV nef 내에 다중 에피토프에 대해 강력한 반응을 유발하였다.
당해 데이터는 백신[특별히 조작된 gag p17 nef gag p24 융합 단백질에 연결된 항-CD4012E12]이 심지어 낮은 용량에서도 광범위한 면역 반응, 즉 CD4+ 및 CD8+ T 세포 구획내 에피토프의 광범위한 제공을 유발할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 당해 데이터는 또한 2개의 백신 부분 [항-CD4012E12 및 유사한 특별한 성질을 갖는 기타 항체, 및 효율적인 생산과 일치하는 최대 에피토프 제공을 위해 조작된 gag-nef 항원]의 각각 - 즉, 항-CD40 성분이 기타 항원의 전달용 비히클일 수 있고 항원 성분은 기타 항-DC 수용체 비히클에 의해 전달될 수 있음을 입증한다. 당해 결과는 또한 기억 [HIV 백신이 접종된 HIV 환자] 및 순수 [PSA 항원이 접종된 정상적인 공여자] T 세포 집단 둘다로부터의 항원-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 광범위 어레이를 확장시키기 위한 CD40계 표적화의 능력을 입증한다.
항-CD40-PSA로 표적화된 DC는 PSA 특이적 CD4+ T 세포 반응을 유도한다. 도 18은 광범위한 PSA 에피토프 어레이에 상응하는 순수한 T 세포 집단 PSA 특이적 CD4+ T 세포로부터의 확장을 유발하기 위해 PSA[전립선-특이적 항원]에 연결된 항-CD40-12E12로 구성된 백신의 능력을 시험하기 위한 프로토콜의 개요를 보여준다. 간략히 설명하면, 정상적인 공여체로부터의 단핵구의 IFNα와 GM-CSF와의 배양에 의해 유래된 DC는 백신과 항온처리한다. 다음 날, 세포는 새로운 배지에 놓고 동일한 공여자로부터의 순수한 CD4+ T 세포를 첨가한다. 수일 후, PSA 펩타이드를 첨가하고 4시간 후 배양 상청액중에 분비된 IFNγ 수준을 측정한다.
도 19는 많은 PSA 펩타이드가 강력한 IFNγ-생산 반응을 유발함을 보여주고 이는 항-CD4012E12 및 유사한 항CD40 제제가 항원을 DC로 효과적으로 전달하여 항원의 다중 에피토프에 대해 면역 반응의 프라이밍을 유도함을 나타낸다.
도 20은 DC로 표적화된 항-CD40-PSA로 표적화된 DC가 PSA 특이적 CD8+ T 세포 반응을 유도함을 보여준다. IFNDC는 PSA와 함께 1 μg의 mAb 융합 단백질로 표적화하였다. 정제된 자가 CD8+ T 세포는 10일 동안 동시 배양하였다. 세포를 항-CD8 및 PSA (KLQCVDLHV)-4량체로 염색시켰다. 세포는 HLA-A*0201 양성 건강한 공여자 기원이다. 당해 결과는 항-CD40이 PSA를 DC로 효과적으로 전달하여 이것이 PSA-특이적 CD8+ T 세포를 유발함을 입증한다.
도 21은 DC에 의한 표적화된 흡수 및 이들의 세포 표면상으로 항원 에피토프의 제공으로부터 비롯된 항원 특이적 T 세포의 증식을 지시하는 이들의 능력에 대해 항-DC 수용체 표적화 백신을 시험하기 위한 DC 표적화 프로토콜을 기재한다. 간략히 설명하면, HIV 환자 단핵구는 IFNα 및 GM-CSF에서 3일 동안 배양함에 의해 DC로 분화한다. 백신[FP]을 이어서 자가 T 세포와 함께 10 ug/ml을 첨가한다. 배양 10일 후, 항원 펩타이드 클러스터를 확장된 T 세포에 첨가하고 4시간 후 세포내 IFNα를 측정한다.
도 22 [상부 패널]는 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신 [환자 Aph002]의 효능을 비교한 것이다. 항-CD4012E12 nef 백신 [녹색 막대]은 nef 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD4+ T 세포의 증식을 자극하였고, 항-CD4012E12 gag p24 [청색 막대]는 p24 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD4+ T 세포의 증식을 자극시키지만 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24는 gag p17, nef, 및 p24 펩타이드 에피토프에 대응하는 IFNα-생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극시켰다.
도 22 [하부 패널]은 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신 [환자 Aph002]의 효능을 비교한 것이다. 항-CD4012E12 nef 백신 [녹색 막대]은 nef 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극하였고, 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 [오렌지색 막대]는 gag p17 및 nef 펩타이드 에피토프 둘다에 대응하는 IFNα-생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극시켰다.
도 23 [상부 패널]은 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신 [환자 Aph010]의 효능을 비교한 것이다. 항-CD4012E12 nef 백신 [녹색 막대]은 nef 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD4+ T 세포의 증식을 자극하였고, 항-CD4012E12 gag p24 [청색 막대]는 p24 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD4+ T 세포의 증식을 자극시키지만 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24는 gag p17, nef, 및 p24 펩타이드 에피토프에 대응하는 IFNα-생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극시켰다.
도 23 [하부 패널]은 항-CD4012E12 nef, 항-CD4012E12 gag p24, 및 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신 [환자 Aph002]의 효능을 비교한 것이다. 항-CD4012E12 nef 백신 [녹색 막대]은 nef 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극하였고, 항-CD4012E12 gag p24 [청색 막대]는 p24 펩타이드 에피토프에만 대응하는 IFNα 생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극시키지만 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24[오렌지색 막대]는 gag p17 및 nef 펩타이드 에피토프 둘다에 대응하는 IFNα-생산 CD8+ T 세포의 증식을 자극시켰다.
이들 데이터는 항-CD4012E12 gag p17 nef gag p24 백신이, 백신의 모든 3개의 항원 요소 - HIV gag p17, HIV gag p24, 및 HIV nef내에 다중 에피토프를 포함하는 T 세포 반응의 광범위한 어레이를 유발할 수 있음을 입증한다.
하기 서열은 C515 벡터에 의해 발현된 코헤신[볼드체 잔기]- 사이클린 D1[밑줄친 잔기]의 아미노산 서열이다.
C515 이.콜라이-pET28 [Cohesin-hCyclinD1-6xHis]
Figure pat00025
이.콜라이에서 제조된 Coh.Cyclin D1 단백질의 발현 및 정제.
Coh.Cyclin D1은 카나마이신 내성에 대한 선별(40ug/ml)과 함께 37℃에서 루리아(Luria) 브로쓰(Difco)에서 200회전/분으로 진탕시키면서 중간-로그 성장 단계까지 성장시킨 이.콜라이 균주 T7 Express(NEB)에서 발현시켰다. 이어서 120 mg/L의 IPTG (Bioline)를 첨가하고 추가로 3시간 후 세포를 원심분리로 수거하고 -80℃에서 저장하였다. 각각 1L 발효로부터 이.콜라이 세포를 0.2ml의 프로테아제 억제제 칵테일 II(Calbiochem)을 갖는 50ml의 빙냉 50 mM Tris, 1 mM EDTA pH 8.0 중에 재현탁시켰다. 당해 세포를 셋팅 18(Fisher Sonic Dismembrator 60)에서 5분의 휴지기와 함께 4분 동안 빙상에서 2회 초음파처리함에 이어서 20분 동안 4℃에서 17,000 r.p.m(Sorvall SA-600)에서 회전시킨다. 50 ml의 세포 용해 상청액을 10 ml의 ANX 세파로스 비드(GE Healthcare)를 통과시킴에 이어서 관류물을 7.5 ml 160 mM Tris, 40 mM 이미다졸, 4 M NaCl pH 7.9와 함께 결합 완충액으로 조정하고 Ni++로 하전된 5ml의 HiTrap 킬레이팅 HP 칼럼(GE Healthcare)상으로 로딩하였다. 결합된 단백질을 20 mM NaPO4, 300 mM NaCl, 10 mM 이미다졸 pH 7.6 (완충액 A)로 세척하고 완충액 A 중의 10 내지 500 mM 이미다졸 농도 구배로 용출시켰다. 피크 분획물을 SDS-PAGE 겔로 분석하고 모았다. 대략적으로 15mg의 모은 용출된 코헤신-사이클린 D1 융합 단백질은 20kDa 페길 그룹을 유리 시스테인 잔기(이는 사이클린 D1 도메인내 수개가 있다)로 부착시키는 10mg의 mPEG-MAL 20k 시약(Nektar)과 실온에서 밤새 반응시켰다. 당해 반응물의 일부는 DPBS[Gibco]에 대해 투석하고 일부는 pH 7.5로 조정하며 이어서 DTT를 실온에서 1.5시간 동안 10mM로 첨가하여 임의의 디설파이드 결합을 감소시킴에 이어서 실온에서 1.5시간 동안 25mM 요오도아세트아미드를 첨가하여 유리 시스테인 잔기를 알킬화시킴에 이어서 실온에서 1.5시간 동안 20mM DTT를 첨가하고 이어서 DPBS에 대해 투석한다. 페길화는 단백질이 DPBS 중에 가용성으로 유지되도록 보장하기 위해 요구되고 알킬화(시험관내 항-CD40 표적화에서 단백질의 활성을 위해 필요하지 않다)는 생성물에 분자내 디설파이드 가교 연결된 형태가 부재이도록 보장하기 위해 사용된다.
도 24. 항-DC 수용체-도케린 재조합 항체와 코헤신-사이클린 D1 융합 단백질과의 상호작용에 대한 분석. 항체-도케린 또는 항체-HIV nef 융합 단백질[20 μg]을 100 μl의 단백질 A-세파로스 비드 [GE Biosciences]와 항온처리함에 이어서 DPBS로 2회 세척한다. 페길화된[peg] 또는 페길화되고 알킬화된 [peg alk] 코헤신-사이클린 D1 [Coh.Cyclin D1]을 첨가[20 μg]하고 실온에서 30분 후, 상청액을 원심분리에 의해 비드로부터 분리하였다. 비드를 20 mM의 HCl로 용출시키고 용출물 및 상청액을 건조시키고 SDS.PAGE 로딩 완충액중에 재현탁시키고 환원 SDS.PAGE상에서 전개시키고 쿠마시 블루 염색으로 가시화하였다. 레인 1은 항체-도케린 + peg Coh.Cyclin D1으로 로딩된 비드로부터의 상청액을 보여주고 레인 2는 상응하는 비드 용출물이다. 레인 3은 항체-HIV nef + peg Coh.Cyclin D1으로 로딩된 비드로부터의 상청액을 보여주고 레인 4는 상응하는 비드 용출물이다. 레인 5는 항체-도케린 + peg alk Coh.Cyclin D1으로 로딩된 비드로부터의 상청액을 보여주고 레인 6은 상응하는 비드 용출물이다. 레인 7은 항체-HIV nef + peg alk Coh.Cyclin D1으로 로딩된 비드로부터의 상청액을 보여주고 레인 8은 상응하는 비드 용출물이다. 레인 9는 단독의 항체-도케린을 보여주고 레인 10은 단독의 항체-HIV nef를 보여주고 레인 11은 단독의 peg Coh.Cyclin D1을 보여주고 레인 12는 단독의 peg alk Coh.Cyclin D1을 보여준다. 화살표[상부에서 하부로]는 다음을 보여준다: 1) 고분자량의 페길화된 형태의 Coh.Cyclin D1, 2) 항체 중쇄의 위치, 3) 비-페길화된 Coh.Cyclin D1[이는 제제의 약 50%이다]의 위치, 4) 항체 경쇄의 위치.
상기 분석은 항체-HIV nef가 아닌 항체-도케린이 Coh.Cyclin D1의 대부분을 효과적으로 포획함을 보여준다. 이것은 Coh.Cyclin D1 제제가 항-DC 수용체-도케린 표적화 비히클과의 복합체를 어셈블리할 수 있음을 입증한다.
맨틀 세포 림프종(MCL)은 B-세포 비호지킨 림프종이고 이는 모든 비호지킨 림프종의 5 내지 10%를 차지하고 고령의 남성에서 주로 나타난다. 이는 통상적인 치료 후 최악의 예후, 빈번한 재발 및 비교적 짧은 생존율을 갖는 매우 공격적인 암이다. 이것은 사이클린 D1의 과발현을 유도하는 유전자 홀마크: t (11; 14) (ql3; q32) 전위를 갖는다.
G1/S-특이적 사이클린-D1(다르게는 PRAD1로도 명명됨), Bc1-1은 CDK4 및 6과 복합체를 형성함을 통해 G1 진행 및 G1/S 전이의 세포 사이클을 조절하는 기능을 한다. 발현은 G1에서는 최대 발현, S에서는 최소 발현과 함께 세포 사이클 의존성이기 때문에 성숙한 림프구에서는 정상적으로 발현하지 않는다. 따라서, 사이클린 D1을 과발현하는 세포에 대해 특이적으로 지시된 세포독성 T 세포 반응을 상승시키는 것이 매력적인 MCL 백신 접종 전략이다.
도 25는 사이클린 D1으로부터의 중첩 펩타이드의 도식을 보여준다. 이들은 개별적인 펩타이드로서 또는 펩타이드의 풀로서 T 세포 배양물에 첨가되고, 여기서 이들은 MHC상에 제공되어 펩타이드 특이적 T 세포의 증식을 자극할 수 있다.
도 26은 사이클린 D1-특이적 CD4+ T 세포의 시험관내 증식을 유발하기 위한 항-CD40-사이클린 D1 복합체의 능력을 시험하기 위한 연구 디자인의 도식[좌측 패널]을 보여준다. DC를 표적화 복합체로 항온처리한 후, 염료 CFSC로 표지된 자가 CD4+ T 세포 [즉, 동일한 공여자로부터 기원하는]를 첨가하고 IL-2와 함께 추가로 8일 동안 계속 배양함에 이어서 IL-2 없이 2일 동안 휴지시킨다. 이어서, 당해 배양물을 나누고 8시간 동안 펩타이드 없이 또는 개별 사이클린 D 펩타이드로 자극시킴에 이어서 세포내 IFNg 및 IL-2(T 세포 활성화의 지표)에 대해 염색하고 FACS로 분석한다.
당해 분석은 사이클린 D 펩타이드 P8, P16 및 P54가 펩타이드(또는 다른 사이클린 D1 펩타이드(나타내지 않음)) 없이 항온처리된 세포보다 CD4+ T 세포의 증식 생성을 상당히 크게(즉, CFSC 희석에 의해 나타남) 자극시킴을 보여준다. 따라서, 항-CD40-사이클린 D1 복합체는 이펙터 기능 표현형을 갖는 사이클린 D1-특이적 T 세포의 정상적인 공여자의 T 세포 기원의 증식을 유발하는 기능을 한다.
도 27은 상이한 정상적인 공여체가 사용되는 것을 제외하고는 도 26에 상세히 기재된 것과 유사한 연구 및 분석을 보여주고 - 이 경우에 항-CD40-사이클린 D1 복합체는 사이클린 D1 펩타이드 P4, P43 및 P70에 특이적인 IFNg 양성 증식 CD4+ T 세포의 증식을 유발하였다.
도 28은 CD8+ T 세포가 사용되는 것을 제외하고는 도 26에 기재된 것들과 유사한 도식 및 분석을 보여준다. 본 공여자에서, 항-CD40-사이클린 D1 복합체는 사이클린 D1 특이적 CD8+ T 세포, 특히, 풀 I 및 풀 II내에 함유된 펩타이드에 상응하는 특이성을 갖는 것들의 증식을 유발하였다.
도 29는 동일한 공여자 기원이지만 이들 풀로부터의 개별 펩타이드로 분석된 유사한 데이터를 보여준다. 특히, 이들 T 세포는 펩타이드 P7, P8 및 P10에 대한 특이성을 나타낸다.
본원 명세서에서 논한 모든 구체예는 본 발명의 모든 방법, 키트, 시약 또는 조성물로 실행될 수 있으며, 그 반대로도 실행될 수 있는 것으로 생각되어야 한다. 또한, 본 발명의 조성물은 본 발명의 방법을 달성하는데 사용될 수 있다.
물론, 본원 명세서에 기술된 특정 양태들은 본 발명을 제한하는 것이 아닌, 예시적으로 나타내는 것이다. 본 발명의 주요 특징은 본 발명의 범위를 벗어남이 없이 다양한 구체예에 이용될 수 있다. 당업자는 통상의 실험만으로도 본원 명세서에 기술된 특정 절차들에 대한 다양한 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명의 범위에 속하는 것으로 간주되며 특허청구범위 안에 포함되는 것이다.
본원 명세서에 언급된 모든 공개문헌 및 특허출원은 본 발명이 속하는 기술분야의 숙련된 자의 수준을 나타낸다. 모든 공개문헌과 특허출원은 각각의 공개문헌 또는 특허출원이 구체적으로 및 개별적으로 참고인용되는 것과 동일한 정도로 참고인용된 것이다.
특허청구범위 및/또는 명세서에서 "포함하는"이란 용어와 함께 사용된 단수 용어의 사용은 "하나"를 의미할 수 있지만, "하나 이상", "적어도 하나" 및 "하나 또는 하나보다 많은"의 의미와도 일치한다. 청구의 범위에서 "또는"이란 용어의 사용은 명세서가 대체예만을 언급하는 정의 및 "및/또는"을 의미하는 정의를 지지하고 있더라도, 단지 대체예만을 언급하는 것으로 분명하게 표시되거나 또는 대체예가 호환 배타적이지 않는 한, "및/또는"을 의미하는 것으로 사용된다. 본 출원에 걸쳐, "약"이란 용어는 값이 장치의 고유 오차 변동, 값을 측정하는데 이용된 방법 또는 연구 피검체 간에 존재하는 변동을 포함한다는 것을 나타내기 위해 사용된 것이다.
본원 명세서와 특허청구범위에 사용된 "포함하는"(및 '포함하는'의 모든 형태, 예컨대 "포함한다"), "보유하는"(및 '보유하는'의 모든 형태, 예컨대 "보유한다"), "포함하는"(및 '포함하는'의 모든 형태, 예컨대 "포함한다") 또는 "함유하는"(및 '함유하는'의 모든 형태, 예컨대 "함유한다")이란 용어들은 포괄적 또는 비제한적이며, 언급되지 않은 추가 요소 또는 방법 단계들을 배제하지 않는다.
본원 명세서에 사용된 "또는 이의 조합"이란 용어는 이 용어 앞에 열거된 항목들의 모든 순열 및 조합을 의미한다. 예를 들어, "A, B, C 또는 이의 조합"은 A, B, C, AB, AC, BC 또는 ABC, 및 특정 상황에서 순서가 중요하다면, BA, CA, CB, CBA, BCA, ACB, BAC 또는 CAB 중 적어도 하나를 포함하는 것으로 생각한다. 이 예를 계속해서 들면, 하나 이상의 항목 또는 용어의 반복을 함유하는 조합, 예컨대 BB, AAA, MB, BBC, AAABCCCC, CBBAAA, CABABB 등도 분명하게 포함된다. 당업자는 전후상황에서 다른 분명한 언급이 없는 한, 모든 조합에서 항목 또는 용어의 수에 일반적으로 제한이 없다는 것을 이해할 것이다.
본원 명세서에 개시되고 청구되는 모든 조성물 및/또는 방법은 본 발명의 개시에 비추어 과도한 실험없이 이루어지고 실행될 수 있다. 본 발명의 조성물과 방법은 바람직한 구체예를 들어 설명했지만, 본 발명의 개념, 취지 및 범위 내에서 조성물 및/또는 방법, 본원 명세서에 기술된 방법의 단계 또는 단계의 순서에서 변형이 있을 수 있다는 것을 당업자라면 잘 알고 있을 것이다. 당업자에게 자명한 이러한 유사한 대체물 및 변형은 모두 이하 특허청구범위에 정의된 바와 같은 본 발명의 취지, 범위 및 개념에 속하는 것으로 간주한다.
<110> Baylor Research Institute <120> HIV vaccine based on targeting maximized Gag and Nef to dendritic cells <130> BHCS:2210 <150> US 61/081,234 <151> 2008-07-16 <160> 32 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 701 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Gly Leu Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Asn Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Lys Ile Thr Ile Val Asp Thr Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Ser His Tyr Tyr Gly Tyr Gly Tyr Gly Gly Tyr Phe 100 105 110 Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr 115 120 125 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 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660 accgccgcaa ataacgcaga ctgtgcctgg ctcgaagctc aagaagaaga agaagtcgga 720 ttccccgtgc gaccccaagt tcccctcaga ccaatgactt ataaaggcgc tctggatctt 780 agccactttc ttaaagaaaa aggaggactg gaaggactta tttattcaca aaaaagacaa 840 gacatcctcg atttgtgggt atatcatact caaggttatt tcccagactg gcaaaattat 900 actcctggac ccggcattcg atatcccctt acctttggat ggtgctttaa acttgtcccc 960 gtcgaacctg aaaaagtaga agaagcaaat gaaggcgaaa ataattcact gctccaccct 1020 atgtcactgc acggaatgga tgaccccgaa cgcgaagttc tggtatggaa atttgattca 1080 agacttgctt ttcaccacat ggctagagaa cttcaccccg aatattataa agactgtgaa 1140 ttcaccaacg gcagcatcac cgtggccgcc accgccccca ccgtgacccc caccgtgaac 1200 gccaccccca gcgccgccca attcgcacag caagcagcag ctgacacagg acacagcaat 1260 caggtcagcc aaaattaccc tatagtgcag aacatccagg ggcaaatggt acatcaggcc 1320 atatcaccta gaactttaaa tgcatgggta aaagtagtag aagagaaggc tttcagccca 1380 gaagtgatac ccatgttttc agcattatca gaaggagcca ccccacaaga tttaaacacc 1440 atgctaaaca cagtgggggg acatcaagca gccatgcaaa tgttaaaaga gaccatcaat 1500 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Glu 165 170 175 His Gln Leu Leu Cys Cys Glu Val Glu Thr Ile Arg Arg Ala Tyr Pro 180 185 190 Asp Ala Asn Leu Leu Asn Asp Arg Val Leu Arg Ala Met Leu Lys Ala 195 200 205 Glu Glu Thr Cys Ala Pro Ser Val Ser Tyr Phe Lys Cys Val Gln Lys 210 215 220 Glu Val Leu Pro Ser Met Arg Lys Ile Val Ala Thr Trp Met Leu Glu 225 230 235 240 Val Cys Glu Glu Gln Lys Cys Glu Glu Glu Val Phe Pro Leu Ala Met 245 250 255 Asn Tyr Leu Asp Arg Phe Leu Ser Leu Glu Pro Val Lys Lys Ser Arg 260 265 270 Leu Gln Leu Leu Gly Ala Thr Cys Met Phe Val Ala Ser Lys Met Lys 275 280 285 Glu Thr Ile Pro Leu Thr Ala Glu Lys Leu Cys Ile Tyr Thr Asp Asn 290 295 300 Ser Ile Arg Pro Glu Glu Leu Leu Gln Met Glu Leu Leu Leu Val Asn 305 310 315 320 Lys Leu Lys Trp Asn Leu Ala Ala Met Thr Pro His Asp Phe Ile Glu 325 330 335 His Phe Leu Ser Lys Met Pro Glu Ala Glu Glu Asn Lys Gln Ile Ile 340 345 350 Arg Lys His Ala Gln Thr Phe Val Ala Leu Cys Ala Thr Asp Val Lys 355 360 365 Phe Ile Ser Asn Pro Pro Ser Met Val Ala Ala Gly Ser Val Val Ala 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Claims (1)

  1. 항원 제공 세포에 의한 항원 제공의 효과를 증가시키기 위한 방법으로서,
    가공된 Gag 항원(여기서, 상기 Gag 항원은 하나 이상의 단백질 분해 부위가 제거됨에 의해 단백질 분해에 덜 민감하다)이 항체-항원 복합체를 형성하기 위해 부착된, 수지상 세포(DC)-특이적 항체 또는 이의 단편을 분리 정제하고;
    상기 항체-항원 복합체가 가공되고 T 세포 인지를 위해 제공되는 조건하에 상기 항원 제공 세포를 접촉시킴
    을 포함하는, 항원 제공 세포에 의한 항원 제공의 효과를 증가시키기 위한 방법.
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Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20110036618A (ko) 2008-07-16 2011-04-07 베일러 리서치 인스티튜트 극대화된 Ｇａｇ 및 Ｎｅｆ를 수지상 세포에 표적화시킴을 기본으로 하는 ＨＩＶ 백신
JP2012501323A (ja) * 2008-08-29 2012-01-19 アカデミシュ ジーケンハウス ライデン ハー．オー．デー．エン． ルムク 対象の腫瘍流入領域リンパ節へのｃｄ４０アゴニストの送達
MX2011009438A (es) 2009-03-10 2012-04-02 Baylor Res Inst Anticuerpos anti-cd40 y usos de los mismos.
EP3138854B1 (en) * 2009-03-10 2022-01-26 Baylor Research Institute Antibodies against cd40
ES2911752T3 (es) * 2009-03-10 2022-05-20 Baylor Res Institute Anticuerpos contra CD40
CN102711824A (zh) 2009-09-14 2012-10-03 贝勒研究院 针对朗格汉斯细胞的疫苗
JP5628544B2 (ja) * 2010-04-07 2014-11-19 株式会社豊田中央研究所 クロストリジウム・サーモセラム由来のタンパク質複合体を構築するためのタンパク質及びその利用
BR112012028522A2 (pt) 2010-05-07 2016-07-19 Baylor Res Inst sensibilização cruzada mediada por imunorreceptores de células dendríticas (dcir) de células t humanas cd8+
US20120039916A1 (en) * 2010-08-13 2012-02-16 Baylor Research Institute Novel vaccine adjuvants based on targeting adjuvants to antibodies directly to antigen-presenting cells
US20120128710A1 (en) * 2010-11-02 2012-05-24 Baylor Research Institute Enhancement of Pathogen-Specific Memory Th17 Cell Responses
WO2012122396A1 (en) * 2011-03-08 2012-09-13 Baylor Research Institute Novel vaccine adjuvants based on targeting adjuvants to antibodies directly to antigen-presenting cells
WO2012135132A1 (en) * 2011-03-25 2012-10-04 Baylor Research Institute Compositions and methods to immunize against hepatitis c virus
EP3508500A1 (en) 2011-04-29 2019-07-10 Apexigen, Inc. Anti-cd40 antibodies and methods of use
EP2620446A1 (en) 2012-01-27 2013-07-31 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Immunogens for HIV vaccination
WO2014031984A1 (en) * 2012-08-24 2014-02-27 Baylor Research Institute Immunological detection methods and compositions
EP2892561A1 (en) * 2012-09-07 2015-07-15 Baylor Research Institute Hiv vaccine compositions and methods
CN109265552A (zh) 2012-10-30 2019-01-25 埃派斯进有限公司 抗-cd40抗体及其使用方法
WO2014210540A1 (en) 2013-06-28 2014-12-31 Baylor Research Institute Dendritic cell asgpr targeting immunotherapeutics for multiple sclerosis
EP3094652B1 (en) 2014-01-13 2021-09-29 Baylor Research Institute Novel vaccines against hpv and hpv-related diseases
SG11201700070QA (en) 2014-07-11 2017-02-27 Gilead Sciences Inc Modulators of toll-like receptors for the treatment of hiv
CN105821030A (zh) * 2015-01-04 2016-08-03 彭霞 表达α1，3半乳糖转移酶的癌细胞/树突状细胞融合肿瘤疫苗及其制备方法
CN105821029A (zh) * 2015-01-04 2016-08-03 彭霞 异源融合基因修饰的癌细胞/树突状细胞融合肿瘤疫苗及其制备方法
JP7364237B2 (ja) 2017-08-10 2023-10-18 グッド ティー セルズ、 インコーポレイテッド 癌治療のためのｔ細胞の活性化方法
US10610585B2 (en) 2017-09-26 2020-04-07 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating and preventing HIV
KR20210035805A (ko) 2018-06-15 2021-04-01 플래그쉽 파이어니어링 이노베이션스 브이, 인크. 세포후 신호전달 인자의 조절을 통한 면역 활성의 증가
CN113597430A (zh) 2019-02-08 2021-11-02 古德T细胞有限公司 激活t细胞用于癌症治疗的方法
JP2022527506A (ja) 2019-03-27 2022-06-02 アンセルム（アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エ・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル） Ｃｄ４０活性化特性を有する組換えタンパク質
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
CA3161633A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Aelix Therapeutics, S.L. Dosage regimens for vaccines
WO2021127217A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Combination anti-cancer therapies with inducers of iron-dependent cellular disassembly
KR20230042222A (ko) 2020-05-26 2023-03-28 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(sars-cov-2) 폴리펩티드 및 백신 목적을 위한 이의 용도
CA3184366A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Darby Rye Schmidt Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer
US20240010739A1 (en) 2020-11-12 2024-01-11 Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale (Inserm) Antibodies conjugated or fused to the receptor-binding domain of the sars-cov-2 spike protein and uses thereof for vaccine purposes
GB202019879D0 (en) * 2020-12-16 2021-01-27 Ucl Business Ltd Polypeptide
CN116940373A (zh) 2020-12-23 2023-10-24 国家健康科学研究所 基于将momp vs4抗原靶向至抗原呈递细胞的衣原体疫苗
MX2023008986A (es) 2021-01-29 2023-08-15 Inst Nat Sante Rech Med Polipeptidos antigenicos de chlamydia trachomatis y usos de los mismos con fines de vacuna.
EP4313109A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer
AU2022303363A1 (en) 2021-06-29 2024-01-18 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
CA3238660A1 (en) 2021-11-17 2023-05-25 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Universal sarbecovirus vaccines
WO2024074571A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Dc-targeting vaccine against nipah virus infection
US20240174732A1 (en) 2022-10-05 2024-05-30 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additional polypeptides and their use in treating cancer

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) * 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
US3949064A (en) 1973-10-26 1976-04-06 Baxter Laboratories, Inc. Method of detecting antigens or antibodies
US4174384A (en) 1975-06-30 1979-11-13 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
DK8189A (da) * 1988-01-12 1989-07-13 Bunge Australia Antigen-antistof-konjugater, deres fremstilling og anvendelse
US6054312A (en) * 1997-08-29 2000-04-25 Selective Genetics, Inc. Receptor-mediated gene delivery using bacteriophage vectors
US6541011B2 (en) 1998-02-11 2003-04-01 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
AU7275698A (en) * 1998-05-01 1999-11-23 Procter & Gamble Company, The Laundry detergent and/or fabric care compositions comprising a modified antimicrobial protein
AU4954899A (en) 1998-06-26 2000-01-17 Trustees Of Dartmouth College Methods and compositions for modulating antigen-specific immunological (humoral)responses by targeting such antigen to apcs in conjunction with anti-cd40 ligan d administration
JP2000157282A (ja) 1998-11-30 2000-06-13 Toyota Central Res & Dev Lab Inc 酵素配列複合体及び固定化酵素配列複合体とそれらの製造方法、担体分子及び酵素
PL358132A1 (en) * 2000-03-23 2004-08-09 Akzo Nobel N.V. Use of mia in immunotherapy
US20030059427A1 (en) * 2000-04-28 2003-03-27 Force Walker R. Isolation and characterization of highly active anti-CD40 antibody
US20050013810A1 (en) * 2001-05-08 2005-01-20 Waller Edmund K Regulating immune response using dendritic cells
GB0118367D0 (en) 2001-07-27 2001-09-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel use
RU2312896C2 (ru) * 2001-09-20 2007-12-20 Глаксо Груп Лимитед Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая белок gag вич-1, способ получения указанной последовательности, вектор, содержащий ее, белок, кодируемый ею, фармацевтическая композиция и их применение для профилактики и/или лечения вич-инфекции и спида
WO2003033695A1 (fr) 2001-10-11 2003-04-24 Katakura Industries Co., Ltd. Procede de purification de proteine fusionnee recombinee et procede de production de proteine utilisant ledit procede de purification
CA2468878A1 (en) * 2001-11-30 2003-06-05 Crucell Holland B.V. Antigen presenting cell targeting conjugate, an antigen presenting cell contacted with such conjugate, their use for vaccination or as medicament, and methods for their productionor generation
EP2258712A3 (en) * 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
JP2004236504A (ja) 2003-02-03 2004-08-26 Toyota Central Res & Dev Lab Inc 酵素配列複合体及び固定化酵素配列複合体とそれらの製造方法、担体分子及び酵素
JP2005143444A (ja) 2003-11-19 2005-06-09 Lion Corp キメラ酵素及び洗浄剤組成物
ZA200701183B (en) * 2004-07-20 2008-05-28 Genentech Inc Inhibitors of angiopoietin-like 4 protein, combinations, an their use
GB0417494D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US20080063656A1 (en) 2004-08-09 2008-03-13 Emini Emilio A Adenoviral Vector Compositions
WO2006053871A2 (en) * 2004-11-16 2006-05-26 Crucell Holland B.V. Multivalent vaccines comprising recombinant viral vectors
EP1752533A1 (en) 2005-08-12 2007-02-14 Institut National de la Recherche Agronomique Fusion proteins between plant cell-wall degrading enzymes, and their uses
WO2007103048A2 (en) * 2006-03-01 2007-09-13 Regents Of The University Of Colorado Tlr agonist (flagellin)/cd40 agonist/antigen protein and dna conjugates and use thereof for inducing synergistic enhancement in immunity
KR20110036618A (ko) * 2008-07-16 2011-04-07 베일러 리서치 인스티튜트 극대화된 Ｇａｇ 및 Ｎｅｆ를 수지상 세포에 표적화시킴을 기본으로 하는 ＨＩＶ 백신

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