KR20110086734A

KR20110086734A - 헤파란 술페이트의 정제 방법 및 미용학적 및 피부학적 제제에서 그의 용도

Info

Publication number: KR20110086734A
Application number: KR1020117013681A
Authority: KR
Inventors: 암브로시 루이기 드
Original assignee: 라보라토리 데리바티 오르가니치 에스.피.아.
Priority date: 2008-11-20
Filing date: 2009-09-29
Publication date: 2011-07-29
Also published as: JP2017043638A; WO2010057710A3; NO2679278T3; WO2010057710A2; DK2679278T3; EP2346573A2; DK2346573T3; KR101669528B1; HUE035362T2; ES2507495T3; US20180028427A1; EP2679278B1; SI2346573T1; EP2346573B1; US20110288047A1; WO2010057710A9; PT2679278T; LT2679278T; EP2679278A1; JP6058588B2

Abstract

본 발명은 헤파란 술페이트를 포함하는 미용학적 및 피부학적 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 피부학적 및 미용학적으로 이용하기 위한 방법을 개시하고 있으며, 상기 방법은 하기의 단계을 포함한다: 헤파란 술페이트를 물에 용해, 음이온교환수지에 흡착, 헤파란 술페이트를 선택적으로 탈착시키는 조건을 이용하여 수지에서 탈착. 본 발명에 따른 미용학적 및 피부학적 조성물은 특히 항노화, 진정 및 미백 효과를 보여준다.

Description

헤파란 술페이트의 정제 방법 및 미용학적 및 피부학적 제제에서 그의 용도 {Process for the purification of heparan sulfate and use thereof in cosmetological and dermatological preparations}

본 발명은 헤파란 술페이트의 정제를 위한 새로운 방법에 대한 것이다. 또한, 본 발명은 헤파란 술페이트를 이용하는 미용학적 및 피부학적 제제에 관한 것이다.

헤파란은 돼지 장점막(pig intestinal mucosa)으로부터의 헤파린의 정제에 있어서 부산물을 구성하는 헤파린류(heparinoids)로부터 추출된다. 그들은 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycanes: GAGs)의 합성 동안에 형성되는 구조적 이형질체이며, 고도로 황산화 및 에피머화된 구조가 전형적인 헤파린이나, 고도로 에피머화는 되어 있으나 보다 적은 N- 및 O- 술페이트화된 구조는 낮은 항응고 활성(anticoagulant activity)을 보이는 전형적인 헤파린 유사 구조이다.

내재적인 프로테오글리칸(proteoglycans: PG)은 상처 치유에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다(V. Prathiba and S. Gupta: "Cutaneous wound healing: Significance of proteoglycans in scar formation". Current Science, vol. 78, no 6, 2000). 그러나, 상기 선행기술은 미용학적 및 피부학적 적용에 프로테오글리칸, 특히 헤파란 술페이트 투여의 효과에 대하여는 기술하고 있지 않다.

본 발명은 헤파란 술페이트를 포함하는 미용학적 및 피부학적 제제 및 미백용, 항주름, 진정제, 항산화제로서의 그들의 용도에 관한 것이다. 놀랍게도 헤파란 술페이트가 상기 상태의 치료에 효과적이라는 것이 발견되었다.

또 다른 구체예에서는, 본 발명은 미용학적 및 피부학적 분야에서 헤파란 술페이트를 이용하는 의료 기기에 관한 것이다.

또 다른 바람직한 구체예에서, 본 발명은, 피부학적 및 미용학적 적용에서 순수한 헤파란 술페이트를 이용할 수 있게 하는 헤파란 술페이트의 정제 방법에 관한 것이다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 미용학적 및 피부학적 제제는 정제된 헤파란 술페이트를 이용한다. 실제로, 헤파란과 함께 추출되나, 다른 성질을 갖는 잔류 화합물을 제거하기 위하여 헤파란 술페이트의 정제는 중요한 단계이다.

본 발명의 정제 방법은 다음 단계에 의해 특징지어진다: 물 중에 헤파란 술페이트를 녹임, 음이온교환수지에 흡착, 헤파란 술페이트를 선택적으로 탈착시키는 조건하에 상기 수지로부터 탈착.

상기 음이온교환수지는 바람직하게 예를 들면 Lewatit™ S 6328 A와 같은 강염기 매크로다공성 음이온교환수지이다. 상기 흡착은 충분한 양의 수지 비드를 혼합함으로써 수행된다. 바람직하게는 비드의 양은 헤파란 술페이트 g당 15 g 이상이고, 보다 바람직하게는 헤파란 술페이트 g당 18 내지 25 g의 수지이다.

상기 음이온교환수지에 흡착시킨 후, 헤파란 술페이트는 알칼리 또는 알카리 토금속 염, 바람직하게는 할로게나이드(halogenide) 또는 아세테이트를 사용함으로써 선택적으로 탈착된다. 적절한 염의 예는 마그네슘 디클로라이드, 마그네슘 디아세테이트, 소듐 클로라이드, 소듐 아세테이트, 포타슘 클로라이드 및 포타슘 아세테이트이다. 상기 염 용액의 pH는 바람직하게는 7.0 내지 10.0이다. 상기 염의 농도는 헤파란 술페이트가 완벽하고 선택적인 탈착(desorption)을 하는 데 있어 중요하다. 바람직한 농도의 범위는 0.3 M 내지 1.0 M이며, 보다 바람직하게는 0.5 M 내지 0.8 M이다. 사실, 상기 염의 농도가 너무 낮으면, 헤파란 술페이트의 탈착은 불완전하다. 농도가 너무 높게 되면, 탈착은 선택적이지 않으며, 헤파란 술페이트와 함께 고도로 황산화된 화합물 또한 탈착된다.

상기 음이온교환수지로부터 탈착한 후에, 헤파란 술페이트는 선택적으로 양이온 수지 및 음이온 수지를 추가로 통과하게 된다. 적절한 음이온 수지의 예는 Amberlite Forte IR 120™이다. 적절한 양이온 수지의 예는 Amberlite Forte IRA 410™이다.

본 발명의 정제된 헤파란 술페이트는 다양한 피부학적 및 미용학적 적용에 시험되었다. 보다 구체적으로, 헤파란 술페이트는 미백, 진정 및 항노화 효과에 대하여 시험되었다. 이러한 모든 적용에서, 헤파란 술페이트는 유의미한 활성을 보였다.

본 발명의 바람직한 구체예는 헤파란 술페이트를 포함하는 미용학적 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 본 발명의 미용학적 조성물은 헤파란 술페이트를 0.01 중량% 내지 5 중량%, 바람직하게는 0.05 중량% 내지 2 중량%, 훨씬 더 바람직하게는 0.1 중량% 내지 1 중량%를 포함한다.

본 발명의 상기 미용학적 및 피부학적 적용에 적합한 헤파란 술페이트의 분자량(Mw)은 바람직하게는 6,000 내지 12,000 Da이다.

본 발명의 미용학적 조성물은 선택적으로 미용학적 및 피부학적 조성물에 보편적으로 포함되는 보존제, 유화제, 안정화제, 습윤제, 항산화제와 같은, 다른 물질을 선택적으로 포함한다.

바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 항노화 제품으로서 사용된다. 많은 항노화 제품은 섬유아세포에 대한 세포 증식 및 단백질 합성의 증가 및 그와 연관된 세포의 견고함이나 두께의 개선을 유도한다고 주장한다.

섬유아세포는 진피(dermis)의 결합 조직에서 주요 세포 성분이며, 그들은 피부 두께 및 외관에 필수적 역할을 하는 진피의 중요 성분인, 콜라겐 및 엘라스틴을 다량 합성할 수 있다. 세포에서 단백질량의 증가는 콜라겐 및 엘라스틴을 합성하는 섬유아세포의 능력을 자극시킨다.

항노화 및 보호용 화장품(cosmetics)에 대한 또 다른 주장은 피부에서 산화적 스트레스 및 자유 라디칼 분비에 대항하는 그들의 활성이다. 산화적 스트레스는 노화 과정의 주요 원인 중 하나이며, 많은 심각한 인간 질병의 발병에 관여하고 있다. UVA 선, 오염물질(pollutants), 담배 연기에의 노출, 및 식이(diet), 약물 복용 또는 병적 상태(pathologies)는 상기 피부 세포에서 산화적 활성 수준을 증가시킬 수 있거나, 내재적인 항산화 시스템의 효능(effectiveness)을 감소시킬 수 있다. 산화적 스트레스 활성산소종(Reactive Oxygen Species: ROS) 형성에 노출된 후, 세포막 및 DNA에의 손상이 상기 세포내에서 일어날 수 있으며, 세포 형질변환(transformation) 및 심지어 사멸을 야기할 수 있다.

섬유아세포 증식 및 진피 세포에서 단백질 합성의 유도는 항노화 국소 산물(topical products)을 표적으로 하는 활동에 대하여 중요한 고려대상이다.

헤파란 술페이트를 포함하는 조성물은 항주름용 조성물 및 항산화용 조성물로서 효과적임이 밝혀졌다.

실험

유기 술페이트, 우론산(uronic acid), 글루코사민, 선광도(optical rotation), 전체 질소 및 APTT는 유럽 약전(European Pharmacopeia) 4판에 따라 측정되었다. 전기영동은 R. Cappelletti et al. "A new Electrophoretic method for the separation of all Gags" Anal. Biochem. 99: 311-315 (1979)에 따라 수행되었다.

분자량(Mw)은 크기배제크로마토그래피에 의해 결정되었다(European Pharmacopoeia 4th ed. : 2.2.30 and 2.2.46 for chromatography techniques and 01/2002:0828 p.1297 for method).

헤파란 술페이트의 정제

돼지 장점막에서 얻은 헤파란 술페이트 5 g을 미네랄이 제거된 물(demineralised water) 200 ㎖에 용해시켰다. Lewatit S 6238 A™ 90 g을 상기 용액에 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 72h 동안 서서히 교반한 후, 여과하였다. 여과물을 분석하였고, 헤파란 술페이트는 검출되지 않았다.

상기 수지를 세척하였고, 직경 3 cm, 길이 40 cm인 컬럼으로 옮긴 후, pH 8.5의 5 중량% MgCl₂ 용액으로 용출하였다.

최초 300 ㎖를 수집하였고, 상기 용액에서는 헤파란 술페이트가 검출되지 않았다(제4차 암모늄에 음성 반응).

상기 용액은 10 % 염산 용액을 이용하여 pH 6으로 만들었으며, 600㎖ 아세톤을 첨가하여 헤파란 술페이트를 침전시켰다. 현탁액은 15 ℃에서 12시간 동안 방치하였다. 그 후 고형물을 수집한 후, 50 ㎖의 물에 용해시키고, 100 ㎖ 아세톤을 첨가하여 침전시켰다.

그 후, 헤파란 술페이트를 100 ㎖ 물에 용해시키고, 상기 용액을 Amberlite Forte IR 120™ 수지에 통과시킨 후, Amberlite Forte IRA 410™ 수지에 통과시켰다. 상기 용출액을 pH 6이 될 때까지 5 중량% NaOH를 이용하여 중화시켰다. 물은 진공하에서 증발시켰고, 상기 고형물은 0.45 ㎛ 필터를 이용하여 여과하였고, 동결 건조하였다. 수득량: 4.12 g.

분석 : 회전도 = +50.62°. 유기 황 = 9.07 %. 우론산 = 31.97 %. 글루코사민 = 37 %. 전체 N = 2.26 %. APTT = 6.31 U/mg. Mw = 7538 Da(정제전 8729 Da).

미백 효능 평가 시험

세포 배양에서 원료 물질의 표백 활성의 인 비트로( in vitro ) 평가 - 시험 과정

HS의 인 비트로 미백 효과는 두가지 다른 농도: 0.1 mg/㎖ (0.01 %) 및 0.05 mg/㎖ (0.005 %) HS와 접촉 6일 뒤에, 멜라노마 세포 B16(섬유아세포-유사 세포는 멜라닌을 생산할 수 있다)에서 멜라닌 함량의 측정에 의하여 검출하였다.

음성 대조군(NC)은 무처리 세포(어떠한 물질도 없는 세포)에 의하여 표시되었다. 양성 대조군(PC)은 히드로퀴논 5 ㎍/㎖ (0.0005 %)으로 처리한 세포에 의하여 표시되었다. 얻어진 결과를 바탕으로, 헤파란 술페이트 나트륨 염(heparan sulphate sodium salt: HS)은 인 비트로에서 미백 효과를 보인다.

	멜라닌 함량 (㎍ 멜라닌/㎎ 단백질)	음성대조군에 대한 % 멜라닌 합성 억제
HS(0.01 %)	41.9	10.3
HS(0.005 %)	44.4	5.2
PC: 히드로퀴논(0.0005 %)	10.8	76.8
NC: 무처리 세포	46.8	---

인 비보( In vivo ) - 20명 자원자에 대한 미용학적 제제의 미백 효능 평가

시험 절차:

상기 시험은 단순 맹검 형태로 수행되었다. 존재하는 곳(손, 이마, 팔, 얼굴, 목)에 검버섯(aged spot)을 가진 20명의 자원자(나이 40-50세). 검버섯이 있는 영역(region)을 두 구역(zone)으로 나누었다: 시험된 물질을 처리하기 위한 한 부위, 위약(plcebo)을 처리하기 위한 한 부위. 상기 검버섯(spot)을 30일 연속적으로 처리하였다: 시험된 면적상의 다이(die on tested area)(150-200 cm²) 당 1회 적용(물질 1 ㎎) [colipa 가이드라인에 따름].

상기 시험 물질은 다음 조성의 에멀젼이었다.: 물(aqua), 에틸헥실 팔미테이트, 세테아릴 알콜, 0.9 % 헤파란 술페이트 나트륨 염, 카르보머, 아크릴레이트/c-10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머, 소듐 히드록시드, 페녹시에탄올, 프로필렌 글리콜, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 디소듐 EDTA.

위약은 다음 조성의 에멀젼이었다: 물, 에틸헥실 팔미테이트, 세테아릴 알콜, 카르보머, 아크릴레이트/c-10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머, 소듐 히드록시드, 페녹시에탄올, 프로필렌 글리콜, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 디소듐 EDTA.

상기 평가는 다음의 방식으로 진행되었다(MI - Mexameter MX 18에 의한 멜라닌 지표(Melanin Index)):

T₀ - 기저값, 물질 적용전의 멜라닌 지표 값

T₁₅ - 물질 적용 15일 뒤의 멜라닌 지표 값

T₃₀ - 최종값, (물질 적용 30일 후) 시험의 끝의 멜라닌 지표 값.

	T ₀ MI±std dev	T ₁₅ MI±std dev	T ₃₀ MI±std dev
HS 0.9 %	229.09 ± 44.06	222.00 ± 58.37	220.81 ± 54.25
위약	199.89 ± 55.89	205.84 ± 55.95	215.07 ± 75.45

적용 30일 후에, 위약을 처리한 MI에 비하여 시험 물질을 처리한 부위의 MI(멜라닌 지표)의 감소는 통계적으로 관련성(relevant))(p < 0.01)이 있었다. 이러한 이유로, 시험 물질(0.9 % 헤파란 술페이트 나트륨 염을 갖는 에멀젼)의 미백 효과는 확인되었다.

진정 효능 평가 시험

인 비트로 - 화장 원재료를 이용한 호염기 세포에 대한 탈과립화 시험 - 시험 절차

호염기 세포는 자극 물질과 접촉하는 경우, 염증 과정에 기여하는 히스타민, 루코트리엔스, 헥소사미니다제로서 단백질 분해 효소와 같은 물질의 (탈과립에 의한) 분비인, 생화학적 반응을 보인다.

호염기 세포 탈과립화의 억제는 물질의 진정(가려움 방지) 효과의 측도이다. HS의 인 비트로 진정 효과는 다음의 4가지 다른 농도의 HS를 접촉시킨 2시간 뒤에 β-헥소사미니다제의 분비를 측정함으로써 검출되었다 : 10 mg/㎖ (1 %), 5 mg/㎖ (0.5 %), 1 mg/㎖ (0.1 %), 0.2 mg/㎖ (0.02 %).

음성 대조군(NC)은 무처리 세포(어떠한 물질도 없는 세포)에 의하여 표시하였다. 양성 대조군(PC)은 호염기세포 탈과립화 자극(α-사슬에 대한 특이적인 폴리클로날 항체와 FcεRI 수용체를 교차결합하는 것은 탈과립화를 자극시킨다(by crosslinking the receptor FcεRI with a specific polyclonal antibody against to the α-chain stimulate the degranulation))으로 하였다. 최고 자극(탈과립화)은 세포를 1 % Triton X-100으로 처리하였을 때이다. 그 결과는 405 nm의 광학밀도(optical density: OD)로서 보고되었다.

	β- 헥소사미니다제 분비 450 nm OD
NC : 무처리 세포	0.054
PC : 호염기세포 탈과립화(basophil degranulation)	0.117
최대 자극	0.377
HS 10 ㎎/㎖	0.066
HS 5 ㎎/㎖	0.059
HS 1 ㎎/㎖	0.062
HS 0.2 ㎎/㎖	0.061
HS 10 ㎎/㎖ + PC	0.061
HS 5 ㎎/㎖ + PC	0.055
HS 1 ㎎/㎖ + PC	0.110
HS 0.2 ㎎/㎖ + PC	0.112

얻어진 결과를 바탕으로, 헤파란 술페이트 나트륨 염(HS)은 인 비트로에서 진정 효과를 보인다.

자극 물질과의 접촉이 없는 수준, 즉 β-헥소사미니다제의 “자연적(natural)” 수준은 0.054 (450 nm OD)이다. (다른 농도에서) HS 단독은 음성 대조군과 동일한 효과를 보이며, 이는 세포가 β-헥소사미니다제의“자연적”수준을 갖도록 한다는 것을 의미한다.

상기 세포가 자극물질(양성 대조군)과 접촉하는 경우, 그 값은 0.117에서 증가하거나, Triton X-100 (1 %)과 접촉시 0.377까지 더욱 높게 증가한다.

상기 세포가 자극물질 (양성 대조군) 및 HS 모두와 접하는 경우, β-헥소사미니다제의 수준은 용량 의존적으로 감소하며, HS가 0.5 % 및 1 %일 때 가장 좋은 효능을 갖으며, 이로 인해 HS는 진정(가려움 방지) 효과를 갖는다.

인 비보 - 20 자원자를 대상으로 미용학적 제제의 진정 효능 평가 - 단기 시험 - 시험 과정

상기 시험은 단순 맹검 형태로 수행되었다. 20명의 자원자(나이 36-52세) 각각의 등에 1 cm²의 그어진 처리된 구역(circumscribed treated zone)에 처리하였다: 시험 물질 적용을 위한 한 부위, 위약 처리를 위한 한 부위, 및 대조군(무처리 부위)을 위한 한 부위. 시험은 시험 면적(1 cm²)에 1회 (물질 2 mg) 적용에 의하여 수행하였다 [colipa 가이드라인에 따름]. 전체 시간 : 적용후 60분

시험된 물질은 다음 조성의 에멀젼이었다: 물, 에틸헥실 팔미테이트, 세테아릴 알콜, 0.9 % 헤파란 술페이트 나트륨 염, 카르보머, 아크릴레이트/c-10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머, 소듐 히드록시드, 페녹시에탄올, 프로필렌 글리콜, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 디소듐 EDTA.

일시적인 홍반성 반응(transient erythemagenic reaction)은 태양광 자극기(Solar Stimulator)에서 나오는 알려진 양의 UVB선에의 노출에 의하여 유발되었다. 상기 평가는 다음 방법으로 수행되었다(EI - Mexameter MX 18에 의한 홍반 지표(Erythema Index)) :

o T₀ - 기저값, UVB 조사 후 물질 적용전의 홍반 지표 값

o T₁₅ - 물질 적용 15분 뒤의 홍반 지표 값

o T₃₀ - 물질 적용 30분 뒤의 홍반 지표 값

o T₆₀ - 물질 적용 60분 뒤의 홍반 지표 값

	T ₀ EI±std dev	T ₁₅ EI±std dev	T ₃₀ EI±std dev	T ₆₀ EI±std dev
시험된 물질	455.75±64.63	439.55±82.67	421.59±72.31	406.39±77.06
위약	453.21±71.50	430.26±76.22	415.69±67.42	415.79±75.18

	T ₀ vs T ₁₅	T ₀ vs T ₃₀	T ₀ vs T ₆₀
시험된 물질	-4.19	-8.29	-11.24
위약	-5.36	-8.29	-8.58

적용 60분 뒤에, 위약을 처리한 EI에 비하여 시험 물질을 처리한 면적에서의 EI(홍반 지표)의 감소는 통계적으로 관련성이 있었고(p < 0.1), 기본값 대비 60분 후의 감소는 통계적으로 유의하다(p < 0.01)(The decrease of EI(Erythema Index) in the area treated with tested substance, versus EI treated with placebo, after 60 minutes from application, resulted statistically relevant(p<0.1), and is statistically relevant(p<0.01) the decrease after 60 minutes versus basal value). 따라서, 시험 물질(0.9 % 헤파란 술페이트 나트륨 염을 갖는 에멀젼)의 진정(홍반 감소) 효과는 확인되었다.

항주름 효능 평가 시험

인간 각질세포(keratinocytes) 배양물에 대한 UVA에 대한 항산화 및 보호 활성의 조사를 통한 화장품의 항노화 활성의 인 비트로 평가.

시험 절차

HS의 항산화 효과는, 하기 7가지의 다른 농도의 HS와 함께 1분 30초(1'30＂), 3분(3'), 4분 30초(4'30＂) 동안 3개의 다른 UVA에의 노출 후 활성 산소종(ROS)으로서 자유 라디칼의 감소를 측정함으로써 검출되었다: 0.031 mg/㎖ (0.0031 %), 0.063 mg/㎖ (0.0063 %), 0.125 mg/㎖ (0.0125 %), 0.250 mg/㎖ (0.0250 %), 0.500 mg/㎖ (0.0500 %), 1.000 mg/㎖ (0.1000 %) 및 9.000 mg/㎖ (0.9000 %). 음성 대조군(NC): 무처리 세포(어떠한 물질도 없는 세포). 양성 대조군(PC)은: 비타민 C(0.15 mg/㎖) (0.015 %).

표 6은 얻어진 결과를 보여준다. 헤파란 술페이트 나트륨 염은 인 비트로에서 항산화 효과를 보이는 것은 분명하다. 0.1 % 농도의 HS의 효능은 비타민 C의 효능에 비견되거나, 훨씬 더 높았다. HS의 효능은 UVA 선에의 지연된 노출(prolonged exposure)의 경우(4'30＂)에서는 비타민 C 보다 더 높았다.

	노출	헤파란 술페이트 나트륨 염 ㎎/㎖							비타민 C ㎎/㎖
	노출	9.000	1.000	0.500	0.250	0.125	0.063	0.031	0.15
ROS 억제 %	1'30＂UVA	30.7	38.7	30.6	28.0	23.5	25.4	25.3	33.5
	3'30＂UVA	31.6	35.7	29.1	22.9	14.2	21.8	20.1	31.4
	4'30＂UVA	26.3	30.4	24.7	18.1	10.3	13.7	6.2	12.7

인 비트로 - 원료 물질의 미토겐 활성( mitogenic activity ) 평가

시험 절차 :

HS의 미토겐 효과는 다음의 2가지 다른 농도의 HS를 사용하여, 48시간 및 72시간 동안 노출한 후, 섬유아세포 증식의 측정, 단백질 합성량의 측정에 의하여 검출되었다: 0.1 mg/㎖ (0.01 %) 및 0.05 mg/㎖ (0.005 %). 음성 대조군(NC)은 무처리 세포(어떠한 물질도 없는 세포)에 의하여 표시되었다. 양성 대조군(PC)은 EGF (epidermal growth factor) (10 ㎍/㎖) (0.001 %)이다.

	음성대조군에 대한 세포 증식 %
	48h	72h
PC : EGF(10 ㎍/㎖)(0.001 %)	112.5	121.6
HS 0.1 ㎎/㎖ (0.01 %)	110.5	118.1
HS 0.05 ㎎/㎖(0.005 %)	106.7	118.2

	음성대조군에 대한 단백질 합성 %
	48h	72h
PC : EGF(10 ㎍/㎖)(0.001 %)	116.6	119.0
HS 0.1 ㎎/㎖ (0.01 %)	103.1	113.2
HS 0.05 ㎎/㎖(0.005 %)	110.2	120.4

얻어진 결과를 바탕으로, 헤파린 술페이트 나트륨 염은 인 비트로에서 세포 증식 및 단백질 합성 효능을 보인다. 가장 높은 효과(세포 증식 18.2 % 및 단백질 합성 20.4 %)는 0.05 mg/㎖에 노출로부터, 72시간 경과 후 관찰되었다.

Claims

헤파란 술페이트를 포함하는 미용학적 및 피부학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 헤파란 술페이트는 0.01 중량% 내지 5 중량%, 바람직하게는 0.05 중량% 내지 2 중량%, 더욱 바람직하게는 0.1 중량% 내지 1 중량%를 포함하는 농도로 존재하는 것인 조성물.
제1항 및 제2항에 있어서, 하기 성분(ingredient) 중 하나 이상을 더 포함하는 것인 조성물: 보존제, 유화제, 안정화제, 습윤제, 항산화제 및 미용학적 및 피부학적 조성물에 포함되는 다른 구성성분(components).
항노화 조성물로서 제1항 내지 제3항의 조성물의 용도.
진정화제로서 제1항 내지 제3항의 조성물의 용도.
미백제로서 제1항 내지 제3항의 조성물의 용도.
하기의 단계를 포함하는 미용학적 적용을 위한 헤파란 술페이트의 정제 방법: 헤파란 술페이트를 물에 용해, 음이온교환수지에 흡착, 헤파란 술페이트를 선택적으로 탈착시키는 조건을 이용하여 수지에서 탈착.
제7항에 있어서, 상기 탈착은 알칼리 또는 알칼리 토금속 염을 이용하여 야기되는 것인 정제 방법.
제8항에 있어서, 상기 염은 마그네슘 디클로라이드, 마그네슘 디아세테이트, 소듐 클로라이드, 소듐 아세테이트, 포타슘 클로라이드 및 포타슘 아세테이트로 구성된 목록으로부터 선택되는 것인 정제 방법.
제7항 내지 제9항에 있어서, 상기 염 용액의 pH는 7.0 내지 10.0 사이인 정제 방법.
제7항 내지 제10항에 있어서, 상기 염의 농도는 0.3 M 내지 1.0 M인 것인 정제 방법.
제11항에 있어서, 상기 염의 농도는 0.5 M 내지 0.8 M인 것인 정제 방법.
미용학적 및 피부학적 분야에서 헤파란 술페이트를 이용하는 의료 기기.