KR20060033736A

KR20060033736A - 외용 조성물

Info

Publication number: KR20060033736A
Application number: KR1020057024773A
Authority: KR
Inventors: 미츠루 마에다; 마사히로 나카오; 하루카즈 후카미
Original assignee: 산또리 가부시키가이샤
Priority date: 2003-06-26
Filing date: 2004-06-25
Publication date: 2006-04-19
Also published as: HK1083074A1; WO2005000319A1; AU2004251549B2; EP1640025A1; JPWO2005000319A1; CA2531017A1; ATE491480T1; AU2004251549A1; US20070269454A1; CN100428939C; CN1812795A; DE602004030568D1; EP1640025A4; JP4881004B2; TW200503773A; EP1640025B1; TWI329024B; US7781409B2

Abstract

안정성이 우수하고, 생체 내에서 지속적으로 이용되고, 항산화 작용이 강하며, 피부 자극성이 적은 아스코르브산 유도체를 함유하고, 피부 침투성이 우수한 피부 외용 조성물을 제공하는 것을 과제로 한다.

식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르와 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 외용 조성물.

Description

외용 조성물{COMPOSITION FOR EXTERNAL USE}

본 발명은, 피부 외용제에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 햇볕에 탄 후의 색소 침착의 발생을 방지하는 등 피부에 대한 우수한 미백 효과를 갖는 화장품, 의약부외품 등의 피부 외용제에 관한 것이다.

의약품, 의약부외품 (예를 들어 연고제) 및 화장품 (예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 겔, 파운데이션) 등과 같은 피부 외용제에는, 이들에 소정의 약효를 부여하려는 목적에서 약효 성분이 첨가되어 있다.

예를 들어, 햇볕에 타거나 하여 생기는 피부의 흑화, 멜라닌 색소의 과잉 침착에 의해 생기는 기미, 주근깨 등의 현상을 방지하기 위해서, 카라민 등이나, L-아스코르브산류, 하이드로퀴논 배당체, 신나믹알데히드, 태반 엑기스 등의 미백 성분이 첨가되어 있다.

그 중에서도, 아스코르브산류는 안전성이 높고, 콜라겐 합성을 촉진하며, 활성산소를 소거하고, 텔로미어 유전자의 단축화를 억제하고, 피부 조직을 유도하는 매우 우수한 미백 인자로서, 의약품, 화장품, 식품, 사료 등에 폭넓게 이용되고 있다. 한편으로, 통상적인 L-아스코르브산의 유도체는 산화 분해되기 쉬워, 제제로 해도 불안정하기 때문에, 그 상태에서는 실용에 쓰일 수 없는 것이었다. 이 안정화를 목적으로, 알칼리 이온수 중에서의 아스코르브산 유도체 또는 그 염의 적어도 1 종을 함유하는 조성물 (특허문헌 1), L-아스코르브산 2-인산염 (특허문헌 2), α-글리코실-L-아스코르브산 (특허문헌 3, 특허문헌 4) 이 제안되어 있다. 그러나, 이들의 작용ㆍ효과가 반드시 만족할만한 것은 아니었다.

즉, 안정화가 확보되었다고 해도, 특히 이들 아스코르브산류 및 그 유도체의 염류만으로는 흡수성이 나쁘다는 과제가 있었다.

또한, 전기적 반발력에 의한 이온성 물질의 피부 심부(深部)로의 침투를 꾀한 이온토포레시스 (이온 도입기), 캐비테이션 억제형 소노포레시스 (초음파 도입기), IPL (스트로보 가시광선) 등에 의해 아스코르브산의 유도체를 피부에 침투시키기 쉽게 하는 방법이 채택되어 왔지만, 이를 위해서는 특수한 기기를 필요로 한다는 문제점이 있었다.

한편, 외용제 조성물 중에 함유시키는 경피 흡수 촉진제로는, 특허문헌 5 에 개시되어 있는 디메틸술폭사이드, 디메틸아세트아미드, 메틸데실술폭사이드 등 외에, 특허문헌 6 에 개시되어 있는 바와 같이, 저급 알킬아미드와 조합한 것 (예를 들어 디메틸아세트아미드와 에틸알코올, 이소프로필알코올, 이소프로필팔미테이트와 조합한 것) 이나, 특허문헌 7 과 같이 2-피롤리돈과 적당한 유성 물질, 예를 들어 직쇄 지방산과 탄소수가 2∼6 인 알코올과의 에스테르를 조합한 것이 알려져 있다. 그런데 이들 공지된 경피 흡수 촉진제는 모두 피부 자극성을 가지고 있어, 피부에 발적(發赤)이나 수종(水腫)을 발생시킬 우려가 있다.

특허문헌 1: 일본 공개특허공보 2000-351905호

특허문헌 2: 일본 공개특허공보 2000-143485호

특허문헌 3: 일본 공개특허공보 2002-53450호

특허문헌 4: 일본 공개특허공보 2002-121115호

특허문헌 5: 미국 특허 제3551554호 명세서

특허문헌 6: 미국 특허 제3472431호 명세서

특허문헌 7: 미국 특허 제4017641호 명세서

발명의 개시

발명이 해결하고자 하는 과제

본 발명은, 안정성이 우수하고, 생체 내에서 지속적으로 이용되고, 항산화 작용이 강하며, 피부 자극성이 적은 아스코르브산 유도체를 함유하고, 피부 침투성이 우수한 피부 외용 조성물을 제공하는 것을 과제로 한다.

과제를 해결하기 위한 수단

본 발명자들은, 상기 종래 기술의 과제에 관해서 여러 가지로 검토한 결과, 신규 화합물인 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산, 그 염 및 그 에스테르 (이하, 본 발명의 아스코르브산 유도체라고 약칭하기도 한다) 의 제조에 성공하여, 이들이 안정성이 우수하고, 생체 내에서 지속적으로 이용되고, 항산화 작용이 강하며, 피부 자극성이 적다는 것을 알아내었다. 또 본 발명자들은, 본 발명의 아스코르브산 유도체가 화장품 또는 의약부외품 등 피부 외용제로서 유용하다는 사실을 발견하였다. 그리고 본 발명자들은, 본 발명의 아스코르브산 유도체를 피부 외용제로서 사용하는 경우, 본 발명의 아스코르브산 유도체의 피부에 대한 침투성을 개선시키기 위해서 여러 가지로 검토한 결과, 본 발명의 아스코르브산 유도체와 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 조합하여 사용하면, 본 발명의 아스코르브산 유도체의 피부 침투성이 현저히 개선된다는 예상치못한 새로운 사실을 발견하였다. 즉, 누룩곰팡이 또는 그 처리물이 본 발명의 아스코르브산의 피부 침투성을 촉진한다는 사실을 알아내었다. 본래 피부는, 최외층인 약 0.01㎜ 의 각질층, 그 내측의 약 0.1㎜ 의 표피와 그 내측의 약 0.1∼1.3㎜ 의 진피로 이루어져, 아스코르브산 또는 아스코르브산 유도체를 피부에 적용해도 피부 조직으로의 침투 이행성이 반드시 좋지는 않다. 그러나, 본 발명의 아스코르브산 유도체와 누룩곰팡이 또는 그 처리물과의 조합을 피부 표면에 적용하면, 본 발명의 아스코르브산 유도체가 신속하게 진피층까지 흡수되고, 거기서 서서히 비타민 C 로 분해되어, 장기간에 걸쳐 비타민 C 를 방출하여 생체 내에서의 이용률이 높다. 또한, 본 발명자들은, 본 발명의 신규 화합물 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 활성을 연구한 결과, 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산과 비교하여 안정성이 향상되고, 또 생체 내에서 지속적으로 이용되는 등, 프로비타민 C 로서 매우 유용하다는 사실을 발견하였다.

즉, 본 발명은,

(1) 식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르와 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 외용 조성물:

[화학식 1]

(2) 화장품 또는 의약부외품인 것을 특징으로 하는 상기 (1) 에 기재된 조성물,

(3) 상기 (1) 에 기재된 식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이, 식물체로부터 추출되는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산인 것을 특징으로 상기 (1) 또는 (2) 에 기재된 조성물,

(4) 식물체가 가지과의 식물인 것을 특징으로 하는 상기 (3) 에 기재된 조성물,

(5) 식물체가 구기자, 구기자의 생과 (生果) 또는 건조 과실인 상기 (3) 또는 (4) 에 기재된 조성물,

(6) 누룩곰팡이가 아스페르길루스 (Aspergillus) 속에 속하는 균인 것을 특징으로 하는 상기 (1)∼(5) 중 어느 한 항에 기재된 조성물,

(7) 누룩곰팡이가 황누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae), 백누룩곰팡이 (Aspergillus kawachii) 또는 흑누룩곰팡이 (Aspergillus awamori) 에 속하는 균인 것을 특징으로 하는 상기 (1)∼(6) 중 어느 한 항에 기재된 조성물,

(8) 상기 (1) 에 기재된 식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르를 함유하는 조성물과 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 조성물과의 세트,

(9) 상기 (8) 에 기재된 세트용의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르를 함유하는 조성물, 및

(10) 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르 피부 침투 증강제,

에 관한 것이다.

발명의 효과

본 발명에 의해, 안정성이 우수하고, 생체 내에서 지속적으로 이용되고, 항산화 작용이 강하며, 피부 자극성이 적은 아스코르브산 유도체를 함유하고, 피부 침투성이 우수한 피부 외용 조성물을 제공할 수 있다.

도 1 은 자외선 B 파 (UVB) 조사로 인한 인간 피부 표피 유래의 각화 세포 (HaCaT) 의 세포사에 대한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 보호 효과를 나타낸다.

도 2 는 인간 피부 각화 세포에서의 세포내 아스코르브산 농도에 대한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 효과를 나타낸다.

도 3 은 인간 피부 진피 유래의 섬유아 세포 (NHDF) 의 콜라겐 합성에 관한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 촉진 효과를 나타낸다.

발명을 실시하기 위한 최선의 형태

본 발명에서 사용되는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 제조는, 식물 또는 그 처리물로부터 추출하는 방법이나 화학 합성 또는 효소법에 의한 제조 방법을 들 수 있다. 식물로부터 추출하는 방법은, 가지과 식물 또는 그 처리물 특히 구기자, 구기자의 생과 혹은 건조 과실로부터 추출함으로써 행해진다. 본 발명의 아스코르브산 유도체 및 그것을 함유하는 조성물의 바람직한 제조 방법을 하기에 예시한다.

본 발명의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 합성 중간체는 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산이다. 중간체인 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산은 아래와 같은 방법으로 합성할 수 있다. 즉, 시판되고 있는 5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산을 문헌 (J. Med. Chem., 31, 793, 1988) 에 개시된 기지의 방법으로 3 위(位)의 수산기를 선택적으로 벤질에테르화하여, 3-O-벤질-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산으로 한다. 이 3-O-벤질체를 아글리콘으로 하여 통상의 글루코실화 반응에 의해 β-배당체화하여, 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-3-O-벤질-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산을 얻을 수 있다. 예를 들어, (2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)탄산에스테르 (고바야시 아키라, 동경공업대학 박사논문, 1977년) 를 3-O-벤질체와 함께 비극성 용매 중에서, 또는 무용매 중에서 100∼200℃ 로 가열함으로써 얻을 수 있다. 탄산에스테르로는 알킬, 할로겐화된 알킬, 또는 치환될 수도 있는 아릴탄산에스테르로서 사용할 수 있다. 또는 (2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)할라이드를 사용하여, 클로로포름이나 염화메틸렌 등의 할로겐화 탄화수소의 용매나 벤젠, 톨루엔 등의 방향족 탄화수소의 용매 중에서 수은염이나 은염의 존재 하, 탈수제를 첨가하여 반응시킴으로써 얻을 수도 있다 (Lodd's Chemistry of Carbon Compounds IF, 320, 1967, Elsvier).

2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-3-O-벤질-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산의 이소프로필리덴기는 산 촉매로 가수분해하여, 제거할 수 있다. 예를 들어, 30%∼80% 의 아세트산 수용액 중, 40∼100℃ 로 가열한다. 또는 아세톤이나 메틸에틸케톤 중에서 p-톨루엔술폰산의 존재 하, 실온에서부터 환류 온도로 가열한다. 또는 거기에 물을 첨가하여 동일하게 반응시킨다.

2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-3-O-벤질아스코르브산의 벤질기는 통상적인 수소화 분해에 의해 제거할 수 있다. 예를 들어, 아세트산이나 알코올 등의 프로톤성 극성 용매 중에서, 또는 벤젠, 톨루엔, 아세트산에틸 등의 비극성 용매 중에서, 팔라듐탄소나 팔라듐흑(黑), 또는 플라티나탄소나 플라티나흑(黑) 등을 촉매로 하여 수소의 존재 하에서 탈벤질화할 수 있다.

이들 탈보호기 반응의 공정을 반대 순서로 실시해도 된다. 즉, 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-3-O-벤질-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산의 탈벤질화 반응 후, 얻어진 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산을 산 촉매로 탈이소프로필리덴화해도 된다.

이상과 같이 하여, 표기 중간체인 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 얻을 수 있다.

상기 중간체를 사용하여 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 화학 합성하는 방법에 관하여 기재한다.

2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 아실기를 알칼리 가수분해함으로써, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 얻을 수 있다. 알칼리로는, 가성소다, 가성칼리 등의 수용액, 또는 탄산칼리, 탄산소다, 중탄산칼리, 중탄산소다 등과 같은 탄산염의 수용액, 나트륨메틸레이트 등의 금속 알코올레이트를 사용할 수 있다. 이들 용액에, 원료인 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 용해시키기 위해서, 메탄올, 에탄올 등의 알코올류의 혼합액을 사용해도 된다. 반응 온도는 0℃∼실온이 최적이다. 반응액을 염산, 황산 또는 양이온 교환 수지 등으로 중화한다. 염산이나 황산의 경우에는 생긴 염을 제거할 필요가 있지만 양이온 교환 수지의 경우에는 나트륨이나 칼륨 근(根)을 흡착하기 위한 탈염 조작을 필요로 하지 않는다. 중화된 반응액을 동결 건조 또는 감압 농축함으로써, 목적 화합물을 얻을 수 있다. 또한, 목적에 따라서, 칼럼 크로마토그램에 의해 정제할 수도 있다.

구기자로부터 추출함으로써 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 함유 추출물을 제조하는 방법에 관하여 기재한다.

구기자의 생과 또는 건조 과실 (구기자) 을 직접 또는 분쇄한 상태로, 뜨거운 물 또는 함수에탄올에 침지하고, 고액(固液) 분리에 의해 얻은 추출액을 감압 농축 또는 동결 건조, 또는 분무 건조시킴으로써 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 함유하는 추출물을 얻을 수 있다. 이 침지시의 알코올 농도는 10% 내지 95%, 침지 일수는 3 내지 7 일이 바람직하다. 구기자 추출물 중의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 함량은 0.86 내지 1.2% 이지만, 이하에 서술하는 방법에 의해 더욱 함량을 높인 조성물을 얻을 수 있다. 즉, 구기자 추출물을 증류수에 녹이거나, 원료에 대하여 5-50배량, 바람직하게는 8-10배량으로 침지한 용액을 증류수로 희석한 후, 다우케미칼사 제조의 상품명 Dowex 1-X8, 롬 & 하스사 제조의 상품명 Amberlite IRA-400 등과 같은 강염기성 음이온 교환 수지에 통과시켜, 그 물질을 흡착시킨다. 충분한 물 세정 후, 아세트산을 사용한 단계 용출 또는 농도 구배 용출에 의해 그 물질을 함유하는 획분을 얻는다. 그 획분을 감압 농축 또는 동결 건조 처리에 의해 아세트산을 제거함으로써, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 함량이 약 30-50% 인 조성물이 얻어진다.

효소법에 의해서 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 함유 조성물을 제조하는 방법에 대해 설명한다.

시판되는 효소제에 관한 생성을 예의 검토한 결과, 셀룰라아제 「오노즈카」, 판셀라아제 BR (야쿠르트약품공업), 셀로신 (한큐공영물산), 셀룰라아제 (시그마), β 글루코시다아제 (토요보), β 글루코시다아제 (나카라이테스크) 효소제가 β 글루코실 전이 활성을 가짐을 발견하였다. 본 발명에 사용되는 당전이 효소는, β 글루코실기를 함유하는 화합물과 아스코르브산을 함유하는 용액에 작용시켜, 당전이 반응에 의해 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 합성하는 것이 면 되고, 기원이나 종류는 한정되지 않지만, 수율 면에서 Trichoderma 속 유래의 셀룰라아제제(劑), 아몬드 유래의 β 글루코시다아제제가 바람직하다.

전이 효소 반응에 관해서는, 셀로비오스 및 아스코르브산 농도는 가능한 한 높은 쪽이 바람직하며, 0.3M 및 0.2M 정도가 바람직하다. 효소의 기질이 되는 셀로비오스는 다른 β 글루코실기를 함유하는 화합물, 예를 들어 셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 등의 고분자 글루칸으로부터도 적당한 가수분해 효소와 조합함으로써 사용할 수 있다. 또한 각 효소를 고정화하여 효소 리액터로 하면 효율적으로 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 생산이 가능하다. 한편, 전이 반응의 수용체가 되는 아스코르브산은, 반응 중의 안정성, 전이 수율의 면에서 유리된 아스코르브산이 바람직하지만, 아스코르브산의 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염 등의 아스코르브산염, 또는, 이들의 혼합물로도 생산이 가능하다. 또한 이소아스코르브산 프리체 및 이소아스코르브산염도 역시 전이 반응의 수용체가 된다는 것을 발견하였다. 따라서, 당(糖)전이 반응에 사용되는 아스코르브산 및 아스코르브산 유도체는 목적에 따라서 사용할 수 있지만, 통상, 유리 아스코르브산뿐만 아니라, 필요에 따라서 아스코르브산나트륨, 아스코르브산칼슘 등이 적절히 사용된다.

효소 반응은 pH2∼8 의 범위에서 진행되지만, 효소의 최적 pH 를 감안하여 pH4∼6 으로 유지시키는 것이 바람직하다. 또한 반응 온도로는 20∼60℃ 에서 진행되지만, 효소의 안정성 및 최적 온도를 감안하여 30∼40℃ 정도로 유지시키는 것이 바람직하다. 또한 효소 첨가량은, 셀로비오스 1g 당 20∼400 단위 (1 단 위는, 1 분간에 1μ㏖ 의 p-니트로페놀을 유리하는 효소력가를 나타낸다) 로 하는 것이 바람직하다. 효소는, 한번에 첨가해도 되고, 고속 액체 크로마토그래피 등에 의해 반응을 모니터하면서, 수 회로 나눠서 첨가할 수도 있다. 또한 적당한 수지 담체, 예를 들어 이온 교환 수지, 소수(疏水) 수지 등에 효소를 고정화하여 효소 리액터로 하여 반응시킬 수도 있다. 반응 시간은 1∼4 일간 정도로 충분하지만, 반응을 모니터하면서 반응 종료 시점을 결정할 수도 있다.

반응 종료 후 생성되는 아스코르브산 유도체는, 막분리, 이온 교환 칼럼 크로마토그래피, 활성탄 칼럼 크로마토그래피 등, 통상적인 분리 수단에 의해 분리할 수 있다. 예를 들어, 강산성 양이온 교환 수지는 술폰산기가 결합된 스티렌-디비닐벤젠 가교 공중합체 수지의 알칼리 금속염형, 알칼리 토금속염형, 또는 H＋ 형 등을 적절히 사용할 수 있다. 시판품으로는, 다우케미칼사 제조의 상품명 다우엑스 50W×8, 롬 & 하스사 제조의 상품명 앰버라이트 CG-120, 미쓰비시화학사 제조의 상품명 다이아이온 SK104 등이 있다. 이 때에, 분리되는 미반응 아스코르브산과 β 글루코실기를 함유하는 화합물을, 다시 효소 반응의 원료로서 이용할 수도 있다.

또, 고순도품을 얻기 위해, 고속 액체 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다. 즉, 당ㆍ유기산 분석용 칼럼과 아세트산, 트리플루오로아세트산 등 휘발성산과의 조합, 또는 ODS 칼럼과 승화성 포름산암모늄, 산성 물질 분석용의 휘발성 이온 페어 시약, 디-n-부틸아민 아세테이트와의 조합에 의해 순수한 고순도품을 얻을 수 있다. 천연물의 고순도품이라는 동정은, 화학적인 합성에 의한 2-O-(β- D-글루코피라노실)아스코르브산의 질량 분석이나 핵자기 공명 스펙트럼과의 비교 해석에 의해 이루어졌다.

본 발명의 아스코르브산 유도체에는, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산인 유리산(遊離酸)뿐만 아니라, 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르를 함유한다. 염으로는, 구체적으로는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 등을 들 수 있고, 에스테르로는, 예를 들어 아세트산에스테르, 프로피온산에스테르 등을 들 수 있다. 염 또는 에스테르는, 각각 유리산에 염기 (예를 들어 수산화나트륨, 수산화칼륨) 를 반응시키는 방법 또는 아실화 반응에 의해 실시되고, 이들은 모두 당업자에게 주지되어 있는 반응이다.

다음으로 본 발명의 아스코르브산 유도체의 생리 활성에 관하여 설명한다.

2-O-(β-D- 글루코피라노실 )아스코르브산에 의한, 자외선 조사로 인한 장해의 억제

상기 방법에 따라서 얻어지거나, 또는 화학적인 합성에 의해 얻어진 순수한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산은 자외선 B 파 (UVB) 조사로 인한 인간 피부 표피 유래의 각화 세포 (HaCaT) 의 세포사를 아스코르브산이나 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산에 비교하여, 동일 농도에 있어서 분명히 강하게 억제하였다.

무모(無毛) 마우스의 피부 일부에 태양광의 파장 스펙트럼에 가까운 빛 (290∼400㎚) 을 조사한 경우, 마우스 피부에 함유된 각종 항산화 인자 중 아스코르브산 (비타민 C) 이 가장 급감한다는 사실이 알려져 있다 (Photodermatol Photoimmunol Photomed., 10(5), 183, 1994). 또한, 모르모트 등부를 털을 깎은 후, UVB 조사에 의한 피부 염증의 야기가 아스코르브산이나 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산의 외용 도포에 의해 억제되고, 그 효과는 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산쪽이 높다 (프레그런스 저널, 25권, 3월호, 55페이지, 1997년). 또, 10% 아스코르브산 수용액을 돼지 피부에 3일 내지 1주 동안 연일 전(前)투여함으로써, 자외선 장해를 경감시킬 수 있다는 것도 보고되어 있다 (Br. J. Dermatol., 121, 247, 1992).

따라서, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산은 자외선 조사에 의한 피부 염증이나 그 밖의 자외선 장해를 억제하는 데에 있어서, 아스코르브산이나 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산보다도 효과가 높다는 것이 강하게 시사된다.

또한, 인간 피부 각화 세포에서의 세포내 아스코르브산 농도에 관해서도 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이 가장 오래, 또한 고농도로 유지된다. 이러한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산에 의한 세포내 아스코르브산의 고농도 유지가 UVB 조사에 의한 세포의 보호에 작용하고 있다. 또한, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이 세포내에서 물론, 아스코르브산으로 변환되는 프로비타민 C 로서 기능하고 있다는 것이 명백하다.

2-O-(β-D- 글루코피라노실 )아스코르브산에 의한, 주름ㆍ처짐의 예방

인간 피부 진피 유래의 섬유아 세포 (NHDF) 의 콜라겐 합성에 관해서도, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산은 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산이나 아스코르브산에 비교하여 활성이 높다. 이것도, 세포내 아스코르브산의 농 도가 지속적으로 높게 유지되어 있기 때문인 것으로 생각된다. 즉, 아스코르브산의 콜라겐 합성 촉진 작용은 피부 유래의 섬유아 세포에서도 일어나고 있어, 피부의 재생이나 재구축에 작용하고 있는 것으로 생각된다. 실제로, 열상(熱傷) 환자에게 안정형 아스코르브산의 하나인 아스코르브산2-인산을 도포함으로써, 반흔(瘢痕)없이 치유한 사실이 보고되어 있다 (일본 향장품학회 강연 요지 50페이지, 1998년). 한편, 아스코르브산이 콜라겐을 분해하는 효소나 피부의 탄성에 필요한 엘라스틴을 분해하는 효소를 억제하는 것도 알려져 있다 (바이오 항산화제 프로비타민 C, 63페이지, 1999년, 프레그런스 저널사). 이들 사실은 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이 주름이나 처짐을 예방하는 효과가 있다는 것을 나타내고 있다.

2-O-(β-D- 글루코피라노실 )아스코르브산의 활성에 의한, 미백 효과

또, 아스코르브산이 티로시나아제를 저해하여 멜라닌 합성을 억제하는 점이나 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산을 배합한 크림을 인간에게 도포하였을 때, 자외선 조사로 인한 색소 침착을 억제하는 점 (프레그런스 저널, 25권, 3월호, 55페이지, 1997년) 으로부터, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산도 동일하게, 게다가 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산보다도 강한 미백 효과가 있음이 강하게 시사된다.

2-O-(β-D- 글루코피라노실 )아스코르브산의 경구 섭취시의 동태

또, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 래트에 경구 섭취시킨 경우, 혈중에 미변화체인 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이 검출되고, 장관으로 부터 미변화체로서 흡수됨을 나타내고 있다. 한편, 전술한 바와 같이 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산은 래트에 경구 섭취시킨 경우, 혈중에서는 미변화체로서 검출되지 않고, 흡수시, 장관(腸管)에서 거의 분해되어, 아스코르브산으로서 혈중에 존재한다 (J. Pharmacobio-Dyn., 13, 688, 1990). 즉, 경구 섭취한 경우, 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산은 아스코르브산으로서 흡수되어, 혈중에서 빠르게 분해될 가능성이 있다. 한편, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산은 혈중에 미변화체로서도 존재하고, 미변화체 상태 그대로 조직으로 이행하여, 조직 또는 세포내에서 아스코르브산으로 활성화될 가능성이 높다.

이상의 실험 결과 및 관련 지견(知見)으로부터, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 및 그것을 함유하는 조성물은 우수한 프로비타민 C 로서, 피부의 보호나 건강한 피부의 유지에 유용하다는 점이 명백하여, 피부 화장료나 피부 보호제로서 사용할 수 있고, 또한 식품으로서, 아스코르브산을 효율적으로 체내 및 조직으로 이행시키는 프로비타민 C 로서 사용할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 누룩곰팡이는, 아스페르길루스 (Aspergillus) 속에 속하는 균이면 되고, 이러한 균으로는, 예를 들어 황누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae), 백누룩곰팡이 (Aspergillus kawachii) 또는 흑누룩곰팡이 (Aspergillus awamori) 에 속하는 균, 그들에 속하는 균주 및 그들의 변이주 등을 들 수 있다. 누룩곰팡이는 생균이어도 되고, 사균이어도 상관없지만, 생균이 바람직하다. 누룩곰팡이는, 효소가 실활(失活)되어 있지 않는 한 어떠한 것도 좋다. 누룩곰팡이는, 누룩곰팡이 자체로도 좋지만, 그것을 영양 번식시킨 누룩곰팡이를 함유하는 배양액이어도 되고, 누룩곰팡이의 강한 전분 당화력(糖化力)을 이용하여 제작된 누룩이어도 된다. 그와 같은 누룩으로 일본술 양조에 사용되는 누룩도 좋다. 누룩곰팡이의 처리물은, 누룩곰팡이에 함유되는 효소가 실활되어 있지 않는 한 어떠한 처리물도 상관없다. 누룩곰팡이의 처리물은, 예를 들어 누룩곰팡이의 건조물이어도 된다. 건조는, 분무 건조나 동결 건조나 상관없다. 누룩곰팡이의 액체 배양액을 원심 분리하고, 그 분리 상청을 동결 건조시켜, 물을 첨가한 것도 본 발명에서 사용되는 누룩곰팡이의 처리물이다. 그리고 또한, 누룩곰팡이의 처리물은 누룩곰팡이의 추출물이어도 된다. 추출물은, 균체를 예를 들어 침지, 분쇄 등의 자체 공지된 수단을 사용하여 처리한 균체의 추출물이어도 된다. 누룩곰팡이의 균체를 에탄올 침지 멸균 후, 원심 분리하여 얻은 침전부에, 밀리 Q 초순수(超純水)를 5배량 첨가하여 분쇄·추출하고, 추출액을 농축하는 것에 의해서도 누룩곰팡이의 추출물이 얻어진다. 상기 누룩곰팡이 또는 그 처리물은, 시판품이어도 되고, 이러한 시판품으로는, 예를 들어 황누룩 (Aspergillus oryzae) 유래의 효소 제제 (아마노엔자임사 제조, 상품명 비오자임 A), 또는 (주)비오크 제조의 쌀누룩용 누룩곰팡이 건조 분말 등을 들 수 있다.

본 발명의 조성물에 관하여 설명한다. 화장품 또는 의약부외품으로서 유용한 본 발명의 외용 조성물은, 피부에 적용되는 경우에는, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르 (이하, (가) 성분으로 약칭하는 경우도 있다) 와 누룩곰팡이 또는 그 처리물 (이하, (나) 성분으로 약칭하는 경우도 있다) 을 함유한다. 그러나, 상기 (가) 성분과 (나) 성분을 혼합 한 상태로 장기간 보존하면, (가) 성분의 분해 반응이 진행되는 경우도 있기 때문에, (가) 성분을 함유하는 조성물과 (나) 성분을 함유하는 조성물을 분리시킨 상태로 보존하고, 피부에 적용할 때 양 조성물을 피부 표면에 도포해도 된다. 따라서, 본 발명은, (가) 성분과 (나) 성분을 함께 함유하는 조성물뿐만 아니라, (가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물의 세트 또는 조합도 포함한다. 또한, 본 발명은, (가) 성분의 피부 침투 촉진을 위한 (나) 성분 함유 조성물의 용도도 포함한다. 사용시에 있어서 본 발명의 제제는, (가) 성분과 (나) 성분을 함유하는 제제여도 되고, (나) 성분 함유 조성물에 (가) 성분 또는 그것을 함유하는 조성물을 배합함으로써 제작되는 제제여도 된다. 본 발명의 제제, 즉, (가) 성분과 (나) 성분을 함유하는 제제, 또는 (가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물의 세트 또는 (가) 성분 함유 조성물은, 통상적으로는 외용 조성물로서, 화장품이거나, 의약부외품이거나, 의약품일 수도 있다. 화장품으로는, 예를 들어, 화장수, 유액, 미용액 등의 기초 화장품, 파운데이션 등의 메이크업 화장품, 두발 화장품, 청정용 화장품, 입술 화장품, 구강 화장품, 손톱 화장품, 아이라이너 화장품, 입욕용 화장품, 자외선 차단 화장품 등을 들 수 있다. 의약품 또는 의약부외품으로는, 예를 들어, 드라이아이용 점안제 외에, 약용 화장품, 육모제 등을 들 수 있다.

본 발명의 바람직한 양태에 관하여 설명한다.

본 발명의 조성물, 즉 (가) 성분과 (나) 성분을 함유하는 조성물 또는 (가) 성분을 함유하는 조성물과 (나) 성분을 함유하는 조성물을 사용시에 혼합함으로써 얻어지는 조성물 중의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 함유량은, 특별히 한정되지 않고 광범위하게 사용할 수 있지만, 조성물의 전체 중량에 대하여 통상 0.1∼30중량%, 바람직하게는 0.5∼10중량% 이다. 조성물 중의 누룩곰팡이 또는 그 처리물은 일률적으로 말할 수는 없지만, 통상 약 0.2∼100중량% 이다.

본 발명의 (가) 성분 함유 조성물에는, (가) 성분 이외에, 통상 화장료에 배합되는 각종 색제, 유성 성분, 불소 화합물, 수지, 점도 조정제, 방부 살균제, 향료, 기타 보습제, 염류, 알코올류, 산화 방지제, 완충제, 중화제, pH 조정제, 곤충 기피제 등의 성분을 사용할 수 있다.

색제의 예로는, 통상적인 화장료에 사용되는 것이면, 그 형상 (구형, 막대형, 침형, 판형, 부정형, 인편형, 방추형 등) 이나 입자직경 (연무형상, 미립자, 안료급 등), 입자 구조 (다공질, 무공질 등) 를 막론하고 모두 사용할 수 있고, 예를 들어 무기 분체, 유기 분체, 계면활성제 금속염 분체, 유색 안료, 펄 안료, 금속 분말 안료, 천연 색소 등을 들 수 있으며, 구체적으로는, 무기 분체로는, 안료급 산화티탄, 산화지르코늄, 안료급 산화아연, 산화세륨, 산화마그네슘, 황산바륨, 황산칼슘, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 활석, 운모, 카올린, 견운모, 백운모, 합성 운모, 금운모, 홍운모, 흑운모, 리티아운모, 규산, 무수 규산, 규산알루미늄, 규산마그네슘, 규산알루미늄마그네슘, 규산칼슘, 규산바륨, 규산스트론튬, 텅스텐산금속염, 히드록시아파타이트, 버미큘레이트, 하이디라이트, 벤토나이트, 몬모릴로나이트 또는, 헥토라이트, 제올라이트, 세라믹스 파우더, 제2인산칼슘, 알루미나, 수산화알루미늄, 질화붕소, 질화보론, 실리카, 미립자 산화티탄, 미 립자 산화아연, 미립자 산화세륨 등; 유기 분체로는, 폴리아미드 파우더, 폴리에스테르 파우더, 폴리에틸렌 파우더, 폴리프로필렌 파우더, 폴리스티렌 파우더, 폴리우레탄 파우더, 벤조구아나민 파우더, 폴리메틸벤조구아나민 파우더, 폴리테트라플루오로에틸렌 파우더, 폴리메틸메타크릴레이트 파우더, 셀룰로오스, 실크 파우더, 나일론 파우더, 12나일론, 6나일론, 실리콘 파우더, 실리콘 고무 파우더, 실리콘 엘라스토머 구형 분체, 스티렌·아크릴산 공중합체, 디비닐벤젠·스티렌 공중합체, 비닐 수지, 우레아 수지, 페놀 수지, 불소 수지, 규소 수지, 아크릴 수지, 멜라민 수지, 에폭시 수지, 폴리카보네이트 수지, 미세결정 섬유 분체, 전분 파우더, 라우로일리신 등; 계면활성제 금속염 분체 (금속 비누) 로는, 스테아르산아연, 스테아르산알루미늄, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 미리스트산아연, 미리스트산마그네슘, 세틸인산아연, 세틸인산칼슘, 세틸인산아연나트륨 등; 유색 안료로는, 산화철, 수산화철, 티탄산철의 무기 적색 안료, γ-산화철 등의 무기 갈색계 안료, 황산화철, 황토 등의 무기 황색계 안료, 흑산화철, 카본 블랙 등의 무기 흑색 안료, 망간바이올렛, 코발트바이올렛 등의 무기 자색 안료, 수산화크롬, 산화크롬, 산화코발트, 티탄산코발트 등의 무기 녹색 안료, 감청, 군청 등의 무기 청색계 안료, 타르계 색소를 레이크화한 것, 천연 색소를 레이크화한 것, 및 이들의 분체를 복합화한 합성 수지 분체 등; 펄 안료로는, 산화티탄 피복 운모, 산화티탄 피복 마이카, 옥시염화비스무트, 산화티탄 피복 옥시염화비스무트, 산화티탄피복활석, 생선비늘박, 산화티탄 피복 착색 운모 등; 타르 색소로는, 적색3호, 적색104호, 적색106호, 적색201호, 적색202호, 적색204호, 적색205호, 적색220호, 적색226호, 적색 227호, 적색228호, 적색230호, 적색401호, 적색505호, 황색4호, 황색5호, 황색202호, 황색203호, 황색204호, 황색401호, 청색1호, 청색2호, 청색201호, 청색404호, 녹색3호, 녹색201호, 녹색204호, 녹색205호, 등색(橙色)201호, 등색203호, 등색204호, 등색206호, 등색207호 등; 천연 색소로는, 카민산, 락카인산, 칼사민, 브라질린, 크로신 등에서 선택되는 분체이고, 이들 분체도 상기와 마찬가지로 본 발명의 효과를 방해하지 않는 범위에서, 분체의 복합화나 일반 유제, 실리콘유, 불소 화합물, 계면활성제 등으로 처리한 것도 사용할 수 있다. 예를 들어, 불소 화합물 처리, 실리콘 수지 처리, 팬던트 처리, 실란 커플링제 처리, 티탄 커플링제 처리, 유제 처리, N-아실화리신 처리, 폴리아크릴산 처리, 금속 비누 처리, 아미노산 처리, 무기 화합물 처리, 플라즈마 처리, 메카노케미컬 (mechanochemical) 처리 등에 의해 사전에 표면 처리되어 있거나 또는 처리되어 있지 않아도 상관없고, 필요에 따라서 1 종, 또는 2 종 이상의 표면 처리를 병용할 수 있다. 본 발명에서는 이들 분체의 1 종 이상을 조합하여 사용할 수 있다.

유성 성분의 예로는, 예를 들어 아보카도유, 아마인유, 아몬드유, 쥐똥나무벌레 분비물, 들깨유, 올리브유, 카카오지, 카포크 왁스, 비자나무유, 카르나우바 왁스, 간유, 칸데릴라 왁스, 우지, 우각지, 우골지, 경화 우지, 살구씨유, 경랍, 경화유, 소맥배아유, 참기름, 쌀배아유, 쌀겨유, 사탕수수랍, 산다화유, 해바라기유, 시어버터, 시나기리유, 시나몬유, 조조바랍, 쉘락랍, 터틀유 (Turtle oil), 대두유, 차실유, 동백유, 달맞이꽃유, 옥수수유, 돈지, 유채씨유, 일본동백유, 쌀겨랍, 배아유, 마지, 살구씨유, 팜유, 팜핵유, 피마자유, 경화피마자유, 피마자유 지 방산 메틸에스테르, 해바라기유, 포도유, 월계수열매랍, 호호바유, 마카데미아넛유, 밀랍, 밍크유, 면실유, 면랍(綿蠟), 목랍, 목랍핵유, 몬탄랍, 야자유, 경화야자유, 트리야자유 지방산 글리세리드, 양지, 낙화생유, 라놀린, 액상 라놀린, 환원 라놀린, 라놀린 알코올, 경질 라놀린, 아세트산라놀린, 라놀린 지방산 이소프로필, 라우르산헥실, POE 라놀린알코올에테르, POE 라놀린알코올아세테이트, 라놀린 지방산 폴리에틸렌글리콜, POE 수소첨가 라놀린알코올에테르, 난황유 등; 탄화수소유로서, 오조케라이트, 스쿠알란, 스쿠알렌, 세레신, 파라핀, 파라핀왁스, 유동파라핀, 프리스탄 (pristane), 폴리이소부틸렌, 마이크로크리스탈린 왁스, 바세린 등; 고급 지방산으로는, 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 베헨산, 운데실렌산, 올레산, 리놀레산, 리놀렌산, 아라키돈산, 에이코사펜타엔산 (EPA), 도코사헥사에노산 (DHA), 이소스테아르산, 12-히드록시스테아르산 등; 고급 알코올로는, 라우릴알코올, 미리스틸알코올, 팔미틸알코올, 스테아릴알코올, 베헤닐알코올, 헥사데실알코올, 올레일알코올, 이소스테아릴알코올, 헥실도데칸올, 옥틸도데칸올, 세토스테아릴알코올, 2-데실테트라데시놀, 콜레스테롤, 피토스테롤, POE 콜레스테롤에테르, 모노스테아릴글리세린에테르 (버틸알코올), 모노올레일글리세릴에테르 (세라킬알코올) 등; 에스테르유로는, 아디프산디이소부틸, 아디프산2-헥실데실, 아디프산디-2-헵틸운데실, 모노이소스테아르산 N-알킬글리콜, 이소스테아르산이소세틸, 트리이소스테아르산트리메틸올프로판, 디-2-에틸헥산산에틸렌글리콜, 2-에틸헥산산세틸, 트리-2-에틸헥산산트리메틸올프로판, 테트라-2-에틸헥산산펜타에리트리톨, 옥탄산세틸, 옥틸도데실검에스테르, 올레산올레일, 올레산옥틸도데실, 올레산데실, 디카프르산네오펜틸글리콜, 시트르산트리에틸, 숙신산2-에틸헥실, 아세트산아밀, 아세트산에틸, 아세트산부틸, 스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 세바스산디이소프로필, 세바스산디-2-에틸헥실, 락트산세틸, 락트산미리스틸, 팔미트산이소프로필, 팔미트산2-에틸헥실, 팔미트산2-헥실데실, 팔미트산2-헵틸운데실, 12-히드록시스테아릴산콜레스테릴, 디펜타에리트리톨 지방산 에스테르, 미리스트산이소프로필, 미리스트산옥틸도데실, 미리스트산2-헥실데실, 미리스트산미리스틸, 디메틸옥탄산헥실데실, 라우르산에틸, 라우르산헥실, N-라우로일-L-글루타민산-2-옥틸도데실에스테르, 말산디이소스테아릴 등; 글리세리드유로는, 아세트글리세릴, 트리이소옥탄산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 트리이소팔미트산글리세릴, 모노스테아르산글리세릴, 디-2-헵틸운데칸산글리세릴, 트리미리스트산글리세릴, 미리스트산이소스테아르산디글리세릴 등을 들 수 있다.

방부제로는, 파라옥시벤조산알킬에스테르, 벤조산, 벤조산나트륨, 소르브산, 소르브산칼륨, 페녹시에탄올 등, 살균제로는, 벤조산, 살리실산, 석탄산, 소르브산, 파라옥시벤조산알킬에스테르, 파라클로르메타크레졸, 헥사클로로펜, 염화벤잘코늄, 염화클로르헥시딘, 트리클로로카르바닐리드, 트리크로산, 감광소(感光素), 페녹시에탄올 등이 있다.

또한, 보습제로는, 예를 들어 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 글리세린, 디글리세린, 솔비톨, 말비톨, 트레할로오스, 라피노스, 자일리톨, 만니톨, 폴리에틸렌글리콜, 폴리글리세린 등과 같은 글리콜류 등의 다가 알코올류 및 다당류 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용하거나 또는 2 종 이상을 혼합하여 본 발명에 사용하는 것이 바람직하다.

점도 조정제의 예로는, 아라비아 검, 트라가칸스, 아라비노 갈락탄, 로커스트빈 검 (구주콩 (carob) 검), 구아 검, 카라야 검, 카라기난, 펙틴, 한천, 퀀스씨드 (Quince Seed: 마르멜로), 전분 (쌀, 옥수수, 감자, 소맥), 알게콜로이드, 트란트 검, 로커스트빈 검 등의 식물계 고분자, 잔탄검, 덱스트란, 숙시노글루칸, 풀루란 등의 미생물계 고분자, 콜라겐, 카세인, 알부민, 젤라틴 등의 동물계 고분자, 카르복시메틸 전분, 메틸히드록시프로필 전분 등의 전분계 고분자, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 메틸히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 니트로셀룰로오스, 셀룰로오스황산나트륨, 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 결정 셀룰로오스, 셀룰로오스말(末)의 셀룰로오스계 고분자, 알긴산나트륨, 알긴산프로필렌글리콜에스테르 등의 알긴산계 고분자, 폴리비닐메틸에테르, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시비닐 폴리머 등의 비닐계 고분자, 폴리에틸렌글리콜 등의 폴리옥시에틸렌계 고분자, 폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌 공중합체계 고분자, 폴리아크릴산나트륨, 폴리에틸아크릴레이트, 폴리아크릴산아미드 등의 아크릴계 고분자, 폴리에틸렌이민, 양이온 폴리머, 벤토나이트, 규산알루미늄마그네슘, 라포나이트, 스메크타이트, 사포나이트, 헥토라이트, 무수 규산 등의 무기계 증점제 등을 들 수 있다. 또한, 다른 증점제로서, 유용성 겔화제가 있고, 예를 들어, 알루미늄스테아레이트, 마그네슘스테아레이트, 징크미리스테이트 등의 금속 비누, N-라우로일-L-글루타민산, α, γ -디- n-부틸아민 등의 아미노산 유도체, 덱스트린팔미트산에스테르, 덱스트린스테아르산에스테르, 덱스트 린2-에틸헥산산팔미트산에스테르 등의 덱스트린 지방산 에스테르, 자당팔미트산에스테르, 자당스테아르산에스테르 등의 자당 지방산 에스테르, 모노벤질리덴솔비톨, 디벤질리덴솔비톨 등의 솔비톨의 벤질리덴 유도체, 디메틸벤질도데실암모늄 몬모릴로나이트 클레이, 디메틸디옥타데실암모늄 몬모릴로나이트, 옥타데실디메틸벤질암모늄 몬모릴로나이트 등의 유기 변성 점토 광물 등을 들 수 있다.

이 (가) 성분 함유 조성물은 그 자체 단독으로 외용 조성물로서 뿐만 아니라, 상기 성분을 혼합함으로써, 화장품, 의약부외품으로서의 로션, 유액, 크림, 팩제, 비누 등의 약용 화장료, 또는 의약품으로서의 로션, 유액, 크림, 연고 등의 피부 외용제로도 사용할 수도 있다.

(나) 성분 함유 조성물은, 누룩곰팡이 또는 그 처리물만이어도 되고, 그밖의 예를 들어 물, 알코올 등의 액체 희석제 또는 예를 들어 파라핀 등의 고체 희석제 또는 예를 들어 유동 파라핀 등의 반고체 희석제에 의해 희석되어 있어도 된다. 또는 상기한 (가) 성분 함유 조성물에 있어서, (가) 성분 대신에 (나) 성분을 사용한 조성물을 (나) 성분 함유 조성물로서 사용해도 된다.

(가) 성분과 (나) 성분을 함유하는 조성물은, (가) 성분과 (나) 성분과 상기 (가) 성분 함유 조성물에서 설명한 각종 성분을 혼합함으로써 제조되고, 상기한 (가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물을 혼합함으로써 얻어지는 조성물일 수도 있다.

피부 외용제로서 피부 표면에 적용하는 경우, (가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물을 혼합한다. 혼합 후, 혼합물을 피부 표면에 적용한다. 양 조성물을 혼합함에 있어서, (가) 성분과 (나) 성분의 사용 비율은, 중량 비율로 약 1:0.001∼0.1, 바람직하게는 약 1:0.005∼0.05 이다.

(가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물은, 잘 알려져 있는 방법에 의해 혼합하면 된다.

본 발명의 조성물이 화장품인 경우의 바람직한 양태를 설명한다. 상기 화장품이 화장수인 경우에는, (가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물을 용매에 용해 또는 분산시킴으로써 상기 화장수가 얻어진다.

상기 화장품이 유액인 경우에는, (가) 성분 함유 조성물과 (나) 성분 함유 조성물을, 예를 들어 호모게니저 등을 사용하여 상기 (가) 성분 및 (나) 성분을 제외한 원료를 유화시킨 혼합액에 배합함으로써 상기 유액을 얻을 수 있다.

이렇게 해서 제작되는 사용시에 있어서의 본 발명의 조성물은, 예를 들어, 화장수, 유액(乳液), 미용액 등의 기초 화장품, 파운데이션 등의 메이크업 화장품, 두발 화장품, 청정용 화장품, 입술 화장품, 구강 화장품, 손톱 화장품, 아이라이너 화장품, 입욕용 화장품, 자외선 차단용 화장품 등에 사용된다. 의약품 또는 의약부외품에도 사용되고, 이러한 예로는, 드라이아이용 점안제 외에, 약용 화장품, 육모제 등을 들 수 있다.

이하, 실시예에 근거하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명의 범위를 이들 실시예에 한정하는 것은 물론 아니다.

(실시예 1)

2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 합성:

5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산 (2g, 9.3m㏖) 을 DMSO (20㎖) 에 용해하고, 탄산칼리 (1.3g, 9.4m㏖) 및 브롬화벤질 (1.1㎖, 9.3m㏖) 을 첨가하여, 50℃ 에서 4시간 교반하였다. 반응액에 물을 첨가하여, 1N-HCl 에 의해 산성으로 한 후, 아세트산에틸로 추출, 물 세정, 포화식염수로 세정한 후, 무수 MgSO4 로 건조시키고, 감압 농축하고, 실리카겔 크로마토그래피 (AcOEt/n-Hexane=3:1) 로 정제하여, 1.1g 의 3-O-벤질-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산을 얻었다 (수율: 39%).

이 벤질 유도체 (0.6g, 2.0m㏖) 및 2,3,4,6-테트라-O-아세틸-1-O-(2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐)-β-D-글루코피라노스 (2.1g, 4.0m㏖) 의 혼합물을 120-130℃ 에서 가열 용융하였다. 3시간 반응시킨 후, 반응액을 칼럼 크로마토그래피 (25% AcOEt/n-헥산으로부터 50% 까지의 그래디언트) 로 정제하여, 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-3-O-벤질-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산 850㎎ 을 얻었다 (수율: 67%).

상기 배당체 (850㎎, 1.3m㏖) 를 아세트산에틸 (40㎖) 에 용해하고, 10% Pd-C (200㎎) 를 첨가하여, 수소화 분해하였다. 2시간 후, 촉매를 여과 제거하고, 농축하여, 약 750㎎ 의 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)-5,6-O-이소프로필리덴아스코르브산을 얻었다.

이 탈(脫)벤질체 (500㎎, 0.9m㏖) 를 아세트산 (5㎖) 에 용해하고, 물 (5㎖) 을 첨가하여, 50-60℃ 에서 1.5시간 가열 교반하였다. 반응액을 농축 후, 물 세정, 포화식염수로 세정하고, 무수 MgSO4 으로 건조시킨 후, 감압 농축하고, 얻어 진 잔류물을 아세트산에틸-헥산으로 결정화하여, 320㎎ 의 2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 얻었다 (수율: 48%).

PMR (σ ppm, DMSO-d₆); 1.94-2.01(12H), 3.42(3H, m),3.7-4.3(4H, m), 4.7-5.1(4H, m), 5.3-5.4(2H, m), 12.00(1H, br).

FABMS(+) m/z: 507.

(실시예 2)

2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 합성:

2-O-(2,3,4,6-테트라-O-아세틸-β-D-글루코피라노실)아스코르브산 (300㎎, 0.6m㏖) 을 메탄올 (10㎖) 에 용해하고, 탄산칼리 (600㎎) 를 물 (9㎖) 에 용해시킨 용액을 첨가하여, 30분간 교반하였다. 반응액을 IR-120(H⁺) 으로 중화하고, 수지를 여과 제거한 후, 또 메탄올 및 50% 메탄올 수용액으로 세정하였다. 여과액과 세정액을 합하여 농축한 후, 물을 첨가하고 동결 건조시켜, 아몰퍼스한 결정 (190㎎, 수율: 100%) 인 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 얻었다.

PMR (σ ppm, D₂O); 3.1-3.3(4H, m), 3.4-3.5(3H, m), 3.58(1H, d), 3.80 (1H, t), 4.61(1H, d), 4.66(1H, d).

FABMS(-) m/z: 337.

(실시예 3)

구기자 중의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 함량 측정

2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 화학 합성품의 고속 액체 크로마 토그래피 (시마즈제작소(주) 제조 LC-10Ai 시스템, 칼럼: Inertsil ODS-3 (디엘사이언스(주) 제조, 4.6X150㎜, 5㎛), 이동상: 20% MeOH-20mM 인산-5mM 브롬화테트라-n-아밀암모늄, 유속: 1.0㎖/분, 칼럼 온도: 35℃, 검출 파장: 254㎚) 에서의 유지 시간 2.63분을 지표로, 건조 식물 3g 에 대하여 10배량의 70% 에탄올로 실온에서 7일간 침지함으로써 얻은 추출액을 1.5% 메타인산/5M KOH (pH3.5) 으로 10배 희석하고, 이것을 피검 시료로 하여 천연에 존재하는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 검색하였다. 그 결과, 영하(寧夏)산 및 하북(河北)산 구기자의 추출액 중에, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산에 상당하는 피크의 존재가 인정되었다. 또한, 영하산 구기자의 생과 100g 에 대하여 2배량의 70% 에탄올을 첨가하여, 동일하게 처리한 시료에도 마찬가지로 그 존재가 인정되었다. 한편 추출 고형분은, 상기 추출액의 일부, 5㎖ 를 감압 농축한 후의 동결 건조 중량 측정에 의해 구하였다. 추출 고형분, 화학 합성품을 사용한 검량선, 추출액 중의 농도, 및 희석 배율을 함께 고려한 결과, 추출물 당 함량은 0.86 내지 1.2% 였다.

(실시예 4)

구기자에 함유되는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 정제

영하산 구기자 100g 을 (주)토쇼 제조의 정제 분쇄기 TS-10M 형으로 분쇄하고, 30% 에탄올 800㎖ 를 첨가하여, 실온하에 6일간 침지하고, 여과 후, 감압 농축, 동결 건조에 의해 65.7g 을 얻었다. 이 추출물의 일부 1.94g (2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 함량 0.86%) 을 증류수로 용해시켜 40㎖ 로 하였다 (pH4.5, 전도도 1.7mS/㎝). 이 시료를 Dowex 1-X8 칼럼 (아세트산형, 1.5X12 ㎝) 에 SV=1 로 통과시켰다. 통과 후, 약 10칼럼 체적 (200㎖) 의 증류수에 의한 세정, 0-0.1M 아세트산의 직선 농도 구배 용출 (100㎖X2), 그리고 0.1-1.0M 아세트산의 직선 농도 구배 용출 (100㎖X2), 다시 1.0M 아세트산에 의하여 용출하였다. 280㎚ 에서의 흡광도를 측정함과 함께, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 용출을 화학 합성품의 유지 시간을 대조로, 고속 액체 크로마토그래피에 의해 조사하였다. 장치, 칼럼 온도는 실시예 1 과 같지만, 다른 조건을, 칼럼: Inertsil ODS-3 (디엘사이언스(주) 제조, 3.0X150㎜, 5㎛), 유속: 0.3㎖/분, 검출 파장: 245㎚, 이동상: 2% MeOH-0.2M KH2PO4/H3PO4 (pH3.0)-0.2mM EDTA-0.5mM 염화도데실트리메틸암모늄으로 변경한 결과, 화학 합성품 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 유지 시간은 6.5분이었다. 고속 액체 크로마토그래피에 의한 검토 결과, 칼럼에 흡착된 그 물질은 0.1-1.0M 아세트산 직선 농도 구배 용출의 획분 19-25 로 용출되었다 (26㎎, 획분 19-25 의 총 회수율 78%, 순도 50%).

(실시예 5)

2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 효소 합성

2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 화학 합성품의 GILSON 사 제조 LC 시스템 (마스터펌프 305형, UV 검출기116형), 칼럼: Inertsil ODS-3 (디엘사이언스(주) 제조, 4.6X150㎜, 5㎛), 이동상: 20% MeOH-20mM 인산-5mM 브롬화테트라-n-아밀암모늄, 유속: 0.5㎖/분, 검출 파장: 254㎚) 에서의 유지 시간 5.2분을 지표로, 시판되는 셀룰라아제, β-글루코시다아제, β-글루카나아제 효소제에 관해서 검색하였다. 또, 효소 반응계는 셀로비오스 0.3M 및 아스코르브산 0.2M 이 되도록 10mM 아세트산 완충액 (pH5.0) 으로 용해하여 1㎖ 로 하였다. 여기에 효소액을 50㎕ 첨가하여 37℃ 에서 반응을 시작하였다. 100℃, 5분간 가열하고 반응 정지시킨 후, 고속 액체 크로마토그래피로 생성된 β-D-글루코피라노실아스코르브산을 분석하였다. 그 결과, 셀룰라아제 (시그마사 제조), β-글루코시다아제 (도요보, 나카라이테스크), 셀로신 T2 (한큐공영물산), 셀룰라아제 「오노즈카」RS, 「오노즈카」FA 및 판셀라아제 BR (야쿠르트약품공업) 에 β 글루코실 전이 활성을 갖는 것을 발견하였다. 유리 아스코르브산이 4.0분의 위치에 나타난 것에 대하여, 이 전후인 3.6분과 5.2분 위치에 피크가 인정되고, 각각 물질 X, 물질 Y 로 하였다. 또, 물질 X 의 전이율은 15.7%, 물질 Y 의 전이율은 0.8% 를 나타내었다. 이 물질 X 와 물질 Y 는 화학 합성품과의 공(共)크로마토그래피 분석에 의해, 물질 X 는 6-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산, 물질 Y 는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산과 유지 시간이 일치하였다.

또, 분자량 1만 커트의 UF 막으로 공존하는 단백질을 제거한 후, 유리 아스코르브산을 제거하기 위해, 고속 액체 크로마토그래피 {GILSON 사 제조 LC 시스템 (마스터펌프 305형, UV 검출기 116형), 칼럼: SUGAR SH1011 (쇼와전공(주) 제조), 이동상: 0.1M 아세트산, 유속: 0.5㎖/분, 칼럼 온도: 30℃, 검출: 시차 굴절계, 0.25㎖ 분획} 를 사용하여 분취하였다. 물질 X 와 물질 Y 를 함유하는 획분은 29-31 로 용출되고, 수율 96% 로 24.7㎍ 의 표품을 얻었다.

그리고, 고속 액체 크로마토그래피에 의해 고순도품을 얻었다. 조건은, GILSON 사 제조 LC 시스템 (마스터펌프 305형, UV 검출기 116형), 칼럼: ODS-UG-5 (노무라화학(주) 제조, 4.6X250㎜, 5㎛), 이동상: 5% 메탄올-20mM 포름산암모늄-5mM Di-n-butylamine Acetate, 유속: 0.5㎖/분, 검출 파장: 254㎚ 이고, 0.5분씩, 프랙션 콜렉터 FC-203B 형 (GILSON 사 제조) 을 사용하여 분취하였다. 물질 X 와 물질 Y 에 상당하는 획분을 감압 농축, 동결 건조 후, 중수(重水)에 용해시키고, 핵자기 공명 스펙트럼을 측정함으로써, 화학 합성품 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산과 비교하였다. HSQC 스펙트럼에 있어서, 화학 합성품의 아스코르브산 부분 구조 중 4위, 5위, 6위 탄소의 화학 시프트는 각각 73, 73, 66ppm 인 데 대하여, 물질 X 에서는 4위, 5위, 6위 탄소의 화학 시프트가 모두 73ppm 이고, 6위에 상당하는 탄소만 저자장 시프트되어 있는 점에서, 물질 X 는 6-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이다.

물질 Y 는 화학 합성품 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산과의 일차원 PMR 스펙트럼 비교에서 일치하였기 때문에 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이다.

(실시예 6)

(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 정제

셀룰라아제제 (Sigma) 20㎎ 을 20mM 아세트산 완충액 (pH5.0) 1㎖ 에 용해하고, 동 완충액으로 평형화한 Marathon WBA (수지 0.5㎖, 다우케미칼사 제조) 에 공급하여 소통(素通) 획분을 얻었다. 이 효소액을, 아스코르브산 0.35g 과 셀로비오스 1g 을 용해한 20mM 아세트산 완충액 (pH5.0) 10㎖ 에 첨가하여 37℃ 에서 2일간 반응시킨 결과, 6-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 11.8%, 2-O-(β-D-글 루코피라노실)아스코르브산 0.8% 의 반응액을 얻었다. 본 용액을 UF 막으로 여과하여 효소를 회수 제거한 액 (pH4.3, 전도도 1.6mS/㎝) 을 Dowex 1-X8 칼럼 (아세트산형, 1.5X12㎝) 에 SV=2.5 로 통과시켰다. 통과 후, 약 10칼럼 체적 (200㎖) 의 증류수에 의한 세정, 0-0.1M 아세트산의 직선 농도 구배 용출 (80㎖X2), 그리고 0.1-1.0M 아세트산의 직선 농도 구배 용출 (80㎖X2) 을 실시하였다. 6-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 고함유 획분 (프랙션 65-68), 미반응 아스코르브산 고함유 획분, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 고함유 획분 (프랙션 101-108) 의 순으로 분획되었다. 이 프랙션 101-108 획분을 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 고함유 획분으로서 채취하였다 (2.4㎎, 회수율 45%)

(실시예 7)

자외선 B 파 (UVB) 조사로 인한 인간 피부 표피 유래의 각화 세포 (HaCaT) 의 세포사에 대한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 보호 효과:

인간 피부 각화 세포 HaCaT (하이델베르그대학 Fusenig 박사로부터 부여된 세포주) 를 10% 소 태아 혈청 (FBS) 함유 덜벳코 변법 이글 배지 (DMEM) 중에서 24 웰 플레이트에 10000세포/웰을 뿌리고 18시간 후에 35밀리주울/평방센티미터 (mJ/㎠) 의 UVB (극대 파장 312㎚) 를 조사한다. 조사 2시간 전에 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 20-100μM 첨가해 두고, 조사 직전에 제거하여 린스한다. 조사는 약제 비존재 하 PBS 중에서 실시하고, 조사 후에는 FBS 10% 함유 DMEM 배지에서 배양을 계속하여, 조사 후 24 시간에 세포 생존율을 2-(4-요오드페닐)-3-(4-니트로페닐)-5-(2,4-디포스페닐)-2H-테트라졸륨, 1 나트륨염 (WST-1) 을 사용한 미토콘드리아 탈수소 효소 활성 측정법에 의해 조사하였다. 결과를 도 1 에 나타낸다. 마찬가지로, 비교예로서 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산, 아스코르브산도 검토하여, 역시 도 1 에 나타내었다.

(실시예 8)

인간 피부 각화 세포에서의 세포내 아스코르브산의 농도에 대한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 효과:

인간 피부 각화 세포 HaCaT 세포를 100밀리미터 직경의 디쉬에 370000세포를 뿌린다. 배양 16시간 후에, HaCaT 의 24시간 무혈청 배양액을 40% 첨가한 10% FBS 함유 DMEM 배지에 녹인 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 100μM 첨가한다. 첨가 후 3-24시간에 배지를 제거하고, 빙랭시킨 PBS 로 2회 린스하고, 트립신으로 세포 시트를 박리시켜, 단일 세포 상태로 한다. 이것을 50μM 의 디티오트레이톨 (DTT) 을 함유한 PBS 로 현탁하고, 원심 처리에 의해 3회 린스한다. 세포 현탁액을 포터형 테플론 (등록상표) 호모게니저로 파쇄하고, 이어서 액체 질소 중에서 2회 동결·융해시킨다. 이 상청을 모르커트 (일본미리포아(주) 제조, 가압식 한외여과 유닛, 분획 분자량 10000, 폴리에테르술폰막) 처리하고 고속 액체 크로마토그래피 (토소(주) 제조 AS-8020 시스템, 칼럼: Shodex ODSpak (쇼와전공(주) 제조, 4.6X150㎜), 이동상: 0.1M KH2PO4-H3PO4 (pH2.35)-0.1mM EDTA-2Na, 유속: 1.5㎖/분) 에 의해 세포내 아스코르브산량을 쿨로메트릭 전기 화학 검출기 (ESA Co, Bedford, MA, 200mV) 로 분석한다. 결과를 도 2 에 나타낸다. 마찬가지로, 비교예로서 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산, 아스코르브산도 검토하여, 역시 도 2 에 나타내었다.

(실시예 9)

인간 피부 진피 유래 섬유아 세포 (NHDF) 의 콜라겐 합성에 관한 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산의 촉진 효과:

인간 피부 섬유아 세포 (NHDF) 를 100밀리미터 직경의 디쉬에 370000세포를 뿌린다. 16시간 후에, NHDF 의 24시간 무혈청 배양액을 40% 첨가한 10% FBS 함유 DMEM 배지 중에, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산을 100μM 첨가한다. 또 1시간 후에 L-[2,3-³H]프롤린을 0.12㎖ (120μCi) 첨가하여, 48시간 배양한다. 배양 후에 배지를 제거하고, 세포 시트를 PBS 로 4회 린스한다. 이어서 세포를 트립신 박리하고, 알칼리로 세포 용해한 후, 중화하여 세포내 단백질을 얻는다. 이것을 클로스트리듐(Clostridium)의 콜라게나아제로 콜라겐 분해하여 얻어진 단백질 획분을, 신티졸 EX-H 를 사용한 액체 신틸레이션카운터에 의해 방사 활성으로서 측정한다. 또한, 콜라게나아제로 처리하지 않은 세포내 단백질 획분을, 역시 액체 신틸레이션카운터에 의해 방사 활성으로서 측정한다. 각각의 방사 활성의 차를 구하여, 콜라겐 합성 활성으로 한다. 결과를 도 3 에 나타낸다. 마찬가지로, 비교예로서 2-O-(α-D-글루코피라노실)아스코르브산, 아스코르브산도 검토하여, 역시 도 3 에 나타내었다.

(실시예 10)

인폼드 콘센트가 얻어진 인간 적출 피부편 (51세 여성의 이후(耳后)하 피부) 를 수직방향으로 가늘고 긴 소편(小片)으로 분할하여, 이 소편을 개변 부로노프 확산 셀 챔버에 넣었다. 피하측을 DMEM 배지 (2㎖) 에 담그고 영양을 공급하면서, 각질층측으로는 5% CO 를 통기시켜 배지의 pH 를 7.25 로 유지하였다. 각질층 위에, 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 (이하 AβG 라고 약칭하기도 한다) 100mM {3.38%w/w, PBS(-) 용액 (염화칼슘, 염화마그네슘의 금속염류를 함유하지 않는, 인산 완충화 생리식염수 (Phosphate Buffered Saline))} 1㎖ 를 스며들게 한 약 5㎜ 사방의 이중 가제를 댐과 동시에, 황누룩 (Aspergillus oryzae) 유래의 효소제제 (아마노엔자임사 제조, 상품명 비오자임 A) 의 25w/w% PBS(-) 용액을 여과 멸균 후, 1 소편 당 1/200 (5㎕), 1/500 (2㎕), 1/1000 액량 (1㎕) 을 가제 상에 첨가하였다 (이하, Bz 로 약칭한다).

또한, 상기 방법에 있어서, (주)비오크 제조의 쌀누룩용 누룩곰팡이 건조 분말 1g에 5㎖ 의 밀리 Q 초순수를 첨가한 현탁액에, 동결 융해와 포터형 테플론 (등록상표) 호모게니저에 의해 파쇄하고, 원심 분리하여 얻어지는 상청을 여과 멸균하여, 1/20 (50㎕), 1/50 액량 (20㎕) 을 Bz 대신에 가제 상에 첨가하였다 (이하, Kj 라고 약칭한다). 또한, 상기 방법에 있어서, Bz 나 Kj 의 첨가물을 사용하지 않고, AβG 만을 투여하는 것도 실시하였다.

투여 5시간 후에 개변 부로노프 확산 셀로부터 피부 소편을 잘라내고, 0.1% 트립신의 PBS(-) 용액을 10배량 첨가하여, 37℃, 3시간 처리 후, 완만하게 교반하여 표피와 진피로 분리하였다. 무기포 하에, 포터형 테플론 (등록상표) 호모게니저와 액체 질소에서의 동결 융해를 각각 실시하여, 세포를 파쇄하였다. 파쇄 액의 원심 분리 상청을 한외여과한 후, AβG 를 UV 법으로, 또, 총 비타민 C (환원형과 산화형의 총합) 및 환원형 비타민 C 량을 전기 화학적 검출법에 의해, 실시예 8 과 동일한 방법으로 측정하였다. 이 때, 총 비타민 C 량에서 차지하는 비율을 구하였다. 인간 적출 피부편에, AβG 단독 또는 첨가물을 동시 투여한 5시간 후의 표피 및 진피 중의 총 비타민 C 량을 표 1 에 나타낸다. 인간 적출 피부편에, AβG 단독 또는 첨가물을 동시 투여한 5시간 후의 표피 및 진피 중의 환원형 비타민 C 가 총 비타민 C 량에서 차지하는 비율을 표 2 에 나타낸다. 인간 적출 피부편에, AβG 단독 또는 첨가물을 동시 투여한 5시간 후의 표피 및 진피에 대한 AβG 침투량을 표 3 에 나타낸다.

AβG 투여량	효소	첨가량	피부 중의 총 비타민 C (n㏖/g 조직)
AβG 투여량	효소	첨가량	표피	진피
100mM	없음	없음	15	3
100mM	Bz	1/200	162	11
100mM	Bz	1/500	57	7
100mM	Kj	1/20	15	6
100mM	Kj	1/50	18	8

AβG 투여량	효소	첨가량	피부중 환원형 비타민C 가 총비타민C 에서 차지하는 비율(%)
AβG 투여량	효소	첨가량	표피	진피
100mM	없음	없음	67	25
100mM	Bz	1/200	82	60
100mM	Bz	1/500	77	42
100mM	Kj	1/20	77	40
100mM	Kj	1/50	77	37

AβG 투여량	효소	첨가량	피부편에 대한 AβG 침투량 (n㏖/g 조직)
AβG 투여량	효소	첨가량	표피	진피
100mM	없음	없음	3400	500
100mM	Bz	1/200	8600	250
		1/500	6700	250
		1/1000	3200	1300
100mM	Kj	1/20	2300	960
100mM	Kj	1/50	2600	1600

표 1 및 표 2 에 나타내는 바와 같이, Bg 나 Bz 의 동시 첨가에 의해, 피부 조직 중에서 특히 비타민 C 의 공급이 어려운 피부 표면으로부터 0.1 내지 1.3㎜ 깊이에 있는 진피에도 비타민 C 인리치먼트가 달성되었다. 이 비타민 C 인리치먼트라는 1 차 효과가, 진피 섬유 아세포에 있어서의 콜라겐 합성 촉진을 통한 주름 방어 효과라는 2 차 효과로 이어진다. 또한, 표 3 에 나타내는 바와 같이, Bz 나 Kj 의 동시 첨가에 의해서, 프로비타민 C 인 AβG 의 피부 표면에서 심부로의 침투 이행성이 증가하였다.

이상의 결과로부터, 본 발명의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산은, 누룩곰팡이 또는 그 처리물의 존재에 의해 피부 침투성이 현저히 개선되고, 비타민 C 로의 변환도 양호하다는 것을 알 수 있다.

본 발명에 의해서, 안정성이 우수하고, 생체 내에서 지속적으로 이용되고, 항산화 작용이 강하며, 피부 자극성이 적은 아스코르브산 유도체를 함유하고, 피부 침투성이 우수한 피부 외용 조성물을 제공할 수 있다.

Claims

식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르와 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 외용 조성물:

[화학식 1]
제 1 항에 있어서,

화장품 또는 의약부외품인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,

제 1 항에 기재된 식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산이, 식물체로부터 추출되는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항에 있어서,

식물체가 가지과의 식물인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,

식물체가 구기자, 구기자의 생과 또는 건조 과실인 조성물.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

누룩곰팡이가 아스페르길루스 (Aspergillus) 속에 속하는 균인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,

누룩곰팡이가 황누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae), 백누룩곰팡이 (Aspergillus kawachii) 또는 흑누룩곰팡이 (Aspergillus awamori) 에 속하는 균인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항에 기재된 식 (Ⅰ) 로 나타내는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르를 함유하는 조성물과 누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 조성물과의 세트.
제 8 항에 기재된 세트용의 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르를 함유하는 조성물.
누룩곰팡이 또는 그 처리물을 함유하는 것을 특징으로 하는 2-O-(β-D-글루코피라노실)아스코르브산 또는 그 인체에 안전한 염 혹은 에스테르 피부 침투 증강제.