KR20050036867A

KR20050036867A - 조직인자경로 억제제（ｔｆｐｉ）의 투여에 의한 중증폐렴의 치료

Info

Publication number: KR20050036867A
Application number: KR1020047005618A
Authority: KR
Inventors: 애블라 에이. 크리시
Original assignee: 카이론 코포레이션
Priority date: 2001-10-15
Filing date: 2002-10-15
Publication date: 2005-04-20
Also published as: EP1446138A4; KR20040040489A; IL161408A0; BR0213292A; JP2005506345A; MXPA04003548A; JP2010006839A; HUP0500472A2; NO20041996D0; WO2003032904A3; US7674769B2; AU2002365131A1; PL374506A1; EA200400548A1; EP1446140A4; HUP0501111A2; US20030139340A1; US20030139339A1; ZA200403601B; CA2463655A1

Abstract

중증 폐렴을 예방적으로 또는 치료적으로 처치하는 방법은 이런 상태로 고통 받거나 이런 상태가 발생할 위험이 있는 환자에게 조직인자경로 억제제(TFPI) 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 포함한다. 본 방법은, 바람직하게는 불리한 부작용을 피할 수 있는 저용량의 TFPI 또는 TFPI 유사체의 연속 정맥내 주입의 사용을 포함한다.

Description

조직인자경로 억제제（ＴＦＰＩ）의 투여에 의한 중증 폐렴의 치료{TREATMENT OF SEVERE PNEUMONIA BY ADMINISTRATION OF TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR(TFPI)}

본 출원은 참고자료로서 그 전체가 본원에 수록된 2001년 10월 15일자 제출된 임시 출원일련번호 60/328,806의 우선권을 주장한다.

본 발명은 중증 폐렴의 치료적 처치 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 조직인자경로 억제제 단백질을 투여하여 중증 폐렴에 관련된 풍부한 또는 증폭된 생리학적 경로를 감소시키는 것에 관한 것이다.

폐렴은 폐포공간 및 간질조직을 포함하는 폐에 속한 하나 이상의 기능적 요소가 급성 감염된 결과이다. 미국에서는 매년 약 2백만명의 사람들에서 폐렴이 발생하며, 이들 중 40,000 내지 70,000명의 사람은 사망한다. 폐렴은 사망의 원인이 되는 모든 질환 범주 중 6번째를 차지하며, 가장 흔한 치사적 병원내(병원감염성) 감염이다. 사회감염성 폐렴(CAP)은 미국에서 보건의료 비용에 상당한 영향을 미치며, 직접 비용에서는 연간 추정하여 14조 달러를, 손실소득으로 치자면 9조 달러를 차지한다(Lynch JP, Martinez FJ. Community-acquired pneumonia. Curr. Opin Pulm Med. 1998; 4:162-172). 개발도상국에서, 하부 호흡기 감염은 전형적으로 사망의 주요 원인이거나, 또는 감염성 설사에 이어서 두번째를 차지하거나 한다(The Merck Manual, Sec. 6, Ch. 73, Penumonia, 2000).

"중증 폐렴"으로 알려진 상태는 미국인후협회(ATS)를 포함한 다양한 기관에 의해 제시된 가이드라인에 따라서 특징지어 진다(Am J Respir Crit Care Med 2001; 163:1730-1754). 예를 들어, ATS는 중증 폐렴의 진단에 대한 다른 기준들에 더하여, 기계호흡의 필요성이나 폐혈쇼크와 같은, 적어도 하나의 주요한 기준을 요구한다. 일반적으로, 중증 폐렴은 급성 폐질환, 폐염증질환, 또는 염증이나 응고 같은 요인으로 인한 폐기능에 있어서의 어떤 동요에 기인할 수 있다. 중증 CAP의 진단은 특히 폐렴을 위한 ICU에 받아들여지는 환자를 기준으로 한다. 역학적으로, 이 환자 집단은 전체 ICU 입원의 대략 10%를 포함한다. CAP로 일반병동에 입원한 환자가 15% 미만의 사망률을 보이는 것에 비하여, 폐렴으로 ICU에 있는 환자는 전체 CAP 환자들 중 최고의 사망률(30% 내지 40%)을 가진다.

미국에서 매년 대략 4백만명의 성인이 사회감염성 폐렴(CAP)으로 진단되며, 600,000명 정도는 입원을 필요로 한다. Fine 등, N. Engl. J. Med. 336, 243-50, 1997. 전반적으로, CAP의 발병률은 나이와 함께 증가하며, 최대 유병율은 65세 이상에서 발견된다. Marston 등, Arch Intern Med. 1997: 157:1709-1718. 또한, 발병률은 만성폐쇄폐질환, 천식, 당뇨병, 알콜중독, 면역억제, 신기능부족, 만성간질환 및 심장질환과 같은 중복이환을 가진 환자들에서 증가된다. Marrie, Curr Opin Pulm Med. 1996; 2:192-197; Niedermann 등, Am Rev Respir Dis. 1993: 148:1418-1426.

폐렴은 미국에서 감염으로 인한 사망의 주도적인 원인이며, 전체 사망의 6번째로 주도적인 원인이다. 폐렴-관련 사망률은 1979년에서 1992년까지 22%까지 증가했으며, 노인층(65세 이상)이 1992년의 전체 폐렴-관련 사망 중 89%를 차지했다. 폐렴 및 인플루엔자 사망률 - 미국 1979-1994[공개 정정판이 MMWR. 1995; 44:782에 남) MMWR 1995; 44:535-537 참조. 파인과 동료들은(1997) 어떤 공존하는 질병(종양질환, 울혈심부전증(CHF), 뇌혈관질환, 신질환 및 간질환) 및 어떤 신체적인 진찰소견(정신상태의 변경, 심박수 증가, 호흡수 증가, 수축기 혈압 감소 및 비정상적으로 낮거나 상승된 체온)이 또한 CAP-관련 사망률의 증가와 관련된다는 것을 보고했다. 이에 더하여, CAP는 미국에서 보건의료 비용에 상당한 영향을 미치며, 직접 비용에서는 연간 추정하여 14조 달러를, 손실소득으로 치자면 9조 달러를 차지한다. Lynch & Martinez, Curr Opin Pulm Med. 1998; 4:162-172.

조직인자경로 억제제(TFPI)는 단백질이며, 포유동물의 혈장에 존재하는 세린 프로테아제 억제제이다. Thomas, Bull. Johns Hopkins Hosp. 81, 26 (1947); Sch-neider, Am. J. Physiol. 149, 123 (1947); Broze & Miletich, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1886 (1987). 또한, TFPI는 조직인자 억제제, 조직 트롬보플라스틴 억제제, 인자 III 억제제, 외인성 경로 억제제(EPI), 및 지방단백질-관련 응고 억제제(LACI)로서 알려져 있다. "조직인자경로 억제제"라는 명칭은 1991년 6월 30일에 국제혈전지혈학회에서 승인되었다.

혈액응고 활성화는 유체인 혈액의 고상의 겔이나 응괴(clot)로의 전환이다. 이에 더하여, 응고 프로테아제의 소비는 과도한 출혈을 가져온다. 주요 사건은 가용성 섬유소원이 불용성 섬유소 가닥으로 전환되는 것이며, 그럼에도 불구하고 섬유소 자체는 총 혈병(blood clot)의 단지 0.15%만을 형성한다. 이 전환은 복잡한 효소 연속단계의 마지막 단계이다. 성분(인자)들은 단백질분해효소의 불활성 전구체인 효소원으로 존재하며, 이것이 특이적 부위에서 단백질분해 절단에 의해 활성 효소로 전환된다. 소량의 한 인자의 활성화는 다음번 등등에서 다량의 형성을 촉매함으로써 증폭을 가져오며, 그 결과 섬유소가 극히 빠르게 형성된다.

응고는 내피 바로 밑의 세포에서 발현되는 조직인자(TF)에 인자 VIIa를 노출시키는 혈관 손상에 의해 개시되는 것으로 여겨진다. 인자 VIIa-TF 복합체는 인자 X를 인자 Xa로 절단하고, 인자 IX를 인자 IXa로 절단한다. TFPI는 인자 VIIa와 인자 Xa 둘 다에 결합한다. TFPI, 인자 VIIa(그것의 결합된 TF와 함께), 및 인자 Xa 사이에 형성된 복합체는 지혈을 지속하는데 필요한 인자 Xa 및 IXa의 더 이상의 형성을 억제한다. Broze, Jr., Ann. Rev. Med. 46:103 (1995).

혈류로 직접 도입된 내독소를 포함하는 박테리아 산물에 의한 응고 연속단계의 활성화가 동맥 표면에 광범한 섬유소 침착, 뿐만 아니라 섬유소원, 프로트롬빈, 인자 V 및 VIII 및 혈소판의 고갈을 가져올 수 있다. 이에 더하여, 섬유소용해 시스템이 흥분됨으로써 섬유소분해산물이 더 많이 형성된다.

응고 활성화가 외견상 박테리아 산물(예를 들어, 내독소)에 의해 개시되는 것과 동시에, 반대의 메카니즘이 응괴형성(clotting), 즉 섬유소용해 시스템의 활성화에 의해 또한 활성화되는 것 같다. 활성화된 인자 XIII는 플라스미노겐 전-활성인자를 플라스미노겐 활성인자로 전환하며, 이어서 이 활성인자가 플라스미노겐을 플라스민으로 전환함으로써 응괴 용해를 매개한다. 그러므로, 혈장 섬유소용해 시스템의 활성화는 출혈 경향의 한 원인이 된다.

내독혈증은 조직 플라스미노겐 활성인자 억제제(PAI)의 혈중 수준의 증가와 관련된다. 이 억제제는 조직 플라스미노겐 활성인자(TPA)를 빠르게 불활성화시킴으로써 플라스미노겐의 플라스민으로의 활성화를 통해 섬유소용해를 촉진하는 그것의 능력을 방해한다. 섬유소용해의 손상은 혈관에 섬유소 침착을 일으킬 수 있으며, 따라서 패혈쇼크에 관련된 DIC의 한 원인이 된다.

중증 폐렴 및 관련 응고병증의 예방이나 치료를 위한 만족스러운 시술을 확인하기 위한 노력들이 진행중이다. 응고경로를 가로막는 제제가 중증 폐렴의 치료적 처치나 예방적 처치로서 반드시 효과적이지는 않다. 예를 들어, 헤파린은 통상 사용되는 항응고제이다. 그러나, 헤파린은 과도한 출혈을 유도하기 때문에 사용의 관리가 어렵고, 응고 비정상성을 약화시키기는 하지만 생존 이득을 제공하지는 않는다고 밝혀졌다. 예를 들어, Aoki 등, "A Comparative Double-BLIND randomized Trial of Activated Protein C and Unfractionated Heparin in the Treatment of Disseminated Intravascular Coagulation," Int. J. Hematol. 75, 540-47 (2002) 참조. 몇몇 임상 시험은 DIC의 급작스런 발생이 두드러진 특징인 세균성 내독혈증에서 주로, 헤파린 치료에 의해 패혈증에서 사망률의 감소를 증명하는데 실패했다. 예를 들어, Corrigan 등, "Heparin Therapy in Septacemia with Disseminated Intravascular Coagulation. Effect on Mortality and Correction of Hemostatic Defects," N. Engl. J. Med., 283:778-782 (1970); Lasch 등, Heparin Therapy of Diffuse Intravascular Coagulation(DIC)", Thrombos. Diathes. Haemorrh., 33:105 (1974); Straub, "A Case Against Heparin Therapy of Intravascular Coagulation" Thrombos. Diathes. Haemorrh., 33:107 (1974) 참조.

재조합 사람 ala-TFPI(TFPI 유사체)의 투여가 패혈증의 동물 모델에서 생존율을 개선하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 미국특허 No. 6,063,764 참조. 내인성 단백질인 TFPI는 꽤 내성이 있다. 정맥내 주입이나 피하 주사에 의한 TFPI 투여는 응괴형성 능력을 감소시키는 것으로 나타났으며, 이는 증가된 프로트로빈 시간(PT)으로서 명백해진다. 동물 및 사람의 연구에서 PT의 연장은 혈장 TFPI의 증가와 직선 관계에 있었다. A. A. Creasey, Sepsis 3:173 (1999).

중증 폐렴의 치사적 효과를 억제하는 동시에 잠재적으로 심각학 부작용을 최소화하는 치료 접근법에 대한 필요성이 본 분야에 여전히 남아 있다.

발명의 개요

본 발명의 한 구체예는 중증 폐렴을 가지거나 중증 폐렴이 발생할 위험이 있는 환자에게 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 포함하는 중증 폐렴을 예방하거나 또는 치료하는 방법이다. 어떤 구체예에서, 환자는 증명할 수 있는 감염을 가진다.

본 발명의 다른 구체예는 TFPI 또는 TFPI 유사체로 구성된 군에서 선택된 제제를 환자에게 연속 정맥내 주입으로 투여하는 것을 포함하는 중증 폐렴을 치료하는 방법이다. 어떤 구체예에서, 환자는 증명할 수 있는 감염을 가진다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체가 약 0.66mg/kg/hr 미만의 용량율(dose rate)로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 용량율로 연속 정맥내 주입에 의해 투여되는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 상기 용량율은 약 0.00025 내지 약 0.050mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등하다. 더 바람직한 구체예에서, 상기 용량율은 약 0.010 내지 약 0.045mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등하다. 더더욱 바람직한 구체예에서, 상기 TFPI 또는 상기 TFPI 유사체는 약 0.025mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 용량율로 투여된다. 다른 바람직한 구체예에서, 상기 용량율은 약 0.024 내지 약 4.8mg/kg의 총용량으로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 총용량을 제공하도록 투여된다. 다른 바람직한 구체예에서, 상기 용량율은 약 0.006mg/kg 이상 약 1.2mg/kg 미만의 일일 용량으로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 일일 용량을 제공하도록 투여된다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체가 적어도 72시간 동안 투여되는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체는 적어도 96시간 동안 투여된다.

다른 구체예는 상기 TFPI 유사체가 비-당화된 ala-TFPI인, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 유사체가 SEQ ID NO:1의 아미노산 19-89로 구성된 첫번째 Kunitz 도메인을 포함하는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 상기 TFPI 유사체는 SEQ ID NO:1의 아미노산 90-160으로 구성된 두번째 Kunitz 도메인을 더 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 유사체가 SEQ ID NO:1의 아미노산 1-160을 포함하거나, 또는 상기 TFPI 유사체가 SEQ ID NO:1의 아미노산 90-160으로 구성된 두번째 Kunitz 도메인을 포함하는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체가 TFPI 또는 TFPI 유사체를 포함하는 동결건조 조성물로부터 제조되는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체가 아르기닌을 포함하는 조제물로서 투여되는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체가 시트르산염을 포함하는 조제물로서 투여되는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체가 약 300mM의 아르기닌 염산염과 약 20mM의 시트르산 나트륨을 포함하는 pH 약 5.5의 조제물중에 약 0.15mg/ml의 농도를 가지는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다.

다른 구체예는 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것과 동시에 또는 24시간 이내에, 항생제, 항체, 내독소 길항제, 항응고 활성을 갖는 조직인자 유사체, 면역자극제, 세포부착 차단제, 헤파린, BPI 단백질, IL-1 길항제, 파파제(PAF 효소 억제제), TNF 억제제, IL-6 억제제 및 보체의 억제제로 구성되는 군에서 선택된 추가 제제를 투여하는 것을 더 포함하는, 상기 구체예들 중 어느 구체예를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 상기 추가 제제는 TNF, IL-6 및 M-CSF로 구성되는 군에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 항체이다.

본 발명의 더 이상의 구체예는 상세한 설명과 함께 하기 참조된 도면에 비추어 분명하다.

발명의 상세한 설명

TFPI 또는 TFPI의 유사체의 투여는 중증 폐렴의 예방 및 치료에 효과적이다. 또한, TFPI 또는 TFPI의 유사체의 연속 저투여량 투여(이후 "저용량 TFPI 투여")가 중증 폐렴의 예방 및 치료에 효과적이다. TFPI 또는 TFPI 유사체 투여, 특히 저용량 투여는 급성 또는 만성 염증, 특히 중증 폐렴을 억제하거나 약화시킨다. 저용량 TFPI 투여가 적어도 3일간 계속되었을 때, 중증 폐렴으로 인한 사망 위험이 감소되는 동시에, 불리한 부작용으로 인한 합병증, 특히 출혈 장애의 비율이 최소화될 수 있다. 저용량 TFPI 투여의 더 이상의 이점은, 충분한 고용량에서는 TFPI의 혈장 농도를 감소시킬 수 있는 내성 효과를 피한다는 것이다. 저용량 TFPI 투여에서는 혈장 수준이 일반적으로 500ng/ml 이하로 유지되는데 반하여 내성 효과는 약 850ng/ml의 혈장 TFPI 농도에서 반-최대 흥분된다. 저용량 TFPI 투여는 일반적으로 TFPI 또는 TFPI 유사체의 연속 정맥내 주입에 의해 수행된다.

TFPI 및 TFPI 유사체

본원에 사용된 TFPI는 SEQ ID NO:1에 나타낸 276개 아미노산 잔기 서열을 갖는 성숙 혈청 당단백질로 간주하며, 약 38,000달톤의 분자량을 가진다. 이것은 조직인자 활성과 그에 따른 응고 활성화의 자연 억제제이다. 미국특허 No.5,110,730은 조직인자(TF)를 설명하며, 미국특허 No. 5,106,833은 TFPI를 설명한다. TFPI cDNA의 클로닝은 Wun 등의 미국특허 No. 4,966,852에서 설명된다. TFPI는 프로테아제 억제제이며, 3개의 Kunitz 도메인을 가지는데, 그 중 2개는 인자 VII 및 Xa와 각각 상호작용한다고 알려져 있다. 세번째 도메인의 기능은 아직 불명인 채로 남아 있다. TFPI는 생체내에서 불활성 4차 인자 Xa:TFPI:인자 VIIa:조직인자 복합체를 형성함으로써 응고 개시를 제한하는 기능을 한다고 여겨진다. Rapaport, Blood 73:359-365 (1989) 및 Broze 등, Biochemistry 29:7539-7546 (1990) 참조. TFPI의 구조적 특징들은 대부분 다른 잘-연구된 프로테아제 억제제와의 상동성으로부터 추론될 수 있다. TFPI는 효소가 아니므로, 아마도 화학량론적 방식으로, 즉 TFPI의 Kunitz 도메인 중 하나가 하나의 프로테아제 분자를 억제하는 방식으로 그것의 프로테아제 표적을 억제할 것이다. 바람직하게, Kunitz 도메인 1 및/또는 2가 본 발명의 TFPI 분자에 존재할 것이다. Kunitz 도메인 3의 기능은 알려지지 않았다.

"TFPI 유사체"는 하나 이상의 아미노산 부가 또는 치환(일반적으로 자연계에서 보존성), 하나 이상의 아미노산 결실(예를 들어, TFPI 단편), 또는 하나 이상의 아미노산에 하나 이상의 화학 부분의 부가를 사용하여 변형된 TFPI의 유도체이며, 단 이 변형은 TFPI의 생물학적 활성을 파괴하지 않는다. 폴리펩티드 유사체를 만드는 방법은 본 분야에 공지되어 있으며 아래에 더 설명된다. 바람직한 TFPI 유사체는 N-L-알라닐-TFPI(ala-TFPI)이며, 이것의 아미노산 서열을 SEQ ID NO:2에 나타낸다. TFPI 유사체는 아래 설명된 생물활성 분석에 의해 결정된 TFPI 활성의 어떤 측정치를 지닌다. TFPI와 유사체에 대한 바람직한 생물활성 분석은 프로트롬빈 시간(PT 분석)이다(아래 참조).

TFPI 및 TFPI 유사체는 당화될 수도 있고 당화되지 않을 수도 있다. TFPI의 유사체가 미국특허 No. 5,106,833에 설명된다. TFPI 유사체인 ala-TFPI는 세계적 약물명인 "티파코긴(tifacogin)"으로도 알려져 있다. ala-TFPI는 성숙 전길이 사람 TFPI의 전체 아미노산 서열에 더하여 아미노 말단에 추가적인 알라닌 잔기를 포함한다. ala-TFPI의 아미노 말단 알라닌 잔기는, E. coli 발현을 개선하고, 다른 상태에서는 아미노 말단 메티오닌 잔기였을 어떤 것의 절단을 행하도록 TFPI 서열로 조작되었다. 미국특허 5,212,091 참조.

특히 바람직한 TFPI 유사체는 자연계에서 보존성인 치환, 즉 그들의 측쇄에 관련된 아미노산들의 패밀리의 범위안에서 발생하는 치환들을 포함한다. 보다 명확히, 아미노산은 일반적으로 4개 패밀리로 나눠진다: (1) 산성 - 아스파르트산염 및 글루탐산염; (2) 염기성 - 리신, 아르기니, 히스티딘; (3) 비극성 - 알라닌, 발린, 로이신, 이소로이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판; 및 (4) 하전되지 않은 극성 - 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌 및 티로신. 페닐알라닌, 트립토판, 및 티로신은 때로는 방향족 아미노산으로 분류된다. 예를 들어, 로이신을 이소로이신이나 발린으로, 아스파르트산염을 글루탐산염으로, 트레오닌을 세린으로 대체하는 단독 대체, 또는 아미노산을 구조적으로 관련된 아미노산으로 대체하는 유사한 보존성 대체가 생물학적 활성에 주요한 효과를 갖지 않을 것이라는 것을 합리적으로 예측할 수 있다. 예를 들어, 관심의 폴리펩티드는 원하는 분자 기능이 그대로 남아 있는 한, 1, 2, 3, 4, 5, 6-50, 15-25, 5-10, 또는 1에서 70까지의 어떤 정수와 같은, 약 1-70개 이하의 보존성 또는 비-보존성 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 당업자는 관심의 분자에서 본원에 정의된 생물학적 활성을 보유하는데 대한 합리적인 가능성을 가지면서 변형될 수 있는 영역을 쉽게 결정할 수 있다.

"상동성"은 2개의 폴리뉴클레오티드 또는 2개의 폴리펩티드 부분 사이의 유사성 퍼센트로 간주한다. 2개의 폴리펩티드 서열은, 분자들의 한정된 길이에 걸쳐서, 서열들이 적어도 약 50%, 바람직하게 적어도 약 75%, 더 바람직하게 적어도 약 80%-85%, 바람직하게 적어도 약 90%, 가장 바람직하게 적어도 약 95%-98% 서열 상동성, 또는 명시된 범위 사이의 어떤 상동성 퍼센트를 나타낼 때 서로 "실질적으로 상동성"이다. 또한, 본원에 사용된 "실질적으로 상동성"은 명시된 폴리펩티드 서열과 완전한 동일성을 나타내는 서열로 간주한다.

일반적으로, "동일성"은 2개 폴리펩티드 서열에 대해서 각각 정확한 아미노산-대-아미노산의 일치로 간주한다. 동일성 퍼센트는 서열 정렬에 의해 2개 분자 사이의 서열 정보를 직접 비교하는 단계, 정렬된 두 서열 사이의 일치하는 짝의 정확한 수를 세는 단계, 더 짧은 서열의 길이로 나누는 단계, 및 그 결과에 100을 곱하는 단계에 의해 결정될 수 있다.

바람직하게, 자연 또는 비-자연 발생 TFPI 유사체는 SEQ ID NO:1으로부터 유래된 TFPI와 적어도 70%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상 상동성인 아미노산 서열을 가진다. 더 바람직하게, 이 분자들은 98% 또는 99% 상동성이다. 상동성 퍼센트는 갭 개방 패널티 12와 갭 확장 패널티 2, 그리고 BLOSUM 매트릭스 62를 갖는 어파인 갭 서치(affine gap search)를 사용하는 Smith-Waterman 상동성 조사 알고리듬을 사용하여 결정된다. Smith -Waterman 상동성 조사 알고리듬은 Smith 및 Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482-489 (1981)에 교시된다.

TFPI 및 TFPI 유사체의 생물학적 활성은 프로트롬빈 분석에 의해 결정될 수 있다. 적합한 프로트롬빈 분석이 미국특허 5,888,968 및 WO 96/40784에 설명된다. 간단히 말해서, 프로트롬빈 시간이 혈액응고측정기(예를 들어, Organon Teknika의 Coag-A-Mate MTX II)를 사용하여 결정될 수 있다. 적합한 분석 완충액은 1mg/ml 소혈청알부민을 함유한 pH 7.5로 조정된 100mM NaCl, 50mM 트리스이다. 필요한 추가 시약은 정상 사람 혈장(예를 들어, Organon Teknika의 "Verify 1"), 트롬보플라스틴 시약(예를 들어, Organon Teknika의 "Simplastin Excel"), 및 TFPI 표준용액(예를 들어, 분석 완충액 ml 당 100% 순수한 ala-TFPI(또는 그의 동등물) 20㎍)이다. TFPI 표준용액의 일련의 희석용액, 예를 들어 1에서 5㎍/ml까지의 최종 농도로 희석된 희석용액의 응고 시간을 분석함으로써 표준 곡선이 얻어진다. 응괴형성 시간을 결정하기 위해 샘플 또는 TFPI 표준이 분석 완충액으로 먼저 희석된다. 다음에, 정상 사람 혈장이 첨가된다. 응괴형성 반응은 트롬보플라스틴 시약의 첨가에 의해 시작된다. 다음에, 기계가 응괴형성 시간을 기록한다. 로그값 응괴형성 시간 대 로그값 TFPI 농도의 플롯으로부터 직선 TFPI 표준 곡선이 얻어진다. TFPI 표준의 순도를 기준으로 표준 곡선을 조정하여, 100% 순수한 표준의 동등한 TFPI 농도와 일치시킨다. 예를 들어, 표준이 97% 생화학적으로 순수한 ala-TFPI로 제조된 경우(즉, TFPI의 생물학적 활성이 없는 분자종을 3중량% 함유한다), 표준의 각 희석용액의 농도에 0.97을 곱하여 실제 TFPI 농도를 얻는다. 따라서, 97% 순수한 제조물 ml 당 실제 중량을 기준으로 1.0㎍/ml인 TFPI 표준은 1.0x0.97의 농도, 또는 0.97㎍/ml와 동등할 것이며, 이 농도로서 취급될 것이다.

TFPI 및 TFPI 유사체 얻기

본 발명의 방법에 사용된 TFPI 및 TFPI의 유사체는 세포나 조직으로부터 분리 정제되거나, 화학적으로 합성되거나, 또는 원핵세포나 진핵세포에서 재조합적으로 생성될 수 있다.

TFPI는 몇 가지 방법에 의해 분리될 수 있다. 예를 들어, TFPI를 분비하는 세포는 노화 내피세포, 약 3-4일간 TNF로 처리된 젊은 내피세포, 간세포, 및 간암세포를 포함한다. TFPI는 종래의 방법들에 의해 정제될 수 있으며, 이 방법들에는 Pedersen 등, 1990, J. Biol. Chem. 265, 16786-93, Novotny 등, 1989, J. Biol. Chem. 264, 18832-37, Novotny 등, 1991, Blood 78, 394-400, Wun 등, 1990, J. Biol. Chem. 265, 16096-101, 및 Broze 등, 1987, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1886-90의 크로마토그래피법 등이 있다. TFPI는 혈류에서도 보이며, 혈액으로부터 정제될 수 있다. Pedersen 등, 1990 참조.

TFPI 또는 TFPI 변이체는 고체상 기술을 사용해 직접 펩티드를 합성하는 것과 같이, 화학적 방법을 사용하여 그것의 아미노산 서열을 합성함으로써 생성될 수 있다(Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85,2149-2154, 1963; Roberge 등, Science 269, 202-204, 1995). 단백질 합성은 수동기술을 사용하여 또는 자동으로 수행될 수 있다. 자동 합성은, 예를 들어 Applied Biosystems 431A 펩티드 합성기(Perkin Elmer)를 사용하여 달성될 수 있다. 선택적으로, TFPI 또는 TFPI 변이체의 단편들이 개별적으로 합성되고 화학적 방법을 사용하여 합쳐져서 전길이 분자를 생성할 수 있다.

TFPI 및 TFPI 유사체는 미국특허 No. 4,966,852에 보여진 대로 재조합적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 원하는 단백질의 cDNA가 원핵생물이나 진핵생물에서의 발현을 위해 플라스미드에 편입될 수 있다. 미국특허 No. 4,847,201는 특이적 DNA 서열로 미생물을 형질전환하고 그들을 발현하기 위한 상세한 설명을 제공한다. 미생물을 사용하여 단백질을 발현하는 것에 대한 상세한 설명을 제공하는 많은 다른 참고자료들이 당업자에게 알려져 있다. Maniatas 등 1982, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Press와 같은, 대부분의 참고자료가 미국특허 No. 4,847,201에서 인용된다.

미생물을 형질전환하고 그들을 사용하여 TFPI 및 TFPI 유사체를 발현하는 다양한 기술들을 이용할 수 있다. 다음은 가능한 접근법들에 대한 단순한 예시이다. TFPI DNA 서열이 분리되어 적합한 대조 서열에 연결되어야 한다. TFPI DNA 서열은 미국특허 No. 4,966,852에 나타나며, Boehringer-Mannheim 같은 회사로부터 시중에서 입수할 수 있는 pUNC13 또는 pBR3822와 같은 플라스미드에 편입될 수 있다. 일단 TFPI DNA가 벡터로 삽입되면, 그것은 적합한 숙주에 클로닝될 수 있다. DNA는 미국특허 No. 4,683,202(Mullis) 및 미국특허 No. 4,683,195(Mullis 등)에 나타낸 것들과 같은 기술에 의해 증폭될 수 있다. TFPI cDNA는 간암세포(HepG2 및 SKHep 같은)와 같은 세포를 유도하여 TFPI mRNA를 제조한 후, mRNA를 확인 및 분리하고, 그것을 역으로 변역하여 TFPI의 cDNA를 얻음으로써 얻어질 수 있다. 발현 벡터가 E. coli와 같은 숙주로 형질전환된 후, 이 박테리아가 발효되고, 단백질이 발현될 수 있다. 박테리아가 바람직한 원핵 미생물이며, E. coli가 특히 바람직하다. 본 발명에 유용한 바람직한 미생물은 부다페스트 조약하에 1984년 2월 14일자로 ATCC에 기탁된 E. coli K-12, 균주 MM294(수탁번호 39607)이다.

다세포 유기체로부터 유래된 진핵 숙주세포 배양물에서 폴리펩티드를 암호화하는 유전자를 발현시키는 것도 물론 가능하다. 예를 들어, Tissue Culture,1973, Cruz 및 Patterson, 편저, Academic Press 참조. 유용한 포유동물의 셀라인은 쥐 골수종 N51, VERO, HeLa 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, COS, C127, Hep G2, 및 SK Hep를 포함한다. 또한, TFPI 및 TFPI 유사체는 바쿨로바이러스-감염된 곤충세포에서 발현될 수 있다(상기 언급된 미국특허 No. 4,847,201 참조). 또한, Pedersen 등, 1990, J. of Biological Chemistry, 265:16786-16793 참조. 진핵세포용 발현 벡터는 보통, 포유동물 세포와 비교할 수 있는 프로모터 및 대조 서열을 포함하는데, 예를 들어 유인원 바이러스 40(SV40)에서 유래된 통상 사용되는 초기 및 후기 프로모터(Fiers, 등, 1978, Nature, 273:113), 또는 폴리오마, 아데노바이러스 2, 소 유두종 바이러스, 또는 조류 육종 바이러스로부터 유래된 것들과 같은 다른 바이러스 프로모터, 또는 면역글로불린 프로모터 및 열충격 프로모터가 있다. 포유동물 세포 숙주 시스템 형질전환에 대한 일반적인 양태는 Axel, 미국특허 No. 4,399,216에 의해 설명되었다. 지금은 "인핸서" 영역이 발현을 최적화하는데 중요하다는 것도 밝혀졌는데, 이들 영역은 일반적으로 프로모터 영역의 상류에서 발견된 서열이다. 필요하다면 복제 기원이 바이러스원으로부터 얻어질 수 있다. 그러나, 염색체로의 통합이 진핵세포에서 DNA를 복제하는 통상적인 메카니즘이다. 식물세포도 이제 숙주로서 이용할 수 있으며, 노팔린 신타제 프로모터 및 폴리아데닐화 신호 서열(Depicker, A., 등, 1982, J. Mol. Appl.Gen. 1:561)과 같은 식물세포와 비교할 수 있는 대조 서열을 이용할 수 있다. 식물세포의 형질전환 방법 및 벡터는 WO 85/04899에 개시되었다.

포유동물 세포에서 발현된 TFPI 및 TFPI 유사체의 정제에 사용될 수 있는 방법은 헤파린-Sepharose, MonoQ, MonoS, 및 역상 HPLC 크로마토그래피의 연속적 사용을 포함한다. Pedersen 등, 상동; Novotny 등 1989, J. Biol. Chem. 264:18832-18837; Novotny 등, 1991, Blood, 78:394-400; Wun 등, 1990, 3. Biol. Chem. 265:16096-16101; Broze 등, 1987, PNAS (USA), 84: 1886-1890; 미국특허 No. 5,106,833; 및 미국특허 No. 5,466,783 참조. 이들 참고자료는 포유동물 생성된 TFPI를 정제하는 다양한 방법을 설명한다.

또한, TFPI는 마우스 C127 세포(Day 등, Blood 76, 1538-45, 1990), 아기 햄스터 신장세포(Pedersen 등, 1990), 중국 햄스터 난소세포 및 사람 SK 간암세포 같은 포유동물 세포 숙주를 사용하여 재조합 당화 단백질로서 발현될 수 있다. C127 TFPI는 동물 연구에서 사용되었는데, 토끼에서 조직인자-유도 혈관내 응고의 억제 (Day 등, 상동), 개에서 혈전용해 후 동맥 재폐색의 방지(Haskel 등, Circulation 84: 821-827(1991)), 그리고 개코원숭이에서 E. coli 폐혈증 모델에서의 사망률의 감소(Creasey 등, J. Clin. Invest. 91:2850(1993))에 효과적인 것으로 나타났다. ala-TFPI는 E. coli 숙주세포를 사용하여 재조합 비-당화 단백질로서 발현될 수 있다. E. coli에서 생성된 재조합 단백질의 시험관내 재폴딩에 의해 고도로 활성인 ala-TFPI를 얻는 방법이 설명되었다. 예를 들어, WO 96/40784 참조.

또한, TFPI 및 TFPI 유사체는 박테리아나 효모에서 생성된 후 정제될 수 있다. 일반적으로, 미국특허들 No. 5,212,091; 6,063,764; 및 6,103,500 또는 WO 96/40784에 나타낸 과정이 사용될 수 있다. ala-TFPI 및 다른 TFPI 유사체들은 본원에 참고자료로 수록된 WO 96/40784 및 Gustafson 등, Prot. Express. Pur. 5:233 (1994)에 따라서 정제되고 용해되고 재폴딩될 수 있다. 예를 들어, WO 96/40784의 실시예 9에 따라 제조되었을 때, 총 단백질의 약 85중량% 내지 90중량%를 성숙한 알맞게 폴딩된 생물학적으로 활성인 ala-TFPI를 함유하며, 이 중 약 10% 내지 15%가 하나 이상의 산화된 메티오닌 잔기를 갖는 ala-TFPI의 제조물이 얻어진다. 이들 산화된 형태는 프로트롬빈 분석에 의해 측정된 유도체화되지 않은 ala-TFPI의 생물학적 할성과 동등한 생물학적 활성을 가지며, 본원에 개시된 발명에서도 활성일 것으로 예상된다. 나머지 물질은 2량체화된 형태, 덩어리진 형태, 및 아세틸화된 형태를 포함하는 다양하게 변형된 형태의 ala-TFPI를 포함한다.

TFPI 및 TFPI 유사체는 상당한 수의 시스테인 잔기를 가질 수 있으며, 미국특허 No. 4,929,700에 나타낸 과정이 TFPI 재폴딩에 관련된다. TFPI와 유사체는 상기 언급된 것들과 같은 다양한 크로마토그래피법에 의해 완충액으로부터 정제될 수 있다. 원한다면 미국특허 4,929,700에 나타낸 방법이 사용될 수 있다. 사람에게 투여하는데 적합한 순도 및 활성 수준을 가져오는 모든 방법이 TFPI 및 TFPI 유사체를 정제하는데 사용될 수 있다.

치료 방법 및 조성물

일반적으로, TFPI 및 TFPI 유사체는 TNF, IL-1 또는 다른 시토킨에 의해 초래된 조직인자 발현과 그에 따른 TF 활성의 상향조절로 인해 발생하는 질환들을 치료 또는 예방하는데 유용하다. TFPI 투여, 특히 저용량 TFPI 투여는 환자에서 IL-6과 같은 시토킨의 농도를 저하시킬 수 있다. 저용량 TFPI 투여는 일반적으로 중증 폐렴 같은 급성 및 만성 염증성 상태를 포함하는, 염증 및 응고 비정상성을 치료하는데 유용하다.

"중증 폐렴"은 미국인후협회에 의해 제시된 가이드라인에 따라 정의된다. 보다 명확히, 중증 폐렴은 폐렴의 진단과 a) 2개의 주요 기준 중 1개, b) 3개의 이차적 기준 중 2개, 또는 c) 영국인후협회(Thorax 2001; 56[suppl IV]: 1-64)의 4개의 기준 중 2개를 만족할 것을 요구한다. 주요 기준은 1) 기계호흡의 필요 및 2) 폐혈쇼크 또는 4시간 미만 동안 승압제의 필요이다. 이차적 기준은 1) 수축기 혈압 ≤90mmHg, 2) 다엽폐렴 및 3) 저산소혈증 기준(PaO₂/FiO₂) <250. 영국인후협회의 기준은 1) 호흡수≥30호흡/분, 2) 확장기 혈압 ≤60mmHg, 3) 혈액요소질소(BUN) >7.0mM(>19.6mg/dL) 및 4) 착란이다. 본 분야에서 이해되는 바와 같이, 저산소혈증 기준(PaO₂/FiO₂)은 흡기산소분율에 대한 동맥산소의 부분압력으로 간주되며, 가스교환의 손상 수준을 나타낸다.

바람직하게, 중증 폐렴을 가진 환자는 본 분야에 공지된 어떤 수단들에 의해 증명할 수 있는 감염을 가진다. 이들 방법은, 제한은 없지만 혈액 배양물이나 다른 정상정으로 멸균된 체액 또는 조직에서, 예를 들어 GRAM 염색, 배양, 조직화학염색, 면역화학분석, 또는 핵산분석에 의한 병원성 유기체의 검출을 포함한다. 또한, 증명할 수 있는 감염은 전신 항-감염 요법에 대한 이유를 구성하는 폐렴의 진단과 일치하는 흉부 방사선사진 뿐만 아니라, 제한은 없지만 호흡수 >/=30/분 또는 PaO₂/FiO₂ <250로의 증가, 혈압 감소, 및 체온 증가를 포함하는 감염의 어떤 임상적 증상에 의해 증명될 수 있다.

TFPI 및 TFPI 유사체의 조제물

TFPI 및 TFPI 유사체의 조제물은 정맥내 주입에 의해 투여된다. 본질적으로 연속 정맥내 주입이 바람직하다. 이 투여를 달성하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 주입은 중추라인 또는 말초라인을 통해 수행될 수 있다. 용량율의 큰 변동은 피해야 하지만, 투여된 TFPI의 결과의 혈장 수준이, 본 발명의 바람직한 구체예에 따르는 일정한 용량율로의 연속 주입으로부터 예상되는 것의 20% 이내라면 본 발명의 용량율로부터의 단기적 벗어남은 허용된다.

환자에게 투여하기 전에, 조제성분들이 TFPI 및 TFPI 유사체에 첨가될 수도 있다. 액상 조제물이 바람직하다. TFPI 및 TFPI 유사체는 다른 조제성분들을 사용하여 다른 농도로, TFPI 단백질의 투여 경로, 용해도 및 안정성과 양립가능한 어떤 생리학적으로 적합한 pH로 조제될 수도 있다. 정맥내 주입을 위한 바람직한 조제물은 약 0.6 mg/ml 이하의 ala-TFPI, 300mM 이하의 아르기닌 염산염, 및 pH 5.0-6.0의 시트르산 나트륨 완충액을 포함한다. 아르기닌, NaCl, 수크로스, 및 만니톨과 같은 어떤 용질은 ala-TFPI를 용해하고 및/또는 안정화시키는 역할을 한다. WO 96/40784 참조. 정맥내 주입을 위한 특히 바람직한 조제물은 약 0.15mg/ml의 ala-TFPI, 300mM의 아르기닌 염산염, 및 pH 5.5의 20mM 시트르산 나트륨을 함유한다. TFPI 및 TFPI 유사체는 또한 선택적으로 0.005% 또는 0.01%(w/v) 폴리소르베이트 80(Tween 80)과 함께 pH 5.5-7.2의 150mM NaCl 및 20mM 인산나트륨 또는 다른 완충액중에 약 0.15mg/ml 이하의 농도로 조제될 수 있다. 다른 조제물은 150mM NaCl, 또는 8%(w/v) 수크로스, 또는 4.5%(w/v) 만니톨을 함유하는 pH 5.5의 10mM 아세트산 나트륨중에 약 0.5mg/ml 이하의 TFPI, 또는 TFPI 유사체를 함유한다. TFPI 및 TFPI 유사체는 또한 고급염을 사용하여 수 mg/ml 이하의 더 높은 농도로 조제될 수 있다. 예를 들면, 한 조제물은 pH 7.0의 500mM NaCl 및 20mM 인산나트륨중에 ala-TFPI를 약 6.7mg/ml 이하로 함유한다.

TFPI 및 TFPI 유사체의 조제성분의 더 이상의 예들은 오일, 폴리머, 비타민, 탄수화물, 아미노산, 염, 완충액, 알부민, 계면활성제, 또는 벌크화제를 포함한다. 바람직하게, 탄수화물은 단당류, 이당류 또는 다당류와 같은 당 또는 당알콜을 포함한다. 당류 또는 글루칸은 프룩토스, 덱스트로스, 락토스, 글루코스, 만노스, 크실로스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀룰란, 덱스트린, 알파 및 베타 시클로덱스트린, 용해성 전분, 히드록시에틸 전분 및 카르복시메틸셀룰루스 또는 그들의 혼합물을 포함할 수 있다. 수크로스가 가장 바람직하다. 당알콜은 OH기를 갖는 C₄ 내지 C₈ 탄화수소로 정의되며, 갈락티톨, 이노시톨, 만니톨, 크실리톨, 솔비톨, 글리세롤 및 아라비톨을 포함한다. 만니톨이 가장 바람직하다. 상기한 이들 당 및 당알콜은 개별적으로 또는 조합하여 사용될 수도 있다. 당 또는 당알콜은 수성 제제에 용해성인 한 사용량에 고정된 제한은 없다. 바람직하게, 당 또는 당알콜의 농도는 1.0w/v% 내지 7.0w/v%이며, 더 바람직하게는 2.0 내지 6.0w/v%이다.

바람직하게, 아미노산은 카르니틴, 아르기닌, 및 베타인의 좌선성(L) 형태를 포함한다. 그러나, 다른 아미노산이 첨가될 수도 있다. 바람직한 폴리머는 평균분자량이 2,000 내지 3,000인 폴리비닐피롤리돈(PVP) 또는 평균분자량이 3,000 내지 5,000인 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 동결건조 전에 또는 복원 후에 용액의 pH 변화를 최소화하기 위해서 조성물에 완충액을 사용하는 것이 또한 바람직하다. 대부분의 어떤 생리학적 완충액도 사용될 수 있으나, 시트르산염, 인산염, 숙신산염, 및 글루탐산염 완충액 또는 그들의 혼합물이 바람직하다. 바람직하게, 완충액의 농도는 0.01 내지 0.3molar이다. 조제물에 사용될 수 있는 계면활성제는 EP No. 270,799 및 268,110에 나타나 있다.

추가로, TFPI 및 TFPI 유사체는, 예를 들어 그것의 혈중 반감기를 증가시키기 위해, 중합체와의 공유 콘쥬게이트에 의해서 화학적으로 변형될 수 있다. 그들을 펩티드에 부착시키기 위한 바람직한 중합체와 방법은 미국특허 No. 4,766,106, 4,179,337, 4,495,285, 및 4,609,546에 교시되어 있다. 바람직한 중합체는 폴리옥시에틸화 폴리올 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. PEG는 실온에서 수용성이며, 일반식: R(O--CH₂--CH₂)_n--O--R를 가지고, 여기서 R은 수소이거나, 또는 알킬 또는 알칸올기 같은 보호기가 될 수 있다. 바람직하게, 보호기는 1 내지 8개 탄소를 가지며, 더 구체적으로 그것은 메틸이다. 기호 n은 양의 정수이고, 바람직하게 1 내지 1,000, 더 바람직하게는 2 내지 500이다. PEG는 1000 내지 40,000, 더 바람직하게는 2000 내지 20,000, 가장 바람직하게는 3,000 내지 12,000의 평균분자량을 가진다. 바람직하게, PEG는 적어도 하나의 히드록시기를 가지며, 더 바람직하게는 말단 히드록시기를 가진다. 이 히드록시기는 억제제상의 유리 아미노기와 반응하도록 바람직하게 활성화된다. 그러나, 반응성기의 형태와 양은 본 발명의 공유 콘쥬게이트된 PEG/TFPI를 달성하기 위해 다양할 수도 있다.

또한, 수용성 폴리옥시에틸화 폴리올이 본 발명에서 유용하다. 그들은 폴리옥시에틸화 솔비톨, 폴리옥시에틸화 글루코스, 폴리록시에틸화 글리세롤(POG) 등이다. POG가 바람직하다. 한가지 이유는 폴리옥시에틸화 글리세롤의 글리세롤 골격이, 예를 들어 모노-, 디- , 트리글리세리드에서 동물 및 사람에서 자연 발생의 같은 골격이라는 것이다. 그러므로, 이 분기는 신체내에서 반드시 외래 약제로서 보여지지는 않을 것이다. POG는 PEG와 같은 범위의 바람직한 분자량을 갖는다. POG의 구조는 Knauf 등, 1988, J. Bio. Chem. 263:15064-15070에 나타나 있고, POG-단백질 콘쥬게이트에 대한 논의는 미국특허 No. 4,766,106에서 볼 수 있다.

TFPI 또는 TFPI 유사체의 액체 제약 조성물이 제조된 후, 그것은 변성을 방지하고 멸균상태를 보존하기 위해 동결건조될 수 있다. 액체 조성물을 동결건조하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 사용하기 바로 전에 조성물은 추가 성분을 포함할 수 있는 멸균 희석용액(예를 들어, 링거액, 증류수 또는 멸균 식염수)에서 복원될 수 있다. 복원시 조성물은 바람직하게 연속 정맥내 주입에 의해 피험자에게 투여된다.

TFPI 및 TFPI 유사체의 투약량

TFPI 또는 TFPI 유사체는 중증 폐렴을 치료 및 예방하는데 치료적으로 효과적인 농도로 투여된다. 그러한 용량은 또한 다른 급성 또는 만성 염증, 및 일반적으로 시토킨이 조직인자 발현을 상향조절하는 질환에 대해서도 효과적이다. 이 목표를 달성하기 위해서, TFPI 또는 TFPI 유사체는 바람직하게 정맥내 투여된다. 이 런 투여를 달성하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 일반적으로, TFPI 또는 TFPI 유사체는 1㎍/kg 내지 20mg/kg, 더 바람직하게 20㎍/kg 내지 15mg/kg, 가장 바람직하게 1 내지 10mg/kg으로 주어진다.

상기 투약량은 일반적으로 단일 또는 분리된 용량으로 숙주에게 투여되는 총 일일 용량이, 예를 들어 일일 약 2 내지 약 15mg/kg체중, 바람직하게는 약 4 내지 약 10mg/kg의 양이 될 수 있도록 적어도 약 1일, 통상 수 일의 기간에 걸쳐서 투여된다. 투약 단위 조성물이 그러한 양들이나 그의 약수를 함유함으로써 일일 용량이 조제될 수 있다. 1㎍/kg 내지 2mg/kg과 같은 더 적은 일일 투약량이 예방적 목적이나 다른 목적들에 유용할 수 있다. 단일 제형을 생성하기 위해서 담체 물질에 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료될 환자와 특정 투여 방식에 따라서 변할 것이다.

투약 섭생은 환자의 종류, 나이, 체중, 성별, 식이요법 및 의학적 상태, 상태의 중한 정도, 투여 경로, 활성, 효능, 약동학 및 독물학 프로필과 같은 약물학적 고려사항, 약물 송달 시스템이 이용되는지의 여부, 및 화합물이 약물 조합의 일부로서 투여되는지의 여부를 포함하는 다양한 요인들에 따라 선택된다. 따라서, 실제 사용되는 투약 섭생은 광범하게 변할 수 있으며, 그러므로 상기 제시된 바람직한 투약 섭생에서 벗어날 수도 있다. 바람직하게, TFPI 또는 TFPI 유사체의 용량은 약 0.66mg/kg/hr의 ala-TFPI의 용량율과 동등한 용량율을 초과하지 않아야 한다.

저용량 투여

TFPI 또는 TFPI 유사체가 약 0.00025mg/kg/hr(0.00417㎍/kg/분) 이상 약 0.0 50mg/kg/hr(0.833㎍/kg/분) 미만의 용량율로 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 용량율로 주어졌을 때, 중증 폐렴의 치료에서 그 효능이 보유되며, 출혈 같은 불리한 부작용이 최소화된다. 효능과 안정성의 조합을 개선하기 위해서 용량율은 바람직하게 약 0.010mg/kg/hr(0.167㎍/kg/분) 이상 약 0.045mg/kg/hr(0.833㎍/kg/분) 미만의 ala-TFPI의 용량율과 동등하거나, 또는 0.020mg/kg/hr 이상 약 0.040mg/kg/hr 미만의 ala-TFPI의 용량율과 동등하거나, 가장 바람직하게는 약 0.025mg/kg/hr(0.4 17㎍/kg/분)의 ala-TFPI의 용량율과 동등하다. 투여 경로는 일반적으로 정맥내 투여이며, 역속 정맥내 주입이 바람직하다. 주입은 적어도 약 72, 96, 120 또는 240시간 동안 투여될 수 있다. 바람직하게, 연속 주입은 3 내지 8일, 더 바람직하게 3 내지 6일, 가장 바람직하게 약 4일간 투여된다.

"연속 주입에 의한" 투여는, 정해진 기간의 대부분 동안 실질적인 중단 없이 대략 정해진 속도로 주입이 유지된다는 의미이다. 또는 달리, 간헐적 정맥내 주입이 사용될 수 있다. 만일 간헐적 주입이 사용된다면, 연속 주입에 대해 상기 설명된 용량율과 동등한 시간-평균 용량율이 사용되어야 한다. 이에 더하여, 간헐적 주입 프로그램은 연속 주입을 사용하여 얻어진 최대 농도를 20% 이상으로 넘지 않는 최대 농도를 가져와야 한다. 환자에서 불리한 반응, 특히 출혈을 수반하는 부작용을 피하기 위해, 용량율은 약 0.050mg/kg/hr로 ala-TFPI를 연속 정맥내 주입하는 것과 동등한 용량율 미만이어야 한다.

용량율 및 총용량을 포함하는 상기 설명된 모든 용량은 프로트롬빈 분석을 사용하여 단백질 농도 및 생물학적 활성을 결정하는데 있어서의 오차로 인해 실제에서는 10% 이하의 변동이 있다. 따라서, 본원에 기재된 용량보다 10%까지 더 많거나 10% 더 적은 어떤 실제 투여된 용량이 기재된 용량과 동등한 것이라고 생각된다. 이런 이유로, 모든 용량은 "약" 특정 용량으로서 기재되었다. 예를 들어, "약 0.025mg/kg/hr"로서 설명된 용량은 0.0225 내지 0.0275mg/kg/hr 범위의 어떤 실제 용량과 동등한 것으로 생각된다.

또한, TFPI 또는 TFPI 유사체의 일시 주사나 또는 간단히 더 높은 주입율이 저용량 TFPI 투여에 이어서라면 본 발명의 실시에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 일시 주사나 더 높은 주입율은 환자의 순환에서 투여된 TFPI나 TFPI 유사체의 평형 시간을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 그렇게 해서, TFPI의 최종 정류상태 혈장 수준에 더 빠르게 도달할 수 있고, TFPI의 수용체가 더 빨리 포화될 수 있다. 2시간 동안 약 0.025mg/kg/hr로 사람에게 ala-TFPI를 투여하는 것은 혈장 TFPI(더해서 ala-TFPI) 수준을 약 80ng/ml 내지 약 125ng/ml로 증가시키거나 또는 대략 50% 증가시킨다. 주입 속도가 증가되거나 일시 주사가 사용된다면 동일한 수준에 더 빨리 도달할 것이다. 더 높은 주입율은 정류상태가 얻어질 때까지 주입이 계속된다면 더 높은 수준을 가져올 것이다. 폐혈증으로 고통 받는 환자에서 약 0.050 mg/kg/hr의 ala-TFPI의 투여에 대한 정류상태 수준은 약 300ng/ml인 것으로 밝혀졌고, 약 0.33나 약 0.66mg/kg/hr의 ala-TFPI의 투여에 대해서는 약 적어도 2㎍/ml으로 밝혀졌다.

단일 연속 주입이나 분리된 주입 용량으로 숙주에게 투여되는 총 일일 용량은, 예를 들어 약 0.006mg/kg/일 이상 내지 약 1.2mg/kg/일 미만의 ala-TFPI 투여와 동등한, 더 통상적으로 약 0.24mg/kg/일 내지 약 1.2mg/kg/일의 ala-TFPI 투여와 동등한, 바람직하게는 약 0.6mg/kg/일의 ala-TFPI 투여와 동등한 양이다. 이 범위내에서 더 적은 양이 예방적 목적이나 다른 목적들에 유용할 수 있다. 또한, 본 발명의 용량계획 프로토콜은 환자에게 투여되는 총용량으로 표현될 수 있다. 총용량은 주입량과 총주입시간의 수학적 소산이다. 예를 들어, ala-TFPI에 대해 약 0.025mg/kg/hr의 바람직한 용량율과 96시간의 바람직한 주입시간에서, 총용량은 체중 kg 당 약 2.4mg ala-TFPI이다. 본 발명에 따라서 투여된 TFPI의 총용량은 약 0.75㎍/kg 이상 약 4.8mg/kg 미만의 ala-TFPI와 동등하다. 바람직하게, 총용량은 약 1mg/kg 이상 약 4.8mg/kg의 ala-TFPI와 동등하다. 더 바람직하게는, 총용량은 약 2.4mg/kg의 ala-TFPI와 동등하다.

투약 섭생을 조정하는데 사용될 수 있는 다른 요인은 각 환자의 응고 기능이며, 이것은 전형적으로 프로트롬빈 시간(PT) 분석이나 국제 정상화 비율(INR)을 사용하여 측정된다. INR은 표준화된 PT 분석이며, 여기서 분석은 국제기준 트롬보플라스틴 시약에 대해 검정된다. 예를 들어, R. S. Riley 등, J. Clin. Lab. Anal. 14:101-114(2000) 참조. 건강한 사람 지원자에서 ala-TFPI에 대한 INR 반응은 보여진 혈장 농도의 범위에 걸처 대략 직선이다(도 3). INR에서 전체적 변화는 혈장 ala-TFPI 농도의 1㎍/ml 증가 당 1.2 단위이다.

약역학 모델에서, ala-TFPI에 대한 INR 반응은 로그-직선 모델에 의해 가장 잘 설명되는데, 여기서 로그값 INR은 ala-TFPI 혈장 농도와 직선 관계에 있었다. 반응의 로그-직선성은 베이스라인에서 상승된 INR을 가진 피험자는 유사한 수준의 혈중 ala-TFPI를 갖는 낮은 베이스라인 값을 가진 피험자에 비해 더 큰 항응고 반응을 경험할 것 같다는 의미이다.

mg/kg/hr에 기준한 용량율 및 총 일일 용량을 포함하는 상기 설명된 용량계획 섭생은 "기준 ala-TFPI의 투여와 동등한" 용량으로서 표현된다. 이것은 그것들이 성숙한 100% 순수한(단백질 기준으로) 알맞게 폴딩된 생물학적으로 활성인 비-당화된 ala-TFPI로 정의된 "기준 ala-TFPI"의 용량에 대한 정규화에 의해서 정량적으로 결정된다는 의미이다. ala-TFPI는 SEQ ID NO:2에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 TFPI의 유사체이다. 성숙한 전길이 TFPI 및 그의 유사체를 포함하는 다른 형태의 TFPI가 또한 본 발명에서 사용될 수 있다. ala-TFPI 이외의 다른 형태의 TFPI와 ala-TFPI 또는 다른 TFPI 유사체의 100% 미만으로 순수한 제조물을 사용하여 본 발명을 실시하는데 적합한 용량 범위를 결정하기 위해서, 기준 ala-TFPI에 대해 본원에 설명된 용량 범위가 특정한 형태의 TFPI에 고유한 생물학적 활성에 기초하여 조정될 수 있으며, 제조물의 생화학적 순도에 기초하여 더 조정될 수 있다.

TFPI 또는 TFPI 유사체의 고유한 생물학적 활성은 성숙한 100% 순수한 알맞게 폴딩된 TFPI 또는 TFPI 유사체의 프로트롬빈 분석에 의해 정의되는 특이적 활성으로 간주한다. 따라서, 동등한 용량은 (기준 ala-TFPI 용량)/((상대 고유 활성)x (생화학적 순도))에 따라 계산되며, 상대 고유 활성은 (유사체의 고유 활성)/(기준 ala-TFPI의 고유 활성)으로 간주된다. 예를 들어, 특정 TFPI 유사체가 기준 ala-TFPI의 80%인 고유 생물학적 활성을 가진다면, 특정 TFPI 유사체에 대한 동등한 용량은 기준 ala-TFPI의 용량값을 0.8로 나눔으로써 얻어진다. 더 나아가, 환자에게 투여되는 조제물이, 예를 들어 단지 90% 생화학적으로 순수하다면, 즉 TFPI의 생화학적 활성이 없는 분자종을 10% 포함한다면, 용량값을 0.9로 나눔으로써 ala-TFPI의 기준 용량값의 추가적 보정이 수행된다. 따라서, ala-TFPI의 고유 활성의 80%를 가지며, 투여되는 것이 90% 생화학적으로 순수한, 가설상의 TFPI 유사체에 대해서, 0.025mg/kg/hr의 기준 ala-TFPI 투여와 동등한 용량율은 0.0347mg/kg/hr(즉, 0.025/(0.8x0.9))일 것이다.

또한, 동등한 용량은 고유 활성이나 생화학적 순도를 알지 못해도 상대 생물학적 활성을 결정함으로써 결정될 수 있다. 상대 생물학적 활성은 프로트로빈 시간 분석을 사용하여 특정 TFPI 유사체와 TFPI 생물학적 활성 표준을 비교함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 약 85%의 생물학적 활성 TFPI 분자종을 함유하는, WO 96/40784의 실시예 9의 방법에 따라서 생성된 ala-TFPI가 TFPI 생물학적 활성 표준으로서 사용될 수 있다. WO 96/40784의 실시예 9의 방법에 따라 생성된 ala-TFPI는 프로트롬빈 분석에서 기준 ala-TFPI 활성의 약 85%를 가진다. 프로트롬빈 시간 표준 곡선을 작도하는데 있어서, 응괴형성 시간의 로그값이 TFPI 농도의 로그값에 대해 작도된다. TFPI 생물학적 활성 표준이 기준 ala-TFPI 활성의 85%를 갖는 경우, 작도 전에 TFPI 생물학적 활성 표준의 농도에 0.85를 곱한다면 기준 ala-TFPI에 대한 것과 동등한 표준 곡선이 작성될 수 있으며, 이로써 작도된 활성은 100% 순수한 기준 ala-TFPI의 활성과 동등하게 된다. 특정 TFPI 유사체에 대한 응괴형성 시간이 표준 곡선과 비교되는 경우, 동등한 농도의 기준 ala-TFPI는 곡선을 벗어나서 판독될 수 있다. 또는 달리, 표준 곡선의 직선 부분의 기울기가 선형회귀분석에 의해 얻어진다면, 기울기는 기준 ala-TFPI에 상대적인 TFPI 생물학적 활성 표준의 활성에 기초하여 보정될 수 있다. 따라서, 특정한 TFPI 유사체의 상대 생물학적 활성은 기준 ala-TFPI 활성 대 유사체의 활성의 비와 동등하다. 예를 들어, 특정한 유사체가 기준 ala-TFPI 1.00㎍과 동일한 프로트롬빈 시간 활성을 야기하는데 1.43㎍을 요한다면, 유사체의 상대 생물학적 활성은 1.00/1.43, 또는 0.7이다. 이 유사체에 대해서, 기준 ala-TFPI 용량을 유사체의 상대 생물학적 활성으로 나눔으로써 기준 ala-TFPI 용량과 동등한 용량이 얻어진다. 예를 들어, 기준 ala-TFPI에 대한 0.025mg/kg/hr 용량은 유사체의 0.0357mg/kg/hr과 동등할 것이다(즉, 0.025/0.7).

TFPI 또는 TFPI 유사체는 유일한 활성의 항응고 약제로서 투여될 수 있는 반면에, 이들 분자는 또한 한가지 이상의 추가의 치료제와 조합하여 중증 폐렴의 치료에 조합요법을 제공할 수 있다. 이러한 추가의 치료제, 예를 들어 항내독소, 모노클로날 항체(예를 들면, 내독소-결합 모노클로날 항체)와 같은 항체와 항-TNF 쥐 모노클로날 항체와 같은 항-TNF 산물을 포함한다. TFPI 및 TFPI 유사체는 또한 인터루킨-I 수용체 길항제, 살균제/침투성 증가(BPI) 단백질, 면역자극제, PAF 길항제와 같은 항염증 활성을 갖는 화합물 및 세포부착 차단제(예를 들면 GPIIb/IIIa 억제제와 같은 항혈소판제)와 조합될 수 있다. 조합물로서 투여될 때 치료제는 동시에 또는 다른 때에 주어지는 별도의 조성물로서 조제될 수 있다. 바람직하게, 추가의 치료제는 동시에(즉, TFPI 또는 TFPI 유사체의 투여 기간 중에) 또는 TFPI 또는 TFPI 유사체의 투여 기간의 24시간 이내에(즉, TFPI 또는 TFPI 유사체의 투여기간의 개시 24시간 내에, 또는 끝난 후 24시간 내에) 주어진다. 추가의 치료제는 또한 TFPI 또는 TFPI 유사체와 함께 단일 조성물로서 주어질 수 있다.

TFPI 또는 TFPI 유사체는 또한 중증 폐렴을 치료하는데 효과적일 다른 약제와 조합하여 제공될 수 있다. 예를 들어, 다음의 것들, 즉 잠재적인 박테리아 감염을 치료할 수 있는 항생제, 박테리아 세포벽 성분에 대한 모노클로날 항체, 중증 폐렴 경로에 수반되는 시토킨과 복합체를 형성할 수 있는 수용체, 그리고 일반적으로 시토킨 또는 중증 폐렴 및/또는 그 증상들을 약화시키는 보체 단백질을 포함하는 다른 활성화되거나 또는 증폭된 생리학적 경로와 상호작용할 수 있는 어떤 약제나 단백질을 TFPI 또는 TFPI 유사체와 조합하여 투여할 수도 있다.

유용한 항생제는 베타-락탐 고리(페니실린), 글리코시드 결합의 아미노당(아미노글리코시드), 거대고리 락톤 고리(매크로리드), 나프타센카르복사니드의 폴리시클릭 유도체(테트라사이클린), 디클로로아세트산의 니트로벤젠 유도체, 펩티드(바시트라신, 그라미시딘, 및 폴리믹신), 콘쥬게이트 이중결합 시스템을 갖는 큰 고리(폴리엔), 술파닐리드로부터 유래된 설파제(술폰아미드), 5-니트로-2-푸라닐기(니트로푸란), 퀴놀론카르복실산(날리딕스산), 기타 등등의 일반적 부류의 것들을 포함한다. 다른 항생제 및 상기한 특정 항생제들의 더 많은 다양한 것들을 Encyclopedia of Chemical Technology, 3판, Kirk-Othymer(편저), 2권, 782-1036페이지 (1978) 및 3권, 1-78페이지, Zinsser, MicroBiology, 17판 W. Joldik 등(편저) 235-277페이지 (1980), 또는 Dorland's Illustrated Medical Dictionary, 27판, W. B. Saunders Company (1988)에서 볼 수 있다.

TFPI 또는 TFPI 유사체와 조합될 수 있는 다른 약제는 E5531와 같은 내독소 길항제(지질 A 유사체, Asai 등, Biol. Pharm. Bull. 22:432 (1999) 참조), 항응고 활성을 갖는 TF 유사체(예를 들어, Kelley 등, Blood 89:3219 (1997) 및 Lee & Kelley, J. Biol. Chem. 273:4149 (1998) 참조), 시토킨에 관한 모노클로날 항체, 예를 들어, IL-6 또는 M-CSF에 관한 이들 모노클로날 항체, 1989년 12월 15일에 출원된 미국출원 No. 07/451,218 참조, 그리고 TNF에 관한 모노클로날 항체(Cerami 등, 미국특허 No. 4,603,106 참조), 그 단백질을 생성한 세포로부터 성숙한 TNF 프로호르몬을 절단하는 단백질의 억제제(1989년 8월 16일자로 출원된 미국출원 No. 07/395,253 참조), IL-1의 길항제(1990년 5월 1일 출원된 미국출원 No. 07/517,276 참조), 인히빈과 같은 IL-6 시토킨 발현의 억제제(미국특허 5,942, 220 참조), 그리고 IL-1와 같은 여러가지 시토킨의 수용체 기제 억제제를 포함한다. 보체에 대한 항체 또는 보체에 대한 단백질 억제제, 예를 들면 CRI, DAF, 및 MCP도 또한 사용될 수 있다.

본 명세서에서 인용된 모든 특허, 특허출원 및 참고자료는 그들의 전체가 참고자료로 본원에 수록된다.

이제 본 발명은 특히 유리한 구체예를 제시하는 다음의 실시예들을 참조하여 예시될 것이다. 그러나, 이들 구체예는 본 발명의 예시이며 본 발명을 어떤 식으로도 제한하지 않는다는 것을 주지해야 한다.

실시예 1

중증 폐렴 환자의 ala-TFPI 치료

비교적 동질적인 군에서 ala-TFPI를 사용한 치료의 잠재적 영향을 탐구하기 위해 중증 폐렴을 가진 환자를 평가했다. 폐렴 환자는 연구자에 의해서 증명된 한 폐혈증원이 폐렴을 일으켰던 경우로 확인되었다. 다른 감염 부위가 또 존재할 수 있다. 감염과 화학적 휴유증을 구별하는 것이 어렵기 때문에, 흡인폐렴을 가진 환자는 포함시키지 않았다. 다음에, 폐렴으로 확인된 환자를 배양균 양성(배양균이나 그램 염색 같은 감염에 대한 어떤 증거), 또는 배양균 음성(음성 배양이나 배양되지 않음)에 따라 분류했다. E. coli에서 발현된 비-당화된 ala-TFPI의 제조물을 300mM L-아르기닌, 20mM 시트르산 나트륨을 함유하는 완충액(pH 5.5, 오스몰농도 560+/-110mOsm)중에 조제된 0.025mg/kg/h의 용량으로 연속 정맥내 주입하여 환자를 치료했다. 위약을 ala-TFPI 없이 동일한 완충액으로 구성했고, 연구 약물과 동일한 속도로 주입했다. 이들 분석 결과는 배양균 양성 폐렴을 가진 환자들에서 ala-TFPI 치료로 인한 양성 효과를 증명한다(표 1). 감염원의 증거가 없는 환자들은 음성 효과를 나타냈다.

폐렴 배양균 음성인 비-헤파린 군의 피험자의 수가 상대적으로 적다는 것을 유념해야 하지만, 그럼에도 INR의 배양균 음성 군에서는 사망률의 증가가 헤파린의 투여를 부가했는지에 관계 없이 환자 집단에서 나타나는 것으로 드러났다(표 3). 강한 양성 치료 효과가 배양균 양성/무 헤파린 코호트에서 관찰되었다.

실시예 2

질병 변수들의 베이스라인 심각도의 조사

관찰된 결과를 설명할 수 있는 군 불균형이 있었는지의 여부를 결정하기 위해서 질병 변수들의 다수의 베이스라인 심각도를 평가했다. 이들 자료는 배양 상태에 관련된 결과들에 있어서의 차이가 베이스라인의 불균형으로 인한 것은 아니라는 것을 나타낸다. 따라서, 이 결과들은 감염된 환자와 감염되지 않은 환자들 간의 생물학적 차이로 인한 TFPI 치료의 차별적 효과를 나타내는 것이 분명하다. 심각도 척도들(예를 들어, APACHE II 점수나 기관 기능장애 점수)이 위약과 동등하거나, 또는 TFPI로 치료된 폐렴 배양균 음성 군에서 더 낮았다는 사실에도 불구하고, 배양균 음성 군은 최고의 전체 사망률을 나타냈다(표 4).

IL-6은 폐혈증에서 초기에 상승되는 염증성 시토킨으로, 염증 반응의 강도를 반영하며 결과와 관련된다. 베이스라인에서 IL-6 수준은 폐렴으로 임상적으로 확인되었지만 감염에 대한 증거는 없는 환자들에서 더 낮다(표 5). 이는 증명된 폐렴의 감염원을 가진 환자와 명백한 감염원이 없는 환자들 간에 생물학적 차이가 있음을 시사한다. 역설적으로, 배양균 음성 TFPI 군은 가장 낮은 IL-6 수준을 가지지만 사망률은 가장 높다. 폐혈증 집단에서 IL-6 수준은 시간에 따라 하락한다. IL-6의 하락 속도는 TFPI로 치료된 폐렴 배양균 음성 피험자에서 감소된다(표 5). 이는 TFPI의 생물학적 효과가 감염을 갖는 환자와 감염이 없는 환자들에서 차이가 있을 수 있음을 시사한다.

실시예 3

감염 증거의 종류에 따른 중증 폐렴 환자들의 분석

상기 논의된 바와 같이, ala-TFPI 치료로 인한 전반적인 이점은 감염 확실성이 가장 높은 환자들, 즉 양성 혈액 배양을 가진 환자들에서 관찰되었다. 감염 증거의 종류에 따른 중증 폐렴 환자의 분석에서, ala-TFPI 치료로 인한 이점은 양성 혈액 배양을 가진 피험자와 다른 증거를 가진 피험자 양쪽에서 보여졌다(표 6). 이 효과는 균혈증 군, 즉 가장 높은 감염 확률을 가지거나, 대부분의 증명할 수 있는 감염원을 가진 군에서 가장 강했다.

이미 나타낸 것처럼, 감염의 증거(혈액 + "기타")을 가진 환자는 헤파린 부재하에서 TFPI 치료로부터 이득을 얻었다. 이 결과는 대부분, 폐렴 군에서 유래된 이점으로 인한 것이다(표 7). 이런 발견은 내인성 항응고제로부터의 이점이 중증 폐감염을 가진 환자들에서 가장 크다는 것을 나타내는 것 같다.

이질성을 더 제한하기 위해서, 앞으로의 시험은 사회감염성 폐렴(CAP)에 대해 집중될 수 있다. 병원에 있는 동안 폐렴이 발생한 환자(병원내 감염)는 병원성 유기체들이 집락을 이루고, 감염성 폐렴의 진단을 더 어렵게 만드는 다른 폐질환을 가질 가능성이 더욱 많다. 이에 더하여, CAP를 가진 환자는 병원내 폐렴을 가진 환자들에 비해 헤파린에 노출되었을 가능성이 더 적다. 치료 전의 병원 입원 기간에 따라 자료를 분석했을 때, 2일 이상 입원한 환자들(병원내 감염)에 비하여 2일 이하로 입원한 배양균 양성 환자들에 대해 유사한 이점이 기록되었다. 배양균 음성 환자들에서의 음성 효과는 주로 병원내 감염 군에서 보여졌다(표 8).

본 발명은 특정한 구체예를 참조하여 설명되었다. 그러나, 본 출원은 첨부된 청구항의 정신과 범위를 벗어나지 않는 범위에서 당업자에 의해 만들어질 수 있는 변화와 치환들을 망라하도록 의도된다.

<110> Chiron Corporation <120> Treatment of Severe Pneumonia by Administration of Tissue Factor Pathway Inhibitor(TFPI) <150> US 60/328,806 <151> 2001-10-15 <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 276 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu 1 5 10 15 Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp 20 25 30 Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr 35 40 45 Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn 50 55 60 Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp Asn 65 70 75 80 Ala Asn Arg Ile Ile Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp Phe 85 90 95 Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg 100 105 110 Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly 115 120 125 Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys 130 135 140 Asn Ile Cys Glu Asp Gly Pro Asn Gly Phe Gln Val Asp Asn Tyr Gly 145 150 155 160 Thr Gln Leu Asn Ala Val Asn Asn Ser Leu Thr Pro Gln Ser Thr Lys 165 170 175 Val Pro Ser Leu Phe Glu Phe His Gly Pro Ser Trp Cys Leu Thr Pro 180 185 190 Ala Asp Arg Gly Leu Cys Arg Ala Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Tyr Asn 195 200 205 Ser Val Ile Gly Lys Cys Arg Pro Phe Lys Tyr Ser Gly Cys Gly Gly 210 215 220 Asn Glu Asn Asn Phe Thr Ser Lys Gln Glu Cys Leu Arg Ala Cys Lys 225 230 235 240 Lys Gly Phe Ile Gln Arg Ile Ser Lys Gly Gly Leu Ile Lys Thr Lys 245 250 255 Arg Lys Arg Lys Lys Gln Arg Val Lys Ile Ala Tyr Glu Glu Ile Phe 260 265 270 Val Lys Asn Met 275 <210> 2 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ala Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu 1 5 10 15 Leu Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp 20 25 30 Asp Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe 35 40 45 Thr Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln 50 55 60 Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp 65 70 75 80 Asn Ala Asn Arg Ile Ile Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp 85 90 95 Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr 100 105 110 Arg Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr 115 120 125 Gly Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys 130 135 140 Lys Asn Ile Cys Glu Asp Gly Pro Asn Gly Phe Gln Val Asp Asn Tyr 145 150 155 160 Gly Thr Gln Leu Asn Ala Val Asn Asn Ser Leu Thr Pro Gln Ser Thr 165 170 175 Lys Val Pro Ser Leu Phe Glu Phe His Gly Pro Ser Trp Cys Leu Thr 180 185 190 Pro Ala Asp Arg Gly Leu Cys Arg Ala Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Tyr 195 200 205 Asn Ser Val Ile Gly Lys Cys Arg Pro Phe Lys Tyr Ser Gly Cys Gly 210 215 220 Gly Asn Glu Asn Asn Phe Thr Ser Lys Gln Glu Cys Leu Arg Ala Cys 225 230 235 240 Lys Lys Gly Phe Ile Gln Arg Ile Ser Lys Gly Gly Leu Ile Lys Thr 245 250 255 Lys Arg Lys Arg Lys Lys Gln Arg Val Lys Ile Ala Tyr Glu Glu Ile 260 265 270 Phe Val Lys Asn Met 275

Claims

중증 폐렴을 가지거나 그럴 위험이 있는 환자에게 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 포함하는 중증 폐렴을 치료 또는 예방하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 환자는 증명할 수 있는 감염을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 약 0.66mg/kg/hr 미만의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 용량율로 연속 정맥내 주입에 의해 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4 항에 있어서, 상기 용량율은 약 0.00025 내지 약 0.050mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등하며, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체는 적어도 약 72시간 동안 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 용량율은 약 0.010 내지 약 0.045mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 것을 특징으로 하는 방법.
제 6 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 6 항에 있어서, 상기 용량율은 약 0.025mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 것을 특징으로 하는 방법.
제 8 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 또는 상기 TFPI 유사체는 적어도 약 96시간 동안 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 10 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 10 항에 있어서, 약 0.024 내지 약 4.8mg/kg의 총용량으로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 총용량을 제공하도록 연속 정맥내 주입에 의해 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 12 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 10 항에 있어서, 약 0.025mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 용량율로 연속 정맥내 주입에 의해 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 14 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 약 0.006mg/kg 내지 약 1.2mg/kg의 일일 용량으로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 일일 용량을 제공하도록 연속 정맥내 주입에 의해 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 SEQ ID NO:1의 아미노산 19-89로 구성된 첫번째 Kunitz 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 SEQ ID NO:1의 아미노산 90-160으로 구성된 두번째 Kunitz 도메인을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 SEQ ID NO:1의 아미노산 1-160을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 SEQ ID NO:1의 아미노산 90-160으로 구성된 두번째 Kunitz 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 21 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 TFPI 또는 TFPI 유사체를 포함하는 동결건조 조성물로부터 제조하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 23 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 아르기닌을 포함하는 조제물로서 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 25 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 시트르산염을 포함하는 조제물로서 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 27 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체는 약 300mM 아르기닌 염산염과 약 20mM 시트르산 나트륨을 포함하는 pH 약 5.5의 조제물중에서 약 0.15mg/ml의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 29 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체의 투여와 동시에 또는 24시간 이내에, 항생제, 항체, 내독소 길항제, 항응고 활성을 갖는 조직인자 유사체, 면역자극제, 세포부착 차단제, 헤파린, BPI 단백질, IL-1 길항제, 파파제(PAF 효소 억제제), TNF 억제제, IL-6 억제제, 및 보체의 억제제로 구성되는 군에서 선택된 추가 제제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 31 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 31 항에 있어서, 상기 추가 제제는 항체이고, 상기 항체는 TNF, IL-6, 및 M-CSF로 구성되는 군에서 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 33 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
환자에게 (i) TFPI 또는 TFPI 유사체와 (ii) 항생제, 모노클로날 항체, 시토킨 억제제, 및 보체 억제제로 구성되는 군에서 선택된 추가 제제를 투여하는 것을 포함하는 중증 폐렴의 치료 방법.
제 35 항에 있어서, 상기 TFPI 유사체는 비-당화된 ala-TFPI인 것을 특징으로 하는 방법.
제 35 항에 있어서, 상기 환자는 증명할 수 있는 감염을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제 35 항에 있어서, 약 0.66mg/kg/hr 미만의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 용량율로 연속 정맥내 주입에 의해 상기 TFPI 또는 TFPI 유사체를 투여하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 38 항에 있어서, 상기 용량율은 약 0.00025 내지 약 0.050mg/kg/hr의 용량율로 기준 ala-TFPI를 투여하는 것과 동등한 것을 특징으로 하는 방법.