KR20040065237A - 동물 사료 - Google Patents

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KR20040065237A KR10-2004-7008837A KR20047008837A KR20040065237A KR 20040065237 A KR20040065237 A KR 20040065237A KR 20047008837 A KR20047008837 A KR 20047008837A KR 20040065237 A KR20040065237 A KR 20040065237A
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Abstract

본 발명은 전분을 포함한 사료에서 사용되는 효소를 포함한 구성성분에 관한 것으로; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.

Description

동물 사료{Animal feed}
사료 내 전분의 소화율은 매우 변화하기 쉽고 전분과 전분 매트릭스 모두의 물리적 구조를 포함한 많은 인자에 따라 달라진다. 전체 식물 세포 내 또는 식량 매트릭스 내에 가둬진 전분 또는 충분히 젤라틴화되지 않은 전분 미립자는 α-아밀라제에 의해서만 매우 느리게 가수분해되고 따라서 소장 내에서 완전한 소화를 벗어난다. 소장 내에서 아밀라제에 의한 소화에 매우 저항적인 전분 및 전분 소화 생성물은 대장 내 미생물 발효에 대한 기질이 된다. 대장 내에서 발효된 전분으로부터의 열량은 전분이 소장 내에서 소화되고 흡수될 때 제공된 것 보다 더 작아서 동물에 있어서 유의적인 에너지 손실을 초래한다.
미생물 분해 전에 소장에서 분해된 전분은 장 상피에 의해 직접적으로 흡수되어 동물에게 사료의 에너지를 효과적으로 방출한다. 미생물 군락에 의해 분해된 전분 중에서 일부분의 에너지만이 동물에 의해 처리된다. 이는 용이하게 분해가능한 전분 및 저항성 전분 분해 효소에 의해 분해된 저항성 전분이 미생물계에 의해 분해된 저항성 전분보다 더욱 효과적으로 이용될 것이다.
De Schrijver et al.(6)은 저항성 전분의 양이 총 음식물의 약 6%의 양만이 존재할 때조차도 저항성 전분으로 사육된 래트 및 돼지가 용이하게 분해가능한 전분으로 사육된 것과 비교하여 유의적으로 더 낮은 명백한 불충분한 에너지 소화율을 지님을 보고하였다.
식이 섬유 및 저항성 전분은 단일위 동물의 결장 내에서 미생물계에 있어서의 기질이된다. 인간 건강에 대한 이들 기질의 중요성에 의해 인간 소장을 벗어나는 저항성 전분의 양을 조사하기 위해 광범한 조사가 수행되었다. 저항성 전분의 최상으로 수용된 효과는 결장암을 예방하는 휘발성 지방산, VFA(volatile fatty acids)의 형성이나 저항성 전분도 다른 유익한 효과를 지닌다. 돼지 및 래트에서도 이루어졌으나 가장 많이 보고된 시도는 인간에서 이루어졌다(대부분 일레오스토메이트(ileostomate), 예를 들어 (11)에 나타남).
시험관 내 모델 분해를 증명하는 다른 타입 전분의 생체 내(인간) 및 시험관 내 분해를 비교하는 조사는 신뢰할 수 있는 결과를 제공한다. 예를 들어 Silvester et al.(24)는 일레오스토메이트 내의 소장을 벗어난 저항성 전분의 양을 정량화하였고 이를 Englyst et al.(8)에 의해 기술된 방법에 기초한 시험관 내 소화와 비교하였다.
유사하게는, Englyst et al.에 의한 조사는 소장 내 소화를 벗어난 91% 저항성 전분 보다 더 큼을 나타내었다.
저항성 전분은 여러 다른 타입의 전분으로 구성된 것으로 정의되고 하나는 비가공 전분이다. 예를 들어 저항성 전분의 예로서 비가공 전분을 확인한 Muir et al(20)이 예시적으로 나타난다.
De Schrijver et al.(6)은 저항성 전분을 수용한 래트 내에서 유의적으로 저하된 노폐물 소호가능 및 대사가능 에너지 수치를 보고하였다. 더욱이 퇴보된(retrograded) 고-아밀로스 옥수수 전분으로 사육될 때 돼지에 의한 저항성 전분 섭취는 명백한 불충분한 에너지 소화율을 저하시켰다.
Ranhotra et al.(22)은 저항성 전분이 제공된 래트가 용이하게 분해가능한전분이 제공된 그룹보다 유의적으로 더 낮은 체중을 지님을 관찰하였다.
Ito et al.(15)는 일반 전분, 비가공된 고 저항성 옥수수 전분 및 가공된 고 저항성 옥수수 전분의 3가지 다른 음식물로 사육된 래트에서 소화기 계통의 다른 부분 내의 전분 양을 정량화하였다. 이들은 저항성 전분의 음식물 특히 가공된 저항성 전분이 제공된 래트가 맹장 내 높은 전분 함량을 지님을 밝혔다. 더욱이 인간과 래트 내의 저항성 전분의 소화를 비교함으로서 Roe et al.(23)은 래트가 인간보다 저항성 전분 및 비-전분 폴리사카라이드를 이용함에 있어서 더욱 효율적임을 밝혔다.
이와는 대조적으로 Morna(19)는 전분 소화가 가금류 내에서 문제가 되지 않고 모든 전분이 닭과 같은 가금류의 소화기 계통에서 분해되고 흡수될 수 있음을 나타낸다.
본 발명은 전분을 포함한 동물 소비용 사료를 제조하는 유용한 수단을 제공하고자 한다.
본 발명
광범위한 관점에서 본 발명은 전분을 포함한 사료에서 사용하기 위한 효소를포함한 성분의 이용에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 성분으로 혼합된 사료에 관한 것이다.
하나의 관점에서 본 발명은 아밀라제 활성을 지니고 전분을 포함한 사료에서 사용하기 위한 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 성분으로 혼합된 사료에 관한 것이다.
본 발명은 사료에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 동물 소비에 적당한 전분을 포함한 사료에 관한 것이다. 일부 실시태양에서 동물은 가금류 또는 돼지이다.
발명의 설명
본 발명의 관점은 수반된 청구범위 및 하기 설명에 나타나 있다.
예로서, 첫 번째 관점에서 본 발명은 전분을 포함한 사료에서 사용하기 위한 성분에 관한 것으로, 상기 성분은 효소를 포함하고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
두 번째 관점에서 본 발명은 전분 및 효소를 포함한 사료에 관한 것으로 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
세 번째 관점에서 본 발명은 저항성 전분을 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소에 접촉시킴을 포함한 사료 내 저항성 전분을 분해하는 방법에 관한 것이다.
네 번째 관점에서 본 발명은 저항성 전분을 분해하기 위해 전분을 포함한 사료의 제조시 효소의 이용에 관한 것으로, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 상기 저항성 전분을 분해할 수 있다.
다섯 번째 관점에서 본 발명은 사료의 열량 수치를 증가시키기 위해 사료의 제조시 효소의 이용에 관한 것으로, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
여섯 번째 관점에서 본 발명은 동물 실행을 증가시키기 위해 사료의 제조시 효소의 이용에 관한 것으로, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
또다른 관점에서 본 발명은 전분과 효소를 혼합하는 것으로 구성된 사료 제조 방법에 관한 것으로, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
또다른 관점에서 본 발명은 사료에 이용하기 위한 성분의 확인 방법에 관한 것으로, 상기 성분은 효소를 포함하고, 상기 방법은 저항성 전분을 후보 성분에 접촉시키고 상기 저항성 전분의 분해 정도를 측정하는 것으로 구성되고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
일부 바람직한 관점
하나의 바람직한 관점에서 본 발명에 사용되는 효소는 아밀라제 효소이다.
하나의 바람직한 관점에서 본 발명에 사용되는 효소는 열안정적이다.
하나의 바람직한 관점에서 본 발명에 사용되는 효소는 pH 안정적이다.
하나의 바람직한 관점에서 본 발명에 사용되는 효소는 비가공 전분 분해 효소이다.
하나의 바람직한 관점에서 본 발명에 사용되는 효소는 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans) F2 아밀라제, 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis) 아밀라제, 크립토코커스(Cryptococcus) S-2 아밀라제, 아스퍼질러스(Aspergillus) K-27 아밀라제, 바실러스 리체니포르미스(Bacilluslicheniformis) 아밀라제 및 써모마이세스 라누기노서스(Thermomyces lanuginosus) 아밀라제로 구성된 군으로부터 선택된 아밀라제 효소이다.
본 발명이 하나의 바람직한 관점에서 사료는 돼지 또는 가금류용이다.
본 발명의 더욱 바람직한 관점에서 사료는 콩류 또는 곡물과 같은 비가공 물질을 포함한다.
일부 장점
본 발명의 일부 장점은 하기 설명에 나타나 있다.
예로서 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용은 동물 내에서 전분 및/또는 전분 분해 생성물의 분해에 있어서의 두드러진 증가가 있기 때문에 유리하다.
더욱이 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용은 동물에 의한 전분 및/또는 전분 분해 생성물의 소화율에 있어서의 두드러진 증가가 있기 때문에 유리하다.
또한 예로서 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용은 동물에 의한 사료로부터의 에너지 유도 효율성을 증가시키는 수단을 제공하기 때문에 유리하다.
더욱이 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용은 저항성 전분의 생체 이용률을 증가시키는 수단을 제공하기 때문에 유리하다.
사료
본 발명에서 사용되는 동물 사료는 특정 동물군의 특정한 요구를 충족시키고 동물에 의해 대사될 수 있는 형태로 필요한 탄수화물, 지방, 단백질 및 다른 영양분을 제공하도록 포뮬레이트된다.
바람직하게는 동물 사료는 돼지 또는 가금류용 사료이다.
여기에 사용된 '돼지'라는 용어는 피그(pig), 호그(hog) 또는 보어(boar)와 같은 비-반추성 잡식동물을 나타낸다. 일반적으로 돼지 사료는 약 50% 탄수화물, 약 20% 단백질 및 약 5% 지방을 포함한다. 고 에너지 돼지 사료의 예는 예를 들어 탄수화물, 단백질, 미네랄, 비타민 및 리신 및 트립토판과 같은 아미노산과 같은 사료 보충물과 종종 조합된 옥수수에 기초한다. 돼지 사료의 예는 동물 단백질 생성물, 해산물, 유제품, 곡물 및 식물 단백질 생성물을 포함하고 이들 모두는 천연 조미료, 인공 조미료, 마이크로 및 마크로 미네랄, 동물성 지방, 식물성 지방, 비타민, 방부제 또는 항생제와 같은 약물을 더욱 포함한다.
청구범위를 포함한 본 발명의 표기에서 '돼지 사료'는 "트랜지션(transition)" 또는 "스타터(starter)" 사료(이유 어린 돼지에 사용되는) 및 "피니싱(finishing)" 또는 "그로워(grower)" 사료(돼지의 생장에서 시장에 적당한 연령 또는 크기로 변환 단계에 사용되는)를 포함하는 것을 의미함이 이해되어야 한다.
여기서 사용된 '가금류'라는 용어는 닭, 영계, 암탉, 수탉, 카폰(capon), 칠면조, 오리, 투계, 암평아리 또는 병아리와 같은 가금을 포함한다. 가금류 사료는 모든 단백질, 에너지, 비타민, 미네랄 및 적당한 생장, 난 생산 및 새의 건강에 필요한 다른 영양분을 포함하기 때문에 "완전한" 사료를 나타낸다. 그러나 가금류 사료는 비타민, 미네랄 또는 구충제(예를 들어 모네신 나트륨(Monesine sodium), 라살로시드(Lasalocid), 암프로륨(Amprolium), 살리노마이신(Salinomycine) and 설파퀴녹살린(Sulfaquinoxaliine)과 같은) 및/또는 항생제(예를 들어 페니실린, 바시트라신(Bacitracin), 클로르테트라시클린(Chlortetracycline) 및 옥시테트라시클린(Oxytetracyciline)과같은 약물을 더욱 포함한다.
육류 생산을 위해 가둬진 어린 닭 또는 영계, 칠면조 및 오리는 난 생산을 위해 보호된 암평아리와는 다르게 사육된다. 영계, 오리 및 칠면조는 난-생산 형태의 닭보다 더 큰 몸체를 지니고 더 빠르게 체중이 늘어난다. 따라서 이들 새는 더 높은 단백질 및 에너지 수준을 지닌 음식물로 사육된다.
청구범위를 포함한 본 명세서 내에 나타난 '가름류 사료'는 "스타터" 사료(부화후), "피니싱", "그로워" 또는 "디벨로퍼(developer)" 사료(6주령부터 도살 크기에 도달할 때까지) 및 "레이어(layer)" 사료(난 생산 동안의 사육)를 포함하는 것을 의미함이 이해되어야 한다.
본 발명에 사용되는 동물 사료는 육류 생산, 유제품, 난 생산, 생식 및 스트레스에 대한 반응에 대한 동물의 영양적 요구에 충족하도록 포뮬레이트된다. 더욱이 본 발명에 사용되는 동물 사료는 비료 양을 증가시키도록 포뮬레이트된다.
바람직한 관점에서 동물 사료는 예를 들어 완두콩 또는 대두 등의 콩류 또는 예를 들어 소맥, 옥수수, 호밀 또는 보리 등의 곡류와 같은 비가공 물질을 포함한다. 적당하게는 비가공 물질은 감자이다.
전분
전분은 식물 내에서 우수한 식물 저장 물질이고 전 세계 인간에 의해 소비되는 열량의 70∼80%를 제공한다. 전분, 전분으로부터 유도된 생성물 및 슈크로스는 동물 음식물 내에 대부분의 소화가능한 탄수화물로 구성된다. 식품의 제조시 사용되는 전분의 양은 결합된 다른 사료 성분의 양을 크기 초과한다.
전분은 미립자로 불리는 분리된 입자로서 자연적으로 발생하고 이는 비교적 농밀하고 불용성이다. 대부분의 전분 미립자는 2개이 폴리머의 혼합물로 구성된다: 아밀로스라고 불리는 본질적으로 선형의 폴리사카라이드 및 아밀로펙틴이라고 불리는 매우 분지된 폴리사카라이드.
아밀로펙틴은 (1→4) 결합에 의해 결합된 α-D-글루코피라노실 단위로 구성된 매우 크고 분지된 분자로서, 상기 체인은 α-D-(1→6) 결합에 의해 부착되어 분지를 형성한다.
아밀로펙틴은 대부분의 일반적인 전분의 약 75%를 구성하는 모든 천연 전분 내에 존재한다. 아밀로펙틴 전체로 구성된 전분은 왁스성 전분 즉, 왁스성 옥수수로 알려져 있다.
아밀로스는 본질적으로 α-D-(1→6) 분지를 거의 지니지 않는 α-D-글루코피라노실 단위로 결합된 (1→4)의 선형 체인이다. 대부분의 전분은 약 25%의 아밀로스를 포함한다.
손상되지 않은 전분 미립자는 차가운 물에서는 용해되지 않으나 역으로 물을 흡수할 수 있다. 그러나 물의 존재 하에서 가열시 전분 미립자 내의 분자 순서가 파괴된다. 이러한 과정은 젤라틴화라고 알려져 있다. 과도한 물 내에서의 전분의 연속된 가열은 더한 팽창과 용해성 성분의 추가적인 용해를 초래한다. 탈취(shear)의 적용시 미립자는 파괴되고 페이스트가 형성된다. 냉각시 일부 전분 분자는 재-결합되기 시작하고 침전물 또는 겔을 형성한다. 이러한 과정은 퇴화(retrogradation) 또는 세트백(setback)으로 알려져 있다.
다른 폴리사카라이드 분자와 같이 전분 분자는 가수분해에 의해 탈-중합되어 글루코스 및 말토스와 같은 모노사카라이드 및 올리고사카라이드를 형성한다. 아밀로스 및 아밀로글루코시다제(글루코아밀라제)와 같은 효소는 전분을 D-글루코스로 가수분해한다. 이소아밀라제 또는 풀라나제(pullanase)와 같은 디브랜칭(debranching) 효소는 아밀로펙틴 내에서 (1→6) 결합을 가수분해한다. 시클로덱스트린 글루카노트랜스퍼라제(cyclodextrin glucanotransferase)는 아밀로스 및 아밀로펙틴으로부터 (1→4) 결합된 α-D-글루코피라노실 단위의 고리를 형성한다.
젤라틴화, 퇴화 및 페이스트 형성과 같은 천연 전분의 기능성은 변형에 의해 개선된다. 변형은 열 및 가공 조건에 결합된 산에 견디는 전분 페이스트의 능력을 증가시키고 특정한 기능성을 도입시킨다. 변형된 전분은 기능적이고 충분한 식량 대성분(macroingredient) 및 첨가제가 된다.
일반적으로 변형은 단독으로 또는 교차결합(crosslinking) 또는 폴리머 체인, 비-교차결합 유도화 및 전젤라틴화 등과 결합하여 이루어진다. 획득될 수 있는 특정한 개선은 증가된 용해성, 겔 형성 억제, 다른 물질과의 상호작용의 개선 및 용해성의 개선을 포함한다.
청구범위를 포함한 본 명세서 내에 나타난 '전분'은 천연 전분 및 안정화되거나, 교차결합되거나, 전젤라틴화되거나 유도화되는 등 부분적으로 또는 전체적으로 변형된 전분을 포함함을 의미함이 이해되어야 한다.
저항성 전분
저항성 전분은 '건강한 개체의 소장 내에서 흡수되지 않은 전분 및 전분 분해 생성물의 총합'으로 정의되었다(3).
저항성 전분은 적어도 4개의 주요 타입을 지닌 이형적 혼합물이다:
저항성 전분 1 - 거칠게 갈리거나 저작된 곡류, 콩류 및 곡물에서 나타난 물리적으로 가둬진 전분
저항성 전분 2 - 젤라틴화될 때까지 α-아밀라제에 의한 소화에 매우 저항적인 저항성 전분 미립자 또는 비젤라틴화된 전분 미립자 즉, 조리되지 않은 감자, 녹색 바나나 및 고-아밀로스 전분과 같은 비가공 전분
저항성 전분 3 - 절라틴화 후 전분이 냉각될 때 생성된 퇴화된 전분 폴리머(주로 아밀로스). 퇴화된 아밀로스는 효소 공격에 매우 저항적인 반면 퇴화된 아밀로펙틴은 덜 저항적이고 재가열에 의해 젤라틴화될 수 있다.
저항성 전분 4 - 화학적으로 변형된 전분
식품 내 4가지 모두의 저항성 전분의 양은 식품 가공 기술 및 식물 재배 기술(즉, 곡류 및 곡물의 높은 또는 낮은 아밀로스 변형체)을 통해 조작될 수 있다.
대장(결장)에 도달하는 전분의 양은 동물의 음식물의 성질(즉, 전분의 양 및 식물 근원) 및 전분을 포함한 사료의 제조시 가공의 작용에 의해 크게 영향받는다.예로서 조리되지 않은 사료 물질 내 저항성 전분의 양이 하기와 같이 Goni et al.(10)에 의해 분류되었다.
저항성 전분 물질 (% 건조 물질)
무시가능(<1%) 삶은 감자(뜨거움)
삶은 쌀(뜨거움)
파스타
아침 씨리얼(겨 포함)
소맥 분말
저(1-2.5%) 아침 씨리얼
비스킷
빵
파스타
삶은 감자(차가움)
삶은 쌀(차가움)
중간(2.5-5%) 아침 씨리얼
감자 튀김
압출된 야채
고(5-10%) 조리된 콩류(렌즉콩, 병아리콩, 강낭콩)
완두콩
비가공 쌀
오토클레이브 및 냉가된 전분(소맥, 감자, 옥수수)
조리되고 냉동된 전분성 식품
매우 높음(>10%) 비가공 감자
비가공 콩류
아밀로메이즈(amylomaize)
미숙성 바나나
퇴화된 아밀로스
본 발명에 사용되는 사료는 하나 이상의 상기 기술된 바와 같은 4개의 저항성 전분 1-4인 전분을 포함한다. 더욱이 본 발명에 사용되는 사료는 용이하게 분해가능한 전분 및/또는 캡슐화된 전분 또는 비가공 전분과 같은 저항성 전분을 포함한다.
현재 아밀라제 활성을 지니고 전분을 포함한 사료에서 사용되는 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용을 제안한 사람은 아무도 없다. 예로서 참고문헌이 하기에 나타날 수 있다.
Muir et al(Am.J.Nutr. 1995, vol.61, pages 82-89)는 식물 가공의 효과 및 소장 내 소화를 벗어난 전분의 양에 영향을 미치는 다른 옥수수 품종을 알렸다. 특히 일반적인 곡류의 품종 보다 고-아밀로스를 이용함으로서 또는 곡물을 더욱 거칠게 제분함으로서 전분-함유 식품이 소화를 벗어난 전분의 양을 증가시키도록 조작될 수 있음을 알렸다.
아밀라제
본 발명에 사용되는 적당한 효소는 저항성 전분 및/또는 전분 분해 생성물과 같은 전분을 가수분해하거나 분해할 수 있다.
하나의 관점에서 본 발명에 사용되는 효소는 아밀라제 즉, 전분을 모노사카라이드 및/또는 올리고사카라이드 및/또는 그의 유도체(즉 덱스트린)로 가수분해할 수 있는 효소이다.
여기서 사용된 "아밀라제"라는 용어는 전분을 모노사카라이드 또는 말토스와 같은 다이사카라이드와 같은 올리고사카라이드 등의 당으로 분해하는 전분의 파괴(breakdown)에 중요한 경로에 참여하는 α-아밀라제와 같은엔도엔자임(endoenzyme)을 나타낸다. 특히 α-아밀라제는 아밀로스( α(1→4) 결합에 의해 결합된 글루코스의 호모폴리머) 또는 아밀로펙틴으로부터 주로 α-말토스를 생성하는 1,4-α-글루코시드 결합의 내부 가수분해를 촉매한다.
α-아밀라제는 전분 가공의 초기 단계(용해)에 사용되는 중요한 상업적 가치를 지닌다; 알코올 생산시 세정제 매트릭스 내 세탁제로서; 및 전분 디사이징(desizing)을 위한 직물 산업에서.
α-아밀라제는 바실러스(Bacillus), 아스퍼질러스(Aspergillus) 및 써모마이세스(Thermomyces)를 포함한 다양한 미생물로부터 생산된다. 대부분의 통상적인 아밀라제는B. licheniformis, B. amyloliquefaciens, B. subtilis또는B. stearothermophilus로부터 생산된다. 최근 통상적으로 사용되는 바람직한 효소는 적어도 중성 및 약알칼리성 pH에서의 열 안정성 및 성능 때문에B. lichemiformis로부터의 것이다.
바람직하게는 아밀라제는 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans) F2 아밀라제, 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis) 아밀라제, 크립토코커스(Cryptococcus) S-2 아밀라제, 아스퍼질러스(Aspergillus) K-27 아밀라제, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) 아밀라제 및 써모마이세스 라누기노서스(Thermomyces lanuginosus) 아밀라제로 구성된 군으로부터 선택된다.
재조합 DNA 기술은 어떤 잔기가 아밀라제의 촉매 활성에 중요한지를 조사하고/또는 다양한 아밀라제의 활성 사이트 내 특정한 아미노산 변형의 효과를 조사하고(Vihinen, M. et al.(1990) J.Bichem. 107:267-272; Holm, L. et al.(1990) Protein Engineering 3:181-191; Takase, K. et al.(1992) Biochemica et Biophysica Acta, 1120:282-288; Matsui, I. et al.(1992) Febs Letters Vol.310, No.3, pp.216-218); 어떤 잔기가 열 안정성에 중요한지를 조사하는데 사용되었고(Suzuki, Y. et al.(1989) J. Biol. Chem. 264:18933-18938); 한 그룹은 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis) 아밀라제(열안정적인 것으로 알려짐) 내의 다양한 히스티딘 잔기에서의 돌연변이를 도입시키는 방법을 사용하였다. 다른 유사한 바실러스 아밀라제와 비교할 때 바실러스 리체니포르미스 아밀라제는 과도한 양의 히스티딘을 지녀서 히스티딘의 대체는 효소의 열안정성에 영향을 미칠 수 있음이 제안되었다(Declerck, N. et al.(1990) J. Biol. Chem. 265:15481-15488; FR 2 665 178-A1; Joyet, P. et al.(1992) Bio/Technology 10:1579-1583).
통상적으로, α-아밀라제 효소는 통상적인 적용에 따라 다르게 높고 낮은 pH 조건과 같은 극적으로 다른 조건 하에서 사용될 수 있다. 예를 들어 α-아밀라제는 바람직하게는 저 pH(pH <5.5)에서 수행된 과정인 전분의 용해에 사용된다. 반대로 아밀라제는 종종 표백제 또는 과산과 같은 산화제를 포함한 통상적인 접시 관리 또는 세탁 세정제에 사용될 수 있고 이는 훨씬 더 알칼리성의 조건에서 사용된다.
다양한 조건 하에서 아밀라제 효소의 안정성 또는 활성 프로파일을 변화시키기 위해 메티오닌, 트립토판, 티로신, 히스티딘 또는 시스테인과 같은 산화가능 아미노산의 선택적인 복위, 치환 또는 삭제가 이들의 전구체와 비교하여 다양한 효소의 변화된 프로파일을 초래한다. 현재 통상적으로 사용가능한 아밀로스는 다양한 조건 하에서 수용가능하지 않기 때문에(안정적) 변화된 안정성 및/또는 활성 프로파일을 지닌 아밀로스가 요구된다. 이러한 변화된 안정성(산화, 열 또는 pH 성능 프로파일)은 야생형 또는 전구체 효소와 비교하여 적당한 효소 활성을 유지할 때 달성될 수 있다. 이러한 돌연변이를 도입함으로서 영향을 받은 특성은 열 안정성을 유지하면서 산화 안정성이 변화되거나 그 반대가 된다. 더욱이 알파-아밀라제 전구체 서열 내 산화가능 아미노산의 다른 아미노산으로의 치환 또는 하나 이상의 산화가능 아미노산(들)의 삭제는 전구체 알파-아밀라제에 최적인 것으로 여겨지는 pH에서의 변화된 효소 활성을 초래한다. 즉, 본 발명의 돌연변이 효소는 효소의 증가된 산화 안정성에 의한 변화된 pH 성능 프로파일을 지닌다.
여기서 사용된 '아밀라제'라는 용어는 또한 알파-아밀라제를 인코드하는 돌연변이된 DNA 서열의 발현 생성물인 알파-아밀라제 돌연변이를 포함한 알파-아밀라제 효소의 모든 형태를 나타내고, 상기 돌연변이 알파-아밀라제는 일반적으로 전구체 아미노산 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기의 치환 또는 삭제를 인코드하기 위해 자연발생 또는 재조합 알파-아밀라제를 인코드하는 전구체 DNA 서열의 시험관 내 변형에 의해 수득된다.
아밀라제-생성 생물체는 동물, 식물, 조류, 진균류, 고세균 및 박테리아를 포함한다. α-아밀라제를 코딩하는 유전자가 분리되었고 특성화되었다. 예로서 EP-B-0470145는 감자 식물 내 α-아밀라제의 뉴클레오타이드 서열을 개시하였다. α-아밀라제는 적어도 5개 이상의 개별적 유전자로 구성된 유전자 패밀리에 의해 인코드되고, 그들의 상동성에 기초하여 2개의 서브패밀리, 타입 3 아밀라제(들) 및 타입 1 아밀라제(들)로 나뉠 수 있다. 예를 들어 감자 식물에서 2 그룹의 α-아밀라제는 다르게 발현된다; 타입 3 α-아밀라제는 뿌리, 괴경, 싹 및 줄기 조직 내에서 발현되는 반면; 타입 1 α-아밀라제는 싹 및 줄기 조직 내에서 발현된다.
현재 아밀라제 활성을 지니고 전분을 포함한 사료에 사용되는 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한 성분의 이용을 제안한 사람은 아무도 없다. 예로서 참고문헌은 하기에 나타나 있다.
Taniguchi et al.(26)은 천연 전분 상에서 높은 활성을 지니는 것으로 언급된 돼지 췌장 아밀라제 및 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis) 아밀라제보다 37℃에서 천연 감자 전분을 훨씬 더욱 효율적으로 분해하는 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans) F2 아밀라제를 기술하였다. 바실러스 아밀라제는 비가공 전분 결합 도메인을 지니고 이러한 도메인의 단백질분해성 제거는 비가공 감자 전분의 활성을 17%로 감소시킨다(17).
이와 유사하게 크립토코커스종(Cryptococcussp) S-2 아밀라제의 비가공 전분 결합 도메인은 비가공 전분에 결합하고 분해하는 능력에 필수적인다. 비가공 소맥 및 옥수수 전분 상에서 크립토코커스 아밀라제는 돼지 췌장 아밀라제와 동일한 활성을 지니는 반면 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae) 아밀라제는 15배 더 적은 활성을 지닌다. 비가공 감자 전분 상에서 크립토코커스 아밀라제는 돼지 췌장 아밀라제보다 3배 더 높은 활성을 지니고 아스퍼질러스 오리자에 아밀라제 보다 70배 더 높은 활성을 지닌다. 크립토코커스 아밀라제는 열안정적이고(80℃에서 기질 없이 2 mM CaCl2있는 30분 후 50% 생존) pH 3에서 >50% 활성을 지닌다(6에서 pH 최적).
1992년에 Gruchala and Pomeranz(12)는 저항성 전분을 분해하는 다른 아밀라제 능력의 차이를 나타냈다. 퇴화된 저항성 전분의 양을 증가시키기 위해 아밀로옥수수가 조리되었다. 이후 알려진 양의 저항성 전분이 60℃에서 12시간 동안 2개 다른 아밀라제로 처리되었고, 현탁액이 여과되었고 전분의 잔여량이 측정되었고대조군과 비교되었다(아밀로스 첨가 없이 처리). 이들은 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis)로부터의 열 안정적 α-아밀라제가 16%의 저항성 전분을 용해시킬 수 있는 반면 아스퍼질러스종 K-27로부터의 아밀라제는 41%의 저항성 전분을 용해시킴을 밝혔다.
비가공 전분 분해 아밀라제
본 발명에 사용되는 아밀라제는 비가공 전분 분해 아밀라제를 포함한다.
비가공 전분 분해 아밀라제는 전분 결합 도메인을 포함하고 천연 옥수수 및 소맥 전분에서 발견된 것과 같이 비가공 전분을 분해할 때 돼지 췌장 아밀라제와 유사하나 감자 또는 분해에 더욱 저항적인 다른 전분보다 우수한 것으로 나타났다.
시클로덱스트린 글리코실 트랜스퍼라제(CGTase)는 시클로덱스트린의 형성에 의해 또한 통상의 아밀라제와 유사하게 가수분해 및 불균형/트랜스글리코실레이션(transglycosylation)에 의해 전분을 분해한다. CGTase는 비가공 전분 분해인 것으로 보고되었다(25)(27).
말토제닉(maltogenic) 아밀라제 NovamylTM(Novo Nordisk A/S)에 관련된CGTase는 비가공 전분으로부터의 말토스 생성에 이용된다(4).
더욱이 일부 적용에서 CGTase는 바실러스 리체니포르미스 아밀라제(TermamylTM, Novo Nordisk A/S) 또는 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제와 같은 용해 아밀라제 대신 전분 용해에 이용된다.
써모아나에로박테리움 써모술푸로게네스(Thermoanaerobacterium thermo-
sulfurogenes)(ToruzymelTM, Novo Nordisk A/S)로부터 유도된 CGTase는 매우 열안정적이고 전분의 존재시 몇 시간 동안 90℃에서 생존할 수 있다.
아스퍼질러스종 K-27 아밀라제 및 돼지 췌장 아밀라제는 천연 소맥 및 옥수수 전분을 유사하게 분해하는 반면 아스퍼질러스종 K-27 아밀라제는 천연 감자 및 고-아밀로스 옥수수 전분을 분해시 후자 효소보다 훨씬 더 효과적이다(21).
적당한 아밀라제는 아밀라제를 생성하는 슈도모나스 사카로필라(Pseudomonas saccharophila) 말토테트로아제(maltotetroase) 및 EC 3.2.1.60의 상동적 글루칸 1,4-알파-말토테트라하이드롤라제도 포함한다.
바람직하게는 아밀라제 효소는 바실러스 서큘란스 F2 아밀라제, 스트렙토코커스 보시스 아밀라제, 크립토코커스 S-2 아밀라제, 아스퍼질러스 K-27 아밀라제, 바실러스 리체니포르미스 아밀라제 및 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제로부터 유도 및/또는 분리된다.
써모마이세스 라누기노서스 아밀라제는 PCT 공보 WO 9601323 및 Ezyme Microbiol. Technol.(1992), 14, 112-116 내의 실시예 내에 개시되어 있다.
아밀라제 활성
여기서 사용된 '아밀라제 활성'이라는 용어는 저항성 전분과 같은 전분 및/또는 전분 분해 생성물을 가수분해 또는 분해할 수 있는 효소를 나타낸다.
다른 아밀라제의 저항성 전분을 분해할 수 있는 능력은 다른 아밀라제로의 분해 후 전분의 잔여량이 측정되고 유의적인 차이가 제공된 Gruchala and Pomeranz(12)의 방법과 같이 당분야에 잘 알려진 기술에 의해 측정될 수 있다.
일반적으로 저항성 전분 상의 아밀라제 활성은 예를 들어 Englyst et al.(9);(8), Silvester et al.(24) and Morales et al.(18)에 기초한 방법을 이용하여 측정된다. 이러한 방법은 대장 전에 인간 소화기 계통을 자극시키는 시험관 내 소화 방법을 이용한다.
전분 결합 도메인
본 발명에 사용되는 아밀라제는 전분-결합 도메인을 포함한다.
여기서 사용된 '전분 결합 도메인'이라는 용어는 전분에 결합하기 위한 어피니티를 지닌 모든 폴리펩타이드 서열 또는 펩타이드 서열을 정의함을 의미한다.
전분 결합 도메인은 단일 단위 전분 결합 도메인, 박테리아, 섬질성 진균 또는 효모와 같은 미생물로부터 분리된 전분 결합 도메인, 또는 전분 결합 단백질 또는 전분에 결합하도록 고안되거나/또한 설계된 단백질의 전분 결합 도메인을 포함한다.
전분 결하 도메인은 단일 도메인 폴리펩타이드로서 또는 이량체, 삼량체 또는 폴리머로서; 또는 단백질 하이브리드의 부분으로서 유용하다. 단일 단위 전분 결합 도메인은 "분리된 전분 결합 도메인" 또는 "개별 전분 결합 도메인"으로도 표현된다.
단일 단위 전분 결합 도메인은 단일 단위 전분 결합 도메인-함유 효소 즉, 본질적으로 촉매 도메인이 없으나 전분 결합 도메인(들)을 보유한 폴리사카라이드가수분해 효소의 아미노산 서열의 전체 부분까지 포함한다. 따라서 전분 분해 효소(즉, 글루코아밀라제) 또는 하나 이상의 전분 결합 도메인을 포함한 다른 효소의 전체 촉매성 아미노산 서열은 단일 단위 전분 결합 도메인으로 간주되지 않는다.
단일 단위 전분 결합 도메인은 폴리사카라이드 가수분해 효소의 하나 이상의 전분 결합 도메인, 전분 결합 단백질 또는 전분에 결합하도록 고안되거나/또한 설계된 단백질의 하나 이상의 전분 결합 도메인으로 구성된다.
열안정적
바람직하게는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소가 열안정적이다.
여기서 사용된 "열안정적"이라는 용어는 증가된 온도에 노출된 후 활성을 보유하는 효소의 능력을 나타낸다.
바람직하게는 본 발명에 사용되는 아밀라제 활성을 지닌 효소는 약 20℃ 내지 약 50℃의 온도에서 저항성 전분을 분해할 수 있다. 적당하게는 효소는 약 95℃까지의 온도에 노출된 후 활성을 보유한다.
pH 안정적
바람직하게는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소는 pH 안정적이다.
여기서 사용된 'pH 안정적'이라는 용어는 광범위한 pH에 걸쳐 활성을 보유하는 효소의 능력을 나타낸다.
바람직하게는 본 발명에 사용되는 아밀라제 활성을 지닌 효소는 약 3 내지 약 7의 pH에서 저항성 전분을 분해할 수 있다.
아밀라제 억제에 실질적으로 저항적
아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소는 아밀라제 억제에 실질적으로 저항적이다.
전분 소화시 아밀라제의 효율에 대한 중요한 인자는 사료 물질로부터의 아밀라제 억제제에 대한 그들의 민감도이다. Al-Kahtani는 대두로부터의 추출물에 의한 돼지 췌장 아밀라제뿐만 아니라 통상의 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis)의 유의적인 억제를 보고하였다(1). 호밀은 바실러스 리체니포르미스 아밀라제뿐만 아니라 돼지 췌장 아밀라제에 대해 효과적인 많은 양의 아밀라제 억제제를 함유함이 보고되었다(7). 구조적으로, 바실러스 리체니포르미스 아밀라제는 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) 사료 아밀라제와 밀접하게 관련된다. 유사하게 옥수수 및 대부분의 다른 사료 식물 내의 아밀라제 억제제의 존재가 보고되었다(2).
여기서 사용된 '아밀라제 억제에 실질적으로 저항적'이라는 용어는 전분을 포함한 사료의 분해로부터 생성된 저항성 전분을 부분적으로 또는 전체적으로 분해하기 충분한 수준의 활성을 유지하는 효소의 능력을 나타낸다.
저항성 전분을 분해 가능성
본 발명에서 사용되는 효소는 저항성 전분을 분해할 수 있다.
저항성 전분의 모노사카라이드 - 글루코스와 같은 것 및/또는 올리고사카라이드 예를 들어 디사카라이드 - 말토스 및/또는 덱스트린 같은 것으로의 부분적인 또는 완전한 가수분해 또는 분해를 나타낸다.
본 발명에서 사용되는 효소는 동물 아밀라제에 의해 완전하게 분해되지 않은 잔여 저항성 전분을 분해한다. 예로서 본 발명에 사용되는 효소는 저항성 전분의분해를 증진시켜 동물의 아밀라제(즉 췌장성 아밀라제 - 췌장 α-아밀라제와 같은 것)를 도울 수 있다.
췌장 α-아밀라제는 동물에 의한 소화기 계통에서 분비된다. 췌장 α-아밀라제는 사료 내 전분을 분해한다. 그러나 전분의 일부, 저항성 전분은 췌장 α-아밀라제에 의해 충분해 분해되지 않고 따라서 소장 내에서 흡수되지 않는다(저항성 전분의 정의 참조).
본 발명에 사용되는 효소는 소화기 계통 내 전분 분해시 췌장 α-아밀라제를 도울 수 있어서 동물에 의한 전분의 이용을 증가시킨다.
저항성 전분을 분해하는 효소의 능력은 예를 들어 표본의 저항성 전분, 용해된 전분 및 총 전분 함량의 측정을 위한 Megazyme International Ireland Ltd.에 의해 개발되고 개시된 방법에 의해 분석된다(Resistant Starch Assay Procedure, AOAC Method 2002.02, AACC Method 32-40).
구성성분
적당하게는 본 발명에 사용되는 효소를 포함한 구성성분은 식료품이다. 여기서 사용된 "식료품"이라는 용어는 동물 소비에 적당한 식품 성분을 포함한다.
일반적인 식품 성분은 동물성 또는 식물성 지방, 천연 또는 합성 조미료, 산화방지제, 점성 변형제, 필수 오일 및/또는 향료, 염료 및/또는 착색제, 비타민, 미네랄, 천연 및/또는 비-천연 아미노산, 영양제, 추가 효소(유전적으로 조작된 효소), 구아 검(guar gum) 또는 크산텀 검(xanthum gum)과 같은 결합제, 완충제, 유화제, 윤활제, 보조제(adjuvant), 현탁제, 방부제, 코딩제 또는 용해제 등과 같은 하나 이상의 첨가제를 포함한다.
본 발명에 사용되는 구성성분은 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소를 포함한다.
일반적으로 본 발명의 구성성분은 본 발명의 구성성분의 사료로의 간접적 또는 직접적 적용에 의한 동물 소비를 위한 사료의 제조에 이용된다.
본 발명에 사용되는 적용 방법의 예는 구성성분을 포함한 물질 내 사료를 코팅하고, 구성성분과 사료를 포함하고 구성성분을 사료 표면상에 스프레이하거나 구성성분 제제 내로 사료를 담금으로서 직접적인 적용을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.
본 발명의 구성성분은 바람직하게는 구성성분과 사료를 혼합함으로서 또는동물 소비용 사료 입자 상에 스프레이함으로서 적용된다. 대안으로, 구성성분은 사료의 에멀젼 내 또는 주입 또는 텀블링에 의한 고형 생성물의 내부에 포함된다.
구성성분의 적용
본 발명의 구성성분은 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 제어된 양의 효소를 지닌 사료를 분산시키고 코팅하고/또는 포화시키는데 적용된다. 또한 효소를 포함한 구성성분의 혼합물이 사용되고 개별적으로, 동시에 또는 연속하여 적용된다. 킬레이팅제, 결합제, 유화제 및 마이크로 및 매크로 미네랄, 아미노산, 비타민, 동물성 지방, 식물성 지방, 방부제, 향료, 착색제와 같은 다른 첨가제가 동시에(혼합물 내에 또는 개별적으로) 또는 연속적으로 사료에 유사하게 적용된다.
유리하게는 효소를 포함한 구성성분은 사료의 완전한 소화가 획득될 때까지 즉, 사료의 총 열량 수치가 방출될 때까지 동물 소비용 사료의 섭취 및 사료의 소화 동안 효과적으로 유지된다.
사료의 제조
사료는 실시예 7에 기술된 바와 같이 당분야에 잘 알려진 기술에 의해 제조된다.
본 발명에 사용되는 특히 적당한 사료 제조는 펠렛 형태의 사료이다.
본 발명에 사용되는 특히 적당한 아밀라제 효소는 저항성 전분을 포함한 펠렛화된 사료를 분해하는데 효과적이어야 한다.
저항성 전분의 측정
가수분해에 저항적인 전분의 양을 측정하는 방법이 당분야에 잘 알려져 있다.
예를 들어 효소 가수분해에 저항적인 전분 프랙션의 존재는 비-전분 폴리사카라이드의 측정에 대한 연구 동안 먼저 1982년 Englyst et al.(Analyst, 107, p.307-318, 1982)에 의해 인식되었다(1). 이러한 연구는 더욱 밀접한 모의 생리적 조건을 위해 Englyst et al.(Analyst, 107, p.307-318, 1982)에 의해 이용된 α-아밀라제/풀룰라나제 처리를 통합시켰으나 100℃에서의 초기 가열 단계를 생략시킨 저항성 전분의 측정에 대한 절차를 개발한 Berry(J. Cereal Science, 4, p.301-304, 1986)에 의해 확장되었다. 이러한 조건 하에서 측정된 표본의 저항성 전분 함량은 훨씬 더 높았다. 이러한 발견은 건강한 일레오스토미(ileostomy) 피험자의 연구를 통해 Englyst et al.(Am.J.Clin.Nutr, 42, p.778-787, 1985; Am.J.Clin.Nutr, 44, p.42-50, 1986; Am.J.Clin.Nutr, 45, p.423-431, 1987)에 의해 더욱 확립되었다.
1990년 초까지 저항성 전분의 생리적 유의성이 충분히 이해되었다. 일부 신규하고/변형된 방법이 European Research Program EURESTA(Englyst et al. Europena J.Clin.Nutr, 46, suppl.2, S33-S50) 동안 개발되었다. 챔프(Champ)(Europena J.Clin.Nutr, 46, suppl.2, S51-S62) 방법은 Berry(J. Cereal Science, 4, p.301-304, 1986)에 방법의 변형에 기초하였고 인큐베이션이 pH 6.9에서 수행된 췌장 α-아밀라제를 이용한 저항성 전분의 직접적 측정을 제공하였다.
Muir and O'Dea(Muir, J.G. & O'Dea, K.(1992) Am.J.Clin.Nutr, 56, 123-127)은 표본이 저작되고 펩신으로 처리된 후 15시간 동안 pH 5.0, 37℃에서 진탕 수조 내에서 췌장 α-아밀라제와 아밀로글루코시다제의 혼합물로 처리되는 절차를 개발하였다. 잔여 펠렛(저항성 전분을 함유한)은 원심분리에 의해 회수되었고 원심분리에 의해 아세테이트 완충액으로 세척되었고 저항성 전분은 가열, DMSO 및 열안정적 α-아밀라제 처리의 결합에 의해 소화되었다.
더욱 최근에는 이들 방법은 Faisant et al.(Faisant, N., Planchot, V.,Kozlowski, F., M.-P.Pacouret, P. Colona. & M. Champ. (1995) Sciences des Aliments, 15, 83-89), Goni et al.(Goni, I., Garcia-Diz, E., Manas, E. & Saura-Calixto, F.(1996), Fd. Chem., 56, 445-449), Akerberg et al.(Akerberg, A.K.E., Liljberg, G.M., Granfeldt, Y.E. Drews, A.W. & Bjorck, M.E.(1998), Am. Soc. Nutr. Sciences, 128, 651-660) 및 Champ et al.(Champ, M., Martin, L., Noah, L & Gratas, M. (1999) In Complex carbohydrates in foods(S.S.Cho, L. Prosky & M. Dreher, Eds.) pp. 169-187. Marcel Dekker, Inc., New York, USA)에 의해 변형되었다. 이들 변형은 사용된 효소 농도의 변화, 사용된 효소의 타입, 표본 전처리(저작), 인큐베이션의 pH 및 α-아밀라제 인큐베이션 단계 후 에탄올의 첨가(또는 비첨가)를 포함한다. 이들 변형 모두는 표본 내 저항성 전분의 측정된 수분에 일부 영향을 미칠 것이다.
더욱이 Megazyme International Ireland Ltd.는 표본 내 저항성 전분, 용해된 전분 및 총 전분 함량을 측정하기 위한 에세이를 개발하였다(Resistant Starch Assay Procedure, AOAC Method 2002.02, AACC Method 32-40).
동물 성능
더한 관점에서 본 발명은 여기에 기술된 바와 같이 동물 성능을 개선시키기 위해 사료의 제조시 효소의 이용에 관한 것이다.
여기서 사용된 "동물 성능 개선"이라는 용어는 예를 들어 생장을 개선시키거나 식품 전환을 개선시키는 것과 같이 하나 이상의 동물의 특징을 개선시키는 것을 나타낸다.
동물 성능은 당 분야에 알려진 다양한 방법 - 생장, 사료 전환 비율 등을 측정하는 것과 같은 방법을 이용하여 측정된다. 또한 배설물의 양, 사망 발생, 뼈 내 인산염의 양 등이 동물 성능의 파라미터로서 측정된다.
본 발명은 실시예를 통해 더욱 상세히 설명되고 이는 본 발명의 수행시 당업자를 돕게되고 본 발명의 범위를 한정하지 않는다.
1. 전분을 포함한 사료 상의 아밀라제 활성을 지닌 후보 효소의 활성을 측정하는 에세이
소맥, 대두 또는 옥수수와 같은 사료 비가공 물질이 취해지고 후보 효소가 일반적인 소호 효소에 추가적으로 첨가되었다.
시험관 내 소화 후 저항성 전분의 양이 잔여(소화되지 않은) 전분의 양으로부터 측정되고 후보 아밀라제 효소가 없는 대조군과 비교되었다.
2. 사료 비가공 물질 내 아밀라제 억제제의 존재의 측정
아밀라제 후보 표본의 억제제 수준은 사료 비가공 물질로부터의 추출물 및 표준 아밀라제 에세이를 이용하여 측정되었다. 사료 비가공 물질로부터 추출물의 증가된 양은 에세이에 첨가되었고 억제의 수준이 아밀라제 활성 내 감소로서 계산되었다.
α-아밀라제 억제제의 에세이 프로토콜
정의
하나의 단위의 아밀라제 활성이 기술된 조건 하에서 1분 내 1 마이크로몰 글리코시드 결합의 가수분해를 촉매한다.
억제는 1%로 측정되고 비-억제된 아밀라제 용액의 활성과 비교된 상대 활성 감소이다.
시약
기질 : 시험관 내 진단성 이용을 위한 Phadebas Amylase Test-tablet (Pharmacia Diagnostics).
시약 용액 : (증류수 내에 1000 ml의 총 부피가 되도록 용해된 0.9 g의 염화나트륨, 2.0 g의 소 혈청 알부민 및 2.2 g의 염화칼슘)
2배 농축된 시약 용액 : (증류수 내에 500 ml의 총 부피가 되도록 용해된 0.9 g의 염화나트륨, 2.0 g의 소 혈청 알부민 및 2.2 g의 염화칼슘)
가능한 억제제를 함유한 테스트 물질로부터의 추출물 : (표본은 미세하게 연마되고 약 2 g이 10분간 10 ml의 냉수와 혼합되고 이후 슬러리가 여과됨)
0.5 M NaOH 용액
여과지
640 nm에서의 흡광도를 측정하는 스펙트로포토미터
테스트되는 효소의 표본
절차
테스트 효소 표본
시약 용액 내 0.2 ml의 희석된 효소 및 4.0 ml의 시약 용액이 시험관 내로 피펫팅되었고 5분간 +37℃에서 평형화되었다. 기질 태블릿(tablet)이 같이 첨가되었고 10초간 혼합되었고 15분간 +37℃에서 인큐베이트되었다. 반응의 시작 시간은 태블릿의 첨가시 기록되었다. 1.0 ml의 0.5 M NaOH 용액이 첨가되었고 교반되었다. 용액은 여과되고 10분간 3500 rmp으로 원심분리되었고 흡광도가 620 nm에서 시약 블랭크에 대해 측정되었다. 효소 표본의 흡광도는 일반적으로 0.3∼0.5 사이이었다.
억제의 테스트 :
상기 기술된 동일한 절차가 테스트 효소 표본에 대해 수행되었으나 4.0 ml의 시약 용액 대신 2.0 ml의 2배 농축된 시약 용액 및 가능한 억제제를 포함한 테스트 물질로부터의 추출물 2.0 ml이 사용되었다.
시약 블랭크
4.2 ml의 시약 용액이 5분간 +37℃에서 평형화되었다. 기질 태블릿이 같이 첨가되었고 10초간 교반된 후 15분간 +37℃에서 인큐베이트되었다. 1.0 ml의 0.5 M NaOH 용액이 첨가되었고 교반되었다. 용액은 여과되었고 10분간 3500 rpm으로 원심분리되었다.
계산
표본의 흡광도는 α-아밀라제 활성에 비례하였다. 각 효소 희석의 아밀라제 활성은 태블릿 키트에 동봉된 계산된 태블릿으로부터 측정되었다. 표본의 아밀라제 활성은 하기와 같이 계산되었다 :
활성 (U/g) = { Act*Df } over {1000 }
Act = Phadebas Amylase Test tablet으로부터의 효소 희석 판독의 아밀라제 활성 수치(U/리터로 표현됨)
Df = 희석 인자(ml/g)
1000 = 리터의 ml로의 전환 인자
활성은 순수 효소 및 물질 추출물을 포함한 테스트 표본 모두에 대해 계산되었다. 추출물의 억제는 추출물이 순수 효소의 활성 백분율로서 첨가될 때 활성의 감소로서 측정되었다.
억제 = { 추출물로의 효소 활성 } over { 순수 효소 활성 }*100%
3. 저항성 전분 양의 측정
낮은 물 함량을 지닌 전분 표본인 1 mm 체를 통해 제분되었다. ≥5%의 지방 함량을 지닌 표본이 제분 전에 지방질이 제거되었다(석유-에테르 추출). 이후 표본은 직접적으로 균질화되었고 분석을 위해 원심분리관에 옮겨졌다.
100 mg의 건조 제분 표본이 50-ml 원심분리관에 놓였고 10 ml의 KCl-HCl 완충액 pH 1.5가 첨가되었다(2 M HCl 또는 0.05 M NaOH로 적정). 습윤 표본의 경우건조 물질의 100 mg과 동일하게 중량 측정된 부분이 KCl-HCl 완충액 pH 1.5 내로 첨가되었고 균질화되었고 원심분리관에 놓였다. 0.2 ml의 펩신 용액(1 펩신/10 ml 완충액 KCl-HCl)이 첨가되었고 혼합되었고 일정한 진탕으로 40℃에서 60분간 수조 내에 시험관을 놓아두었다. 40℃에서의 인큐베이션 후 표본이 회수되었고 상온에서 냉각되었다. 9 ml의 0.1 M Tris-maleate 완충액 pH 6.9가 첨가되었고(2 M HCl 또는 0.5 M NaOH로의 pH 적정) 1 ml의 α-아밀라제 용액(Tris-maleate 완충액 ml 당 40 mg의 α-아밀라제). 혼합한 후 표본은 일정한 진탕으로 37℃ 수조 내에서 16시간 동안 인큐베이트되었다. 표본은 원심분리되었고(15분, 3000 g 및 상청액이 제거되었다.
3 ml의 증류수가 잔여물에 첨가되었고 조심스럽게 표본을 적셨다. 3 ml의 4 M KOH가 첨가되었고 표본이 혼합되었고 상온에서 30분간 진탕되었다. 5.5 ml의 2 M HCl 및 3 ml의 0.4 M 아세트산나트륨 완충액, pH 4.75가 첨가되었고(2 M HCl 또는 0.5 M NaOH로 pH 적정) 80 ㎕의 아밀로글루코시다제가 첨가되었다. 혼합 후 표본은 60℃ 수조 내에서 56분 동안 일정하게 진탕되었다.
표본은 원심분리되었고(15분, 3000 g) 상청액이 수집되었다. 잔여물은 10 ml의 증류수로 적어도 1회 이상 세척되었고 다시 원심분리되었고 상청액은 앞서 수득된 것과 혼합되었다.
3.1. 글루코스 농도를 측정하는 표준 곡선의 준비(10-60 ppm)
0.5 ml의 물, 표본 및 표준물이 시험관 내로 피펫팅되었다. 1 ml의 글루코스 측정 키트(GOD-PAP)로부터의 시약이 첨가되었다. 용액은 혼합되었고 37℃ 수조 내에 30분간 정치되었다.
인큐베이션 후 5분과 45분 사이에서 표본 및 표준물의 흡광도가 500 nm에서 시약 블랭크에 대해 판독되었다. 표본의 글루코스 농도가 알려진 글루코스 농도(10-60 ppm)를 지닌 표준물의 흡광도로부터 작성된 표준 곡선을 이용하여 계산되었다. 테스트 표본의 저항성 전분 농도는 글루코스 ×0.9의 mg으로 계산되었다.
4. 순수 전분 및 식물 물질 내 저항성 전분의 측정
4.1. 테스트 표본의 제조
곡물 또는 맥아의 50 g의 표본이 1.0 mm 체를 통과하는 연마 제분기 내에서 연마되었다. 신선한 표본(즉 통조림 강낭콩, 바나나, 감자)이 손으로 작동되는 육류 민서(mincer) 잘게 썰려서 4 mm 스크린을 통과한다. 건조 표본의 수분 함량은 AOAC Method 925.10(14)에 의해 측정되었고 신선한 표본은 AOAC Method 925.10에 따라 동결건조 후 오븐 건조에 의해 측정되었다.
4.2. 저항성 전분의 측정
100 mg의 표본의 중량이 나사 뚜껑 튜브 내에서 직접적으로 측정되었다. 소듐 말리에이트(sodium maleate) 완충액(pH 6) 내에 AMG(3 U/ml)를 함유한 4.0 ml의 췌장 α-아밀라제(10 mg/ml)가 각 튜브에 첨가되었다. 혼합 후 표본은 연속적인 진탕(200 스트로크/분)으로 37℃에서 인큐베이트되었다. 16시간 후 표본은 4.0 ml의 IMS(99% v/v)으로 처리되었고 3,000 rmp으로 10분간 원심분리되었다. 상청액이 제거되었고 펠렛은 볼텍스 믹서 상에서 강한 교반으로 2 ml의 50% IMS 내에 재-현탁되었다. 6 ml의 50% IMS가 첨가되었고 혼합되었고 튜브는 3,000 rpm으로 10분간 원심분리되었다. 현탁액 및 원심분리 단계가 반복되었다.
2 ml의 2 M KOH가 각 튜브에 첨가되었고 펠렛은 얼음/수조 내에서 약 20분간 교반함으로서 재현탁되었다(저항성 전분을 용해시킴). 각 튜브는 8 ml의 1.2 M 아세트산나트륨 완충액(pH 3.8)으로 교반하면서 처리되었다. 0.1 ml의 AMG(3200 U/ml)이 즉시 첨가되었고 튜브는 연속적으로 혼합되면서 50℃에서 30분간 수조 내에 놓였다.
>10% 저항성 전분을 함유한 표본은 100 ml의 부피측정 플라스크(물 세척병 이용)에 옮겨졌고 물로 부피가 조정되었다. 용액의 알리쿼트(aliquote)가 3,000rpm으로 10분간 원심분리되었다.
<10% 저항성 전분을 함유한 표본(희석 없이)은 3,000 rpm으로 10분간 원심분리되었다.
희석되거나 희석되지 않은 상청액의 0.1 ml의 알리쿼트(2반복)가 유리 시험관(16 ×100 mm)에 옮겨졌고, 3.0 ml의 GOPOD 시약(Glucose Oxidase-Peroxidase-aminoantipyrine 완충액 혼합물 - 0.4 mM 인산염 완충액 pH 7.4 내 글루코스 옥시다제의 혼합물, >12000 U/L; 퍼옥시다제, >650 U/L; 및 4-아미노안티피린)으로 처리되었고 50℃에서 20분간 인큐베이트되었다.
시약 블랭크 용액은 0.1 ml의 0.1 M 아세트산나트륨 완충액(pH 4.5)와 3.0 ml의 GOPOD 시약을 혼합함으로서 제조된다. 글루코스 표준물은 0.1 ml의 글루코스(1 mg/ml)와 3.0 ml의 GOPOD 시약을 혼합함으로서 제조되었다. 50℃에서 20분간 인큐베이션 후 각 용액의 흡광도가 510 nm에서 시약 블랭크에 대해 측정되었다.
4.3. 계산
테스트 표본 내 저항성 전분 함량(건조 중량 기초, %)이 하기와 같이 계산되었다 :
>10% 저항성 전분을 함유한 표본의 경우 :
= ΔE ×F ×100/0.1 ×1/1000 ×100/W ×162/180
= ΔE ×F/W ×90.
<10% 저항성 전분을 함유한 표본의 경우 :
= ΔE ×F ×10.3/0.1 ×1/1000 ×100/W ×162/180
= ΔE ×F/W ×9.27.
ΔE = 시약 블랭크에 대해 판독된 흡광도(반응)
F = 흡광도에서 마이크로그램으로의 전환 = 100 (㎍ 글루코스)/100 ㎍의 글루코스의 흡광도
100/0.1 = 부피 보정 (100 ml로부터 취해진 0.1 ml); 1/1000 = 마이크로그램으로부터 밀리그램으로의 전환
W = 분석된 표본의 건조 중량 [="즉" 중량 ×(100-수분함량)/100];
100/W = 표본 중량의 백분율로서의 존재 전분의 인자
162/180 = 측정된 자유 글루코스로부터 전분 내 발생한 무수-글루코스로 전환하는 인자
10.3/0.1 = 인큐베이션 용액이 희석되지 않고 최종 농도가 ∼10.3 ml인 0-10% 저항성 전분을 함유한 표본에 대한 부피 보정 (10.3 ml로부터 취해진 0.1 ml).
5. 분해된 비가공 전분의 측정
본 실시예에서 아밀라제 활성을 지닌 2개의 효소의 비가공 전분 분해시 췌장 α-아밀라제를 돕는 능력이 측정되었다. 효소는 WO9601323에 개시된 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제(LTAA, Genencor International Inc.) 및 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제이다.
5.1. 원리
이러한 분석은 Megazyme(Megazyme International Ireland Limited)로부터의 Resistant Starch Assay Kit(Cat. no. K-RSTAR)에 기초한다. Resistant Starch Assay Procedure(AOAC Method 2002.02 AACC Method 32-40)의 원리는 본 실시예의 목적에 맞게 변형되어 인큐베이션 시간은 16시간 대신 1.5시간만 수행하였다.
표본은 췌장 α-아밀라제 및 아밀로글루코시다제(AMG) 및 선택적으로는 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제(LTAA, Genencor International Inc.) 또는 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제로 37℃에서 1.5시간 동안 진탕 수조 내에서 인큐베이트되었고 그 시간 동안 전분이 용해되었고 효소의 결합된 작용에 의해 글루코스로 가수분해되었다. 반응은 동일한 부피의 산업적으로 메틸화된 스피릿(Industrial methylated spirits, IMS, 변성된 에탄올)의 첨가에 의해 종결되었다. 상청액 내의 용해된 전분이 AMG로 글루코스로 정량적으로 가수분해되었다. 글루코스는 옥시다제/퍼옥시다제 시약(GOPOD)으로 측정되었다. 이는 표본의 용해된 전분 함량의 직접적인 측정이다.
바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제(LTAA) 또는 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제의 단위는 Phadebas amylase test(Pharmacia & Upjohn)에 의해 측정되었다.
5.2. 용이하게 분해가능한 전분의 측정
100 mg의 표본의 중량이 나사 뚜껑 튜브(Corning 배양 튜브; 16 ×125 mm) 내에서 직접 측정되었다. 소듐 말리에이트 완충액 내 AMG(3 U/ml)를 함유한 4.0 ml의 췌장 α-아밀라제(10 mg/ml) 및 선택적으로 총 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제 또는 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제의 0.4 U이 각 튜브에 첨가되었다. 혼합 후 표본은 연속적으로 진탕하면서 37℃ 15분간 인큐베이트되었다. 1.5시간 후 표본은 4.0 ml의 IMS(99% v/v)으로 볼텍스 믹서 상에서 강한 교반으로 처리되었고 3,000 rpm으로 20분간 원심분리되었다. 상청액은 100 ml의 부피측정 플라스크로 옮겨졌고 탈염수로 100 ml까지 채워졌다. 2 ml의 표본이 취해졌고 0.2 ml의 AMG(3200 U/ml)이 첨가되었다. 튜브는 연속적인 혼합으로 50℃에서 30분간 수조 내에 놓였다.
희석되거나 희석되지 않은 상청액의 0.1 ml의 알리쿼트가 유리 시험관(16×100 mm) 내로 옮겨졌고, 3.0 ml의 GOPOD로 처리되었고 50℃에서 20분간 인큐베이트되었다. 시약 블랭크 용액은 0.1 ml의 0.1 M 아세트산나트륨 완충액(pH 4.5)과 3.0 ml의 GOPOD 시약을 혼합함으로서 제조되었다. 글루코스 표준물은 0.1 ml의 글루코스(1 mg/ml)와 3.0 ml의 GOPOD 시약을 혼합함으로서 제조되었다(4반복으로). 50℃에서 20분간 인큐베이션 후 각 용액의 흡광도는 510 nm에서 물에 대해 측정되었다.
5.3. 계산
표본 내 용해된(건조 중량 기초, %) 전분 함량은 하기와 같이 계산되었다 :
= ΔE ×G ×D ×100/0.1 ×1.1 ×1/1000 ×100/W ×162/180
= ΔE ×(G ×D)/W ×99.
ΔE = 시약 블랭크에 대해 판독된 흡광도(반응)
G = 흡광도에서 마이크로그램으로의 전환 = 100 (㎍ 글루코스)/100 ㎍의 글루코스의 흡광도
D = 상청액 희석; 100/0.1 = 부피 보정(100 ml로부터 취해진 0.1 ml); 1.1 = 1,5시간 인큐베이션 후 AMG가 표본에 첨가될 때 희석,
1/1000 = 마이크로그램으로부터 밀리그램으로의 전환
162/180 = 측정된 자유 글루코스로부터 전분 내 발생한 무수-글루코스로 전환하는 인자
5.4. 결과
첫 번째로, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제이 작용이 분석되었고 췌장 α-아밀라제 및 아밀로글루코시다제(AMG)만을 포함한 참조와 비교되었다. 처리 후 표본 내 용해성 전분의 양(%)은 표 1에 나타나 있다.
효소 없음 0.4㎕ LTAA
48.97 49.45
51.02 49.51
50.09
52.27
평균 : 49.995 50.33
이들 결과는 LTAA가 췌장 α-아밀라제 및 AMG 단독과 비교하여 불용성 전분을 분해할 때 어떠한 부가 효과도 지니지 않음을 나타낸다.
두 번째로 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제의 작용이 분석되었고 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제와 비교되었다. 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제 및 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제의 처리 후 표본 내 용해성 전분의 양(%)이 표 2에 나타나 있다.
0.4 ㎕ LTAA 0.4 u 써모마이세스
49.45 53.99
49.51 56.03
50.09 55.98
52.27 56.64
평균 50.33 55.66
이들 결과는 써모마이세스 라누기노서스 아밀라제가 불용성 전분을 분해할 때 부가 효과를 지님을 나타낸다(평균은 99%의 신뢰수준으로의 유의적인 차이임).
6. 동물 사료의 제조
일반적인 사료는 하기 성분으로부터 제조된다 :
옥수수 57.71%
대두 가루 48 31.52%
콩기름 6.30%
NaCl 0.40%
DL 메티오닌 0.20%
인산이칼슘 1.46%
비타민/미네랄 믹스 1.25%
총 100%
사료 혼합물은 30초간 80℃의 온도를 제공하도록 증기를 주입시킴으로서 가열되고 펠레타이저(pelletizer) 내에서 펠렛화된다. 펠렛은 이후 건조된다.
이러한 과정은 펠렛화된 사료를 수득하는 사료 산업에서 일반적이다.
7. 아밀라제 효소의 전분 포함 동물 사료로의 첨가의 효과
7.1. 사육 시도 - 피그
음식물
대조군 피그가 통상의 음식물로 사육되는 동안 5개의 실험적 음식물이 사료 그램 당 1-10 U의 외생적 아밀라제로 공급되었다. 음식물은 임의적으로 제공되었다. 물도 각 홀딩 펜(holding pen) 내에 위치한 젖꼭지 급수기로부터 임의적으로 유용하였다. 각 음식물은 스타터(starter) 및 그로워(grower) 페이스를 지녔다. 피그는 6 치료 중의 하나에 할당되었고 각 음식물 조합(스타터 및 그로워)은 6 반복으로 사육되었다.
동물/주거
통상의 유니트로부터의 이유기의 36 암컷 피그(pig)가(생 체중 범위 7.5 - 9 kg) 이용되었다. 피그는 개별적인 축사 내에 주거되었다.
절차
도착시 동물은 개별적으로 체중이 측정되고 즉시 실험 유니트로 옮겨졌고 적당하게 번호가 매겨진 축사 내에 주거되었고 대조군 또는 실험 스타터 음식물로 할당되었다. 피그는 이후 7일 마다 체중이 측정되었다. 피그는 임의적으로 사육되었고 0일로부터 소비된 사료가 주 단위로 기록되었다. 피그 체중이 16.0 kg 이상일 때 그로워 음식물로 옮겨졌다. 사료 섭취량 및 체중이 매주 기록되었다. 동물은 급식 시간에 하루에 두 번 검사되었다. 건강, 청결도 및 다른 관련된 관찰이 기록되었다. 피글렛(piglet)이 27.5 kg의 체중에 도달하면 시도가 종결된다.
생장률, 사료 섭취량 및 사료 전환 비율이 약 10 내지 25 kg 생 체중 사이의 피글렛에서 측정되었다.
결론
저항성 전분 분해 아밀라제를 함유한 실험 음식물로 사육된 동물은 사료 전환 비율(FCR)의 현저한 감소를 나타내었고 이는 대조군과 비교하여 주어진 체중 증가에 도달시 더 적은 사료가 요구됨을 나타내었다.
7.2. 사육 시도 - 브로일러(broiler)
음식물
대조군 동물은 통상의 음식물로 사육되었고 5 실험 음식물이 사료 그램 당 1-10 U 외생적 아밀라제와 함께 공급되었다. 음식물은 임의적으로 제공되었다. 물은 임의적으로 이용가능하였다. 각 음식물은 스타터 및 그로워 페이스를 지녔다.
동물
브로일러는 6 음식물 중의 하나에 할당되었고 각 음식물 조합(스타터 및 그로워)은 42 동물 각각의 8 반복에 사육되었다. 동물은 규칙적으로 조사되었다. 건강, 청결도 및 다른 관련된 관찰이 기록되었다.
절차
도착시 동물은 개별적으로 체중이 측정되고 즉시 실험 유니트로 옮겨졌고 적당하게 번호가 매겨진 축사 내에 주거되었고 대조군 또는 실험 스타터 음식물로 할당되었다. 브로일러는 20일 및 40일 후 체중이 측정되었다. 20일 및 40일 후 사료의 이용도 기록되었다. 생장률, 사료 섭취량 및 사료 전환 비율이 측정되었다.
결론
저항성 전분 분해 아밀라제를 함유한 실험 음식물로 사육된 동물은 사료 전환 비율(FCR)의 현저한 감소를 나타내었고 이는 대조군과 비교하여 주어진 체중 증가에 도달시 더 적은 사료가 요구됨을 나타내었다.
또한 실험 음식물로 사육된 브로일러는 생장률의 현저한 증가 및 사료 섭취량의 감소를 나타내었다.
본 발명의 요약
광범위한 관점에서 본 발명은 전분을 포함한 사료 내에서 사용되는 구성성분에 관한 것으로서 상기 구성성분은 효소를 포함하고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있다.
또다른 광범위한 관점에서 본 발명은 저항성 전분을 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소에 접촉시키는 것으로 구성된 사료 내 저항성 전분을 분해하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 다른 관점
본 발명의 다른 관점은 숫자로 표시된 단락에 의해 기술될 것이다.
1. 전분을 포함한 사료 내에서 사용되는 구성성분에 있어서 상기 구성성분은 효소를 포함하고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있고 상기 효소는 하나 이상의 하기 특성을 포함함을 특징으로 하는 구성성분 :
a. 전분 결합 도메인
b. 열안정적
c. pH 안정적
d. 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적
2. 제 1단락에 있어서, 상기 효소는 전분 결합 도메인을 포함함을 특징으로 하는 구성성분
3. 제 1단락 또는 제 2단락에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 구성성분
4. 제 1, 2 또는 3단락에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 구성성분
5. 전 단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적임을 특징으로 하는 구성성분
6. 전 단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 비가공 전분 분해 효소임을 특징으로 하는 구성성분
7. 전 단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 시클로덱스트린 글리코실 트랜스퍼라제(cyclodextrin glycosyl transferase, CGTase)임을 특징으로 하는 구성성분
8. 제 7단락에 있어서, 상기 CGTase는 써모아나에로박테리움 써모술푸로게네스(Thermoanaerobacterium thermosulfurogenes)로부터 유도됨을 특징으로 하는 구성성분
9. 제 7단락 또는 제 8단락에 있어서, 상기 CGTase는 ToruzymeTM임을 특징으로 하는 구성성분
10. 제 7단락에 있어서, 상기 CGTase는 NovamylTM과 같은 말토스 아밀라제임을 특징으로 하는 구성성분
11. 제 1단락에 있어서, 상기 효소는 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans) F2 아밀라제, 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis) 아밀라제, 크립토코커스(Cryptococcus) S-2 아밀라제, 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae) 아밀라제, 아스퍼질러스(Aspergillus) K-27 아밀라제, 바실러스 리체니포미스(Bacillus licheniformis) 아밀라제, 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis) 아밀라제 및 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens) 아밀라제로 구성된 군으로부터 선택된 아밀라제 효소임을 특징으로 하는 구성성분
12. 제 11단락에 있어서, 상기 효소는 바실러스 리체니포르미스 아밀라제(Thermamyl) 또는 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 아밀라제와 같은 용해성 아밀라제임을 특징으로 하는 구성성분
13. 전 단락의 어느 한 단락에 따른 사료에 사용되는 구성성분에 있어서, 상기 사료는 돼지 또는 가금류용 사료임을 특징으로 하는 구성성분
14. 제 13단락에 있어서, 상기 사료는 콩류 또는 곡류와 같은 비가공 물질임을 특징으로 하는 구성성분
15. 전분 및 효소를 포함하는 사료에 있어서; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있고 상기 효소는 하나 이상의 하기 특성을 포함함을 특징으로 하는 사료 :
a. 전분 결합 도메인
b. 열안정적
c. pH 안정적
d. 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적
16. 제 15단락에 있어서, 상기 효소는 전분 결합 도메인을 포함함을 특징으로 하는 사료
17. 제 15단락 또는 제 16단락에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 사료
18. 제 15, 16 또는 17단락에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 사료
19. 제 15단락 내지 제 18단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적임을 특징으로 하는 사료
20. 제 15단락 내지 제 19단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 비가공 전분 분해 효소임을 특징으로 하는 사료
21. 제 15단락 내지 제 20단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 사료는 돼지 또는 가금류용임을 특징으로 하는 사료
22. 콩류 또는 곡류와 같은 비가공 물질인 제 21단락에 따른 사료
23. 저항성 전분을 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소에 접촉시키는 것으로 구성된 사료 내 저항성 전분을 분해하는 방법에 있어서, 상기 효소는 하나 이상의 하기 특성을 포함함을 특징으로 하는 방법 :
a. 전분 결합 도메인
b. 열안정적
c. pH 안정적
d. 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적
24. 제 23단락에 있어서, 상기 효소는 전분 결합 도메인을 포함함을 특징으로 하는 방법
25. 제 23단락 또는 제 24단락에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 방법
26. 제 23, 24 또는 25단락에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 방법
27. 제 23단락 내지 제 26단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적임을 특징으로 하는 방법
28. 제 23단락 내지 제 27단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 효소는 비가공 전분 분해 효소임을 특징으로 하는 방법
29. 제 23단락 내지 제 28단락의 어느 한 단락에 있어서, 상기 사료는 돼지 또는 가금류용임을 특징으로 하는 방법
30. 제 29단락에 있어서, 상기 사료는 콩류 또는 곡류와 같은 비가공 물질임을 특징으로 하는 방법
31. 저항성 전분을 위한 전분을 포함한 사료의 제조시 효소의 이용에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있고, 상기 효소는 하나 이상의 하기 특성을 포함함을 특징으로 하는 효소의 이용 :
a. 전분 결합 도메인
b. 열안정적
c. pH 안정적
d. 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적
32. 사료로부터 유도가능한 에너지의 양을 증진시키기 위한 사료의 제조시 효소의 이용에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 효소의 이용
33. 전분과 효소를 혼합하는 것으로 구성된 사료의 제조 방법에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 방법
34. 사료 내에서 사용되는 구성성분의 확인 방법에 있어서, 상기 구성성분은 효소를 포함하고, 상기 방법은 저항성 전분을 후보 구성성부에 접촉시키고 상기 저항성 전분의 분해 정도를 측정하는 것으로 구성되고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있고 상기 효소는 하나 이상의 하기 특성을 포함함을 특징으로 하는 방법 :
a. 전분 결합 도메인
b. 열안정적
c. pH 안정적
d. 아밀라제 억제제에 실질적으로 저항적
상기 명세서 내에서 언급된 모든 문헌은 참고문헌으로 통합된다. 본 발명의 기술된 방법 및 시스템의 다양한 변형 및 변화가 본 발명의 범위 및 정신에서 벗어남 없이 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명이 특정한 바람직한 실시태양과 관련하여 기술되었으나 청구된 본 발명은 이러한 특정한 실시태양에 한정되지 않음이 이해되어야 한다. 당업자에게 분명한 본 발명을 수행하기 위한 기술된 방법의 다양한 변형은 하기 청구항의 범위 내에 있다.
참고문헌

Claims (33)

  1. 전분을 포함한 사료에 사용되는 구성성분에 있어서, 상기 구성성분을 효소를 포함하고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 구성성분
  2. 제 1항에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 구성성분
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 구성성분
  4. 상기 항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 비가공 전분 분해 효소임을 특징으로 하는 구성성분
  5. 상기 항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 바실러스 서큘란스(Bacillus circulans) F2 아밀라제, 스트렙토코커스 보비스(Streptococcus bovis) 아밀라제,크립토코커스(Cryptococcus) S-2 아밀라제, 아스퍼질러스(Aspergillus) K-27 아밀라제, 바실러스 리체니포미스(Bacillus licheniformis) 아밀라제 및 써모마이세스 라누기노서스(Thermomyces lanuginosus) 아밀라제로 구성된 군으로부터 선택된 아밀라제 효소임을 특징으로 하는 구성성분
  6. 상기 항의 어느 한 항에 있어서, 상기 사료는 돼지 또는 가금류용 사료임을 특징으로 하는 구성성분
  7. 제 6항에 있어서, 상기 사료는 콩류 또는 곡류와 같은 비가공 물질임을 특징으로 하는 구성성분
  8. 전분 및 효소를 포함하는 사료에 있어서; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 사료
  9. 제 8항에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 사료
  10. 제 8항 또는 제9항에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 사료
  11. 제 8항 내지 제10항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 비가공 전분 분해 효소임을 특징으로 하는 사료
  12. 돼지 또는 가금류용 사료임을 특징으로 하는 제 8항 내지 제11항에 따른 사료
  13. 콩류 또는 곡류와 같은 비가공 물질임을 특징으로 하는 제 12항에 따른 사료
  14. 저항성 전분을 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있는 효소와 접촉시키는 것으로 구성된 사료 내 저항성 전분의 분해 방법
  15. 제 14항에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 방법
  16. 제 14항 또는 제 15항에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 방법
  17. 제 14항 내지 제 16항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 비가공 전분 분해 효소임을 특징으로 하는 방법
  18. 제 14항 내지 제 17항의 어느 한 항에 있어서, 상기 사료는 돼지 또는 가금류용임을 특징으로 하는 방법
  19. 제 18항에 있어서, 상기 사료는 콩류 또는 곡류와 같은 비가공 물질임을 특징으로 하는 방법
  20. 저항성 전분을 분해하기 위한 전분을 포함한 사료의 제조시 효소 이용에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 상기 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 이용
  21. 열량 수치를 증진시키기 위한 사료의 제조시 효소 이용에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 이용
  22. 동물 성능을 증진시키기 위한 사료의 제조시 효소 이용에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 이용
  23. 제 20항 내지 제 22항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 이용
  24. 제 20항 내지 제 23항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 이용
  25. 전분과 효소를 혼합시키는 것으로 구성된 사료 제조 방법에 있어서, 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 방법
  26. 사료에 사용되는 구성성분을 확인하는 방법에 있어서, 상기 구성성분은 효소를 포함하고, 상기 방법은 저항성 전분을 후보 구성성분과 접촉시키고 상기 저항성 전분의 분해 정도를 측정하는 것으로 구성되고; 상기 효소는 아밀라제 활성을 지니고 상기 저항성 전분을 분해할 수 있음을 특징으로 하는 방법
  27. 제 25항 또는 제 26항에 있어서, 상기 효소는 열안정적임을 특징으로 하는 방법
  28. 제 25항 내지 제 27항의 어느 한 항에 있어서, 상기 효소는 pH 안정적임을 특징으로 하는 방법
  29. 명세서 내에 실질적으로 기술되고 수반된 실시예에 나타난 구성성분
  30. 명세서 내에 실질적으로 기술되고 수반된 실시예에 나타난 사료
  31. 명세서 내에 실질적으로 기술되고 수반된 실시예에 나타난 이용
  32. 명세서 내에 실질적으로 기술되고 수반된 실시예에 나타난 방법
  33. 명세서 내에 실질적으로 기술되고 수반된 실시예에 나타난 사료에서 이용되는 구성성분의 확인 방법
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Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7252836B2 (en) * 2003-01-13 2007-08-07 Penwest, Ltd. Food and feed compositions including resistant starch
WO2006074089A2 (en) * 2004-12-30 2006-07-13 Hill's Pet Nutrition, Inc. Methods for enhancing the quality of life of a senior animal
US8252742B2 (en) 2004-12-30 2012-08-28 Hill's Pet Nutrition, Inc. Methods for enhancing the quality of life of a senior animal
BRPI0615117A2 (pt) * 2005-08-25 2011-05-03 Archer Daniels Midland Co uso de dextrinas na alimentação de animais
US20070172514A1 (en) * 2006-01-20 2007-07-26 Francis Chi Materials and methods for improving livestock productivity
CN103120264B (zh) * 2006-07-13 2015-07-08 诺维信公司 细菌淀粉酶在牛类动物的饲料中的用途
CA2665595A1 (en) 2006-10-10 2008-04-17 Danisco Us, Inc., Genencor Division Glucoamylase variants with altered properties
US8592194B2 (en) 2007-10-09 2013-11-26 Danisco Us Inc. Glucoamylase variants with altered properties
EP2481796B1 (en) 2007-10-09 2014-06-11 Danisco US Inc. Glucoamylase variants
MX2010005461A (es) 2007-11-20 2010-06-02 Danisco Us Inc Variantes de glucoamilasa con propiedades alteradas.
BR112012003787A2 (pt) 2009-08-19 2017-07-04 Danisco variantes de glicoamilase
CN102712915B (zh) 2009-08-19 2014-12-10 丹尼斯科美国公司 具有改良比活和/或热稳定性的葡糖淀粉酶的组合变体
GB201011513D0 (en) 2010-07-08 2010-08-25 Danisco Method
BR112014014593A2 (pt) * 2011-12-15 2017-06-13 Hills Pet Nutrition Inc composição alimentícia para animais de estimação com uma textura macia
CN104011067B (zh) 2011-12-22 2017-12-26 杜邦营养生物科学有限公司 具有葡糖淀粉酶活性的多肽及其制备方法
MX2015002099A (es) 2012-08-22 2015-05-11 Dupont Nutrition Biosci Aps Variantes que tienen actividad glucoamilasa.
AU2017332665B2 (en) 2016-09-23 2021-12-02 International N&H Denmark Aps Use of low pH active alpha-1,4/1,6-glycoside hydrolases as a feed additive for ruminants to enhance starch digestion
CN112218953A (zh) 2018-03-09 2021-01-12 丹尼斯科美国公司 葡糖淀粉酶及其使用方法
CN111281970A (zh) * 2018-12-10 2020-06-16 河南普爱饲料股份有限公司 一种复合益生菌发酵组合物及其在制备防治霉菌毒素引起的上皮细胞损伤的制剂中的应用

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3950543A (en) * 1970-06-05 1976-04-13 United Nations Childrens' Fund Process for making foods and feeds
JPS5534046A (en) * 1978-09-01 1980-03-10 Cpc International Inc Novel glucoamyrase having excellent heat resistance and production
HU180730B (en) * 1979-12-29 1983-04-29 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Method for producing self-splitting preparation and fodder mixture
JPS6075238A (ja) * 1983-09-29 1985-04-27 Toshio Tsubaki 家畜飼料
JPS6083595A (ja) * 1983-10-13 1985-05-11 Daikin Ind Ltd デンプンの直接酵素糖化法
DE3587623T2 (de) * 1984-08-06 1994-05-19 Genencor Inc Enzymatische Hydrolyse von körniger Stärke direkt bis zu Glukose.
US4746531A (en) * 1986-04-18 1988-05-24 Bloomfield Feed Mill, Inc. Swine feed
FI77359C (fi) * 1986-08-22 1989-03-10 Suomen Sokeri Oy Foderfix och foerfarande foer framstaellning av densamma.
JPH0763364B2 (ja) * 1986-08-28 1995-07-12 大関株式会社 生澱粉分解酵素の製造法
FI81484C (fi) * 1987-04-06 1990-11-12 Cultor Oy Metod foer behandling av foderraovara, foderraovara och foderblandning.
US5314692A (en) * 1987-08-24 1994-05-24 Cultor Ltd. Enzyme premix for feed and method
AU620412B2 (en) * 1988-07-01 1992-02-20 Showa Denko Kabushiki Kaisha Thermostable amylase and use thereof
JP2790320B2 (ja) * 1988-07-01 1998-08-27 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 耐熱性アミラーゼ並びにその製造及び使用方法
JP2868818B2 (ja) * 1990-01-08 1999-03-10 日本食品化工株式会社 とうもろこし澱粉抽出残渣の処理法
JPH05328914A (ja) * 1992-06-01 1993-12-14 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd 吸油量の少ない揚げ物食品及びそれに用いる組成物
FR2712891B1 (fr) * 1993-11-22 1996-02-02 Roquette Freres Procédé de purification d'un polymère soluble hypocalorique du glucose et produit ainsi obtenu.
JPH09234078A (ja) * 1996-03-04 1997-09-09 Meiji Milk Prod Co Ltd 乳酸菌用分泌ベクター及び該ベクターを用いたタンパク質の製造方法
CA2208827C (en) * 1996-07-09 2006-01-03 Ben A. Steensma Animal feed
WO1999034687A1 (en) * 1998-01-07 1999-07-15 Metabolix, Inc. Animal nutrition compositions
CA2322467A1 (en) * 1998-03-09 1999-09-16 Kent J. Lanter Animal feed gel
US6117458A (en) * 1999-06-01 2000-09-12 Morgan; Norma B. Swine feed composition
CN100378218C (zh) * 1999-10-01 2008-04-02 诺沃奇梅兹有限公司 喷雾干燥的酶产品
JP3507860B2 (ja) * 2000-03-13 2004-03-15 独立行政法人酒類総合研究所 酵母由来の新規リパーゼｃｓ２

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CN100429989C (zh) 2008-11-05
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MXPA04005679A (es) 2004-12-06
CN1617674A (zh) 2005-05-18

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