KR20000053251A

KR20000053251A - 항혈전성유기질산염

Info

Publication number: KR20000053251A
Application number: KR1019990704229A
Authority: KR
Inventors: 델솔다토피에로
Original assignee: 니콕스 에스. 에이.
Priority date: 1996-11-14
Filing date: 1997-11-12
Publication date: 2000-08-25
Also published as: CN1242768A; CA2272063C; WO1998021193A1; AU5551998A; ATE226199T1; KR100504122B1; DE69716461T2; CN1094931C; PT941218E; EP0941218A1; RU2190594C2; AU729423B2; IL129768A0; JP4264137B2; BR9712959A; IL129768A; CA2272063A1; ES2186013T3; BR9712959B1; IT1295694B1

Abstract

항혈전성응용물(antithrombotic application)을 위한 약제(medicament)들의 제조를 위한 일반식: A-(X₁-NO₂)_t0의 화합물(compound)들 또는 이들의 조성물(composition)들 또는 이들의 염(salt)들: 여기서, t0은 1 또는 2와 등가이며; X₁은 알킬렌연결가교(alkylene connecting bridge) 이며; A는 심혈관생성물들(cardiovascular product)의 잔재물(residue)이며, 바람직하게는, 티몰올(timolol) 또는 에날아프릴(enalapril).

Description

항혈전성유기질산염{Antithrombotic Organic Nitrates}

본 발명은 항혈전작용(antithrombotic activity)을 갖는 신규한 생성물(products)들에 관한 것이다.

항염증성생성물(anti-inflammatory)들을 억제하는 시클로옥시겐아제 (cyclooxygenase) COX-는 출원인 명의의 이전의 특허출원들로부터 공지된 것이다. 상세하게는, 공개된 국제특허출원 WO94/04484, WO94/12463, WO95/09831 및 WO95/30641호를 참조하기 바란다. 이들 특허출원들은 비산성말단(non-acid ending)을 갖는 비스테로이드항염증성생성물(non-steroid anti-inflammatory product)들과 이 분야에서 공지된 바와 같은 산성말단(acid ending)을 갖는 비스테로이드항염증성생성물들에 대해서 언급했다.

상기 생성물들은 -ONO₂기와 비교하여 훨씬 낮은 독성수준(toxicity level)을 나타냈다. 긴 기한처리(long term treatment)에서 낮은 독성을 가지면서도 항혈전 작용을 갖는 유효한 생성물들에 관한 필요성이 절감되었다. 상세하게는, 항염증성작용제(antithrombotic agent)들의 효능과 안전성은 밀접하게 연관되었으며, 그 연구는 증가된 치료학적 지수(therapeutic index)를 갖는 신규한 분자(molecule)들, 예를 들면, 개선된 효능 및 감소된 독성을 갖는 분자들을 발견하는 것을 목적으로 한다(Goodman & Gilmam: "The pharmacological basis of therapeutics", Ed. J. Limbrid, page 1357, 1996).

이하에 정의된 바와 같은 본 발명의 생성물들이 서로 다른 종류의 자극들(stimuli)에 의해 유발된 혈소판응집(platelete aggregation)을 억제하는데 있어 효과적이며, 상세하게는, 콜라겐(collagen) 및 트롬빈(thrombin), 그와 동시에, 처리된 동물들에 있어서 위장점막(gastrointestinal mucosa)에 장애(lesion)들을 일으킴 없이 일반적으로 높은 안전성, 상세하게는, 위장의 안전성(gastric safety)을 나타낸다는 것이 예상외로 놀랍게도 발견되었다.

본 발명의 결과들은, 본 발명의 생생물들의 신규한 클래스(class)들이 생성물들을 억제하는 시클로옥시겐아제가 아님을 고려하면 더욱 놀랍다. 그러므로, 이들은 공지기술에서 설명된 생성물들로부터, 상세하게는, 상기 특허들로부터 어떠한 방식으로든 이끌어내질 수 없다.

본 발명의 요지는, 일반식:A-(X₁-NO₂)_to의 화합물(compound)들 또는 이들의 조성물(composition)들 또는 이들의 염(salt)들이며, 이들은 약제용으로 사용되며, 상세하게는, 이들이 혈소판응집을 억제하는데 효과적이므로 항혈전제와 같은 약제용으로 사용되며,

여기서, t₀는 1 또는 2와 등가의 정수이며;

A = RN₀이며, 여기서 N₀= (COX_u)_t- 또는 COON₁이며, 여기서 t는 0 또는 1과 등가이며; u는 0 또는 1과 등가이며;

X = O, NH, NR_1c이며, 여기서, R_1c는 1 내지 10개의 탄소원자들을 갖는 선형 또는 분지형의 알킬이며; N₁은 1내지 10개의 탄소원자들 또는 수소를 갖는 선형 또는 분지형의 알킬이며;

R은 다음의 기들로부터 선택되며:

* 기 A

여기서, R_Ia및 R_IIa는 서로 같거나 다르며 H 또는 선형 또는 가능할 때마다 1내지 3개의 탄소원자들을 갖는 분지형의 알킬이며, 바람직하게는, R_Ia= R_IIa= H이며; n_Ia는 1 내지 6의 정수이며, 바람직하게는, 2 내지 4의 정수이며;

R_I은 다음과 같이 될 수 있으며:

여기서, N₂는 N₀와 동일한 의미를 가질 수 있으며; N₂또는 N₀중 적어도 하나의 기들은 X₁과 결합할 수 있는 하나의 자유결합가(즉, t = 1)를 가지며,

R_Ia, R_IIa, n_Ia는 Ia에서 정의된 바와 같으며;

N₃는 H,(CH₃)₂CH-CH-OCOCH₂CH₃, 또는 X₁과 결합하는 자유결합가이며(즉, N₃가없는);

R_Ib는 다음으로부터 선택되며:

여기서, N₂는 상기 정의된 바와 같으며, 여기서, N₃또는 N₂중 적어도 하나의 기들은 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가를 가지며(N₂, t = 1인 경우);

여기서, N₀은 상기 정의된 바와 같으며, 여기서, t = 1이며, 즉, 이는 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가를 가지며;

R_Ic는 H,-COCH₃, 또는,

로부터 선택되며,

여기서, N₂는 상기 정의된 바와 같으며, N₂기들중 적어도 하나는 X₁과 결합 수 있는 자유결합가(t = 1)를 가지며;

* 기 B

t = 1 및 u = 0인 경우;

여기서, R_Ia, R_IIa는 Ia)에서 정의된 바와 같으며;

R_IIb는 R_Ia의 의미를 가지며;

R_BA는 다음으로부터 선택되며:

여기서, 기 B)에 있어서, N₂는 상기 정의된 바와 같으며 N₂기들 중 적어도 하나는 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가를 가지며,(즉, 적어도 하나의 N₂치환기가 t = 1을 갖는다);

X₁은 다음으로부터 선택되는 2가연결가교이며:

- YO, 여기서, Y는 선형 또는 가능할 때마다 분지형의 C₁-C₂₀알킬렌이며, 바람직하게는, 2 내지 5개의 탄소원자들을 가지며, 또는, 선택적으로 5내지 7개의 탄소원자들을 갖는 치환된 알킬렌이며;

- Y₁은 다음으로부터 선택되며,

여기서, n₃은 0 내지 3의 정수이며;

여기서, nf'은 1 내지 6의 정수이며, 바람직하게는, 2 내지 4의 정수이며;

여기서, R_1f= H, CH₃이며, nf는 1 내지 6의 정수이며, 바람직하게는 2 내지 4의 정수이다.

언급될 수 있으며, 바람직한 화합물들이 아래에 나열된다. 여기서, R은 이 분야에서 알려진 공정에 의해 획득될 수 있다.

예를 들면, Merck Index, Ed 12, 1996에서 기술된 화합물 및 공정은 선행 및 관련된 공정으로 언급될 수 있으며, 이 문헌은 참조문헌으로서 전체적으로 일체화된다. 선행기술(Merck 명명에 따른)은 이하에 나타낸 바와 같으며, 여기서, 기 A)및 기 b)의 공식들에서 보여지는 다양한 치환물들은 나열된 화합물들에서와 같이 정의된다: 알라세프릴(alacepril), 베나제프릴(benazepril), 캡토프릴(captopril),세론아프릴(ceroapril), 실라자프릴(cilazapril), 델아프릴(delapril), 에날아프 릴(enalapril), 에날아프릴라트(enalaprilat), 포신아프릴(fosinapril), 이미드아프릴(imidapril), 리신오프릴(lisinopril), 퀸아프릴(quinapril), 라미프릴(ramipril), 스피라프릴(spirapril), 테모카프릴(temocapril), 트란돌아프릴(trandolapril), 모벨틸프릴(moveltilpril), 페린도프릴(perindopril), 베푸놀올(befunolol), 베탁솔올(betaxolol), 부프라놀올(bupranolol), 카르테올올(carteolol), 레보부놀올(levobunolol), 메티프라놀올(metipranolol), 티몰올(timolol), 옥스프레놀올(oxprenolol), 메핀돌올(mepindolol), 아테놀올(atenolol), 라베탈올(labetalol).

상기 정의된 바와 같은 연결가교들 X₁은, 공지기술로부터의 방법을 이용하여 획득될 수 있으며, 또는 이들이 이 분야의 알려진 공정으로 언급된 특허들에 기재된 다른 가교들과 다른 경우에는 X₁가교들을 도입하는 것에 의해 공지방법들을 변형함으로써 획득될 수 있다. 일반적으로, A 및 X₁간의 연결은, 보여진 바와 같이, 에스테르 또는 아마이드 타입(type)의 연결이다(NH 또는 NR_1c). 이들 결합들을 형성하기 위한 어떠한 잘 알려진 합성경로(synthestic route)라도 사용될 수 있다.

에스테르의 경우에 있어서, 가장 직접적인 합성경로는 타입 HO-Y_a-Br, HO-Y_a-I의 할로겐알코올에서의 아실클로라이드(acyl chloride)들 A-CO-Cl 또는 A-(CO-Cl)₂의 반응을 포함한다. 여기서, Y_a는 산소원자 -O-가 없는 상기 정의 된 바와 같은 Y 또는 Y₁과 동등하며, 실험환경에 있어서, 이는 공지기술의 부분과 동일하다.

또한, 공식 A-CO-Y_a-Cl(Br, I)의 반응생성물들은 일반식: Y_aCl₂, Y_aBr₂, YaI₂의 디-할로겐유도체와 상기 산들 A-CO-OH의 소듐(sodium) 또는 포타슘(potassium) 염(salt)들과 을 반응시키는 것에 의해서도 획득될 수 있다.

반응생성물들은 선행기술에서 알려진 공정에 따른 아세토니트릴(acetonitrile)에서의 AgNO₃와의 반응에 의해 최종생성물들로 변환된다.

일반적인 도식은 다음과 같다:

A-CO-Cl + HO-Y_a-Br ------> A-CO-O-Y_a-Br + AgNO₃------> A-X₁NO₂

여기서, X₁= Y_aO.

또한, 일반적인 도식은 다음과 같이 될 수도 있다:

A-CO-ONa + Br₂Y_a------> A-CO-O-Y_a-Br + AgNO₃------> A-X₁NO₂

여기서, X₁= Y_aO.

아마이드들의 경우에 있어서, 합성순서(synthetic sequence)는 일반식: NH₂-Y_a-OH 또는 NHR_1c-Y_a-OH의 아미노알코올들과 동일한 아실클로라이드들 A-CO-Cl의 반응을 포함하여 알려진 방법에 따른 일반식: A-CO-NH-Y_a-OH 또는 A-CO-NR_1c-Y_a-OH의 아마이드들을 제공한다.

예를 들면, PCl₅, PBr₃, SOCl₂등과 같은 할로겐화작용제(halogenating agent)와 이들 아마이드들의 반응은, 일반식: A-CO-NH-Y_a-Br(Cl) 및 A-CO-NR_1c-Y_a-Br(Cl) 의 할로겐유도체를 이끌어낸다.

알려진 문헌방법에 따른 아세토니트릴에서의 AgNO₃와의 반응에 의해, 상기 후자의 생성물들은 최종생성물들 AX₁NO₂를 이끌어낸다.

순서는 다음과 같이 표현될 수 있다:

PCl₅

A-CO-Cl + NHR_1c-Y_a-OH ------> A-CO-NR_1c-Y_a-OH ------>

A-CO-NR_1c-Y_a-Br + AgNO₃------> A-CO-NR1_1c-Y_a-ONO₂

여기서, Y_aO는 X₁.

에스테르구조(esther formation)에 대한 대안적인 경로(alternative route)는 일반식: NO₂-O-Y_a-Cl(Br,I)의 할로겐알코올의 니트릭에스테르(nitric esther)들과 소듐 또는 포타슘 염들의 반응이며, 직접적으로 본 발명의 생성물들을 제공한다.

반응도식은 다음과 같다:

A-CO-ONA + Br-Y_a-ONO₂------> A-CO-O-Y_a-ONO₂

여기서, Y_aO는 X₁.

상기 기재된 것들과 유사한 다른 합성경로들은 디할로겐유도체 Br₂Y_a가 에놀레이트와 반응되는 경우의 경로들이다. 그 다음, 반응생성물들은 상기 반응에 따른 아세토니트릴에서의 AgNO₃와의 반응에 의해 변환된다. 기A에 속하는 -OH를 위한 일반적인 도식은 다음과 같다:

AgNO₃

-ONA + Br₂-Y_a------> -O-Y_a-Br ------> -O-Y_a-ONO₂

여기서, Y_aO는 X₁.

-OH기를 위한 일반적인 방법이 단지 설명을 목적으로 실시예 1에서 기술된다.

이들 연결기들 X₁을 획득하기 위한 공정은 국제특허출원 WO 95/30641호에서 기술된다. 이 특허는 참조문헌으로서 전체적으로 일체화된다.

상기 기술된 바와 같은 본 발명의 생성물들은 일반적으로 약제용으로서 신규하다. 상세하게는, 이들의 항혈전작용은 신규한 것이며 이와 같은 화합물들 또한 신규한 것이다.

본 발명의 생성물들을 위해 언급될 수 있는 추가의 약학적인 용도들로는, 예를 들면, 이들의 항승압작용(antihyperthensive : 예를 들면, 동맥승압, 녹내장) 및 이들의 심장보호작용(cardioprotective: 예를 들면, 협심증, 심부전증, 관상동맥국소빈혈)이 있다.

항승압작용에 관하여서는, 본 발명의 생성물들이 -ONO₂기를 갖지 않는 선행기술과 비교하여 개선된 효능을 갖는 지극히 만족할만한 약학적-치료학적 프로필(profile)을 보이며, 동시에, 뛰어난 안정성을 보인다는 것에 주목해야 될 것이다.

또한, 본 발명의 생성물들이 항혈전작용과 조합된 항승압작용을 나타낸다는 것도 주목해야될 것이다. 이는, 치료학적 접근의 목적이 환자에게 심근 또는 대뇌골절(myocardial or cerebral infraction) 및 아테롬성동맥경화증 (atherosclerosis)과 같은 심혈관질환(cardiovascular disease)의 감소된 위험을 전적으로 보증하는 것이기 때문에, 일반적으로 심혈관질환의 치료에 있어서 두드러진 이득이다(Goodman & Gilman "The paharmacological basis of therapeutics", Ed. J. Hardman, pages 747, 1354-7, 1996).

다음의 실시예들은 설명으로서 제공되는 것이며, 본 발명의 한정은 아니다.

실시예 1: NO-티몰올(NO-timolol)의 화학적 분석 및 특성화

1-[(1,1-디메틸) 아미노]-3-{[4-(4-모로폴리닐)-1,2,5-티아디아졸-3-릴]옥시 }-2-프로필말레에이트의 (R)-(4-니트록시)부타노에이트의 분석.

시작점은 티몰올말레에이트(상용 생성물; timolol maleate)이며, 이 티몰올은 다음의 화학식 1과 같이 표현되는 일반식을 갖는다.

(S)-1-[(1,1-디메틸렌틸)아미노]-3-{[4-모르폴리닐)-1,2,5-티아디아졸-3릴]옥시}-2-프로판올.

티몰올말레에이트(2.0g)가 10% NaOH (30ml)의 용액과 함께 처리되었다. 30ml의 CH₂Cl₂가 추가되었으며, 그 다음, 상(phase)들이 분리되었다. 수성의 상(aqueous phase)은 CH₂Cl₂와 함께 수회(several times) 추출되었다. 고이게된 유기상(pooled phase)들은 건조된 (Na₂SO₄)였으며 용매(solvent)는 감소된 압력에서 증발되었다. 1.4g의 순수한 생성물이 획득되었다(수득율 96%).

¹H NMR (300MHz CDCl₃: ∂1.05 (9H, s, 3CH₃), 2.7(2H, 2dd, CH₂-NH), 3.5(4H, m, 모르폴린), 3.8 (4H, t, 모르폴린), 3.85 (1H, m, CH), 4.4 (2H, 2dd, 0-CH₂).

(S)-1-[(1,1-디메틸렌틸)아미노]-3-{[4-(4-모르폴리닐)-1,2,5-티아디아졸-3릴]옥시}-2-프로판올 하이드로클로라이드.

이소프로판올에서의 7M HCL의 0.8ml가 이소프로판올(30ml)에서의 티몰올(1.4g)의 자기적으로 교반된 용액에 드롭방식(dropwise)으로 첨가되었다. 반응혼합물(reaction mixture)은 감소된 압력에서 용매에 자유로웠다. 1.47g의 순수한 생성물이 획득되었다(수득율 91%).

¹H NMR (300MHz CDCl₃: ∂1.45 (9H, s, 3CH₃), 3.05(2H, 2dd, CH₂-NH), 3.5(4H, t, 모르폴린), 3.8 (4H, t, 모르폴린), 4.5 (2H, d, O-CH₂), 4.55 (1H, m, CH).

1-[(1, 1-디메틸에틸)아미노]-3-{[4-(4-모르폴리닐)-1,2,5-티아디아졸-3-릴]옥실}-2-프로필의 (R)-(4-브로모)부타노에이트

4-브로모부티릴 클로라이드(0.4ml)가 P₂O₅(20ml)에 의해 건조된 CHCl₃에서의 티몰올하이드로클로라이드(0.82g)의 자기적으로 교반된 용액에 질소분위기에서 드롭방식으로 첨가되었다. 교반은 4일 지속되었다. 반응혼합물은 곧 감소된 압력에서 용매에 자유로워졌다. 잔재물은 3% Et₃N과 함께 디메틸에테르를 이용하여 실리카겔(silica gel) 상에서 색층분석(chromatograph)되었다. 0.830g의 순수한 생성물이 중간분류(intermediate fraction)로부터 획득되었다(수득율 78%).

¹H NMR (300MHz CDCl₃: δ1.05 (9H, s, 3-CH3), 2.05(2H, m, COCH₂-CH₂-CH₂-ONO₂), 2.5(2H, m, COCH₂-CH₂-CH₂-ONO₂), 2.8 (2H, d, CH₂-NH), 3.5 (6H, m, 모르폴린, CH₂-Br), 3.8(4H, t, 모르폴린), 4.65 (2H, 2dd, 0-CH₂), 5.25 (1H, m, CH).

1-[(1, 1-디메틸에틸)아미노]-3-{[4-(4-모르폴리닐)-1,2,5-티아디아졸-3-릴]옥시}-2-프로필의 (R)-(니트록시)부타노에이트.

CH₃CN(5ml)에서의 AgNO₃(0.450g)의 용액이 CH₃CN(10ml)에서의 티몰올(4-브로모)부타노에이트(0.830ｇ)의 자기적으로 교반된 용액에 환경온도(ambient temperature)에서 드롭방식으로 첨가되었다. 온도는 점진적으로 60℃까지 상승되었으며 반응은 24시간 지속되었다. 반응혼합물은 감소된 압력에서 용매에 자유로워졌다. 잔재물은 용리제로서 3% Et₃N과 함께 디메틸에테르를 이용하여 실리카겔(silica gel) 상에서 색층분석(chromatograph)되었다. 0.51ｇ의 순수한 생성물이 첫번째 분류(first fraction)들로부터 획득되었다(수득율 64%).

¹H NMR (300MHz CDCl₃: ∂1.05 (9H, s, 3-CH₃), 2.05(2H, m, COCH₂-CH₂-CH₂-ONO₂), 2.5(2H, 2t, COCH₂-CH₂-CH₂-ONO₂), 2.8 (2H, d, CH₂-NH), 3.5 (4H, m, 모르폴린), 3.8(4H, t, 모르폴린), 4.5 (2H, t, -CH₂-ONO₂), 4.58 (2H, 2dd, 0-CH₂), 5.25(1H, m, CH). MS:M⁺448

1-[(1, 1-디메틸에틸) 아미노]-3-{[4-(4-모르폴리닐)-1,2,5-티아디아졸-3-릴]옥시}-2-프로필말레에이트의 (R)-(4-니트록실)부타노에이트.

아세톤(5ml)에서의 말레산(0.132g)의 용액이 아세톤(10ml)에서의 티몰올(4-니트록시)부타노에이트(0.50g)의 자기적으로 교반된 용액에 드롭방식으로 첨가되었다. 교반은 2시간 지속되었다. 반응혼합물은 감소된 압력에서 용매에 자유로웠다. 인공을 가하지 않은 잔재물(crude residue)이 디메틸에테르에 의해 내려져 0.5g의 백색고체를 제공하였다(m.p. 133-166℃, 수득율 70%).

¹H NMR (300MHz CDCl₃: ∂1.48 (9H, s, 3CH₃), 2.05(2H, m, COCH₂-CH₂-CH₂-ONO₂), 2.58(2H, 2td, COCH₂-CH₂-CH₂-ONO₂), 3.3 (2H, 2m, CH₂-NH₂), 3.5 (4H, m, 모르폴린), 3.8(4H, t, 모르폴린), 4.5 (2H, t, CH₂-ONO₂), 4.7 (2H, 2dd, O-CH₂), 5.55 (1H, m, CH), 6.47(2H, s, 말레익).

실시예 2A: NO-에날아프릴(NO-ENA)의 화학적 분석 및 특성화

반응도식(reaction scheme)은 다음과 같다:

단계1

3g의 디테르부틸디카르보닐(diterbutyldicarbonyl: DTBC)이 환경온도에서100ml의 디메틸포름아마이드(dimethylformamide: DMF) 및 트리메틸아민(trimethylamine: TEA) (2.76g)에서의 5g의 에날아프릴의 용액에 첨가되었다. 용액은 16시간 교반되었다. 그 다음, 용액은 희석된 HCl 및 물에 의해 2회 세척되었으며, 1회분량 100ml의 에테르에 의해 3회 추출되었다. 건조 및 증발된 유기상(dried and evaporated-off organic phase)들이 3g의 공식 2)의 생성물(오일)을 제공했다. 공식 2)에 있어서 tBOC = t-부틸디카르보닐.

단계 2

1.4g의 디시클로헥실카르보디이미드(dicylohxyl carbodiimide: DCT), 그 다음, CH₂Cl₂에서의 1.1ｇ의 니트로옥시메틸페놀(nitrooxynethylphenol)의 용액 30ml가 50ml의 메틸렌디클로라이드(methylene dichloride)에서 용해된 3g의 N-프로텍티드에날아프릴(공식 2의 화합물)의 용액에 첨가되었다. 이 혼합물은 밤새 교반되었으며, 디시클로헥실우레아(dicyclohexylurea)가 여과되었으며, 이 용매는 건조한 상태로 증발되었다. 잔재물은 에틸아세테이트/헥산 혼합물을 이용하여 실리카겔 60Merck 상에서 색층분석되었다. 2g의 공식 3의 중간물의 분류가 수집되었다. 여기서, R은 OH가 없는 니트로옥시메틸페놀의 잔재물.

단계 3

1g의 공식 3의 생성물이 0℃에서 에틸아세테이트(ACO-Et)에서의 30ml의 건조한 HCl기체의 4N용액에 용해되었으며, 10시간 교반되었다. 침전획득물 (precipitate obtained)이 진공상태 하에서 여과 및 건조되었으며 0.5g의 생성물 4)가 획득되었다.

실시예 2B: NO-에날아프릴레이트(NO-ENP)의 화학적 분석 및 특성화

반응도식(reaction scheme)은 다음과 같다:

단계 1

3g의 디테르부틸디카르보닐(DTBC) 이 환경온도에서 100ml의 디메틸포름아마이드(DMF) 및 트리메틸아민(TEA) (2.76g)에서의 5g의 에날아프릴의 용액에 첨가되었다. 용액은 16시간 교반되었다. 그 다음, 용액은 희석된 HCl 및 물에 의해 2회 세척되었으며, 1회분량 100ml의 에테르에 의해 3회 추출되었다. 건조 및 증발된 유기상(dried and evaporated-off organic phase)들이 오일인 3g의 공식 2)의 생성물을 제공했다. 공식 2)에 있어서 tBOC = t-부틸디카르보닐.

단계 2

2.75g의 디시클로헥실카르보디이미드(DCT), 그 다음, CH₂Cl₂에서의 2.25g의 니트로옥시메틸페놀의 용액 30ml가 50ml의 메틸렌디클로라이드에서 용해된 3g의 N-프로텍티드에날아프릴에이트(N-protected enalaprilate)의 용액에 첨가되었다. 이 혼합물은 밤새 교반되었으며, 디시클로헥실우레아(dicyclohexylurea)가 여과되었으며, 이 용매는 건조한 상태로 증발되었다. 잔재물은 에틸아세테이트/핵산 혼합물을 이용하여 실리카겔 60 Merck 상에서 색층분석되었다. 3g의 공식 3의 중간생성물물의 분류가 수집되었다. R은 실시예 2A에서 정의된 바와 같은 의미를 갖는다.

단계 3

1ｇ의 공식 3의 생성물이 0℃에서 10시간 동안 ACO-Et에서의 30ml의 건조한 HCl기체의 4N용액에 용해되었다. 침전획득물(precipitate obtained)이 진공상태하에서 여과 및 건조되었으며 0.7g의 생성물 4)가 획득되었다.

실시예 3: 약제학적 연구

실시예들 1 및 2로부터의 생성물들이 항상 카르복시메틸셀룰로오스(carboxymethyl collulose)에서 2중량% 부유물로서 생체 내에 투여되었다.

실험그룹들은 6 내지 8개까지의 샘플들로 만들어져 적절한 통계학적 평가를 허용하였으며, 이러한 통계학적 평가는 필요할 때마다 수행되었다.

본 발명의 목적인 화합물에 대한 치사율 및 독성증상은 각각 쥐 10마리의 그룹들에 대해 단일 경구투약 후 평가되었다. 50mg/kg의 투여 후에도 이 동물들은 뚜렷한 독성의 증상을 나타내지 않았다.

실시예 3A: 항혈소판작용의 연구

혈소판응집을 억제하는 NO-ENA 및 NO-TIM의 능력은 피논에 의해 설명된 바와 같은 생체내 모델(J. Pharmacol. 12, 79, 1989)을 이용하여 평가되었다. 5그룹의 수컷 위스터 쥐들에게 각각 일일분량 10mg/kg의 NO-ENA, 에날아프릴, NO-TIM, 티몰올 또는 부형약이 5일간 경구투약했다. 4번째날의 적절한 시간에 음식이 철회되었다(물은 제외). 18 내지 20시간 후, 동물들은 마지막 처리를 받았다. 1시간 후 동물들은 10% 우레탄(1mg/kg 복막내적으로)에 의해 마취되었으며, 좌측 경정맥(jugular vein) 및 우측 경동맥(carotid artery)으로 관이 캐뉼라삽입되었다. 그 다음, 콜라겐(타입 6, 시그마)이 2mg/kg의 일회투여량에서 맥관내로 운용되었다. 3분후, 2.5-ml 플라스틱주사기를 이용하여 경동맥으로부터 2개의 혈액샘플들(A 및 B)이 다음과 같은 방식으로 수집되었다: 샘플 A, 1.6ml의 ETDA/포르말린버퍼(ETDA 테트라소듐염 24mM, KH₂PO₄1.3mM, Na₂PO₄13.4mM)에서의 0.4ml의 혈액. 그 다음, 이 샘플들은 5-ml 폴리스틸렌테스트튜브로 옮겨졌으며, 15분간 환경온도에서 고정되었다. 이 시간후, 샘플 A에서 혈소판응집들이포르말린에서 고착되었으며, 한편, 샘플 B로부터의 혈소판응집들은 EDTA에 의해 처리되었다. 그 다음, 혈소판 카운트가 종래의 마이크로스코프를 이용하여 각 샘플에 대해 이루어졌다. 샘플 B에 대한 카운트는 혈소판의 총 개수였으며, 한편, 샘플 A에 대한 카운트는 비응집된 혈소판(non-aggregated platelet)들로 고려되었다. 이 결과들은 퍼센트응집(per-cent aggregation)으로 표현되었으며, 다음과 같이 계산되었다: {[1-(샘플 A에서의 혈소판카운트)/(샘플 B에서의 혈소판카운트)] ×100}. 이 결과들은 조절그룹의 퍼센트억제로서 표현되었으며, 표 1에 나타냈었다.

[표 1]

표 1에서 나타낸 바와 같이, 참조생성물들과는 다르게, 본 발명의 니트로유도체(nitroderivative)들은 콜라겐에 의해 유도된 응집을 억제할 수 있었다.

실시예 3B: 항혈전작용의 연구

5그룹의 스위스 스트레인의 수컷 찰스리버 쥐들에게 각각 일일분량 10mg/kg의 NO-ENA, 에날아프릴, NO-TIM, 티몰올 또는 부형약이 5일간 경구투약했다. 4번째날의 적절한 시간에 음식이 철회되었다(물은 제외). 18 내지 20시간 후, 동물들은 마지막 처리를 받았다. 1시간 후, 동물들에게 꼬리쪽의 정맥으로 0.154 M 소듐클로라이드의 용액에서의 희석된 아드레날린히드로클로라이드(100 μM)와 0.1ml의 콜라겐(타입 6, 시그마)혼합물이 주입되었다. 이전에 설명된 (Cirino G. et al., Thrombosis Research 79, 73, 1985)와 같이, 이 혼합물의 주입은 3분내에 조절동물들의 90%를 치사시켰다.

결과들은 조절그룹과 비교되는 억제퍼센트로서 표시되었으며, 표 2에 나타냈었다.

[표 2]

표 2에서 나타낸 바와 같이, 참조 생성물들과는 다르게, 본 발명의 니트로유도체는 콜라겐에 유도된 혈전을 억제할 수 있었다.

실시예 3C: 항승압작용의 연구

승압을 억제하는 NO-ENA의 능력이 Riberio et al.(Hypertension 20, 298, 1992)에서 기재된 바와 같은 생체내 모델을 이용하여 평가되었다. 5그룹의 수컷 위스터 쥐들(235 내지 284g)에게 각각 일일분량 10mg/kg의 NO-ENA, 에날아프릴, NO-TIM, 티몰올 또는 부형약이 5일간 정맥내로 투약되었다. 동맥승압은 6주 동안 식수(drinking water)에서의 N^w-니트로-L-아르기닌메틸에스테르 (L-NAME)의 운용에 의해 유도되었다. L-NAME는 약 60mg kg^-1의 일일 양이 운용되도록 60 내지 70mg 100ml^-1농축으로 식수에 용해되었다. 처리 후 한시간 후에 전신혈과 압력이 테일-캡방법(tail-cap method; Zats, Lab, Anim, Sci.42, 198, 1990)에 의해 측정되었다.

[표 3]

표 3에 의해 보여진 바와 같이, 참조 생성물과는 다르게, 본 발명의 니트로유도체는 L-NAME에 의해 유도된 혈전에 의한 혈액승압을 억제할 수 있었다.

실시예 3B: 쥐들에 있어서 NO-ENA 또는 NO-TIM 대 에날아프릴 또는 티몰올의 안구승압(oscular hypotensive) 및 안구안전성(oscular safety)의 연구

쥐들에 있어서, 100㎍의 NO-ENA 또는 NO-TIM의 국부인가(topical application)는 참조생성물들 티몰올 및 에날아프릴보다 더 뚜렷한 그리고 지속적인(6시간 이상의) 내부안압(intraoscular pressure; 각각, 6-7 mmHg)의 감소를 제공한다. 또한, NO-TIM의 경우, 혈장(plasma: P) 내의 생성물 농축과 수성체액(aqueous humor: AH) 간의 비율 대 티몰올은 HPLC방법에 의해 결정되었다. NO-TIM의 경우 P/AH 비율은 티몰올의 경우보다 5.5배 낮음이 발견되었으며, 이는 니트로유도체의 전신흡수(그리고 그 결과로 상기 유도체로부터의 임의의 잠재적인 부작용)가 참조생성물과 비교하여 현저하게 감소됨을 제시하였다.

실시예 3E: 기니아돼지들에서 유도된 기관지수축에 대한 NO-ENA 작용 대 에날아프릴의 연구

기니아돼지들에 있어서 카프사이신에 의해 유도된 기관지수축은 ACE(앤지오텐신-변환효소: angiotensin-converting enzyme)억제제들의 효능에 관련된 동물모델이며, 환자에게 기침을 일으킨다(Subissi et al., J, cardiovasc. Pharmacol. 20/1, 139-246, 1992).채

용된 테스트환경은 Del Sodato에 의해 이전에 기술된 바와 같다(J. Pharmacological Methods 5, 279, 1981). 중량 300 내지 400g의 암컷 기니아돼지들이 소듐 5, 5-디에틸바르비튜레이트(sodium 5, 5-diethylbarbiturate: 200mg/kg)의 복막내주입(intraperitoneal injection)에 의해 마취되었으며, 일정한 포지티브압력(constant positive pressure)에서의 인공호흡(artificial respiration) 하에서 유지되었다. 우측 경부정맥 내측으로 테스트화합물의 운용을 위해 관이 캐뉼라 삽입되었다. 복부(abdomen)의 중앙절개(medianincision)에 의해, 십이지장(duodenum) 이 제거되었으며, 미소절개(snall incision)를 통해 적절한 폴리에틸렌캐뉼라의 끝이 삽입 및 고정되었다. 캐뉼라의 다른 끝은 NO-ENA(10mg/kg), 에날아프릴(10mg/kg) 또는 부형제의 십이지장내부로의 운용을 위해 주사기에 연결되었다. 45분 후, 0.1ml의 카프사이신(1㎍/kg)이 동물들의 경부정맥으로 투여되었다. 카프사이신 주입의 이전 및 이후, 감조구역(tidal area)에서의 변화가 폴리그래픽증폭기(Hewlett packard)에 연결된 변형된 Konzett장치에 의해 측정되었다.

이 결과들은 테스트화합물의 운용 이전 및 이후에 획득된 응답의 비율로서 계산되었으며, 표 4에 있어서 부형제 단독으로 획득된 응답의 %로 표현되었다.

[표 4]

표 4에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 니트로유도체는 참조 생성물과 달리 카프사이신에 의해 유도된 기관지수축을 감소시켰으며, 이는 실질적으로 현저하게 기관지수축응답(bronchoconstrictive response)을 높였다.

결론

상기 실시예들로부터 관찰할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 목적인 니트로유도체들은 참조생성물들과 비교하여 우수한 안정성 및 현저한 항혈전성 및 심장혈관작용을 나타냈다.

Claims

일반식: A-(X₁-NO₂)t₀의 화합물 또는 이들의 조성물 또는 이들의 염들에 있어서,

t₀은 1 또는 2와 등가의 정수이며;

A = RN₀이며, 여기서 N₀= (COX_u)_t- 또는 COON₁이며, 여기서 t는 0 또는 1과 등가이며; u는 0 또는 1과 등가이며;

X = O, NH, NR_1c이며, 여기서, R_1c는 1 내지 10개의 탄소원자들을 갖는 선형또는 분지형의 알킬이며; N₁은 1내지 10개의 탄소원자들 또는 수소를 갖는 선형 또는 분지형의 알킬이며;

R은 다음의 기들로부터 선택되며:

* 기 A

여기서, R_Ia및 R_IIa는 서로 같거나 다르며 H 또는 선형 또는 가능할 때마다 1내지 3개의 탄소원자들을 갖는 분지형의 알킬이며, 바람직하게는, R_Ia= R_IIa= H이며; n_Ia는 1 내지 6의 정수이며, 바람직하게는, 2 내지 4의 정수이며;

R_I은 다음과 같이 될 수 있으며:

여기서, N₂는 N₀와 동일한 의미를 가질 수 있으며; N₂또는 N₀기들 중 적어도 하나는 X₁과 결합할 수 있는 하나의 자유결합가(즉, t=1)를 가지며,

R_Ia, R_IIa, n_Ia는 Ia에서 정의된 바와 같으며;

N₃는 H,(CH₃)₂CH-CH-OCOCH₂CH₃, 또는 X₁과 결합하는 자유결합가이며(즉, N₃가없는);

R_Ib는 다음으로부터 선택되며:

여기서, N₂는 상기 정의된 바와 같으며, 여기서, N₃또는 N₂중 적어도 하나의기들은 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가를 가지며(N₂, t = 1인 경우);

여기서, N₀은 상기 정의된 바와 같으며, 여기서, t = 1이며, 즉, 이는 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가를 가지며;

R_IC는 H, -COCH₃, 또는,

로부터 선택되며,

여기서, N₂는 상기 정의된 바와 같으며, N₂중 적어도 하나의 기들은 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가(t = 1)를 가지며;

* 기 B

t = 1 및 u = 0인 경우;

여기서, R_Ia, R_IIa는 Ia)에서 정의된 바와 같으며;

R_IIb는 R_Ia의 의미를 가지며;

R_BA는 다음으로부터 선택되며;

여기서, 기 B)에 있어서, N₂는 상기 정의된 바와 같으며 N₂기들 중 적어도 하나는 X₁과 결합할 수 있는 자유결합가를 가지며, (즉, 적어도 하나의 N₂치환기가 t = 1을 갖는다);

X₁은 다음으로부터 선택되는 2가연결가교이며:

- YO, 여기서, Y는 선형 또는 가능할 때마다 분지형의 C₁-C₂₀알킬렌이며, 바람직하게는, 2 내지 5개의 탄소원자들을 가지며, 또는, 선택적으로 5내지 7개의 탄소원자들을 갖는 치환된 알킬렌이며;

- Y₁은 다음으로부터 선택되며,

여기서, n₃은 0 내지 3의 정수이며;

여기서, nf'은 1 내지 6의 정수이며, 바람직하게는, 2 내지 4의 정수이며;

여기서, R_1f= H, CH₃이며, nf는 1 내지 6의 정수이며, 바람직하게는 2 내지 4의 정수인 화합물.
제1항에 있어서,

R, R_I, R_Ib, R_Ic, R_BA와 화합물들 Id) 및 IIb)는 알라세프릴(alacepril), 베나제프릴(benazepril), 캡토프릴(captopril), 세론아프릴(ceroapril), 실라자프릴(cilazapril), 델아프릴(delapril), 에날아프릴(enalapril), 에날아프릴라트(enalaprilat), 포신아프릴(fosinapril), 이미드아프릴(imidapril), 리신오프릴(lisinopril), 퀸아프릴(quinapril), 라미프릴(ramipril), 스피라프릴 (spirapril), 테모카프릴(temocapril), 트란돌아프릴(trandolapril), 모벨틸프릴 (moveltilpril), 페린도프릴(perindopril), 베푸놀올(befunolol), 베탁솔올 (betaxolol), 부프라놀올(bupranolol), 카르테올올(carteolol), 레보부놀올 (levobunolol), 메티프라놀올(metipranolol), 티몰올(timolol), 옥스프레놀올 (oxprenolol), 메핀돌올(mepindolol), 아테놀올(atenolol), 라베탈올(labetalol) 인 화합물.
제 1항 또는 제 2항 중 어느 한 항에 있어서,

X₁은 다음으로부터 선택되며,

- YO, 여기서, Y는 선형 또는 가능할 때마다 분지형 C₁-C₂₀알킬렌, 바람직하게는, 2 내지 5개의 탄소원자들을 가지며, 또는 선택적으로 5 내지 7개의 탄소원자들을 갖는 치환된 시클로알킬렌;

- Y₁, 여기서, Y₁은 다음으로부터 선택되며,

여기서, n₃은 0 내지 5의 정수인 화합물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물들 또는 조성물들은 약제로 사용되는 화합물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물들 또는 조성물들의 용도는 항혈전제와 같은 응용물을 위한 약제의 제조를 위한 것인 화합물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물들 또는 조성물들의 용도는 항승압제와 같은 응용물을 위한 약제의 제조를 위한 것인 화합물.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 화합물들 또는 조성물들의 용도는 심장보호제와 같은 응용물을 위한 약제의 제조를 위한 것인 화합물.