KR102573074B1 - 시르투인1 활성화제 및 시르투인1 활성화용 피부 화장료 - Google Patents

Abstract

안전성이 높은 천연 추출물을 유효성분으로 하는 시르투인1 활성화제 및 시르투인1 활성화용 피부 화장료를 제공한다.
본 발명의 시르투인1 활성화제에 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 함유한다. 또, 본 발명의 시르투인1 활성화용 피부 화장료에 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 배합한다.

Description

시르투인1 활성화제 및 시르투인1 활성화용 피부 화장료{SIRTUIN-1 ACTIVATION AGENT AND SKIN COSMETIC FOR ACTIVATING SIRTUIN 1}

본 발명은 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사(cordyline fruticosa)의 추출물을 유효성분으로 하는 시르투인1 활성화제, 시르투인1 활성화용 피부 화장료에 관한 것이다.

노화 제어에 관한 연구에 있어서, 고세균(古細菌), 효모, 선충, 사람에 이르기까지, 저영양이 되지 않을 정도의 칼로리 제한이 항노화, 수명 연장 효과를 나타내는 것을 알고 있다. 이들 효과에 관여하는 분자의 하나로서 Sir2가 동정(同定·identification)되어 있다. 그 포유류 호모로그(homolog)로서 7종류의 시르투인 패밀리가 존재하고 있다. 그 중에서도 가장 Sir2와 구조나 기능이 유사한 시르투인1이 주목받고 있다.

시르투인1은, NAD 의존성 탈아세틸화 효소 활성이나 ADP 리보실 전이 효소 활성을 가지며, 생체 내에서 중요한 역할을 하고 있다. 예를 들면 시르투인1 고발현 마우스에 있어서 신체 능력의 개선 및 생식 기간의 연장과 함께, 당대사, 콜레스테롤 대사, 지방 대사의 개선이 인정되고 있다. 또한, 고지방식 하에서의 내당능 개선, 지방간 억제도 관찰되고 있다. 즉 시르투인1의 활성화가 대사계 질환의 예방, 치료 또는 개선에 유용하다고 생각된다(비특허문헌 1).

또 시르투인1의 활성화에 의해, 전사 인자 NF-κB(nuclear factor-kappa B)의 p65 서브 유닛이 탈아세틸화 되어, NF-κB 활성이 감약하는 결과, 염증을 억제하는 것이 분명해지고 있고, 이 염증 억제 작용이 염증성 질환의 예방, 치료 또는 개선된다고 생각된다(비특허문헌 1). 또한, 마우스에서는 NF-κB의 유전자의 차단에 의해, 피부의 증식능(增殖能)이 높아지는 것을 알 수 있으며, 시르투인1의 활성화는 피부의 증식능의 항진에 유용하다고 생각된다(비특허문헌 2)

시르투인1은 FOXO, p53, p73, Ku70, Smad7 등을 탈아세틸화 하고, 그 결과로서, 산화 스트레스 내성의 유도, 세포사 억제를 유도한다. 이들의 표현형의 유도가, 항노화, 장기 수명화의 실현에 기여하고 있다고 생각된다(비특허문헌 1).

세포 노화는 자외선 등의 외인적 스트레스에 노출됨으로서 발생된다. 여기서 세포 노화란 영구히 세포 주기가 정지하는 현상이다. 시르투인1은 TERT(Telomere Reverse Transcriptase)의 발현을 조절하여, 히스톤을 탈아세틸화함으로써 텔로미어(telomere)의 안정성을 유지하고, WRN 등의 수복 단백질을 탈아세틸화함으로써 DNA 수복을 촉진하여 게놈의 안정성을 유지하고 있으며, 이들의 기능을 통하여 세포 노화를 억제하고 있는 것이 밝혀지고 있다(비특허문헌 3).

이와 같이, 시르투인1은 대사계 질환 개선 작용, 염증성 질환 개선 작용, 세포 노화 억제 작용에 더하여, 당뇨병 개선 작용, 심혈관 보호 작용, 신장 질환 개선 작용, 신경 보호 작용 등, 여러가지 기능을 가지는 것이 밝혀지고 있다. 그 때문에, 시르투인1의 활성화에 의해, 대사계 질환, 염증성 질환, 세포 노화, 당뇨병, 심혈관 질환, 신장 질환, 신경 질환 등의 각종 질환의 예방, 치료, 또는 개선에 유용하다고 생각된다.

시르투인1을 활성화시키는 물질로서 적포도의 껍질에 많이 포함되어 있는 레스베라트롤이 알려져 있다. 근래에는 특허문헌 1과 같은 흑생강의 추출물 유래의 시르투인 활성화제도 보고되고 있다(특허문헌 1).

(특허문헌):일본 공개특허공보 2018-199680호

: 화학과 생물, 2009년, Vol. 47, No.8, p531∼537 : Aging cell, 2010년, 9, pp285-290 : BMB Reports, 2019년, 52(1), p. 24-34

본 발명은, 안전성이 높은 천연 추출물로부터 시르투인1 활성화 작용을 가지는 것을 찾아내, 그것을 유효성분으로 하는 시르투인1 활성화제 및 시르투인1 활성화용 피부 화장료를 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 시르투인1 활성화제는, 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명의 시르투인1 활성화용 피부 화장료는, 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 배합하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 시르투인1 활성화제는, 천연물인 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 유효성분으로 함으로써, 작용 효과가 우수하며 안전성이 높은 시르투인1 활성화제를 제공할 수 있다.

또한 키위 및/또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 배합함으로써, 작용 효과가 우수하며 안전성이 높은 시르투인1 활성화용 피부용 화장료를 제공할 수 있다.

이하, 본 발명의 일실시형태에 대하여 설명한다.

〔시르투인1 활성화제〕

본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 키위(학명：Actinidia chinensis Planch.(Actinidiaceae)) 및/또는 코리딜리네 프루티코사(학명：Cordyline terminalis)의 추출물을 유효성분으로 한다.

여기서, 본 실시형태에 있어서의 「추출물」에는, 키위(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae)) 혹은 코리딜리네 프루티코사(Cordyline terminalis)를 추출 원료로서 얻어지는 추출액, 이 추출액의 희석액 혹은 농축액, 이 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들의 조정제물(粗精製物) 혹은 정제물 모두가 포함된다.

키위(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))는, 다래나무과 다래나무속에 속하는 낙엽 덩굴성 관목이며, 그 과실은 일본 각지에서 재배되고 있어, 이들 지역으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 추출 원료로서 사용하는 키위의 구성 부위로서는, 잎 부분, 줄기 부분, 꽃 부분, 과실 부분 등의 지상부, 뿌리부 또는 이들 부위의 혼합물을 들 수 있지만, 바람직하게는 과실부, 특히 바람직하게는 적과(摘果) 과실부이다. 또한, 본 발명에 있어서 추출 원료로서 사용할 수 있는 키위(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))의 재배 품종으로서는, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 레인보우레드, 애플키위, 홍심(紅心), 골든킹, 제스프리골드, 고바야시 39, 뷰어컨트리, 퍼스트 엠페라, 티어드롭, 홍선(紅鮮), 키위그레이프, 사누키골드, 풍밀(豊蜜) 등을 매우 적합하게 이용할 수 있다.

본 실시형태에 있어서 키위의 「적과 과실」이란, 키위 과실의 재배 과정에 있어서, 재배되는 키위 과실의 당도 및 크기를 원하는 범위로 증대시키는 것을 목적으로 하여 솎아내어지는(가지치기 되는) 과실을 의미한다. 당도는 3.0∼7.0%가 바람직하고, 보다 바람직하게는 4.0∼5.5%이다. 크기(긴 지름)는 1∼4cm가 바람직하고, 보다 바람직하게는 2∼3cm이다.

코리딜리네 프루티코사는, 다른 명칭 티(Cordyline terminalis 'Ti' )라고 일컬어지는 용설란과 코리딜리네 프루티코사속에 속하는 상록 관목이며, 인도, 오스트레일리아, 열대 아프리카, 중국 등에 분포하고 있어, 이들 지역으로부터 용이하게 입수할 수 있다. 추출 원료로서 사용할 수 있는 코리딜리네 프루티코사의 구성 부위로서는, 예를 들면, 잎 부분, 가지 부분, 줄기 부분 등의 지상부, 뿌리부 등의 지하부, 또는 이들의 혼합물을 들 수 있지만, 바람직하게는 잎 부분이다.

상기 식물의 추출물은, 추출 원료를 건조한 후, 그대로 또는 조쇄기(粗碎機)를 이용하여 분쇄하고, 추출 용매에 의한 추출에 제공함으로써 얻을 수 있다. 건조는 햇빛으로 행해도 좋고, 통상 사용되는 건조기를 이용하여 행해도 좋다. 또한, 헥산 등의 비극성 추출 용매에 의하여 탈지 등의 전(前)처리를 행함으로써, 극성 용매에 의한 추출 처리를 효율적으로 행할 수 있다.

추출 용매로서는, 극성 용매를 사용하는 것이 바람직하고, 예를 들면, 물, 친수성 유기용매 등을 들 수 있고, 이들을 단독으로 또는 2종 이상을 조합하여, 실온 또는 용매의 비점 이하의 온도에서 사용하는 것이 바람직하다.

추출 용매로서 사용할 수 있는 물로서는, 순수, 수돗물, 우물물, 광천수, 광수, 온천수, 용수, 담수 등 외, 이들에 각종 처리를 실시한 것이 포함된다. 물에 실시하는 처리로서는, 예를 들면, 정제, 가열, 살균, 여과, 이온 교환, 침투압 조정, 완충화 등이 포함된다. 따라서, 본 실시형태에 있어서 추출 용매로서 사용할 수 있는 물에는, 정제수, 열수, 이온 교환수, 생리 식염수, 인산 완충액, 인산 완충 생리 식염수 등도 포함된다.

추출 용매로서 사용할 수 있는 친수성 유기용매로서는, 메탄올, 에탄올, 프로필 알코올, 이소프로필 알코올 등의 탄소수 1∼5의 저급 지방족 알코올；아세톤, 메틸에틸케톤 등의 저급 지방족 케톤; 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린 등의 탄소수 2∼5의 다가 알코올 등을 들 수 있다.

2종 이상의 극성 용매의 혼합액을 추출 용매로서 사용하는 경우, 그 혼합비는 적절히 조정할 수 있다. 예를 들면, 물과 저급 지방족 알코올과의 혼합액을 추출 용매로서 사용하는 경우에는, 물과 저급 지방족 알코올과의 혼합비가 9：1∼1：9(용량비)인 것이 바람직하고, 7：3∼2：8(용량비)인 것이 더 바람직하다. 또한, 물과 저급 지방족 케톤과의 혼합액을 사용하는 경우에는, 물과 저급 지방족 케톤과의 혼합비가 9：1∼2：8(용량비)인 것이 바람직하고, 물과 다가 알코올과의 혼합액을 사용하는 경우에는, 물과 다가 알코올과의 혼합비가 8：2∼1：9(용량비)인 것이 바람직하다.

추출 처리는, 추출 원료에 포함되는 가용성 성분을 추출 용매에 용출하게 할 수 있는 한 특히 한정은 되지 않고, 통상법에 따라서 행할 수 있다. 예를 들면, 추출 원료의 1.5∼30배량(질량비)의 추출 용매에, 추출 원료를 침지하고, 상온 또는 환류 가열하에서 가용성 성분을 추출시킨 후, 여과하여 추출 잔사를 제거함으로써 추출액을 얻을 수 있다. 얻어진 추출액으로부터 용매를 증류하면 페이스트 형상의 농축물이 얻어지며, 이 농축물울 더 건조하면 건조물이 얻어진다.

정제는, 예를 들면, 활성탄 처리, 흡착 수지 처리, 이온교환 수지 처리에 의해 행할 수 있다. 얻어진 추출액은 그대로도 시르투인1 활성화제의 유효성분으로서 사용할 수 있지만, 농축액 또는 건조물로 한 것이 사용하기 쉽다.

키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물은, 특유의 냄새를 가지고 있기 때문에, 그 생리 활성의 저하를 초래하지 않는 범위에서 탈색, 탈취 등을 목적으로 하는 정제를 행하는 것도 가능하지만, 피부 화장료 등에 배합하는 경우에는 대량으로 사용하는 것이 아니기 때문에, 미정제인 채로도 실용상 지장은 없다.

상기와 같이 하여 얻어지는 키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물은, 시르투인1 활성화 작용을 가지고 있기 때문에, 시르투인1 활성화제의 유효성분으로서 이용할 수 있다.

본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 의약품, 의약부외품, 화장품 등의 폭 넓은 용도로 사용할 수 있다.

본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물만으로 이루어진 것이어도 좋고, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 제제화한 것이어도 좋다.

본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 덱스트린, 사이클로 덱스트린 등의 약학적으로 허용할 수 있는 캐리어 그 외 임의의 조제(助劑)를 이용하고, 통상법에 따라, 분말상, 과립상, 정제상, 액상 등의 임의의 제형으로 제제화 할 수 있다. 이 때, 조제로서는, 예를 들면, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 안정제, 교취제 등을 이용할 수 있다. 시르투인1 활성화제는, 다른 조성물(예를 들면, 피부 화장료, 음식품 등)에 배합하여 사용할 수 있는 것 외에 연고제, 외용 액제, 시트제 등으로서 사용할 수 있다.

본 실시형태의 시르투인1 활성화제를 제제화한 경우, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물의 함유량은 특히 한정되지 않고, 목적에 따라 적절히 설정할 수 있다.

한편, 본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 필요에 따라서, 시르투인1 활성화 작용을 가지는 다른 천연 추출물 등을, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물과 함께 배합하여 유효성분으로서 이용할 수 있다.

본 실시형태의 시르투인1 활성화제의 환자에 대한 투여 방법으로서는, 경피투여, 경구투여 등을 들 수 있지만, 질환의 종류에 따라, 그 예방, 치료 등에 적합한 방법을 적절히 선택하면 좋다. 또, 본 실시형태의 시르투인1 활성화제의 투여량도, 질환의 종류, 중증도, 환자의 개인차, 투여 방법, 투여 기간 등에 의하여 적절히 증감하면 좋다.

본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물이 가지는 시르투인1 활성화 작용에 의해, 대사계 질환, 염증성 질환, 세포 노화, 당뇨병, 심혈관 질환, 신장 질환, 신경 질환 등의 각종 질환의 예방, 치료, 또는 개선, 또한 항노화나 장기 수명화 등, 시르투인1이 관여하는 각종 현상을 위하여 이용할 수 있다. 다만, 본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 이들 용도 이외에도 시르투인1 활성화 작용을 발휘하는 것에 의의가 있는 모든 용도로 이용할 수 있다.

키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물은, 시르투인1 활성화 작용을 가지고 있고, 피부에 적용한 경우의 사용감 또는 안전성이 우수하기 때문에, 피부외용제로 배합하는데 매우 적합하다. 이 경우에, 피부외용제로는 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 그대로 배합해도 좋고, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물로부터 제제화한 시르투인1 활성화제를 배합해도 좋다. 키위 혹은 코리딜리네 프루티코사의 추출물, 또는 이 키위 혹은 코리딜리네 프루티코사의 추출물로부터 제제화한 시르투인1 활성화제를 배합함으로써, 피부외용제에 시르투인1 활성화 작용을 부여할 수 있다.

여기서 피부외용제로서는, 그 구분에 제한은 없고, 후술하는 피부 화장료 외, 경피적으로 사용되는 의약부외품, 의약품 등을 폭넓게 포함하는 것이다.

또한, 본 실시형태의 키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물은 우수한 시르투인1 활성화 작용을 가지므로, 이들의 작용 기구에 관한 연구를 위한 시약으로서도 적합하게 이용할 수 있다.

또한, 본 실시형태의 시르투인1 활성화제는, 사람에 대하여 적합하게 적용되지만, 이 작용 효과가 있는 한, 사람 이외의 동물에 대하여 적용할 수도 있다.

〔시르투인1 활성화용 피부 화장료〕

상기 실시형태에 따른 키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물은 우수한 시르투인1 활성화 작용을 가지고 있기 때문에, 피부 화장료에 배합하는데 적합하다. 이 경우, 시르투인1 활성화 성분인 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 그대로 배합해도 좋고, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물로부터 제제화한 시르투인1 활성화제를 배합해도 좋다.

키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 배합할 수 있는 피부 화장료의 종류는 특히 한정되지 않고, 예를 들면, 연고, 크림, 유액, 로션, 팩, 파운데이션 등을 들 수 있다.

키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 피부 화장료에 배합하는 경우, 그 배합량은, 피부 화장료의 종류에 따라 적절히 조정할 수 있지만, 적합한 배합율은, 0.0001∼10질량%(고형분 환산)이고, 특히 적합한 배합률은 0.001∼1질량%(고형분 환산)이다.

본 실시형태의 피부 화장료는, 키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물이 가지는 시르투인1 활성화 작용을 방해하지 않는 한, 통상의 피부 화장료의 제조에 이용되는 주제(主劑), 조제 또는 그 외의 성분, 예를 들면, 수렴제, 살균·항균제, 자외선 흡수제, 보습제, 세포 부활제, 소염·항알레르기제, 항산화·활성 산소 제거제, 유지류, 왁스류, 탄화수소류, 지방산류, 알코올류, 에스테르류, 계면활성제, 향료 등을 병용할 수 있다. 이와 같이 병용함으로써, 보다 일반성이 있는 제품이 되고, 또, 병용된 상기 성분 사이의 상승작용이 통상 기대되는 이상의 우수한 사용 효과를 초래하는 것이 있다.

상기 피부 화장료는, 높은 안전성을 가지고 있고, 또한 시르투인1 활성화 작용을 통하여, 대사계 질환, 염증성 질환, 세포 노화, 당뇨병, 심혈관 질환, 신장 질환, 신경 질환 등의 각종 질환의 예방, 치료 또는 개선, 또한 항노화나 장기 수명화 등, 시르투인1이 관여하는 각종 현상을 위하여 이용할 수 있다.

〔시르투인1 활성화용 음식품〕

키위 및 코리딜리네 프루티코사의 추출물은, 시르투인1 활성화 작용을 가지고 있고, 안전성이 우수하기 때문에, 음식품에 배합하는데 적합하다. 이 경우에 있어서, 음식품에는, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 그대로 배합해도 좋고, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물로부터 제제화한 시르투인1 활성화제를 배합해도 좋다. 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물, 또는 이 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물로부터 제제화한 시르투인1 활성화제를 배합함으로써, 음식품에 시르투인1 활성화 작용을 부여할 수 있다.

여기서 음식품이란, 사람의 건강에 위해를 가할 염려가 적고, 통상의 사회생활에 있어서, 경구 또는 소화관 투여에 의해 섭취되는 것을 말하며, 행정구분상의 식품, 의약품, 의약부외품 등의 구분으로 제한되는 것은 아니다. 따라서, 본 실시형태에 있어서의 「음식품」은, 경구적으로 섭취되는 일반식품, 건강식품(기능성 음식품), 보건 기능 식품(특정 보건용 식품, 영양 기능 식품), 의약부외품, 의약품 등을 폭넓게 포함하는 것이다.

키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 음식품에 배합하는 경우, 그들에 있어서의 유효성분의 배합량은, 사용 목적, 증상, 성별 등을 고려하여 적절히 변경할 수 있지만, 첨가 대상이 되는 음식품의 일반적인 섭취량을 고려하여, 성인 1일당 추출물 섭취량이 약 1∼1000㎎이 되도록 하는 것이 바람직하다. 또한, 첨가 대상 음식품이 과립상, 정제상 또는 캡슐 형상의 음식품의 경우, 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물의 첨가량은, 첨가 대상 음식품에 대하여, 통상 0.1∼100질량%이고, 바람직하게는 5∼100질량%이다.

본 실시형태의 음식품은, 상기 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물의 활성을 방해하지 않는 임의의 음식품에 배합한 것이어도 좋고, 상기 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 주성분으로 하는 영양 보조 식품이어도 좋다.

본 실시형태의 음식품을 제조할 때, 예를 들면, 덱스트린, 전분 등의 당류； 젤라틴, 대두 단백, 옥수수 단백 등의 단백질； 알라닌, 글루타민, 아이소루신 등의 아미노산류; 셀룰로오스, 아라비아검 등의 다당류； 대두유, 중쇄 지방산 트리글리셀라이드 등의 유지류 등의 임의의 조제를 첨가하여 임의의 형상의 음식품으로 할 수 있다.

상기 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 배합할 수 있는 음식품은 특별히 한정되지 않지만, 그 구체적인 예로서는, 청량 음료, 탄산 음료, 영양 음료, 과실 음료, 유산 음료 등의 음료(이들 음료의 농축 원액 및 조정용 분말을 포함함)；아이스크림, 아이스 셔벗, 빙수 등의 빙과； 메밀국수, 우동, 당면, 만두피, 샤오마이의 피, 중화면, 즉석면 등의 면류； 엿, 추잉껌, 캔디, 껌, 초콜릿, 정과, 스낵 과자, 비스킷, 젤리, 잼, 크림, 구운 과자 등의 과자류； 어묵, 햄, 소시지 등의 수산·축산 가공 식품； 가공유, 발효유 등의 유제품； 샐러드유, 튀김유, 마가린, 마요네즈, 쇼트닝, 휘프트 크림, 드레싱 등의 유지 및 유지 가공 식품； 소스, 양념장 등의 조미료； 스프, 스튜, 샐러드, 반찬, 채소 절임； 그 외 여러 가지 형태의 건강·영양 보조 식품； 정제, 캡슐제, 드링크제 등을 들 수 있다. 이들 음식품에 상기 키위 또는 코리딜리네 프루티코사의 추출물을 배합할 때에는, 통상 이용되는 보조적인 원료나 첨가물을 병용할 수 있다.

[실시예]

이하, 실시예를 나타내어, 본 발명을 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 하기의 각 예에 하등 제한되는 것은 아니다.

〔실시예 1〕키위 적과 과실 추출액의 조제

키위(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae), 레인보우레드종)의 적과 과실(당도：4.3%, 긴 지름：2cm)의 분쇄물 200g에 추출 용매(정제수) 400mL를 더하고, 30℃에서 1시간 가온 추출하여, 고온 여과(hot filtration)했다. 잔사에 대하여 또한 마찬가지로 추출 처리를 했다. 얻어진 추출액에 대하여 합하여 감압하에서 농축하고, 더 건조하여 키위 적과 과실 추출물 5.5g을 얻었다. 30% BG(부틸렌글리콜)로 0.43%로 조제했다.

〔실시예 2〕코리딜리네 프루티코사 추출액의 조제

아오히로바 코리딜리네 프루티코사(도쿄도 오가사와라쇼도산)의 잎 부분의 건조물 20g에 대해, 50% BG(1,3부틸렌글리콜, 하이슈거케인 BG, Kokyu Alcohol Kogyo Co., Ltd제) 4kg을 혼합하여, 7일간 침지했다. ADVANTEC 정성 여과지(No.2, Toyo Roshi Kaisha, Ltd제) 및 멤브레인(0.45)을 이용하여 여과하고, 여과액으로서 코리딜리네 프루티코사 잎 부분의 추출물(고형분: 1.76질량%)을 얻었다.

〔비교예 1〕NMN(Nicotine amide mononucleotide) 용액의 조제

NMN(Nicotine amide mononucleotide)은 도쿄카세이코교사(Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.)로부터 구입하여, 인산 완충액(PBS(1), Sigma-Aldrich Co. LLC.제)으로 0.43%로 조제했다.

〔시험예 1〕시르투인1 유전자의 발현 시험

실시예 1의 키위 적과 과실 추출액, 실시예 2의 코리딜리네 프루티코사의 잎 부분 추출액 및 비교예 1의 NMN 용액에 대하여, 이하와 같이 하여 시르투인1 유전자의 발현 시험을 행하였다.

사람 신생아 포피 유래 섬유아세포(계대수 3)는 10% 소태아 혈청(FBS, Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 포함하는 Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM, Thermo Fisher Scientific Inc.제)을 이용하여, 37℃, 5% CO₂하에서 전(前)배양하고, 0.25% 트립신(Sigma-Aldrich Co. LLC.제)처리에 의해 세포를 모았다. 회수한 세포를 3×10⁴cells/ml의 농도로 10% FBS/DMEM으로 희석한 후, 세포 배양용 플라스크 50(Sumitomo Bakelite Co., Ltd.사제))에 1 플라스크당 각 5mL 파종하고, 2시간 배양했다. 그 후, 실시예 1을 10μL(시료 농도 8.6㎍/mL), 실시예2를 2.4μL(시료 농도 8.6㎍/mL), 비교예 1을 10μL(시료 농도 8.6㎍/mL) 및 50μL((시료 농도 43.6㎍/mL) 첨가하여, 3일간 배양했다.

세포 독성이 없는 것을 확인 후, 배양액을 제거하고, 인산 완충액(PBS(1), Sigma-Aldrich Co. LLC.제)으로 세정하고, 1% SDS 용액(NIPPON GENE CO., LTD.제) 1mL를 더하여 세포를 회수했다. 이 세포 현탁액을 볼텍스로 충분히 교반한 후, 180μL를 채취했다. 이것에 1% KOH(NACALAI TESQUE, INC.제) 1μL 및 Proteinase Ｋ Solution(Thermo Fisher Scientific Inc.제) 20μL를 첨가하여, 교반 후 15분간 37℃에서 인큐베이트했다. 인큐베이트 후, RNA Clean XP(Beckman Coulter, Inc.제)를 각 100μL 첨가하여, 교반 후 마그넷 스탠드 위에서 5분 정치(靜置)했다. 상청(上淸)을 제거하고, 85% 에탄올로 2회 세정 후, 10분간 건조하여 30μL의 Nuclease-Free Water(Thermo Fisher Scientific Inc.제)를 더했다. 마그넷 스탠드 위에서 5분간 정치하고 상청을 RNA 용액으로 했다.

0℃ 하, 200μL의 PCR 튜브(Bio-Rad laboratories Inc.제, 클리어, 돔 캡)에 Super Script^TM IV VILO™ Master Mix(Thermo Fisher Scientific Inc.제) 1에 대해 Nuclease-free water 2.5의 비율로 조제하고, 볼텍스로 교반 후, 다른 PCR 튜브에 각 14.0μL 분주(分注, dispense)했다. NRT 샘플은, Super Script™ IV VILO™ No RT Control(Thermo Fisher Scientific Inc.제) 1에 대하여 Nuclease-free water 2.5의 비율로 조제하여 마찬가지로 분주했다. 이것에 위에서 얻어진 RNA 용액을 각 6.0μL 첨가하고, 25℃ 10분, 50℃ 10분, 85℃ 5분 서멀 사이클러(Bio-Rad laboratories Inc.제, T100™ Thermal Cycler)를 이용하여 인큐베이트하고, cDNA 샘플 및 NRT 샘플로 했다.

Taqman^(R) Gene Expression Assay (ACTB Hs99999903_m1 또는 SIRT1 Hs01009006_m1, Thermo Fisher Scientific Inc.제) 1에 대해, TaqPath™ qPCR Master Mix, CG(Thermo Fisher Scientific Inc.제)10, Nuclease-free water 5의 비율로 조제하고, Nuclease-free 튜브에 넣어, 볼텍스로 교반 후, 스핀다운 했다. 이것을 PCR 튜브(Bio-Rad laboratories Inc.제, 화이트, 플랫 캡)에 각 16.0μL 분주하여 cDNA 샘플, NRT 샘플을 각 4.0μL 첨가하여 피펫팅, 볼텍스로 교반 후, 스핀다운 했다.

이들 샘플을 이용하여 실시간 PCR(Bio-Rad laboratories Inc.제, C1000 Touch™ Thermal Cycler)을 실시했다. PCR 조건은, 25℃ 2분, 95℃ 20초, 95℃ 3초(1), 60℃ 30초(2)(1→2를 40사이클)로 행하였다.

결과를 표 1에 나타낸다.

	시료 농도	시르투인1 Cq	β-액틴 Cq	△Cq	비*1000	상대비
미처리 콘트롤	0μg/mL	29.04	21.86	7.18	6.89	1
실시예 1	8.6μg/mL	29.44	22.98	6.46	11.40	1.65
실시예 2	8.6μg/mL	30.28	25.56	4.72	38.01	1.64
비교예 1	8.6μg/mL	26.66	19.28	7.38	6.00	0.87
비교예 1	43.6μg/mL	24.63	18.99	5.64	20.00	2.90

Cq : 증폭곡선과 임계치가 교차하는 사이클 수

β-액틴 : 내재성 콘트롤

△Cq : 시르투인Cq-β-액틴Cq

비*1000 : 2^(-△Cq)×1000

시료 농도 8.6μg/mL에 있어서, 실시예 1에서는 미처리 컨트롤과 비교하여 1.65배, 실시예 2에서는 미처리 컨트롤과 비교하여 1.64배의 시르투인1 유전자의 발현이 인정되었지만, 같은 농도의 비교예 1에서는 시르투인1 유전자의 발현은 나타나지 않았다. 시르투인1 유전자의 활성화가 인정되는 시료 농도 43.6μg/mL의 비교예 1에서는 미처리 컨트롤과 비교하여 2.9배의 시르투인1 유전자의 활성화가 인정되었다. 이상의 결과에 의해, 실시예 1 및 실시예 2는, 비교예 1 보다도 강한 시르투인1 유전자의 활성이 인정되었다.

[배합예 1]

하기 조성에 따라, 유액을 통상법에 의해 제조했다.

키위 추출물 0.01g

호호바 오일 4.00g

1,3-부틸렌글리콜 3.00g

알부틴 3.00g

폴리옥시에틸렌세틸에테르(20E.0.) 2.50g

올리브 오일 2.00g

스쿠알렌 2.00g

세탄올 2.00g

모노스테아린산글리세릴 2.00g

올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄(20E.0.) 2.00g

파라옥시안식향산메틸 0.15g

글리틸레틴산스테아릴 0.10g

황기 엑기스 0.10g

다이포타슘글리시리제이트 0.10g

은행나무잎 엑기스 0.10g

콘키올린 0.10g

황벽나무 엑기스 0.10g

카밀레 엑기스 0.10g

향료 0.05g

정제수 잔부(전량을 100g으로 함)

[배합예 2]

아래와 같은 조성의 크림을 통상법에 의해 제조했다.

코리딜리네 프루티코사 추출물 0.01g

고삼 엑기스 0.1g

울금 엑기스 0.1g

유동 파라핀 5.0g

화이트 비즈왁스 4.0g

스쿠알렌 10.0g

세탄올 3.0g

라놀린 2.0g

스테아린산 1.0g

올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄(20E.0.) 1.5g

모노스테아린산글리세릴 3.0g

유용성 감초 엑기스 0.1g

1,3-부틸렌글리콜 6.0g

파라옥시안식향산메틸 1.5g

향료 0.1g

정제수 잔부(전량을 100g으로 함)

[배합예 3]

아래와 같은 조성의 미용액을 통상법에 의해 제조했다.

키위 추출물 0.01g

코리딜리네 프루티코사 추출물 0.01g

아스코르빈산2-글루코시드 0.1g

카밀레 엑기스 0.1g

당근 엑기스 0.1g

잔탄검 0.3g

하이드록시에틸셀룰로오스 0.1g

카르복시비닐폴리머 0.1g

1,3-부틸렌글리콜 4.0g

다이포타슘글리시리제이트 0.1g

글리세린 2.0g

수산화칼륨 0.25g

향료 0.01g

방부제(파라옥시안식향산메틸) 0.15g

에탄올 2.0g

정제수 잔부(전량을 100g으로 함)

본 발명의 시르투인 활성화제는, 대사계 질환, 염증성 질환, 세포 노화, 당뇨병, 심혈관 질환, 신장 질환, 신경 질환 등의 각종 질환의 예방, 치료, 또는 개선, 또한 항노화 및 장기 수명화 등의 실현에 크게 공헌할 수 있다.

Claims (10)

1. 키위 과실부 및/또는 코리딜리네 프루티코사 잎부분의 추출물을 유효성분으로 하는 시르투인1 활성화제로서,
   상기 추출물은, 물, 탄소수 1∼5의 저급 지방족 알코올, 탄소수 3의 저급 지방족 케톤 및 탄소수 2∼5의 다가 알코올로부터 선택되는 1종의 용매 또는 2종 이상의 혼합 용매를 추출 용매로서 얻어지는 것인, 시르투인1 활성화제.
   
2. 키위 과실부 및/또는 코리딜리네 프루티코사 잎부분의 추출물을 배합한 시르투인1 활성화용 피부 화장료로서,
   상기 추출물은, 물, 탄소수 1∼5의 저급 지방족 알코올, 탄소수 3의 저급 지방족 케톤 및 탄소수 2∼5의 다가 알코올로부터 선택되는 1종의 용매 또는 2종 이상의 혼합 용매를 추출 용매로서 얻어지는 것인, 시르투인1 활성화용 피부 화장료.
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