KR102549413B1

KR102549413B1 - 탈모 치료용 조성물의 제조 방법

Info

Publication number: KR102549413B1
Application number: KR1020207030744A
Authority: KR
Inventors: 웨이밍 왕; 진하이 후오; 멩수이 리; 웬팅 동; 후아쉬 리우; 드퀴앙 한
Original assignee: 헤이룽장 아카데미 오브 트래디셔널 차이니즈 메디슨
Priority date: 2018-09-21
Filing date: 2019-09-16
Publication date: 2023-06-28
Also published as: KR20200136964A; JP2021516701A; WO2020057451A1; CN109223603B; CN109223603A; JP7042544B2

Abstract

탈모 치료용 조성물의 제조 방법은 3가지 탈모 치료용 조성물에 관한 것으로, 일용 화학제품 분야에 관한 것이다. 상기 조성물은 인류의 탈모 현상이 갈수록 심각해지고 연령층이 점점 젊어지는 기술적 과제를 해결하기 위한 것이다. 상기 조성물의 제조 방법은, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1); 발효 기질을 제조하는 단계 (2); 및 발효 기질에 누룩곰팡이, 털곰팡이 또는 고초균을 접종하여 탈모 치료용 조성물을 얻는 단계 (3)을 포함한다. 상기 탈모 치료용 조성물은 모낭 성장에 대한 촉진 작용이 현저하고, 지루성 탈모에 대한 개선 작용이 현저하다.

Description

탈모 치료용 조성물의 제조 방법

본 발명은 다양한 조성물의 제조 방법에 관한 것으로, 일용 화학제품 분야에 관한 것이다.

생활 리듬이 빨라지고 업무 스트레스가 증가되며 음식 및 생활 습관이 개변됨에 따라, 중국 청년 남성의 탈모 발병률이 20년 전에 비해 10배 이상으로 증가되었다. 동시에, 여성 주민의 탈모 발병률도 해마다 상승되고 있다. 하지만, 탈모를 질환으로 여겨 내원하여 진단을 받아야 한다는 인지율은 여전히 낮은 편이다. 탈모의 주요한 원인은 유전 요소, 생리 기능 실조, 업무와 학습의 강한 스트레스, 정신 긴장, 약물 반응, 방사선 치료, 환경 오염, 영양 불량 등이다.

하지만, 최근의 연구에서 탈모가 유기체의 장내 세균총 불균형과 관련됨을 발견하였는 바, 장내 세균총 문란은 락토바실러스 무리누스를 증가시킴으로써, 일부 물질 또는 효소의 결핍을 초래하는데, 이러한 물질이 반드시 장내 미생물 분비 과정을 거칠 가능성이 극히 높다. 인간 장내 세균총은 하나의 복잡한 군락으로, 건강한 성인의 장내 미생물 전체 수량은 약 1 ~ 1.5kg이고, 1000여 종이 있으며, 장내 미생물의 수량은 인간 세포수의 10배이므로, "인체 투명 슈퍼 기관”으로 불리우고 있다. 장내 세균총은 소화, 대사 및 면역 기능에서 중요한 작용을 일으킨다. 장내 세균총 불균형은 비만, 당뇨병, 종양, 탈모 등 대사 이상을 야기시키는 중요한 원인 중 하나이다. 따라서, 본 특허는 상기 본 발명의 조성물을 경구 투여하여 장내 세균총 종류를 보충할 수 있고 장내 세균총을 개선시키는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 목적은, 장내 세균총을 개선시켜 인간 탈모 현상의 기술적 과제를 해결하기 위해 탈모 치료용 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다.

첫 번째 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

흑 목이버섯을 깨끗이 씻고, 잡질을 제거하며, 분쇄 후 40 메쉬로 스크리닝하여, 흑 목이버섯 분말로 제조하고, 흑 목이버섯 분말과 증류수의 140:1 질량비에 따라 흑 목이버섯 분말을 증류수에 넣은 다음, 초음파 전력이 500 W인 조건에서 15분 동안 초음파를 수행하며, 워터 배스에서 3시간 동안 침출시킨 후, 추출액을 4500 r/min으로 10분 동안 원심분리하여 잡질을 제거한 다음, 추출액을 흑 목이버섯 다당류 농도가 4 g/L이고 pH값이 5.6인 재료액으로 제조하고, 다음, 온도가 40 ℃이고 압력이 0.17 bar인 조건에서 한외 여과를 수행하여, 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액을 얻는, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1); 및

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 삶아 익히며, 익은 재료를 30 ℃ ~ 40 ℃까지 냉각시킨 다음, 1:3의 질량비로 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 접종하고, 28 ℃의 실온을 유지하며, 20 ~ 24시간 동안 제국(koji making)하여 1차 국 뒤집기(turning koji)를 수행하고, 28시간 동안 제국하여 2차 국 뒤집기를 수행하며, 34시간 동안 제국한 후 출국(finished koji)하고, 출국 후 국을 세척하며, 12시간 동안 뜸을 들여 용기에 넣고, 28 ℃의 항온실에서 30일 이상 보온 발효시킨 후, 꺼내 말리워 누룩곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치(Douchi) 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함한다.

두 번째 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

흑 목이버섯을 깨끗이 씻고, 잡질을 제거하며, 분쇄 후 40 메쉬로 스크리닝하여, 흑 목이버섯 분말로 제조하고, 흑 목이버섯 분말과 증류수의 140:1 질량비에 따라 흑 목이버섯 분말을 증류수에 넣은 다음, 초음파 전력이 500 W인 조건에서 15분 동안 초음파를 수행하며, 워터 배스에서 3시간 동안 침출시킨 후, 추출액을 4500 r/min으로 10분 동안 원심분리하여 잡질을 제거한 다음, 추출액을 흑 목이버섯 다당류 농도가 4 g/L이고 pH값이 5.6인 재료액으로 제조하고, 다음, 온도가 40 ℃이고 압력이 0.17 bar인 조건에서 한외 여과를 수행하여, 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액을 얻는, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1);

털곰팡이 균종을 무균 생리 식염수에 넣고, 피펫으로 균액을 흡수하여 겨 배지에 접종하며, 20 ℃에서 96시간 동안 배양하고, 배양된 머더 스타아터(mother starter) 배양병에 500 mL의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 흔들며, 이중 거즈로 여과하고, 거른 찌꺼기를 다시 500 mL의 멸균 생리 식염수로 한 번 세척하여 여과하며, 두 번의 여과액을 혼합하여 털곰팡이 포자 현탁액으로 제조하고, 상기 털곰팡이 포자 현탁액을 4 ℃의 냉장고에 넣는 단계 (2);

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키는 단계 (3), 및

1:3의 질량비에 따라 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 털곰팡이 포자 현탁액을 접종하고, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양한 다음, 48동안 후숙 처리하여, 털곰팡이형-목이버섯 다당류 30000 Da 두치 발효물을 얻는, 혼합 접종 단계 (4)를 포함한다.

세 번째 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 물에 10 ~ 18시간 동안 담그고, 120 ℃에서 멸균하여 발효 기질을 얻는 단계 (2); 및

발효 기질 중 복합액의 농도가 2 ml/L가 될 때가지 발효 기질을 복합액에 접종하고, 상기 복합액을 목이버섯 다당류 300 kDa 차단액에 의해 고초균 접종액과 1:3의 질량비로 혼합하고, 균일하게 흔들어, 4 ~ 8 ℃에서 72 ~ 120 시간 동안 배양하여, 고초균형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치 발효물을 얻는 단계 (3)을 포함한다.

두치(발효된 황두)는 풍부한 영양 물질을 함유하는데, 주로 단백질, 유리 아미노산, 필수 지방산, 가용성 당, 무기염, 비타민 등을 포함한다. 이 외에, 두치는 대두 이소플라본, 대두 사포닌, 갈색 색소, 두치 섬유소용해효소, β-글루코시다아제, 항생제 등 생리 활성 물질을 더 함유한다. 두치 중 이러한 활성 물질의 일부분은 원료 대두로부터 유래되고, 일부분은 발효 과정에 참여하는 다양한 미생물, 및 원료 대두 중 유기물에 대한 분해, 재조합 등 복합한 생화학 반응으로부터 유래된다.

흑 목이버섯에 함유된 다당체는 구체적으로 항궤양, 노화 지연, 혈지 감소, 항간염, 항돌연변이, 항종양, 단백질과 핵산 증강 및 유기체 면역 촉진 등 기능을 구비하고, 막분리법으로 목이버섯 다당류를 차단 분리하여 두치와 같이 발효시킴으로써, 모발 견고 효과가 현저하다.

본 발명의 특징은 하기와 같다.

1. 기존의 발모는 생강, 측백엽 등으로 표피 마사지를 수행하여 두피의 미소 순환을 촉진시키는 것이지만, 본 발명의 발효물을 경구 투여하면, 장내 세균총 구조를 복원시키고, 미소 생태 평형을 회복시킬 수 있다. 장내 세균총 복용을 통해 조절하여 모발 견고 목적에 도달하는데, 이러한 분야는 미개지이다.

2. 본 발명의 조성물은 동물 실험에서 극히 우수한 모발 견고 효과를 나타냈고, 금후를 위해 탈모 문제를 대규모적으로 해결하였고, 새로운 경로를 찾았다.

3. 본 발명의 탈모 치료용 조성물은 모낭 성장에 대한 촉진 작용이 현저하고, 지루성 탈모에 대한 개선 작용이 현저하다.

본 발명의 기술적 해결수단은 하기 구체적인 실시형태에 한정되지 않고, 각 구체적인 실시형태 간의 임의의 조합을 더 포함한다.

구체적인 실시형태 1에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고(수분 함량45 %-55 %), 삶아 익히며, 익은 재료를 30 ℃ ~ 40 ℃까지 냉각시킨 다음, 1:3의 질량비로 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 접종하고, 28 ℃의 실온을 유지하며, 20 ~ 24시간 동안 제국(koji making)하여 1차 국 뒤집기(turning koji)를 수행하고, 28시간 동안 제국하여 2차 국 뒤집기를 수행하며, 34시간 동안 제국한 후 출국(finished koji)하고, 출국 후 국을 세척하며, 12시간 동안 뜸을 들여 용기에 넣고, 28 ℃의 항온실에서 30일 이상 보온 발효시킨 후, 꺼내 말리워 누룩곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함한다.

본 실시형태의 단계 (1)에서, 상기 워터 배스에서의 침출 온도는 70 ℃ ~ 85 ℃이다.

본 실시형태의 단계 (1)에서, 원심분리 상청액에 증류수를 넣고, 상청액 중의 흑 목이버섯 다당류를 4 g/L까지 희석한다.

본 실시형태의 단계 (2)에서, 상기 익은 재료는 삶아 익힌 황두이다.

본 실시형태의 단계 (2)에서, 삶아 익힌 황두 200 g 당 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 총 3 ml 접종하고, 누룩곰팡이 균액 포자의 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

본 실시형태의 단계 (2)에서, "뜸을 들인다”는 것은 온도가 30±2 ℃인 밀폐 배양기에서 처리하는 것이다.

구체적인 실시형태 2에서, 본 실시형태와 구체적인 실시형태 1의 상이한 점은 단계 (2)에서 수분 함량이 50 %인 것이다. 나머지는 구체적인 실시형태 1과 동일하다.

구체적인 실시형태 3에서, 본 실시형태와 구체적인 실시형태 1 또는 구체적인 실시형태 2의 상이한 점은 단계 (2)에서 익은 재료를 35 ℃까지 냉각시키는 것이다. 나머지는 구체적인 실시형태 1 또는 구체적인 실시형태 2와 동일하다.

구체적인 실시형태 4에서, 본 구체적인 실시형태와 구체적인 실시형태 1 내지 구체적인 실시형태 3의 상이한 점은 단계 (2)에서 22시간 동안 제국하여 1차 국 뒤집기를 수행하는 것이다. 나머지는 구체적인 실시형태 1 내지 구체적인 실시형태 3과 동일하다.

구체적인 실시형태 5에서, 본 구체적인 실시형태의 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

털곰팡이 균종을 무균 생리 식염수에 넣고, 피펫으로 균액을 흡수하여 겨 배지에 접종하며, 20 ℃에서 96시간 동안 배양하고(삼각 플라스크 내의 겨에 균사와 회색 포자가 가득 자란 후 꺼내서 사용을 위해 준비함), 배양된 머더 스타아터(mother starter) 배양병에 500 mL의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 흔들며, 이중 거즈로 여과하고, 거른 찌꺼기를 다시 500 mL의 멸균 생리 식염수로 한 번 세척하여 여과하며, 두 번의 여과액을 혼합하여 털곰팡이 포자 현탁액으로 제조하고, 상기 털곰팡이 포자 현탁액을 4 ℃의 냉장고에 넣는 단계 (2);

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키는 단계 (3); 및

1:3의 질량비에 따라 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 털곰팡이 포자 현탁액을 접종하고, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양한 다음, 48동안 후숙 처리하여, 털곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치 발효물을 얻는, 혼합 접종 단계 (4)를 포함한다.

본 실시형태의 단계 (2)에서, 삶아 익힌 황두 200 g 당 목이버섯 다당류 차단액과 털곰팡이 포자 현탁액을 총 2 ml 접종한다.

본 실시형태에서, 털곰팡이 포자 현탁액 중 포자 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

구체적인 실시형태 6에서, 본 구체적인 실시형태의 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

본 실시형태에서, 고초균 접종액의 포자 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

하기와 같은 실험을 통해 본 발명의 효과를 검증한다.

실시예1에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키며, 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액을 넣고, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양하여, 두치 전 발효 산물을 얻고; 다음 48동안 후숙 처리하여, 황두-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함한다.

본 실시예의 단계 (1)에서, 상기 워터 배스에서의 침출 온도는 70 ℃ ~ 85 ℃이다.

본 실시예의 단계 (1)에서, 원심분리 상청액에 증류수를 넣고, 상청액 중의 흑 목이버섯 다당류를 4 g/L까지 희석한다.

실시예2에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

흑 목이버섯을 깨끗이 씻고, 잡질을 제거하며, 분쇄 후 40 메쉬로 스크리닝하여, 흑 목이버섯 분말로 제조하고, 흑 목이버섯 분말과 증류수의 140:1 질량비에 따라 흑 목이버섯 분말을 증류수에 넣은 다음, 초음파 전력이 500 W인 조건에서 15분 동안 초음파를 수행하며, 워터 배스에서 3시간 동안 침출시킨 후, 추출액을 4500 r/min으로 10분 동안 원심분리하여 잡질을 제거한 다음, 추출액을 흑 목이버섯 다당류 농도가 4 g/L이고 pH값이 5.6인 재료액으로 제조하고, 다음, 온도가 40 ℃이고 압력이 0.17 bar인 조건에서 한외 여과를 수행하여, 목이버섯 다당류 300 kDa 투과액을 선택하는, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1); 및

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키며, 목이버섯 다당류 300 kDa 투과액을 넣고, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양하며, 두치 전 발효 산물을 얻고; 다음 48동안 후숙 처리하여, 황두-목이버섯 다당류 300 kDa 투과액 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함한다.

실시예3에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

털곰팡이 균종을 무균 생리 식염수에 넣고, 피펫으로 균액을 흡수하여 겨 배지에 접종하며, 20 ℃에서 96시간 동안 배양하고, 삼각 플라스크 내의 겨에 균사와 회색 포자가 가득 자란 후 꺼내서 사용을 위해 준비하며, 배양된 머더 스타아터(mother starter) 배양병에 500 mL의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 흔들며, 이중 거즈로 여과하고, 거른 찌꺼기를 다시 500 mL의 멸균 생리 식염수로 한 번 세척하여 여과하며, 두 번의 여과액을 혼합하여 털곰팡이 포자 현탁액으로 제조하고, 상기 털곰팡이 포자 현탁액을 4 ℃의 냉장고에 넣는 단계 (2);

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 질량비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키는 단계 (3), 및

1:3의 질량비에 따라 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 털곰팡이 포자 현탁액을 접종하고, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양한 다음, 48동안 후숙 처리하여, 털곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치 발효물을 얻는 혼합 접종 단계 (4)를 포함한다.

본 실시예의 단계 (2)에서, 삶아 익힌 황두 200 g 당 목이버섯 다당류 차단액과 털곰팡이 포자 현탁액을 총 2 ml 접종한다.

본 실시예에서, 털곰팡이 포자 현탁액 중 포자 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

실시예4에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

흑 목이버섯을 깨끗이 씻고, 잡질을 제거하며, 분쇄 후 40 메쉬로 스크리닝하여, 흑 목이버섯 분말로 제조하고, 흑 목이버섯 분말과 증류수의 140:1 질량비에 따라 흑 목이버섯 분말을 증류수에 넣은 다음, 초음파 전력이 500 W인 조건에서 15분 동안 초음파를 수행하며, 워터 배스에서 3시간 동안 침출시킨 후, 추출액을 4500 r/min으로 10분 동안 원심분리하여 잡질을 제거한 다음, 추출액을 흑 목이버섯 다당류 농도가 4 g/L이고 pH값이 5.6인 재료액으로 제조하고, 다음, 온도가 40 ℃이고 압력이 0.17 bar인 조건에서 한외 여과를 수행하여, 목이버섯 다당류 300 kDa 투과액을 선택하는, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1);

털곰팡이 균종을 무균 생리 식염수에 넣고, 피펫으로 균액을 흡수하여 겨 배지에 접종하며, 20 ℃에서 96시간 동안 배양하고, 삼각 플라스크 내의 겨에 균사와 회색 포자가 가득 자란 후 꺼내서 사용을 위해 준비하며, 배양된 머더 스타아터(mother starter) 배양병에 500 mL의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 흔들며, 이중 거즈로 여과하고, 거른 찌꺼기를 다시 500 mL의 멸균 생리 식염수로 한 번 세척하여 여과하며, 두 번의 여과액을 혼합하여 털곰팡이 포자 현탁액으로 제조하고, 상기 털곰팡이 포자 현탁액을 4 ℃의 냉장고에 넣어, 균종으로서 보관하는 단계 (2); 및

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키며, 사용을 위해 준비하고, 1:3의 질량비에 따라 목이버섯 다당류 300 kDa 투과액과 털곰팡이 포자를 접종하며, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양하여, 두치 전 발효 산물을 얻고; 다음 48동안 후숙 처리하여, 털곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 투과액 두치 발효물을 얻는 단계 (3)을 포함한다.

본 실시예 털곰팡이 포자 현탁액 중 포자 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

실시예5에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 수분 함량45 %-55 %, 삶아 익히며, 익은 재료를 30 ℃ ~ 40 ℃까지 냉각시킨 다음, 1:3의 질량비로 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 접종하고, 28 ℃의 실온을 유지하며, 22시간 동안 제국(koji making)하여 1차 국 뒤집기(turning koji)를 수행하고, 28시간 동안 제국하여 2차 국 뒤집기를 수행하며, 34시간 동안 제국한 후 출국(finished koji)하고, 출국 후 국을 세척하며,12시간 동안 뜸을 들여 용기에 넣고, 28 ℃의 항온실에서 30일 이상 보온 발효시킨 후, 꺼내 말리워 누룩곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함한다.

본 실시예의 단계 (2)에서, 삶아 익힌 황두 200 g 당 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 총 3 ml 접종하고, 누룩곰팡이 균액 포자의 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

본 실시예의 단계 (2)에서, "뜸을 들인다”는 것은 온도가 30±2 ℃인 밀폐 배양기에서 처리하는 것이다.

실시예6에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 수분 함량 50 %가 될 때까지 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 삶아 익히며, 익은 재료를 35 ℃까지 냉각시키고, 1:3의 질량비에 따라 목이버섯 다당류 300 kDa 투과액과 누룩곰팡이 접종액을 접종하며, 균일하게 교반하여 실내에 두되, 28 ℃의 실온을 유지하고, 22시간 동안 제국(koji making)하여 1차 국 뒤집기(turning koji)를 수행하며, 28시간 동안 제국하여 2차 국 뒤집기를 수행하고, 34시간 동안 제국한 후 출국(finished koji)하며, 출국 후 국을 세척하고, 12시간 동안 뜸을 들여 용기에 넣으며, 28 ℃의 항온실에서 30일 이상 보온 발효시킨 후, 꺼내 말리워 누룩곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 투과액 두치 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함한다.

실시예7에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 질량비로 물과 혼합한 후 물에 10 ~ 18시간 동안 담그고, 120 ℃에서 멸균하여 발효 기질을 얻는 단계 (2); 및

본 실시예에서, 고초균 접종액의 포자 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml이다.

실시예8에서, 탈모 치료용 조성물의 제조 방법은,

과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 비율로 물과 혼합한 후 물에 10 ~ 18시간 동안 담그고, 120 ℃에서 멸균하여 발효 기질을 얻는 단계 (2); 및

발효 기질 중 복합액의 농도가 2 ml/L가 될 때가지 발효 기질을 복합액에 접종하고, 상기 복합액을 목이버섯 다당류 300 kDa 투과액에 의해 고초균 접종액과 1:3의 질량비로 혼합하고, 균일하게 흔들어, 4 ~ 8 ℃에서 72 ~ 120 시간 동안 배양하여, 고초균-목이버섯 다당류 300 kDa 투과액 두치 발효물을 얻는 단계 (3)을 포함한다.

실험 1. 지루성 마우스 탈모에 대한 본 발명의 경구 투여 조성물의 억제 실험

1. 실험 재료

25 mg/1ml의 테스토스테론 프로피오네이트 주사액을 닝보 제 2 호르몬 공장(菱퀼꺼뒤랗샴羹낍)에서 구매하였고, 배치 번호는 11025이다.

90 ml/병의 샐러드유는 아로와나 유한회사(쏜질戴唐掘무鱇)에서 구매하였다.

체중이 18 ~ 22 g이고 클린 등급(clean grade) 성체 웅성 B6CBAF1/J 마우스는 베이징 찰스 리버 실험 동물 기술 유한회사(굇쑴郭繫적빽茄駱땡膠세減唐掘무鱇)(허가증 번호: SCXK(쑴)2017-0011)에서 구매하였고, 23 ℃의 실온, 50 ~ 60 %의 습도 조건에서, 매일 2번 통풍시키고, 매번 1시간 동안 지속하며, 마우스의 자연 생활 모드에 따라, B6CBAF1/J 마우스가 자유롭게 활동하고 물과 음식을 섭취하도록 하였다.

2. 실험 방법

2.1. 실험 그룹화

100마리의 웅성 마우스에서 랜덤으로 10마리의 B6CBAF1/J 마우스를 선택하여 실험 블랭크 대조군으로 사용하고, 나머지 90마리의 B6CBAF1/J 마우스를 실험 마우스로 사용하며, 분리하여 사육하였다. 즉, 탈모 모델군, 조성물을 경구 투여한 실시예 1군 ~ 실시예8군으로 나뉜다.

2.2. 동물 모델 제조 및 투여 방법

탈모 동물 모델에 주사 투여 모델링 방식을 적용하였고, 주사 부위는 마우스 뒷등이 척주 부분에 평행되는 피하이며, 블랭크 대조군에 생리 식염수를 주사한 이외에, 나머지 9군에 5mg/kg·d 주사량의 테스토스테론 프로피오네이트를 주사하되, 주사 기간은 4주이다.

B6CBAF1/J 마우스 탈모 동물 모델을 성공적으로 모델링한 4주째에, 약물 치료를 수행하기 시작하였고, 블랭크군 이외에, 탈모 모델군에 모두 각 실시예의 조성물을 위내 직접 투여하되, 6주 동안 투여하여 치료하였다. 마우스 탈모 부위의 마우스의 모발 성장 상황을 관찰하여 마우스 탈모 중량을 통계하고; 병리학 관찰과 결부하여 모델군과 비교했을 때 현미경 하에서의 종모/솜털의 비율로 평균값을 계산하였다.

3. 데이터 통계 분석

SPSS 20.0 소프트웨어로 데이터를 처리하되, 군 사이의 차이는 일원 분산 분석법(One Way ANOVA)으로 분석하였으며, p＜0.05는 유의차(significant difference)를 나타내고, 통계학적 의미를 가지는 것으로 이해된다.

4. 실험 결과

(1) 탈모 중량 측정

표 1로부터 알 수 있는 바, 블랭크 대조군에 비해, 다른 각 실험 마우스에는 모두 상이한 정도의 탈모 현상이 발생하였고, 실시예 3, 실시예 5, 실시예 7에서 유의차가 존재하는 이외에(p<0.05), 나머지 각 군에서 극히 유의차가 존재하며(p<0.01); 모델군에 비해, 실시예 3, 실시예 5, 실시예 7군의 마우스의 탈모 현상이 모두 개선되었고(p<0.01), 다른 각 실시예군에서 모두 유의차가 존재하지 않았으며, 탈모에 대한 개선 추세가 보이지 않았다.

(2) 마우스 종모/솜털 비율 측정

표 1로부터 알 수 있는 바, 블랭크 대조군에 비해, 모델군의 종모/솜털 비율이 현저히 감소되었고(p<0.01); 모델군에 비해, 실시예 3, 실시예 5, 실시예 7은 종모/솜털 비율을 현저히 증가시킬 수 있으며(p<0.01), 다른 실험예의 종모/솜털 비율은 개선되지 않았다.

(3) 본 발명의 경구 투여 조성물 실시예 3, 실시예 5, 실시예 7은 지루성 탈모에 대해 현저한 개선 작용을 일으키므로, 대두는 균종 발효를 거친 후 현저한 모발 견고 작용을 발휘할 수 있음을 설명한다.

표 1. 마우스 탈모 중량 측정 결과

그룹화(n=10)	탈모 중량(mg)
블랭크 대조군	5.03±0.57
모델 대조군	13.78±1.03^**
실시예 1	12.42±1.45^**
실시예 2	13.98±0.74^**
실시예 3	7.56±0.92^△△
실시예 4	13.07±0.89^**
실시예 5	6.85±0.41^△△
실시예 6	12.74±1.02^**
실시예 7	5.86±0.48^△△
실시예 8	12.65±0.97^**

**는 블랭크 대조군에 비해 p<0.01임을 나타내고; △△는 모델군에 비해 p<0.01임을 나타낸다. 표 2. 마우스 종모/솜털 비율 측정 결과

그룹화(n=10)	비율
블랭크 대조군	8.36±0.63
모델 대조군	3.08±0.45^**
실시예 1	3.42±0.71^**
실시예 2	3.28±0.48^**
실시예 3	7.46±0.39^△△
실시예 4	4.05±0.73
실시예 5	7.95±0.81^△△
실시예 6	3.25±0.30
실시예 7	8.23±0.53^△△
실시예 8	3.31±0.28

**는 블랭크 대조군에 비해 p<0.01임을 나타내고; △△는 모델군에 비해 p<0.01임을 나타낸다.실험 2. 모발 성장기 마우스 모낭 수량에 대한 경구 투여 조성물의 영향

1. 실험 재료

로진은 선전시 찌톈 화학공업 유한회사(深柏市吉田化工有限公司)에서 구매하였고, 피라핀은 아우웨이 접착제 산업 왁스 제품(걔寬스撚)에서 구매하였으며; 체중이 18 ~ 22 g이고 클린 등급(clean grade) 성체 자성 C57BL/6 마우스는 피부색이 핑크이고 모발이 휴지기인 마우스를 선택하였다. 베이징 찰스 리버 실험 동물 기술 유한회사(北京郭通利빽茄駱땡物技減有限公司)(허가증 번호: SCXK(京)2017-0149)에서 구매하였고, 23 ℃의 실온, 50 ~ 60 %의 습도 조건에서, 매일 2번 통풍시키고, 매번 1시간 동안 지속하며, 마우스의 자연 생활 모드에 따라, 자유롭게 활동하고 물과 음식을 섭취하도록 하였다.

2. 실험 방법

2.1. 실험 그룹화

90마리의 자성 C57BL/6 마우스를 랜덤으로 9그룹으로 나누되, 블랭크 대조군, 조성물을 경구 투여한 실시예 1군 ~ 실시예8군으로 나누어, 분리하여 사육하였다.

2.2. 동물 모델 제조 및 투여 방법

로진과 피라핀을 1:1로 혼합하고 가열하여 녹인 후, 마우스 뒷등에 균일하게 도포하되, 도포 면적은 약 2 cm Х 3 cm이고, 냉각시켜 응고된 후 제거하여, 뒷등 모발을 제거한다(모발 성장기가 휴지기임을 확인해야 함). 탈모한 다음날, 블랭크군에 증류수를 위내 직접 투여한 이외에, 다른 각 군에 각각 위내 직접 투여하되, 매일 정해진 시간에 1번 투여하고, 위내 직접 투여 부피는 2 ml/100 g이며, 연속 20일 동안 투여한다. 20번째 일에, 각 군의 마우스 뒷등의 동일한 위치 피부 조직 조각을 취하여 10 %의 포르말린으로 고정시키고, 피라핀으로 절편을 포매하며, 절편의 두께는 약 4 ~ 5 μm이고, HE로 염색하며, 고배율의 시야(Х400)의 모낭수의 평균값을 취하여 통계학적 처리를 수행하였다.

3. 데이터 통계 분석

SPSS 20.0 소프트웨어로 데이터를 처리하되, 군 사이의 차이는 일원 분산 분석법으로 분석하였으며, p＜0.05는 유의차를 나타내고, 통계학적 의미를 가지는 것으로 이해된다.

4. 실험 결과

(1) 모낭 밀도의 영향

실험 20번째 일에, 각 군의 마우스의 모낭 수량은 표 3과 같다. 블랭크 대조군에 비해, 실시예 3, 실시예 5, 실시예 7은 블랭크군의 마우스의 모낭 수량을 증가시킬 수 있고(p<0.01), 다른 각 군의 실시예는 C57BL/6 마우스의 모낭 수량에 영향 주지 않는 바(p>0.05); 이는 대두 발효물이C57BL/6 마우스의 모낭이 성장기에 진입하도록 유도하고 성장기 시간을 연장하며 퇴행기의 진입을 지연시킬 수 있고 모낭 성장기를 촉진시키는 작용을 가지는 것을 설명한다.

표 3. 마우스 탈모 중량 측정 결과

그룹화(n=10)	모낭 수량(개/고배율 시야)
블랭크 대조군	12.53±1.07
실시예 1	12.42±1.25
실시예 2	13.05±1.19
실시예 3	15.56±0.94^**
실시예 4	11.98±0.74
실시예 5	16.23±1.02^**
실시예 6	13.14±1.10
실시예 7	16.06±0.85^**
실시예 8	12.84±0.94

*는 블랭크 대조군에 비해 p<0.05임을 나타내고, **는 블랭크 대조군에 비해 P<0.01임을 나타낸다.

Claims

탈모 치료용 조성물의 제조 방법으로서,
흑 목이버섯을 깨끗이 씻고, 잡질을 제거하며, 분쇄 후 40 메쉬로 스크리닝하여, 흑 목이버섯 분말로 제조하고, 흑 목이버섯 분말과 증류수의 140:1 질량비에 따라 흑 목이버섯 분말을 증류수에 넣은 다음, 초음파 전력이 500 W인 조건에서 15분 동안 초음파를 수행하며, 워터 배스에서 3시간 동안 침출시킨 후, 추출액을 4500 r/min으로 10분 동안 원심분리하여 잡질을 제거한 다음, 추출액을 흑 목이버섯 다당류 농도가 4 g/L이고 pH값이 5.6인 재료액으로 제조하고, 다음, 온도가 40 ℃이고 압력이 0.17 bar인 조건에서 한외 여과를 수행하여, 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액을 얻는, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1); 및
과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 삶아 익히며, 익은 재료를 30 ℃ ~ 40 ℃까지 냉각시킨 다음, 1:3의 질량비로 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 접종하고, 28 ℃의 실온을 유지하며, 20 ~ 24시간 동안 제국(koji making)하여 1차 국 뒤집기(turning koji)를 수행하고, 28시간 동안 제국하여 2차 국 뒤집기를 수행하며, 34시간 동안 제국한 후 출국(finished koji)하고, 출국 후 국을 세척하며, 12시간 동안 뜸을 들여 용기에 넣고, 28 ℃의 항온실에서 30일 이상 보온 발효시킨 후, 꺼내 말리워 누룩곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 차단액 두치(Douchi) 발효물을 얻는 단계 (2)를 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모 치료용 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
단계 (2)에서, 수분 함량은 50 %인 것을 특징으로 하는 탈모 치료용 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
단계 (2)에서, 익은 재료를 35 ℃까지 냉각시키는 것을 특징으로 하는 탈모 치료용 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
단계 (2)에서, 22시간 동안 제국하여 1차 국 뒤집기를 수행하는 것을 특징으로 하는 탈모 치료용 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서,
단계 (2)에서, 삶아 익힌 황두 200 g 당 목이버섯 다당류 차단액과 누룩곰팡이 접종액을 총 3 ml 접종하고, 누룩곰팡이 균액 포자의 농도는 1.0Х10⁷ ~ 1.0Х10⁸개/ml인 것을 특징으로 하는 탈모 치료용 조성물의 제조 방법.
탈모 치료용 조성물의 제조 방법으로서,
흑 목이버섯을 깨끗이 씻고, 잡질을 제거하며, 분쇄 후 40 메쉬로 스크리닝하여, 흑 목이버섯 분말로 제조하고, 흑 목이버섯 분말과 증류수의 140:1 질량비에 따라 흑 목이버섯 분말을 증류수에 넣은 다음, 초음파 전력이 500 W인 조건에서 15분 동안 초음파를 수행하며, 워터 배스에서 3시간 동안 침출시킨 후, 추출액을 4500 r/min으로 10분 동안 원심분리하여 잡질을 제거한 다음, 추출액을 흑 목이버섯 다당류 농도가 4 g/L이고 pH값이 5.6인 재료액으로 제조하고, 다음, 온도가 40 ℃이고 압력이 0.17 bar인 조건에서 한외 여과를 수행하여, 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액을 얻는, 목이버섯 다당류의 막분리 단계 (1);
털곰팡이 균종을 무균 생리 식염수에 넣고, 피펫으로 균액을 흡수하여 겨 배지에 접종하며, 20 ℃에서 96시간 동안 배양하고, 배양된 머더 스타아터(mother starter) 배양병에 500 mL의 멸균 생리 식염수를 넣고 충분히 흔들며, 이중 거즈로 여과하고, 거른 찌꺼기를 다시 500 mL의 멸균 생리 식염수로 한 번 세척하여 여과하며, 두 번의 여과액을 혼합하여 털곰팡이 포자 현탁액으로 제조하고, 상기 털곰팡이 포자 현탁액을 4 ℃의 냉장고에 넣는 단계 (2);
과립이 풍만하고 크기가 균일한 황두를 선택하여 칭량하고 깨끗이 씻으며, 1:3의 부피비로 물과 혼합한 후 30 ℃에서 3시간 동안 담그고, 물기를 뺀 후, 고온 고압 멸균 솥에서, 121 ℃에서 30분 동안 찐 다음, 냉각시키는 단계 (3); 및
상기 단계 (3)에 따른 황두에 분자 차단량이 300 kDa인 목이버섯 다당류 차단액과 털곰팡이 포자 현탁액을 1:3의 질량비로 접종하고, 25 ℃의 온도에서 48시간 동안 배양한 다음, 48 시간 동안 후숙 처리하여, 털곰팡이형-목이버섯 다당류 300 kDa 두치 발효물을 얻는, 혼합 접종 단계 (4)를 포함하는 것을 특징으로 하는 탈모 치료용 조성물의 제조 방법.
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