CN109223603B - 治疗脱发组合物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

治疗脱发组合物的制备方法，它涉及一种治疗脱发组合物，涉及日用化学品领域。本发明是为了解决人群中脱发现象日益突出，并且呈现年轻化趋势的技术问题。本方法如下：一、膜分离木耳多糖；二、制备发酵基质、三、在发酵基质接种曲霉、毛霉或枯草芽孢杆菌，得到治疗脱发组合物。本发明的组合在动物实验中，表现了极好的固发效果，为今后的大规模解决脱发问题，寻找了新的途径。本发明的治疗脱发组合物对毛囊生长有明显促进作用，对脂溢性脱发有明显改善作用。

Description

治疗脱发组合物的制备方法
技术领域
本发明涉及一种组合物制备方法，涉及日用化学品领域。
背景技术
随着生活节奏的加快，工作压力的增大，饮食及生活习惯的改变，我国中青年男性脱发的发病率较20年前增长了近10倍以上。同时女性居民的脱发发病率也在逐年上升。但对脱发是种病需要去医院就诊的认知率仍然很低。主要的原因有遗传因素、生理功能失调、工作和学习压力大、精神紧张、药物反应、放射化疗、环境污染、营养不良等。
但是最新的研究显示脱发与机体的肠道菌群不平衡有关，肠道菌群紊乱导致鼠乳杆菌增多，进而导致某些物质或酶的缺乏，而该物质又极有可能必须通过胃肠道微生物分泌。人类肠道菌群是一个复杂的群落，健康成人肠道内的微生物总量大约1-1.5kg，有1000多种，肠道微生物的数量是人类细胞数的10倍，被称为“人体隐形的超级器官”。肠道菌群在消化、代谢和免疫功能中起到重要的作用。肠道菌群失衡可能是造成肥胖、糖尿病、肿瘤、脱发等多种多种代谢异常的重要原因之一。所以本专利想通过口服该发明组合物能够起到补充肠道菌群多样性，改善肠道菌群的目的。
发明内容
本发明的目的是为了改善肠道菌群，从而解决人类脱发现象的技术问题，提供了一种治疗脱发组合物的制备方法。
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比混合后于30℃下浸泡3h，至含水量45％-55％，煮熟，将熟料冷却至30℃-40℃，然后将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种，保持室温28℃，制曲至20-24小时进行第一次翻曲，28小时进行第二次翻曲，34小时后出曲，出曲后洗曲,闷12小时入罐，置于28℃恒温室中保温发酵30天以上，取出晾干，即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、将毛霉菌种加入无菌生理盐水，用移液器吸取菌液，接种于麸皮培养基，20℃下培养96h，至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用，在培养好的种曲培养瓶中加入500mL灭菌生理盐水充分摇匀，双层纱布过滤，滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过滤，两次滤液混合制成孢子悬液，将此孢子悬浮液置于4℃冰箱中；
三、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比比混合后于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，于121℃蒸煮30min，冷却，
四、混合接种：将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接种，在25℃的温度下培养48h，然后经后熟处理48h，制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa豆豉发酵物。
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1：3的体积比混合后在水中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
三、每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L，所述复合液由木耳多糖300kDa截留液和枯草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。
豆豉中含有丰富的营养物质，主要包括蛋白质、游离氨基酸、必需脂肪酸、可溶性糖、无机盐、维生素等。除此之外，豆豉中还含有大豆异黄酮、大豆皂甙、褐色色素、豆豉纤溶酶、β-葡萄糖苷酶、抗菌素等生理活性物质。豆豉中这些活性物质部分来源于原料大豆中，部分来源于参与发酵过程中的各种微生物及酶对原料大豆中有机物的分解、重组等复杂的生化反应。
黑木耳所含的多糖体具有抗溃疡、延缓衰老、降低血脂、抗肝炎、抗突变、抗肿瘤、增强蛋白质和核酸代谢及促进机体免疫等功能，采用膜分离法截断分离木耳多糖与豆豉联合发酵，固发效果明显。
本发明的特点：
1、传统的生发多以生姜、侧柏叶等用于表皮按摩，促进头皮微循坏为主，而口服本发明发酵物，能够修复肠道菌群结构，恢复微生态平衡。通过吃-肠道菌群调节达到固发作用的，还是空白领域。
2、本发明的组合在动物实验中，表现了极好的固发效果，为今后的大规模解决脱发问题，寻找了新的途径。
本发明的治疗脱发组合物对毛囊生长有明显促进作用，对脂溢性脱发有明显改善作用。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比混合后于30℃下浸泡3h，至含水量45％-55％，煮熟，将熟料冷却至30℃-40℃，然后将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种，保持室温28℃，制曲至20-24小时进行第一次翻曲，28小时进行第二次翻曲，34小时后出曲，出曲后洗曲,闷12小时入罐，置于28℃恒温室中保温发酵30天以上，取出晾干，即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤二中至至含水量50％。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤二中将熟料冷却至35℃。其它与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本具体实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二中制曲至22小时进行第一次翻曲。其它与具体实施方式一至三之一相同。
具体实施方式五：本具体实施方式治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、将毛霉菌种加入无菌生理盐水，用移液器吸取菌液，接种于麸皮培养基，20℃下培养96h，至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用，在培养好的种曲培养瓶中加入500mL灭菌生理盐水充分摇匀，双层纱布过滤，滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过滤，两次滤液混合制成孢子悬液，将此孢子悬浮液置于4℃冰箱中；
三、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比混合后于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，于121℃蒸煮30min，冷却，
四、混合接种：将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接种，在25℃的温度下培养48h，然后经后熟处理48h，制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa豆豉发酵物。
具体实施方式六：本具体实施方式治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1：3的体积比比混合后在水中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
三、每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L，所述复合液由木耳多糖300kDa截留液和枯草芽孢杆菌按照1:3质量比混合，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。
采用下述实验验证本发明效果：
实施例1：治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，121℃蒸煮30min，冷却，加入分子截留量300kDa的木耳多糖截留液，在25℃的温度下培养48h，即得豆豉前发酵产物；然后经后熟处理48h。即得黄豆-木耳多糖300kDa截流液。
实施例2：治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到木耳多糖300kDa透过液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，121℃蒸煮30min，冷却，加入木耳多糖300kDa透过液，在25℃的温度下培养，48h，即得豆豉前发酵产物；然后经后熟处理48h。即得黄豆-木耳多糖300kDa透过液。
实施例3：治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、将毛霉菌种加入无菌生理盐水，用移液器吸取菌液，接种于麸皮培养基，20℃下培养96h，至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用，在培养好的种曲培养瓶中加入500mL灭菌生理盐水充分摇匀，双层纱布过滤，滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过滤，两次滤液混合制成孢子悬液，将此孢子悬浮液置于4℃冰箱中；
三、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的质量比混合后于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，于121℃蒸煮30min，冷却，
四、混合接种：将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接种，在25℃的温度下培养48h，然后经后熟处理48h，制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa豆豉发酵物。
实施例4：
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到木耳多糖300kDa透过液；
二、将毛霉菌种加入无菌生理盐水，用移液器吸取菌液，接种于麸皮培养基，20℃下培养96h，至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用，在培养好的种曲培养瓶中加入500mL灭菌生理盐水充分摇匀，双层纱布过滤，滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过滤，两次滤液混合制成孢子悬液，将此孢子悬浮液置于4℃冰箱中，作为菌种保存；
三、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，121℃蒸煮30min，冷却，待用，将木耳多糖300kDa透过液和毛霉按1:3的质量比接种，在25℃的温度下培养48h，即得豆豉前发酵产物；然后经后熟处理48h，制得毛霉菌型-木耳多糖300kDa透过液豆豉发酵物。
实施例5：
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比混合后于30℃下浸泡3h，至含水量45％-55％，煮熟，将熟料冷却至30℃-40℃，然后将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种，保持室温28℃，制曲至20-24小时进行第一次翻曲，28小时进行第二次翻曲，34小时后出曲，出曲后洗曲,闷12小时入罐，置于28℃恒温室中保温发酵30天以上，取出晾干，即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。
实施例6：
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到木耳多糖300kDa透过液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比于30℃下浸泡3h，至含水量50％，煮熟，将熟料冷却至35℃，将木耳多糖300kDa透过液和曲霉接种液按1:3的质量比接种，拌匀入室，保持室温28℃，制曲至22小时进行第一次翻曲，28小时进行第二次翻曲，34小时后出曲，出曲后洗曲,闷12小时入罐，置于28℃恒温室中保温发酵30天以上。取出晾干即得曲菌型-木耳多糖300kDa透过液豆豉发酵物。
实施例7：
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1：3的质量比混合后在水中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
三、每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L，所述复合液由木耳多糖300kDa截留液和枯草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。
实施例8：
治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到木耳多糖300kDa透过液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3比例在水中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
三、每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L，所述复合液由木耳多糖300kDa透过液和枯草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa透过液豆豉发酵物。
实验一：本发明口服组合物对脂溢性小鼠脱发的抑制实验
1、实验材料
丙酸睾酮注射液25mg/1ml，购自宁波第二激素厂，生产批号：11025
色拉油90ml/瓶，金龙鱼有限公司
成年雄性B6CBAF1/J小鼠，体重18-22g，清洁级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司【许可证号：SCXK(京)2017-0011】，室温23℃，湿度50-60％，每天通风2次，每次持续1小时，按照小鼠的自然生活模式，使B6CBAF1/J小鼠自由进行自由活动、饮水和进食。
2、实验方法
2.1实验分组
100只雄性小鼠中随机选出10只B6CBAF1/J小鼠作为实验空白对照组，其余90只B6CBAF1/J小鼠作为实验小鼠，分笼饲养。即脱发模型组、口服组合物实施例1-8组。
2.2动物模型制备和给药方法
脱发动物模型采用注射给药造模方式，注射部位为小鼠背部平行于脊柱区皮下，除空白对照组给予注射生理盐水外，其余9组给予注射丙酸睾酮，注射剂量为5mg/kg·d，注射时间为4周。
在B6CBAF1/J小鼠脱发动物模型成功造模第4周时，开始给予药物治疗，除空白组外，脱发模型组均灌胃给予各实施例组合物，给药治疗6周。观察小鼠脱毛部位小鼠的毛发生长状况，统计小鼠脱毛重量；并结合病理学观察，与模型组相比，显微镜下终毛/毳毛的比值，计算出平均数。
3.数据统计分析
采用SPSS 20.0软件进行数据处理，组间差异采用单因素方差分析，p＜0.05显著性差异，认为具有统计学意义。
4实验结果
(1)脱毛重量测定
由表1可知：与空白对照组相比，其他各实验小鼠均发生不同程度的脱毛现象，除实施例3、5、7存在显著性差异外(p<0.05)，其余各组均存在极显著性差异(p<0.01)；与模型组相比，实施例3、5、7组小鼠脱毛现象均有所改善(p<0.01)，其他各实施例组均没有显著差异，对脱发没有改善趋势。
(2)小鼠终毛/毫毛比例测定
由表2可知，与空白对照组相比，模型组的终毛/毫毛的比例显著下降(p<0.01)；与模型组相比，实施例3、5、7能明显提高终毛/毫毛的比例(p<0.01)，其他实验例终毛/毫毛比例没有改变。
(3)本发明口服组合物实施例3、5、7对脂溢性脱发有明显改善作用，表明大豆经菌种发酵后，可发挥明显的固发作用。
表1小鼠脱毛重量测定结果
Figure GDA0002628901100000101
**与空白对照组相比p<0.01；△△与模型组相比p<0.01。
表2小鼠终毛/毫毛比例测定结果
Figure GDA0002628901100000102
**与空白对照组相比p<0.01；△△与模型组相比p<0.01。
实验二：口服组合物对毛发生长期小鼠毛囊数目的影响
1、实验材料
松香购自于(深圳市吉田化工有限公司)；石蜡购自于(奥伟胶业蜡制品)；成年雌性C57BL/6小鼠，体重18-22g，清洁级，选择皮色粉红，毛发属于休止期的小鼠。购自北京维通利华实验动物技术有限公司【许可证号：SCXK(京)2017-0149】，室温23℃，湿度50-60％，每天通风2次，每次持续1小时，按照小鼠的自然生活模式，进行自由活动、饮水和进食。
2、实验方法
2.1实验分组
90只雌性C57BL/6小鼠随机分为9组，空白对照组，口服组合物实施例1-8组，分笼饲养。
2.2动物模型制备和给药方法
将松香与石蜡1:1混合加热融化后，均匀涂于小鼠背部，涂抹面积约2cm×3cm，冷却凝固后揭去，以去除背毛(确认毛发生长期处于休止期)。脱毛次日，除空白组灌胃给予蒸馏水外，其他各组分别灌胃给药，每天定时给药1次，灌胃体积为2ml/100g，连续给药20天。第20天时，取各组小鼠背部相同位置皮肤组织块，用10％福尔马林固定，石蜡包埋切片，切片厚约4-5微米，HE染色，高倍视野(×400)的毛囊数，取其均值，并进行统计学处理。
3.数据统计分析
采用SPSS 20.0软件进行数据处理，组间差异采用单因素方差分析，p＜0.05显著性差异，具有统计学意义。
4实验结果
(1)毛囊密度的影响
实验第20天，各组小鼠毛囊数目见表3。与空白对照组相比，实施例3、5、7可增加空白小鼠的毛囊数目(p<0.01)，其他各组实施例对C57BL/6小鼠的毛囊数目没有影响(p>0.05)；提示大豆发酵物其可诱导C57BL/6小鼠毛囊进入生长期，延长生长期时间，并推迟进入退行期，具有促进毛囊生长的作用。
表3小鼠脱毛重量测定结果
Figure GDA0002628901100000111
Figure GDA0002628901100000121
*与空白对照组相比p<0.05，**与空白对照组相比P<0.01。

Claims (6)

1.治疗脱发组合物的制备方法，其特征在于治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比混合后于30℃下浸泡3h，至含水量45％-55％，煮熟，将熟料冷却至30℃-40℃，然后将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和曲霉接种液按1:3的质量比接种，保持室温28℃，制曲至20-24小时进行第一次翻曲，28小时进行第二次翻曲，34小时后出曲，出曲后洗曲,闷12小时入罐，置于28℃恒温室中保温发酵30天以上，取出晾干，即得曲菌型-木耳多糖300kDa截留液豉发酵物。
2.根据权利要求1所述治疗脱发组合物的制备方法，其特征在于步骤二中至至含水量50％。
3.根据权利要求1所述治疗脱发组合物的制备方法，其特征在于步骤二中将熟料冷却至35℃。
4.根据权利要求1所述治疗脱发组合物的制备方法，其特征在于步骤二中制曲至22小时进行第一次翻曲。
5.治疗脱发组合物的制备方法，其特征在于治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量300kDa的木耳多糖截留液；
二、将毛霉菌种加入无菌生理盐水，用移液器吸取菌液，接种于麸皮培养基，20℃下培养96h，至三角瓶内麸皮长满菌丝和灰色孢子后取出备用，在培养好的种曲培养瓶中加入500mL灭菌生理盐水充分摇匀，双层纱布过滤，滤渣再加500mL灭菌生理盐水洗涤一次过滤，两次滤液混合制成孢子悬液，将此孢子悬浮液置于4℃冰箱中；
三、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1:3的体积比混合后于30℃下浸泡3h，沥干，在高温高压灭菌锅下，于121℃蒸煮30min，冷却，
四、混合接种：将分子截留量300kDa的木耳多糖截留液和孢子悬液按1:3质量比接种，在25℃的温度下培养48h，然后经后熟处理48h，制得毛霉菌型-木耳多糖30000Da豆豉发酵物。
6.治疗脱发组合物的制备方法，其特征在于治疗脱发组合物的制备方法按照以下步骤进行：
一、膜分离木耳多糖:
将黑木耳洗净、除杂、粉碎后过40目筛，制成黑木耳干粉，按照黑木耳干粉与蒸馏水质量比为140:1的比例将黑木耳干粉加入到蒸馏水中，然后在超声功率为500w的条件下超声15min，水浴浸提3h，之后将提取液以4500r/min离心10min，除渣，然后将提取液配制成浓度为4g/L、pH值5.6的料液，然后在温度为40℃、压力为0.17bar的条件下超滤，得到分子截留量30000Da的木耳多糖截留液；
二、选取颗粒饱满，大小均匀的黄豆，称量洗净，与水以1：3的体积比混合后在水中浸泡10-18小时，于120℃灭菌，得到发酵基质；
三、每250g发酵基质接种复合液至复合液在混合液中的浓度为2mol/L，所述复合液由木耳多糖300kDa截留液和枯草芽孢杆菌接种液按照1:3质量比混合，摇匀，于4-8℃培养72-120小时，得到枯草芽孢杆菌-木耳多糖300kDa截留液豆豉发酵物。
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