KR102137252B1

KR102137252B1 - 락토바실러스 플란타넘 j2k- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물 및 그 제조 방법, 그 혼합 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102137252B1
Application number: KR1020200049088A
Authority: KR
Inventors: 이재섭; 오경식; 장준환; 한희상; 김정원; 최다예; 전경희; 홍승령
Original assignee: 주식회사 제이투케이바이오; 한국콜마주식회사; 에이치케이이노엔 주식회사
Priority date: 2020-04-23
Filing date: 2020-04-23
Publication date: 2020-07-24

Abstract

본 발명은 석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리의 혼합 추출물에 락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 배양액을 첨가, 배양하여 수득한 혼합발효 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명은 혼합 발효 추출물을 유효성분으로 하며 항산화 효과, TGF-β2, IL-6 등이 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물 및 그 제조 방법, 그 혼합 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물{fermented extract for preventing stress alopecia using Lactobacillus plantarum J2K-27, and manufacturing method of it, and cosmetic composition containing fermented extract}

본 발명은 석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리를 혼합하여 추출하고, 락토바실러스 플란타넘 J2K-27을 이용해 발효한 혼합발효추출물의 제조방법 및 이를 함유하는 스트레스성 탈모방지 화장료 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로는 석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리를 혼합하여 추출하는 공정, 혼합추출물을 락토바실러스 플란타넘 J2K-27을 이용하여 접종하고 배양하는 공정 등을 포함하는 혼합발효추출물을 제조하는 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 스트레스성 탈모방지 화장료 조성물에 관한 것이다.

모발의 주기 또는 헤어 사이클(hair cycle)은 모발이 성장하는 성장기 단계, 성장을 멈추고 모구가 축소하는 시기인 퇴행기 단계, 모유두가 활동을 시작하거나 또는 새로운 모발을 발생시켜 오래된 모발을 탈모시키는 시기인 휴지기와 발생기 단계로 나눌 수 있다. 모발의 성장기는 남성이 3～5 년, 여성이 4～6 년 정도이다. 퇴행기는 2～3 주 정도 ,휴지기는 3～4 개월 정도 지나 자연적으로 탈모가 된다. 그리고휴지기단계의 마지막이 되면 새로운 모발이 생성되는 발생기단계가 시작 된다. 만약 모발의 성장 주기가 모두 같게 된다면 동물에서 흔히 볼 수 있는 털갈이와 같이 모발이 한꺼번에 빠지는 현상이 일어날 수 있는데, 실제로 인간도 모발이 스트레스를 받게 되는 경우 이와 같은 현상이 일어날 수 있다.

모발의 탈모 현상에 모발의 탈모 현상에 대해 아직 정확한 기전이 밝혀져 있지는 않으나, 호르몬의 불균형에 의해 발생한다는 호르몬설, 급격한 정신적 고통 때문이라는 스트레스설, 모발의 외부 오염으로 발생한다는 외부 오염설등이 있다. 대부분의 탈모 질환은 매우 복잡하고 다양한 요인에 의해 발생하지만, 그 중에서도 스트레스는 필수적인 요소가 된다고 할 수 있다. 만병의 근원으로 알려진 스트레스는 직접 또는 간접적으로 모발에 많은 영향을 줄 수 있는데, 그 중에는 발열 질환을 앓거나 수술을 받은 후, 만성 질환을 갖고 있는 경우와 같은 생리적인 스트레스로부터 우리가 흔히 말하는 정신적인 스트레스까지 다양하다. 스트레스에 의해 발생된 탈모는 주로 미만성으로 머리카락이 빠지는게 되는데, 이는 모발이 스트레스에 의해서 한참 자라야 할 시기에 자라지 못하고 바로 퇴화되어 빠져버리는 휴지기성 탈모가 주종을 이루기 때문이다.

탈모 치료제는 모발의 생성 또는 성장을 촉진시키는 약물로 정의되는데, 모발의 생성을 촉진시키는 약물을 발모제, 모발의 성장을 촉진시키는 약물을 양모제라고 한다. 발모제 중 남성호르몬 억제제, 두피 혈관확장제는 남성형 탈모 치료에 사용되며, 스테로이드제는 원형탈모 치료에 사용된다. 양모제는 영양 공급제로서 아미노산이나 비타민 B군 등이 해당된다. 종류에 따라 다양한 다양한 외용제가 사용되고 있는데, 미국 FDA의 공인을 받은 미녹시딜(Minoxidil)은 안드로겐성 탈모증 치료에 사용된다. 나이가 젊고, 탈모된 기간이 짧은 경우, 탈모 부위가 적은 경우에 더 효과적이다. 하지만, 매일 2회씩 지속적으로 발라야 하고, 약제가 두피에 머무르도록 해야만 어느 정도 효과가 나타나는 등 불편할 뿐 아니라, 그에 상응하는 효과면에서도 미미하고, 가려움증, 자극 등의 부작용이 나타나는 실정이다. 또한 FDA의 공인을 받은 내복약인 피나스테라이드(finasteride)는 탈모를 유발하는 남성 호르몬인 DHT(5-dihydrotestosterone) 생성 억제 작용을 갖고 있으며,일반적으로 3개월 이상 복용해야 치료 효과가 나타나며, 치료 효과 유지를 위해 지속적으로 복용해야 한다. 복용을 중단하면 12개월 내에 원상태로 돌아가는 문제점이 있다. 또한 미녹시딜과 피나스테라이드 모두 기형아 출산 위험이 있기 때문에 여성 특히 임부, 수유부의 접촉을 금기시하고 있는 실정이다.

한편, 식품으로 섭취되어 안전성이 확보되어 있는 생약성분의 혼합 추출물을 이용하여 두피에 적용하고자 하는 연구가 이루어지고 있다.

탈모 방지에 관한 기술로, "탈모방지용 석류추출물 및 상기 석류추출물을 포함하는 탈모방지용 화장료 조성물"(한국 등록특허공보 제10-0451885호, 특허문헌 1)에는 석류를 물이나 에탄올 등의 용제로 추출하여 5알파-리덕타아제 억제활성을 갖도록 하는 기술이 공개되어 있다.

또, "탈모 및 새치 방지용 천연 조성물 및 이의 제조방법"(한국 공개특허공보 제10-2013-0075207호, 특허문헌 2)에는 헛개나무, 백하수오 뿌리, 구기자 추출물을 탈모 및 새치 방지용으로 활용하는 기술이 공개되어 있기도 하다.

한편, 미생물 발효를 이용하여 탈모 방지 효과를 얻기 위한 노력으로 "탈모 개선용 조성물 및 이에 의해 제조된 탈모 개선용 조성물"(한국 등록특허공보 제10-1600012호, 특허문헌 3)에는 줄풀, 맥아를 락토바실러스 플란타럼과 같은 유용 미생물을 활용하여 발효시킨 후, 여기에 어성초, 적하수오 등의 원료를 첨가한 후 발효시키는 공정이 공개되어 있다.

그러나, 특정 식물의 추출물, 이에 적용되는 특정 균주의 접종 및 발효를 통해 스트레스성 탈모 유발 유전자의 발현에 관한 연구는 아직도 부족한 실정이다.

KR 10-0451885 (2004.09.24) KR 10-2013-0075207 (2013.07.05) KR 10-1600012 (2016.02.26)

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하고자 연구 개발된 것으로 탈모를 방지하고 발모를 촉진하며 구체적으로는 탈모의 원인이 되는 스트레스성 탈모에 효과가 있는 혼합발효추출물의 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 플란타넘(Lactobacillus plantarum) J2K-27(기탁번호: KCTC 13696BP)로 발효한 혼합발효 추출물의 제조방법을 제공함으로서 화장품 원료로서 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 상기한 과제를 해결하기 위하여, 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물의 제조 방법에 있어서, 석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리를 혼합 및 추출하여 혼합추출물을 수득하고, 상기 혼합추출물에 기탁번호 KCTC 13696BP의 락토바실러스 플란타넘 J2K- 27을 접종하여 발효시킨 후, 침전물과 유산균체를 제거하여 혼합 발효 추출물을 제조하는 것을 특징으로 한다.

상기한 구성에서, 상기 혼합추출물 제조를 위한 원료는, 석류나무 100 중량부를 기준으로, 하와이 무궁화 꽃 50 ~ 150 중량부, 라즈베리케톤 50 ~ 150 중량부, 헛개나무 열매 400 ~ 600 중량부, 구기자 400 ~ 600 중량부, 백하수오 뿌리 400 ~ 600 중량부가 혼합되어 구성된 것을 특징으로 한다.

또, 상기 혼합추출물은 추출물 원료에 정제수를 혼합한 다음 85 ~ 95℃의 온도로 2 ~4시간 동안 추출하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물은 상기 제조 방법에 의해 제조된 것을 특징으로 한다.

또, 본 발명의 스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물은, 상기 혼합 발효 추출물이 화장료 조성물 전체 함량에 대해 0.001 ~ 10 중량% 함유되어 있는 것을 특징으로 한다.

더하여, 상기 화장료 조성물은, 수산기를 2개 이상 포함하고 있는 용매, 세라마이드, 콜레스테롤, 지방산을 포함하는 지질농축부와; 토코페롤 및 그 유도체, 코엔자임 큐10, 비타민 C 친유성 유도체들, 올레아놀릭산(oleanolic acid), 레티놀(retinol) 및 그 유도체, 우르솔릭산(ursolic acid), 디아세틸볼딘(diacetyl boldine) 및 친유성 감초로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 생리활성물질인 친유성 생리활성물질과, 에몰리언트 오일을 포함하는 친유성 활성물질부와; 물을 포함하는 수상부;를 더 포함하여 구성된 나노 농축 캡슐로 이루어진 것을 특징으로 한다.

또, 상기 캡슐 입자 크기는 80 ~ 150nm인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 용매는 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린, 1,2-펜탄디올, D-판테놀, 디프로필렌글리콜 및 디글리세린로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 용매인 것을 특징으로 한다

더불어, 상기 에몰리언트 오일은, 비극성 오일로 스쿠알란 또는 극성 오일로 글리세릴 트리옥타노에이트, 옥틸도데실미리스테이트, 이소스테아릴이소스테아레이트, 디카프릴카보네이트, 카프릭/카프릴릭 트리글리세라이드, 이소프로필팔미테이트, 이소프로필미리스테이트 및 옥틸팔미테이트로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 극성 오일을 사용하는 것을 특징으로 한다.

아울러, 상기 지질농축부는 수산기를 2개 이상 포함하고 있는 용매 40 ~ 50 중량%, 세라마이드 1.0 ~ 2.0 중량%, 콜레스테롤 0.5 ~ 1.5 중량%, 지방산 6 ~ 8 중량%로 구성되고, 상기 친유성 활성물질부는 30 ~ 33 중량%로 구성되는 것을 특징으로 한다.

상기에서 살펴본 바와 같이 본 발명의 락토바실러스 플란타넘 J2K-27(기탁번호: KCTC 13696BP)을 이용해 발효한 혼합발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항산화, 스트레스성 탈모방지 효과를 갖는 피부 유사 지질막 복합 구조체를 함유함으로써 스트레스성 탈모방지 효과를 발휘한다.

도 1은 본 발명의 실험예 1의 결과를 나타낸 그래프.
도 2 및 도 3은 본 발명의 실험예 3의 결과를 나타낸 그래프.
도 4는 실험예 4에서 시간별 경피 투과량을 나타낸 그래프.
도 5는 실험예 5에서 지속적인 경피 투과량을 나타낸 그래프.
도 6은 본 발명에 쓰인 락토바실러스 플란타넘(Lactobacillus plantarum) J2K-27(기탁번호: KCTC 13696BP)의 동정결과 16S rRNA 서열 도이다.
도 7은 본 발명의 균주 기탁을 입증하는 기탁증.
도 8은 본 발명에서 혼합 발효 추출물의 제조 방법을 나타낸 공정도.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해서 본 발명자는 석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리 등을 혼합하여 추출물을 처리했을 때 보다 락토바실러스 플란타넘 J2K-27(기탁번호: KCTC 13696BP)으로 배양한 혼합발효 추출물이 더욱 효과가 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물의 제조 방법은 도 8에 나타나 있는 바와 같이 원료를 혼합추출한 다음, 멸균시키고, 이어 미생물을 이용하여 배양 발효시킨 다음, 원심분리 및 감압 농축 단계를 거쳐 진공 건조함으로써 제조된다.

보다 구체적으로, 원료로는 석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리를 사용하며, 이들을 개별 추출 후 추출물을 혼합하거나, 혼합한 다음 추출하여 혼합추출물을 수득할 수 있다.

이때, 바람직하기로는 원료의 혼합 후 추출함이 바람직하다.

원료의 함량비는 석류나무 1~10 질량비, 하와이 무궁화 꽃 0.1~10 질량비, 라즈베리케톤 0.1~10 질량비, 헛개나무 열매 1~50 질량비, 구기자 1~50 질량비, 백하수오 뿌리 1~50 질량비로 구성될 수 있다.

보다 구체적으로는 석류나무 100 중량부를 기준으로, 하와이 무궁화 꽃 50 ~ 150 중량부, 라즈베리케톤 50 ~ 150 중량부, 헛개나무 열매 400 ~ 600 중량부, 구기자 400 ~ 600 중량부, 백하수오 뿌리 400 ~ 600 중량부가 혼합되어 구성될 수 있다.

추출 방식은 열수 추출, 증류 추출, 에탄올 추출, 초음파 추출 등 다양한 방식이 적용 가능하나, 80~100℃의 정제수를 사용하여 1~6시간 추출하는 것이 적절하다.

보다 바람직하기로는 85 ~ 95℃의 온도로 2 ~4시간 동안 추출하는 것이 좋다.

더불어, 추출에 의해 혼합추출물이 제조되면, 이를 냉각 및 여과시키고, 120℃ 내외의 온도에서 10 ~ 20분간 멸균 처리한다.

혼합추출물의 준비와 더불어, 기탁번호 KCTC 13696BP의 락토바실러스 플란타넘 J2K- 27을 접종하여 배양 및 발효시킨다.

도 6, 7에는 락토바실러스 플란타넘 J2K-27의 염기서열 및 기탁증이 제시되어 있다.

배양 및 발효 조건은 온도 25 ~ 37℃가 적정하고, 배양 기간은 3일 내지 5일 정도가 적절하다.

배양 및 발효에 의해 발효액이 수득되면 이를 원심분리기에 투입하여 8,000 ~ 1,2000 rpm의 조건으로 15 ~ 25분 동안 원심분리하여 침전물과 유산균체가 제거된 혼합 발효 추출물을 수득한다.

그런 다음 혼합 발효 추출물을 감압 농축 및 진공 건조 처리해준다.

한편, 상기와 같이 제조된 혼합 발효 추출물은 화장료 조성물 원료로 포함되는데, 적절한 함량은 화장료 조성물 전체 함량에 대해 0.001 ~ 10 중량% 함유되는 것이 좋다.

아울러, 화장료 조성물은 다양한 방식으로 구성될 수도 있으나, 과량의 친유성 생리활성물질을 함유한 나노 농축 캡슐로 구성됨이 바람직하다.

이를 위한 구체적인 구성으로, 상기 화장료 조성물은,

수산기를 2개 이상 포함하고 있는 용매, 세라마이드, 콜레스테롤, 지방산을 포함하는 지질농축부와;

토코페롤 및 그 유도체, 코엔자임 큐10, 비타민 C 친유성 유도체들, 올레아놀릭산(oleanolic acid), 레티놀(retinol) 및 그 유도체, 우르솔릭산(ursolic acid), 디아세틸볼딘(diacetyl boldine) 및 친유성 감초로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 생리활성물질인 친유성 생리활성물질과, 에몰리언트 오일을 포함하는 친유성 활성물질부와;

물을 포함하는 수상부;를 더 포함하여 구성된 나노 농축 캡슐로 구성될 수 있다.

상기한 구성에서 상기 캡슐 입자 크기는 80 ~ 150nm인 것이 바람직하다.

또, 상기 용매는 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린, 1,2-펜탄디올, D-판테놀, 디프로필렌글리콜 및 디글리세린로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 용매로 이루어질 수 있다.

또, 상기 에몰리언트 오일은, 비극성 오일로 스쿠알란 또는 극성 오일로 글리세릴 트리옥타노에이트, 옥틸도데실미리스테이트, 이소스테아릴이소스테아레이트, 디카프릴카보네이트, 카프릭/카프릴릭 트리글리세라이드, 이소프로필팔미테이트, 이소프로필미리스테이트 및 옥틸팔미테이트로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 극성 오일을 사용하는 것이 바람직하다.

더하여, 상기 지질농축부는 수산기를 2개 이상 포함하고 있는 용매 40 ~ 50 중량%, 세라마이드 1.0 ~ 2.0 중량%, 콜레스테롤 0.5 ~ 1.5 중량%, 지방산 6 ~ 8 중량%로 구성되고, 상기 친유성 활성물질부는 30 ~ 33 중량%로 구성되는 것이 바람직하다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1: 혼합 발효 추출물의 제조

석류나무 10g, 하와이 무궁화 꽃 10g, 라즈베리케톤 10g, 헛개나무 열매 50g, 구기자 50g, 백하수오 뿌리 50g을 추출 용기에 넣고 정제수 1080g을 혼합한 다음 90℃에서 3시간 동안 추출하여 혼합추출물을 제조하고 냉각하여 여과하였다.

그런 다음 배양을 위해 혼합추출물을 121℃에서 15분간 멸균하였다.

멸균이 끝난 혼합추출물에 락토바실러스 플란타넘 J2K-27을 접종하여 온도 35℃, 정치배양 조건으로 3일간 배양 발효시켜 발효액을 제조하였다.

이어 상기 발효액을 10,000 rpm에서 20분간 원심분리하여 침전물과 유산균체가 제거된 혼합 발효 추출물을 얻었다.

이를 감압농축 및 진공건조하여 분말을 얻었다.

비교예 1: 혼합 추출물의 제조

석류나무 10g, 하와이 무궁화 꽃 10g, 라즈베리케톤 10g, 헛개나무 열매 50g, 구기자 50g, 백하수오 뿌리 50g을 넣고 정제수 1080g을 혼합한 추출물을 90℃에서 3시간 추출하고 냉각하여 여과하였다. 상기 추출물을 감압농축 및 진공건조하여 분말을 얻었다.

실험예 1： 전자 공여능 측정

실시예1과 비교예 1의 항산화 효과를 측정하기 위하여 1,1 - diphenyl - 2 - picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼을 이용하여 측정하였다. 시료 100μg을 증류수 1mL에 녹여 0.2 mM DPPH 용액(in Ethyl alcohol) 1mL를 가하여 총 2mL의 시약을 10초간 혼합 후 상온에서 30분간 반응 하였다. 이후 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 아래의 수학식 1을 이용하여 계산하였다. 결과를 표 1 과 그림 1 에 나타내었다.

시험군	실험농도 (ppm)	DPPH radical scavenging activity (%)	Stdev.
Blank	-	0	0
혼합추출물 (ppm)	100	14.3851	2.38
	250	25.3968	2.50
	500	39.9952	1.88
혼합발효추출물 (ppm)	100	20.1862	6.18
	250	35.6512	2.83
	500	55.9952	3.28

표 1 및 도 1에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 비교예 1 모두 항산화 효과가 나타났으나, 실시예1 에서 보다 더 우수한 효과가 나타남을 확인하였다.

실험예 2：세포배양

HHGMC (Human Hair Germinal Matrix Cell:모모세포) 세포를 사용하였으며, 5% 소태아혈청 (Fetal Bovine Serum, FBS), 1% 페니실린/스트립토마이신 솔루션 (penicillin/streptomycin solution, S/P), 1% 중간엽줄기세포 성장 공급원 (mesenchymal stem cell growth supplement, MSCGS)을 함유한 MSCM (Mesenchymal Stem Cell Medium)배지를 이용하여 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.

실험예 3 : 혼합추출물 및 혼합발효추출물 스트레스성 탈모 유발 유전자 TGF-β2, IL-6 발현량 조사

스트레스성 탈모 완화 효능을 평가하기 위해 5% 소혈청이 함유된 MSCM배지와 모모세포 (Human Hair Germinal Matrix Cell, HHGMC, ScienCell)를 2.5X105 cells/well로 2㎖씩 접종하여 24시간 배양 후 각 well을 serum free 배지로 교체한다. 배지 교체 후 스트레스 발생시 분비되는 Substance P acetate salt hydrate(Sigma aldrich, S6883)와 시료를 처리 한 뒤 24시간 동안 배양 하였다. PBS를 이용하여 washing 후 세포를 NucleoZOL lysis buffer(NM, 740404)를 500 μL씩 처리하여 MN에서 제공하는 protocol을 이용하여 RNA isolation을 진행 하였으며 분리된 RNA를 microplate reader를 이용하여 정량한 뒤 HiSenScript™ RH(-) RT PreMix Kit(intron, 25087)을 이용하여 cDNA를 합성하였다. Real-time PCR Kit (2x qPCRBIO SyGreen Blue mix Lo-ROX, PCRBIOSYSTEMS, London, UK)를 이용하여 유전자를 증폭한 후 증폭산물을 정량 분석하였다. PCR에 사용된 TGF-β2, IL-6, β-actin primer는 바이오니아(Korea)에서 합성하여 사용하였으며 primer sequence는 [표2]에 나타내었다.

Primers

Primer	Sense	Antisense
TGF-β2	5'-CAC CAT AAA GAC AGG AAC CTG-3'	5'-GGA GGT GCC ATC AAT ACC TGC-3'
IL-6	5'-CCA GGA GCC CAG CTA TGA AC-3'	5'-CCC AGG GAG AAG GCA ACT G-3'
β-actin	5'-GGC ACC CAG CAC AAT GAA G-3'	5'-CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG-3'

PCR 증폭 조건은 TGF-β2, IL-6, β-actin 모두 95℃에서 5초, 60℃에서 25초, 40 사이클이다. Control은 용해 용매로 사용된 정제수를 처리한 것을 사용하였으며, 양성대조군으로 사용된 Minoxidil은 모근강화 및 모발성장을 유도하고 탈모를 억제하는 물질로 알려져 있다.

발현양의 결과를 표 3, 4와 그림 2, 3에 나타내었다.

시험군		실험농도 (ppm)	TGF-β2 mRNA expression rate (%)	Stdev.
비조사군 (Control)			64.66	5.16
Substnace P (ppm)		0.1	100.00	0.00
Substnace P (ppm)	Minoxidil	1	54.55	2.97
	혼합추출물 (ppm)	100	79.11	1.14
		250	75.65	3.50
		500	73.11	4.12
	혼합발효추출물 (ppm)	100	67.24	1.59
		250	64.98	5.73
		500	60.93	4.99

시험군		실험농도 (μg/ml)	IL-6 mRNA expression rate (%)	Stdev.
비조사군 (Control)			46.41	2.31
Substnace P (ppm)		0.1	100.00	0.00
Substnace P (ppm)	Minoxidil	1	44.52	2.38
	혼합추출물 (ppm)	100	61.75	2.38
		250	47.91	2.50
		500	31.87	1.88
	혼합발효추출물 (ppm)	100	48.75	6.18
		250	33.19	2.83
		500	18.84	3.28

표 3, 4 및 도 2, 3에 나타난 바와 같이 스트레스성 탈모 조건에서 혼합추출물 및 혼합발효추출물은 모발의 퇴행에 관여하는 TGF-β2의 발현을 농도 의존적으로 저해시켰다. 모발연장을 억제하는 사이토카인 IL-6의 발현도 혼합추출물 및 혼합발효추출물은 농도 의존적으로 감소 시켜 스트레스로 인해 발생하는 탈모를 완화 시키는 효능이 있음을 확인 하였다.

실시예 2 : 혼합발효 추출물을 포함하는 나노 농축 에멀젼 캡슐 제조

실시예 1을 화장료에 적용하기 위해서 농축 에멀젼 캡슐을 제조하였다.

표 5에 기재된 바의 수상부(정제수 등)를 투입하고 나머지 원료를 넣어 호모믹서로 1000~2000rpm, 5분간 교반하면서 유화시켰다.

이후 고압형 유화기에 투입하여 600~1500 bar의 압력으로 1~2회 처리하여 나노 캡슐입자를 형성하고 30~40℃로 냉각하여 나노(100nm) 사이즈를 갖는 에멀젼 캡슐을 형성시켰다.

성분 (중량 %)	실시예 2
Glycerin	45
Tocopheryl acetate	30.0
Water(정제수)	11.9
Hydrogenated Lecithin	7.0
Caprylic/Capric triglyceride	1.5
Ceramide NP	1.5
Cholesterol	1.0
실시예 1	2.0
나이아신아마이드	0.1

실험예 4 : 경피 투과율

프란츠 디퓨젼 셀(Franz diffusion cell, 유효면적: 0.785 ㎠, 수용칸의 부피: 5 ml)을 사용하여 싱크 조건(sink condition)하에서, 상기 표 5에서 수득한 피부유사 지질막 복합 구조체를 함유한 화장료의 경피 흡수율을 측정하였다. 피부의 흡수도와 유사하게 만든 케미칼 멤브레인(1.5 cm x 1.5 cm)을 수용칸(receptor chamber) 위에 위치시키고, 공여칸(donor chamber)을 덮어 클램프로 고정시킨 후, 수용상을 프란츠 디퓨젼 셀에 채우고 32±1 ℃로 유지시켰다.

표5에서 수득한 피부유사지질막 복합 구조체의 경우, 수용상으로 pH 7.4의 인산 완충 식염수(Phosphate buffered saline, PBS)를 사용하였다.

이어서, 각 화장료 조성물을 각각 0.3 g씩 일정하게 공여 부위에 도포하였다. 도포하고 30 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 24 시간이 경과한 후, 수용상 5 ml를 채취하여 HPLC로 분석하였다.

HPLC	Waters 2985e / 2998 UVD
column	Capcellpak c18 MG II , 250mm X 4.6mm, 5um
Eluent	MeOH :Water (10:90)
Flow rate	1 ml / min
Oven temp	35 ℃
Injection volume	10 ul
UV	259nm

도 4는 물질의 경피 투과량을 시간별로 나타낸 그래프이며, 도 5는 지속적인 경피투과량을 나타낸 그래프이다.

한국생명공학연구원

KCTC13696BP

20181031

<110> J2KBIO CO., LTD. <120> fermented extract for preventing stress alopecia using Lactobacillus plantarum J2K-27, and manufacturing method of it, and cosmetic composition containing fermented extract <130> J2K-27 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1135 <212> RNA <213> Lactobacillus plantarum <400> 1 tgcccaactt aatgctggca actgataata agagttgcgc tcgtgcggga cttaacccaa 60 catctcacga cacgagctga cgacnccatg caccacctgt atccatgtcc ccgaagagaa 120 cgtctaatct cttagatttg catagtatgt caagacctgg taagggtctt cgcgtagctt 180 cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcag 240 ccttgcggcc gtactcccca ggcggaatgc ttaatgcgtt agctgcagca ctgaaagagc 300 ggaaaccctc caacacttag cattcatcgt ttacggtatg gactaccagg gtatctaatc 360 ctgtttgcta cccatacttt cgagcctcag cgtcagttac agaccagaca gccgccttcg 420 ccactggtgt tcttccatat atctacgcat ttcaccgcta cacatggagt tccactgtcc 480 tcttctgcac tcaagtttcc cagtttccga tgcacttctt cggttgagcc gaaggctttc 540 acatcagact taaaaaaccg cctgcgctcg ctttacgccc aataaatccg gacaacgctt 600 gccacctacg tattaccgcg gctgctggca cgtagttagc cgtggctttc tggttaaata 660 ccgtcaatac ctgaacagtt actctcagat atgttcttct ttaacaacag agttttacga 720 gccgaaaccc ttcttcactc acgcggcgtt gctccatcag actttcgtcc attgtggaag 780 attccctact gctgcctccc gtaggagttt gggccgtgtc tcagtcccaa tgtggccgat 840 taccctctca ggtcggctac gtatcattgc catggtgagc cgttacccca ccatctagct 900 aatacgccgc gggaccatcc aaaagtgata gccgaagcca tctttcaaac tcggaccatg 960 cggtccaagt tgttatgcgg tattagcatc tgtttccagg tgttatcccc cgcttctggg 1020 caggtttccc acgtgttact caccagttcg ccactcactc aaatgtaaat catgatgcaa 1080 gcaccaatca ataccagagt tcgttcgact tgcatgtata gcnngcnnca cntnn 1135 <210> 2 <211> 1150 <212> RNA <213> Lactobacillus plantarum <400> 2 ntaccgggag gcagcagtag ggaattcttc caccaattgg acgaaagtct gatggagcaa 60 cgccgcgtga gtgaagaagg gtttcggctc gtaaactctg ttgttaaaga agaacatatc 120 tgagagtaac tgttcaggta ttgacggtat ttaaccagaa agccacggct aactacgtgc 180 cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg atttattggg cgtaaagcga 240 gcgcaggcgg ttttttaagt ctgatgtgaa agccttcggc tcaaccgaag aagtgcatcg 300 gaaactggga aacttgagtg cagaagagga cagtggaact ccatgtgtag cggtgaaatg 360 cgtagatata tggaagaaca ccagtggcga aggcggctgt ctggtctgta actgacgctg 420 aggctcgaaa gtatgggtag caaacaggat tagataccct ggtagtccat accgtaaacg 480 atgaatgcta agtgttggag ggtttccgcc cttcagtgct gcagctaacg cattaagcat 540 tccgcctggg gagtacggcc gcaaggctga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca 600 agcggtggag catgtggttt aattcgaagc tacgcgaaga accttaccag gtcttgacat 660 actatgcaaa tctaagagat tagacgttcc cttcggggac atggatacag gtggtgcatg 720 gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta 780 ttatcagttg ccagcattaa gttgggcact ctggtgagac tgccggtgac aaaccggagg 840 aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca 900 atggatggta caacgagttg cgaactcgcg agagtaagct aatctcttaa agccattctc 960 agttcggatt gtaggctgca actcgcctac atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat 1020 cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatgaga 1080 gtttgtaaca cccaaagtcg gtggggtaac cttttaggaa ccagccgcct aaggtggacc 1140 anangnnnnn 1150

Claims

스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물의 제조 방법에 있어서,
석류나무, 하와이 무궁화 꽃, 라즈베리케톤, 헛개나무 열매, 구기자, 백하수오 뿌리를 혼합 및 추출하여 혼합추출물을 수득하고,
상기 혼합추출물에 기탁번호 KCTC 13696BP의 락토바실러스 플란타넘 J2K- 27을 접종하여 발효시킨 후, 침전물과 유산균체를 제거하여 혼합 발효 추출물을 제조하는 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물의 제조 방법.
제 1항에 있어서,
상기 혼합추출물 제조를 위한 원료는,
석류나무 100 중량부를 기준으로, 하와이 무궁화 꽃 50 ~ 150 중량부, 라즈베리케톤 50 ~ 150 중량부, 헛개나무 열매 400 ~ 600 중량부, 구기자 400 ~ 600 중량부, 백하수오 뿌리 400 ~ 600 중량부가 혼합되어 구성된 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물의 제조 방법.
제 2항에 있어서,
상기 혼합추출물은 추출물 원료에 정제수를 혼합한 다음 85 ~ 95℃의 온도로 2 ~4시간 동안 추출하는 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물의 제조 방법.
스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물에 있어서,
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항의 제조 방법에 의해 제조된 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 혼합 발효 추출물.
스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물에 있어서,
제 4항의 혼합 발효 추출물이 화장료 조성물 전체 함량에 대해 0.001 ~ 10 중량% 함유되어 있는 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물.
제 5항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
수산기를 2개 이상 포함하고 있는 용매, 세라마이드, 콜레스테롤, 지방산을 포함하는 지질농축부와;
토코페롤 및 그 유도체, 코엔자임 큐10, 비타민 C 친유성 유도체들, 올레아놀릭산(oleanolic acid), 레티놀(retinol) 및 그 유도체, 우르솔릭산(ursolic acid), 디아세틸볼딘(diacetyl boldine) 및 친유성 감초로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 생리활성물질인 친유성 생리활성물질과, 에몰리언트 오일을 포함하는 친유성 활성물질부와;
물을 포함하는 수상부;를 더 포함하여 구성된 나노 농축 캡슐로 이루어진 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물.
제 6항에 있어서,
상기 캡슐 입자 크기는 80 ~ 150nm인 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물.
제 6항에 있어서,
상기 용매는 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세린, 1,2-펜탄디올, D-판테놀, 디프로필렌글리콜 및 디글리세린로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 용매인 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물.
제 6항에 있어서,
상기 에몰리언트 오일은,
비극성 오일로 스쿠알란 또는 극성 오일로 글리세릴 트리옥타노에이트, 옥틸도데실미리스테이트, 이소스테아릴이소스테아레이트, 디카프릴카보네이트, 카프릭/카프릴릭 트리글리세라이드, 이소프로필팔미테이트, 이소프로필미리스테이트 및 옥틸팔미테이트로 이루어진 군에서 선택된 적어도 1 종 이상의 극성 오일을 사용하는 것을 특징으로 하는,
락토바실러스 플란타넘 J2K- 27 균주를 이용한 스트레스성 탈모방지용 화장료 조성물.