KR102239415B1 - 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물 - Google Patents

발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR102239415B1
KR102239415B1 KR1020190105186A KR20190105186A KR102239415B1 KR 102239415 B1 KR102239415 B1 KR 102239415B1 KR 1020190105186 A KR1020190105186 A KR 1020190105186A KR 20190105186 A KR20190105186 A KR 20190105186A KR 102239415 B1 KR102239415 B1 KR 102239415B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
fermented
composition
extract
samchil
skin
Prior art date
Application number
KR1020190105186A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20210025316A (ko
Inventor
경서연
유정진
여현주
강승현
박명삼
Original Assignee
코스맥스 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 코스맥스 주식회사 filed Critical 코스맥스 주식회사
Priority to KR1020190105186A priority Critical patent/KR102239415B1/ko
Priority to CN202010275128.4A priority patent/CN112438921B/zh
Publication of KR20210025316A publication Critical patent/KR20210025316A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102239415B1 publication Critical patent/KR102239415B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00—Food ingredients
    • A23V2250/20—Natural extracts
    • A23V2250/21—Plant extracts
    • A23V2250/2124—Ginseng
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Abstract

아스페르길루스 크리스타투스 (Aspergillus cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물 및 상기 추출물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 일 양상에 따른 피부미용 개선용 조성물에 의하면, 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 노화 억제 효능이 있으므로, 피부미용을 개선하는데 유용하다. 다른 양상에 따른 삼칠근의 추출물을 제조하는 방법에 의하면, 피부미용 개선 효과가 있는 발효 삼칠근의 추출물을 제조할 수 있으므로, 제조된 추출물을 화장품 및 식품 등 다양한 분야에 응용할 수 있다.

Description

발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물{Composition for improving skin beauty comprising extract of fermented roots of Panax notoginseng by Aspergillus cristatus strain}
발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물에 관한 것이다.
인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 된다. 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가하여, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부 트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.
일반적으로 노화된 피부에서 나타나는 주름살과 피부의 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등은 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산 및 당 단백질의 함유량과 배열이 변하거나 감소하기 때문이며, 특히 콜라겐은 피부의 장력과 강도를 조절하는 기능으로, 콜라겐의 감소는 피부노화 및 주름 생성과 매우 깊은 관계를 가지고 있다. 또한, 진피는 피부 내에서 피부의 강도와 형태를 지지하는 역할을 하고 있기 때문에 노화가 진행되면서 진피의 형태적인 변화가 일어나게 되면 주름 생성 및 피부 쳐짐에 결정적인 역할을 하게 된다. 따라서, 콜라겐 및 엘라스틴 등 진피 구성 성분들을 증가시키는 물질은 피부 주름 개선, 피부 노화 억제 또는 피부 탄력 증진에 유용하게 사용될 수 있다.
한편, 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus)는 중국의 후발효차(post fermented tea)인 푸주안 복전차(Fuzhuan brick tea)에 우점하고 있는 미생물로 금꽃과 같은 포자를 형성하기에 중국인들은 금화균(Golden flower Fungus)으로 부르기도 한다. 금화균(A. cristatus)은 발암성 곰팡이 독소를 생성하지 않는 안전한 균주로써 벽돌 차 생산에 오랜 기간 동안 사용해왔다. 또한 Yongyi Ge 등(2016)도 복전차에서 분리한 금화균(A. cristatus)에서 곰팡이 독소 유전자의 존재 및 발현이 관찰되지 않았다고 보고한 바 있다.
삼칠근은 두릅나무과에 속하는 삼칠(Panax notoginseng (Burk) F. H. Chen:三七)의 뿌리를 말한다. 삼칠은 혈분에 들어 지혈작용을 함으로써 어혈을 없애주어 각종 출혈 증상, 즉 토혈, 코피, 객혈, 대소변출혈 등에 쓰이며 타박골절상, 어혈로 인한 복통, 종기, 진통, 산후에 피를 많이 흘리는 증상에 사용된다. 약리작용은 혈액응고시간 단축, 항피로 효과, 혈압강하, 심장박동 이완, 관상동맥 혈류량 증가, 지질용해작용, 간 기능 증진, 면역기능 활성화 등이 보고되었다.
오랜 기간 사용되어 부작용이 적은 천연물에서 식품 또는 화장품 소재를 찾아 개발하고자 하는 연구가 진행되어 오고 있으나, 발효 삼칠근을 소재로 하는 연구는 미미한 실정이다.
한국 등록특허 제10-1419463호.
일 양상은 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부미용 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
다른 양상은 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부미용 개선용 식품 조성물을 제공한다.
또 다른 양상은 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시켜 발효 삼칠근을 제조하는 단계; 및 상기 발효 삼칠근을 C1-C6의 알콜, 물, 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 발효 삼칠근의 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
일 양상은 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부미용 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 피부미용 개선은 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 또는 피부 노화 억제일 수 있다.
용어, "피부 주름 개선" 또는 "피부 탄력 증진"이란 피부가 쳐지거나 늘어지는 정도를 완화시켜주는 것, 또는 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 의미할 수 있다.
용어, "개선"이란 상태의 완화 또는 치료와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미할 수 있다.
용어, "피부 노화 억제"란 노화를 야기하는 원인을 불문하고 피부의 노화를 억제 또는 지연시키는 것을 의미할 수 있다.
상기 "아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus)"는 누룩곰팡이의 일종으로서, 금꽃과 같은 포자를 형성하여 금화균(golden flower fungus)이라고도 한다. 상기 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus)는 식품, 토양, 바다 등에서 분리한 것일 수 있고, 이에 제한되지 않으나, 예를 들어 중국의 후발효차(post fermented tea)인 푸주안 복전차(Fuzhuan brick tea)로부터 분리한 것일 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물에서, 상기 균주는 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) GF8 균주 (수탁번호: KCCM12432P)일 수 있다. 아스페르길루스 크리스타투스 GF8 균주는 중국에서 제조된 복전차로부터 분리된 신규한 균주로서, 구체적으로 복전차를 NaCl 용액으로 희석하는 단계; 희석된 복전차를 클로람페니콜(chloramphenicol)이 첨가된 감자한천배지에서 배양하는 단계; 및 배지에서 금색의 콜로니를 형성하는 균주를 선별하는 단계;를 포함하는 방법에 의해 분리된 균주일 수 있다. 상기 NaCl 용액은 0.50%(w/w) 내지 0.99%(w/w), 0.60%(w/w) 내지 0.95%(w/w), 0.70%(w/w) 내지 0.90%(w/w), 0.80%(w/w) 내지 0.90(w/w), 0.84%(w/w) 내지 0.86%(w/w), 예를 들어 0.85%(w/w) NaCl 용액일 수 있다. 상기 배양은 20 내지 40℃, 25 내지 40℃, 25 내지 35℃, 27 내지 35℃, 28 내지 32℃의 온도에서 수행할 수 있다. 상기 배양은 10 내지 100시간, 20 내지 90시간, 30 내지 80시간, 40 내지 70시간, 48 내지 65시간, 48 내지 60시간 동안 수행할 수 있다.
상기 "삼칠근"은 두릅나무과에 속하는 삼칠(Panax notoginseng (Burk) F. H. Chen:三七)의 뿌리이다. 상기 삼칠근은 통상적으로 입수할 수 있는 방법에 의해 얻은 것일 수 있고, 예를 들어 시중에서 판매하는 것을 구입한 것일 수 있다. 상기 삼칠근은 멸균된 삼칠근을 사용할 수 있으며, 멸균 방법은 당해 기술분야에서 통상적인 방법으로 수행할 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물에서, 상기 발효는 고체 발효일 수 있다. 용어, "고체 발효"란 수분이 적은 고체 상태의 원료에 미생물을 접종하여 발효하는 것을 의미할 수 있다. 고체 발효법은 종래의 발효법인 액체 발효법 또는 반 고체 발효법에 비해 잡균의 오염을 받지 않고, 생산물의 회수가 쉽다는 장점이 있을 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물에서, 상기 발효 삼칠근은 삼칠근에 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus), 구체적으로 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus) 포자 현탁액을 접종하여 고체 발효시킨 것일 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물에서, 상기 발효를 통해 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus)의 세포 외 효소(extracellular enzyme)에 의해 배양 기질을 기능성 물질로 전환시킬 수 있다. 상기 세포 외 효소의 종류는 예를 들어, 알칼리 포스파타제(Alkaline phosphatase), 에스테라제(Esterase(C4)), 에스테라제 리파제(Esterase Lipase(C8)), 산성 포스파타제(Acid phosphatase), 알파-갈락토시다제(alpha-galactosidase), 베타-갈락토시다제(beta-galactosidase), 베타-글루코시다제(beta-glucosidase), N-아세틸-베타-글루코사미니다제(N-acetyl-beta-glucosaminidase), 알파-만노시다제(alpha-mannosidase) 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 따라서, 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus)의 라이프 사이클(life cycle)에서 효소의 생합성량이 가장 높은 시점인 균사에서 포자로 전환되는 단계(phase)를 오랫동안 유지시키는 것이 중요하다. 그러므로, 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus)의 세포 외 효소의 발현이 많이 되는 단계를 최대한 유지하여 삼칠근의 유용성분을 증가시키기 위하여, 발효 온도 및 시간 등을 적절히 선택할 수 있다.
상기 발효 삼칠근은 25 내지 40℃, 25 내지 35℃, 25 내지 32℃, 28 내지 40℃, 28 내지 35℃, 28 내지 32℃, 또는 30℃에서 발효시킨 것일 수 있다. 발효 온도가 35℃를 초과하는 경우 균주가 포자로 형성되는 시간이 빨라져 상대적으로 효소의 활성과 발현량이 낮아질 수 있고, 반대로 온도가 25℃ 미만인 경우 효소 반응속도가 느려져 기능성 성분으로의 전환 속도가 낮아질 수 있다.
상기 발효 삼칠근은 0.5 내지 20일, 1 내지 20일, 1.5 내지 20일, 2.5 내지 20일, 3 내지 20일, 0.5 내지 10일, 1 내지 10일, 1.5 내지 10일, 2.5 내지 10일, 3 내지 10일, 0.5 내지 9일, 1 내지 9일, 1.5 내지 9일, 2.5 내지 9일, 3 내지 9일, 0.5 내지 7.5일, 1 내지 7.5일, 1.5 내지 7.5일, 2.5 내지 7.5일, 3 내지 7.5일, 0.5 내지 7일, 1 내지 7일, 1.5 내지 7일, 2.5 내지 7일, 3 내지 7일, 또는 4 내지 6일 동안 발효시킨 것일 수 있다. 발효 시간은 발효 온도에 따라 균사의 생장을 고려하여 포자가 형성되기 직전까지 종료하는 것으로 적절히 선택할 수 있다.
예를 들어, 상기 발효 삼칠근은 25 내지 35℃에서 1 내지 10일 동안 발효시킨 것일 수 있다.
상기 발효 삼칠근은 발효 삼칠근의 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료일 수 있다. 추출에 사용된 상기 발효 삼칠근은 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료를 분쇄 또는 세절하거나 적당하게 건조한 것일 수 있다. 상기 발효 삼칠근은 건조에 의해 수분함량이 20% 이하, 15% 이하, 예를 들어 12% 이하인 것을 사용할 수 있다.
상기 추출물은 친수성 용매(hydrophilic solvent), 예를 들면, 알콜, 물, 또는 그 조합에 의하여 추출된 것일 수 있다. 상기 알콜은 C1 내지 C10의 하나 이상의 -OH기를 갖는 화합물일 수 있다. 상기 알콜은 C1 내지 C6의 알코올, C3 내지 C6의 다가 알콜일 수 있다. 상기 알콜은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, 이소프로판올, n-부탄올, sec-부탄올, 이소부탄올, tert-부탄올, n-펜탄올, n-헥산올, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 상기 용매는 예를 들면, 물과 알콜의 혼합물, 즉 알콜 수용액일 수 있다. 알콜 수용액의 알콜 농도는 1 내지 100%(w/w), 예를 들면, 1 내지 99.5%(w/w), 10 내지 100%(w/w), 20 내지 100%(w/w), 30 내지 100%(w/w), 40 내지 100%(w/w), 50 내지 100%(w/w), 60 내지 100%(w/w), 70 내지 100%(w/w), 75 내지 100%(w/w), 60 내지 90%(w/w), 70 내지 90%(w/w), 75 내지 85%(w/w), 또는 80%(w/w)일 수 있다. 상기 알콜 수용액은 메탄올, 에탄올, 또는 부탄올 수용액일 수 있다. 일 구체예에 따른 조성물에서, 상기 추출물은 에탄올 추출물인 것일 수 있다.
상기 추출물은 가온 추출, 가압 추출, 초음파 추출, 열수 추출, 환류 냉각 추출, 아임계 추출, 또는 초임계 추출 등 당업계의 기술분야에서 통상적인 방법으로 추출한 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 발효 삼칠근 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료에 추출 용매를 첨가한 후, 음파 처리 후, 회전식 진탕기에서 교반하여 추출한 것일 수 있다.
상기 추출 용매는 발효 삼칠근의 0.5 내지 10 (부피/중량)배, 0.8 내지 10 (부피/중량)배, 0.5 내지 5 (부피/중량)배, 0.8 내지 5 (부피/중량)배, 0.5 내지 3 (부피/중량)배, 0.8 내지 3 (부피/중량)배, 0.5 내지 2 (부피/중량)배, 0.8 내지 2 (부피/중량)배, 0.5 내지 1.5 (부피/중량)배, 또는 1 (부피/중량)배일 수 있다. 예를 들면, 상기 발효 삼칠근 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료 100 g에 대하여 상기 추출 용매를 50 내지 150 mL 첨가하는 것을 포함할 수 있다.
상기 추출 시간은 선택된 온도 및 추출 방법에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 추출 시간은 1시간 내지 3일, 1시간 내지 2일, 1시간 내지 1일, 5시간 내지 3일, 5시간 내지 2일, 5시간 내지 1일, 10시간 내지 3일, 15시간 내지 2일, 15시간 내지 36시간, 18시간 내지 30시간, 1일 내지 3일, 1일 내지 2일, 또는 24시간일 수 있다. 예를 들면, 상기 발효 삼칠근 전체, 그 일부분, 또는 이들로부터 유래된 재료에 추출 용매를 첨가한 후, 10분간 음파 처리 후, 24시간 동안 회전식 진탕기에서 교반하여 추출한 것일 수 있다. 상기 추출은 1회 이상, 예를 들면 1 내지 5회, 1 내지 4회, 1 내지 3회, 2 내지 5회, 또는 2 내지 4회 추출되는 것일 수 있고, 각 추출은 동일한 방법으로 수행되거나, 다른 방법으로 수행될 수 있다.
상기 추출은 식물체 잔사 및 추출액을 여과 등의 알려진 방법에 의하여 분리할 수 있다. 상기 추출은 또한 얻어진 추출액으로부터 감압 농축과 같은 알려진 방법에 의하여 용매를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 상기 추출은 또한 얻어진 추출물을 동결건조와 같은 건조에 의하여 건조 추출물을 제조하는 것을 포함할 수 있다.
상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.001 중량% 내지 60 중량%, 0.001 중량% 내지 40 중량%, 0.001 중량% 내지 30 중량%, 0.001 중량% 내지 20 중량%, 0.001 중량% 내지 10 중량%, 0.001 중량% 내지 5 중량%, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%로 포함될 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은, 상기 발효 삼칠근의 추출물 대신 발효 삼칠근의 추출물의 분획물을 유효 성분으로서 포함할 수 있다. 일 구체예에 따른 조성물은, 상기 발효 삼칠근의 추출물의 분획물을 더 포함할 수 있다. 용어, "분획물(fraction)"은 상기 발효 삼칠근의 추출물이 그 일부의 성분으로 나누어진 물질 즉, 분획되어진 물질을 나타낸다. 상기 분획물은 용매 분획화 (fractionation)에 의하여 얻어진 것일 수 있다. 상기 용매 분획화는 발효 삼칠근 추출물을 용매와 혼합하고 상기 용매에 존재하는 물질을 분리하는 것일 수 있다. 상기 분획물은 상기 발효 삼칠근 추출물을 물에 현탁시킨 후 메틸렌클로리드, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물로 순차적으로 분획화하여 얻어진 메틸렌클로리드 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물, 또는 물 분획물일 수 있다.
구체적으로, 상기 메틸렌클로리드 분획물은 상기 발효 삼칠근 추출물을 물과 혼합하고, 이 혼합물을 다시 메틸렌클로리드와 혼합한 후 일정 시간 동안 방치한 후 메틸렌클로리드 층을 분리하고, 분리된 메틸렌클로리드층으로부터 분획물을 분리하는 것에 의하여 얻어진 것일 수 있다. 분획물을 분리하는 것은 메틸렌클로리드층으로부터 메틸렌클로리드를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 상기 에틸아세테이트 분획물은 상기 메틸렌클로리드 분획물 분리 후 남은 물을 다시 에틸아세테이트와 혼합한 후 일정 시간 동안 방치한 후 에틸아세테이트층을 분리하고, 분리된 에틸아세테이트층으로부터 분획물을 분리하는 것에 의하여 얻어진 것일 수 있다. 분획물을 분리하는 것은 에틸아세테이트층으로부터 에틸아세테이트를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 상기 부탄올 분획물은 상기 에틸아세테이트 분획물 분리 후, 남은 물을 다시 부탄올과 혼합한 후 일정 시간 동안 방치한 후 부탄올층을 분리하고, 분리된 부탄올층으로부터 분획물을 분리하는 것에 의하여 얻어진 것일 수 있다. 분획물을 분리하는 것은 부탄올층으로부터 부탄올을 제거하는 것을 포함할 수 있다. 온도 조건, 압력 조건, 시간, 사용된 용매의 양 또는 농도, 교반 등과 같은 상기 분획화의 조건은 상기한 발효 삼칠근 추출물을 제조하는데 사용된 추출에 대하여 설명한 바와 같을 수 있다. 상기 분획화는 1회 이상, 예를 들면, 1 내지 5회 반복될 수 있다.
상기 분획물을 분리하는 것은 여과 등의 알려진 방법에 의하여 이루어질 수 있다. 상기 분획화는 또한 얻어진 분획물으로부터 감압 농축과 같은 알려진 방법에 의하여 용매를 제거하는 것을 포함할 수 있다. 상기 분획화는 또한 얻어진 분획물을 농축 및/또는 건조하는 것을 포함할 수 있다. 상기 농축은 감압 농축일 수 있다. 상기 건조는 감압 건조, 비등 건조, 분무 건조, 상온 건조 또는 동결건조를 포함할 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은 알파-1 제1형 콜라겐(alpha-1 type 1 collagen, COL1A1), 피브릴린 1(fibrillin 1, FBN1) 및 엘라스틴(elastin, ELN)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 증가시키는 것일 수 있고, 구체적으로 COL1A1, FBN1 및 ELN의 발현을 증가시켜 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 노화 억제 효과를 나타내는 것일 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은 상기 추출물을 유효한 양, 또는 유효 성분으로서 포함할 수 있다. 상기 유효한 양은 개체에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 질환 내지 상태의 중증도, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 추출물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 투여 기간, 상기 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 다른 조성물을 포함한 요소 및 기타 생리 내지 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
일 구체예에 따른 피부미용 개선용 조성물은 화장품학적으로, 식품적으로, 또는 약학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 조성물은 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제, 또는 피부외용제일 수 있다. 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제등을 필요에 따라서 적절하게 배합할 수 있다.
상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 이 경우, 추출물은 화장수(스킨로션), 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 현탁액, 겔, 분말, 페이스트, 마스크 팩 또는 시트, 또는 에어로졸 조성물을 포함하는 제형으로 제조될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야에서 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 보존제, 안정화제, 계면활성제, 용해제, 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제 등을 더 포함할 수 있다. 상기 보습제 등의 추가 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
일 구체예에 따른 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 이 경우, 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능식품의 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 식품 조성물은 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 환제, 캅셀제, 현탁액, 유제, 시럽제, 침제, 액제, 엑스제 등의 일반적인 제형으로 제조될 수도 있고, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 젤리, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등의 임의의 건강식품 형태로 제조될 수도 있다. 상기 건강식품의 제제화를 위해 식품학적으로 허용 가능한 담체 또는 첨가제를 사용할 수 있으며, 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다. 상기 첨가제로서 각종 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 이외에도 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 첨가제 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 첨가제의 비율은 조성물 총 중량을 기준으로 0.001 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
상기 식품 조성물 중의 상기 추출물의 함량은 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료로서 제조될 경우 100 mL를 기준으로 0.02 내지 10 g, 구체적으로 0.3 내지 1 g의 비율로 함유할 수 있다.
상기 음료는 상기 추출물 이외의 다른 성분을 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 음료에 사용되는 다양한 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 더 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 단당류(예: 포도당, 과당 등), 이당류(예: 말토즈, 수크로즈 등), 다당류(예: 덱스트린, 시클로덱스트린 등)와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 함유될 수 있다. 또한, 향미제로서 천연 향미제(예: 타우마틴, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예: 사카린, 아스파탐 등)를 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 음료 100 mL 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 구체적으로 약 5 내지 12 g으로 함유될 수 있다.
다른 양상은 상기 화장료 또는 식품 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부미용을 개선시키는 방법을 제공한다. 상기 조성물에 대해서는 상술한 바와 동일하다.
상기 방법은 구체적으로, 개체의 피부 주름을 개선시키는 방법, 개체의 피부 탄력을 증진시키는 방법, 또는 개체의 피부 노화를 억제하는 방법일 수 있다.
용어, "투여하는"은 "도입하는" 및 "이식하는"과 상호교환적으로 사용될 수 있고, 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. 일 구체예에 따른 조성물의 추출물 또는 추출물 성분의 적어도 일부를 생존하는 개체 내에서 원하는 위치로 전달하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부미용 개선, 예를 들어 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 또는 피부 노화 억제 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 발효 삼칠근 추출물을 개체당 일당 0.1 mg 내지 1,000 mg, 예를 들면, 0.1 mg 내지 500 mg, 0.1 mg 내지 100 mg, 0.1 mg 내지 50 mg, 0.1 mg 내지 25 mg, 1 mg 내지 1,000 mg, 1 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 100 mg, 1 mg 내지 50 mg, 1 mg 내지 25 mg, 5 mg 내지 1,000 mg, 5 mg 내지 500 mg, 5 mg 내지 100 mg, 5 mg 내지 50 mg, 5 mg 내지 25 mg, 10 mg 내지 1,000 mg, 10 mg 내지 500 mg, 10 mg 내지 100 mg, 10 mg 내지 50 mg, 또는 10 mg 내지 25 mg을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인 가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
다른 양상은 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시켜 발효 삼칠근을 제조하는 단계; 및 상기 발효 삼칠근을 C1-C6의 알콜, 물, 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 발효 삼칠근의 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 삼칠근, 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주, 발효, 발효 삼칠근, 및 발효 삼칠근의 추출물에 대해서는 상술한 바와 동일하다.
일 구체예에 따른 방법에서, 상기 균주는 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) GF8 균주 (수탁번호: KCCM12432P)일 수 있다.
일 구체예에 따른 방법에서, 상기 발효는 고체 발효일 수 있다.
일 구체예에 따른 방법에서, 상기 발효는 25 내지 35℃에서 1 내지 10일 동안 수행될 수 있다.
상기 방법에 의해 제조된 발효 삼칠근의 추출물은 COL1A1, FBN1 및 ELN으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 증가시켜 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 노화 억제 효과를 나타내는 것일 수 있다. 이러한 발효 삼칠근의 추출물의 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 노화 억제 효과는 발효시키지 않은 삼칠근의 추출물에 비해 매우 우수하다. 따라서, 상기 방법에 의해 제조된 발효 삼칠근의 추출물은 화장품, 식품 등 다양한 용도로 이용될 수 있다.
일 양상에 따른 피부미용 개선용 조성물에 의하면, 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 노화 억제 용도로 사용할 수 있다.
다른 양상에 따른 발효 삼칠근의 추출물을 제조하는 방법에 의하면, 피부미용 개선 효과가 있는 발효 삼칠근의 추출물을 제조할 수 있으므로, 제조된 추출물을 화장품 및 식품 등 다양한 분야에 응용할 수 있다.
도 1은 아스페르길루스 크리스타투스(A. cristatus) GF8 균주 (수탁번호: KCCM12432P)로 고체 배양된 발효 삼칠근을 나타낸 사진이다.
도 2는 비교예 1, 2 및 실시예 1의 삼칠근에 대한 액체 크로마토그래피-질량 분석(liquid chromatography-mass spectrometry; LC-MS) 결과이다. 비교예 1: 삼칠근 추출물; 비교예 2: 아스페르길루스 크리스타투스 GF8 균주로 4일 동안 액체 발효시킨 삼칠근 추출물; 실시예 1: 아스페르길루스 크리스타투스 GF8 균주로 4일 동안 고체 발효시킨 삼칠근 추출물.
도 3은 비교예 1, 및 실시예 2 내지 5의 삼칠근에 대한 LC-MS 결과이다. 비교예 1: 삼칠근 추출물; 실시예 2 내지 5: 아스페르길루스 크리스타투스 GF8 균주로 2일(실시예 2), 4일(실시예 3), 6일(실시예 4), 또는 8일(실시예 5) 동안 고체 발효시킨 삼칠근 추출물.
도 4는 20세 및 65세 피부 유래 정상 인간 진피 섬유아세포(normal human dermal fibroblast, NHDF)에서 진피 구성 성분의 유전자인 COL1A1의 mRNA 상대수준(relative level)을 나타낸 그래프이다. None: 음성대조군; LF 0 day 및 SSF 0 day: 비교예 1의 삼칠근 추출물 처리군; LF 4 day: 비교예 2의 액체 발효 삼칠근 추출물 처리군; SSF 4 day: 실시예 1의 고체 발효 삼칠근 처리군.
도 5는 20세 및 65세 피부 유래 NHDF 세포에서 진피 구성 성분의 유전자인 FBN1의 mRNA 상대수준을 나타낸 그래프이다. None: 음성대조군; LF 0 day 및 SSF 0 day: 비교예 1의 삼칠근 추출물 처리군; LF 4 day: 비교예 2의 액체 발효 삼칠근 추출물 처리군; SSF 4 day: 실시예 1의 고체 발효 삼칠근 처리군.
도 6은 20세 및 65세 피부 유래 NHDF 세포에서 진피 구성 성분의 유전자인 COL1A1의 mRNA 상대수준을 나타낸 그래프이다. None: 음성대조군; SSF 0 day: 비교예 1의 삼칠근 추출물 처리군; SSF 2 day, SSF 4 day, SSF 6 day 및 SSF 8 day: 각각 실시예 2 내지 5의 고체 발효 삼칠근 처리군.
도 7은 20세 및 65세 피부 유래 NHDF 세포에서 진피 구성 성분의 유전자인 FBN1의 mRNA 상대수준을 나타낸 그래프이다. None: 음성대조군; SSF 0 day: 비교예 1의 삼칠근 추출물 처리군; SSF 2 day, SSF 4 day, SSF 6 day 및 SSF 8 day: 각각 실시예 2 내지 5의 고체 발효 삼칠근 처리군.
도 8은 20세 및 65세 피부 유래 NHDF 세포에서 진피 구성 성분의 유전자인 ELN의 mRNA 상대수준을 나타낸 그래프이다. None: 음성대조군; SSF 0 day: 비교예 1의 삼칠근 추출물 처리군; SSF 2 day, SSF 4 day, SSF 6 day 및 SSF 8 day: 각각 실시예 2 내지 5의 고체 발효 삼칠근 처리군.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
비교예 1. 삼칠근 추출물의 제조
서울경동시장에서 구매한 중국 운남산 삼칠근 300 g을 취하여 세척 후, 삼칠근의 수분 함유량이 45%가 되도록 가수하여 2시간 동안 침지하였다. 금속 체에 가수된 삼칠근을 담아 121℃에서 60분간 멸균하였다. 이를 최종 수분 함유량이 12%가 될 때까지 동결 건조한 후 분쇄하였다. 분쇄한 시료 200 g에 80% 에탄올 200 mL를 넣어 10분간 음파처리 후 회전식 진탕기에서 24시간 동안 200 rpm에서 교반 추출하였다. 이후, 상기 추출물을 4℃, 2370 g에서 10분간 원심분리하여 상층액을 0.22 μm 필터(Milex®, Merck Millipore, 미국)로 여과하였다. 여과한 상층액은 진공 농축기에서 건조시킨 후, 건조 중량을 측정하여 사용하였다.
비교예 2. 액체 발효(Liquid fermentation, LF) 삼칠근 추출물의 제조
상기 비교예 1에 기재된 것과 동일한 삼칠근 300 g을 취하여 세척 및 분쇄한 후, 증류수를 1.2 L 첨가하여 121℃에서 60분간 멸균하였다. 이후, PDA(Potato dextrose agar) 배지에서 키운 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) GF8 균주를 포자 현탁액으로 제조하고, 이를 멸균된 삼칠근 포함 용액에 접종하여 30℃에서 4일간 액체 발효를 하였다. 이를 최종 수분 함유량이 12%가 될 때까지 동결 건조한 후 분쇄하였다. 분쇄한 시료 200 g에 80% 에탄올 200 mL를 넣어 10분간 음파처리 후 회전식 진탕기에서 24시간 동안 200 rpm에서 교반 추출하였다. 상기 추출물을 비교예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 원심분리 및 여과하고, 상층액을 건조시킨 후, 건조 중량을 측정하여 사용하였다.
실시예 1. 고체 발효(Solid state fermentation, SSF) 삼칠근 추출물의 제조
비교예 1에 기재된 것과 동일하게 멸균된 삼칠근에 2 × 105 CFU(colony-forming unit)/mL의 아스페르길루스 크리스타투스 GF8 포자 현탁액을 접종하여 30℃에서 4일간 배양하여 고체 발효시켰다. 이후 최종 수분 함유량이 12%가 될 때까지 동결 건조한 후 분쇄하였다. 분쇄한 시료 200 g에 80% 에탄올 200 mL를 넣어 10분간 음파처리 후 회전식 진탕기에서 24시간 동안 200 rpm에서 교반 추출하였다. 상기 추출물을 비교예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 원심분리 및 여과하고, 상층액을 건조시킨 후, 건조 중량을 측정하여 사용하였다.
실시예 2 내지 5. 고체 발효 삼칠근 추출물의 제조
멸균된 삼칠근에 아스페르길루스 크리스타투스 GF8 포자 현탁액을 접종한 후 30℃에서 2일간 (실시예 2), 4일간 (실시예 3), 6일간 (실시예 4), 또는 8일간 (실시예 5) 배양한 것을 제외하고는 상기 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법으로 고체 발효 삼칠근 추출물을 제조하였다.
제조예 1. 삼칠근 또는 발효 삼칠근 추출물이 첨가된 에센스 제형의 제조
하기 표 1의 조성 및 함량에 따라 통상적인 방법으로 에센스 제형을 제조하였다.
전성분명(함량: 중량%) 비교제형예 1 비교제형예 2 제형예 1
세테아릴 알코올 0.5 0.5 0.5
글리세릴 스테아레이트/PEG-100 스테아레이트 0.5 0.5 0.5
PEG-40 스테아레이트 0.8 0.8 0.8
C14-22 알콜/C12-20 알킬 글루코시드 0.2 0.2 0.2
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3 3 3
하이드로제네이티드 폴리데센 1 1 1
사이클로펜타실록산 3 3 3
정제수 51.1 51.1 51.1
글리세린 1 1 1
디프로필렌 글리콜 4 4 4
카보머 8.5 8.5 8.5
잔탄검 10 10 10
아크릴레이트/C10-30 알킬 아크릴레이트 크로스폴리머 8.5 8.5 8.5
디소듐 EDTA 0.4 0.4 0.4
트로메타민 4.5 4.5 4.5
삼칠근 추출물 (비교예 1) 2
A. cristatus GF8 균주로 4일 동안 액체 발효시킨 삼칠근 추출물 (비교예 2) 2
A. cristatus GF8 균주로 4일 동안 고체 발효시킨 삼칠근 추출물 (실시예 1) 2
1,2-헥산디올 1 1 1
합계 100 100 100
실험예 1. 고체 발효에 따른 삼칠근 대사체의 액체 크로마토그래피-질량 분석
고체 발효에 따른 삼칠근 대사체의 변화 양상을 액체 크로마토그래피-질량 분석(liquid chromatography-mass spectrometry; LC-MS)으로 조사하였다.
구체적으로, LC-MS 분석은 UHPLC (Ultra-high-performance LC) 질량분석기(UHPLC-Orbitrap-IT-MS/MS, Thermo Fisher Scientific, 미국)를 이용하여 수행하였다. 비교예 1, 2, 및 실시예 1 내지 5의 시료들을 각 5 μL씩 컬럼(Hypersil Gold C18 컬럼)에 0.3 mL/분의 속도로 주입하였고, 이동상은 용액 A(0.1%(v/v) 포름산 수용액)과 용액 B(0.1%(v/v) 포름산 아세토니트릴 용액)으로 구성하였으며, 프로브 히터(Probe heater)의 온도는 300℃로 조절하여 분석하였다. 분석 결과 얻어진 LC-MS 그래프는 도 2 및 도 3에 나타내었다.
그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 발효 방법, 즉, 액체 발효인지 고체 발효인지 여부에 따라 삼칠근 대사체가 달라짐을 알 수 있었다. 또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 고체 발효에 있어 발효 시간에 따라서도 삼칠근의 대사체가 달라짐을 알 수 있었다.
실험예 2. 고체 발효 삼칠근의 진피 구성성분의 유전자 발현 증가 효과 확인
고체 발효 삼칠근의 피부 진피 구성성분의 유전자 발현 증가 효과를 확인하기 위하여, 실시간(real-time) 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)을 수행하였다.
구체적으로, 20세 및 65세의 사람 피부에서 채취한 정상 인간 진피 섬유아세포(normal human dermal fibroblast, NHDF)를 각각 6-웰 플레이트에 3.5 × 105 개/웰로 분주하여 37℃ 5% CO2 조건의 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 DPBS (Dulbecco's phosphate buffered saline)를 넣어 세척하고, 혈청(serum)이 없는 배지로 갈아 준 후, 비교예 1, 2 및 실시예 1 내지 5의 시료를 각 10 μg/mL씩 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다.
이후, 아큐타제(Accutase, Merck, 미국)로 세포를 회수하여 RNAprep 키트(Monarch® Total RNAprep Kit, NEB, 미국)를 이용하여 RNA를 분리하였다. 분리한 RNA를 나노드롭(nanodrop)을 이용하여 260 nm에서 정량한 후, 각 2 ㎍의 RNA를 증폭기(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국)를 이용하여 상보적 DNA(complementary DNA, cDNA)로 합성하였다. 합성된 각 cDNA를 하기 표 2의 프라이머들 및 SYBR-그린 믹스(SYBR-Green supermix, Applied Biosystems, 미국)와 혼합하여 실시간 PCR을 수행하였다. 실시간 PCR 반응은 94℃에서 5분 동안 중합효소 활성화 후, 95℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 30초 반응의 사이클을 40 사이클로 반복하여 수행하였다.
프라이머명 서열(5'→3') 서열번호
COL1A1_F GAGGGCCAAGACGAAGACATC 1
COL1A1_R CAGATCACGTCATCGCACAAC 2
FBN1_F AATGTCAGACGAAGCCAGGG 3
FBN1_R GATTTGGTGACGGGGTTCCT 4
ELN_F CACCTTGCCCTTGTAGAATCCA 5
ELN_R CCATGACAGGTCAACCAGGTT 6
beta-actin_F GGCCATCTCTTGCTCGAAGT 7
beta-actin_R GAGACCTTCAACACCCCAGC 8
사람 진피의 구성성분인 알파-1 제1형 콜라겐(alpha-1 type 1 collagen, COL1A1), 피브릴린 1(fibrillin 1, FBN1) 및 엘라스틴(elastin, ELN) 각 유전자의 상대적인 mRNA 수준을 베타-액틴(β-actin) 유전자의 mRNA 발현량을 기준으로 보정하여 분석한 후, 도 4 내지 8에 나타내었다.
그 결과, 도 4 및 5에 나타낸 바와 같이, COL1A1 및 FBN1의 상대적인 mRNA 발현량은 두 가지 세포에서 모두 삼칠근(비교예 1) 및 액체 발효 삼칠근(비교예 2)에 비하여 고체 발효 삼칠근(실시예 1)에서 현저히 높게 나타났고, 자연노화가 이루어진 상태인 65세 유래 NHDF 세포에 고체 발효 삼칠근을 처리한 군에서 25세 유래 NHDF 세포의 대조군과 유사한 수준까지 COL1A1 및 FBN1의 mRNA 발현이 증가됨을 확인하였다.
또한, 도 6 및 7에 나타낸 바와 같이, 20세 유래 NHDF 세포에서는 고체 발효를 2, 4 또는 6일 동안 수행한 삼칠근(실시예 2 내지 4)에서, 65세 유래 NHDF 세포에서는 고체 발효를 2, 4, 6 또는 8일 동안 수행한 삼칠근(실시예 2 내지 5)에서, 발효 전 삼칠근(비교예 1)에 비하여 COL1A1 및 FBN1의 mRNA 발현이 증가하였다.
또한, 도 8에 나타낸 바와 같이, 20세 유래 NHDF 세포에서는 고체 발효를 2, 4, 6 또는 8일 동안 수행한 삼칠근(실시예 2 내지 5)에서, 65세 유래 NHDF 세포에서는 고체 발효를 4, 6 또는 8일 동안 수행한 삼칠근(실시예 3 내지 5)에서, 발효 전 삼칠근(비교예 1)에 비하여 ELN의 mRNA 발현이 증가하였다.
즉, 도 6 내지 8에 나타난 결과로부터, 삼칠근의 고체 발효 시간에 따라 COL1A1, FBN1 및 ELN의 발현 증가 양상이 다르게 나타나며, 특히 고체 발효를 4 또는 6일 동안 수행한 삼칠근에서 그 효과가 우수함을 알 수 있었다.
<110> COSMAX, INC. <120> Composition for improving skin beauty comprising extract of fermented roots of Panax notoginseng by Aspergillus cristatus strain <130> PN128239KR <160> 8 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1_F <400> 1 gagggccaag acgaagacat c 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> COL1A1_R <400> 2 cagatcacgt catcgcacaa c 21 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FBN1_F <400> 3 aatgtcagac gaagccaggg 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FBN1_R <400> 4 gatttggtga cggggttcct 20 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ELN_F <400> 5 caccttgccc ttgtagaatc ca 22 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ELN_R <400> 6 ccatgacagg tcaaccaggt t 21 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin_F <400> 7 ggccatctct tgctcgaagt 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> beta-actin_R <400> 8 gagaccttca acaccccagc 20

Claims (17)

  1. 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부미용 개선용 화장료 조성물로, 상기 발효 삼칠근은 3 내지 10일 동안 발효시킨 것인 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 피부미용 개선은 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 또는 피부 노화 억제인 것인 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 균주는 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) GF8 균주 (수탁번호: KCCM12432P)인 것인 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 발효는 고체 발효인 것인 조성물.
  5. 삭제
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 발효 삼칠근은 25 내지 35℃에서 발효시킨 것인 조성물.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 C1-C6의 알콜, 물, 또는 이들의 혼합물의 추출물인 것인 조성물.
  8. 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 에탄올 추출물인 것인 조성물.
  9. 청구항 1에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%로 포함되는 것인 조성물.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 알파-1 제1형 콜라겐(alpha-1 type 1 collagen, COL1A1), 피브릴린 1(fibrillin 1, FBN1) 및 엘라스틴(elastin, ELN)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 발현을 증가시키는 것인 조성물.
  11. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 현탁액, 겔, 분말, 페이스트, 마스크 팩 또는 시트, 또는 에어로졸 조성물로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 제형으로 제조되는 것인 조성물.
  12. 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시킨 발효 삼칠근의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부미용 개선용 식품 조성물로, 상기 발효 삼칠근은 3 내지 10일 동안 발효시킨 것인 조성물.
  13. 삼칠근을 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) 균주로 발효시켜 발효 삼칠근을 제조하는 단계; 및
    상기 발효 삼칠근을 C1-C6의 알콜, 물, 또는 이들의 혼합물과 접촉시키는 단계를 포함하는 발효 삼칠근의 추출물을 제조하는 방법으로, 상기 발효는 3 내지 10일 동안 수행되는 것인 방법.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 균주는 아스페르길루스 크리스타투스(Aspergillus cristatus) GF8 균주 (수탁번호: KCCM12432P)인 것인 방법.
  15. 청구항 13에 있어서, 상기 발효는 고체 발효인 것인 방법.
  16. 삭제
  17. 청구항 13에 있어서, 상기 발효는 25 내지 35℃에서 수행되는 것인 방법.
KR1020190105186A 2019-08-27 2019-08-27 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물 KR102239415B1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190105186A KR102239415B1 (ko) 2019-08-27 2019-08-27 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
CN202010275128.4A CN112438921B (zh) 2019-08-27 2020-04-09 包括由冠突曲霉所得的发酵三七根提取物的用于改善皮肤美容的组合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190105186A KR102239415B1 (ko) 2019-08-27 2019-08-27 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210025316A KR20210025316A (ko) 2021-03-09
KR102239415B1 true KR102239415B1 (ko) 2021-04-13

Family

ID=74733217

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020190105186A KR102239415B1 (ko) 2019-08-27 2019-08-27 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102239415B1 (ko)
CN (1) CN112438921B (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113249233B (zh) * 2021-06-29 2021-11-09 北京百奥茵诺生物科技有限公司 冠突散囊菌和菌剂及它们的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102009633B1 (ko) * 2019-02-18 2019-08-13 코스맥스 주식회사 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 고체발효시킨 발효 인삼의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101419463B1 (ko) 2012-04-10 2014-07-14 신준식 간질환 예방 및 치료용 생약 조성물
CN104825383A (zh) * 2015-05-28 2015-08-12 云南白药集团股份有限公司 一种三七发酵物提取方法及应用
KR102004150B1 (ko) * 2017-04-11 2019-07-26 코스맥스 주식회사 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 인삼의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
CN107233244B (zh) * 2017-06-08 2020-03-31 无限极（中国）有限公司 一种三七发酵液的制备方法及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102009633B1 (ko) * 2019-02-18 2019-08-13 코스맥스 주식회사 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 고체발효시킨 발효 인삼의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
CN112438921A (zh) 2021-03-05
KR20210025316A (ko) 2021-03-09
CN112438921B (zh) 2022-07-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111053716B (zh) 一种茯茶提取物在制备皮肤调节产品中的用途
KR102009633B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 고체발효시킨 발효 인삼의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
CN110278706B (zh) 包含使用冠突曲霉菌株发酵的发酵大豆的提取物的皮肤美容改善用组合物
KR101963572B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 제비집의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
KR102239415B1 (ko) 발효 삼칠근의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
KR102114133B1 (ko) 알피나 골무꽃 추출물을 포함하는 탈모 방지 또는 육모 촉진용 조성물
KR20200083293A (ko) 엉겅퀴 및 모링가의 온천수 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물
KR102019642B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 콩의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
KR102046298B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 표고버섯의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
KR102275055B1 (ko) 알피나 골무꽃 추출물을 포함하는 조성물
KR102004150B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 인삼의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물
EP3127547B1 (en) Composition comprising extract of alpine wormwood
KR102288902B1 (ko) 갈대 발효 추출물을 포함하는 주름 개선 및 탄력 증가용 화장료 조성물
KR102224313B1 (ko) 알피나 골무꽃 추출물을 포함하는 미백용 조성물
KR101994618B1 (ko) 발효 지실의 추출물을 포함하는 피부 진정용 조성물
KR102012366B1 (ko) 아슈와간다 캘러스 추출물을 포함하는 미백용 조성물
CN113631227A (zh) 抗老化剂、抗氧化剂、抗炎剂、及美白剂、以及化妆品
KR20190089748A (ko) 눈빛승마 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 피부 미백용 조성물
JP6574436B2 (ja) アルパインワームウッド抽出物を含む組成物
KR102515074B1 (ko) 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물
KR102484422B1 (ko) 사막 선인장 추출물 및 락토바실러스 배양액을 포함하는 화장료 조성물
KR102104803B1 (ko) 진세노사이드 f2 및 4-알파-d-글루코피라노실록시 벤질 알코올을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 예방 또는 개선용 조성물
KR102569532B1 (ko) 스타필로코커스 속, 스트렙토코커스 속, 쿠티박테리움 속, 인하이드로박터 균주 및 dna 단편 혼합물을 포함하는 화장료 조성물
KR102316637B1 (ko) 병풀 유래 바실러스 서브틸리스 균주 및 그의 피부 상태 개선 용도
KR102004149B1 (ko) 아스페르길루스 크리스타투스 균주로 발효시킨 발효 쌀의 추출물을 포함하는 피부미용 개선용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant