KR102515074B1 - 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

화장료 조성물에 관한 것으로, 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함함으로써 피부 노화, 보습, 장벽, 및 피부 혈행 개선과 같은 피부 상태 개선에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising fermented producrt of Perilla frutescens}
화장료 조성물에 관한 것이다.
차즈기(蘇葉; Perilla frutescens (L.) Britton var. acuta (Thunb.) Kudo)는 생물학적 분류로 피자식물문, 쌍떡잎식물강, 꿀풀과에 속하는 1년초 약용식물로서 우리나라와 중국에 분포한다.
줄기는 곧추서고 네모지며 전주(全株)에 자색을 띠고 향기가 있고, 잎은 대생하고 넓은 난형으로 끝은 뾰족하고 밑은 둥글거나 다소 쐐기 모양이며 가장자리에 톱니가 있고, 양면에 털이 있으며 특히 맥 위에 긴 털이 있고 엽병이 길다. 꽃은 8~9월에 연한 자색으로 피고 줄기와 가지 끝, 위쪽의 잎 짬에 총상화서로 달린다. 꽃받침은 2개로 갈라지고 위쪽 것은 다시 3열, 아래쪽 것은 2열하며 통부의 내외에 털이 있다. 화관은 짧은 통상 순형이고 하순이 상순보다 약간 길며 수술은 2강웅예이고 과실은 분과로 둥글며 꽃받침 안에 들어 있다. 본종은 전체에 자색을 띠며 분과는 원형이고 그물 무늬가 있다. 잎과 줄기는 약용으로 쓰이고 어린잎과 종자는 식용한다.
어린 잎은 들깨 잎과 구분이 어려울 정도로 비슷하며, 차즈기에 들어 있는 페릴알데히드로 만든 설탕은 정상 설탕보다 2,000배 정도 강한 감미료이므로 담배·장·치약 등에 사용한다. 잎이 자줏빛이 아니고 녹색인 것을 청소엽(for. viridis)이라고 한다.
한편, 차즈기는 눈피로 완화에 의한 시력 개선 효과 및 염증 개선 효과가 있다고 알려져 있다.
그러나, 기존 연구들은 일반적인 열수 추출 및 에탄올 추출에 한정되어 있으며, 상기 한방 약재에 미생물을 적용하여 발효 오일을 제조한 연구는 진행된 바가 없다.
일 양상은 차즈기를 미생물로 발효시킨 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
다른 양상은 차즈기를 미생물로 발효하는 단계를 포함하는 차즈기 발효물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
일 양상은 차즈기를 미생물로 발효시킨 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 조성물을 제공한다.
상기 차즈기 발효물은 차즈기 잎(자소엽), 줄기, 꽃, 씨앗(자소자), 뿌리 또는 이들의 혼합물을 발효시킨 것일 수 있다. 또한, 상기 차즈기 발효물은 차즈기 발효 오일인 것일 수 있다.
상기 미생물은 칸디다 속(Candida sp.)에 속하는 균주로서, 예를 들어, 칸디다 봄비콜라(Candida bombicola), 칸디다 파라실로시스(Candida parapsilosis), 칸디다 모기(Candida mogii) 등인 것일 수 있다. 일 구체예에 있어서, 상기 미생물은 칸디다 봄비콜라(Candida bombicola)(기타번호: KCTC 18592P)인 것일 수 있다.
일 실시예에서는 차즈기를 칸디다 속에 속하는 균주로 발효시킨 차즈기 발효물이 차즈기 열수 추출물 및 차즈기 주정 추출물과 비교하여 폴리페놀 함량이 높고, COL1A1, AQP3, 및 HAS3의 발현, cGMP 및 NO의 발현을 유의하게 증가시키는 것을 확인하였다. 또한, 상기 차즈기 발효물은 피부 성분의 대부분을 차지하는 다양한 아미노산, 예를 들어, 아스파르산(Aspartic acid), 글루탐산(Glutamic acid), 아스파라긴(Asparagine), 세린(Serine), 글루타민(Glutamine), 히스티딘(Histidine), 글리신(Glycine), 트레오닌(Threonine), 아그기닌(Arginine), 알라닌(Alanine), GABA, 타이로신(Tyrosine), 발린(Valine), 트립토판(Tryptophane), 페닐알라닌(Phenylalanine), 이소류신(Isoleucine), 류신(Leucine), 라이신(Lysine), 하이드록시프롤린(Hydroxyproline) 및 프롤린(Proline)과 같은 아미노산을 함유하는 것을 확인하였다.
따라서, 일 양상에 따른 차즈기 발효물은 피부 상태 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선은 피부 노화 억제 또는 개선, 피부 상처 개선, 항산화, 주름, 탄력, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 피부 혈행 개선, 피부 미백일 수 있다.
본 명세서에서 용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다.
상기 조성물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 처짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 활성산소에 의한 노화 또는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다.
본 명세서에서 용어 "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하여 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.
상기 "피부 질환"은 피부 장벽 기능 손상에 의한 질환, 피부 노화, 피부 상처, 피부 흉터, 또는 피부 염증일 수 있다. 용어, "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어, "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다.
상기 피부 장벽 기능 손상은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다.
상기 피부 염증성 질환은 피부 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것일 수 있다.
상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 80 중량%, 예를 들면, 0.01 중량% 내지 60 중량%, 0.01 중량% 내지 40 중량%, 0.01 중량% 내지 30 중량%, 0.01 중량% 내지 20 중량%, 0.01 중량% 내지 10 중량%, 0.01 중량% 내지 5 중량%, 0.05 중량% 내지 60 중량%, 0.05 중량% 내지 40 중량%, 0.05 중량% 내지 30 중량%, 0.05 중량% 내지 20 중량%, 0.05 중량% 내지 10 중량%, 0.05 중량% 내지 5 중량%, 0.1 중량% 내지 60 중량%, 0.1 중량% 내지 40 중량%, 0.1 중량% 내지 30 중량%, 0.1 중량% 내지 20 중량%, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 또는 0.1 중량% 내지 5 중량%의 차즈기 발효물을 포함할 수 있다. 이때, 차즈기 발효물의 함량이 상기 범위 미만인 경우, 피부 상태 개선 효과, 예를 들면, 피부 노화 억제, 상처 개선, 피부 장벽 강화, 피부 주름 억제, 피부 보습 효과 또는 피부 혈행 개선 효과가 충분히 발휘되지 않는다는 문제점이 있다.
본 명세서에서 용어, "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 차즈기 발효물이 첨가되는 것을 의미하고, 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션 (formulation)되는 것을 포함하는 의미이다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
본 명세서에서, 상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물은 상기 균주 또는 이의 배양액 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
또한, 다른 양상은 유효한 양의 상기한 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 상태를 예방, 개선, 또는 치료하는 방법을 제공한다.
상기 개체의 상태는 피부와 관련된 상태, 또는 염증과 관련된 상태일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부미용 개선, 예를 들어 피부 보습, 피부 장벽 강화, 피부 염증 억제, 피부 주름 개선 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.
상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
다른 양상은 오일을 포함하는 배지에 미생물을 접종하여 미생물 배양액을 제조하는 단계; 및 상기 미생물 배양액에 차즈기를 첨가하여 발효하는 단계를 포함하는 차즈기 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
또 다른 양상은 상기 방법에 의해 제조된 차즈기 발효 오일을 제공한다. 상기 차즈기 발효물의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
상기 방법은 오일을 포함하는 배지에 미생물을 접종하여 미생물 배양액을 제조하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 오일은 식물성 오일인 것일 수 있다. 상기 식물성 오일은 예를 들어, 쌀 배아 오일, 마카다미아씨 오일, 올리브 오일, 야자 오일, 아르간 오일, 녹차씨 오일, 포도씨 오일, 메도우폼씨 오일, 대두 오일, 해바라기씨 오일, 포도씨 오일, 참깨 오일, 들깨 오일, 아마 오일, 홍화씨 오일, 옥수수 오일, 유채씨 오일, 및 카놀라 오일 등인 것일 수 있다.
일 구체예에 있어서, 상기 미생물 배양액을 제조하는 단계는 오일을 포함하는 1차 배양 배지에 미생물을 접종하여 1차 배양액을 제조하는 단계; 상기 1차 배양액을 포함하는 2차 배양 배지에서 상기 미생물을 계대 배양하여 2차 배양액을 제조하는 단계를 포함한다.
상기 1차 배양 배지는 미생물의 성장 및 대사과정을 최적화하기 위한 성분을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 1차 배양 배지는 포도당, 효모 추출물, 맥아 추출물, 펩톤, 요소, 물 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 상기 1차 배양 배지는 예를 들어, 오일 10.0 내지 80.0 g/L, 포도당 5.0 내지 20.0 g/L, 효모 추출물 1.0 내지 5.0 g/L, 맥아 추출물 1.0 내지 5.0 g/L, 펩톤 2.0 내지 10.0 g/L, 및 요소 0.1 내지 5.0 g/L를 포함할 수 있다. 또한, 상기 1차 배양 배지는 예를 들어, 오일 30.0 내지 60.0 g/L, 포도당 8.0 내지 15.0 g/L, 효모 추출물 2.0 내지 4.0 g/L, 맥아 추출물 2.0 내지 4.0 g/L, 펩톤 4.0 내지 6.0 g/L, 및 요소 0.5 내지 2.0 g/L를 포함할 수 있다. 이때, 상기 오일, 포도당, 효모 추출물, 맥아 추출물, 펩톤, 및 요소의 함량이 상기 범위 미만인 경우, 미생물이 충분히 성장하지 않는다는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 미생물에 의하여 과발효가 이루어지거나 또는 이취가 발생한다는 문제점이 있다.
또한, 상기 2차 배양 배지는 글리세린, 효모 추출물, 맥아 추출물, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4, 물 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 상기 2차 배양 배지는 예를 들어, 오일 200.0 내지 800.0 g/L, 글리세린 10.0 내지 50.0 g/L, 효모 추출물 5.0 내지 15.0 g/L, K2HPO4 12.0 내지 50.0 g/L, KH2PO4 3.0 내지 15.0 g/L, NH4NO3 1.0 내지 10.0 g/L, 및 MgSO4 1.0 내지 5.0 g/L를 포함할 수 있다. 상기 2차 배양 배지는 예를 들어, 오일 400.0 내지 600.0 g/L, 글리세린 15.0 내지 30.0 g/L, 효모 추출물 8.0 내지 12.0 g/L, K2HPO4 20.0 내지 30.0 g/L, KH2PO4 5.0 내지 10.0 g/L, NH4NO3 2.0 내지 5.0 g/L, 및 MgSO4 1.5 내지 3.0 g/L를 포함할 수 있다. 이때, 상기 오일, 글리세린, 효모 추출물, 맥아 추출물, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, 및 MgSO4의 함량이 상기 범위 미만이거나 또는 상기 범위를 초과하는 경우, 미생물이 충분히 성장하지 않는다는 문제점이 있다.
상기 1차 및 2차 배양액을 제조하는 단계는 10 내지 50 ℃의 온도에서 2 내지 120시간 동안 미생물을 발효시킴으로써 수행되는 것일 수 있다. 상기 1차 및 2차 배양액을 제조하는 단계는 예를 들어, 10 내지 50 ℃, 10 내지 40 ℃, 10 내지 35 ℃, 10 내지 30 ℃, 10 내지 25 ℃, 15 내지 50 ℃, 15 내지 40 ℃, 15 내지 35 ℃, 15 내지 30 ℃, 또는 15 내지 25 ℃의 온도에서 수행되는 것일 수 있다. 또한, 상기 1차 및 2차 배양액을 제조하는 단계는 예를 들어, 2 내지 120시간, 2 내지 72시간, 2 내지 48시간, 2 내지 30시간, 10 내지 120시간, 10 내지 72시간, 10 내지 48시간, 10 내지 30시간, 20 내지 120시간, 20 내지 72시간, 20 내지 48시간, 또는 20 내지 30시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 이때, 상기 발효 온도 및 시간이 상기 범위 미만인 경우, 미생물이 충분히 성장하지 않는다는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 미생물에 의한 과발효가 이루어지거나 또는 부패되어 이취가 발생한다는 문제점이 있다.
다른 구체예에 있어서, 상기 차즈기 발효물을 제조하는 단계는 오일을 포함하는 배지에 상기 2차 배양액을 첨가하여 1차 발효하는 단계; 및 차즈기를 첨가하여 2차 발효하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 오일 및 2차 배양액의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.
상기 배지는 글리세린, 효모 추출물, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4, 물 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 상기 배지는 예를 들어, 오일 200.0 내지 800.0 g/L, 글리세린 10.0 내지 50.0 g/L, 효모 추출물 5.0 내지 15.0 g/L, K2HPO4 12.0 내지 50.0 g/L, KH2PO4 3.0 내지 15.0 g/L, NH4NO3 1.0 내지 10.0 g/L, 및 MgSO4 1.0 내지 5.0 g/L를 포함하는 것일 수 있다. 상기 배지는 예를 들어, 오일 400.0 내지 600.0 g/L, 글리세린 15.0 내지 30.0 g/L, 효모 추출물 8.0 내지 12.0 g/L, K2HPO4 20.0 내지 30.0 g/L, KH2PO4 5.0 내지 10.0 g/L, NH4NO3 2.0 내지 5.0 g/L, 및 MgSO4 1.5 내지 3.0 g/L를 포함하는 것일 수 있다. 이때, 상기 오일, 글리세린, 효모 추출물, K2HPO4, KH2PO4, NH4NO3, MgSO4의 함량이 상기 범위 미만이거나 또는 상기 범위를 초과하는 경우, 미생물의 성장이 원활하지 않다는 문제점이 있다.
상기 1차 발효하는 단계는 10 내지 50℃에서 2 내지 120 시간 동안 수행되는 것일 수 있다.
상기 1차 발효하는 단계는 예를 들어, 10 내지 50 ℃, 10 내지 40 ℃, 10 내지 35 ℃, 10 내지 30 ℃, 10 내지 25 ℃, 15 내지 50 ℃, 15 내지 40 ℃, 15 내지 35 ℃, 15 내지 30 ℃, 또는 15 내지 25 ℃에서 수행되는 것일 수 있다. 또한, 상기 1차 발효하는 단계는 예를 들어, 2 내지 120 시간, 2 내지 100시간, 2 내지 50 시간, 10 내지 120 시간, 10 내지 100 시간, 10 내지 50 시간, 20 내지 120 시간, 20 내지 100 시간, 20 내지 50 시간, 50 내지 120 시간, 50 내지 100 시간 또는 50 내지 80 시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 이때, 상기 발효 온도 및 시간이 상기 범위 미만인 경우, 미생물이 충분히 성장할 수 없다는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 미생물에 의한 과발효가 이루어지거나 또는 부패되어 이취가 발생한다는 문제점이 있다.
상기 2차 발효하는 단계는 1차 발효 후, 차즈기 2 내지 500 g/L를 첨가하여 10 내지 50 ℃에서 20 내지 150 시간 동안 수행되는 것일 수 있다.
상기 2차 발효하는 단계에서 상기 차즈기는 예를 들어, 5 내지 500 g/L, 10 내지 500 g/L, 50 내지 500 g/L, 100 내지 500 g/L, 5 내지 300 g/L, 10 내지 300 g/L, 50 내지 300 g/L, 또는 100 내지 300 g/L로 첨가되는 것일 수 있다. 이때, 상기 차즈기의 함량이 상기 범위 미만인 경우, 차즈기 내 활성 성분이 충분히 발효되지 않는다는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 발효가 효과적으로 수행되지 않거나 또는 발효물 제형의 선호도가 감소한다는 문제점이 있다.
상기 2차 발효하는 단계는 10 내지 50 ℃에서 20 내지 150 시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 상기 2차 발효하는 단계는 예를 들어, 10 내지 50 ℃, 10 내지 40 ℃, 10 내지 35 ℃, 10 내지 30 ℃, 10 내지 25 ℃, 15 내지 50 ℃, 15 내지 40 ℃, 15 내지 35 ℃, 15 내지 30 ℃, 또는 15 내지 25 ℃에서 수행되는 것일 수 있다. 또한, 상기 2차 발효하는 단계는 예를 들어, 20 내지 150 시간, 20 내지 130 시간, 20 내지 100 시간, 40 내지 110 시간, 50 내지 100 시간 또는 60 내지 80 시간 동안 수행되는 것일 수 있다. 이때, 상기 발효 온도 및 시간이 상기 범위 미만인 경우, 미생물이 충분히 성장할 수 없다는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 미생물에 의한 과발효가 이루어지거나 또는 부패되어 이취가 발생한다는 문제점이 있다.
상기 발효물은 발효액, 상기 발효액의 희석액 또는 농축액, 상기 발효액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물 등을 포함할 수 있다. 또한, 상기 발효물은 오일 제형인 것일 수 있다.
또한, 상기 방법은 상기 차즈기 발효물로부터 오일을 분리하여 차즈기 발효 오일을 수득하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 오일은 통상적인 방법에 의해 분리할 수 있으며, 예를 들어, 정치, 원심분리, 흡착, 여과 등을 수행함으로써 배지 내 불순물, 미생물 균체, 수분 등을 제거하고 오일을 수득하는 것일 수 있다.
일 양상에 따른 조성물은 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함함으로써 피부 노화, 보습, 장벽, 및 피부 혈행 개선과 같은 피부 상태 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 총 폴리페놀 함량을 측정한 결과이다.
도 2a는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 2b는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 자외선 조사에 따른 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 3은 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 AQP3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 4는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 5는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 cGMP의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 6을 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 NO의 발현이 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[준비예]
준비예 1. 미생물 발효 배지의 제조
차즈기 발효물의 제조에 앞서, 미생물을 1차 및 2차 배양하여 종균 발효배지를 제조하였다. 먼저, 하기 표 1의 성분 및 함량이 포함된 1차 종균 발효 배지 1 L에 칸디다 봄비콜라(Candida bombicola) UA-06 균주(수탁번호: KCTC 18592P)를 접종하여 20℃, 300 rpm, 1 NL/min(1vvm)의 호기성 조건에서 24시간 동안 1차 종균 발효를 진행하였다. 이후, 계대배양을 위하여, 하기 표 1의 성분 및 함량이 포함된 2차 종균 발효 배지 10 L에 상기 1차 종균 발효 배양액을 넣어 20 ℃, 300 rpm, 1 NL/min(1vvm)의 호기성 조건에서 24시간 동안 2차 종균 발효를 진행하였다.
(단위: g/L) 1차 종균 발효 2차 종균 발효
쌀 배아 오일 50 50
포도당 (glucose) 10 -
글리세린 (Glycerin) - 20
효모 추출물 (yeast extract) 3 3
맥아 추출물 (malt extract) 3 3
펩톤 (peptone) 5 5
요소 (Urea) 1 1
증류수 (to 1 L) (to 1 L)
[실시예]
실시예 1. 차즈기 발효물의 제조
상기 준비예에서 제조한 2차 종균 발효 배양액을 사용하여 차즈기 발효물을 제조하였다. 구체적으로, 하기 표 2의 성분 및 함량이 포함된 배지 100 L에 상기 준비예에서 제조한 2차 종균 발효 배양액을 넣어 20℃, 300 rpm, 1 NL/min(1vvm)의 호기성 조건에서 1차 발효를 진행하였다. 발효 6 내지 42시간 후, 차즈기 250 g/L를 투입하여 동일한 조건에서 2차 발효를 진행하였다. 상기 1차 발효 및 2차 발효는 총 96시간 동안 진행하였다. 발효 후 배양액을 정치시켜 상층(오일)과 하층(배지 및 불순물)을 분리한 후, 하층을 모두 폐기하여 미생물 등을 제거하였다. 이후, MgSO4 20 g/L를 첨가한 뒤 2시간 동안 교반하여 수분을 제거하였다. 연속형 원심분리기를 이용하여 미생물 균체, MgSO4, 오일층에 잔존해 있던 불순물 및 한약재를 제거하여 오일을 수득하였다. 이후, 직경 45π, 길이 2M의 친화성 크로마토그래피 컬럼(Affinity chromatography column) 내부에 규산 마그네슘(magnesium silicate)을 충진제로 사용하여, 30 L/hour의 유량으로 지방산 및 불순물을 흡착 및 여과하여 지방산 및 불순물을 제거하였다. 상기와 같은 과정을 통하여 오일 제형의 차즈기 미생물 발효물을 제조하였다.
(단위: g/L) 실시예 1
쌀배아 오일 500
글리세린 (Glycerin) 20
효모 추출물 (yeast extract) 10
K2HPO4 25
KH2PO4 7
NH4NO3 3
MgSO4 2
증류수 (to 1 L)
[비교예]
비교예 1. 차즈기 열수 추출물의 제조
차즈기 20 g을 1 L의 증류수에 가하여 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후, 0.45 ㎛의 멤브레인 필터로 여과한 후, 농축, 건조하여 차즈기 열수 추출물을 제조하였다.
비교예 2. 차즈기 주정 추출물의 제조
차즈기 20 g을 50% 주정 1 L에 가하여 60℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이후, 0.45 ㎛의 멤브레인 필터로 여과한 후, 농축, 건조하여 차즈기 주정 추출물을 제조하였다.
[실험예]
항산화 활성 확인
일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 항산화 활성을 확인하기 위하여, Folin-Denis법에 따라 총 폴리페놀의 함량을 측정하였다. 구체적으로, 0.12 ml 2N Folin-Ciocalteu's Phenol reagent(SIGMA, CAS 10213-10-2)와 상기 실시예 1 및 비교예 1~2를 각각 0.12 ml씩 혼합하였다. 이후, 0.12 ㎖ 10% Sodium carbonate, anhydrous (DUKSAN, CAS 497-19-8)를 첨가하고 완전히 차광하여 상온에서 1시간 동안 반응시킨 후, 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 700 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 총 폴리페놀의 함량은 탄닌산(tannic acid) (DAEJUNG, CAS 1402-55-4)을 정량하여 작성한 표준 곡선으로부터 계산하였다.
도 1은 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 총 폴리페놀 함량을 측정한 결과이다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 실시예 1은 비교예 1~2와 비교하여 총 폴리페놀의 함량이 현저하게 높은 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물은 총 폴리페놀을 활성성분으로 포함함으로써 항산화에 의한 피부 노화 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
항노화 및 항주름 활성 확인
일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 피부 노화 및 주름 개선 활성을 확인하였다. 구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 6 웰 플레이트에 4x105로 분주한 후, 37℃ 5% CO2 조건의 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 PBS를 넣은 후 20 mJ/cm2의 UVB를 조사하거나 조사하지 않았다. UVB 조사 직후 PBS를 제거하고 FBS가 없는 배지로 갈아 준 후, 상기 실시예 1 및 비교예 1~2를 농도별(100, 200 ppm)로 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 음성 대조군으로 자외선 처리 및 발효물 비처리군을 사용하였고, 양성 대조군으로 EGCG(Epigallocatechin-3-gallate) 1 μM을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2 ㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 COL1A1에 대하여 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 프라이머 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계(Step One Plus, AppliedBiosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
도 2a는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 2b는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 자외선 조사에 따른 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
그 결과, 도 2a에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1 및 비교예 2와 비교하여 COL1A1의 발현을 유의하게 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 2b에 나타낸 바와 같이, 자외선 조사에 의하여 섬유아세포주에서 ColA1의 발현이 감소하였고, 실시예 1 및 비교예 1~2의 처리에 의하여 CoL1A1의 발현이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 구체적으로, 실시예 1은 비교예 1 및 비교예 2와 비교하여 자외선에 의해 감소된 COL1A1의 발현을 현저하게 증가시키는 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물은 COL1A1의 발현을 증가시키는 바, 피부 노화, 주름 개선의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
피부 보습 및 장벽 개선 효과 확인
일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 피부 보습 및 장벽 개선 효과를 확인하였다. 구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청 (fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃ 5% CO2 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 상기 실시예 1 및 비교예 1~2를 농도별(50, 100, 200, 300ppm)을 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 음성 대조군으로 발효물 비처리군을 사용하였다. 그 후 각 시료의 세포에서 트리졸(RNA iso, DAKARA, 일본)을 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 피부 장벽 강화 및 보습과 관련된 인자인 AQP3(아쿠아포린) 및 HAS3(히알루론산 합성 효소)에 대하여 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 프라이머 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
도 3은 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 AQP3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 4는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
그 결과, 도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 농도의존적으로 AQP3 및 HAS3의 발현을 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 동일한 농도의 비교예 1 및 비교예 2와 비교하여 실시예 1에서 AQP3 및 HAS3의 발현이 현저하게 증가된 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물은 AQP3 및 HAS3의 발현을 증가시킴으로써 피부 보습 및 장벽 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
피부 혈행 개선 효과 확인
일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물의 피부 혈행 개선 효과를 확인하였다. 구체적으로, 인간동맥평활근 세포주인 hASMCs 세포를 6 웰 플레이트에 5x105로 분주하여 24시간 동안 배양한 후, PBS로 세척하였다. FBS를 넣지 않은 DMEM 배지에 실시예 1 및 비교예 1~2를 농도별(50, 100, 200, 300 ppm)로 첨가하고 각 웰에 처리하여 24시간 추가 배양하였다. 이후, cyclic GMP ELISA kit Cell Biolabs, Inc. (San Diego, CA)와 Griesse reagent를 사용하여 세포 배양액의 cGMP와 NO 농도를 측정하였다.
도 5는 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 cGMP의 발현에 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
도 6을 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물이 NO의 발현이 미치는 영향을 나타낸 결과이다.
그 결과, 도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 농도 의존적으로 cGMP 및 NO의 발현을 유의하게 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 더 높은 농도로 처리한 비교예 1 및 비교예 2와 비교하여 실시예 1에서 cGMP 및 NO이 더 높게 발현하는 것을 확인할 수 있었다.
즉, 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물은 혈행 개선 인자인 cGMP 및 NO의 발현을 증가시킴으로써 피부 혈행 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
활성 성분 확인
일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물 내 포함된 활성 성분을 확인하였다. 구체적으로, 실시예 1 및 비교예 1~2를 하기 표 3의 조건 하에서 HPLC(Ultimate3000, Thermo Scientifinc, USA)(Triple TOF 5600+, AB와 연결된 고분해능 질량분석기 Sciex, USA)를 사용하여 고분해능 질량 분석하였다. 또한, 하기 표 4의 조건 하에서 TOF-MS 분석한 뒤 라이브러리 프로그램을 통하여 활성 성분을 추측하였다. MS score와 mass accuracy가 0.95~1.00인 결과만 추출하였으며, positive mode와 negative mode를 고려하여 성분을 예측하여 하기 표 5에 나타내었다.
컬럼 Cortex C18+ (2.1 ㎜ X 100 ㎜, 2.7 ㎛)
컬럼 온도 40 ℃
주입 부피 20 ㎕
이동상 A = 0.1% 포름산 (in water)B = 0.1% 포름산 (in acetonitrile)
농도 구배 A (%) B (%)
1 90 10
2 90 10
12 0 100
16 0 100
17 90 10
28 90 10
유속 0.4 ㎖/min
Ion 모드 ESI, both positive and negative
MS 스캔 범위 50~2000 m/z
MS/MS 스캔 범위 50~2000 m/z
Sorce 온도 500
Ionspray 전압 5500 V/4500 V
충돌 에너지(Collision Energy) 50
충돌 에너지 확산(Collision Energy spread) 15
아미노산 분석 결과 (mg/L)
No. Amino acids 실시예 1 비교예 1 비교예 2
1 Aspartic acid 1.86 0.23 0.16
2 Glutamic acid 8.07 - -
3 Asparagine 28.93 0.4 0.33
4 Serine 3.22 - -
5 Glutamine 22.62 - -
6 Histidine 1.76 - -
7 Glycine 2.13 0.22 0.26
8 Threonine 3.45 - -
9 Arginine 138.2 0.34 0.21
10 Alanine 19.12 0.18 0.25
11 GABA 30.36 - -
12 Tyrosine 10.91 - -
13 Valine 14.1 - -
14 Tryptophane 0.8 - -
15 Phenylalanine 10.22 - -
16 Isoleucine 9.64 - -
17 Leucine 7.8 - -
18 Lysine 13.43 - -
19 Hydroxyproline 1.81 - -
20 Proline 340.77 - -
Total 669.2 1.37 1.21
그 결과, 표 5에 나타낸 바와 같이, 비교예 1 및 비교예 2에서는 5가지 종류의 아미노산이 검출되는 반면, 실시예 1에서는 약 20여가지의 다양한 아미노산이 검출되는 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 일 양상에 따른 차즈기 미생물 발효물은 피부 성분의 대부분을 차지하는 다양한 아미노산을 포함함으로써 피부 구성 성분을 유지하고, 피부 조직의 재생을 촉진하며, 피부 미백, 염증 개선 등과 같은 피부 상태의 개선에 유용하게 사용될 수 있다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (10)

  1. 차즈기를 칸디다 속(Candida sp.)에 속하는 미생물로 발효시킨 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물로서, 상기 피부 상태는 자외선 또는 활성 산소에 의한 피부 노화, 피부 상처, 주름, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 또는 피부 혈행 개선인 것인 화장료 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 미생물은 칸디다 봄비콜라(Candida bombicola), 칸디다 파라실로시스(Candida parapsilosis), 및 칸디다 모기(Candida mogii)로 구성된 군에서 선택되는 것인 화장료 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 차즈기 발효물은
    오일을 포함하는 배지에 칸디다 속(Candida sp.)에 속하는 미생물을 접종하여 미생물 배양액을 제조하는 단계;
    상기 미생물 배양액에 차즈기를 첨가하여 발효하는 단계에 의해 제조된 것인 화장료 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 차즈기 발효물은 오일 제형인 것인 화장료 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서, COL1A1, AQP3, HAS3, cGMP, 또는 NO의 발현을 증가시키는 것인 화장료 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 차즈기 발효물은 아스파르산(Aspartic acid), 글루탐산(Glutamic acid), 아스파라긴(Asparagine), 세린(Serine), 글루타민(Glutamine), 히스티딘(Histidine), 글리신(Glycine), 트레오닌(Threonine), 아그기닌(Arginine), 알라닌(Alanine), GABA, 타이로신(Tyrosine), 발린(Valine), 트립토판(Tryptophane), 페닐알라닌(Phenylalanine), 이소류신(Isoleucine), 류신(Leucine), 라이신(Lysine), 하이드록시프롤린(Hydroxyproline) 및 프롤린(Proline)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산을 포함하는 것인 화장료 조성물.
  7. 차즈기를 칸디다 속(Candida sp.)에 속하는 미생물로 발효시킨 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 피부외용제 조성물로서, 상기 피부 상태는 자외선 또는 활성 산소에 의한 피부 노화, 피부 상처, 주름, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 또는 피부 혈행 개선인 것인 피부외용제 조성물.
  8. 차즈기를 칸디다 속(Candida sp.)에 속하는 미생물로 발효시킨 차즈기 발효물을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품 조성물로서, 상기 피부 상태는 자외선 또는 활성 산소에 의한 피부 노화, 피부 상처, 주름, 피부 장벽 강화, 피부 보습, 또는 피부 혈행 개선인 것인 건강기능식품 조성물.
  9. 오일을 포함하는 배지에 칸디다 속(Candida sp.)에 속하는 미생물을 접종하여 미생물 배양액을 제조하는 단계; 및
    상기 미생물 배양액에 차즈기를 첨가하여 발효하는 단계를 포함하는 차즈기 발효물을 제조하는 방법으로서, 상기 발효물은 글루타민(glutamine), GABA, 트립토판(tryptophane), 및 하이드록시프롤린(hydroxyproline)으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산을 포함하는 것인 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 차즈기 발효물은 오일 제형인 것인 방법.
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