KR102443258B1 - 항 cd40 항체에 의한 병용 치료제 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 병용 치료제에 관한 것이다. 병용 치료제는 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함한다. 본 발명은 또한 이러한 치료를 사용하는 키트 및 방법에 관한 것이다.

Description

항 CD40 항체에 의한 병용 치료제{COMBINATION THERAPIES WITH ANTI CD40 ANTIBODIES}
본 발명은 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 병용 치료제, 및 이의 사용 방법에 관한 것이다. 병용 치료제는 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 (b) CD40 이외의 면역 관문 분자(immune checkpoint molecule)에 특이적으로 결합하는 추가의 면역치료제를 포함한다. 본 발명은 또한 본 발명의 병용 치료제를 사용하기 위한 키트 및 방법에 관한 것이다.
암은 선진국에서 조기 사망의 주요 원인이다. 암에서의 면역치료의 목표는 종양, 특히 고형 종양에 대한 신체에 의한 효과적인 면역 반응을 증가시키는 것이다. 이것은 예를 들어 종양 항원에 대한 내약성을 파괴하고, 항종양 면역 반응을 증대시키고 종양 부위에서 국소 사이토카인 반응을 자극함으로써 달성될 수 있다. 오래 지속하는 항종양 면역 반응의 중요한 이팩터 세포는 활성화 종양 특이적 이팩터 T 세포이다. 예를 들어, 수지상 세포에 의한 이팩터 T 세포의 불완전 활성화는 비효율적인 항종양 반응을 발생시키는 T 세포 아네르기를 발생시킬 수 있는 반면, 수지상 세포에 의한 적절한 유도는 활성화 이팩터 T 세포의 강력한 증식을 생성하여, 종양에 대한 면역 반응을 재지향시킬 수 있다.
세포 표면 CD40 수용체 분자는 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리(tumour necrosis factor receptor superfamily; TNFR)의 구성원이고, 선천성 및 후천성 면역 반응 둘 다에서 중요한 조절자이다. 이것은 인간 항원 제시 세포, 특히 B 세포, 수지상 세포 및 대식세포에서 및 정상 세포, 예컨대 섬유아세포, 평활근 세포, 내피 세포 및 상피 세포에서 발현된다. 더구나, 이것은 고형 종양, 흑색종 및 암종의 30% 내지 70%인 모든 B 림프종을 포함하는 광범위한 종양 세포에서 발현된다.
CD154 또는 CD40L이라 칭하는, CD40의 천연 리간드는 성숙 T 림프구에서 주로 발현된다. CD40L 매개 신호전달은 사이토카인 및 케모카인의 면역 세포 활성화, 증식 및 생성을 포함하는 몇몇 생물학적 사건을 촉발한다. 따라서, CD40 수용체를 통한 자극은 세포 및 면역 기능을 증대시킨다. 세포 매개 면역 반응에서의 이의 역할은 널리 공지되어 있다. 예를 들어, CD40 자극을 통한 수지상 세포의 활성화는 이팩터 T 세포의 활성화를 유도한다. CD40 작용제에 의한 치료는 따라서 면역 반응을 재지향시키고 종양에 지향된 이팩터 T 세포를 증식시키는 수단을 제공할 수 있다.
항종양 효과는 몇몇 항-CD40 항체에 대해 보고되었고, 몇몇 기전이 확인되었다. 항원 제시 세포의 활성화, 특히 종양 특이적 세포독성 T 림프구 및 천연 살해 세포(NK 세포)에 의한 활성 증가를 포함하는 간접 효과가 CD40 음성 종양에 대해 관찰된다. 간접 및 직접 항종양 기전 둘 다가 CD40 양성 종양에 관찰되었고, 종양 세포에 결합하는 CD40 항체는 세포 아폽토시스를 유도한다. 항종양 활성에 대한 이들 기전은 항체 매개 세포내 세포독성(antibody mediated cellular cytotoxicity; ADCC)에 의해 보완될 수 있다. 그러나, 항-CD40 항체의 투여는 또한 부작용, 예컨대 사이토카인 방출 증후군과 연관된다.
따라서, 고형 종양을 치료하는 데 사용하기에 적합한 개선된 암 치료, 특히 항-CD40 항체 및 이의 병용 치료제에 대한 수요가 여전하다.
본 발명의 제1 양상은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 데 사용하기 위한 병용 치료제를 제공하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁하고, 추가의 면역치료제는 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합한다.
일 실시형태에서, 고형 종양은 선종, 아세포종, 암종, 섬유성 종양(desmoid tumour), 섬유조직형성 소형 원형 세포 종양(desmopolastic small round cell tumour), 내분비 종양, 배아 세포 종양, 림프종, 육종, 윌름스 종양(Wilms tumour), 폐 종양, 결장 종양, 림프 종양, 유방 종양 및 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, 고형 종양은 흑색종, 예컨대 전이성 흑색종일 수 있다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 무손상 항체(intact antibody)를 포함하거나 이로 이루어진다.
대안적인 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 Fv 단편(예컨대, 단쇄 Fv 단편, 또는 다이설파이드 결합 Fv 단편) 및 Fab 유사 단편(예컨대, Fab 단편; Fab' 단편 또는 F(ab)2 단편)으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원 결합 단편을 포함하거나 이로 이루어진다.
일 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 또는 인간화된다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 적어도 하나의 CDR, 또는 이의 '코어' CDR 서열을 포함한다(서열 상세내용에 대해 하기 실시예 1 참조).
따라서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 1, 2 및 3 및/또는 서열 번호 4, 5 및 6의 CDR 서열, 또는 이의 '코어' CDR 서열을 포함한다.
예를 들어, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 11의 경쇄 불변 영역 및/또는 서열 번호 12의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
따라서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7과 서열 번호 11의 경쇄 및/또는 서열 번호 8과 서열 번호 12의 중쇄를 포함하거나 이들로 이루어진다.
본 발명의 병용 치료제는 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 암의 치료에서 효과적인 추가의 면역치료제를 추가적으로 포함한다. 추가의 면역치료제의 치료학적 이익이 저해 면역 관문 분자의 기능을 약화시킴으로써 및/또는 자극 면역 관문 분자의 기능을 활성화함으로써 매개될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
또 다른 실시형태에서, 추가의 면역치료제는
(a) PD-1에 결합하는 면역치료제;
(b) CTLA-4에 결합하는 면역치료제;
(c) OX40에 결합하는 면역치료제; 및
(d) CD137에 결합하는 면역치료제로 이루어진 군으로부터 선택된다.
따라서, 추가의 면역치료제는 PD1 저해제, 예컨대 PD1 기능을 저해할 있는 항-PD1 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 람브롤리주맙, 피딜리주맙 및 AMP-224)일 수 있다. 대안적으로, PD1 저해제는 PD1 기능을 저해할 있는 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, MEDI-4736 및 MPDL3280A)을 포함하거나, 이들로 이루어질 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 추가의 면역치료제는 CTLA-4 저해제, 예컨대 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
추가의 실시형태에서, 추가의 면역치료제는 OX40, 예컨대 작용성 항-OX40 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 활성화한다.
훨씬 추가의 실시형태에서, 추가의 면역치료제는 CD137, 예컨대 작용성 항-CD137 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 활성화한다.
(상기 기재된 바와 같은) 2개의 활성제의 존재가 대상체에서 고형 종양의 치료에서 상승적 이익을 제공할 수 있는 것으로 당해 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다. "상승적"에 의해 본 발명자들은 (예를 들어, 종양의 성장 속도 또는 크기를 참조하여 결정된 바대로) 병용되는 2개의 물질의 치료학적 효과가 홀로 투여되는 2개의 물질의 상가적 치료학적 효과를 초과한다는 것을 포함한다. 이러한 상승효과는 고형 종양의 관련 세포주 모델에서, 단독의 및 병용의, 활성제를 시험함으로써 확인될 수 있다.
임의적으로, 병용 치료제는 암의 치료에서의 효능을 가지는 제3 면역치료제를 추가로 포함한다.
예를 들어, 병용 치료제는 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분, (b) PD1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (c) CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함할 수 있다.
본 발명의 제2 양상은, 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제와 병용되어 사용하기 위한 것이다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
일 실시형태에서, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제는 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
본 발명의 관련 제3 양상은, 고형 종양을 치료하기 위한 약제의 제조에서의, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도를 제공하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제와 병용되어 사용하기 위한 것이다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
일 실시형태에서, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제는 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
본 발명의 제4 양상은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
일 실시형태에서, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제는 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
본 발명의 제5 양상은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하는 고형 종양을 치료하기 위한 키트를 제공하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
일 실시형태에서, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제는 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
본 발명의 제6 양상은 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계 및 (b) 암의 치료에서 효능을 가지는, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 추가의 면역치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계의, 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
일 실시형태에서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
일 실시형태에서, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제는 본 발명의 제1 양상과 관련하여 상기 기재되어 있다.
추가의 실시형태에서, 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행되거나, 단계 (b)는 단계 (a) 후 24시간 내지 2주에, 단계 (a) 후 24시간 내지 1주에, 단계 (a) 후 24 내지 72시간에, 또는 단계 (a) 후 24시간 내지 48시간에 수행된다.
일 실시형태에서, 단계 (a)는 종양 부위에 대한 항체의 국소 투여를 포함한다.
일 실시형태에서, 단계 (a)에서 투여된 항체의 양의 적어도 30%는 투여 후 4시간에 종양 부위에 보유되고, 바람직하게는 상기 양의 적어도 40%는 투여 후 4시간에 종양 부위에 보유된다.
일 실시형태에서, 단계 (b)의 추가적인 치료제는 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체에 의한 전신 투여에 적합한 조성물로서 제제화된다.
일 실시형태에서, 단계 (a)는 복수의 별개의 경우에 수행되고, 단계 (b)는 추가적인 치료제에 대한 대상체의 노출이 상기 방법의 기간 동안 연속적이도록 수행된다.
일 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
본 발명자들은 소정의 항-CD40 항체가 대상체에 대한 투여 후 고형 종양의 부위에서 보유된다는 것을 또한 놀랍게도 밝혀냈다. 따라서, 항체의 오직 작은 비율이 종양 부위로부터 대상체의 혈관 또는 림프 순환으로 빠져나간다.
이것은 매우 효과적인 치료, 및 감소한 부작용을 발생시켜서, 더 낮은 용량의 항체가 사용되게 한다. 이 이점은 이러한 항체가 대상체에서 종양 부위에 국소로 투여될 때 특히 명확하지만, 항체가 전신으로 투여될 때에도 명확할 수 있다.
그러나, 항-CD40 항체가 전신으로, 예를 들어 정맥내 또는 피하로 대상체에게 또한 투여될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.
본 발명자들은 추가적인 치료제의 대상체에 대한 전신 투여에 의해 종양 부위에서 보유된 항-CD40 항체의 병용 투여가 항-CD40 항체 단독의 투여에 비해 치료 효과의 개선을 발생시킨다는 것을 또한 놀랍게도 밝혀냈다.
본 발명은 따라서 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 (a) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된, 항체의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계 및 임의적으로 (b) 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 전신으로 투여하는 단계를 포함한다. 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행될 수 있다. 대안적으로, 단계 (a) 및 (b)는 순차적으로 수행될 수 있고, 단 단계 (a)는 단계 (b)에 선행한다. 단계 (a)에서, 항-CD40 항체는 바람직하게는 종양에 국소로 투여된다.
본 발명은 또한 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 키트를 제공하고, 상기 키트는 (a) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된, 항체의 치료학적 유효량 및 임의적으로 (b) 대상체에 대한 전신 투여에 적합한 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 포함한다. CD40에 특이적으로 결합하는 항체는 바람직하게는 종양에 대한 국소 투여에 적합한 형태로 제공된다.
서열 목록의 간단한 설명
서열 번호 1, 2 및 3은 항체 G12의 경쇄의 각각 CDR 1, 2 및 3이다(IMGT 넘버링에 따라 정의됨).
서열 번호 4, 5 및 6은 항체 G12의 중쇄의 각각 CDR 1, 2 및 3이다(IMGT 넘버링에 따라 정의됨).
서열 번호 7 및 8은 항체 G12의 각각 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열이다.
서열 번호 9 및 10은 항체 G12의 각각 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 핵산 서열이다.
서열 번호 11은 예시적인 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열 번호 12는 예시적인 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열이다.
서열 번호 13은 인간 CD40의 아미노산 서열이다.
도 1은 100㎍의 용량에서 종양내로(IT), 종양주변으로(PT) 또는 정맥내로(IV) 항체의 투여 후 hCD40 음성 방광암 세포 MB49의 종양을 보유하는 hCD40tg 마우스의 혈청에서 검출 가능한 항체의 수준을 보여준다.
도 2는 피하 또는 정맥내 경로를 통한 표시된 용량에서의 항체의 투여 후 사이노몰거스 원숭이의 혈액 샘플에서 검출 가능한 항체의 수준을 보여준다.
도 3은 (A) B16.F10(hCD40+) 클론 5.G12.46 세포 및 (B) 모의 형질감염된 세포에 의한 세포 표면 인간 CD40 발현의 유세포분석 분석의 결과를 보여준다.
도 4A는 대조군 ADC-1013 단독, 또는 ADC-1013과 항-PD-1 항체("PD-1")에 의한 치료 후 피하 B16.F10(hCD40+) 흑색종을 보유하는 hCD40tg 마우스의 생존율을 보여준다.
도 4B는 제1 마우스가 희생되는 날에 각각의 치료 그룹에 대한 종양 용적을 보여준다. 그래프는 2개의 개별 실험(n=16)으로부터의 풀링된 데이터를 보여준다. 상당한 항종양 효능 및 증가한 생존이 ADC-1013 치료에 의해 입증되었다. 개선된 항종양 효능 및 개선된 생존이 항-PD-1에 의한 병용 치료에 의해 관찰되었다(* = p < 0.05, ** = < 0.01, 생존에 대한 로그 랭크 시험 및 종양 용적에 대한 만 휘트니(Mann Whitney) 시험).
도 5a는 마우스 종양 모델에서 항-CD40 항체의 상이한 투여 방식 후 배수 림프절에서 CD11c 양성 세포의 활성화에 대한 검정의 결과를 보여준다. 종양내 투여(IT), 복강내 투여(IP). 활성화는 평균 형광 강도(mean fluorescent intensity; MFI)에 의해 측정된 CD86 발현 수준에 의해 표시된다.
도 5b는 마우스 종양 모델에서 항-CD40 항체의 상이한 투여 방식 후 배수 림프절에서 CD11b 양성 세포의 활성화에 대한 검정의 결과를 보여준다. 종양내 투여(IT), 복강내 투여(IP). 활성화는 평균 형광 강도(MFI)에 의해 측정된 CD86 발현 수준에 의해 표시된다.
도 6. B16.F10.hCD40+ 종양을 하나의 옆구리에 접종하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013을 종양내로 투여하였다(용량마다 100㎍). 항-PD-1, 용량마다 250㎍(클론 RPM1-14, BioXcell) 및 항-CTLA-4 항체, 용량마다 100㎍(9D9, BioXcel)을 복강내 주사하였다. 14일에 종양 용적이 도시되어 있다.
도 7. B16.F10 종양을 하나의 옆구리에 접종하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013, 항-CD137(Lob 12.3) 및 항-OX40(CD86) 항체 및 대조군을 종양내로 투여하였다(용량마다 100㎍). 종양 용적은 시간에 따랐다.
도 8. ADC-1013 또는 대조군(종양내, 3일, 6일 및 9일에 100㎍)에 의한 치료 후 B16.F10(wt) 종양에서의 항종양 효과와 비교된 B16.F10.hCD40+ 종양에서의 ADC-1013의 항종양 효과.
도 9. ADC-1013(30㎍)을 확립된 림프종 종양(A20)을 가지는 hCD40tg-BalbC(F1) 마우스에서 10일, 13일, 16일에 종양내로 투여하였다. 시간에 따른 종양 용적 및 생존이 도면에 제시되어 있다.
도 10. ADC-1013(100㎍)을 확립된 종양(LLC-1)을 가지는 hCD40tg 마우스에서 4일, 7일, 10일에 종양내로 투여하였다. 시간에 따른 종양 용적이 도면에 제시되어 있다.
도 11. B16.F10 흑색종 암 전이 모델에서의 항종양 효과. 종양 접종 후 3일, 6일 및 9일에, 오른쪽 옆구리에서 종양에서 종양주변으로 100㎍의 ADC-1013을 받은, 각각의 옆구리에서 하나의 종양을 가지는 hCD40tg 마우스. 주사된 종양(오른쪽 종양) 및 비주사된 종양(왼쪽) 둘 다에 대한 시간에 따른 종양 용적이 도면에 표시되어 있다.
도 12. 16일에서의 종양 용적. ADC-1013을 확립된 흑색종 종양(B16.F10.hCD40+)을 가지는 hCD40tg 마우스(100㎍(n=12))에서 3일, 6일 및 9일에 정맥내로 투여하였다.
도 13은 BalbC 마우스에서 피하 A20 림프종 종양에서 (시간에 따른 생존으로 측정된) 항종양 효과를 보여준다. 마우스를 5일 및 8일에 종양주변으로 9D9(항-CTLA-4 항체, BioXcel)에 의해 치료하고, 5일, 8일 및 11일에 종양내로 TLR 작용제 CpG(1668)에 의해 치료하였다.
개시된 병용 치료제 및 방법의 상이한 적용이 당해 분야에서 특정한 수요에 맞춰질 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 사용된 전문용어가 단지 본 발명의 특정한 실시형태를 기술할 목적을 위한 것이고, 제한인 것으로 의도되지 않는 것으로 또한 이해되어야 한다.
또한, 본 명세서 및 첨부된 청구항에 사용된 바대로, 단수 형태 "하나", "일" 및 "이"는, 문맥이 달리 명확히 표시하지 않는 한, 복수 지칭을 포함한다. 따라서, 예를 들어 "일 항체"에 대한 언급은 "항체"를 포함하고, "일 항원"에 대한 언급은 2개 이상의 이러한 항원을 포함하고, "일 대상체"에 대한 언급은 2개 이상의 이러한 대상체를 포함하고, 기타 등등이다.
"폴리펩타이드"는 본 명세서에서 2개 이상의 아단위 아미노산, 아미노산 유사체 또는 다른 펩티도모방체의 화합물을 언급하도록 이의 광의로 사용된다. 용어 "폴리펩타이드"는 따라서 짧은 펩타이드 서열 및 또한 더 긴 폴리펩타이드 및 단백질을 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "아미노산"은 글라이신 및 D 또는 L 광학 이성질체 둘 다 및 아미노산 유사체 및 펩티도모방체를 포함하는 천연 및/또는 비천연 또는 합성 아미노산을 의미한다.
"고형 종양의 부위에 보유된"에 의해, 본 발명자들은 항-CD40 항체가 종양 부위로부터 오직 천천히 방출된다는 것을 포함한다. 종양 부위에서의 항체의 보유는 투여 이후 항체의 혈청 수준을 모니터링함으로써 평가될 수 있다(문헌[Mangsbo et al., 2014, Clin. Cancer Res. 21(5):1115-1126](이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨) 참조). 예를 들어, 일 실시형태에서, (60㎕ 중의) 30㎍의 항체의 종양내 주사 후 4시간에 항-CD40의 혈청 수준은 1㎕/㎖ 미만이다.
물질의 "치료학적 유효량"이란, 병태 또는 이의 징후 중 하나 이상을 치유하거나 경감시키거나 부분적으로 정지시키기에 충분한 양으로 소정의 물질이 병태를 겪는 대상체에게 투여된다는 것을 의미하다. 이러한 치료학적 치료는 질환 징후의 중증도를 감소시키거나, 징후 무 기간의 빈도 또는 기간을 증가시킬 수 있다. 소정의 목적 및 소정의 물질에 대한 유효량은 질환 또는 상해의 중증도, 및 대상체의 체중 및 일반 상태에 따라 달라질 것이다. 본 명세서에 사용되는 바대로, 용어 "대상체"는 임의의 포유류, 바람직하게는 인간을 포함한다.
본 명세서에 인용된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은, 상기든 또는 하기든, 본 명세서에 그 전문이 참고로 포함된다.
방법
본 발명은 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법을 제공한다. 종양은 통상적으로 악성이고, 전이성일 수 있다.
고형 종양은 전통적으로 이것이 기원하는 조직, 예를 들어 유방, 결장 등에 의해 정의된다. 그러나, 면역치료제가 면역계 및 종양 자체가 아니라 면역계에 작용하므로, 종양의 면역 상태는 종양의 기원보다는 반응을 더 예측할 수 있다. 본 명세서에 제시된 지지 연구에서, 2개의 상이한 모델, 더 자세히, 흑색종 모델, B16.F10(인간 CD40을 가지는 것 및 가지지 않는 것) 및 MB49 방광 종양 모델. 하기 실시예에 제시된 데이터는 MB49가 B16.F10보다 더 면역원성이라는 것을 보여준다. 그러나, 모델 둘 다에서 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-CD40 항체에 의한 치료 후 상당한 항종양 효과가 관찰되었다. 따라서, 본 발명은 면역원성 종양(예컨대, MB49) 및 불량한 면역원성 모델(예컨대, B16.F10) 둘 다에서 항종양 효과를 제공한다.
따라서, 본 발명의 일 실시형태에서, 종양은 면역원성이다. 이러한 종양은 면역 세포, 예컨대 T 세포 및 골수성 기원의 세포의 침윤을 특징으로 한다. CD8 T 세포의 침윤, 즉 더 면역원성인 종양 프로필이 예를 들어 결장암에서 치료 후 우수한 예후와 상관되는 것으로 입증된다(Galon et al., 2014, J. Pathol. 232(2):199-209).
본 발명의 대안적인 실시형태에서, 종양은 비면역원성이거나 불량하게 면역원성이다. 불량한 면역원성 종양은 대개 낮은 또는 부재한 MHCI 발현을 가지고, 적은 수의 침윤 면역 세포, 예컨대 T 세포 및 골수성 기원의 세포를 특징으로 한다(Lechner et al., 2013, J Immunotherapy 36(9):477-89). 종양은 선종, 선암, 아세포종, 암종, 섬유성 종양, 섬유조직형성 소형 원형 세포 종양, 내분비 종양, 배아 세포 종양, 림프종, 육종, 윌름스 종양, 폐 종양, 결장 종양, 림프 종양, 유방 종양 또는 흑색종일 수 있다.
아세포종의 유형은 간암세포종, 교모세포종, 신경아세포종 또는 망막아세포종을 포함한다. 암종의 유형은 결장직장 암종 또는 헵타세포 암종, 췌장, 전립선, 위, 식도, 자궁경부 및 두경부 암종 및 선암을 포함한다. 육종의 유형은 유잉 육종, 골육종, 횡문근육종, 또는 임의의 다른 연조직 육종을 포함한다. 흑색종의 유형은 악성 흑색점, 악성 흑색점 흑색종, 표재 확산 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 점막성 흑색종, 결절성 흑색종, 용종양 흑색종, 결합조직형성 흑색종, 무색소성 흑색종, 연조직 흑색종, 작은 모반 유사 세포를 가지는 흑색종, 스피츠 모반의 특징을 가지는 흑색종 및 포도막 흑색종을 포함한다. 림프종의 유형은 전구체 T 세포 백혈병/림프종, 소포성 림프종, 미만성 큰 B 세포 림프종, 외투 세포 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병/림프종, MALT 림프종, 버킷 림프종, 균상 식육종, 말초 T 세포 림프종, 호지킨 림프종의 결절 경화 형태, 호지킨 림프종의 혼합세포형 아형을 포함한다. 폐 종양의 유형은 비소세포 폐암의 종양(선암, 편평 세포 암종 및 대세포 암종) 및 소세포 폐 암종을 포함한다.
흑색종의 발생률이 증가하고, 대략 200,000건의 새로운 사례가 매년 세계에서 진단된다. 더욱이, 흑색종은 원발성 종양, 및 전이 둘 다가 대개 쉽게 접근 가능하므로 클리닉에서 국소 투여에 매우 훌륭히 적합하다. 따라서, 본 발명의 방법을 위해, 종양은 바람직하게는 흑색종이고, 가장 바람직하게는 전이성 흑색종이다. 종양은 높은 락테이트 탈수소효소 시험 결과로 인해 전이성으로 분류될 수 있다. 종양은 하기 병기 중 임의의 하나로 분류될 수 있지만, 바람직하게는 병기 III 또는 IV이다.
병기 0: 상피내 흑색종(Clark 수준 I), 99.9% 생존
병기 I/II: 침윤성 흑색종, 89-95% 생존
T1a: 1.0㎜ 미만의 원발성 종양 두께, 궤양 및 유사분열 없음 < 1/㎟
T1b: 1.0㎜ 미만의 원발성 종양 두께, 궤양 또는 유사분열 가짐 ≥ 1/㎟
T2a: 1.01-2.0㎜의 원발성 종양 두께, 궤양 없음
병기 II: 고위험 흑색종, 45-79% 생존
T2b: 1.01-2.0㎜의 원발성 종양 두께, 궤양 가짐
T3a: 2.01-4.0㎜의 원발성 종양 두께, 궤양 없음
T3b: 2.01-4.0㎜의 원발성 종양 두께, 궤양 가짐
T4a: 4.0㎜ 초과의 원발성 종양 두께, 궤양 없음
T4b: 4.0㎜ 초과의 원발성 종양 두께, 궤양 가짐
병기 III: 국소 전이, 24-70% 생존
N1: 단일 양성 림프절
N2: 2개 내지 3개의 양성 림프절 또는 국소 피부/이동성 전이
N3: 4개의 양성 림프절 또는 1개의 림프절 및 국소 피부/이동성 전이
병기 IV: 원격 전이, 7-19% 생존
M1a: 원격 피부 전이, 정상 LDH
M1b: 폐 전이, 정상 LDH
M1c: 다른 원격 전이 또는 상승된 LDH를 가지는 임의의 원격 전이
본 발명의 방법은 (a) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된, 항체의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계 및 임의적으로 (b) 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 전신으로 투여하는 단계를 포함한다. 종양 부위에서의 항체의 보유는 하기 더 자세히 기재되어 있다. 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행될 수 있다. 대안적으로, 단계 (a) 및 (b)는 순차적으로 수행될 수 있고, 단 단계 (a)가 단계 (b)에 선행한다. 단계 (a)에서, 항-CD40 항체는 바람직하게는 종양으로 국소로 투여된다.
본 발명의 방법은 몇몇 이점을 가진다. 첫째로, 항-CD40 항체가 종양 부위에 보유되므로, 이것은 치료제로서 매우 효과적이다. 더욱이, 항-CD40 항체에 대한 전신 노출이 감소하여서, 더 낮은 용량의 항체가 사용되게 하고, 부작용이 더 적게 한다. 단계 (b)가 수행될 때, 치료 효과가 추가로 개선된다.
본 발명은 또한 하기를 제공한다:
- 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된 항체(상기 방법은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계 및 임의적으로 (b) 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 전신으로 투여하는 단계를 포함함). 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행될 수 있다. 대안적으로 단계 (a) 및 (b)는 순차적으로 수행될 수 있고, 단 단계 (a)가 단계 (b)에 선행한다. 단계 (a)에서, 상기 항-CD40 항체는 바람직하게는 종양에 국소로 투여된다.
- 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 약제의 제조에서의, CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된 항체의 용도(상기 치료는 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체의 치료학적 유효량을 종양에 투여하는 단계 및 임의적으로 (b) 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 전신으로 투여하는 단계를 포함함). 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행될 수 있다. 대안적으로 단계 (a) 및 (b)는 순차적으로 수행될 수 있고, 단 단계 (a)가 단계 (b)에 선행한다. 단계 (a)에서, 상기 항-CD40 항체는 바람직하게는 종양에 국소로 투여된다.
- (1) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된 항체 및 임의적으로 (2) 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 방법에서 동시, 별개 또는 순차 사용을 위한 추가적인 치료제를 함유하는 생성물(상기 방법은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체의 치료학적 유효량을 종양에 투여하는 단계 및 임의적으로 (b) 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 전신으로 투여하는 단계를 포함함). 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행될 수 있다. 대안적으로 단계 (a) 및 (b)는 순차적으로 수행될 수 있고, 단 단계 (a)가 단계 (b)에 선행한다. 단계 (a)에서, 상기 항-CD40 항체는 바람직하게는 종양에 국소로 투여된다.
단계 (a) 및 (b)의 시기 및 순서
단계 (a) 및 (b)는 바람직하게는 순차적으로(즉, 상이한 시간에) 수행되고, 단계 (a)는 단계 (b) 전에 수행된다.
단계 (a) 및 (b)는 바람직하게는 조합된 항종양 효과가 최적화되는 간격으로 분리된다. 이것은 통상적으로 단계 (b)가 단계 (a) 후 충분히 긴 간격 동안 수행되어서, 단계 (a)의 적어도 하나의 생리학적 효과가 이의 피크 수준이거나 이에 가깝다는 것을 의미한다. 예를 들어, 항-CD40 항체는 통상적으로 수지상 세포를 자극할 것이고, 이것은 결국 종양 특이적 T 세포를 활성화한다. 활성화 T 세포는 항-CD40에 의한 치료의 대략 24시간 내에 더 높은 수준의 면역계 관문 분자(예컨대, PD-1)를 발현하기 시작한다. 이들 면역계 관문 분자는 항종양 반응을 부정적으로 조절할 수 있다. 단계 (b)에서 투여된 물질은 따라서 바람직하게는 이러한 면역계 관문의 이러한 활성을 차단하거나 저해하는 물질(예컨대, 항-PD1 또는 항-PDL1 항체)일 수 있다. 단계 (b)에서 투여된 물질이 이러한 물질일 때, 단계 (b)는 바람직하게는 단계 (a) 후에 충분히 긴 간격 동안 수행되어서, 대상체에서의 세포에서의 면역계 관문 분자의 발현 수준 또는 상기 면역계 관문 분자를 발현하는 대상체에서의 세포의 수는 단계 (a) 전에 대상체에서의 상기 수준 또는 수와 관련하여, 또는 건강한 대상체에서의 상기 수준 또는 수와 관련하여 상승한다. 이 맥락에서, 단계 (b)는 바람직하게는 단계 (a) 후 24시간 내지 2주에, 단계 (a) 후 24시간 내지 1주에, 단계 (a) 후 24시간 내지 72시간에, 또는 단계 (a) 후 24시간 내지 48시간에 수행된다.
대안적으로, 단계 (b)는 단계 (a) 후 시점에서 수행될 수 있고, 여기서 대상체에서의 세포에서의 면역계 관문 분자의 발현 수준 또는 상기 면역계 관문 분자를 발현하는 대상체에서의 세포의 수는 단계 (a) 전에 대상체에서의 상기 수준 또는 수와 관련하여, 또는 건강한 대상체에서의 상기 수준 또는 수와 관련하여 결정된다.
대상체에서의 세포에서의 면역계 관문 분자의 발현 수준 또는 이러한 분자를 발현하는 대상체에서의 세포의 수는 임의의 적합한 수단에 의해, 예를 들어 대상체로부터 취한 샘플의 유세포분석 분석에 의해 결정될 수 있다.
대안적으로, 단계 (a) 및 (b)를 동시에(즉, 동일 시간에), 또는 서로 24시간 내에 수행하는 것이 바람직할 수 있어서, 단계 둘 다는 동일한 일자에 또는 치료 센터에 대한 동일한 방문 동안 수행될 수 있다. 이것은 치료 센터에 대한 접근이 제한될 때 특히 유리할 수 있다. 이 맥락에서, 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행될 수 있거나, 24시간 미만 떨어져, 12시간 미만 떨어져, 10시간 미만 떨어져, 6시간 미만 떨어져, 4시간 미만 떨어져, 3시간 미만 떨어져, 또는 2시간 미만 떨어져 수행될 수 있다.
임의의 상기 실시형태에서, 단계 (a)는 제1 경우 후 다수의 추가의 경우에 수행될 수 있다. 즉, 대상체는 항-CD40 항체의 일련의 용량을 받을 수 있다. 이 용량은 대상체가 항-CD40 항체에 대한 오직 간헐적인 노출을 가지도록, 바람직하게는 대상체의 면역 세포가 결핍되지 않도록 및/또는 대상체가 항-CD40 항체에 대한 속성 내성(tachyphylaxia)을 겪지 않도록 투여된다. 이들 징후 중 어느 하나의 검출 시, 항-CD40 항체의 다음의 투여는 지연되거나 취소될 수 있다. 항-CD40의 다수의 용량이 투여되면, 단계 (b)는 바람직하게는, 단계 (b)의 개시 후, 단계 (a)의 임의의 제2 및 추가의 경우 동안을 포함하여, 방법의 기간 동안 추가적인 치료제에 대한 대상체의 연속 노출을 허용하는 방식으로 수행된다. 이것은 추가적인 물질이 면역계 관문의 이러한 활성을 차단하거나 저해하는 물질(예컨대, 항-PD1 또는 항-PDL1 항체)인 경우 특히 적절할 수 있다. 연속 수용체 봉쇄는 이러한 물질의 치료학적 효과에 특히 중요할 수 있다.
단계 (a)
상기 방법의 단계 (a)는 고형 종양을 가지는 대상체에 대한 항-CD40 항체의 국소 또는 전신 투여에 관한 것이다. 종양 부위에 대한 국소 투여가 바람직하고, 임의의 적합한 수단, 예컨대 주사에 의해 종양주변, 종양근방, 종양내, 병변내, 병변주변, 두개내 및 물집내 투여를 포함한다. 국소 투여는 종양의 부위에 따라 공동내 점적주사 및 흡입을 또한 포함할 수 있다.
높은 비율의 항-CD40 항체는 상기 항체의 투여 후 연장된 시간 기간 동안, 종양 미세환경 내인, 생체내 종양 부위에서 보유될 것이다. 즉, 항체는 특히 종양 부위에 국소로 투여될 때 종양 부위로부터 혈관 또는 림프 순환으로 감소한 누수를 나타낸다. 바람직하게는, 상기 방법에 따라 종양으로 투여되는 항체의 적어도 30%는 투여 후 4시간에 종양 부위에 보유되고, 더 바람직하게는 용량의 적어도 40%는 투여 후 4시간에 종양 부위에 보유되고, 가장 바람직하게는 용량의 적어도 50%는 투여 후 4시간에 종양 부위에 보유된다.
종양 미세환경에서의 항체 보유는 쥣과 모델에서 항체를 종양으로 주사하고 투여 후 시간에 따라 항체의 혈청 수준을 측정함으로써 연구될 수 있다. 대안적으로, 항체의 분포는 쥣과 모델에서 종양으로 주사된 방사선 표지된 항체를 사용하여 측정될 수 있다. 적합한 기법은 실시예에 기재되어 있다.
생체내 종양 미세환경 내의 pH는 건강한 조직의 것보다 상당히 더 산성이다. 종양에 대한 범위는 건강한 조직에 대해 7.2 내지 7.4와 비교하여 대략 pH 6.5 내지 7.2 또는 6.6 내지 7.0으로 보고된다. 이 산도는 주로 감소한 혼돈상태 혈류에 의한 불량하게 조직화된 맥관구조의 결과로서 단기간 또는 장기간 저산소증으로 처리된 종양 영역에서의 혐기성 해당작용 및 심지어 산소의 존재 하에 해당 대사 경로가 사용되는 일반 암 표현형 특성인 호기성 해당작용(바르부르크 효과(Warburg effect))으로 인한다. 이 산도를 고려하면, 본 발명의 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 바람직하게는 높은 등전점을 가질 수 있는데, 왜냐하면 이것이 더 낮은 등전점을 가지는 유사한 항체에 비해 종양 미세환경에서의 개선된 보유를 발생시킬 것이기 때문이다.
항체의 등전점은 임의의 적합한 방법에 의해 결정될 수 있다. 이것은 시험관내, 예를 들어 전기영동 방법에 의해 결정될 수 있다. 대안적으로, 등전점은 기본 원칙으로부터 계산될 수 있다. 이러한 경우에, 생성된 등전점은 통상적으로 이론적 등전점이라 칭해진다. GP-MAW(버전 9.2, 라이트하우스 데이터(Lighthouse Data)로부터)와 같은 수많은 소프트웨어 프로그램은 이론적 등전점의 인실리코 계산을 위해 존재한다. 본 발명의 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 바람직하게는 9.0 이상, 바람직하게는 9.1 이상, 더 바람직하게는 9.2 이상, 또는 9.25 이상, 가장 바람직하게는 9.3 이상의 이론적 등전점(pI)을 가진다.
단계 (b)
상기 방법의 단계 (b)는 대상체에 대한 추가적인 치료제의 전신 투여에 관한 것이다. 본 명세서에 기재된 임의의 물질(단계 (a)의 항-CD40 항체 포함)의 전신 투여는 혈관 및/또는 림프계를 포함하는 대상체의 순환계로의 투여를 의미한다. 이러한 투여는 임의의 적합한 경로에 의할 수 있지만, 통상적으로 비경구이다.
구절 "비경구 투여"는, 본 명세서에 사용되는 바대로, 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 통상적으로 주사, 점적주사 또는 이식에 의해 달성된다. 적합한 경로는 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 피하, 척추, 뇌내, 척추강내, 골내 또는 다른 비경구 투여 경로를 포함한다.
항체
일반사항
본 명세서에서 언급된 용어 "항체"는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원 결합 부분") 또는 이의 단쇄를 포함한다. 항체는 이황화 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 이의 항원 결합 부분을 의미한다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 명세서에서 VH라 축약) 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 명세서에서 VL이라 축약) 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(framework region; FR)이라 칭하는 더 보존된 영역에 의해 배치된 상보성 결정 영역(complementarity determining region; CDR)이라 칭하는 과변이의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 항체의 불변 영역은 전통적인 보체 시스템의 제1 성분(Clq) 및 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이팩터 세포)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
중쇄는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 아형), IgA(IgA1 및 IgA2 아형), IgM 및 IgE를 포함하는 임의의 아이소타입을 가질 수 있다.
경쇄는 카파 사슬 및 람다 사슬을 포함한다.
자연에서 발생하는 것과 구별되는 물리적 환경에서 존재하도록 "단리된", 또는 아미노산 서열에서 천연 발생 항체와 다르도록 변형된, 항체 및 이의 항원 결합 단편이 특히 관련된다.
항체는 다중클론 항체 또는 단일클론 항체일 수 있다. 항체는 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체를 제조하기 위한 적합한 방법은 문헌["Monoclonal Antibodies; A manual of techniques", H Zola (CRC Press, 1988) 및 "Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Application", SGR Hurrell (CRC Press, 1982)]에 개시되어 있다. 재조합 기법을 또한 이용할 수 있다.
용어 항체의 "항원 결합 부분" 또는 "항원 결합 단편"은 항원, 예컨대 CD40에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 하나 이상의 항체의 단편을 의미한다. 항체의 항원 결합 기능이 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 용어 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포함된 결합 단편의 예는 Fab 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fd 단편, Fv 단편, dAb 단편 및 단리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 단쇄 항체, 예컨대 scFv 및 중쇄 항체, 예컨대 VHH 및 낙타 항체는 또한 용어 항체의 "항원 결합 부분" 내에 포함되도록 의도된다. 이들 항체 단편은 당해 분야의 당업자에게 공지된 종래의 기법을 이용하여 얻어질 수 있고, 단편은 무손상 항체와 동일한 방식으로 이용성에 대해 스크리닝될 수 있다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체는 인간 항체일 수 있다. 용어 "인간 항체"는, 본 명세서에 사용되는 바대로, 프레임워크 및 CDR 영역 둘 다가 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래한 가변 영역을 가지는 항체를 포함하도록 의도된다. 더욱이, 항체가 불변 영역을 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래한다. 본 발명의 인간 항체는 인간 생식선 면역글로불린 서열(예를 들어, 시험관내 랜덤 또는 부위 특이적 돌연변이유발 도입된 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)에 의해 코딩되지 않은 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 용어 "인간 항체"는, 본 명세서에 사용되는 바대로, 또 다른 포유류 종, 예컨대 마우스의 생식선으로부터 유래한 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 그래프팅된 항체를 포함하도록 의도되지 않고, 이러한 항체는 통상적으로 키메라 또는 인간화라 칭해진다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 인간 항체는 통상적으로 인간 단일클론 항체이다. 이러한 인간 단일클론 항체는 부동화된 세포에 융합된 인간 중쇄 전이유전자 및 경쇄 전이유전자를 포함하는 게놈을 가지는 전이유전자 비인간 동물, 예를 들어 전이유전자 마우스로부터 얻어진 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 제조될 수 있다. 인간 항체는 인간 림프구의 시험관내 면역화, 이어서 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스에 의한 림프구의 형질전환에 의해 또한 제조될 수 있다. 용어 "인간 항체 유도체"는 인간 항체의 임의의 변형 형태, 예를 들어 항체 및 또 다른 물질 또는 항체의 접합체를 의미한다.
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 항체는 대안적으로 인간화 항체일 수 있다.
용어 "인간화"는 비인간 종으로부터의 면역글로불린으로부터 유래한 항원 결합 부위 및 인간 면역글로불린의 구조 및/또는 서열에 기초한 남은 면역글로불린 구조를 가지는 재조합 기법을 이용하여 일반적으로 제조된 항체 분자를 의미한다. 항원 결합 부위는 인간 불변 도메인에 융합된 완전 비인간 항체 가변 도메인, 또는 오직 인간 가변 도메인의 적절한 인간 프레임워크 영역에 그래프팅된 이러한 가변 도메인의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함할 수 있다. 이러한 인간화 분자의 프레임워크 잔기는 야생형(예를 들어, 완전 인간)일 수 있거나, 이들은 서열이 인간화에 대한 기준으로서 작용하는 인간 항체에서 발견되지 않는 하나 이상의 아미노산 치환을 함유하도록 변형될 수 있다. 인간화는 분자의 불변 영역이 인간 개인에서 면역원으로서 작용하는 가능성을 감소시키거나 제거하지만, 외래 가변 영역에 대한 면역 반응의 가능성이 남는다(LoBuglio, A.F. et al. (1989) "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224). 또 다른 접근법은 인간 유래 불변 영역을 제공할 뿐만 아니라, 가변 영역을 변형하고, 또한 이들을 인간 형태에 가능한 가깝게 재성형하는 것에 초점을 둔다. 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 영역이, 비교적 소정의 종에서 보존적이고, CDR에 대한 스캐폴딩을 추정상 제공하는, 4개의 프레임워크 영역(FR)에 의해 플랭킹된, 해당 항원에 반응하여 변하고 결합 능력을 결정하는 3개의 상보성 결정 영역(CDR)을 함유한다는 것이 공지되어 있다. 비인간 항체가 특정한 항원과 관련하여 제조될 때, 가변 영역은 변형된 인간 항체에 존재하는 FR에서 비인간 항체로부터 유래한 CDR을 그래프팅함으로써 "재성형" 또는 "인간화"될 수 있다. 다양한 항체에 대한 이 접근법의 적용은 문헌[Sato, K. et al. (1993) Cancer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies for Therapy," Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) "Reshaping Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity," Science 239:1534-1536; Kettleborough, C. A. et al. (1991) "Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation," Protein Engineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) "Construction Of Reshaped Human Antibodies With HIV-Neutralizing Activity," Human Antibodies Hybridoma 2:124-134; Gorman, S. D. et al. (1991) "Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) "Reshaping A Human Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection in vivo," Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) "Humanized Antibodies For Antiviral Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carter, P. et al. (1992) "Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289; and Co, M.S. et al. (1992) "Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen," J. Immunol. 148:1149-1154]에 의해 보고되어 있다. 몇몇 실시형태에서, 인간화 항체는 모든 CDR 서열(예를 들어, 마우스 항체로부터 모든 6개의 CDR을 함유하는 인간화 마우스 항체)를 보존한다. 다른 실시형태에서, 인간화 항체는, 원래 항체로부터 하나 이상의 CDR로부터 "유래한" 하나 이상의 CDR이라 또한 칭해지는, 원래 항체와 관련하여 변경된, 하나 이상의 CDR(1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)을 가진다. 항원을 인간화하는 능력은 널리 공지되어 있다(예를 들어 미국 특허 제5,225,539호; 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,859,205호; 제6,407,213호; 제6,881,557호 참조).
본 명세서에 언급된 임의의 항체는 단리 형태로 제공될 수 있거나, 임의적으로 (직접적으로 또는 간접적으로) 또 다른 모이어티에 (직접적으로 또는 간접적으로) 연결되어 제공될 수 있다. 다른 모이어티는 치료학적 분자, 예컨대 세포독성 모이어티 또는 약물일 수 있다.
치료학적 분자는 예를 들어 화학 접합에 의해 본 발명의 항체에 직접적으로 부착될 수 있다. 분자를 항체에 접합하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 카보다이이미드 접합(Bauminger & Wilchek(1980) Methods Enzymol. 70, 151-159)은 항체 또는 펩타이드에 독소루비신을 포함하는 다양한 물질을 접합시키도록 이용될 수 있다. 수용성 카보다이이미드, 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필) 카보다이이미드(EDC)는 기능적 모이어티를 결합 모이어티에 접합하기에 특히 유용하다.
모이어티를 항체에 접합하기 위한 다른 방법을 또한 이용할 수 있다. 예를 들어, 적절한 반응물질의 과요오드산나트륨 산화, 이어서 환원 알킬화를 글루타르알데하이드 가교결합처럼 이용할 수 있다. 그러나, 본 발명의 접합체를 생성하는 방법이 선택되는 것과 무관하게, 항체가 이의 표적화 능력을 유지하고, 기능적 모이어티가 이의 관련 기능을 유지한다는 결정이 이루어져야 하는 것으로 인식된다.
세포독성 모이어티는 직접적으로 및/또는 간접적으로 세포독성일 수 있다. "직접적으로 세포독성"이란, 모이어티가 그 자체가 세포독성이라는 것을 의미한다. "간접적으로 세포독성"이란, 모이어티가 자체가 세포독성이 아니지만, 예를 들어 추가의 분자에 대한 이의 작용 또는 이것에 대한 추가의 작용에 의해 세포독성을 유도할 수 있다는 것을 의미한다. 세포독성 모이어티는 오직 세포내일 때 세포독성일 수 있고, 바람직하게는 세포외일 때 세포독성이 아니다.
바람직하게는, 항체 또는 항원 결합 단편은 직접적으로 세포독성 화학치료제인 세포독성 모이어티에 연결된다. 임의적으로, 세포독성 모이어티는 직접적으로 세포독성 폴리펩타이드이다. 세포독성 화학치료제는 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
세포독성 화학치료제, 예컨대 항암제는 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드, 예컨대 메클로레타민(HN2), 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜팔란(L-사르콜리신) 및 클로르암부실; 에틸렌이민 및 메틸멜라민, 예컨대 헥사메틸멜라민, 티오테파; 알킬 설포네이트, 예컨대 부술판; 나이트로소유레아, 예컨대 카르무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 세무스틴(메틸-CCNU) 및 스트렙토조신(스트렙토조토신); 및 트라이아젠, 예컨대 데카르바진(DTIC; 다이메틸트라이아제노이미다졸-카복스아마이드); 대사저해물질, 예컨대 엽산 유사체, 예컨대 메토트렉세이트(아메톱테린); 피리미딘 유사체, 예컨대 플루오로유라실(5-플루오로유라실; 5-FU), 플록수리딘(플루오로데옥시유리딘; FUdR) 및 사이타라빈(사이토신 아라비노사이드); 및 퓨린 유사체 및 관련 저해제, 예컨대 머캅토퓨린(6-머캅토퓨린; 6-MP), 티오구아닌(6-티오구아닌; TG) 및 펜토스타틴(2'-데옥시코포르마이신)을 포함한다. 천연 생성물, 예컨대 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈블라스틴(VLB) 및 빈크리스틴; 에피포도필로톡신, 예컨대 에토포사이드 및 테니포사이드; 항생제, 예컨대 닥티노마이신(악티노마이신 D), 다우노루비신(다우노마이신; 루비도마이신), 독소루비신, 블레오마이신, 플리카마이신(미트라마이신) 및 미토마이신(미토마이신 C); 효소, 예컨대 L-아스파라기나제; 및 생물학적 반응 개질제, 예컨대 인터페론 알페놈. 백금 배위 착체를 포함하는 기타 물질, 예컨대 시스플라틴(시스-DDP) 및 카보플라틴; 안트라센다이온, 예컨대 미톡산트론 및 안트라사이클린; 치환 유레아, 예컨대 하이드록시유레아; 메틸 하이드라진 유도체, 예컨대 프로카바진(N-메틸하이드라진, MIH); 및 부신피질 억제제, 예컨대 미토탄(o,p'-DDD) 및 아미노글루테티미드; 탁솔 및 유사체/유도체; 및 호르몬 작용제/길항제, 예컨대 플루타마이드 및 타목시펜.
세포독성 모이어티는 세포 사멸을 발생시키는 세포독성 펩타이드 또는 폴리펩타이드 모이어티일 수 있다. 세포독성 펩타이드 및 폴리펩타이드 모이어티는 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 리신, 아브린, 슈도모나스 외독소, 조직 인자 등을 포함한다. 이를 표적화 모이어티, 예컨대 항체에 연결하는 방법은 당해 분야에 또한 공지되어 있다. 다른 리보솜 불활화 단백질은 세포독성 물질로서 WO 96/06641에 기재되어 있다. 슈도모나스 외독소는 세포독성 폴리펩타이드로서 또한 사용될 수 있다. 소정의 사이토카인, 예컨대 TNFα 및 IL-2는 세포독성 물질로서 또한 유용할 수 있다.
소정의 방사능 원자는 충분한 용량으로 전달되는 경우 또한 세포독성일 수 있다. 따라서, 세포독성 모이어티는 세포독성이도록 사용 시 방사능의 충분한 분량을 표적 부위로 전달하는 방사능 원자를 포함할 수 있다. 적합한 방사능 원자는 이웃 세포, 세포소기관 또는 핵산을 파괴하기에 충분한 에너지를 방출하는 인-32, 요오드-125, 요오드-131, 인듐-111, 레늄-186, 레늄-188 또는 이트륨-90, 또는 임의의 다른 동위원소를 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 물질에서 동위원소 및 방사능 원자의 밀도는 4000cGy 초과(바람직하게는 적어도 6000, 8000 또는 10000cGy)의 용량이 표적 부위, 및 바람직하게는 표적 부위에서의 세포 및 이의 세포소기관, 특히 핵으로 전달되는 것이다.
방사능 원자는 항체, 항원 결합 단편, 이의 변이체, 융합 또는 유도체에 공지된 방식으로 부착할 수 있다. 예를 들어, EDTA 또는 또 다른 킬레이트 물질은 결합 모이어티에 부착되고, 111In 또는 90Y를 부착시키기 위해 사용될 수 있다. 타이로신 잔기는 125I 또는 131I에 의해 직접적으로 표지될 수 있다.
세포독성 모이어티는 적합한 간접적으로 세포독성 폴리펩타이드일 수 있다. 간접적으로 세포독성 폴리펩타이드는 효소 활성을 가지고, 비독성인 및/또는 비교적 비독성인 프로드럭을 세포독성 약물로 전환시킬 수 있는 폴리펩타이드일 수 있다. 항체에 의해, 이 유형의 시스템은 대개 ADEPT(항체 지정 효소 프로드럭 치료(Antibody-Directed Enzyme Prodrug Therapy))라 칭해진다. 시스템은 항체가 환자의 신체에서 원하는 부위에 효소 부분을 위치시키는 것 및 효소가 그 부위에 국재화되게 허용한 후, 효소에 대한 기질인 프로드럭을 투여하는 것(촉매작용의 최종 생성물은 세포독성 화합물임)을 요한다. 접근법의 목적은 원하는 부위에서 약물의 농도를 최대화하고, 정상 조직에서 약물의 농도를 최소화하는 것이다. 세포독성 모이어티는 비세포독성 프로드럭을 세포독성 약물로 전환시킬 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 표적화 효소를 사용한 시스템의 효소 및 프로드럭은 임의의 이전에 제안된 것일 수 있다. 세포독성 물질은 임의의 기존의 항암 약물, 예컨대 알킬화제; DNA에서 치윤하는 물질; 임의의 중요한 효소, 예컨대 다이하이드로엽산 환원효소, 티미딘 합성효소, 리보뉴클레오타이드 환원효소, 뉴클레오사이드 키나제 또는 토포아이소머라제를 저해하는 물질; 임의의 다른 세포 구성성분과 상호작용함으로써 세포 사멸을 발생시키는 물질일 수 있다. 에토포사이드는 토포아이소머라제 저해제의 예이다.
보고된 프로드럭 시스템은 표 1에 기재된 것을 포함한다.
Figure 112017020769680-pct00001
효소 부분의 일부를 형성하기에 적합한 효소는 엑소펩티다제, 예컨대 카복시펩티다제 G, G1 및 G2(글루타밀화 머스타드 프로드럭에 대해), 카복시펩티다제 A 및 B(MTX 기반 프로드럭에 대해) 및 아미노펩티다제(2-α-아미노실 MTC 프로드럭에 대해); 엔도펩티다제, 예컨대 트롬볼리신(트롬빈 프로드럭에 대해) 등; 가수분해효소, 예컨대 포스파타제(예를 들어, 알칼리 포스파타제) 또는 설파타제(예를 들어, 아릴 설파타제)(인산화 또는 황산화 프로드럭에 대해); 아미다제, 예컨대 페니실린 아미다제 및 아릴아실 아미다제; 락타마제, 예컨대 β-락타마제; 글라이코시다제, 예컨대 β-글루쿠로니다제(β-글루쿠로노마이드 안트라사이클린에 대해), α-갈락토시다제(아미그달린에 대해) 및 β-갈락토시다제(β-갈락토스 안트라사이클린에 대해); 탈아미노효소, 예컨대 사이토신 탈아미노효소(5FC에 대해); 키나제, 예컨대 우로키나제 및 티미딘 키나제(간시클로버에 대해); 리덕타제, 예컨대 나이트로환원효소(CB1954 및 유사체에 대해), 아조환원효소(아조벤젠 머스타드에 대해) 및 DT-디아포라제(CB1954에 대해); 옥시다제, 예컨대 글루코스 옥시다제(글루코스에 대해), 잔틴 옥시다제(잔틴에 대해) 및 락토퍼옥시다제; DL-라세마제, 촉매 항체 및 사이클로덱스트린을 포함한다.
바람직하게는, 프로드럭은 세포독성 약물과 비교하여 비교적 비독성이다. 통상적으로, 이것은 적합한 시험관내 세포독성 시험에서 측정될 때 독성의 10% 미만, 바람직하게는 독성의 1% 미만이다.
프로드럭을 세포독성 약물로 전환시킬 수 있는 모이어티가 본 발명의 물질의 나머지로부터 단리에서 활성일 수 있지만, (a) 이것이 본 발명의 물질의 나머지와 조합될 때 및 (b) 본 발명의 물질이 표적 세포에 부착되거나, 인접하거나, 내재화될 때, 오직 이것이 활성인 것이 필요할 것이다.
각각의 모이어티가 폴리펩타이드일 때, 2개의 부분은 폴리펩타이드를 연결시키는 임의의 종래의 방식에 의해 함께 연결될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편은 티올기, 및 이 티올기와 반응할 수 있는 이중작용성 물질, 예를 들어 요오도아세트산(NHIA)의 N-하이드록시숙신이미드 에스터 또는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜다이티오)프로피오네이트(SPDP)와 반응한 추가의 모이어티에 의해 농후해질 수 있다. 예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미드 에스터에 의해 달성된, 아마이드 및 티오에터 결합은 이황화 결합보다 생체내 일반적으로 더 안정하다.
세포독성 모이어티는 방사선 증감제일 수 있다. 방사선 증감제는 플루오로피리미딘, 티미딘 유사체, 하이드록시유레아, 젬시타빈, 플루다라빈, 니코틴아마이드, 할로겐화된 피리미딘, 3-아미노벤즈아마이드, 3-아미노벤조다이아마이드, 에타닉사돌, 피모니다졸 및 미소니다졸을 포함한다. 또한, 세포로의 유전자의 전달, 예를 들어 p53 유전자 또는 사이클린 D의 전달은 이들을 방사선 증감시킬 수 있다. 추가의 모이어티는 세포독성이 되거나, 조사 시 세포독성 모이어티를 방출하는 것일 수 있다. 예를 들어, 붕소-10 동위원소는, 적절하게 조사될 때, 세포독성인 α 입자를 방출한다. 유사하게, 세포독성 모이어티는 광역동 치료에서 유용한 것, 예컨대 포토프린일 수 있다.
CD40에 특이적인 항체
본 발명의 병용 치료제 및 방법은 "항-CD40 항체"인 CD40에 면역특이적으로 결합하는 항체를 이용한다. 일 실시형태에서, 상기 항체는 대상체에 대한 투여 이후 종양 부위에 보유된다(상기 단계 (a) 하의 토의 참조)). 항체는 바람직하게는 CD40에 특이적으로 결합하고, 즉 이것은 CD40에 결합하지만, 다른 분자에 결합하지 않거나, 더 낮은 친화도(예를 들어, 10배 더 낮은 친화도)로 결합한다. 달리 기재되지 않은 한, 용어 CD40은, 본 명세서에 사용되는 바대로, 인간 CD40을 의미한다. 인간 CD40의 서열은 서열 번호 13에 기재되어 있다. 본 발명의 항-CD40 항체는 다른 포유류로부터의 CD40, 예를 들어 영장류 또는 쥣과 CD40에 대해 약간의 결합 친화도를 가질 수 있다. 항체는 바람직하게는 세포의 표면에 국재화될 때 인간 CD40에 결합한다.
특히, 본 발명의 병용 치료제에서 사용된 항-CD40 항체는 (임의적으로 각각 서열 번호 11 및 서열 번호 12의 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 함께) 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 '기준 항체'와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁한다. 이러한 경쟁적 결합 저해는 당해 분야에 널리 공지된 검정 및 방법을 이용하여, 예를 들어 부동화된 인간 CD40을 가지는 비아코어(BIAcore) 칩을 사용하고 기준 항체의 존재 하에, 시험하고자 하는 항체 폴리펩타이드의 존재 및 부재 하에 항온처리하여 결정될 수 있다. 대안적으로, 기준 항체가 비아코어 칩의 표면에 부동화되고, 인간 CD40이 부동화된 항체에 결합하고, 이후 제2 항체가 인간 CD40에 동시 결합하는 능력에 대해 시험되는 쌍 지음 맵핑 접근법을 사용할 수 있다(문헌['BIAcore Assay Handbook', GE Healthcare Life Sciences, 29-0194-00 AA 05/2012](이들의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨) 참조).
예시적인 항-CD40 항체는 WO 2013/034904(Alligator Bioscience AB에 허여)(이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨)에 개시되어 있다.
항체는 바람직하게는 나이브 상태의 CD40 및 특히 세포의 표면에서 국재화된 CD40에 결합하는 능력을 가진다. 바람직하게는, 항체는 CD40에 특이적으로 결합할 것이다. 즉, 발명의 방법에서 사용된 항체는 바람직하게는 또 다른 분자에 결합하는 것보다 높은 결합 친화도로 CD40에 결합할 것이다.
"세포의 표면에서 국재화된"이란, CD40의 하나 이상의 영역이 세포 표면의 외부 면에 존재하도록 CD40이 세포와 회합된다는 것을 의미한다. 예를 들어, CD40은 세포외 표면에 존재하는 하나 이상의 영역을 가지는 세포 혈장 막으로 삽입(즉, 막관통 단백질로서 배향)될 수 있다. 이것은 세포에 의한 CD40의 발현의 과정에서 발생할 수 있다. 따라서, 일 실시형태에서, "세포의 표면에서 국재화된"은 "세포의 표면에서 발현된"을 의미할 수 있다. 대안적으로, CD40은 이것을 세포 표면의 특이적 영역 또는 영역들에 국재화하는 공유 및/또는 이온 상호작용을 가지는 세포 밖에 있을 수 있다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 CD40을 발현하는 세포의 ADCC 매개 용해를 유도하고/하거나, 증대시키거나, CD40을 발현하는 세포의 아폽토시스를 증대시킬 수 있다. 세포는 통상적으로 종양 세포이다. "증대시킨다"란, 용해되거나 아폽토시스된 세포의 수가 적절한 제어 물질의 존재 하에 용해되거나 아폽토시스된 세포의 수와 관련하여 본 발명의 항체의 존재 하에 증가한다는 것을 의미한다. 세포의 샘플에서 ADCC 매개 용해 또는 아폽토시스의 수준을 결정하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 크롬-51 방출 검정, 유로퓸 방출 검정 또는 황-35 방출 검정을 이용할 수 있다. 이러한 검정에서, 항원(이 경우에 CD40)을 발현하는 이전에 표지된 표적 세포주는 시험하고자 하는 항체와 항온처리된다. 세척 후, (통상적으로 Fc 수용체 CD16을 발현하는) 이팩터 세포는 항체 표지된 표적 세포와 동시항온처리된다. 표적 세포 용해는 후속하여 섬광 계수기에 의한 세포내 라벨의 방출 또는 분광광도법에 의해 측정된다.
바람직하게는, 항체, 항원 결합 단편은 항체 Fc 영역을 포함한다. Fc 부분이 IgG 항체 또는 상이한 종류의 항체(예컨대, IgM, IgA, IgD 또는 IgE) 유래일 수 있는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체 유래일 수 있다. 그러나, 유리하게는, Fc 영역은 IgG1 항체 유래일 수 있다.
Fc 영역은 천연 발생(예를 들어, 내인성으로 제조된 항체의 일부)일 수 있거나, 인공(예를 들어, 천연 발생 Fc 영역에 대한 하나 이상의 점 돌연변이 포함)일 수 있다. FcR에 결합하는 이의 능력을 개선하는 점 돌연변이를 가지는 Fc 영역은 예를 들어 혈청 반감기의 변경에 의해 유리할 수 있거나, ADCC 및 CDC에 관여된 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 결합을 개선할 수 있다. 특히, FcγRIIB에 대한 결합을 증대시키는 돌연변이, 예를 들어 S267E(Strohl et al., 2009, Curr Opin Biotechnol, 20:685-691)가 본 발명에서 유리할 수 있어서, CD40 항체의 기능 활성과 FcγRIIB 결합 사이의 연결을 제공한다(Li et al., 2011, Science, 333: 1030-1034).
이러한 검정에서 필요한 방사선 동위원소에 의해 표지에 대한 대안으로서, 표적 세포에 자연히 존재하는 효소의 방출을 측정함으로써 용해가 검출되는 방법이 이용될 수 있다. 이것은 효소 촉매화 반응의 생성물의 검출(예를 들어, 생물발광 검출)에 의해 달성될 수 있다. 세포의 이전의 표지가 이러한 검정에서 필요하지 않다. 이러한 검정에 의해 검출된 통상적인 세포 효소는 GAPDH이다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 CD40을 발현하는 세포의 활성을 조절할 수 있고, 상기 조절은 상기 세포의 활성의 증가 또는 감소이다. 세포는 통상적으로 수지상 세포 또는 B 세포이다.
전문 APC, 예컨대 수지상 세포는 CD40을 통한 신호전달이 발생할 때 활성화되고, 이것은 면역 세포 활성화, 사이토카인 및 케모카인의 증식 및 생성을 포함하는 몇몇 생물학적 사건을 촉발한다. CD40과 연관된 수지상 세포 활성화를 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고(예를 들어, 문헌[Schonbeck et al., 2001, Cell Mol Life Sci., 58:40-43; van Kooten et al., 2000, J. Leuk., Biol., 67: 2-17]에 기재됨), 하기 추가로 기재되어 있다.
재조합 CD40L 또는 항-CD40 항체에 의한 인간 B 세포의 자극은 표면 마커, 예컨대 CD23, CD30, CD80, CD86, Fas 및 MHC II의 상향조절, 가용성 사이토카인, 예를 들어 IL-6, TNF-γ 및 TNF-α의 분비 및 동형 집합을 유도한다. CD40 관련 B 세포 활성화를 결정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있고(예를 들어, 상기 Schonbeck 등의 문헌(2001)에 기재됨), 하기 추가로 기재되어 있다.
수지상 세포 및 B 세포의 활성을 조절하는 항체의 능력을 검출하기 위한 방법 및 검정은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 수지상 세포의 활성화는 세포 표면 마커, 예컨대 CD86 및 CD80의 수준을 측정함으로써 및/또는 T 세포로부터 IFNγ의 항-CD40 항체 유도 분비를 측정함으로써 평가될 수 있고, 임의의 이들 매개변수의 증가는 활성화의 증가를 나타내고, 감소는 활성화의 감소를 나타낸다. 유사하게, B 세포의 활성을 조절하는 항체의 능력은 세포 표면 마커(예컨대, CD86)의 수준을 측정함으로써 및/또는 항-CD40 항체 유도 B 세포 증식을 측정함으로써 평가될 수 있고(하기 실시예 3 참조), 임의의 이들 매개변수의 증가는 활성화의 증가를 나타내고, 감소는 활성화의 감소를 나타낸다.
바람직하게는, 수지상 세포 또는 B 세포의 활성화를 증가시키는 본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 수지상 세포 또는 B 세포 활성화에 대한 효력을 가진다. 세포 활성화는, 단리된 수지상 또는 B 세포를 시험 자극물질과 항온처리하는 단계 및 이후 활성화의 측정치로서 세포 증식을 검출하는 단계를 포함하는 검정에서, EC50 수준으로서 통상적으로 측정될 수 있다.
용어 "결합 활성" 및 "결합 친화도"는 표적에 결합하거나 결합하지 않는 항체 분자의 경향을 의미하도록 의도된다. 결합 친화도는 항체 및 이의 표적에 대한 해리 상수(Kd)를 결정함으로써 정량화될 수 있다. 유사하게, 표적에 대한 항체의 결합의 특이성은, 항체 및 또 다른 비표적 분자와 관련하여 해리 상수와 비교하여, 표적에 대한 항체의 비교적인 해리 상수(Kd)의 면에서 정의될 수 있다.
통상적으로, 표적과 관련하여 항체에 대한 Kd는 환경에서 다른 비표적 분자, 예컨대 비연관 재료 또는 수반 재료와 관련하여 Kd보다 2배, 바람직하게는 5배, 더 바람직하게는 10배 낮을 것이다. 더 바람직하게는, Kd는 50배 미만, 더욱 더 바람직하게는 100배 미만, 더욱 더 바람직하게는 200배 미만일 것이다.
이 해리 상수의 값은 널리 공지된 방법에 의해 직접적으로 결정될 수 있고, 예를 들어 문헌[Caceci et al. (Byte 9:340-362, 1984)]에 기재된 것과 같은 방법에 의해 심지어 복잡한 혼합물에 대해 산출될 수 있다. 예를 들어, Kd는 이중 필터 나이트로셀룰로스 필터 결합 검정, 예컨대 문헌[Wong & Lohman (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90, 5428-5432, 1993)]에 의해 개시된 것을 이용하여 확립될 수 있다. 예를 들어, ELISA, 웨스턴 브롯, RIA 및 유세포분석법 분석을 포함하는, 표적에 대한 리간드, 예컨대 항체의 결합 능력을 평가하는 다른 표준 검정이 당해 분야에 공지되어 있다. 항체의 결합 역학(예를 들어, 결합 친화도)은 또한 당해 분야에 공지된 표준 검정, 예컨대 비아코어(상표명) 시스템 분석에 의해 평가될 수 있다.
표적에 대한 항체의 결합이 그 표적의 또 다른 공지된 리간드, 예컨대 또 다른 항체에 의한 표적의 결합과 비교되는 경쟁적 결합 검정이 수행될 수 있다. 50% 저해가 발생하는 농도는 Ki로 공지되어 있다. 이상적인 조건 하에, Ki는 Kd와 동등하다. Ki 값은 결코 Kd 미만이지 않을 수 있어서, Ki의 측정은 Kd에 대한 상한을 제공하도록 편리하게 대체될 수 있다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 바람직하게는, 또 다른 비표적 분자에 대한 결합에 대한 이의 친화도의 적어도 2배, 10배, 50배, 100배 또는 이것 초과인 친화도로, 이의 표적에 결합할 수 있다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에 사용된 항체는 통상적으로 하기 특징을 나타낼 것이다:
(i) 세포의 표면에서 국재화될 때 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 능력; 및/또는
(ii) CD40을 발현하는 세포의 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC) 매개 용해를 증대시키는 능력; 및/또는
(iii) CD40을 발현하는 세포의 아폽토시스를 증대시키는 능력; 및/또는
(iv) CD40을 발현하는 세포의 활성을 조절하는 능력(여기서, 상기 조절은 상기 세포의 활성의 증가 또는 감소임).
항체는 본 명세서에 개시된 특이적 항-CD40 항체 중 하나의 변이체 또는 단편일 수 있거나 이를 포함할 수 있고, 단 상기 변이체 또는 단편은 CD40에 대한 특이성 및 기능적 특징 (i) 내지 (iv) 중 적어도 하나를 보유한다.
단편은 바람직하게는 상기 항체의 항원 결합 부분이다. 단편은 예를 들어 폴리펩타이드의 N 및/또는 C 말단 끝으로부터 하나 이상의 아미노산의 절두, 예를 들어 제거에 의해 만들어질 수 있다. 10개 이하, 20개 이하, 30개 이하, 40개 이하 또는 이것 초과의 아미노산이 N 및/또는 C 말단으로부터 이러한 방식으로 제거될 수 있다. 단편은 하나 이상의 내부 결실에 의해 또한 생성될 수 있다.
변이체는 본 명세서에 개시된 특정한 항-CD40 항체의 서열과 관련하여 하나 이상의 치환, 결실 또는 추가를 포함할 수 있다. 변이체는 본 명세서에 개시된 특정한 서열로부터의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 10개 이하, 20개 이하, 30개 이하 또는 이것 초과의 아미노산 치환 및/또는 결실을 포함할 수 있다. "결실" 변이체는 개별 아미노산의 결실, 작은 그룹의 아미노산, 예컨대 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산의 결실, 또는 더 큰 아미노산 영역의 결실, 예컨대 특정한 아미노산 도메인 또는 다른 특징의 결실을 포함한다. "치환" 변이체는 바람직하게는 동일한 수의 아미노산에 의한 하나 이상의 아미노산의 대체 및 보존적 아미노산 치환을 만드는 것을 포함한다. 예를 들어, 아미노산은 유사한 특성을 가지는 대안적인 아미노산, 예를 들어 또 다른 염기성 아미노산, 또 다른 산성 아미노산, 또 다른 천연 아미노산, 또 다른 하전 아미노산, 또 다른 친수성 아미노산, 또 다른 소수성 아미노산, 또 다른 극성 아미노산, 또 다른 방향족 아미노산 또는 또 다른 지방족 아미노산에 의해 치환될 수 있다.
적합한 치환기를 선택하기 위해 사용될 수 있는 20개의 주요 아미노산의 여러 특징은 하기와 같다:
Figure 112017020769680-pct00002
바람직한 "변이체"는 천연 발생 아미노산 대신에 서열에서 나타나는 아미노산이 이의 구조 유사체인 것을 포함한다. 서열에서 사용된 아미노산은 또한 유도체화 또는 변형, 예를 들어 표지될 수 있고, 단 항체의 기능은 상당히 부정적으로 영향을 받지 않는다.
변이체는 부위 지정 돌연변이유발, 랜덤 돌연변이유발, 또는 효소 절단 및/또는 핵산의 결찰의 공지된 기법을 이용하여 항체의 합성 동안 또는 제조 후 변형에 의해, 또는 항체가 재조합 형태일 때 제조될 수 있다.
바람직하게는, 변이체 항체는 본 명세서에 개시된 항체의 VL 또는 VH 도메인과 60% 초과, 또는 70% 초과, 예를 들어 75% 또는 80%, 바람직하게는 85% 초과, 예를 들어 90% 초과 또는 95%의 아미노산 동일성을 가지는 아미노산 서열을 가진다. 아미노산 동일성의 이 수준은, 전장 폴리펩타이드의 크기에 따라, 관련 서열 번호 서열의 전체 길이에 걸쳐 또는 서열의 일부에 대해, 예컨대 20, 30, 50, 75, 100, 150, 200 이상의 아미노산에 걸쳐 보일 수 있다.
아미노산 서열과 연결되어, "서열 동일성"은 하기 매개변수에 의해 ClustalW(상기 Thompson 등의 문헌(1994))를 사용하여 평가할 때 기재된 값을 가지는 서열을 의미한다:
쌍 지음 정렬 매개변수 - 방법: 정확, 매트릭스: PAM, 갭 오픈 패널티: 10.00, 갭 연장 패널티: 0.10;
다수의 정렬 매개변수 - 매트릭스: PAM, 갭 오픈 패널티: 10.00%, 지연에 대한 동일성: 30, 최종 갭의 패널티: 유, 갭 분리 거리: 0, 음성 매트릭스: 무, 갭 연장 패널티: 0.20, 잔기 특이적 갭 패널티: 유, 친수성 갭 패널티: 유, 친수성 잔기: GPSNDQEKR. 특정한 잔기에 대한 서열 동일성은 단순히 유도체화된 동일한 잔기를 포함하도록 의도된다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용하기 위한 항-CD40 항체는, 이러한 항체가 개시된 항체의 작용을 모방할 것이므로, 본 명세서에 개시된 바와 같은 특정한 항체와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 항체가 또 다른 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지 또는 아닌지는 일상적인 방법에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 표적에 대한 각각의 항체의 결합은 경쟁적 결합 검정을 이용하는 것일 수 있다. 경쟁적 결합 검정을 수행하는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 이들은 항체가 표적 분자에 결합할 수 있는 조건 하에 항체 및 표적 분자를 함께 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 항체/표적 복합체는 이후 제2 (시험) 항체와 접촉할 수 있고, 시험 항체가 항체/표적 복합체로부터 제1 항체을 대체할 수 있는 정도가 평가될 수 있다. 이러한 평가는 예를 들어 표면 플라스몬 공명, ELISA, 또는 유세포분석법을 포함하는 임의의 적합한 기법을 이용할 수 있다. 표적에 대한 제1 항체의 결합을 저해하는 시험 항체의 능력은 시험 항체가 표적에 대한 결합에 대해 상기 제1 항체와 경쟁할 수 있고, 따라서 시험 항체가 제1 항체와 표적 상의 동일한 에피토프 또는 영역에 결합하고, 따라서 제1 항체의 작용을 모방할 수 있다는 것을 입증한다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 서열 번호 1 내지 3의 1개, 2개 또는 모든 3개의 CDR 서열 및/또는 서열 번호 4 내지 6의 1개, 2개 또는 모든 3개의 CDR 서열을 포함하는 항체일 수 있다. 항체는 서열 번호 1 내지 6의 모든 6개의 CDR 서열을 포함할 수 있다.
항체는 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 서열 및/또는 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역 서열을 포함할 수 있다.
항체는 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 서열 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항체와 동일한 에피토프일 수 있거나 이에 결합할 수 있다. 또한, 항체는 서열 번호 11의 경쇄 불변 영역 서열 및/또는 서열 번호 12의 중쇄 불변 영역 서열을 포함할 수 있다.
본 발명의 병용 치료제 및 방법에서 사용된 항-CD40 항체 또는 임의의 변이체 또는 이의 단편은 바람직하게는 9.0 이상, 바람직하게는 9.1 이상, 더 바람직하게는 9.2 이상 또는 9.25 이상, 가장 바람직하게는 9.3 이상의 이론적 등전점(pI)을 가진다.
병용 치료제
본 발명은 (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌, 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 데 사용하기 위한 병용 치료제를 제공하고, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 CD40에 대한 결합에 대해 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁하고, 추가의 면역치료제는 면역 관문 분자에 특이적으로 결합한다.
용어 "병용 치료제" 또는 "조합된 치료" 또는 "조합된"은, 본 명세서에 사용되는 바대로, 적어도 2개의 명확한 치료제와 동시 또는 병행 치료의 임의의 형태를 나타낸다.
소정의 실시형태에 따르면, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제는 동일한 조성물 또는 별개의 조성물에서 동시에 투여된다. 다른 실시형태에 따르면, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제는 순차적으로 투여되고, 즉 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제의 투여 전에 또는 전에 투여된다. 몇몇 실시형태에서, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제의 투여는 동시발생이고, 즉 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제의 투여 기간은 서로 중첩한다. 몇몇 실시형태에서, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제의 투여는 동시발생이 아니다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에서, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여는 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제가 투여된 후에 결정된다. 몇몇 실시형태에서, CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제의 투여는 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 투여되기 전에 결정된다.
소정의 통상적인 실시형태에 따르면, 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제는 단일 치료학적 조성물 내에 투여된다. 몇몇 실시형태에 따르면, 치료학적 조성물은 치료학적으로 허용되는 희석제 또는 담체를 추가로 포함한다.
본 발명의 병용 치료제의 추가의 성분은 물질이 항-CD40 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 아닌 암의 치료에서 효능을 가지는 면역치료제이다.
용어 "면역치료제"는 대상체에서 종양 또는 암에 대한 면역 반응을 생성하도록 숙주 면역계를 자극할 수 있는 임의의 분자, 펩타이드, 항체 또는 다른 물질을 포함하도록 의도된다. 다양한 면역치료제는 본 명세서에 기재된 조성물 및 방법에서 유용하다. 일 실시형태에서, 면역치료제는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
용어 "면역 반응"은 T 세포 매개 및/또는 B 세포 매개 면역 반응을 포함한다. 예시적인 면역 반응은 T 세포 반응, 예를 들어 사이토카인 제조 및 세포 세포독성을 포함한다. 또한, 용어 면역 반응은 T 세포 활성화, 예를 들어 항체 생성(체액 반응) 및 사이토카인 반응성 세포, 예를 들어 대식세포의 활성화에 의해 간접적으로 수행되는 면역 반응을 포함한다.
용어 "면역 관문 분자"는 면역 세포, 예컨대 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포, 수지상 세포, NK 세포 및 대식세포의 세포 표면에서뿐만 아니라 면역 반응을 조절하는 소정의 종양 세포에서 단백질의 그룹을 포함하도록 의도된다. 면역 관문 단백질이 저해적, 예를 들어 CTLA-4 및 PD-1, 또는 자극적, 예를 들어 OX40 및 CD137일 수 있는 것으로 당해 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다. 예시적인 면역 관문 분자는, 제한 없이, PD-1, CTLA-4, OX40(CD134), CD137, VISTA, B7-H2, B7-H3, PD-L 1, B7-H4, B7-H6, 2B4, ICOS, HVEM, PD-L2, CD160, gp49B, PIR-B, KIR 패밀리 수용체, TIM-1, TIM-3, TIM-4, LAG-3, BTLA, SIRP알파(CD47), CD48, 2B4(CD244), B7.1, B7.2, ILT-2, ILT-4, TIGIT 및 A2aR을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 면역 관문 분자는 PD-1, CTLA-4, OX40(CD134) 또는 CD137이다.
하나 이상의 저해 면역 관문 분자의 차단 또는 중화는 암을 더 효율적으로 치료하기 위해 저해 신호전달을 차단하거나 그렇지 않으면 중화시킬 수 있다. 저해 면역 관문을 차단하기에 유용한 예시적인 물질은 저해 면역 관문 단백질, 또는 이의 단편에 결합하고/하거나 이를 불활화하거나 저해할 수 있는, 항체, 소분자, 펩타이드, 펩티도모방체, 천연 리간드 및 천연 리간드의 유도체; 및 저해 면역 관문 핵산, 또는 이의 단편의 발현 및/또는 활성을 하향조절할 수 있는, RNA 간섭, 안티센스, 핵산 압타머 등을 포함한다. 면역 반응을 상향조절하기 위한 예시적인 물질은 단백질과 이의 천연 수용체(들) 사이의 상호작용을 차단하는 하나 이상의 저해 면역 관문 단백질에 대한 항체; 하나 이상의 면역 관문 저해제 단백질의 비활성화 형태(예를 들어, 우세 음성 폴리펩타이드): 하나 이상의 저해 면역 관문 단백질과 이의 천연 수용체(들) 사이의 상호작용을 차단하는 소분자 또는 펩타이드; 천연 수용체(들)에 결합하는 융합 단백질(예를 들어, 항체 또는 면역글로불린의 Fc 부분에 융합된 면역 관문 저해 단백질의 세포외 부분); 저해 면역 관문 핵산 전사 또는 번역을 차단하는 핵산 분자 등을 포함한다. 이러한 물질은 저해 신호전달을 방지하고 면역 반응을 상향조절하기 위해 하나 이상의 저해 면역 관문과 이의 천연 수용체(들)(예를 들어, 항체) 사이의 상호작용을 직접적으로 차단할 수 있다. 대안적으로, 이러한 물질은 저해 신호전달을 방지하고 면역 반응을 상향조절하기 위해 하나 이상의 저해 면역 관문과 이의 천연 수용체(들)(예를 들어, 항체) 사이의 상호작용을 간접적으로 차단할 수 있다. 예를 들어, 면역 관문 단백질 리간드의 가용성 버전, 예컨대 안정화된 세포외 도메인은 적절한 리간드에 결합하기 위해 수용체의 유효 농도를 간접적으로 감소시키기 위해 이의 수용체에 결합할 수 있다. 일 실시형태에서, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 항-CTLA-4 항체는, 단독으로 또는 병용되어, 면역 관문 저해제를 저해하기 위해 사용된다.
따라서, 일 실시형태에서, CD40 이외에 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제는 저해 면역 관문 분자에 결합하고 이의 기능을 저해하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
하나 이상의 자극 면역 관문 분자의 활성화는 암을 더 효율적으로 치료하기 위해 면역 반응을 상향조절할 수 있다. 자극 면역 관문을 활성화하기에 유용한 예시적인 물질은 항체, 소분자, 펩타이드, 펩티도모방체, 천연 리간드 및 자극 면역 관문 단백질을 활성화할 수 있는 천연 리간드의 유도체, 또는 이들의 단편; 및 면역 관문 핵산을 증대시킬 수 있는 RNA 간섭, 안티센스, 핵산 압타머 등, 또는 이들의 단편을 포함한다. 면역 반응을 상향조절하기 위한 예시적인 물질은 자극 면역 관문 단백질 리간드의 가용성 버전, 또는 Fc에 융합된 이러한 리간드 또는 리간드의 다합체화를 수월하게 하는 도메인을 포함한다. 일 실시형태에서, 단독의 또는 병용된 항-CD137 및 항-OX40 항체는 자극 면역 관문 저해제를 활성화하기 위해 사용된다.
따라서, 대안적인 실시형태에서, CD40 이외의 면역 관문 분자에 특이적으로 결합하는 면역치료제는 자극 면역 관문 분자에 결합하고 이의 기능을 활성화하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
관문 분자의 바람직한 예는 이의 리간드 PD-L1 또는 PD-L2와 연관될 때 T 세포 활성화의 음성 조절제로서 작용하는 PD1을 포함한다. PD-L1은 흑색종을 포함하는 많은 고형 종양에 의해 특히 발현된다. 이 종양은 따라서 T 세포에서 저해 PD-1 수용체의 활성화를 통해 면역 매개 항종양 효과를 하향조절할 수 있다. PD1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단함으로써, 면역 반응의 관문은 제거될 수 있어서, 증대된 항종양 T 세포 반응을 발생시킨다. 이 상호작용은 PD1 또는 PD-L1에 특이적인 항체 또는 임의의 다른 적합한 물질에 의해 차단될 수 있다. 이러한 항체 및 물질은 일반적으로 PD1 저해제라 불릴 수 있다. PD1 저해제는 본 발명의 방법의 단계 (b)에서 추가적인 치료제로서 특히 바람직하다.
항-PD1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 람브롤리주맙, 피딜리주맙 및 AMP-224를 포함한다. 항-PD-L1 항체는 MEDI-4736 및 MPDL3280A를 포함한다.
전신 PD1 저해제 및 국소 항-CD40 항체의 병용은 종양에 의한 PD-L1의 발현 때문에 그리 매력적이지 않다. 이러한 병용은 조절 T 세포 및 골수성 유래 억제자 세포(myeloid-derived suppressor cell; MSDC)에 영향을 미침으로써 일반적인 면역억제 환경을 조절하는 데 또한 유리할 수 있다. 예를 들어, CD40 작용제, 예컨대 본 발명의 방법에서 사용된 항-CD40 항체는 CD40 양성 종양 연관 M2 대식세포 및 MSDC를 조절하는 반면, PD1 저해제는 조절 T 세포 및 MSDC를 조절할 것이다. 더구나, 상기 기재된 바대로(단계 (a) 및 (b)의 시기와 관련하여 토의 참조), 항체에 의한 CD40의 결찰은 수지상 세포를 활성화하고 성숙시키는 것으로 보고되어 있어 있고, 이 세포는 성숙 시 PD-L 1 및 2를 상향조절하여 2개의 치료를 병용하기 위한 추가의 이유를 제공한다. 추가로, CD40 작용제, 예컨대 본 발명의 방법에 사용된 항-CD40 항체는 T 세포에서 PD-1 및 종양 및 종양 침윤 세포에서 PD-L1을 간접적으로 상향조절할 것이다. 그러므로, 전신 PD1 저해제 및 종양 부위에 보유된 항-CD40 항체의 병용에 의한 고형 종양(예컨대, 흑색종)의 치료는 면역계의 활성화 및 대응 조절 신호의 억제 둘 다에 의해 다면발현 효과를 가질 것이다.
관문 분자의 또 다른 예는 T 세포 활성화의 음성 조절제로서 작용하는 T 세포 수용체 CTLA-4이다. 보통, 이것은 초기 활성화 후 T 세포 표면에서 상향조절된다. CTLA-4 수용체의 리간드는 항원 제시 세포에 의해 발현된 B7 단백질(B7-1 및 B7-2)이다. T 세포 활성화의 상향조절을 담당하는 상응하는 수용체는 B7 단백질에 대한 결합에 대해 CTLA-4와 경쟁하는 CD28이다. 따라서, B7 단백질과의 CD28 상호작용이 아니라 B7 단백질과의 CTLA-4 상호작용을 차단함으로써, 면역 반응의 정상 관문 중 하나가 제거될 수 있어서, 증대된 항종양 T 세포 반응을 발생시킨다. B7 단백질과의 CTLA-4 상호작용의 차단은 항-CTLA-4 항체 또는 다른 적합한 물질에 의해 달성될 수 있다. 항-CTLA-4 항체는 이필루무맙, 트레멜리무맙, 또는 PCT/EP2014/063442에 개시된 임의의 항체를 포함한다. 다른 분자는 폴리펩타이드, 또는 가용성 돌연변이체 CD86 폴리펩타이드를 포함한다.
따라서, 추가적인 치료제는 바람직하게는 PD1, PD-L1 또는 CTLA-4 중 적어도 하나에 특이적으로 결합하는 항체 또는 다른 물질일 수 있다.
추가적인 치료제는 가장 바람직하게는 PD1 저해제, 예컨대 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 람보르리주맙, 프딜리주맙, MEDI-4736 및 MPDL3280A로부터 선택된 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체이다.
추가적인 치료제가 항체 또는 항체를 포함하는 이중특이적 분자인 경우, 추가적인 치료학적 모이어티 등에 대한 항체, 항체의 항원 결합 단편, 임의적인 접합의 정의와 관련하여 상기 기재된 모든 일반적인 고려사항이 추가적인 치료제인 항체에 또한 적용되는 것으로 이해될 것이다. 유사하게, 물질의 특정한 표적이 CD40 대신에 읽혀진다는 것을 제외하고는, 표적 특이성/친화도의 정의 및 항-CD40 항체에 대해 상기 기재된 특이성/친화도를 결정하는 방법이 추가적인 치료제인 항체에 동등하게 적용될 것이라는 것이 이해될 것이다. 추가적인 치료제인 항체의 변이체 및 단편은 항-CD40 항체의 변이체 및 단편과 동일한 방식으로 또한 정의될 수 있다.
키트 및 약제학적 조성물
본 발명은 또한 상기 정의된 바와 같은 병용 치료제를 포함하는 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 키트를 제공한다. 예를 들어, 키트는 (a) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된, 항체의 치료학적 유효량 및 임의적으로 (b) 대상체에 대한 전신 투여에 적합한 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 포함할 수 있다. CD40에 특이적으로 결합하는 항체는 바람직하게는 종양 부위에 대한 국소 투여에 적합한 형태로 제공된다.
본 발명의 키트는 상기 언급된 임의의 실시형태가 수행되게 하는 하나 이상의 다른 시약 또는 장치를 추가적으로 포함할 수 있다. 이러한 시약 또는 장치는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 적합한 완충제(들)(수성 용액) 및 항-CD40 항체 및/또는 추가적인 치료제를 투여하기 위한 수단(예컨대, 침을 포함하는 용기 또는 장치).
본 발명의 방법에서 사용되거나, 본 발명의 키트에 제공된 항-CD40 항체 및 추가적인 치료제는 각각 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 별개의 약제학적 조성물로서 제공될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바대로, "약제학적으로 허용 가능한 담체"는, 생리학적으로 상용성이고 또한 필요한 투여 경로에 알맞는, 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장성 물질 및 흡수 지연 물질 등을 포함한다.
따라서, 항-CD40 항체 및 추가적인 치료제에 대한 담체는 상기 정의된 바대로 혈관 및/또는 림프계를 포함하는 대상체의 순환계에 대한 투여를 의미하는 전신 투여에 적합할 수 있다. 이러한 투여는 임의의 적합한 경로에 의할 수 있지만, 통상적으로 비경구이다. 구절 "비경구 투여"는, 본 명세서에 사용되는 바대로, 장내 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 통상적으로 주사, 점적주사 또는 이식에 의해 달성된다. 적합한 경로는 정맥내, 근육내, 피내, 복강내, 피하, 척추 또는 투여의 다른 비경구 경로를 포함한다.
그러나, 항-CD40 항체에 대한 담체는 바람직하게는 상기 정의된 바대로 임의의 적합한 수단, 예컨대 주사에 의해 종양주변, 종양근방, 종양내, 병변내, 병변주변, 두개내 및 물집내 투여를 포함하는 국소 투여에 적합하다. 국소 투여는 종양의 부위에 따라 공동내 점적주사 및 흡입을 또한 포함할 수 있다.
투여 경로에 따라, 항체 및/또는 물질은 항체 및/또는 물질을 불활성화하거나 변성시킬 수 있는 산 및 다른 천연 조건의 작용으로부터 항체를 보호하기 위해 재료에서 코팅될 수 있다. 바람직한 약제학적으로 허용 가능한 담체는 수성 담체 또는 희석제를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에서 사용될 수 있는 적합한 수성 담체의 예는 물, 완충 물 및 식염수를 포함한다. 다른 담체의 예는 에탄올, 폴리올(예컨대, 글라이세롤, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜 등) 및 적합한 이들의 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브유 및 주사용 유기 에스터, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은 예를 들어 코팅 재료, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지에 의해 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 많은 경우에, 조성물에서 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알코올, 예컨대 만니톨, 소르비톨, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다.
본 발명의 병용 치료제의 항체 성분이 통상적으로 하나 이상의 약제학적 조성물의 형태로 제공되고, 각각은 약제학적으로 허용 가능한 완충제, 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 항체 성분(들)의 치료학적 유효량을 함유하는 것으로 당해 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다.
'치료학적 유효량', 또는 '유효량', 또는 '치료학적으로 효과적인'은, 본 명세서에 사용되는 바대로, 소정의 병태 및 투여 섭생에 대한 치료학적 효과를 제공하는 양을 의미한다. 이것은 필요한 첨가제 및 희석제, 즉 담체 또는 투여 비히클과 연관되어 원하는 치료학적 효과를 생성하기 위해 계산된 활성 항체의 미리 결정된 분량이다. 추가로, 이것은 숙주의 활동, 기능 및 반응의 임상적으로 상당한 결핍을 감소시키거나 예방하기에 충분한 양을 의미하도록 의도된다. 대안적으로, 치료학적 유효량은 숙주에서 임상적으로 상당한 상태의 개선을 발생시키기에 충분하다. 당해 분야의 당업자에 의해 이해되는 것처럼, 화합물의 양은 이의 특정한 활성에 따라 변할 수 있다. 적합한 투약량 양은 필요한 희석제와 연관되어 원하는 치료학적 효과를 생성하기 위해 계산된 활성 조성물의 미리 결정된 분량을 함유할 수 있다.
치료학적 유효량은 당해 분야에 널리 공지된 바대로 환자 특징, 예컨대 연령, 체중, 성별, 상태, 합병증, 다른 질환 등에 기초하여 통상의 기술 의학 또는 수의학 작업자에 의해 결정될 수 있다.
약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 항산화제를 포함할 수 있다. 이들 조성물은 아쥬번트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 또한 함유할 수 있다. 미생물의 존재의 방지는 상기 무균 절차 및 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로뷰탄올, 페놀 소르브산 등의 포함 둘 다에 의해 보장될 수 있다. 조성물에 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 포함하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 주사용 약제학적 형태의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 물질, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 포함에 의해 발생할 수 있다.
약제학적 조성물은 통상적으로 제조 및 조정의 조건 하에 무균 및 안정해야 한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀션, 리포솜, 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 구조화된 구조로서 제제화될 수 있다. 무균 주사용 용액은 필요한 바대로 상기 열거된 성분 중 하나 또는 이들의 조합과 함께 적절한 용매 중에 필요한 양의 활성제(예를 들어, 항체)의 혼입, 이어서 무균 마이크로여과에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터 필요한 다른 성분을 함유하는 무균 비히클로 활성제를 혼입함으로써 제조된다. 무균 주사용 용액의 제조를 위한 무균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 이전에 무균 여과된 이의 용액으로부터 임의의 추가적인 원하는 성분과 활성제의 분말을 생성시키는 진공 건조 및 냉동 건조(동결건조)이다. 약제학적 조성물은 추가적인 활성 성분, 및 상기 언급된 것을 포함할 수 있다.
적합한 약제학적으로 허용 가능한 완충제, 희석제, 담체 및 부형제는 당해 분야에 널리 공지되어 있다(문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A.R Gennaro, Ed., Mack Publishing Company (1990) and handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd edition, A. Kibbe, Ed., Pharmaceutical Press (2000)](이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨) 참조).
용어 "완충제"는 pH를 안정화시킬 목적으로 산-염기 혼합물을 함유하는 수성 용액을 포함하도록 의도된다. 완충제의 예는 트리즈마(Trizma), 비신(Bicine), 트리신(Tricine), MOPS, MOPSO, MOBS, 트리스(Tris), 허페스(Hepes), HEPBS, MES, 포스페이트, 카보네이트, 아세테이트, 시트레이트, 글라이콜레이트, 락테이트, 보레이트, ACES, ADA, 타르트레이트, AMP, AMPD, AMPSO, BES, CABS, 카코딜레이트, CHES, DIPSO, EPPS, 에탄올아민, 글라이신, HEPPSO, 이미다졸, 이미다졸락트산, PIPES, SSC, SSPE, POPSO, TAPS, TABS, TAPSO 및 TES이다.
용어 "희석제"는 약제학적 제제에서 물질을 희석시킬 목적으로 수성 또는 비수성 용액을 포함하도록 의도된다. 희석제는 식염수, 물, 폴리에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜, 에탄올 또는 오일(예컨대, 홍화유, 옥수수유, 땅콩유, 면실유 또는 참깨유) 중 하나 이상일 수 있다.
용어 "아쥬번트"는 본 발명의 물질의 생물학적 효과를 증가시키도록 제제에 첨가되는 임의의 화합물을 포함하도록 의도된다. 아쥬번트는 상이한 아실 조성물의 상이한 음이온, 예를 들어 플루오라이드, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 티오사이아네이트, 설파이트, 하이드록사이드, 포스페이트, 카보네이트, 락테이트, 글라이콜레이트, 시트레이트, 보레이트, 타르트레이트 및 아세테이트(이들로 제한되지는 않음)와의 아연, 구리 또는 은 염 중 하나 이상일 수 있다. 아쥬번트는 또한 양이온성 중합체, 예컨대 양이온성 셀룰로스 에터, 양이온성 셀룰로스 에스터, 탈아세틸화 히알우론산, 키토산, 양이온성 덴드리머, 양이온성 합성 중합체, 예컨대 폴리(비닐 이미다졸) 및 양이온성 폴리펩타이드, 예컨대 폴리히스티딘, 폴리라이신, 폴리아르기닌 및 이들 아미노산을 함유하는 펩타이드일 수 있다.
부형제는 탄수화물, 중합체, 지질 및 미네랄 중 하나 이상일 수 있다. 탄수화물의 예는 예를 들어 동결건조를 수월하게 하기 위해 조성물에 첨가되는 락토스, 글루코스, 수크로스, 만니톨 및 사이클로덱스트린을 포함한다. 중합체의 예는, 예를 들어 점도 제어를 위해, 생체접착을 달성하기 위해, 또는 화학 및 단백분해 분해로부터 지질을 보호하기 위해 조성물에 첨가되는, 전분, 셀룰로스 에터, 셀룰로스 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸 셀룰로스, 에틸하이드록시에틸 셀룰로스, 알기네이트, 카라기난, 히알우론산 및 이들의 유도체, 폴리아크릴산, 폴리설포네이트, 폴리에틸렌글라이콜/폴리에틸렌 옥사이드, 폴리에틸렌옥사이드/폴리프로필렌 옥사이드 공중합체, 상이한 가수분해도의 폴리비닐알코올/폴리비닐아세테이트 및 폴리비닐피롤리돈(모두 상이한 분자량임)이다. 지질의 예는, 중합체에 대한 것과 유사한 이유로 조성물에 첨가되는, 지방산, 인지질, 모노-, 다이- 및 트라이글라이세라이드, 세라마이드, 스핑고지질 및 글라이코리피드이고(모두 상이한 아실 사슬 길이 및 포화를 가짐), 난 레시틴, 콩 레시틴, 수소화 난 및 콩 레시틴이다. 미네랄의 예는 액체 축적의 감소 또는 유리한 안료 특성과 같은 이익을 얻기 위해 조성물에 첨가되는 탈크, 산화마그네슘, 산화아연 및 산화티탄이다.
본 발명의 활성 항체 기반 물질은 이의 전달에 적합하도록 당해 분야에 공지된 임의의 유형의 약제학적 조성물로 제제화될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 물질이, 다른 약제학적으로 허용 가능한 담체 이외에, 미셀, 불용성 단층 및 액체 결정으로서 응집된 형태로 존재하는 양친매성 물질, 예컨대 지질과 조합된, 리포솜의 형태일 수 있다. 리포솜 제제에 적합한 지질은, 제한 없이, 모노글라이세라이드, 다이글라이세라이드, 설파타이드, 리소레시틴, 인지질, 사포닌, 담즙산 등을 포함한다. 적합한 지질은 또한 혈류 순환 시간을 연장시키기 위해 극성 헤드 기에서 폴리(에틸렌 글라이콜)에 의해 상기 변형된 지질을 포함한다. 이러한 리포솜 제제의 제조는 예를 들어 US 제4,235,871호(이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨)에서 발견될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 또한 생체분해성 마이크로구의 형태일 수 있다. 지방족 폴리에스터, 예컨대 폴리(락트산)(PLA), 폴리(글라이콜산)(PGA), PLA 및 PGA의 공중합체(PLGA) 또는 폴리(카프로락톤)(PCL) 및 폴리언하이드라이드는 마이크로구의 제조에서 생체분해성 중합체로서 널리 사용된다. 이러한 마이크로구의 제조는 US 제5,851,451호 및 EP 제0 213 303호(이들의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨)에서 발견될 수 있다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들어 폴리-감마 글루탐산에 기초하여 나노입자의 형태로 제공된다. 이러한 나노입자의 제조 및 사용의 상세내용은 WO 제2011/128642호(이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함됨)에서 발견될 수 있다. 본 발명의 병용 치료제의 활성 성분 중 하나 이상이 별개의 나노입자에서 제제화될 수 있거나, 활성 성분 둘 다가 동일한 나노입자에서 제제화될 수 있는 것으로 당해 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다.
추가의 실시형태에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 중합체 겔의 형태로 제공되고, 여기서 중합체, 예컨대 전분, 셀룰로스 에터, 셀룰로스 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸 셀룰로스, 에틸하이드록시에틸 셀룰로스, 알기네이트, 카라기난, 히알우론산 및 이들의 유도체, 폴리아크릴산, 폴리비닐 이미다졸, 폴리설포네이트, 폴리에틸렌글라이콜/폴리에틸렌 옥사이드, 폴리에틸렌옥사이드/폴리프로필렌 옥사이드 공중합체, 상이한 가수분해도의 폴리비닐알코올/폴리비닐아세테이트 및 폴리비닐피롤리돈은 물질을 함유하는 용액의 점증에 사용된다. 중합체는 또한 젤라틴 또는 콜라겐을 포함할 수 있다.
대안적으로, 물질들은 단순히 식염수, 물, 폴리에틸렌 글라이콜, 프로필렌 글라이콜, 에탄올 또는 오일(예컨대, 홍화유, 옥수수유, 땅콩유, 면실유 또는 참깨유), 트라가칸스 검 및/또는 다양한 완충제 중에 용해될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물이 활성제의 작용의 강화를 위해 이온 및 한정된 pH를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 추가적으로, 조성물은 종래의 약제학적 조작, 예컨대 무균으로 처리될 수 있고/있거나, 종래의 아쥬번트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 완충제, 충전제 등을 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 당해 분야의 당업자에게 공지된 임의의 적합한 경로를 통해 투여될 수 있다. 따라서, 가능한 투여 경로는 비경구(정맥내, 피하 및 근육내), 국소, 눈, 코, 폐, 협측, 경구, 비경구, 질 및 직장을 포함한다. 또한 임플란트로부터의 투여가 가능하다.
유리하게는, 약제학적 조성물은 종양의 부위에서 또는 그 근처에서, 예를 들어 종양내로 또는 종양주변으로 투여에 적합하다.
약제학적 조성물이 비경구 투여에 적합한 것이 바람직하다. 약제학적 조성물로 항체를 제제화하는 방법은 의학 및 약학의 분야의 당업자에게 널리 공지될 것이다. 바람직한 조성물은 수반 실시예에 기재되어 있다.
본 발명의 병용 치료제는 주사용 지속 방출 약물 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있다. 이것은 구체적으로 주사의 빈도를 감소시키도록 설계된다. 이러한 시스템의 예는 주사되면 지속적인 기간에 걸쳐 천천히 rhGH를 방출하는 생체분해성 마이크로구에서 재조합 인간 성장 호르몬(rhGH)을 캡슐화하는 누트로핀 데포이다. 바람직하게는, 전달은 근육내(i.m.) 및/또는 피하로(s.c.) 및/또는 정맥내로(i.v.) 수행된다.
본 발명의 병용 치료제는 필요한 부위로 직접적으로 약물을 방출하는 수술로 이식된 장치에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 비트라세르트(Vitrasert)는 CMV 망막염을 치료하기 위해 눈으로 직접적으로 간시클로버를 방출한다. 질환의 부위로의 이 독성 물질의 직접 적용은 약물의 상당한 전신 부작용 없이 효과적인 치료를 달성한다.
전기천공 치료(electroporation therapy; EPT) 시스템은 본 발명의 병용 치료제의 투여에 또한 이용될 수 있다. 세포에 펄스 자기장을 전달하는 장치는 약물에 대한 세포막의 투과성을 증가시켜서, 세포내 약물 전달을 상당히 증대시킨다.
본 발명의 병용 치료제는 전기혼입(electro-incorporation; EI)에 의해 또한 전달될 수 있다. 피부의 표면에서 직경이 30마이크론 이하인 작은 입자가 전기천공에서 사용된 것과 동일하거나 유사한 전기 펄스를 경험할 때 EI가 발생한다. EI에서, 이들 입자는 각질층을 통해 더 깊은 피부층으로 몰아진다. 입자는 약물 또는 유전자에 의해 장입되거나 코팅될 수 있거나, 단순히 약물이 진입할 수 있는 피부에서 기공을 생성하는 "불릿(bullet)"으로서 작용할 수 있다.
본 발명의 대안적인 병용 치료제는 열에 민감한 레겔(ReGel) 주사용 시스템이다. 신체 온도 아래에서, 레겔은 주사용 액체이지만, 신체 온도에서 이것은 공지된, 안전한, 생체분해성 중합체로 천천히 침식하고 용해되는 겔 저장소를 즉시 형성한다. 활성 물질은 생물중합체가 용해되면서 시간이 지나면서 전달된다.
본 발명의 병용 치료제는 경구로 또한 전달될 수 있다. 과정은 단백질 및 펩타이드를 동시전달하기 위해 신체에서 비타민 B12 및/또는 비타민 D의 경구 흡수를 위한 천연 과정을 이용한다. 비타민 B12 및/또는 비타민 D 흡수 시스템을 통과함으로써, 본 발명의 물질, 약제 및 약제학적 조성물은 장벽을 통해 이동할 수 있다. 복합체는 복합체의 비타민 B12 부분/비타민 D 부분에서의 고유 인자(intrinsic factor; IF)에 대한 상당한 친화도 및 복합체의 활성 물질의 상당한 생물활성 둘 다를 보유하는 약물과 비타민 B12 유사체 및/또는 비타민 D 유사체 사이에 합성된다.
본 발명의 병용 치료제는 "트로잔(Trojan) 펩타이드"에 의해 세포로 도입될 수 있다. 이것은 이행성 특성을 가지고 혈장 막에 걸쳐 친수성 화합물을 운반할 수 있는 침투라 불리는 폴리펩타이드의 종류이다. 이 시스템은 세포질 및 핵에 대한 올리고펩타이드의 직접 표적화를 허용하고, 비세포 유형 특이적이고 매우 효과적일 수 있다. 문헌[Derossi et al. (1998), Trends Cell Biol. 8, 84-87]을 참조한다.
바람직하게는, 본 발명의 병용 치료제는 활성 성분의 1일 용량 또는 단위, 1일 하위용량 또는 이들의 적절한 분획을 함유하는 단위 투약량이다.
본 발명의 병용 치료제는 약제학적으로 허용 가능한 제형에서 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 형태로, 임의적으로 비독성 유기, 또는 무기, 산, 또는 염기, 부가염의 형태로 경구로 또는 임의의 비경구 경로에 의해 보통 투여될 것이다. 치료하고자 하는 환자 및 장애, 및 투여 경로에 따라, 조성물은 다양한 용량으로 투여될 수 있다.
인간 치료에서, 본 발명의 병용 치료제는 단독으로 투여될 수 있지만, 의도된 투여 경로 및 표준 약제학적 실행과 관련하여 선택된 적합한 약제학적 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합되어 일반적으로 투여될 것이다.
예를 들어, 본 발명의 병용 치료제는 즉시, 지연 또는 제어 방출 적용을 위해 가향제 또는 착색제를 함유할 수 있는 정제, 캡슐, 질좌약(ovule), 엘릭시르, 용액 또는 현탁액의 형태로 경구로, 협측으로 또는 설하로 투여될 수 있다. 본 발명의 물질, 약제 및 약제학적 조성물은 해면체 주사를 통해 또한 투여될 수 있다.
이러한 정제는 부형제, 예컨대 미결정질 셀룰로스, 락토스, 시트르산나트륨, 탄산칼슘, 이염기성 인산칼슘 및 글라이신, 붕괴제, 예컨대 전분(바람직하게는 옥수수, 감자 또는 타피오카 전분), 나트륨 전분 글라이콜레이트, 크로스카르멜로스 나트륨 및 소정의 복합 실리케이트 및 과립화 결합제, 예컨대 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC), 하이드록시-프로필셀룰로스(HPC), 수크로스, 젤라틴 및 아카시아를 함유할 수 있다. 추가적으로, 활택제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 글라이세릴 베헤네이트 및 탈크가 포함될 수 있다.
유사한 유형의 경구 조성물은 젤라틴 캡슐에서 충전제로서 또한 사용될 수 있다. 이와 관련하여 바람직한 부형제는 락토스, 전분, 셀룰로스, 유당 또는 고분자량 폴리에틸렌 글라이콜을 포함한다. 수성 현탁액 및/또는 엘릭시르의 경우, 본 발명의 물질, 약제 및 약제학적 조성물은 다양한 감미료 또는 향료, 착색제 또는 염료와, 유화제 및/또는 현탁제와 및 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 프로필렌 글라이콜 및 글라이세린 및 이들의 조합과 조합될 수 있다.
본 발명의 병용 치료제는 비경구로, 예를 들어 정맥내로, 동맥내로, 복강내로, 포막내로(intra-thecally), 심실내, 흉골내로, 두개골내로, 근육내로 또는 피하로 투여될 수 있거나, 이들은 점적주사 기법에 의해 투여될 수 있다. 이들은 용액이 혈액과 등장성이 되게 하기에 충분한 다른 물질, 예를 들어 염 또는 글루코스를 함유할 수 있는 무균 수성 용액의 형태로 최고로 사용된다. 수성 용액은 필요한 경우 (바람직하게는 3 내지 9의 pH로) 적절하게 완충되어야 한다. 무균 조건 하에 적합한 비경구 제제의 제조는 당해 분야의 당업자에게 널리 공지된 표준 약제학적 기법에 의해 용이하게 달성된다.
비경구 투여에 적합한 약제 및 약제학적 조성물은 제제가 의도되는 수혜자의 혈액과 등장성이 되게 하는 항산화제, 완충제, 세균 발육 저지제 및 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 무균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 무균 현탁액을 포함한다. 약제 및 약제학적 조성물은 예를 들어 앰플 또는 바이알에 밀봉된 단위 용량 또는 다용량 용기에서 제시될 수 있거나, 사용 직전에 오직 무균 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가를 요하는 냉동 건조(동결건조) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 이전에 기재된 종류의 무균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다.
본 발명의 병용 치료제는 또한 비강내로 또는 흡입에 의해 투여될 수 있고, 편리하게는 적합한 추진제, 예를 들어 다이클로로다이플루오로메탄, 트라이클로로플루오로메탄, 다이클로로테트라플루오로-에탄, 하이드로플루오로알칸, 예컨대 1,1,1,2-테트라플루오로에탄(HFA 134A3 또는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판(HFA 227EA3), 이산화탄소 또는 다른 적합한 가스의 사용에 의해 가압 용기, 펌프, 스프레이 또는 분무장치로부터 건조 분말 흡입기 또는 에어로졸 스프레이 제시의 형태로 전달된다. 가압 에어로졸의 경우, 투약량 단위는 계량된 양을 전달하도록 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 가압 용기, 펌프, 스프레이 또는 분무장치는 활택제, 예를 들어 소르비탄 트라이올레에이트를 추가적으로 함유할 수 있는, 예를 들어 용매로서 에탄올 및 추진제의 혼합물을 사용하여 활성제의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있다. 흡입기 또는 통기장치에서 사용하기 위한 (예를 들어 젤라틴으로부터 제조된) 캡슐 및 카트리지는 본 발명의 물질 및 적합한 분말 기제, 예컨대 락토스 또는 전분의 분말 혼합물을 함유하도록 제제화될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 병용 치료제는 좌제 또는 페서리의 형태로 투여될 수 있거나, 이것은 로션, 용액, 크림, 겔, 연고 또는 더스팅 분말의 형태로 국소로 적용될 수 있다. 본 발명의 물질, 약제 및 약제학적 조성물은 예를 들어 피부 패치의 사용에 의해 피하로 또한 투여될 수 있다. 이들은 특히 질환을 치료하기 위해 눈 경로에 의해 또한 투여될 수 있다.
안과용 용도를 위해, 본 발명의 병용 치료제는 등장성, pH 조정된, 무균 식염수 중의 미분화 현탁액으로서, 또는, 바람직하게는 임의적으로 보존제, 예컨대 벤질알코늄 클로라이드와 조합되어 등장성, pH 조정된, 무균 식염수 중의 용액으로서 제제화될 수 있다. 대안적으로, 이들은 연고, 예컨대 페트롤라툼 중에 제제화될 수 있다.
피부에 대한 국소 도포를 위해, 본 발명의 병용 치료제는 하기 중 하나 이상과, 예를 들어 혼합물 중에 현탁되거나 용해된 활성제를 함유하는, 적합한 연고로서 제제화될 수 있다: 광유, 액체 페트롤라툼, 화이트 페트롤라툼, 프로필렌 글라이콜, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 물질, 유화 왁스 및 물. 대안적으로, 이들은 하기 중 하나 이상과, 예를 들어 혼합물 중에 현탁되거나 용해된, 적합한 로션 또는 크림으로서 제제화될 수 있다: 광유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리에틸렌 글라이콜, 액체 파라핀, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스터 왁스, 세테아릴 알코올, 2-옥틸도데칸올, 벤질 알코올 및 물.
입에서의 국소 투여에 적합한 제제는 가향 기제, 보통 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸스에서 활성 성분을 포함하는 로젠지; 불활성 기제, 예컨대 젤라틴 및 글라이세린, 또는 수크로스 및 아카시아에서 활성 성분을 포함하는 파스틸; 및 적합한 액체 담체 중에 활성 성분을 포함하는 구강 청결제를 포함한다.
일반적으로, 인간에서, 종양 부위에서의 또는 근처에서의 본 발명의 병용 치료제의 국소 투여는 바람직한 경로, 특히 종양내 또는 종양주변 투여이다.
수의학적 용도를 위해, 본 발명의 병용 치료제는 일반 수의학적 실행에 따라 적합하게 허용되는 제제로서 투여되고, 수의사는 특정한 동물에 가장 적절한 투약 섭생 및 투여 경로를 결정할 것이다.
본 발명의 실시형태는 하기를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다:
A. 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법으로서, (a) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된, 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 치료학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계 및 임의적으로 (b) 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 대상체에게 전신으로 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
B. 실시형태 A에 있어서, 단계 (b)의 추가적인 치료제는 항-CD40 항체가 아닌 암의 치료를 위한 면역치료제인, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
C. 실시형태 B에 있어서, 상기 면역치료제는 PD1 저해제이고, 임의적으로 상기 PD1 저해제는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체인, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
D. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양은 선종, 아세포종, 암종, 섬유성 종양, 섬유조직형성 소형 원형 세포 종양, 내분비 종양, 배아 세포 종양, 림프종, 육종, 윌름스 종양, 폐 종양, 결장 종양, 림프 종양, 유방 종양 또는 흑색종인, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
E. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양은 흑색종, 바람직하게는 전이성 흑색종인, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
F. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 항체는 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 적어도 하나의 CDR을 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
G. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 항체는 서열 번호 1, 2 및 3 및/또는 서열 번호 4, 5 및 6의 CDR 서열을 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
H. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 항체는 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
I. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 항체는 서열 번호 11의 경쇄 불변 영역 및/또는 서열 번호 12의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
J. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)의 항체는 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
K. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a) 및 (b)는 동시에 수행되거나, 단계 (b)는 단계 (a) 후 24시간 내지 2주에, 단계 (a) 후 24시간 내지 1주에, 단계 (a) 후 24시간 내지 72시간에, 또는 단계 (a) 후 24시간 내지 48시간에 수행되는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
L. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)는 종양 부위에 대한 항체의 국소 투여를 포함하고, 임의적으로 항체는 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체에 의한 국소 투여에 적합한 조성물로서 제제화되고/되거나, 항체는 추가적인 치료학적 모이어티에 접합된, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
M. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)에서 투여된 항체의 양의 적어도 30%는 투여 후 4시간에 종양 부위에서 보유되고, 바람직하게는 상기 양의 적어도 40%는 투여 후 4시간에 종양 부위에서 보유된, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
N. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (b)의 추가적인 치료제는 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체에 의한 전신 투여에 적합한 조성물로서 제제화된, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
O. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 단계 (a)는 다수의 별개의 경우에 수행되고, 단계 (b)는 추가적인 치료제에 대한 대상체의 노출이 상기 방법의 기간 동안 연속적이도록 수행되는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
P. 이전의 실시형태 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 인간인, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
Q. 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 키트로서, (a) CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유된, 항체의 치료학적 유효량 및 임의적으로 (b) 대상체에 대한 전신 투여에 적합한 추가적인 치료제의 치료학적 유효량을 포함하는, 키트.
R. 대상체에서 고형 종양을 치료하기 위한 용도를 위한, CD40에 특이적으로 결합하고, 투여 이후 종양 부위에서 보유될 수 있는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
S. 실시형태 R에 있어서, 하나 이상의 추가적인 치료제와 병용하여 사용하기 위한 것이고, 추가적인 치료제(들)는 항-CD40 항체가 아닌, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
T. 실시형태 S에 있어서, 상기 추가적인 치료제는 종래의 방사선치료제, 경로 저해제(예컨대, 타이로신 키나제 저해제 또는 세린/트레오닌 키나제 저해제), 사이토카인(예컨대, IL-2, IL-12, IL-15 또는 IL-21), 화학치료제 및 면역치료제로 이루어진 군으로부터 선택된 암 치료제인, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
U. 실시형태 S 또는 T에 있어서, 하기 추가적인 치료제 중 하나 이상과 병용하여 사용하기 위한 것인, 항체 또는 이의 항원 결합 부분:
(i) 항-PD1 면역치료제;
(ii) 항-CTLA-4 면역치료제;
(iii) 항-OX40 면역치료제; 및/또는
(iv) 항-CD137 면역치료제.
V. 실시형태 T 또는 U에 있어서, 상기 면역치료제는 PD1 저해제이고, 임의적으로 상기 PD1 저해제는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체인, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
W. 실시형태 R 내지 V 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양은 선종, 아세포종, 암종, 섬유성 종양, 섬유조직형성 소형 원형 세포 종양, 내분비 종양, 배아 세포 종양, 림프종, 육종, 윌름스 종양, 폐 종양, 결장 종양, 림프 종양, 유방 종양 또는 흑색종인, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
X. 실시형태 R 내지 W 중 어느 하나에 있어서, 고형 종양은 흑색종, 바람직하게는 전이성 흑색종인, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
Y. 실시형태 R 내지 X 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된 적어도 하나의 CDR을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
Z. 실시형태 R 내지 Y 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 1, 2 및 3 및/또는 서열 번호 4, 5 및 6의 CDR 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
AA. 실시형태 R 내지 Z 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
BB. 실시형태 R 내지 AA 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 11의 경쇄 불변 영역 및/또는 서열 번호 12의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
CC. 실시형태 R 내지 BB 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 인간 CD40에 대한 결합에 대해 경쟁하는, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
DD. 실시형태 R 내지 CC 중 어느 하나에 있어서, 항체는 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체에 의한 국소 투여에 적합한 조성물로서 제제화되고/되거나, 항체는 추가적인 치료학적 모이어티에 접합된, 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
EE. 실시형태 R 내지 DD 중 어느 하나에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 하나 이상의 추가적인 치료제(들)를 포함하는 병용 치료제 조성물로서, 추가적인 치료제(들)는 항-CD40 항체가 아닌, 병용 치료제 조성물.
FF. 실시형태 EE에 있어서, 상기 추가적인 치료제는 종래의 방사선치료제, 경로 저해제(예컨대, 타이로신 키나제 저해제 또는 세린/트레오닌 키나제 저해제), 사이토카인(예컨대, IL-2, IL-12, IL-15 또는 IL-21), 화학치료제 및 면역치료제로 이루어진 군으로부터 선택된 암 치료제인, 병용 치료제 조성물.
GG. 실시형태 EE 또는 FF에 있어서,
(i) 항-PD1 면역치료제;
(ii) 항-CTLA-4 면역치료제;
(iii) 항-OX40 면역치료제; 및/또는
(iv) 항-CD137 면역치료제를 포함하는, 병용 치료제 조성물.
HH. 실시형태 EE 내지 GG 중 어느 하나에 있어서, 상기 면역치료제는 PD1 저해제이고, 임의적으로 상기 PD1 저해제는 항-PD1 또는 항-PD-L1 항체인, 병용 치료제 조성물.
II. 대상체에서의 고형 종양의 치료를 위한 약제의 제조에서의, 실시형태 R 내지 DD 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 용도.
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 예시되고, 실시예는 추가의 제한으로서 해석되지 않아야 한다. 본원에 걸쳐 인용된 모든 도면 및 모든 참고문헌, 특허 및 공개 특허 출원의 내용은 본 명세서에서 참고로 명확히 포함된다.
실시예
실시예 1 - 서열 정보
항-CD40 항체 클론 G12(항체 ADC-1013)
(a) CDR 서열(IMGT 넘버링(코어 CDR 서열은 내부에 밑줄 표시됨)에 따라 정의됨)
VL CDR1: CTGSSSNIGAGYNVY [서열 번호 1];
VL CDR2: GNINRPS [서열 번호 2];
VL CDR3: CAAWDKSISGLV [서열 번호 3];
VH CDR1: GFTFSTYGMH [서열 번호 4];
VH CDR2: GKGLEWLSYISGGSSYIFYADSVRGR [서열 번호 5];
VH CDR3: CARILRGGSGMDL [서열 번호 6]
(b) 가변 영역 서열
가변 경쇄(V L ) 아미노산 서열 - 서열 번호 7
Figure 112017020769680-pct00003
가변 중쇄(V H ) 아미노산 서열 - 서열 번호 8
Figure 112017020769680-pct00004
가변 경쇄(V L ) 뉴클레오타이드 서열 - 서열 번호 9
Figure 112017020769680-pct00005
가변 중쇄(V H ) 뉴클레오타이드 서열 - 서열 번호 10
Figure 112017020769680-pct00006
(c) 예시적인 불변 영역 아미노산 서열
인간 Ig 람다 경쇄 C2 영역(NCBI AAA59107.1) - 서열 번호 11
Figure 112017020769680-pct00007
인간 Ig 감마-1 중쇄 불변 영역(유니프로트 P01857.1) - 서열 번호 12
Figure 112017020769680-pct00008
인간 CD40 서열 - 서열 번호 13
>gi|117606560|gb|ABK41937.1| CD40 분자, TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 5 [호포 사피엔스]
Figure 112017020769680-pct00009
실시예 2 - 국소 또는 전신 투여 후 생체이용률
종양주변, 종양내 또는 정맥내 투여 후 ADC-1013의 생체이용률을 연구하기 위해 사이노몰거스 원숭이 및 마우스에서 전임상 연구를 수행하였다.
재료 및 방법
MB49인 인간 CD40 음성 방광암 세포에 의해 접종된 인간 CD40 양성 전이유전자 마우스 모델에서 ADC-1013의 약동학을 평가하였다. ADC-1013을 100㎍의 용량으로 종양내로(IT), 종양주변으로(PT) 또는 정맥내로(IV) 주사하고, 혈청을 치료전 및 치료 후 4시간 및 24시간에 수집하였다. 약동학적 프로필(도 1)은 투여 후 4시간에 ADC-1013의 전신 노출이 IV와 비교하여 IT 또는 PT 투여 후 100 내지 1000배 감소한다는 것을 나타낸다.
사이노몰거스 원숭이를 피하 또는 정맥내 경로를 통해 ADC-1013에 노출시켰다. 여기서 피하 투여는 흑색종에 대한 국소 투여와 유사하다.
결과 및 결론
투약전 및 투약 후 15분 및 2시간, 6시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간 및 168시간의 시점에서 독성동태 분석 및 측정된 ADC1013의 수준을 위해 모든 동물로부터 혈액 샘플을 취했다(도 2). 곡선 하 평균 면적(AUC-96)에 기초한 피하 투여 후 ADC1013의 생체이용률을 계산하였다. 피하 대 정맥내 투여에 대한 AUC-96은 28-42% 범위여서 28% 내지 42% 전신 생체이용률을 나타낸다.
이 관찰은 실시예 3에 개시된 바대로 B16.F10 마우스 모델에서 면역치료 항체의 투여된 조합의 용량 수준을 결정하는 데 적용된다.
실시예 3 - 생체내 쥣과 흑색종 모델
B16.F10은 전임상 마우스 모델에서 흑색종에 대한 모델로서 가장 흔히 사용되는 종양 세포주이다(Grosso 2013 Cancer Immunity Review). 마우스 B16.F10 흑색종 세포주는 인간 흑색종과 훌륭히 비교되는데, 왜냐하면 이것은 낮은 수준에서 MHC를 발현하고, 불량하게 면역원성인 것으로 생각되기 때문이다(Lechner J immunother 2013). 낮은 MHC 수준은 예를 들어 불충분한 T 세포 활성화와 연관될 수 있고, 가능하게는 이러한 종양이 면역치료에 의해 치료하기 어렵게 만든다. B16.F10의 번역 연관성을 증가시키기 위해, 세포주를 인간 CD40에 의해 형질감염시켰다. 형질감염된 세포주(B16.F10(hCD40+라 칭함)를 이 실험에 사용하였다.
재료 및 방법
흑색종 세포주 B16.F10을 미국 세포주 은행(American Type Cell Collection; ATCC)으로부터 얻었다. 인간 CD40을 함유하는 직선화 벡터에 의해 B16.F10을 형질감염시킴으로써 그리고 리포펙타민(Invitrogen)을 사용함으로써 hCD40 발현 세포주 B16.F10(hCD40+)을 얻었다. 벡터는 네오마이신 내성을 부여하는 구성요소를 함유하였다. 형질감염된 세포를 DMEM(4.5g/ℓ의 글루코스, 울트라글루타민 I 및 피류베이트나트륨 함유), 10% FCS, 허페스 및 1㎎/㎖의 G418 중에 배양하여 안정한 형질감염체를 선택하였다. CD40 바이오틴 및 자기 자석(Miltenyi)을 사용하여 CD40 양성 클론을 선택하였다. 유세포분석법에 의해 측정된 검증된 hCD40 발현을 가지는 단일 클론(클론 5.G12.46)을 선택하였다.
대수기에서 성장한, B16.F10(hCD40+)을 100㎕의 용적으로 hCD40 전이유전자 마우스(hCD40Tg)의 오른쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. 접종된 세포의 평균 수는 마우스마다 0.1x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013을 종양내로(용량마다 20㎕, 100㎍) 투여하고, 항-PD-1(클론 RPM1-14, BioXcell)을 복강내로(용량마다 100㎕, 250㎍) 투여하였다.
결과 및 결론
형질감염된 B16.F10(hCD40+) 흑색종 세포주는 도 3A에 도시된 바대로 인간 CD40의 실질적인 발현을 나타냈다. 제1 마우스가 희생된 일자에 생존(도 4A) 및 종양 용적(도 4B)에 의해 피하 B16.F10(hCD40+) 흑색종을 보유하는 hCD40tg 마우스에서 ADC-1013의 항종양 효과를 결정하였다. ADC-1013은 증가한 생존 시간 및 감소한 종양 용적에 의해 측정된 상당한 정도의 종양 성장을 나타냈다. 동물을 ADC-1013 및 항-PD-1 항체의 조합에 의해 치료함으로써 항종양 효능을 증가하였다.
실시예 4 - 생체내 쥣과 방광암 모델
재료 및 방법
8주령 암컷 hCD40Tg 마우스에서 종양을 개시시키도록 MB49 방광암 세포를 사용하였다. 0일에, 0.25x106개의 종양 세포를 마우스의 오른쪽 옆구리로 피하로 접종하였다. 14일에, 마우스를 시험 항-CD40 항체(마우스당 전체 1㎍ 및 30㎍의 항체 또는 PBS; 그룹마다 4마리의 마우스)에 의해 종양내로 또는 복강내 주사하였다. 16일에, 40마리의 마우스를 경추탈골에 의해 희생시켰다. 종양 배수 림프절을 완전 배지로 수집하고, 각각의 실험군으로부터의 2개의 종양 또는 림프절 함께 혼주하였다. 수집된 조직을 리버라제(Liberase) TL(Roche) 및 나일론 네트 필터(100?m; Fischer 과학적)를 사용하여 효소로 및 기계적으로 균질화하였다. 막을 3-10mM EDTA 및 0.1% 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI 배지에 의해 완전히 세척하여 단일 세포 현탁액을 제조하였다. 단리된 세포를 0.5% 소 혈청 알부민을 함유하는 PBS 중에 세척하고, 세포를 마우스 항-CD16/32(BD Bioscience)에 의해 처리함으로써 비특이적 Fc 결합을 차단하였다.
유세포분석법에 의해 CD11c 양성 세포 및 CD11b 양성 세포에서 별개로 CD86 발현 수준(활성화에 대한 마커로서)을 분석하였다. CD11c은 수지상 세포에 대한 마커이다. CD11b는 단핵구, 대식세포 및 수지상 세포의 하위그룹에서 발현된다. 세포를 살아 있는/죽은 고정 가능한 균주 FVS450(BD Bioscience) 및 1:100 희석된 CD11c-PE, CD11b-PECy7 및 CD86-APC(BD Bioscience)에 특이적인 항체에 의해 염색하였다. 염색한 후, 모든 세포를 셀픽스(Cellfix)(BD Bioscience)를 사용하여 파라포름알데하이드 고정하였다. 각각의 샘플에 대한 염색을 측정하고, CD86(샘플)-FMO(샘플)로서 계산하고, % 양성 세포 - PBS 대조군으로서 제시된다. 염색된 세포를 FACS Verse(Becton Dickinson) 및 FlowJo vX 분석 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 결과가 도 5a(CD11c 세포) 및 도 5b(CD11b 세포)에 도시되어 있다.
결과 및 결론
도 5a에서의 데이터는 항-CD40 항체에 의한 치료가 종양에서 CD86 발현에 의해 측정된 수지상 세포의 활성화를 증가시킨다는 것을 보여준다. 도 5b에서의 데이터는 항-CD40 항체에 의한 치료가 종양에서 CD86 발현에 의해 측정된 CD11b 양성 세포의 활성화를 증가시킨다는 것을 보여준다. 전체적으로, 더 강한 활성화가 복강내(IP) 치료와 비교하여 종양내(IT) 치료 후 발견되었다. 종양내(IT) 제공된 1㎍의 낮은 용량에 의한 치료는 수지상 세포의 예상치 못하게 높은 활성화를 생성시켰다.
실시예 5 - 병용 치료제 I의 생체내 효과
재료 및 방법
대수기에서 성장한, B16.F10(hCD40+) 종양 세포주를 100㎕의 용적으로 hCD40 전이유전자 마우스(hCD40Tg)의 오른쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. 접종된 세포의 수는 마우스마다 0.1x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013을 종양내로(용량마다 100㎍) 투여하였다. 항-PD-1, 용량마다 250㎍(클론 RPM1-14, BioXcell) 및 항-CTLA-4 항체, 용량마다 100㎍(9D9, BioXcel)을 복강내로 주사하였다. 14일에 종양 용적이 도 6에 도시되어 있다.
결과 및 결론
CTLA-4를 표적화하는 항체와 조합된 PD-1을 표적화하는 항체에 의한 치료가 임상 실험에서 상가 효과를 부여할 수 있다는 것이 나타났다(Wolchok et al New Eng J Med, 2013). 이 실시예에서, 본 발명자들은 CTLA-4/PD-1 조합에 대한 ADC-1013에 의한 치료의 추가가 흑색종 환자에서 치료학적 효과를 추가로 증가시킬 수 있다는 것을 제시하는 전임상 데이터를 개시한다. 14일에 종양 용적의 감소에 의해 측정된 항종양 효과는 CTLA-4 및 PD-1 단독과 비교하여 CTLA-4, PD-1 및 ADC-1013에 대해 상당히 더 우수하였다(도 6).
임상 환경에서, CTLA-4 항체는 임의의 이플리무맙, 트레멜리무맙 또는 다른 CTLA-4 표적화 항체일 수 있다. PD-1 표적화 항체는 인간 PD-1, 예컨대 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙 또는 기타에 결합하는 항체일 수 있다. 이것은 또한 PD-1의 리간드에 결합하는 항체, 예컨대 PD-L1 및 PD-L2 표적화 항체, 예컨대 더발루맙 및 아벨루맙일 수 있다.
실시예 6 - 병용 치료제 II의 생체내 효과
재료 및 방법
대수기에서 성장한, B16.F10 종양 세포주를 100㎕의 용적으로 hCD40 전이유전자 마우스(hCD40Tg)의 오른쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. 접종된 세포의 수는 마우스마다 0.1x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013, 항-CD137(클론 Lob 12.3) 및 항-OX40(CD86) 항체 및 대조군을 종양내로(용량마다 100㎍) 투여하였다. 용적이 도 7에 도시된 바대로 시간에 따라 뒤따랐다.
결과 및 결론
ADC-1013에 의한 치료는 대조군과 비교하여 상당한 항종양 반응을 생성하였다. 항종양 효과는 CD137 및 OX40을 표적화하는 항체에 의해 얻어진 항종양 효과보다 컸다(도 7). ADC-1013 및 OX40의 조합이 생성되었고, ADC-103과 CD137의 조합은 단일치료와 비교하여 더 강한 항종양 효과를 발생시켰다. 이것은 CD40 및 CD137의 조합 또는 CD40 및 OX40의 조합이 임상 이익을 가질 것이라는 것을 나타낸다.
실시예 7 - 마우스에서의 야생형 B16 흑색종에 대한 ADC-1013의 효과
재료 및 방법
B16.F10.hCD40+ 세포 또는 B16.F10(야생형) 세포(1x105)를 피하로 접종하고, 마우스를 3일, 6일 및 9일에(용량당 100㎍) ADC-1013에 의해 종양내로 치료하였다.
이 연구에 사용된 마우스는 hCD40tg 마우스이었다.
결과 및 결론
ADC-1013은 또한 B16.F10 종양에서 상당한 항종양 효과를 생성한다. B16.F10(야생형) 및 B16.F10.hCD40+ 종양에서 얻어진 항종양 효과는 유사하였다(도 8). 이것은 ADCC의 직접 유도가 인간-CD40 양성 흑색종의 치료에서 역할을 한다는 것을 배제하지 않는다. hCD40 양성 종양, 예컨대 더 낮은 면역 세포 침윤에서 다른 정량적 차이가 있을 수 있다. 추가로, B16 종양에서 인간 CD40 수준은 종양 샘플에서 생체외 측정된 바대로 낮았다.
실시예 8 - 림프종 모델(A20)에서의 ADC-1013의 효과
재료 및 방법
대수기에서 성장한, A20 림프종 세포주를 100㎕의 용적으로 hCD40tg-BalbC(F1) 마우스의 오른쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. hCD40tg 마우스를 BalbC 마우스에 의해 교차시킴으로써 hCD40tg-BalbC(F1) 마우스를 생성하였다. 접종된 세포의 수는 마우스마다 5x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. ADC-1013(용량당 30㎍)을 확립된 림프종 종양(A20)을 가지는 마우스에서 10일, 13일 및 16일에 종양주변으로 투여하였다.
결과 및 결론
ADC-1013에 의한 치료는 A20 림프종 모델에서 상당한 항종양 효과를 발생시킨다(도 9). 이 모델은 hCD40 음성이고, 여기서 입증된 항종양 효과는 ADC-1013에 의한 면역 세포의 활성화에 의해 유일하게 발생한다.
실시예 9 - 폐암 모델(LLC-1)에서의 ADC-1013의 효과
재료 및 방법
대수기에서 성장한, 폐암 세포주(LLC-1)를 100㎕의 용적으로 hCD40tg 마우스의 오른쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. 접종된 세포의 수는 마우스마다 0.25x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. ADC-1013(100㎍)을 확립된 종양(LLC-1)을 가지는 hCD40tg 마우스에서 4일, 7일 및 10일에 종양주변으로 투여하였다.
결과 및 결론
ADC-1013에 의한 치료는 폐암 모델에서 상당한(p<0.05, 일측 만 휘트니 t 시험) 항종양 효과를 발생시킨다(도 10). 이 모델은 hCD40 음성이고, 여기서 입증된 항종양 효과는 ADC-1013에 의한 면역 세포의 활성화에 의해 유일하게 발생한다.
실시예 10 - ADC-1013의 국소 투여의 원위 효과
재료 및 방법
대수기에서 성장한, B16.F10 종양 세포주를 100㎕의 용적으로 hCD40 전이유전자 마우스(hCD40Tg)의 오른쪽 옆구리 및 왼쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. 접종된 세포의 수는 마우스마다 0.1x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013 및 대조군을 오른쪽 옆구리에서 종양으로 종양내로 투여하였다(용량당 100㎍). 주사된 종양 및 비주사된 종양 둘 다의 종양 용적이 도 11에 도시된 바대로 시간에 따라 뒤따랐다.
결과 및 결론
국소, 종양내 치료는 또한 원위, 비주사된 종양에서 항종양 효과를 생성하였다. 100㎍의 용량의 치료 후 유리 ADC-1013의 수준은 시험관내 검정에서 ADC-1013에 대해 EC50보다 많이 낮아서, 비주사된 종양에 대한 항종양 효과가 비주사된 종양에 대한 주사된 종양 부위에서 활성화된 면역 세포의 이동에 부분적으로 의존한다는 것을 제안한다.
이것은 하나의 종양으로 주사된 ADC-1013이 다른 비주사된 종양에 대한 상당한 항종양 효과(예를 들어, 전이)를 가질 수 있다는 것을 제안한다.
실시예 11 - ADC-1013의 전신 (iv) 투여의 효과
재료 및 방법
대수기에서 성장한, B16.F10(hCD40+) 종양 세포주를 100㎕의 용적으로 hCD40 전이유전자 마우스(hCD40Tg)의 오른쪽 옆구리에 0일(D0)에 피하로 주사하였다. 접종된 세포의 수는 마우스마다 0.1x106이었다. 종양 성장을 종양 용적이 계산되는 너비, 길이 및 높이(w/2x l/2xh/2x pi x (4/3))에서 디지털 캘리퍼스에 의해 측정하였다. 치료제를 3일, 6일 및 9일에 투여하였다. ADC-1013을 정맥내로 투여하였다(용량당 100㎍).
결과 및 결론
ADC-1013의 전신, 정맥내 투여는 종양 성장에 대해 뚜렷한 저해 효과를 발생시켰다(도 12).
실시예 12 - 병용 치료제 III의 생체내 효과
재료 및 방법
암컷 BalbC 마우스를 5x106개의 A20 림프종 세포에 의해 피하로 접종하였다. 마우스를 5일 및 8일에 종양주변으로 9D9(항-CTLA-4 항체, BioXcel)에 의해 그리고 5일, 8일 및 11일에 종양내로 TLR 작용제 CpG(1668)에 의해 처리하였다. 생존율이 시간에 따라 뒤따랐다.
결과 및 결론
9D9 항체는 관문 수용체 CTLA-4를 표적화하고, CpG는 톨 유사 수용체 9에 결합한다. TLR은 항원 제시 세포, 예컨대 수지상 세포에서 발현된 막관통 단백질이다. CpG에 의한 TLR9의 결찰은 수지상 세포의 활성화를 유도한다. 결과가 도 13에 도시되어 있다.
TLR9 및 CTLA4를 표적화하는 치료의 조합의 항종양 효과는 CpG 단독에 의한 치료와 비교하여 증가한 항종양 효과를 발생시키지 않았다. 따라서, 데이터는 관문 저해제와 조합되어 수지상 세포를 활성화하는 치료의 조합이 증가한 항종양 효과를 항상 발생시키지는 않는다는 것을 보여준다.
따라서, 본 발명의 병용 치료제의 효능은 예측되거나 합당하게 예상되지 않을 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Alligator Bioscience AB <120> COMBINATION THERAPIES WITH ANTI CD40 ANTIBODIES <130> WO 2016/023960 <140> PCT/EP2015/068598 <141> 2015-08-12 <150> GB1414270.7 <151> 2014-08-12 <150> GB1422614.6 <151> 2014-12-18 <150> GB1507541.9 <151> 2015-05-01 <160> 13 <170> BiSSAP 1.2 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable light chain complementarity determining region 1 <400> 1 Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asn Val Tyr 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable light chain complementarity determining region 2 <400> 2 Gly Asn Ile Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable light chain complementarity determining region 3 <400> 3 Cys Ala Ala Trp Asp Lys Ser Ile Ser Gly Leu Val 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Variable heavy chain complementarity determining region 1 <400> 4 Gly Phe Thr Phe Ser Thr 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<210> 11 <211> 105 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Human Ig lambda light chain C2 region <400> 11 Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe 20 25 30 Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val 35 40 45 Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys 50 55 60 Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser 65 70 75 80 His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu 85 90 95 Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105 <210> 12 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Human Ig gamma-1 heavy chain constant region <400> 12 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 13 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Human CD40 sequence <400> 13 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 165 170 175 Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 195 200 205 Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 210 215 220 Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 225 230 235 240 Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 245 250 255 Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 260 265 270 Val Gln Glu Arg Gln 275

Claims (43)

  1. 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법에 사용하기 위한 병용 치료제로서, (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 암의 치료에서의 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하되,
    CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 1, 2 및 3의 경쇄 CDR 서열 및 서열 번호 4, 5 및 6의 중쇄 CDR 서열을 포함하고,
    상기 추가의 면역치료제는 PD1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 항-PD-1 항체인, 병용 치료제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 병용 치료제는 대상체에서의 고형 종양의 치료에서 상승적 이익을 제공하는, 병용 치료제.
  3. 제1항에 있어서, 상기 고형 종양은 선종, 아세포종, 암종, 섬유성 종양(desmoid tumour), 섬유조직형성 소형 원형 세포 종양(desmoplastic small round cell tumour), 내분비 종양, 배아 세포 종양, 림프종, 육종, 윌름스 종양(Wilms tumour), 폐 종양, 결장 종양, 림프 종양, 유방 종양 및 흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 병용 치료제.
  4. 제1항에 있어서, 상기 고형 종양은 흑색종인, 병용 치료제.
  5. 제1항에 있어서, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 무손상 항체(intact antibody)를 포함하거나 이로 이루어진, 병용 치료제.
  6. 제1항에 있어서, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 Fv 단편, Fab 단편, Fab' 단편, 및 F(ab)2 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 항원 결합 단편을 포함하거나 이로 이루어진, 병용 치료제.
  7. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 또는 인간화된, 병용 치료제.
  8. 제1항에 있어서, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7의 경쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호 8의 중쇄 가변 영역을 포함하는, 병용 치료제.
  9. 제1항에 있어서, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 11의 경쇄 불변 영역 및/또는 서열 번호 12의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 병용 치료제.
  10. 제1항에 있어서, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 7과 서열 번호 11의 경쇄 및/또는 서열 번호 8과 서열 번호 12의 중쇄를 포함하거나 이들로 이루어진, 병용 치료제.
  11. 제1항에 있어서, 상기 항-PD1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 람브롤리주맙, 피딜리주맙 및 AMP-224로 이루어진 군으로부터 선택된, 병용 치료제.
  12. 고형 종양 치료용 의약의 제조에 있어서, CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 항-PD-1 항체와 조합하여 사용하는 방법으로서,
    CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 1, 2 및 3의 경쇄 CDR 서열 및 서열 번호 4, 5 및 6의 중쇄 CDR 서열을 포함하고,
    상기 항-PD-1 항체는 PD1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하고,
    CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 상기 항-PD-1 항체는 동일한 조성물 또는 분리된 조성물에 존재하는 것인, 사용하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 것인, 사용하는 방법.
  14. 제12항에 있어서, 상기 항-PD-1 항체는 청구항 11에서 정의된 바와 같은 것인, 사용하는 방법.
  15. (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하는, 고형 종양 치료용 약제학적 조성물로서,
    상기 면역치료제는 PD1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 항-PD-1 항체이고, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 1, 2 및 3의 경쇄 CDR 서열 및 서열 번호 4, 5 및 6의 중쇄 CDR 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은, 약제학적 조성물.
  17. 제15항에 있어서, 암의 치료에서 효능을 가지는 상기 추가의 면역치료제는 제11항에 정의된 바와 같은, 약제학적 조성물.
  18. (a) CD40에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 (b) 암의 치료에서 효능을 가지는 추가의 면역치료제를 포함하는 고형 종양 치료용 키트로서, 상기 면역치료제는 PD1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 항-PD-1 항체이고, CD40에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열 번호 1, 2 및 3의 경쇄 CDR 서열 및 서열 번호 4, 5 및 6의 중쇄 CDR 서열을 포함하는, 키트.
  19. 제18항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은, 키트.
  20. 제18항에 있어서, 암의 치료에서 효능을 가지는 상기 추가의 면역치료제는 제11항에 정의된 바와 같은, 키트.
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