KR102341581B1 - 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법 - Google Patents

생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR102341581B1
KR102341581B1 KR1020217000464A KR20217000464A KR102341581B1 KR 102341581 B1 KR102341581 B1 KR 102341581B1 KR 1020217000464 A KR1020217000464 A KR 1020217000464A KR 20217000464 A KR20217000464 A KR 20217000464A KR 102341581 B1 KR102341581 B1 KR 102341581B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
another embodiment
ctp
polypeptide
fragment
delete delete
Prior art date
Application number
KR1020217000464A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20210016042A (ko
Inventor
오렌 헤르쉬코비츠
아후바 바르-일란
Original Assignee
옵코 바이오로직스 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 옵코 바이오로직스 리미티드 filed Critical 옵코 바이오로직스 리미티드
Publication of KR20210016042A publication Critical patent/KR20210016042A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102341581B1 publication Critical patent/KR102341581B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH] (Somatotropin)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/775—Apolipopeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin

Abstract

본 발명은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 증가시키도록 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 변형시키기 위한 융모막 생식샘자극 호르몬(gonadotrophin) 카복시 말단 펩타이드(CTP) 또는 그의 단편들의 용도에 관한 것이다.

Description

생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법{Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides}
본 발명은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 증가시키기 위한 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)의 용도에 관한 것이다.
생체기술학 (biotechnology) 산물들은 단일클론 항체들, 백신들, 성장인자들, 호르몬들, 사이토카인들, 응고인자들, 융합 단백질들, 효소들 및 기타 단백질들을 포함하는 모든 치료 약물들의 증가된 비율을 차지한다. 단일클론 항체들 및 백신들을 제외한 이러한 목록상의 많은 것들이 50 kDa 미만의 분자 질량 그리고 수 분 내지 수 시간의 범위에 있는 짧은 말단 반감기를 소유한다.
단백질 치료제들의 효능은 분배 및 배출에 영향을 주는 그들의 혈장 반감기들을 포함하는 그들의 약물역학적 성질들에 의해 강력하게 결정된다. 작은 크기는 조직 침투를 용이하게 하더라도, 이들 분자들은 종종 순환으로부터 신속하게 제거된다. 이에 따라, 연장된 기간 동안 치료적으로 유효한 농도를 유지하기 위하여 주입들 또는 빈번한 투여들이 이루어지거나, 약물들이 국소적 (loco-regional)으로 적용되거나, 피하로 혈류 내의 느린 흡수를 사용하고 있다. 작은 크기의 단백질 약물들의 이들 문제점들은 혈액에서 이들 재조합 항체들의 순환을 연장시키고 이에 따라 투여 및 약물동력학적 뿐만 아니라 약물역학적 성질들을 개선하도록 반감기 연장 전략들의 개발 및 이행을 선도하여 왔다.
본 발명은 이러한 전략을 펩타이드들을 포함하는 관심 있는 단백질들 또는 그들의 단편들의 유체역학적 크기 또는 부피를 특정한 팩터로 증가시킴으로써 그들의 투여, 약물동력학 뿐만 아니라 약물역학적 성질들을 개선하기 위하여 채용한다. 이러한 유체역학적 부피의 증가는 단백질들 및 펩타이드들의 혈청 반감기를 연장하기 위한 펩타이드-기초 기술학을 사용하여 달성된다. 본 기술학은 천연의 펩타이드인, 인간 융모막 생식샘자극 호르몬 (hCG)의 베타 사슬의 C-말단 펩타이드 (CTP)를 사용하는 것을 기초로 하고, 이는 임신을 유지하는 데 요구되는 수명을 가진 hCG를 제공한다. 배란을 촉발하는 수정 (fertility) 호르몬인, 황체형성 호르몬 (LH)은 hCG와 거의 일치하지만 CTP를 포함하지 않는다. 그 결과, LH는 혈액에서 유의하게 더 짧은 반감기를 가진다. 관심 있는 단백질 또는 펩타이드와 선결정된 수의 CTP들을 부착하는 것은 특이적 팩터로 그의 유체역학적 부피를 증가시키고, 관심 있는 단백질 또는 펩타이드의 증진된 혈청 반감기 및 효능을 포함하는 개선된 성질들을 유도한다.
한 가지 구현예에서, 본 발명은 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)을 부착시키는 단계를 포함하고, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 상기 1개 내지 10개의 CTP들을 부착시키는 단계는 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 각각의 부착된 CTP 당 약 28 내지 53 kDa으로 증가시키는 결과를 가져오고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는, 방법에 관한 것이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개 사이 범위의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)을 부착시키는 단계를 포함하고, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 상기 1개 내지 10개의 CTP들을 부착시키는 단계는 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 CTP가 부착되는 특정한 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 의존적인 양으로 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 결과를 가져오고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는, 방법에 관한 것이다.
본 발명의 다른 특징들 및 장점들은 다음의 상세한 설명의 실시예들 및 도면들로부터 자명해질 것이다. 그러나, 상세한 설명 및 특정한 실시예들은 본 발명의 바람직한 구현예들을 나타내는 한편, 본 발명의 정신 및 범주 내에서 다양한 변화들 및 변형들이 본 상세한 설명으로부터 당업자들에게라면 자명할 것이기 때문에, 단지 설명으로서 주어지는 것으로 이해되어야 한다.
한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피 또는 유체역학적 크기를 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단 또는 C-말단 둘 중 하나 위에 융합시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다.
한 가지 구현예에서, 용어들 "단백질" 및 "폴리펩타이드"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 또 다른 구현예에서, 용어들 "관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편", 또는 "관심 있는 단백질 또는 그의 단편"은 미가공 폴리펩타이드들 (분해 산물들, 합성적으로 합성된 폴리펩타이드들 또는 재조합 폴리펩타이드들) 및 펩타이드 모방체들 (peptidomimetics) (전형적으로, 합성적으로 합성된 폴리펩타이드들), 뿐만 아니라 폴리펩타이드 유사체들인 펩토이드들 및 세미펩토이드들을 포함하고, 이는 또 다른 구현예에서 본 명세서에서 제공된 변형된 폴리펩타이드들을 신체에 머무는 동안 훨씬 더 안정하게 만들거나 세포들 내로 더욱 잘 침투할 수 있게 만드는 변형들을 가진다. 또한, 용어들은 관심 있는 펩타이드들도 마찬가지로 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 적어도 하나의 CTP 펩타이드는 관심 있는 폴리펩타이드들 또는 그의 단편들, 또는 본 명세서에서 제공된 관심 있는 펩타이드들과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 용어 "그의 단편"은 단백질 또는 폴리펩타이드를 기준으로 할 때 관심 있는 펩타이드들을 포함하는, 관심 있는 단백질 또는 폴리펩타이드의 절단된 버전들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 용어 단백질 또는 폴리펩타이드의 "그의 단편"은 기능적 단편 (예로, 부모 폴리펩타이드가 가진 생물학적 활성 또는 부모 폴리펩타이드와 비교 시 증진된 활성을 가지는 단편)을 말한다. 그의 단편들의 예들은 폴리펩타이드의 변이체들, 또는 부모 폴리펩타이드로부터 유래된 펩타이드들을 포함할 수 있다. 따라서, 용어들 단백질 또는 폴리펩타이드의 "그의 단편", 및 용어 "펩타이드"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용될 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 적어도 약 28 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단 또는 C-말단 둘 중 하나 위에 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)와 융합시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다.
한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 부착시키는 단계를 포함하고, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 상기 1개 내지 10개의 CTP들을 부착시키는 단계는 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 결과를 가져오는, 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피는 상기 폴리펩타이드 및 그의 단편과 부착된 각각의 글리코실화 CTP 당 약 28 내지 53 kDa으로 증가되고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피는 상기 폴리펩타이드 및 그의 단편과 부착된 각각의 비-글리코실화 CTP 당 약 8.0 내지 22 kDa으로 증가되고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피는 상기 폴리펩타이드 및 그의 단편과 부착된 각각의 비-글리코실화 CTP 당 약 8.1 내지 21.6 kDa으로 증가되고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시킨다.
또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개 사이 범위의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)을 부착시키는 단계를 포함하고, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 상기 1개 내지 10개의 CTP를 부착시키는 단계는 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 CTP가 부착된 특정한 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 의존적인 양으로 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 결과를 가져오고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는, 방법이 본 명세서에서 제공된다.
한 가지 구현예에서, 상기 1개 내지 10개의 CTP들은 상기 폴리펩타이드의 N-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 상기 1개 내지 10개의 CTP들은 상기 폴리펩타이드의 C-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 상기 1개 내지 10개의 CTP들은 상기 폴리펩타이드의 N-말단 및 C-말단 둘 다와 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개의 CTP는 상기 폴리펩타이드의 N-말단과 부착되고, 2개의 CTP들은 상기 폴리펩타이드의 상기 C-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 2개의 CTP들은 상기 폴리펩타이드의 N-말단과 부착되고, 2개의 CTP들은 상기 폴리펩타이드의 상기 C-말단과 부착된다.
한 가지 구현예에서, 용어들 "유체역학적 크기" 또는 "유체역학적 부피"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되고, 각각은 수용성 용액을 통한 분자의 확산을 기초로 하여 분자 (예로, 단백질 분자)의 외관상 크기를 말한다. 용액을 통한 확산 또는 단백질의 이동은, 단백질 입자의 "이동 반경 (stroke radius)" 또는 "유체역학적 반경"으로 주어지는 단백질의 외관상의 크기를 유도하도록 진행될 수 있다. 단백질의 "유체역학적 크기"는 질량 및 모양 (입체형태) 둘 다에 의존함으로써, 동일한 분자 질량을 가지는 두 가지 단백질들은 단백질의 전반적 입체형태를 기초로 하여 달라지는 유체역학적 크기들을 가질 수 있다.
또 다른 구현예에서, 글리코실화의 유형은 O-글리코실화이다. 또 다른 구현예에서, O-글리코실화의 유형은 α-글리코시드 결합에 의해 단백질 사슬의 세린 (Ser) 또는 트레오닌 (Thr)과 GalNAc 부착이다. 또 다른 구현예에서, O-글리코실화의 유형은 단백질 사슬의 Ser 또는 Thr 잔기들과 N-아세틸글리코사민 (GlcNac) 부착이다. 또 다른 구현예에서, O-글리코실화의 유형은 O-퓨코실화, O-만노실화, 코아 1 O-글리코실화, 코아 2 O-글리코실화 또는 O-글리코실화이다. 또 다른 구현예에서, O-글리코실화는 뮤신-유형 O-글리코실화이다. 또 다른 구현예에서, O-글리코실화는 세린, 트레오닌, 타이로신, 하이드록시라이신, 또는 하이드록시프롤린 측쇄들의 하이드록시 산소에 부착된 O-결합된 글리칸들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, O-글리코실화는 갈락토스 및/또는 시알산의 첨가에 의해 진행되고, 다른 구현예들에서 O-글리코실화 이후에 관심 있는 단백질 분자에 적어도 하나의 갈락토스 분자가 첨가되고/거나, 적어도 하나의 시알산 분자가 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 3개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 3개의 시알산 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 5개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 5개의 시알산 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 10개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 20개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 21개 내지 30개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 31개 내지 40개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 41개 내지 50개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 51개 내지 60개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 61개 내지 70개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 약 1개 내지 10개의 시알산 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 첨가된 각각의 갈락토스 분자당 2개의 시알산 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 각각의 CTP 당 약 1개 내지 5개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 각각의 CTP 당 약 1개 내지 10개의 시알산 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 각각의 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 당 모두 약 1개 내지 60개의 갈락토스 분자들이 첨가되고 약 1개 내지 120개의 시알산 분자들이 첨가된다. 한 가지 구현예에서, 각각의 CTP 당 1개 내지 6개의 갈락토스 분자들이 첨가된다. 한 가지 구현예에서, 각각의 CTP 당 1개 내지 12개의 시알산 분자들이 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 각각의 CTP 당 1개 내지 6개의 갈락토스 분자들 및 1개 내지 12개의 시알산 분자들이 첨가된다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 글리코실화의 유형은 N-글리코실화이다. 또 다른 구현예에서, N-결합된 글리칸들은 아스파라진 또는 아르기닌 측쇄들의 질소와 부착된다. N-결합된 아미노산 공통 서열은 Asn-임의의 아미노산-Ser 또는 Thr이고, 여기에서 임의의 아미노산은 프롤린일 수 없다.
또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단 또는 C-말단과 부착시키는 단계를 포함하고, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착시키는 단계는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 CTP가 부착된 특정한 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 의존적인 양으로 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 결과를 가져오고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는, 방법이 본 명세서에서 제공된다.
한 가지 구현예에서, 글리코실화 CTP는 이것이 부착되거나 융합된 단백질의 유체역학적 부피를 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 비-글리코실화 CTP는 이것이 부착되거나 융합된 단백질의 유체역학적 부피를 증가시킨다.
한 가지 구현예에서, 단백질의 미가공 부분에 글리칸들을 포함하는 CTP 변형된 단백질들은 글리코실화 CTP의 1개 사본의 유체역학적 부피에 대하여 더 높은 증가분을 기여하고, 예를 들면 본 명세서에서 실시예 3/표 5는 단백질의 미가공 부분에서 글리칸을 포함하는 FⅨ 및 FⅦa-CTP 변형된 단백질들이 글리코실화 CTP의 1개 사 사본의 유체역학적 부피에 대하여 더 높은 증가분을 기여하는 점을 보여준다.
본 발명의 명세서에 의해 안내될 때, 글리코실화 및 비-글리코실화 CTP들의 조합들이 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 유체역학적 크기 또는 부피를 증가시키는 데 사용하도록 채용될 수 있는 것으로 당업자라면 판단될 것이다. 이러한 조작들은 최적의 또는 바람직한 수준으로 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 유체역학적 부피를 증가시키도록 수행될 수 있다. 한 가지 구현예에서, 유체역학적 부피의 이러한 최적의 또는 바람직한 수준은 개체에서 증진된 정체 시간, 개체로부터 낮은 제거율, 및 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 증진된 생물학적 활성과 연관되어 있다. 한 가지 구현예에서, 1개 내지 5개의 글리코실화 CTP들 및 1개 내지 5개의 비-글리코실화 CTP들이 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 동시에 부착된다. 또 다른 구현예에서, 글리코실화 또는 비-글리코실화 CTP 펩타이드들이 N- 또는 C-말단 둘 중 하나 위에 일렬로 부착되거나 N- 및 C-말단 둘 다와 무작위로 부착된다. 또한 글리코실화 또는 비-글리코실화 CTP 펩타이드들의 추가적인 조합들이 사용될 수 있고, 따라서 본 발명에 포함되는 점은 당업자라면 잘 이해될 것이다.
한 가지 구현예에서, 용어 "부착된" 및 그의 문법적인 변형들은 또 다른 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드과 한 가지 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 결합을 말한다. 또 다른 구현예에서, 이러한 결합은 본 명세서에서 제공된 적어도 하나의 CTP 펩타이드와 관심 있는 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 결합을 말한다. 또 다른 구현예에서, 이러한 결합은 본 명세서에서 제공된 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들과 관심 있는 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 결합을 말한다. 이러한 결합은 이에 제한되는 것은 아니지만 공유 결합, 수소 결합, 이온 결합, 금속 결합, 극성 공유 결합, 비-공유 결합 (반데르발스 상호작용들, 소수성 상호작용들, 수소 결합 등), 링커들의 사용에 의한 결합 등을 포함하는 수많은 수단을 통해 달성될 수 있다.
한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 비-글리코실화 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단 또는 C-말단과 부착시키는 단계를 포함하고, 적어도 하나의 CTP를 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착시키는 단계는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 CTP가 부착된 특정한 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 의존적인 양으로 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 결과를 가져오고, 이로써 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는, 방법이 본 명세서에서 제공된다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP는 이에 제한되는 것은 아니지만 효소-기초 탈글리코실화를 포함하는 당해 기술분야에 알려진 방법들을 사용하여 탈글리코실화된다.
용어들 "비-글리코실화" 및 "탈글리코실화" 그리고 그들의 문법적인 변형들이 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 점은 당업자라면 이해될 것이다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 더 제공된 바와 같이 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 생체내 생물학적 활성을 증가시키거나, 혈청 반감기를 증가시키거나, 생체유용성을 증가시키거나, 효능을 증가시키거나, 곡선 하 면적 (AUC)을 확장하는 방법으로서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 적어도 하나의 글리코실화 CTP 펩타이드를 융합하는 단계를 포함하고, 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 글리코실화 CTP 펩타이드를 융합하는 단계는 미변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 적어도 약 28 kDa으로 증가시키는 결과를 가져오는, 방법이 본 명세서에서 제공된다.
또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드는 더 낮은 시험관내 생물학적 활성을 가지지만 이러한 더 낮은 활성은 연장된 반감기에 의해 보상된다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드는 증가된 시험관내 생물학적 활성을 가진다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 증가시키는 단계는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도를 감소시킨다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 증가시키는 단계는 또한 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 증가시킨다.
한 가지 구현예에서, 외관상 분자량은 이에 제한되는 것은 아니지만 크기-배제 크로마토그래피 (SEC), 역동적 광분산 방법들 (DLS), 침전 속도, 침전 평형 원심분리법, 및 분광광도 검출을 포함하는 당해 기술분야에 잘 알려진 방법들을 사용하여 결정된다. 또 다른 구현예에서, 이론적인 분자량은 당해 기술분야에서 입수가능한 프로테옴 소프트웨어를 사용하여 결정된다. 이러한 소프트웨어는 이에 제한되는 것은 아니지만, Expasy 포탈, ProteoIQ, 스캐폴드 3 등을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 실제 분자량은 이에 제한되는 것은 아니지만 MALDI-TOF를 포함하는 당해 기술분야에 잘 알려진 방법들을 사용하여 결정된다.
또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 적어도 28 kDa으로 증가시키는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 1 내지 14 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 1 내지 14 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 15 내지 27 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 28 내지 40.0 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 28 내지 55.0 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 28 내지 70.0 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 28 내지 80.0 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 28 내지 90.0 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 28 내지 100.0 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 41.0 내지 50 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 51.0 내지 60 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 약 61.0 내지 70 kDa으로 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 CTP를 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, CTP는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, CTP는 비-글리코실화 CTP이다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 글리코실화 CTP 펩타이드들의 연속적 첨가들이 예기치 못하게도 CTP 펩타이드의 사전 부착과 거의 동일한 외관상 분자량을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 대해 선형적으로 기여하는 점을 보여준다 (표 4 참조).
또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 글리코실화 CTP는 관심 있는 단백질에 대하여 각각의 글리코실화 CTP 당 약 28 내지 40 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 글리코실화 CTP는 관심 있는 단백질에 대하여 각각의 글리코실화 CTP 당 약 28 내지 55 kDa을 부착된 CTP의 수와는 상관없이 기여한다.
한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 2의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드를 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 3 내지 5의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 적어도 하나의 CTP 펩타이드를 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 6 내지 10의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 11 내지 20의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 21 내지 30의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하고, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 적어도 하나의 CTP 펩타이드를 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 31 내지 40의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 41 내지 50의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 적어도 하나의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 51 내지 60의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 61 내지 70의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 71 내지 80의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 81 내지 90의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착하는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 외관상 분자량을 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 이론적인 분자량을 초과하여 약 91 내지 100의 팩터로 증가시키는 방법으로서, 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들을 부착시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP 펩타이드가 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 5개의 CTP 펩타이드들이 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 15개의 CTP 펩타이드들이 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 20개의 CTP 펩타이드들이 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP 펩타이드는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP 펩타이드는 비-글리코실화 CTP 펩타이드이다.
또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편 또는 관심 있는 펩타이드의 생물학적 활성, 혈청 반감기, 생체유용성, 효능 등을 증가시키는 방법은 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 글리코실화 CTP를 부착하여 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 전체 유체역학적 부피를, 미변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 비교 시 약 28.0 kDa으로 증가시키는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 생물학적 활성, 혈청 반감기, 생체유용성, 효능 등을 증가시키는 방법은 본 명세서에서 제공된 CTP를 상기 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여, 미변형된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 전체 유체역학적 부피를 약 1 내지 10 kDa, 11 내지 20 kDa, 21 내지 30 kDa, 31 내지 40 kDa, 41 내지 50 kDa, 51 내지 60 kDa, 61 내지 70 kDa, 71 내지 80 kDa, 81 내지 90 kDa, 91 내지 100 kDa, 100 내지 150 kDa, 151 내지 200 kDa, 201 내지 400 kDa, 401 내지 1,000 kDa, 또는 1,001 내지 5,000 kDa으로 증가시키는 단계를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들에서 적어도 하나의 CTP는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들에서 적어도 하나의 CTP는 각각의 CTP 당 유체역학적 부피 약 28.3 내지 38.7 kDa를 본 명세서에서 역시 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 대하여 기여한다. 또 다른 구현예에서, 글리코실화 CTP는 이와 결합된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과는 상관없이 각각의 CTP 당 약 28.3 내지 38.7 kDa을 기여한다 (본 명세서에서 실시예 3 참조). 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP의 기여는 적어도 20 kDa이다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP의 기여는 적어도 약 20 kDa 내지 27.9 kDa이다. 또 다른 구현예에서, 1개 CTP의 기여는 적어도 28 kDa이다. 또 다른 구현예에서, 1개 CTP의 기여는 약 28 kDa 내지 40 kDa이다. 또 다른 구현예에서, 1개 CTP의 기여는 약 41 kDa 내지 50 kDa이다. 또 다른 구현예에서, 1개 CTP의 기여는 약 51 kDa 내지 60 kDa이다.
또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 혈청 반감기를 증가시키거나 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 효능을 증진시키는 방법은 미변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 약 84 kDa으로 증가시키는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 부피를 약 84 kDa으로 증가시키는 단계는 본 명세서에서 제공된 방법에 따라 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들과 부착하여 변형시키는 단계에 해당한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착된 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드 중에서, 1개의 글리코실화 CTP 펩타이드는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단과 부착된 한편, 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 C-말단과 일렬로 부착된다.
한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 혈청 반감기또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법은 미변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 84 내지 159 kDa으로 증가시키는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 56 내지 110 kDa으로 증가시키는 단계는 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 84 내지 162 kDa으로 증가시키는 단계는 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 112 내지 230 kDa으로 증가시키는 단계는 4개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 140 내지 280 kDa으로 증가시키는 단계는 5개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 168 내지 330 kDa으로 증가시키는 단계는 6개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 196 내지 390 kDa으로 증가시키는 단계는 7개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 224 내지 425 kDa으로 증가시키는 단계는 8개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 252 내지 480 kDa으로 증가시키는 단계는 9개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 280 내지 330 kDa으로 증가시키는 단계는 10개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 또한 비-글리코실화 CTP를 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계를 포함한다. 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 글리코실화 및/또는 비-글리코실화 CTP로 변형하는 다양한 방식들이 수행될 수 있는 점이 이해될 것이다. 한 가지 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 적어도 하나의 글리코실화 CTP 단독으로, 또는 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP 단독으로 변형된다. 또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 적어도 하나의 글리코실화 CTP, 또는 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP으로 변형된다. 또 다른 구현예에서, 글리코실화 및/또는 비-글리코실화 CTP들 둘 다의 절단된 버전들은 본 명세서에서 제공된 방법들에서 사용하는 데 채용된다.
또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 특이적 양으로 증가시켜서 생물학적 활성, 혈청 반감기, 생체유용성, 효능 등을 증가시키는 방법으로서, 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드 (CTP)를 폴리펩타이드의 N-말단 또는 C-말단과 부착하는 단계를 포함하고, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP 펩타이드를 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착하는 단계는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 미변형된 형태와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피를 증가시키는 결과를 가져오고, 특이적 양은 비-글리코실화 CTP가 부착되는 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 의존적인, 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP가 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착될 때, 비-글리코실화 CTP가 부착된 관심 있는 폴리펩타이드는 외관상 분자량 또는 유체역학적 부피의 증가량을 알려준다. 또 다른 구현예에서, 1개의 비-글리코실화 CTP가 hGH와 부착될 때, 비-글리코실화 CTP는 인간 성장호르몬 (hGH)의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피에 대해 약 8 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 1개의 비-글리코실화 CTP가 에리트로포이에틴 (EPO)과 부착될 때, 비-글리코실화 CTP는 EPO의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피에 대하여 약 16 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 1개의 비-글리코실화 CTP가 아포지질단백질-A1 (APO-A1)과 부착될 때, 비-글리코실화 CTP는 APO-A1의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피에 대하여 약 21 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 1개의 비-글리코실화 CTP가 인자 Ⅸ (FⅨ)와 부착될 때, 비-글리코실화 CTP는 FⅨ의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피에 대하여 약 20 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 1개의 비-글리코실화 CTP가 인자 Ⅶa (FⅦa)와 부착될 때, 비-글리코실화 CTP는 FⅦa의 유체역학적 크기 또는 유체역학적 부피에 대하여 약 20 kDa을 기여한다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법은 폴리펩타이드의 또는 그의 단편의 생체유용성을 증진시킨다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법은 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도를 감소시킨다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들에 의해 변형된 폴리펩타이드는 사이토카인, 단일클론 항체, 성장인자, 호르몬, 사이토카인, 응고인자, 효소 등이다.
또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP 펩타이드가 부착된 폴리펩타이드는 에리트로포이에틴 (EPO), 인간 성장호르몬 (hGH), 아포지질단백질-A1 (APO-A1), 인자 Ⅱa (FⅡa) 인자 Ⅸ (FⅨ), 인자 Ⅶa (FⅦa), 또는 옥신토모듈린 (OXM)이다.
한 가지 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP는 EPO에 약 16 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP는 EPO와 부착될 때 EPO의 외관상 분자량에 대해 약 16 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP는 hGH에 대하여 약 8 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP는 hGH와 부착될 때 hGH의 외관상 분자량에 대하여 약 8 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP는 APO-A1에 대하여 약 21 kDa을 기여한다. 또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP는 APO-A1과 부착될 때 APO-A1의 외관상 분자량에 대하여 약 21 kDa을 기여한다.
한 가지 구현예에서, 비-글리코실화 CTP는 비-글리코실화 CTP가 결합된 각각의 폴리펩타이드에 대하여 서로 다른 유체역학적 부피를 기여한다. 또 다른 구현예에서, 이러한 차이는 비-글리코실화 CTP가 결합된 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 의존한다 (본 명세서에서 실시예 3 참조). 또 다른 구현예에서, 비-글리코실화 CTP는 예기치 못하게도 폴리펩타이드와 부착된 비-글리코실화 CTP 펩타이드들의 수와는 상관없이 각각의 특정한 폴리펩타이드 위에서 각각의 CTP 당 동일한 유체역학적 크기에 대해 기여한다 (본 명세서에서 실시예 3 참조).
한 가지 구현예에서, hGH의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 hGH와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 28 내지 40 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 56 내지 80 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 84 내지 120 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 112 내지 160 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 4개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 140 내지 200 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 5개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 168 내지 240 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 6개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 196 내지 280 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 7개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 224 내지 320 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 8개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 252 내지 360 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 9개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 280 내지 400 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 약 10개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 10개의 절단된 또는 부분적 CTP 펩타이드들은 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 부착된다.
한 가지 구현예에서, EPO의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 hGH와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 28 내지 40 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 56 내지 80 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 84 내지 120 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 112 내지 160 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 4개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 140 내지 200 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 5개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 168 내지 240 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 6개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 196 내지 280 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 7개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 224 내지 320 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 8개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 252 내지 360 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 9개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 280 내지 400 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 10개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, APO-A1의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 APO-A1와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 28 내지 40 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 56 내지 80 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 84 내지 120 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 112 내지 160 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 4개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 140 내지 200 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 5개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 168 내지 240 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 6개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 196 내지 280 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 7개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 224 내지 320 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 8개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 252 내지 360 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 9개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 280 내지 400 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 10개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, FⅨ의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 FⅨ와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 48 내지 53 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 96 내지 106 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 144 내지 159 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 192 내지 212 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 4개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 240 내지 265 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 5개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 288 내지 318 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 6개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 336 내지 371 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 7개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 384 내지 424 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 8개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 432 내지 530 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 9개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 480 내지 530 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 10개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, FⅦa의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 FⅦa와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 43 내지 50 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 86 내지 100 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 2개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 129 내지 150 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 3개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 172 내지 200 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 4개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 215 내지 250 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 5개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 258 내지 300 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 6개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 301 내지 350 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 7개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 344 내지 400 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 8개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 387 내지 450 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 9개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 430 내지 500 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 10개의 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, hGH의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 hGH와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 8 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 16 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 2개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 24 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 3개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 32 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 4개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 40 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 5개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 48 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 6개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 56 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 7개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 64 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 8개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 72 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 9개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 80 kDa으로 증가시키는 단계는 hGH에 10개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, EPO의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 EPO와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 16 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 32 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 2개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 48 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 3개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 16 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 4개의 비- 글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 80 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 5개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 96 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 6개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 112 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 7개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 128 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 8개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 144 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 9개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 160 kDa으로 증가시키는 단계는 EPO에 10개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, APO-A1의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 APO-A1와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 21 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 42 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 2개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 63 내지 120 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 3개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 84 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 4개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 105 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 5개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 126 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 6개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 147 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 7개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 168 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 8개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 189 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 9개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 210 kDa으로 증가시키는 단계는 APO-A1에 10개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, FⅨ의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 FⅨ와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 20 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 40 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 2개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 60 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 3개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 80 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 4개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 100 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 5개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 120 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 6개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 140 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 7개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 160 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 8개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 180 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 9개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 200 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅨ에 10개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, FⅦa의 혈청 반감기 또는 생물학적 활성을 증가시키는 방법으로서, 미변형된 FⅦa와 비교 시 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기 또는 부피를 약 20 kDa으로 증가시키는 단계를 포함하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 40 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 2개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 60 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 3개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 80 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 4개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 100 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 5개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 120 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 6개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 140 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 7개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 160 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 8개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 180 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 9개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 크기 또는 부피를 약 200 kDa으로 증가시키는 단계는 FⅦa에 10개의 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 부착하여 달성된다.
한 가지 구현예에서, 유체역학적 부피는 생물학적 시료에서 관심 있는 단백질의 정체 시간을 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 유체역학적 부피는 생물학적 시료에서 관심 있는 단백질의 곡선 하 면적 (AUC)을 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 생물학적 시료는 혈액, 표적 조직들 (예로, 관절, CNS), 뇌척수액 (CSF), 림프, 또는 혈청들이다.
또 다른 구현예에서, 유체역학적 부피를 증가시키는 단계는 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 생체유용성을 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드의 유체역학적 부피를 증가시키는 단계는 또한 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 혈청 반감기를 연장시킨다.
또 다른 구현예에서, 유체역학적 부피를 증가시키는 단계는 폴리펩타이드의 생체활성을 증가시킨다.
또 다른 구현예에서, 용어들 "CTP 펩타이드", "카복시 말단 펩타이드" 및 "CTP 서열"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 또 다른 구현예에서, 카복시 말단 펩타이드는 전장의 CTP이다. 또 다른 구현예에서, 카복시 말단 펩타이드는 절단된 CTP이다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별적 구현예를 나타낸다.
또 다른 구현예에서, 신호 펩타이드는 본 명세서에서 그의 전부가 참고문헌으로 통합되어 있는 미국 특허 제 US 7,553,940호에 기술된 바와 같이, CTP의 아미노 말단과 부착된다.
또 다른 구현예에서, 적어도 하나의 CTP는 링커에 의해 폴리펩타이드와 부착된다. 또 다른 구현예에서, 링커는 펩타이드 결합이다. 또 다른 구현예에서, 융합된 단백질은 CTP-변형된 폴리펩타이드를 형성한다. 한 가지 구현예에서 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법은 폴리펩타이드 또는 그들의 단편들의 아미노 또는 카복시 말단 위에 적어도 하나의 CTP와 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 융합하는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, CTP는 폴리펩타이드 또는 그들의 단편들과 재조합적으로 융합된다. 또 다른 구현예에서, CTP는 폴리펩타이드 또는 그들의 단편들과 화학적으로 결합된다.
한 가지 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드는 펩타이드의 N-(아미노) 또는 C-(카복시) 말단과 부착된 50개 이하의 아미노산들 및 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다.
한 가지 구현예에서, 그들의 N-말단 및/또는 C-말단과 부착된 적어도 단일한 CTP를 포함하는 본 발명의 관심 있는 조작된 폴리펩타이드들은 생물학적 활성의 견지에서 관심 있는 비 CTP 변형된 폴리펩타이드들과 적어도 동등하다. 다른 구현예들에서, 그들의 N-말단 및/또는 C-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP를 포함하는 본 발명의 관심 있는 조작된 폴리펩타이드들은 약물역학 및 약물동력학과 같은 약학적 척도들의 견지에서 관심 있는 비 CTP 변형된 폴리펩타이드들과 적어도 동등하다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP 서열은: DPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPIL (서열번호 1)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, CTP 서열은: SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 2)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, CTP 서열은 서열번호 1 및 서열번호 2에 개시된 서열들로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 보다 또 다른 구현예에서, CTP 서열은 서열번호 1 및 서열번호 2로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 카복시 말단 펩타이드 (CTP) 펩타이드는 인간 융모막 생식샘자극 호르몬의 아미노산 112번부터 145번까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 서열은 서열번호 2에 개시된 바와 같이 인간 융모막 생식샘자극 호르몬의 아미노산 118번부터 145번까지의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, CTP 서열은 또한 인간 융모막 생식샘자극 호르몬의 112번 내지 118번 사이의 임의의 자리로부터 시작하고 145번에서 종결한다. 또 다른 구현예에서, CTP 서열 펩타이드는 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개 또는 34개의 아미노산들 길이이고, CTP 아미노산 서열의 112번, 113번, 114번, 115번, 116번, 117번 또는 118번에서 시작한다.
한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 3의 첫 번째 10개의 아미노산들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 3은 다음의 아미노산 서열 (AA): SSSSKAPPPSLP을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2의 첫 번째 11개의 아미노산들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2의 첫 번째 12개의 아미노산들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2 또는 서열번호 3의 첫 번째 8개의 아미노산들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2의 첫 번째 13개의 아미노산들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2의 첫 번째 14개의 아미노산들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2 또는 서열번호 3의 첫 번째 6개의 아미노산들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 절단된 CTP는 서열번호 2 또는 서열번호 3의 첫 번째 5개의 아미노산들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 미국 특허 제 5,712,122호에 기술된 바와 같이 1개 내지 5개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 1개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 2개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 2개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 3개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 4개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드는 5개의 보존적 아미노산 치환들에 의해 미가공 CTP와 달라지는 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP의 변이체이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 40% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 50% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 60% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 70% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 80% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 90% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 95% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드 아미노산 서열은 그의 미가공 CTP 아미노산 서열 또는 펩타이드와 적어도 98% 상동적이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 그의 미가공 인간 CTP DNA 서열 또는 펩타이드와 적어도 70% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 그의 미가공 인간 CTP DNA 서열 또는 펩타이드와 적어도 80% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 그의 미가공 인간 CTP DNA 서열 또는 펩타이드와 적어도 90% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 그의 미가공 인간 CTP DNA 서열 또는 펩타이드와 적어도 95% 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP 펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 그의 미가공 인간 CTP DNA 서열 또는 펩타이드와 적어도 98% 상동적이다.
한 가지 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 적어도 하나는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 둘 다는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 2개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 3개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 4개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 5개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 6개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 7개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 8개는 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 둘 이상은 절단된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들 모두는 절단된다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP 펩타이드들은 링커에 의해 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들과 부착된다. 한 가지 구현예에서, 1개 내지 10개의 CTP 펩타이드들은 링커에 의해 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들과 부착된다. 한 가지 구현예에서, 적어도 하나의 CTP 펩타이드들은 링커에 의해 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 링커는 펩타이드 결합니다.
한 가지 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들은 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 둘 다는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 2개는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 3개는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 4개는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 5개는 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 둘 이상은 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들 모두는 글리코실화된다.
한 가지 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들은 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 둘 다는 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 2개는 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 3개는 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 4개는 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 5개는 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 둘 이상은 글리코실화되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들 모두는 글리코실화되지 않는다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 적어도 하나의 글리코실화 부위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 2개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 3개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 4개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 5개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 6개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 7개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 8개의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 4개부터 9개까지의 글리코실화 부위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 글리코실화 CTP 서열은 6개부터 12개까지의 글리코실화 부위들을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들은 전적으로 글리코실화된다. 또 다른 구현예에서, 융모막 생식샘자극 호르몬 CTP 아미노산 서열들의 부분적으로 글리코실화된다. 한 가지 구현예에서, 부분적으로 글리코실화는 적어도 하나의 CTP 글리코실화 부위들이 글리코실화되는 것을 가리킨다. 또 다른 구현예에서, 글리코실화 부위들은 O-글리코실화 부위들이다. 또 다른 구현예에서, 글리코실화 부위들은 N-글리코실화 부위들이다.
한 가지 구현예에서, CTP 서열 변형은 관심 있는 폴리펩타이드, 약물, 또는 제제와 부착될 때 더 낮은 용량들의 사용을 허용하는 데 유리하다. 또 다른 구현예에서, CTP 서열 변형은 관심 있는 폴리펩타이드, 약물, 또는 제제의 더 적은 용량들을 허용하는 데 유리하다. 또 다른 구현예에서, CTP 서열 변형은 관심 있는 CTP-변형된 폴리펩타이드, 약물, 또는 제제를 투여할 때 안전한 지속성 효과를 허용하는 데 유리하다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 관심 있는 폴리펩타이드들 및 CTP 펩타이드들의 변형들은 이에 제한되는 것은 아니지만 C-말단 변형, 이에 제한되는 것은 아니지만 CH2-NH, CH2-S, CH2-S=O, O=C-NH, CH2-O, CH2-CH2, S=C-NH, CH=CH 또는 CF=CH를 포함하는 폴리펩타이드 결합 변형, 골격 변형, 및 잔기 변형을 포함한다. 펩타이드 모방체 화합물들을 제조하는 방법은 잘 알려져 있으며, 예를 들면 Quantitative Drug Design, C.A. Ramsden Gd., Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992)에 기술되고, 이는 본 명세서에서 전부 개시된 것과 같이 참고문헌으로 통합된다.
또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 내의 폴리펩타이드 결합들 (-CO-NH-)은 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 N-메틸화 결합들 (-N(CH3)-CO-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 에스테르 결합들 (-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 케토메틸렌 결합들 (-CO-CH2-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 α-아자 결합들 (-NH-N(R)-CO-), 여기에서 R은 임의의 알킬 예로 메틸, 카바 결합들 (-CH2-NH-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 하이드록시에틸렌 결합들 (-CH(OH)-CH2-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 티오아마이드 결합들 (-CS-NH-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 올레핀 이중 결합들 (-CH=CH-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 역아마이드 결합들 (-NH-CO-)에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 결합들은 폴리펩타이드 유도체들 (-N(R)-CH2-CO-), 여기에서 R은 자연적으로 탄소 원자 위에 제시되는 "정상적인" 측쇄이고, 이에 의해 치환된다. 또 다른 구현예에서, 이들 변형들은 폴리펩타이드 사슬을 따라 임의의 결합들에서 일어나고, 한 가지 구현예에서 여러 (2개 내지 3개) 결합들에서 동시에 일어난다.
한 가지 구현예에서, 폴리펩타이드의 Trp, Tyr 및 Phe와 같은 천연 방향족 아미노산들은 페닐글리신, TIC, 나프틸레나닌 (naphthylelanine, Nol), Phe의 고리-메틸화 유도체들, Phe의 할로겐화 유도체들 또는 o-메틸-Tyr와 같은 합성 비-천연 아미노산으로 치환된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드들은 하나 이상의 변형된 아미노산 또는 하나 이상의 비-아미노산 단일체들 (예로, 지방산, 복합 탄수화물들 등)을 포함한다.
한 가지 구현예에서, "아미노산" 또는 "아미노산 서열"은; 아미노산이 종종 예를 들면 하이드록시프롤린, 포스포세린 및 포스포트레오닌을 포함하여 생체내에서 번역후 변형되는 20개의 자연적으로 생기는 아미노산; 및 이에 제한되는 것은 아니지만 2-아미노 지방산 (2-aminoadipic acid), 하이드록시라이신, 이소데스모신, 노르-발린, 노르-루이신 및 오르니틴을 포함하는 특별한 아미노산을 포함하는 것으로 이해된다.한 가지 구현예에서, "아미노산"은 D- 및 L-아미노산들 둘 다를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 조작된 폴리펩타이드들 또는 펩타이드들은 표준 고체상 기법들을 사용하는 것과 같이 생화학적으로 합성된다. 또 다른 구현예에서, 이들 생화학적 방법은 배제적 고체상 합성, 부분적 고체상 합성, 단편 응축, 또는 고전적인 용액 합성을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 재조합 단백질 기법들이 본 발명의 관심 있는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 생성하는 데 사용된다. 또 다른 구현예에서, 재조합 기법들은 본 명세서에서 전부가 참고문헌으로 통합되어 있는 Bitter et al., (1987) Methods in Enzymol. 153: 516-544; Studier et al. (1990) Methods in Enzymol. 185: 60-89; Brisson et al. (1984) Nature 310: 511-514; Takamatsu et al. (1987) EMBO J. 6: 307-311; Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3: 1671-1680; Brogli et al., (1984) Science 224: 838-843; Gurley et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6: 559-565; 및 Weissbach & Weissbach, 1988, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, 섹션 Ⅷ, pp 421-463에 기술된다.
또 다른 구현예에서, 관심 있는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 50개 이하의 아미노산들 그리고 폴리펩타이드의 N- 또는 C-말단과 부착된 적어도 하나의 글리코실화 및/또는 비-글리코실화 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 50개 이하의 아미노산들 그리고 폴리펩타이드의 N- 또는 C-말단과 부착된 적어도 하나의 글리코실화 및/또는 비-글리코실화 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 40개 이하의 아미노산들 그리고 폴리펩타이드의 N- 또는 C-말단과 부착된 적어도 하나의 글리코실화 및/또는 비-글리코실화 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드를 포함하는 펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 30개, 20개, 또는 10개 이하의 아미노산들을 포함하는 펩타이드를 포함한다. 한 가지 구현예에서, 50개 이하의 아미노산들을 포함하는 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 본 명세서에서 제공된 펩타이드들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 50개 이하의 아미노산을 포함하는 펩타이드는 hGH, OXM, EPO, 아포지질단백질 A1 (APO-A1), 인터페론, 사이토카인 또는 응고인자이다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 EPO이다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 APO이다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 FⅦa이다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 FⅨ이다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 인터페론이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 hGH이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 OXM이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 EPO이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 GLP-1이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 인슐린이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 엔케팔린이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 ACTH이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 글루카곤이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 인슐린-유사 성장인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 표피 성장인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 산성 또는 염기성 섬유모세포 성장인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 혈소판-유래 성장인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 과립구-CSF이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 IL-2이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 IL-3이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 종양괴사인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 LHRH이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 LHRH 유사체이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 소마토스타틴이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 성장호르몬 방출인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 엔돌핀이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 폐포 표면활성제 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 L나트륨이뇨 인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 아드헤진이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 엔도스타틴이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 수용체 펩타이드이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 수용체 결합 리간드이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 항체이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 항체 단편이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 임의의 변형된 형태를 포함하는 펩타이드 또는 단백질이다.
또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 N-말단 위에 부착된 적어도 하나의 CTP 아미노산 펩타이드 및/또는 C-말단 위에 부착된 적어도 하나의 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 포함한다. 또 다른 구현예에서, 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 다음의 목록으로부터 선택된다: 알부테인/알부민, 액티바제 알티플라제/tPA, 아데노신 탈아미나제, 면역글로불린, 글루코세레브로시다제, 루킨-사그라모스팀/GM-CSF, G-CSF, 베노글로불린-S/IgG, 프로루킨 알데스루킨, DNase, 인자 Ⅷ, 헬리제이트, L-아스파라기나제, WinRho SDF Rh I, 레타바제 레타플라제/tPA, 인자 Ⅸ, FSH, 글로불린, 피브린, 인터루이킨-11, 베카플러민/PDGF, 레피루딘/헤루딘, TNF, 타이모글로불린, 인자 Ⅶa, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파 n-1, 인터페론 알파-N3, 인터페론 베타-1b, 인터페론 감마-1b, 인터루킨-2, HGH, 또는 단일클론 항체들.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 신호 펩타이드를 또한 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 성장호르몬이다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 신호 펩타이드도 역시 포함한다. 또 다른 구현예에서, 발현 및 분비 이후에, 신호 펩타이드는 전구체 조작된 펩타이드들/폴리펩타이드들로부터 절단되어 성숙한 조작된 펩타이드들/폴리펩타이드들이 된다. 또 다른 구현예에서, 신호 서열은 이에 제한되는 것은 아니지만 내인성 신호 서열들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드들 및 방법들은 다음의 아미노산 서열들을 포함하는 신호 펩타이드를 추가적으로 가지는 성장호르몬을 제공한다: MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSA (서열번호 4).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP-변형된 또는 결합된 성장호르몬들은 미변형된 성장호르몬들과 동일한 방식으로 사용된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 결합된 성장호르몬들은 생체내에서 증가된 순환 반감기 및 혈장 정체 시간, 감소된 제거율, 및 증가된 임상적 활성을 가진다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 결합된 성장호르몬들의 개선된 성질들로 인해, 이들 결합체들은 미변형된 성장호르몬들보다 덜 빈번하게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 결합된 성장호르몬들은 매주 내지 격주로 1번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 결합된 성장호르몬들은 격주 내지 3주에 1번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 결합된 성장호르몬들은 매일 1번 내지 매주 3번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 감소된 투여의 빈도는 개선된 치료 성과들을 가져오는 개선된 환자 순응, 뿐만 아니라 개선된 환자 삶의 질을 가져올 것이다. 또 다른 구현예에서, 폴리(에틸렌 글리콜)과 결합된 성장호르몬들의 통상적인 결합체들과 대비하여, 본 발명의 결합체들의 분자량 및 링커 구조를 가지는 성장호르몬 CTP 결합체들은 개선된 효능, 개선된 안정성, 증가된 곡선 하 면적 (AUC) 수준들, 및 증진된 순환 반감기를 가지는 점이 확인되어 왔다. 또 다른 구현예에서, 폴리(에틸렌 글리콜)과 결합된 성장호르몬들의 통상적인 결합체들과 대비하여, 본 발명의 결합체들의 분자량 및 링커 구조를 가지는 성장호르몬들은 개선된 효능, 개선된 안정성, 증가된 AUC 수준들, 및 증진된 순환 반감기를 가지는 점이 확인되어 왔다. 또 다른 구현예에서, 폴리(에틸렌 글리콜)과 결합된 성장호르몬들의 통상적인 결합체들과 대비하여, 본 발명의 결합체들의 최적의 유체역학적 부피를 가지는 성장호르몬들은 개선된 효능, 개선된 안정성, 증가된 AUC 수준들, 및 증진된 순환 반감기를 가지는 점이 확인되어 왔다. 또 다른 구현예에서, 결합된 성장호르몬의 치료적 유효량은 생체내 측정가능한 예상된 생물학적 활성을 위해 필요한 결합체의 양이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 제안들에 따라 사용된 성장호르몬은 증가된 효능을 나타낸다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬의 N- 및 C-말단 둘 다와 CTP 서열들의 부착은 연장된 생체내 활성을 유도한다.
또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 당업자에게 알려진 임의의 성장 호르몬이다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 인간 성장호르몬이다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬의 뉴클레오타이드 서열 및/또는 아미노산 서열은 진뱅크 데이타베이스에서 입수가능하다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 본 명세서에서 제공된 성장호르몬의 및/또는 진뱅크 데이타베이스에서 제공된 성장호르몬의 상동체이다. 또 다른 구현예에서, 상동체는 또한 그의 결실, 삽입, 또는 아미노산 치환을 포함하는 치환 변이체 및 생물학적으로 활성을 가진 그의 폴리펩타이드 단편들을 말한다.
또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 엑손들 2번, 3번, 4번 또는 그의 임의의 조합을 소실한 hGH의 변이체이다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 신호 펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬은 신호 절단 부위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 CTP들에 의해 변형된 GH를 포함하는 폴리펩타이드들은 재조합 GH를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 성장호르몬은 성장호르몬 (GH)-유사 사이토카인들의 슈퍼패밀리의 구성원이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 성장호르몬은 인간 성장호르몬 (hGH)이다. 또 다른 구현예에서, 인간 성장호르몬은 다음의 아미노산 서열 (진뱅크 기탁번호 제 P01241호)을 포함한다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF (서열번호 5).
또 다른 구현예에서, 인간 성장호르몬은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF (서열번호 6). 또 다른 구현예에서, 인간 성장호르몬은 다음의 아미노산 서열을 포함한다: MFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLA (서열번호 7). 또 다른 구현예에서, hGH는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKVQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF (서열번호 8). 또 다른 구현예에서, hGH의 65번 글루타민이 발린으로 치환된 치환 변이체이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 AAA72260호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 AAK69708호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 CAA01435호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 CAA01329호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 CAA00380호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 AAA72555호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 NP_000506.2호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 NP_072053.1호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 NP_072054.1호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 NP_072055.1호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 기탁번호 제 NP_072056.1호 하에 기탁된 진뱅크 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 당업자에게 알려진 성장호르몬의 임의의 아미노산 서열을 인코딩한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 hGH를 인코딩한다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 기탁번호 제 NM_000515.3호 하에 기탁된 진뱅크 핵산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 기탁번호 제 NM_022559.2호 하에 기탁된 진뱅크 핵산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 기탁번호 제 NM_022560.2호 하에 기탁된 진뱅크 핵산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 기탁번호 제 NM_022561.2호 하에 기탁된 진뱅크 핵산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 성장호르몬을 인코딩하는 핵산 분자는 기탁번호 제 NM_022562.2호 하에 기탁된 진뱅크 핵산 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬을 포함하는 폴리펩타이드는 성장호르몬의 C-말단과 부착된 1개의 CTP를 포함하고 (hGH-CTP) 다음의 아미노산 서열을 가진다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGFSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 9).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬을 포함하는 폴리펩타이드는 성장호르몬의 C-말단과 일렬로 부착된 2개의 CTP들을 포함하고 (hGH-CTP-CTP) 다음의 아미노산 서열을 가진다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSAFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGFSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 10).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬을 포함하는 폴리펩타이드는 성장호르몬의 C-말단과 일렬로 부착된 2개의 CTP들 및 성장호르몬의 N-말단과 부착된 1개의 CTP를 포함하고 (CTP-hGH-CTP-CTP) 다음의 아미노산 서열을 가진다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGFSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 11).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬을 포함하는 폴리펩타이드는 성장호르몬의 C-말단과 일렬로 부착된 2개의 CTP들을 포함하고, 2개 CTP들 중 1개 CTP는 절단되고 1개의 추가적인 CTP가 성장호르몬의 N-말단과 부착되며 (tCTP-hGH-CTP-CTP) 다음의 아미노산 서열을 가진다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGFSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 12).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬을 포함하는 폴리펩타이드는 성장호르몬의 C-말단과 부착된 1개의 CTP 및 성장호르몬의 N-말단과 부착된 1개의 CTP를 포함하고 (CTP-hGH-CTP) 다음의 아미노산 서열을 가진다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGFSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 13).
또 다른 구현예에서, 성장호르몬 및 1개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드는 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MATGSRTSLLLAFGLLCLPWLQEGSASSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQFPTIPLSRLFDNAMLRAHRLHQLAFDTYQEFEEAYIPKEQKYSFLQNPQTSLCFSESIPTPSNREETQQKSNLELLRISLLLIQSWLEPVQFLRSVFANSLVYGASDSNVYDLLKDLEEGIQTLMGRLEDGSPRTGQIFKQTYSKFDTNSHNDDALLKNYGLLYCFRKDMDKVETFLRIVQCRSVEGSCGF (서열번호 14).
또 다른 구현예에서, CTP-hGH-CTP를 가지는 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 분자는 다음의 핵산 서열을 포함한다:
tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccatctctgcccagccccagcagactgccgggccccagcgacacacccattctgccccagttccccaccatccccctgagcaggctgttcgacaacgccatgctgagggctcacaggctgcaccagctggcctttgacacctaccaggagttcgaggaagcctacatccccaaggagcagaagtacagcttcctgcagaacccccagacctccctgtgcttcagcgagagcatccccacccccagcaacagagaggagacccagcagaagagcaacctggagctgctgaggatctccctgctgctgatccagagctggctggagcccgtgcagttcctgagaagcgtgttcgccaacagcctggtgtacggcgccagcgacagcaacgtgtacgacctgctgaaggacctggaggagggcatccagaccctgatgggccggctggaggacggcagccccaggaccggccagatcttcaagcagacctacagcaagttcgacaccaacagccacaacgacgacgccctgctgaagaactacgggctgctgtactgcttcagaaaggacatggacaaggtggagaccttcctgaggatcgtgcagtgcagaagcgtggagggcagctgcggcttcagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgcctcagtgatgaaggtctggatgcggccgc (서열번호 15).
또 다른 구현예에서, CTP-hGH-CTP-CTP를 가지는 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 분자는 다음의 핵산 서열을 포함한다:
tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccatctctgcccagccccagcagactgccgggccccagcgacacacccattctgccccagttccccaccatccccctgagcaggctgttcgacaacgccatgctgagggctcacaggctgcaccagctggcctttgacacctaccaggagttcgaggaagcctacatccccaaggagcagaagtacagcttcctgcagaacccccagacctccctgtgcttcagcgagagcatccccacccccagcaacagagaggagacccagcagaagagcaacctggagctgctgaggatctccctgctgctgatccagagctggctggagcccgtgcagttcctgagaagcgtgttcgccaacagcctggtgtacggcgccagcgacagcaacgtgtacgacctgctgaaggacctggaggagggcatccagaccctgatgggccggctggaggacggcagccccaggaccggccagatcttcaagcagacctacagcaagttcgacaccaacagccacaacgacgacgccctgctgaagaactacgggctgctgtactgcttcagaaaggacatggacaaggtggagaccttcctgaggatcgtgcagtgcagaagcgtggagggcagctgcggcttcagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatgcggccgc (서열번호 16).
또 다른 구현예에서, CTP-hGH-CTP-CTP를 가지는 폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 분자는 다음의 핵산 서열을 포함한다:
tctagaggacatggccaccggcagcaggaccagcctgctgctggccttcggcctgctgtgcctgccatggctgcaggagggcagcgccagctcttcttctaaggctccacccccgagcctgcccttccccaccatccccctgagcaggctgttcgacaacgccatgctgagggctcacaggctgcaccagctggcctttgacacctaccaggagttcgaggaagcctacatccccaaggagcagaagtacagcttcctgcagaacccccagacctccctgtgcttcagcgagagcatccccacccccagcaacagagaggagacccagcagaagagcaacctggagctgctgaggatctccctgctgctgatccagagctggctggagcccgtgcagttcctgagaagcgtgttcgccaacagcctggtgtacggcgccagcgacagcaacgtgtacgacctgctgaaggacctggaggagggcatccagaccctgatgggccggctggaggacggcagccccaggaccggccagatcttcaagcagacctacagcaagttcgacaccaacagccacaacgacgacgccctgctgaagaactacgggctgctgtactgcttcagaaaggacatggacaaggtggagaccttcctgaggatcgtgcagtgcagaagcgtggagggcagctgcggcttcagctccagcagcaaggcccctcccccgagcctgccctccccaagcaggctgcctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatgcggccgc (서열번호 17).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 성장호르몬의 기지의 서열과 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 성장호르몬은 본 명세서에서 개시된 바와 같은 성장호르몬 서열과 상동적이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명에 따른 상동성은 또한 그의 결실들, 삽입들, 또는 아미노산 치환을 포함하는 치환 변이체들 및 그의 생물학적으로 활성을 가진 폴리펩타이드 단편들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 치환 변이체는 hGH의 65번 글루타민이 발린으로 치환된 것이다 (Gellerfors et al., J. Pharm Biomed Anal 1989, 7: 173-83).
한 가지 구현예에서, 용어 "인간 성장호르몬" (hGH)은 hGH 활성 (예로, 성장의 촉진)을 나타내는 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에서 개시된 바와 같은 폴리펩타이드를 말한다.
한 가지 구현예에서, 용어 "인간 성장호르몬" (hGH)은 hGH 활성 (예로, 성장의 촉진)을 나타내는 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에서 개시된 바와 같은 폴리펩타이드를 말한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH는 또한 상동체를 말한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에 개시된 hGH 서열과 적어도 50% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에 개시된 hGH 서열과 적어도 60% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에 개시된 hGH 서열과 적어도 70% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에 개시된 hGH 서열과 적어도 80% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에 개시된 hGH 서열과 적어도 90% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 hGH 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 P01241호에 개시된 hGH 서열과 적어도 95% 상동적이다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 펩타이드는 옥신토모듈린이다. 또 다른 구현예에서, 옥신토모듈린 (OXM)은 다음의 아미노산 (AA)서열을 포함한다: HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA (서열번호 18). 또 다른 구현예에서, OXM은 서열번호 18의 아미노산 서열로 구성된다. 또 다른 구현예에서, OXM은 CAS 번호 제 62340-29-8호에 나타낸 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된다.
한 가지 구현예에서, 용어 옥신토모듈린은 기지의 옥신토모듈린의 상동체를 또한 포함한다. 한 가지 구현예에서, 상동체는 기능적 상동체이다. 또 다른 구현예에서, 용어 "기능적"은 본 명세서에서 제공된 상동체, 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들이 작용을 억제하도록 가지는 능력을 말한다. 본 용어는 또한 본 명세서에서 제공된 상동체, 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들이 또 다른 단백질의 또는 펩타이드의 생물학적 반감기를 연장하도록 가지는 능력을 말한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 단백질, 펩타이드 또는 상동체의 생물학적 반감기 (T1/ 2)는 단백질, 펩타이드 또는 상동체 양의 절반이 분해되거나 개체의 생물학적 배지에 존재하지 않는 데 걸리는 시간을 말한다. 또 다른 구현예에서, 생물학적 배지는 혈청, 뇌척수액, 조직, 점막 등이다.
또 다른 구현예에서, OXM은 인간 OXM 또는 임의의 포유동물 OXM이다. 또 다른 구현예에서, OXM은 또한 글루카곤-37 또는 생체활성을 가진 엔테로글루카곤이라고 언급된다. 또 다른 구현예에서, OXM은 이중 폴리펩타이드 또는 그의 단편들이다. 또 다른 구현예에서, OXM은 생물학적으로 활성을 가진 OXM의 단편이다. 또 다른 구현예에서, 생물학적으로 활성을 가진 OXM은 서열번호 18의 아미노산 19번부터 아미노산 37번까지 연장된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 OXM은 2개의 C-말단 아미노산들이 결실된 옥타펩타이드에 해당한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 OXM은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 OXM 활성을 보유하는 서열번호 18의 임의의 단편에 해당한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 또한 예로 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 옥신토신과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 87%, 적어도 89%, 적어도 91%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 상동적인 상동체들을 포함한다.
다른 구현예들에서, 용어 조작된 옥신토신은 성숙화 옥신토모듈린의 아미노산 서열을 말한다. 다른 구현예들에서, 용어 조작된 옥신토신은 그의 신호 서열 또는 신호 펩타이드를 포함하는 옥신토모듈린의 아미노산 서열을 말한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 신호 펩타이드 또는 신호 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, "신호 서열" 및 "신호 펩타이드"는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 또 다른 구현예에서, "서열"은 폴리뉴클레오타이드 분자를 기준으로 할 때 코딩 부분을 말할 수 있다. 각각의 가능성은 본 발명의 개별적 구현예를 나타낸다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 펩타이드는 에리트로포이에틴 (EPO)이다. 또 다른 구현예에서, 용어 "에리트로포이에틴"은 포유동물의 에리트로포이에틴을 말한다. 한 가지 구현예에서, "에리트로포이에틴"은 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 바와 같은 인간 에리트로포이에틴을 말한다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 또는 EPO 서열은 또한 상동체들을 말한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 에리트로포이에틴 서열과 적어도 50% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 에리트로포이에틴 서열과 적어도 60% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 에리트로포이에틴 서열과 적어도 70% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 에리트로포이에틴 서열과 적어도 80% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 에리트로포이에틴 서열과 적어도 90% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 에리트로포이에틴 아미노산 서열은 디폴드 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 AAA52400호에 개시된 에리트로포이에틴 서열과 적어도 95% 상동적이다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 추가적인 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가지는 서열번호 19에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 서열번호 19에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 19).
또 다른 구현예에서, EPO 펩타이드는 빈혈의 치료를 위해 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 추가적인 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가진다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가지는 서열번호 20에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 20).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가지는 서열번호 21에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 21).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가지는 서열번호 22에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDR (서열번호 22).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가지는 서열번호 23에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDR (서열번호 23).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 적어도 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 추가적으로 가지는 서열번호 24에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 24).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 서열번호 25에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDR (서열번호 25).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 1개의 CTP 아미노산 펩타이드 및 C-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들을 가지는 EPO 펩타이드를 인코딩하는 서열번호 26에 개시된 핵산을 제공한다: tctagaggtc atcatggggg tgcacgaatg tcctgcctgg ctgtggcttc tcctgtcccttc tgtcgctc cctctgggcc tcccagtcct gggctcctct tcctcaaagg cccctccccc gagccttcca agtccatccc gactcccggg gccctcggac accccaatat taccacaagc cccaccacgc ctcatctgtg acagccgagt cctggagagg tacctcttgg aggccaagga ggccgagaat atcacgacgg gctgtgctga acactgcagc ttgaatgaga atatcactgt cccagacacc aaagttaatt tctatgcctg gaagaggatg gaggtcgggc agcaggccgt agaagtctgg cagggcctgg ccctgctgtc ggaagctgtc ctgcggggcc aggccctgtt ggtcaactct tcccagccgt gggagcccct gcagctgcat gtggataaag ccgtcagtgg ccttcgcagc ctcaccactc tgcttcgggc tctgggagcc cagaaggaag ccatctcccc tccagatgcg gcctcagctg ctccactccg aacaatcact gctgacactt tccgcaaact cttccgagtc tactccaatt tcctccgggg aaagctgaag ctgtacacag gggaggcctg caggacaggg gacagatcct cttcctcaaa ggcccctccc ccgagccttc caagtccatc ccgactcccg gggccctccg acacaccaat cctgccacag agcagctcct ctaaggcccctcctccatcc ctgccatccc cctcccggct gcctggcccc tctgacaccc ctatcctgcc tcagtgatga aggtcttctg gatccgcggc cgc (서열번호 26). 또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들을 가지는 서열번호 66에 개시된 EPO 펩타이드를 포함하는 아미노산 서열을 제공한다: MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDR (서열번호 66).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들을 가지는 EPO 펩타이드를 인코딩하는 서열번호 67에 개시된 핵산 서열을 제공한다: ATGGGCGTGCACGAGTGTCCTGCTTGGCTGTGGCTGCTGCTGAGCCTGCTGTCCCTGCCTCTGGGCCTGCCTGTGCTGGGCAGCAGCAGCTCTAAGGCCCCTCCACCCAGCCTGCCCAGCCCTTCTAGACTGCCTGGCCCCAGCGACACCCCCATCCTGCCTCAGAGCAGCAGCAGCAAGGCCCCACCACCATCCCTGCCTAGCCCCAGCAGACTGCCAGGCCCTTCCGATACCCCAATCCTGCCCCAGGCCCCTCCCAGACTGATCTGCGACAGCCGGGTGCTGGAAAGATACCTGCTGGAAGCCAAAGAGGCCGAGAACATCACCACCGGCTGCGCCGAGCACTGCAGCCTGAACGAGAATATCACCGTGCCCGACACCAAAGTGAACTTCTACGCCTGGAAGCGGATGGAAGTGGGCCAGCAGGCCGTGGAAGTGTGGCAGGGACTGGCCCTGCTGAGCGAGGCCGTGCTGAGAGGACAGGCCCTGCTGGTGAACAGCAGCCAGCCCTGGGAGCCCCTGCAGCTGCATGTGGATAAGGCCGTGTCCGGCCTGCGGAGCCTGACCACACTGCTGAGAGCCCTGGGCGCTCAGAAAGAGGCCATCTCTCCCCCTGATGCCGCCTCTGCCGCCCCTCTGAGAACCATCACCGCCGACACCTTCCGGAAGCTGTTCCGGGTGTACAGCAACTTCCTGCGGGGCAAGCTGAAGCTGTACACCGGCGAGGCCTGCCGGACCGGCGATAGATAAGCTTGGCGCGCC (서열번호 67).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들 및 C-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들을 가지는 서열번호 68에 개시된 EPO 펩타이드를 제공한다:
MGVHECPAWLWLLLSLLSLPLGLPVLGSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQAPPRLICDSRVLERYLLEAKEAENITTGCAEHCSLNENITVPDTKVNFYAWKRMEVGQQAVEVWQGLALLSEAVLRGQALLVNSSQPWEPLQLHVDKAVSGLRSLTTLLRALGAQKEAISPPDAASAAPLRTITADTFRKLFRVYSNFLRGKLKLYTGEACRTGDRSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 68).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 N-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들 및 C-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드들을 가지는 EPO 펩타이드를 인코딩하는 서열번호 69에 개시된 핵산 서열을 제공한다:
ATGGGCGTGCACGAGTGTCCTGCTTGGCTGTGGCTGCTGCTGAGCCTGCTGTCCCTGCCTCTGGGCCTGCCTGTGCTGGGCAGCAGCAGCTCTAAGGCCCCTCCACCCAGCCTGCCCAGCCCTTCTAGACTGCCTGGCCCCAGCGACACCCCCATCCTGCCTCAGAGCAGCAGCAGCAAGGCCCCACCACCATCCCTGCCTAGCCCCAGCAGACTGCCAGGCCCTTCCGATACCCCAATCCTGCCCCAGGCCCCTCCCAGACTGATCTGCGACAGCCGGGTGCTGGAAAGATACCTGCTGGAAGCCAAAGAGGCCGAGAACATCACCACCGGCTGCGCCGAGCACTGCAGCCTGAACGAGAATATCACCGTGCCCGACACCAAAGTGAACTTCTACGCCTGGAAGCGGATGGAAGTGGGCCAGCAGGCCGTGGAAGTGTGGCAGGGACTGGCCCTGCTGAGCGAGGCCGTGCTGAGAGGACAGGCCCTGCTGGTGAACAGCAGCCAGCCCTGGGAGCCCCTGCAGCTGCATGTGGATAAGGCCGTGTCCGGCCTGCGGAGCCTGACCACACTGCTGAGAGCCCTGGGCGCTCAGAAAGAGGCCATCTCTCCCCCTGATGCCGCCTCTGCCGCCCCTCTGAGAACCATCACCGCCGACACCTTCCGGAAGCTGTTCCGGGTGTACAGCAACTTCCTGCGGGGCAAGCTGAAGCTGTACACCGGCGAGGCCTGCCGGACCGGCGATAGAAGCAGCTCCAGCAAGGCTCCACCCCCCAGCCTGCCATCCCCAAGTAGACTGCCCGGGCCCTCTGACACACCTATCCTGCCACAGTCCAGCAGCTCCAAAGCTCCCCCACCATCCCTCCCATCCCCATCCAGACTGCCTGGACCATCCGACACTCCAATTCTGCCTCAGTAAGCTTGGCGCGCC (서열번호 69).
한 가지 구현예에서, "인터페론"은 포유동물의 인터페론 폴리펩타이드 유형 I을 말한다. 한 가지 구현예에서, "인터페론"은 포유동물의 인터페론 폴리펩타이드 유형 Ⅱ를 말한다. 일정 구현예들에서, 당업자들에게 알려진 바와 같은 추가적인 적합한 인터페론 폴리펩타이드들이 사용된다. 일정 구현예들에서, 인터페론은 알파-인터페론이다. 일정 구현예들에서, 인터페론은 베타-인터페론이다. 일정 구현예들에서, 인터페론은 감마-인터페론이다. 일정 구현예들에서, 인터페론은 오메가-인터페론이다. 일정 구현예들에서, 인터페론은 아종 인터페론이다. 한 가지 구현예에서, 아종 인터페론 (IFN)은 IFN-α2a이다. 한 가지 구현예에서, 아종 인터페론 (IFN)은 IFN-α2b이다. 한 가지 구현예에서, 아종 인터페론 (IFN)은 IFN-β1a이다. 한 가지 구현예에서, 아종 인터페론 (IFN)은 IFN-β1b이다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 인터페론은 항바이러스 또는 항증식성 활성과 같은 인터페론 활성을 나타낸다. 일정 구현예들에서, 인터페론들의 비-제한적인 예들의 진뱅크 기탁번호들은 하기 표 1에 나열된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 인터페론은 또한 상동체들을 말한다. 한 가지 구현예들에서, 본 발명의 인터페론 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 표 1에 나열된 인터페론 서열들과 적어도 50% 상동적이다. 한 가지 구현예들에서, 본 발명의 인터페론 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 표 1에 나열된 인터페론 서열들과 적어도 60% 상동적이다. 한 가지 구현예들에서, 본 발명의 인터페론 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 표 1에 나열된 인터페론 서열들과 적어도 70% 상동적이다. 한 가지 구현예들에서, 본 발명의 인터페론 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 표 1에 나열된 인터페론 서열들과 적어도 80% 상동적이다. 한 가지 구현예들에서, 본 발명의 인터페론 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 표 1에 나열된 인터페론 서열들과 적어도 90% 상동적이다. 한 가지 구현예들에서, 본 발명의 인터페론 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 표 1에 나열된 인터페론 서열들과 적어도 95% 상동적이다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 상동성은 또한 그의 결실들, 삽입들, 또는 아미노산 치환을 포함하는 치환 변이체들 및 그의 생물학적으로 활성을 가진 폴리펩타이드 단편들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 인터페론 β의 17번 자리에서 시스테인은 세린으로 치환된다.
하기 표 1은 인터페론들의 예들을 그들 각각의 NCBI 서열 번호들과 함께 나열하고 있다.
Figure 112021001830313-pat00001
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 펩타이드로서 또는 폴리펩타이드로서 제공된 인터페론 (IFN)은 유형 I 인터페론이다. 또 다른 구현예에서, 인터페론 (IFN)은 INF-α이다. 또 다른 구현예에서, 인터페론 (IFN)은 INF-β이다. 또 다른 구현예에서, 인터페론 (IFN)은 INF-γ이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 서열번호 27에 개시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 27은 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN (서열번호 27, 인간 인터페론-β1a). 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 인간 인터페론 β1a (hIFN β1a)의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 진뱅크 기탁번호 제 NP_002167.1호에 개시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 서열번호 28에 개시된 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 28은 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
tctagaggacatgaccaacaagtgcctgctgcagatcgccctgctgctgtgcttcagcaccaccgccctgagcatgagctacaacctgctgggcttcctgcagaggtccagcaacttccagtgccagaagctgctgtggcagctgaacggcaggctggaatactgcctgaaggacaggatgaacttcgacatcccagaggaaatcaagcagctgcagcagttccagaaggaggacgccgccctgaccatctacgagatgctgcagaacatcttcgccatcttcaggcaggacagcagcagcaccggctggaacgagaccatcgtggagaacctgctggccaacgtgtaccaccagatcaaccacctgaaaaccgtgctggaagagaagctggaaaaggaggacttcaccaggggcaagctgatgagcagcctgcacctgaagaggtactacggcagaatcctgcactacctgaaggccaaggagtacagccactgcgcctggaccatcgtgagggtggagatcctgaggaacttctacttcatcaacaggctgaccggctacctgaggaactgatgagtccgcggccgc (서열번호 28, 인간 인터페론-β1a). 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 인간 인터페론 β1a (hIFN β1a)의 핵산 (NA) 분자에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 진뱅크 기탁번호 제 NM_002176호에 개시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 (NA) 분자에 의해 인코딩된다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 서열번호 29에 개시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 29는 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다: TF*LQPFEAFALAQQVVGDTVRVVNMTNKCLLQIALLLCFSTTALSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN (서열번호 29).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드는 서열번호 30에 개시된 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 30은 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
acattctaactgcaacctttcgaagcctttgctctggcacaacaggtagtaggcgacactgttcgtgttgtcaacatgaccaacaagtgtctcctccaaattgctctcctgttgtgcttctccactacagctctttccatgagctacaacttgcttggattcctacaaagaagcagcaattttcagtgtcagaagctcctgtggcaattgaatgggaggcttgaatactgcctcaaggacaggatgaactttgacatccctgaggagattaagcagctgcagcagttccagaaggaggacgccgcattgaccatctatgagatgctccagaacatctttgctattttcagacaagattcatctagcactggctggaatgagactattgttgagaacctcctggctaatgtctatcatcagataaaccatctgaagacagtcctggaagaaaaactggagaaagaagatttcaccaggggaaaactcatgagcagtctgcacctgaaaagatattatgggaggattctgcattacctgaaggccaaggagtacagtcactgtgcctggaccatagtcagagtggaaatcctaaggaacttttacttcattaacagacttacaggttacctccgaaactga (서열번호 30).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 C-말단과 부착된 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 C-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 N-말단과 부착된 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 N-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 C-말단과 부착된 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 그리고 N-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 단위 및/또는 C-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, N-말단과 부착된 적어도 1개의 CTP 단위 및 C-말단과 일렬로 부착된 2개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, N-말단과 부착된 적어도 1개의 CTP 단위 및 C-말단과 부착된 2개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, N-말단과 부착된 1개의 CTP 단위 및 C-말단과 부착된 적어도 2개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, N-말단과 부착된 1개의 CTP 단위 및 C-말단과 일렬로 부착된 적어도 2개의 CTP 단위들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 적어도 3개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 3개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 서열번호 31에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열에 의해 인코딩되는 인터페론 (IFN) 펩타이드 - CTP 폴리펩타이드를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 31은 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRNSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 31).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드 - CTP를 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 32에 개시된 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 32는 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
tctagaggacatgaccaacaagtgcctgctgcagatcgccctgctgctgtgcttcagcaccaccgccctgagcatgagctacaacctgctgggcttcctgcagaggtccagcaacttccagtgccagaagctgctgtggcagctgaacggcaggctggaatactgcctgaaggacaggatgaacttcgacatcccagaggaaatcaagcagctgcagcagttccagaaggaggacgccgccctgaccatctacgagatgctgcagaacatcttcgccatcttcaggcaggacagcagcagcaccggctggaacgagaccatcgtggagaacctgctggccaacgtgtaccaccagatcaaccacctgaaaaccgtgctggaagagaagctggaaaaggaggacttcaccaggggcaagctgatgagcagcctgcacctgaagaggtactacggcagaatcctgcactacctgaaggccaaggagtacagccactgcgcctggaccatcgtgagggtggagatcctgaggaacttctacttcatcaacaggctgaccggctacctgaggaacagctccagcagcaaggcccctccaccttccctgcccagtccaagccgactccctgggccctccgatacaccaattctgccacagtgatga (서열번호 32).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 그의 카복시 말단과 부착된 2개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 서열번호 33에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열에 의해 인코딩된 인터페론 (IFN) 펩타이드 - CTP (×2)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 33은 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRNSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 33).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드 - 그의 카복시 말단과 부착된 2개의 CTP를 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 34에 개시된 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 34는 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
tctagaggacatgaccaacaagtgcctgctgcagatcgccctgctgctgtgcttcagcaccaccgccctgagcatgagctacaacctgctgggcttcctgcagaggtccagcaacttccagtgccagaagctgctgtggcagctgaacggcaggctggaatactgcctgaaggacaggatgaacttcgacatcccagaggaaatcaagcagctgcagcagttccagaaggaggacgccgccctgaccatctacgagatgctgcagaacatcttcgccatcttcaggcaggacagcagcagcaccggctggaacgagaccatcgtggagaacctgctggccaacgtgtaccaccagatcaaccacctgaaaaccgtgctggaagagaagctggaaaaggaggacttcaccaggggcaagctgatgagcagcctgcacctgaagaggtactacggcagaatcctgcactacctgaaggccaaggagtacagccactgcgcctggaccatcgtgagggtggagatcctgaggaacttctacttcatcaacaggctgaccggctacctgaggaacagctccagcagcaaggcccctccaccttccctgcccagtccaagccgactccctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatccgcggccgc (서열번호 34).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, IFN의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위, 및 IFN의 카복시 말단과 부착된 2개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, IFN의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위, 및 IFN의 카복시 말단과 일렬로 부착된 2개의 CTP 단위들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 (아미노 말단부터 카복시 말단까지): 서열번호 35에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 CTP (×1) - 인터페론 (IFN) 펩타이드 - CTP (×2)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 35는 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRNSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 35).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드, IFN의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위 및 IFN의 카복시 말단과 부착된 2개의 CTP 단위들을 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 36에 개시된 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 36은 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
tctagaggacatgaccaacaagtgcctgctgcagatcgccctgctgctgtgcttcagcaccaccgccctgagcagcagcagctccaaggccccaccccccagcctgcccagccccagcagactgccaggccccagcgacacccccatcctgccccagatgagctacaacctgctgggcttcctgcagaggtccagcaacttccagtgccagaagctgctgtggcagctgaacggcaggctggaatactgcctgaaggacaggatgaacttcgacatcccagaggaaatcaagcagctgcagcagttccagaaggaggacgccgccctgaccatctacgagatgctgcagaacatcttcgccatcttcaggcaggacagcagcagcaccggctggaacgagaccatcgtggagaacctgctggccaacgtgtaccaccagatcaaccacctgaaaaccgtgctggaagagaagctggaaaaggaggacttcaccaggggcaagctgatgagcagcctgcacctgaagaggtactacggcagaatcctgcactacctgaaggccaaggagtacagccactgcgcctggaccatcgtgagggtggagatcctgaggaacttctacttcatcaacaggctgaccggctacctgaggaacagctccagcagcaaggcccctccaccttccctgcccagtccaagccgactccctgggccctccgacacaccaatcctgccacagagcagctcctctaaggcccctcctccatccctgccatccccctcccggctgcctggcccctctgacacccctatcctgcctcagtgatgaaggtctggatccgcggccgc (서열번호 36).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, IFN의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위, 및 IFN 코딩 서열 내에 위치한 단일한 CTP를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 (아미노 말단부터 카복시 말단까지): 서열번호 37에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 CTP (×1) - 인터페론 (IFN) 펩타이드 (단편 1) - 인터페론 (IFN) 펩타이드 (단편 2)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 37은 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRNSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN (서열번호 37).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드, IFN의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위 및 IFN 코딩 서열 내에 위치한 단일한 CTP를 함하는 폴리펩타이드는 서열번호 38 개시된 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 38 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00002
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드 및 그의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 서열번호 39에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 인터페론 (IFN) 펩타이드 - CTP를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 39는 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN* (서열번호 39).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드 - 그의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 40에 의해 개시된 핵산 분자에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 40은 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
tctagaggacatgaccaacaagtgcctgctgcagatcgccctgctgctgtgcttcagcaccaccgccctgagcagcagcagctccaaggccccaccccccagcctgcccagccccagcaggctgccaggccccagcgacacccccatcctgccccagatgagctacaacctgctgggcttcctgcagaggtccagcaacttccagtgccagaaactgctgtggcagctgaacggcaggctggaatactgcctgaaggaccggatgaacttcgacatccccgaagagatcaagcagctgcagcagttccagaaagaggacgccgccctgaccatctacgagatgctgcagaacatcttcgccatcttcaggcaggacagcagcagcaccggctggaacgagaccatcgtggagaacctgctggccaacgtgtaccaccagatcaaccacctgaaaaccgtgctggaagagaagctggaaaaagaggacttcaccaggggcaagctgatgagcagcctgcacctgaagaggtactacggcagaatcctgcactacctgaaggccaaagagtacagccactgcgcctggaccatcgtgagggtggagatcctgcggaacttctacttcatcaacaggctgaccggctacctgaggaactgatgagtccgcggccgc (서열번호 40).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 인터페론 (IFN) 펩타이드, 그의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위, 및 그의 카복시 말단과 부착된 단일한 CTP 단위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드는 서열번호 41에 개시된 아미노산 서열을 포함하는 인터페론 (IFN) 펩타이드 - CTP를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 41은 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함한다:
MTNKCLLQIALLLCFSTTALSSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQMSYNLLGFLQRSSNFQCQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRNSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ* (서열번호 41).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 인터페론 (IFN) 펩타이드, 그의 아미노 말단과 부착된 단일한 CTP 단위 및 그의 카복시 말단과 부착된 단일한 CTP를 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 42에 의해 개시된 핵산 분자에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 42는 다음의 핵산 (NA) 서열을 포함한다:
tctagaggacatgaccaacaagtgcctgctgcagatcgccctgctgctgtgcttcagcaccaccgccctgagcagcagcagctccaaggccccaccccccagcctgcccagccccagcagactgccaggccccagcgacacccccatcctgccccagatgagctacaacctgctgggcttcctgcagaggtccagcaacttccagtgccagaagctgctgtggcagctgaacggcaggctggaatactgcctgaaggacaggatgaacttcgacatcccagaggaaatcaagcagctgcagcagttccagaaggaggacgccgccctgaccatctacgagatgctgcagaacatcttcgccatcttcaggcaggacagcagcagcaccggctggaacgagaccatcgtggagaacctgctggccaacgtgtaccaccagatcaaccacctgaaaaccgtgctggaagagaagctggaaaaggaggacttcaccaggggcaagctgatgagcagcctgcacctgaagaggtactacggcagaatcctgcactacctgaaggccaaggagtacagccactgcgcctggaccatcgtgagggtggagatcctgaggaacttctacttcatcaacaggctgaccggctacctgaggaacagctccagcagcaaggcccctccaccttccctgcccagtccaagccgactccctgggccctccgatacaccaattctgccacagtgatgaaggtctggatgcggccgc (서열번호 42).
또 다른 구현예에서, 인터페론 β 펩타이드는 다음의 아미노산 (AA) 서열을 포함하는 서열번호 43을 포함한다:
MSYNLLGFLQRSSNFQSQKLLWQLNGRLEYCLKDRMNFDIPEEIKQLQQFQKEDAALTIYEMLQNIFAIFRQDSSSTGWNETIVENLLANVYHQINHLKTVLEEKLEKEDFTRGKLMSSLHLKRYYGRILHYLKAKEYSHCAWTIVRVEILRNFYFINRLTGYLRN (서열번호 43).
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 글루카곤-유사 펩타이드-1이다. 또 다른 구현예에서, 글루카곤-유사 펩타이드-1은 본 발명의 제안에 따라 사용된다. 또 다른 구현예에서, "글루카곤-유사 펩타이드-1"의 아미노 및 카복시 말단들 둘 다와 CTP의 부착은 증가된 효능을 가져온다. 또 다른 구현예에서, 펩타이드의 아미노 및 카복시 말단들 둘 다와 CTP 서열들의 부착은 연장된 생체내 활성을 가져온다. 또 다른 구현예에서, 글루카곤-유사 펩타이드의 아미노 및 카복시 말단들 둘 다와 CTP의 부착은 연장된 생체내 활성을 가져온다.
한 가지 구현예에서, "글루카곤-유사 펩타이드-1" (GLP-1)은 포유동물의 폴리펩타이드를 말한다. 한 가지 구현예에서, "글루카곤-유사 펩타이드-1" (GLP-1)은 인간 폴리펩타이드를 말한다. 또 다른 구현예에서. GLP-1은 GLP-1 수용체와 결합하는 능력을 가진 글루카곤 프리프로단백질 (진뱅크 수탁번호 제 NP002045호)로부터 절단되고 인슐린 자극 활성을 유도하는 신호전달 경로를 개시한다. 한 가지 구현예에서, "인슐린 자극 활성"은 증가된 포도당 수준에 반응하여 인슐린 분비를 촉진함으로써, 세포들에 의한 포도당 흡수 및 감소된 혈장 포도당 수준들을 유발하는 능력을 말한다. 일정 구현예들에서, GLP-1 폴리펩타이드들은 이에 제한되는 것은 아니지만 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 미국 특허 제 5,118,666호에서 기술된 것들을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1은 또한 GLP-1 상동체를 말한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 NP002045호에 개시된 GLP-1 서열들과 적어도 50% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 NP002045호에 개시된 GLP-1 서열들과 적어도 60% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 NP002045호에 개시된 GLP-1 서열들과 적어도 70% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 NP002045호에 개시된 GLP-1 서열들과 적어도 80% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 NP002045호에 개시된 GLP-1 서열들과 적어도 90% 상동적이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 GLP-1 아미노산 서열은 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 진뱅크 기탁번호 제 NP002045호에 개시된 GLP-1 서열들과 적어도 95% 상동적이다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 아포지질단백질이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 아포지질단백질 A1 (APO-A1)이다. 또 다른 구현예에서, 아포지질단백질은 N- 또는 C-말단 위에 적어도 하나의 CTP 펩타이드와 부착된다. 또 다른 구현예에서, 아포지질단백질은 아포지질단백질 AI, 아포지질단백질 AⅡ, 아포지질단백질 AⅣ, 또는 그의 유사체 또는 변이체이다.
한 가지 구현예에서, 본 발명에 따른 아포지질단백질 제작물들은 콜레스테롤 및 기타 지질들과 복합체들을 형성하고 간으로 이들 복합체들의 운반을 돕는 그들의 능력으로 인해 HDL 유사체들로서 광범위하게 간주될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 미가공 아포지질단백질 A-I, A-Ⅱ 또는 A-Ⅳ와 기능적 동등성은 지질 결합 검정법을 사용하여 간편하게 측정될 수 있다. 포유동물에서 실질적으로 동일한 생리학적 반응을 나타내는 CTP-변형된 아포지질단백질의 능력은 토끼들 또는 마우스들과 같은 설치류와 같은 테스트 유기체에서 역 콜레스테롤 운반을 수행하는 능력의 측정에 의해 간편하게 측정될 수 있다.
한 가지 구현예에서, CTP-변형된 아포지질단백질을 포함하는 폴리펩타이드는 마찬가지로 역 콜레스테롤 운반을 수행할 수 있거나, 적어도 하나의 CTP의 첨가에 의해 유발된 변형에도 불구하고 생체내에서 미가공 아포지질단백질들보다 훨씬 더 좋다. 또 다른 구현예에서, 시험관내 CTP-변형된 아포지질단백질은 더 낮은 시험관내 생물학적 활성을 가지지만, 연장된 반감기에 의해 보상된다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 아포지질단백질의 혈장 반감기는 야생형 아포지질단백질과 대비하여 바람직하게 증가된다. 한 가지 구현예에서, 증가된 반감기는 아포지질단백질 제작물의 유체역학적 크기로 인하고, 이는 신장들을 통한 여과율을 감소시킬 수 있다.
한 가지 구현예에서, APO-A1의 아미노산 서열은 DEPPQSPWDRVKDKATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSAGKGLNLKLLDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEGLRGEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQKKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVDALRTHLAPYSDELRQRLAARLEALKENGGARLAEYHAKATEHLSTLSEKAKPALEDLRQGLLPVLESFKVSFLSALEEYTKKLNTQ (서열번호 44) 또는 그의 상동체 또는 변이체이다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 방법들은 C-말단 위에 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 가지는 APO-A1 펩타이드를 포함하는 아미노산 서열을 제공한다: MKAAVLTLAVLFLTGSQARHFWQQDEPPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSALGKQLNLKLLDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEGLRQEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQKKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVDALRTHLAPYSDELRQRLAARLEALKENGGARLAEYHAKATEHLSTLSEKAKPALEDLRQGLLPVLESFKVSFLSALEEYTKKLNTQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 70).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 APO-A1 펩타이드 및 C-말단 위에 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 인코딩하는 서열번호 71에 개시된 핵산 서열을 제공한다:
ATGAAGGCCGCCGTGCTGACCCTGGCCGTGCTGTTTCTGACCGGCTCTCAGGCCCGGCACTTCTGGCAGCAGGACGAGCCTCCCCAGTCCCCCTGGGACAGAGTGAAGGACCTGGCCACCGTGTACGTGGACGTGCTGAAGGACTCCGGCAGAGACTACGTGTCCCAGTTCGAGGGCTCTGCCCTGGGCAAGCAGCTGAACCTGAAGCTGCTGGACAACTGGGACTCCGTGACCTCCACCTTCTCCAAGCTGCGCGAACAGCTGGGACCTGTGACCCAGGAATTCTGGGACAACCTGGAAAAAGAGACAGAGGGCCTGAGACAGGAAATGTCCAAGGACCTGGAAGAGGTCAAAGCCAAGGTGCAGCCCTACCTGGACGACTTCCAGAAGAAATGGCAGGAAGAGATGGAACTGTACCGGCAGAAGGTGGAACCCCTGCGGGCCGAGCTGCAGGAAGGCGCTAGACAGAAGCTGCACGAACTGCAGGAAAAGCTGTCCCCCCTGGGCGAGGAAATGCGGGACAGAGCCAGAGCCCACGTGGACGCCCTGAGAACCCACCTGGCCCCCTACTCTGACGAGCTGCGGCAGAGGCTGGCCGCCAGACTGGAAGCCCTGAAAGAGAACGGCGGAGCCCGGCTGGCCGAGTACCACGCTAAGGCTACCGAGCACCTGTCCACCCTGTCCGAGAAGGCCAAGCCCGCCCTGGAAGATCTGCGGCAGGGCCTGCTGCCCGTGCTGGAATCCTTCAAGGTGTCCTTCCTGTCCGCTCTGGAAGAGTACACCAAGAAGCTGAACACCCAGTCCTCCAGCTCCAAGGCCCCTCCACCCTCCCTGCCTAGCCCTAGTAGACTGCCTGGGCCCTCCGACACCCCCATCCTGCCCCAGTGATGAGGATCCGCGGCCGCGAGCTC (서열번호 71).
한 가지 구현예에서, 본 발명의 방법들은 C-말단 위에 1개의 CTP 아미노산 펩타이드를 가지는 APO-A1 펩타이드를 포함하는 아미노산 서열을 제공한다: MKAAVLTLAVLFLTGSQARHFWQQDEPPQSPWDRVKDLATVYVDVLKDSGRDYVSQFEGSALGKQLNLKLLDNWDSVTSTFSKLREQLGPVTQEFWDNLEKETEGLRQEMSKDLEEVKAKVQPYLDDFQKKWQEEMELYRQKVEPLRAELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEMRDRARAHVDALRTHLAPYSDELRQRLAARLEALKENGGARLAEYHAKATEHLSTLSEKAKPALEDLRQGLLPVLESFKVSFLSALEEYTKKLNTQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 72).
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 APO-A1 펩타이드 및 C-말단 위에 2개의 CTP 아미노산 펩타이드를 인코딩하는 서열번호 73에 개시된 핵산 서열을 제공한다:
ATGAAGGCCGCCGTGCTGACCCTGGCCGTGCTGTTTCTGACCGGCTCTCAGGCCCGGCACTTCTGGCAGCAGGACGAGCCTCCCCAGTCCCCCTGGGACAGAGTGAAGGACCTGGCCACCGTGTACGTGGACGTGCTGAAGGACTCCGGCAGAGACTACGTGTCCCAGTTCGAGGGCTCTGCCCTGGGCAAGCAGCTGAACCTGAAGCTGCTGGACAACTGGGACTCCGTGACCTCCACCTTCTCCAAGCTGCGCGAACAGCTGGGACCTGTGACCCAGGAATTCTGGGACAACCTGGAAAAAGAGACAGAGGGCCTGAGACAGGAAATGTCCAAGGACCTGGAAGAGGTCAAAGCCAAGGTGCAGCCCTACCTGGACGACTTCCAGAAGAAATGGCAGGAAGAGATGGAACTGTACCGGCAGAAGGTGGAACCCCTGCGGGCCGAGCTGCAGGAAGGCGCTAGACAGAAGCTGCACGAACTGCAGGAAAAGCTGTCCCCCCTGGGCGAGGAAATGCGGGACAGAGCCAGAGCCCACGTGGACGCCCTGAGAACCCACCTGGCCCCCTACTCTGACGAGCTGCGGCAGAGGCTGGCCGCCAGACTGGAAGCCCTGAAAGAGAACGGCGGAGCCCGGCTGGCCGAGTACCACGCTAAGGCTACCGAGCACCTGTCCACCCTGTCCGAGAAGGCCAAGCCCGCCCTGGAAGATCTGCGGCAGGGCCTGCTGCCCGTGCTGGAATCCTTCAAGGTGTCCTTCCTGTCCGCTCTGGAAGAGTACACCAAGAAGCTGAACACCCAGTCCTCCAGCTCCAAGGCCCCTCCACCCTCCCTGCCTAGCCCTAGTAGACTGCCTGGGCCCTCCGACACACCAATCCTGCCACAGAGCAGCTCCTCTAAGGCCCCTCCTCCATCCCTGCCATCCCCCTCCCGGCTGCCTGGCCCCTCTGACACCCCTATCCTGCCTCAGTGATGAAGGTCTGGATCCGCGGCCGC (서열번호 73).
한 가지 구현예에서, 아포지질단백질 또는 그의 단편들의 기능적 동등물은 적어도 하나의 아미노산의 삽입, 치환 또는 결실에 의해 획득될 수 있다. 아미노산 서열이 하나의 아미노산의 또 다른 것으로 치환을 포함할 때, 이러한 치환은 보존적 아미노산 치환일 수 있다. 서열번호 44의 단편들은 하나 이상의 이러한 치환을 포함하고, 예를 들면 2개의 보존적 아미노산 치환들, 예를 들면 3개 또는 4개의 아미노산 치환들, 5개 또는 6개 아미노산 치환들, 예를 들면 7개 또는 8개의 보존적 아미노산 치환들, 10개부터 15까지의 보존적 아미노산 치환들, 15개부터 25까지의 보존적 아미노산 치환들, 25개부터 75까지의 보존적 아미노산 치환들, 75개부터 125까지의 보존적 아미노산 치환들, 125개부터 175까지의 보존적 아미노산 치환들과 같다. 치환들은 선결정된 아미노산들의 임의의 하나 이상의 그룹들 내에서 만들어질 수 있다.
또 다른 구현예에서, 아포지질단백질의 단편은 지질 결합 부위를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바 "기능적 동등성"은 본 명세서에서 제공되는 서열들의 선결정된 단편의 해당하는 기능성을 참조하여 확립된 바람직한 구현예의 하나에 따른다.
본 명세서에서 제공된 서열들의 변이체들의 기능적 동등물들은 삽입들, 결실들 및 보존적 치환들을 포함하는 치환들이 증가하면서 바람직한 선결정된 서열로부터 점진적으로 달라지는 아미노산 서열들을 나타낼 것으로 이해될 것이다. 이러한 치이는 바람직한 선결정된 서열 및 단편 또는 기능적 동등물 간의 상동성의 감소로서 측정된다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 사이토카인이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 헤마토포이에틴 사이토카인이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 인터페론 사이토카인이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 케모카인이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 종양괴사인자 사이토카인이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 사용되는 바 사이토카인은 생물학적 활성 및 임상적 효능을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 사용되는 바 사이토카인은 치료적 단백질이다.
아포지질단백질의 모든 단편들 또는 기능적 동등물들은 아포지질단백질의 바람직한 선결정된 서열 대비 그들이 보여주는 상동성의 정도와는 상관없이, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 이러한 이유는 서열번호 44의 서열의 일정 부위들이 결과로 얻은 단편의 결합 활성에 미치는 임의의 유의한 효과가 없이도 바로 돌연변이 가능하거나, 완전하게 결실될 수 있기 때문이다. 기능적으로 동등한 서열번호 44의 변이체들을 생성하는 방법들이 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 미국 특허 제 6,897,039호에 기술되어 있다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 응고인자는 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 응고인자는 펩타이드이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 응고인자는 폴리펩타이드이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 효소이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 세린 프로테아제이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 당단백질이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 트랜스글루타미나제이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 불활성 자이모겐이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 당업자에게 알려져 있는 임의의 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅧ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FV이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 인자 XⅢ 이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 인자 X이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 트롬빈이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 피브린이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅦa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FXa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FVa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 프로트롬빈이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 트롬빈이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FV이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FXI이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 vWF이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅧa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 B-결실 도메인 FⅧ (FⅧBDD)이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅨa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 프리칼리크레인이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 칼리크레인이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅦa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 피브리노겐이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 트롬보모듈린이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅡ이다.
또 다른 구현예에서, 응고인자는 당단백질이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 비타민 K 의존성 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 비타민 K 비의존성 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 단백질이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 당단백질이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 당단백질 FV이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅥ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅦ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅧ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅨ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FX이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FXI이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FXⅡ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FvW이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅡ이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅨa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FXIa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 피브린이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅦa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FXa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FVa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 프로트롬빈이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 FⅧa이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 프리칼리크레인이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 재조합 칼리크레인이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 임의의 기지의 재조합 응고인자다. 또 다른 구현예에서, 신호 펩타이드를 포함하는 응고인자는 임의의 기지의 재조합 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없는 C-말단과 부착된 1개 내지 10개 CTP 반복서열들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 신호 펩타이드를 포함하는 응고인자는 임의의 기지의 재조합 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없는 C-말단과 부착된 1개 내지 10개 CTP 반복서열들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 신호 펩타이드를 포함하는 응고인자는 임의의 기지의 재조합 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없는 C-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 반복서열들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없고 C-말단과 부착된 1개 내지 10개의 CTP 반복서열들을 포함하는 응고인자는 조작된 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없고 C-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 반복서열들을 포함하는 응고인자는 조작된 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없고 C-말단과 부착된 1개 내지 10개의 CTP 반복서열들을 포함하는 응고인자는 결합된 응고인자이다. 또 다른 구현예에서, N-말단과 부착된 CTP들은 전혀 없고 C-말단과 부착된 적어도 하나의 CTP 반복서열들을 포함하는 응고인자는 결합된 응고인자이다.
또 다른 구현예에서, 응고인자는 FⅨ, FⅦ, 인자 X, 단백질 C 및 프로트롬빈의 도메인 구성과 유사하거나 일치하는 도메인 구성을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 N-말단 프로펩타이드와 함께 전구체들로서 합성된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 사용되는 바 응고인자는 불활성 프로-효소 형태로 있다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 간세포들에서 생산된다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 글루타민산들 (Glu)을 감마 카복시 글루타민산들 (Gla)로 전환하는 감마카복실라제를 위한 결착 (docking) 부위를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 응고인자는 시판되는 응고인자이다.
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPR PGVLLRAPFP (서열번호 45).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFP*GCGR (서열번호 46).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ를 인코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00003
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP (카복시 말단에 부착됨)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00004
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP (카복시 말단에 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFPSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ* (서열번호 49).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP-CTP (카복시 말단에 부착됨)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00005
Figure 112021001830313-pat00006
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP-CTP (카복시 말단에 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFPSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ** (서열번호 51).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP-CTP-CTP (카복시 말단에 3개가 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFPSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 52).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP (×4) (카복시 말단에 4개가 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFPSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 53).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅶ-CTP (×5) (카복시 말단에 5개가 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MVSQALRLLCLLLGLQGCLAAVFVTQEEAHGVLHRRRRANAFLEELRPGSLERECKEEQCSFEEAREIFKDAERTKLFWISYSDGDQCASSPCQNGGSCKDQLQSYICFCLPAFEGRNCETHKDDQLICVNENGGCEQYCSDHTGTKRSCRCHEGYSLLADGVSCTPTVEYPCGKIPILEKRNASKPQGRIVGGKVCPKGECPWQVLLLVNGAQLCGGTLINTIWVVSAAHCFDKIKNWRNLIAVLGEHDLSEHDGDEQSRRVAQVIIPSTYVPGTTNHDIALLRLHQPVVLTDHVVPLCLPERTFSERTLAFVRFSLVSGWGQLLDRGATALELMVLNVPRLMTQDCLQQSRKVGDSPNITEYMFCAGYSDGSKDSCKGDSGGPHATHYRGTWYLTGIVSWGQGCATVGHFGVYTRVSQYIEWLQKLMRSEPRPGVLLRAPFPSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 54).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ를 인코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00007
Figure 112021001830313-pat00008
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MQRVNMIMAESPGLITICLLGYLLSAECTVFLDHENANKILNRPKRYNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELDVTCNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLRSTKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKEKTKLT* (서열번호 56).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP (카복시 말단에 부착됨)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00009
Figure 112021001830313-pat00010
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP (카복시 말단에 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MQRVNMIMAESPGLITICLLGYLLSAECTVFLDHENANKILNRPKRYNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELDVTCNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLRSTKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKEKTKLTSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ** (서열번호 58).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP-CTP (카복시 말단에 부착됨)를 인코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00011
Figure 112021001830313-pat00012
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP-CTP (카복시 말단에 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MQRVNMIMAESPGLITICLLGYLLSAECTVFLDHENANKILNRPKRYNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELDVTCNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLRSTKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKEKTKLTSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ** (서열번호 60).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP-CTP (카복시 말단에 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MQRVNMIMAESPGLITICLLGYLLSAECTVFLDHENANKILNRPKRYNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELDVTCNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLRSTKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKEKTKLTSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 61).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP (×4) (카복시 말단에 4개가 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MQRVNMIMAESPGLITICLLGYLLSAECTVFLDHENANKILNRPKRYNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELDVTCNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLRSTKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKEKTKLTSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 62).
또 다른 구현예에서, 인자 Ⅸ-CTP (×5) (카복시 말단에 5개가 부착됨)의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다:
MQRVNMIMAESPGLITICLLGYLLSAECTVFLDHENANKILNRPKRYNSGKLEEFVQGNLERECMEEKCSFEEAREVFENTERTTEFWKQYVDGDQCESNPCLNGGSCKDDINSYECWCPFGFEGKNCELDVTCNIKNGRCEQFCKNSADNKVVCSCTEGYRLAENQKSCEPAVPFPCGRVSVSQTSKLTRAETVFPDVDYVNSTEAETILDNITQSTQSFNDFTRVVGGEDAKPGQFPWQVVLNGKVDAFCGGSIVNEKWIVTAAHCVETGVKITVVAGEHNIEETEHTEQKRNVIRIIPHHNYNAAINKYNHDIALLELDEPLVLNSYVTPICIADKEYTNIFLKFGSGYVSGWGRVFHKGRSALVLQYLRVPLVDRATCLRSTKFTIYNNMFCAGFHEGGRDSCQGDSGGPHVTEVEGTSFLTGIISWGEECAMKGKYGIYTKVSRYVNWIKEKTKLTSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ (서열번호 63).
또 다른 구현예에서, 퓨린이 본 발명의 응고인자-CTP를 발현하는 세포에 첨가된다. 또 다른 구현예에서, 퓨린은 세포에서 본 발명의 응고인자-CTP의 생산 효율을 증가시킨다. 또 다른 구현예에서, 퓨린은 본 발명의 응고인자-CTP의 코딩 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된다. 또 다른 구현예에서, 퓨린은 별도의 벡터에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 퓨린 및 응고인자-CTP는 하나의 벡터에 의해 인코딩된다. 또 다른 구현예에서, 퓨린의 코딩 서열은 pCI-DHFR 내로 삽입된다. 또 다른 구현예에서, 퓨린의 코딩 서열은 pCI-dhfr/smaI+NotI, Furin/AsisI F.I.+NotI에서 조작된다.
또 다른 구현예에서, 퓨린을 코딩하는 핵산 서열은 다음의 핵산 서열을 포함한다:
Figure 112021001830313-pat00013
Figure 112021001830313-pat00014
또 다른 구현예에서, 퓨린의 아미노산 서열은 다음의 아미노산 서열을 포함한다.
MELRPWLLWVVAATGTLVLLAADAQGQKVFTNTWAVRIPGGPAVANSVARKHGFLNLGQIFGDYYHFWHRGVTKRSLSPHRPRHSRLQREPQVQWLEQQVAKRRTKRDVYQEPTDPKFPQQWYLSGVTQRDLNVKAAWAQGYTGHGIVVSILDDGIEKNHPDLAGNYDPGASFDVNDQDPDPQPRYTQMNDNRHGTRCAGEVAAVANNGVCGVGVAYNARIGGVRMLDGEVTDAVEARSLGLNPNHIHIYSASWGPEDDGKTVDGPARLAEEAFFRGVSQGRGGLGSIFVWASGNGGREHDSCNCDGYTNSIYTLSISSATQFGNVPWYSEACSSTLATTYSSGNQNEKQIVTTDLRQKCTESHTGTSASAPLAAGIIALTLEANKNLTWRDMQHLVVQTSKPAHLNANDWATNGVGRKVSHSYGYGLLDAGAMVALAQNWTTVAPQRKCIIDILTEPKDIGKRLEVRKTVTACLGEPNHITRLEHAQARLTLSYNRRGDLAIHLVSPMGTRSTLLAARPHDYSADGFNDWAFMTTHSWDEDPSGEWVLEIENTSEANNYGTLTKFTLVLYGTAPEGLPVPPESSGCKTLTSSQACVVCEEGFSLHQKSCVQHCPPGFAPQVLDTHYSTENDVETIRASVCAPCHASCATCQGPALTDCLSCPSHASLDPVEQTCSRQSQSSRESPPQQQPPRLPPEVEAGQRLRAGLLPSHLPEVVAGLSCAFIVLVFVTVFLVLQLRSGFSFRGVKVYTMDRGLISYKGLPPEAWQEECPSDSEEDEGRGERTAFIKDQSAL* (서열번호 65).
일정 구현예들에서, 용어 응고인자는 또한 응고 활성을 가지는 기지의 응고인자들의 상동체들을 포함한다. 일정 구현예들에서, 본 발명에 따른 상동성은 또한 그의 결실들, 삽입들, 또는 아미노산 치환을 포함하는 치환 변이체들 및 그의 생물학적으로 활성을 가진 폴리펩타이드 단편들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 응고 활성을 가지는 응고인자의 상동체들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 응고 활성을 가지는 본 명세서에서 기술된 바와 같은 응고인자의 상동체들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 예로 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 응고인자와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 87%, 적어도 89%, 적어도 91%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 더 말하지만 99% 상동적 폴리펩타이드들인 상동체들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 퓨린의 상동체들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 예로 디폴트 매개변수들을 사용하는 국립 생체기술학 정보센터 (NCBI)의 블라스트P 소프트웨어를 사용하여 결정된 바와 같이 응고인자와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 87%, 적어도 89%, 적어도 91%, 적어도 93%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 더 말하지만 99% 상동적 폴리펩타이드들인 상동체들을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 상동체들은 또한 그의 결실들, 삽입들, 또는 아미노산 치환을 포함하는 치환 변이체들 및 그의 생물학적으로 활성을 가진 폴리펩타이드 단편들을 말한다.
또 다른 구현예에서, 3개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들이 본 명세서에서 제공된 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 C-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 4개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들이 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 C-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 5개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들이 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 C-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 10개의 CTP가 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 아미노 또는 C-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 10개의 CTP가 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단과 부착된다. 또 다른 구현예에서, 1개 내지 10개의 CTP가 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 C-말단과 부착된다.
본 명세서에서 기술된 바와 같이 요소들 또는 단계들을 포함하는 본 발명의 조성물들 및 방법은, 또 다른 구현예에서 이들 요소들 또는 단계들로 구성되거나, 또 다른 구현예에서 이들 요소들 또는 단계들로 필수적으로 구성될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 용어 "포함하다 (comprise)"는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 같은 지시된 활성 제제의 포함, 뿐만 아니라 다른 활성 제제 및 약제학적 산업에서 알려진 바와 같은 약제학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체들, 부형제들, 연화제들, 안정화제들 등의 포함을 말한다. 또 다른 구현예에서, 용어 "필수적으로 구성되는"은 그의 활성 성분은 단지 지시된 활성 성분인 조성물을 말하지만, 제형물을 안정화하거나 보존하거나 등을 하지만 지시된 활성 성분의 치료적 효과에는 직접적으로 관여하지 않는 다른 화합물들이 포함될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 용어 "필수적으로 구성되는"은 활성 성분의 방출을 용이하게 하는 구성성분들을 말할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 용어 "구성되는"은 활성 성분 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물을 말한다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 또는 C-말단에 부착된 적어도 하나의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 1개 내지 3개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 1개 내지 5개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 1개 내지 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 2개 내지 3개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 2개 내지 5개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 2개 내지 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 3개 내지 5개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 3개 내지 8개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 3개 내지 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 6개 내지 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 1개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N- 및/또는 C-말단에 부착된 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들)과 부착된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, CTP 펩타이드들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 측면 둘 중 하나 (N-말단 또는 C-말단) 위에 일렬로 부착된다.
한 가지 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터가 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 발현 벡터를 포함하는 세포가 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, 발현 벡터를 포함하는 조성물이 본 명세서에서 제공된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 세포를 포함하는 조성물을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 세포는 진핵세포이다. 또 다른 구현예에서, 세포는 원핵세포다.
한 가지 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 분해에 대항한 증진된 보호작용을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 제거에 대항한 증진된 보호작용을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 연장된 제거 시간을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 그의 Cmax를 증진시킨다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 그의 Tmax를 증진시킨다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 그의 T1/ 2을 증진시킨다. 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 C-말단 끝에서 CTP 서열은 그의 AUC를 연장시킨다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 결합된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 미변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 동일한 방식으로 사용된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 미변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편과 동일한 방식으로 사용된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 생체내에서 증가된 순환 반감기 및 혈장 정체 시간, 감소된 제거율, 및 증가된 임상적 활성을 가진다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 개선된 성질들로 인해, 이들 결합체들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편보다 덜 빈번하게 투여된다.
또 다른 구현예에서, 감소된 투여의 빈도는 개선된 치료 전략을 가져오고, 이는 한 가지 구현예에서 개선된 치료 성과들 유도하는 개선된 환자 순응, 뿐만 아니라 개선된 환자 삶의 질을 가져온다. 또 다른 구현예에서, 통상적인 결합체들과 대비하여, 본 명세서에서 또한 제공된 유체역학적 부피를 가지는 본 명세서에서 제공된 결합체들은 개선된 생체내 효능, 개선된 안정성, 증가된 AUC 수준들, 및 증진된 순환 반감기를 가진다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 또한 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단과 부착된 1개의 글리코실화 융모막 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들 (CTP들) 및 C-말단과 부착된 2개의 글리코실화 CTP를 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 글리코실화 및 비-글리코실화 CTP들의 조합들이 관심 있는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 변형하는 데 사용될 수 있고, 또한 본 명세서에서 제공되는 것으로 이해될 것이다. 이러한 조합들은 예를 들면 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 N-말단과 부착된 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP, 및 그의 C-말단과 부착된 적어도 하나의 글리코실화 CTP, 및 그의 역을 포함할 수 있다. 더우기, 또 다른 구현예에서 동일한 말단 (N- 또는 C-말단)과 부착된 적어도 하나의 글리코실화 CTP 및 적어도 하나의 비-글리코실화 CTP의 조합들도 역시 참작된다. 이들 조합들은 또한 글리코실화 및/또는 비글리코실화 CTP의 절단들로 포함할 수 있다. 이러한 조합들은 관심 있는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 위한 최적으로 유체역학적 부피 또는 유체역학적 크기에 도달하도록 본 명세서에서 제공된 본 발명에 의해 안내된 당업자에 의해 결정될 수 있다. 그 결과로 최적의 유체역학적 부피를 가지는 관심 있는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 최적으로 원하는 특징들, 예로 개선된 효능, 개선된 안정성, 증가된 AUC 수준들, 증가된 생체유용성 및 증진된 순환 반감기를 소유한다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 관심 있는 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 치료적 유효량을 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 치료적 유효량은 치료될 특이적 조건, 치료될 환자의 병태, 뿐만 아니라 조성물의 기타 성분들과 같은 요인들에 따라 결정된다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 치료적 효능은 최적의 유체역학적 부피에 도달하도록 글리코실화 및/또는 비-글리코실화 CTP 펩타이드들을 첨가하거나 제거함으로써 최적으로 조정된다. 이와 같이 수행할 시, 당업자라면 최적의 치료적 효능을 가지는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편에 도달할 것으로 이해될 것이다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공되는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 치료적 용도들을 가진다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공되는 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 예방적 용도들을 가진다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법들과 관련하여 사용될 때, 용어들 "감소시키는, 감소, 낮추는 등"은 이전에 측정되거나 결정된 수준으로부터 또는 정상적인 수준으로부터 100% 감소를 말한다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 89 내지 99%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 79 내지 88%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 69 내지 78%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 59 내지 68%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 49 내지 58%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 39 내지 48%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 29 내지 38%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 19 내지 28%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 9 내지 18%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 5 내지 8%로 이다. 또 다른 구현예에서, 감소는 이전에 결정된 수준으로부터 1 내지 4%로 이다.
한 가지 구현예에서, 본 발명과 함께 사용에 적합한 조직-특이적 프로모터들은 하나 이상의 특이적 세포 집단들에서 기능적인 서열들을 포함한다. 예들로는 이에 제한되는 것은 아니지만, 간-특이적 알부민 프로모터들 [Pinkert et al., (1987) Genes Dev. 1: 268-277], 림프-특이적 프로모터들 [Calame et al., (1988) Adv. Immunol. 43: 235-275]; 상세하게는 T-세포 수용체들 [Winoto et al., (1989) EMBO J. 8: 729-733] 및 면역글로불린들 [Banerji et al. (1983) Cell 33729-740]의 프로모터들; 신경필라멘트 프로모터와 같은 뉴런-특이적 프로모터 [Byrne et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5473-5477]; 췌장-특이적 프로모터들 [Edlunch et al. (1985) Science 230: 912-916]; 또는 유장 프로모터와 같은 유방샘-특이적 프로모터들 (미국 특허 제 4,873,316호 및 유럽 출원공고 제 264,166호)을 포함한다. 본 발명에서 사용하는 데 적합한 유도성 프로모터들은 예를 들면 테트라사이클린-유도성 프로모터를 포함한다 (Srour, M.A., et al., 2003. Thromb. Haemost. 90: 398-405).
한 가지 구현예에서, 용어 "폴리뉴클레오타이드 분자"는 RNA 서열, 상보적 폴리뉴클레오타이드 서열 (cDNA), 게놈 폴리뉴클레오타이드 서열 및/또는 복합 폴리뉴클레오타이드 서열들 (예로, 상기의 조합)의 형태로 분리되고 제공되는 단일 또는 이중가닥 핵산 서열을 말한다.
한 가지 구현예에서, "상보적 폴리뉴클레오타이드 서열"은 역전사효소 또는 기타 다른 RNA-의존성 DNA 중합효소를 사용하여 메신저 RNA의 역전사로부터 나오는 서열을 말한다. 한 가지 구현예에서, 서열은 DNA 중합효소를 사용하여 생체내 또는 시험관내에서 연속적으로 증폭될 수 있다.
한 가지 구현예에서, "게놈 폴리뉴클레오타이드 서열"은 염색체로부터 유래된 (분리된) 서열을 말하고, 따라서 이것은 염색체의 인접한 부분을 나타낸다.
한 가지 구현예에서, "복합 폴리뉴클레오타이드 서열"은 적어도 부분적으로 상보적이고 적어도 부분적으로 게놈인 서열을 말한다. 한 가지 구현예에서, 복합 서열은 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하도록 요구되는 일정 엑손 서열들, 뿐만 아니라 이들 사이에 끼어있는 일정 인트론 서열들을 포함할 수 있다. 한 가지 구현예에서, 인트론 서열들은 다른 유전자들을 포함하는 임의의 출처일 수 있고, 전형적으로 보존된 스프라이싱 신호 서열들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 인트론 서열들은 시스-작용 발현 조절 요소들을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드들은 PCR 기법들, 또는 당업자에게 알려진 기타 다른 방법 또는 절차를 사용하여 제조된다. 또 다른 구현예에서, 절차는 두 가지 다른 DNA 서열들의 라이게이션이 관여한다 (예를 들면, "Current Protocols in Molecular Biology", eds. Ausubel et al., John Wiley & Sons, 1992 참조).
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 관심 있는 조작된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 인코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드들은 재조합 펩타이드/폴리펩타이드의 발현을 가능하게 하는 발현 벡터들 (예로, 핵산 제작물) 내로 삽입된다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 이러한 벡터를 원핵세포들에서 복제 및 삽입 (integration)에 적합하게 하는 추가적인 서열들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 이러한 벡터를 진핵세포들에서 복제 및 삽입에 적합하게 하는 추가적인 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 이러한 벡터를 원핵세포들 및 진핵세포들 둘 다에서 복제 및 삽입에 적합하게 하는 셔틀 벡터를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 클로닝 벡터들은 전사 및 번역 개시 서열들 (예로, 프로모터들, 인핸서들) 및 전사 및 번역 종결인자들 (예로, 폴리아데닐화 신호들)을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 다양한 원핵 또는 진핵 세포들이 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그의 단편들을을 발현하도록 숙주-발현 시스템들로서 사용될 수 있다. 또 따른 구현예에서, 이들은 이에 제한되는 것은 아니지만, 폴리펩타이드 코딩 서열을 포함하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아; 폴리펩타이드 코딩 서열을 포함하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모; 폴리펩타이드 코딩 서열을 포함하는, 재조합 바이러스 발현 벡터들 (예로, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 Ti 플라스미드와 같은 재조합 플라스미드 발현 벡터들로 형질전환된 효모과 같은 미생물들을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 비-박테리아 발현 시스템들이 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 발현하는 데 사용될 수 있다 (예로, CHO 세포들과 같은 포유동물 발현 시스템들). 또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드들을 발현하는 데 사용되는 발현 벡터는 pCI-dhfr벡터이다. 한 가지 구현예에 따르면, pCI-dhfr 벡터의 제작은 하기 실시예의 재료들 및 방법들에서 기술된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 박테리아 시스템들에서, 많은 발현 벡터들은 발현되는 폴리펩타이드를 위해 의도된 용도에 의존하여 유리하게 선택될 수 있다. 한 가지 구현예에서, 많은 양의 폴리펩타이드들이 바람직하다. 한 가지 구현예에서, 높은 수준들의 단백질 산물의 발현을 가능하게는 소수성 신호 서열과의 융합으로서 유도하고, 단백질 산물이 바로 정제되도록 박테리아의 원형질막공간 또는 배양 배지 내로 발현된 산물을 유도하는 벡터들이 바람직하다. 한 가지 구현예에서, 소정의 융합 단백질들이 폴리펩타이드의 회수를 돕도록 특이적 절단 부위로 조작된다. 한 가지 구현예에서, 이러한 조작에 적응 가능한 벡터들은 이에 제한되는 것은 아니지만 pET 시리즈의 대장균 발현 벡터들을 포함한다 [Studier et al., Methods in Enzymol. 185: 60-89 (1990)].
한 가지 구현예에서, 효모 발현 시스템들이 사용된다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 그의 전부가 참고문헌으로 통합되는 미국 특허 제 5,932,447호에서 개시된 바와 같이, 구성적 (constitutive) 또는 유도성 프로모터들을 포함하는 많은 벡터들이 효모에서 사용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 외래 DNA 서열들을 효모 염색체 내로 삽입을 촉진하는 벡터들이 사용된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 발현 벡터는 또한 예를 들면 내부 리보좀 진입 부위 (IRES)와 같은 단일한 mRNA로부터 여러 단백질들의 번역을 허용하는 추가적인 폴리뉴클레오타이드 서열들 및 프로모터-키메라 폴리펩타이드의 게놈 삽입을 위한 서열들을 포함할 수 있다.
한 가지 구현예에서, 포유동물 발현 벡터들은 이에 제한되는 것은 아니지만
인비트로겐사로부터 입수가능한 pcDNA3, pcDNA3.1(+/-), pGL3, pZeoSV2(+/-), pSecTag2, pDisplay, pEF/myc/cyto, pCMV/myc/cyto, pCR3.1, pSinRep5, DH26S, DHBB, pNMT1, pNMT41, pNMT81, 프로메가사로부터 입수가능한 pCI, 스트라트젠사로부터 입수가능한 Promega, pMbac, pPbac, pBK-RSV 및 pBK-CMV, 클론테크사로부터 입수가능한 pTRES 및 그들의 유도체들을 포함한다.
한 가지 구현예에서, 레트로바이러스들과 같은 진핵세포 바이러스들로부터 얻은 조절 요소들을 포함하는 발현 벡터들이 본 발명에서 사용된다. SV40 벡터들은 pSVT7 및 pMT2을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 소의 파필로마 바이러스로부터 유래된 벡터들은 pBV-1MTHA을 포함하고, 엡스타인 바 바이러스로부터 유래된 벡터들은 pHEBO, 및 p2O5을 포함한다. 기타 대표적인 벡터들은 pMSG, pAV009/A+, pMTO10/A+, pMAMneo-5, 배큘로바이러스 pDSVE, 및 SV-40 초기 프로모터, SV-40 후기 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스 프로모터, 라우 육종 바이러스 프로모터, 폴리헤드린 프로모터, 또는 진핵 세포들의 발현에 효과적으로 보이는 기타 프로모터들 하에 단백질들의 발현을 허용하는 기타 다른 벡터를 포함한다.
한 가지 구현예에서, 재조합 바이러스 벡터들은 그들이 잠복 감염 및 표적 특이성과 같은 장점들을 제시하기 때문에 본 발명의 펩타이드들/폴리펩타이드들의 생체내 발현에 유용하다. 한 가지 구현예에서, 잠복 감염은 예를 들면 레트로바이러스의 생활 주기에서 고유하고, 단일한 감염된 세포가 발아하여 이웃하는 세포들을 감염시키는 많은 자손 비리온들을 생산하는 과정이다. 한 가지 구현예에서, 결과는 넓은 영역이 신속하게 감염되는 것이고, 이들 대부분은 원래의 바이러스 입자들에 의해 초기에 감염된 것이 아니다. 한 가지 구현예에서, 잠복으로 전파될 수 있는 바이러스성 벡터들이 생산된다. 한 가지 구현예에서, 이러한 특징은 원하는 목적이 특정된 유전자를 단지 국소화된 많은 표적화 세포들 내로 도입하는 경우라면 유용할 수 있다.
한 가지 구현예에서, 다양한 방법들이 본 발명의 발현 벡터를 세포들 내로 도입하는 데 사용될 수 있다. 이러한 방법들은 일반적으로 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Md. (1989); Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (1995); Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor Mich. (1995); Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Butterworths, Boston Mass. (1988); 및 Gilboa et at., Biotechniques 4 (6): 504-512, 1986에 기술되어 있고, 예를 들면 재조합 바이러스성 벡터들로 안정한 또는 일시적 형질전환법, 리포펙션, 전기천공법 및 감염을 포함한다. 또한, 양성-음성 선별 방법들의 경우는 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 미국 특허 제 5,464,764호 및 제 5,487,992호를 참조한다.
한 가지 구현예에서, 바이러스 감염에 의한 핵산의 도입은 더 높은 형질전환 효율이 바이러스들의 감염적 특성으로 인해 획득될 수 있기 때문에, 리포펙션 및 전기천공법과 같은 다른 방법들을 능가하는 여러 장점들을 제공한다.
본 명세서에서 제공된 조작된 폴리펩타이드들 또는 그의 단편들은 또한 임의의 적합한 투여의 방식 (예로, 피하 투여, 경구 투여, 비강내 투여, 정맥내 투여, 또는 생체내 유전자 치료법)을 채용하여 개인에게 투여되는 핵산 제작물로부터 발현될 수 있는 것으로 판단될 것이다. 한 가지 구현예에서, 핵산 제작물은 적절한 유전자 전달 운반체/방법 (형질전환, 형질감염, 상동적 재조합 등) 및 필요한 경우 발현 시스템을 통해 적합한 세포 내로 도입되고, 변형된 세포들은 배양으로 증식되며 개인에게로 복귀된다 (예로, 생체외 유전자 치료법).
한 가지 구현예에서, 식물 발현 벡터들이 사용된다. 한 가지 구현예에서, 폴리펩타이드 코딩 서열의 발현은 많은 프로모터들에 의해 추진된다. 또 다른 구현예에서, 35S RNA 및 CaMV의 19S RNA 프로모터들 CaMV [Brisson et al., Nature 310: 511-514 (1984)], 또는 TMV의 피막 단백질 프로모터 [Takamatsu et al., EMBO J. 6: 307-311 (1987)]와 같은 바이러스성 프로모터들이 사용된다. 또 다른 구현예에서, 예를 들면 루비스코의 작은 소단위 [Coruzzi et al., EMBO J. 3: 1671-1680 (1984); 및 Brogli et al., Science 224:838-843 (1984)], 열충격 단백질 예로 콩의 hsp17.5-E 또는 hsp17.3-B [Gurley et al., Mol. Cell. Biol. 6: 559-565 (1986)]와 같은 식물 프로모터들이 사용된다. 한 가지 구현예에서, 제작물들은 Ti 플라스미드, Ri 플라스미드, 식물 바이러스성 벡터들, 직접적 DNA 형질전환, 미세주입법, 전기천공법 및 당업자에게 잘 알려진 기타 기법들을 사용하여 식물 세포들 내로 도입된다. 예를 들면, Weissbach & Weissbach, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, NY, 섹션 Ⅷ, pp 421-463 (1988)를 참조한다. 당해 기술분야에서 잘 알려진 곤충들 및 포유동물 숙주세포 시스템들과 같은 기타 발현 시스템들도 역시 본 발명에 의해 사용될 수 있다.
삽입된 코딩 서열 (폴리펩타이드를 인코딩함)의 전사 및 번역을 위해 필요한 요소들을 포함하는 것이외에도, 본 발명의 발현 제작물은 또한 발현된 폴리펩타이드의 안정성, 생산, 정제, 수율 또는 활성을 최적화하도록 조작된 서열들을 포함할 수 있는 것으로 판단될 것이다.
한 가지 구현예에서, 형질전환된 세포들은 효과적인 조건들 하에서 배양되고, 이는 재조합 조작된 옥신토모듈린 펩타이드들의 높은 양들의 발현을 허용한다. 또 다른 구현예에서, 효과적인 배양 조건들은 이에 제한되는 것은 아니지만 단백질 생산을 허용하는 효과적인 배지, 생물반응기, 온도, pH 및 산소 조건들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 효과적인 배지는 세포가 본 발명의 재조합 폴리펩타이드를 생산하는 임의의 배지를 말한다. 또 다른 구현예에서, 배지는 전형적으로 동화가능한 탄소, 질소 및 포스페이트 출처들, 그리고 적절한 염들, 미네랄들, 금속들 및 비타민들과 같은 기타 영양소들을 가지는 수용성 용액을 포함한다. 본 발명의 세포들은 통상적인 발효 생물반응기들, 진탕 플라스크들, 시험관들, 마이크로타이터 접시들 및 페트리디쉬들에서 배양될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 배양은 재조합 세포를 위해 적절한 온도, pH 및 산소 함량에서 수행된다. 또 다른 구현예에서, 배양 조건들의 결정은 당업자의 전문성에 속한다.
한 가지 구현예에서, 생산에 사용되는 벡터 및 숙주 시스템에 의존하여, 결과로 얻은 폴리펩타이드 또는 그의 단편 또는, 또 다른 구현예에서 결과로 얻은 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편은 CTP의 글리코실화가 일어나도록 재조합 세포 내에서 발현되거나, 발효 배지 내로 분비되거나, 포유동물 세포의 외부 표면 위에 보유된다.
한 가지 구현예에서, 선결정된 시간의 배양 이후에 재조합 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 회수가 수행된다.
한 가지 구현예에서, 용어 "재조합 조작된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 회수하는 단계"는 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 전체 발효 배지를 수집하는 것을 말하고 분리 또는 정제의 추가적인 단계들을 내포할 것을 필요로 하지 않는다. 또 다른 구현예에서, 당해 기술분야에서 잘 알려진 분리 또는 정제의 추가적인 단계들은 재조합 조작된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 회수하기 위하여 수행된다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 조작된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 또는 그의 변이체들은 이에 제한되는 것은 아니지만 친화 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 여과법, 전기영동법, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 젤 여과 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피, 콘카나발린 A 크로마토그래피, 크로마토포커싱 및 차별적 용액화법과 같은 다양한 표준 단백질 정제 기법들을 사용하여 정제된다.
회수를 용이하게 하기 위하여, 발현된 코딩 서열은 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 융합된 절단가능한 분체를 인코딩하도록 조작될 수 있다. 또한, 융합 단백질은 폴리펩타이드가 폴리펩타이드가 친화 크로마토그래피에 의해, 예로 절단가능한 분체에 대한 특이적 컬럼 상의 고정화에 의해 바로 분리될 수 있도록 설계될 수 있다. 절단가능한 부위는 조작된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 절단가능한 분체 사이에서 조작되고 절단가능한 분체 및 폴리펩타이드는 융합 단백질을 이러한 부위에서 특이적으로 절단할 수 있는 적절한 효소 또는 제제로의 처리에 의해 크로마토그래피 컬럼으로부터 방출될 수 있다 [예로, Booth et al., Immunol. Lett. 19:65-70 (1988); and Gardella et al., J. Biol. Chem. 265: 15854-15859 (1990) 참조].
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 조작된 폴리펩타이드 또는 그의 단편는 "실질적으로 순수한" 형태로 복구된다.
한 가지 구현예에서, 용어 "실질적으로 순수한"은 본 명세서에서 기술된 적용들에서 단백질의 효과적인 사용을 허용하는 순도를 말한다.
본 명세서에서 제공된 조작된 폴리펩타이드 또는 그의 단편는 또한 시험관내 발현 시스템들을 사용하여 합성될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 시험관내 합성 방법들이 당해 기술분야에서 잘 알려져 있고 시스템의 구성성분들은 시판되고 있다.
한 가지 구현예에서, 재조합 조작된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 합성되고 정제되며, 그들의 치료적 효능은 생체내 또는 시험관내 둘 중 하나에서 검정될 수 있다. 본 발명의 재조합 조작된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 결합 활성들은 당업자에게 알려진 바와 같은 다양한 검정법들을 사용하여 확인될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개인에게 그 자체로 제공될 수 있다. 한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 조작된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합된 약제학적 조성물의 일부로서 개인에게 제공될 수 있다.
또 다른 구현예에서, "약제학적 조성물"은 생리학적으로 적합한 담체들 및 부형제들과 같은 다른 화학적 구성성분들을 가진 본 명세서에서 기술된 하나 이상의 활성 성분들의 조제물을 말한다. 약제학적 조성물의 목적은 유기체로 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.
또 다른 구현예에서, "활성 성분"은 생물학적 효과를 부여할 수 있는 관심 있는 폴리펩타이드 서열을 말한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 용어들 "생리학적으로 허용가능한 담체" 및 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 유기체에게 유의한 자극을 유발하지 않고 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 성질들을 없애지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 아쥬반트가 이들 용어들 하에 포함된다. 한 가지 구현예에서, 약제학적으로 허용가능한 담체에 포함된 성분들의 하나는 예를 들면 유기성 및 수용성 배지들 둘 다에서 넓은 범위의 용해도를 가진 생체적합한 중합체인 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)일 수 있다 (Mutter et al. (1979)).
또 다른 구현예에서, 용어 "부형제"는 활성 성분의 투여를 더 용이하게 하도록 약제학적 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 말한다. 한 가지 구현예에서, 부형제들은 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당들 및 전분 유형들, 셀룰로스 유도체들, 젤라틴, 식물성 오일들 및 폴리에틸렌 글리콜들을 포함한다.
약물들의 제형화 및 투여를 위한 기법은 본 명세서에서 참고문헌으로 통합되어 있는 "레밍턴의 약제학적 과학들" Mack 출판사, Easton, PA, 최신판에서 확인된다.
용량 범위들의 다양한 구현예들이 본 발명에 의해 고려된다. 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 용량은 한 가지 구현예에서 0.005 내지 100 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.005 내지 5 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.01 내지 50 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.1 내지 20 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.1 내지 10 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.01 내지 5 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.001 내지 0.01 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.001 내지 0.1 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.1 내지 5 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.5 내지 50 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.2 내지 15 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.8 내지 65 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 50 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 5 내지 10 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 8 내지 15 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 20 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 20 내지 40 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 60 내지 120 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 12 내지 40 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 40 내지 60 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 50 내지 100 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 60 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 15 내지 25 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 5 내지 10 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 55 내지 65 mg/일의 범위를 가진다.
또 다른 구현예에서, 용량은 50 내지 500 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 50 내지 150 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 100 내지 200 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 150 내지 250 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 200 내지 300 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 250 내지 400 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 300 내지 500 mg/일의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 350 내지 500 mg/일의 범위를 가진다.
한 가지 구현예에서, 용량은 20 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 30 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 40 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 50 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 0.01 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 0.1 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 1 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 0.530 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 0.05 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 50 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 10 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 20 내지 70 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, 용량은 5 mg/일이다.
한 가지 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 1 내지 5 mg/일이다. 한 가지 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 1 내지 3 mg/일이다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 2 mg/일이다.
또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/2일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/3일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/4일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/5일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/6일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/주이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/9일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/11일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 90 mg/14일이다.
또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 용량은 10 내지 50 mg/일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/2일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/3일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/4일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/5일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/6일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg주이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/9일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/11일이다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 50 mg/14일이다.
또 다른 구현예에서, 투여량들은 mg/kg 또는 유닛/kg으로서 주어질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 용량은, 한 가지 구현예에서 0.005 내지 100 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.005 내지 5 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.01 내지 50 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.1 내지 20 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.1 내지 10 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.01 내지 5 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.001 내지 0.01 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.001 내지 0.1 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.1 내지 5 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.5 내지 50 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.2 내지 15 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 0.8 내지 65 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 50 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 5 내지 10 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 8 내지 15 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 10 내지 20 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 20 내지 40 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 60 내지 120 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 12 내지 40 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 40 내지 60 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 50 내지 100 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 1 내지 60 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 15 내지 25 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 5 내지 10 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다. 또 다른 구현예에서, 용량은 55 내지 65 mg/kg 또는 유닛/kg의 범위를 가진다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 비강내 용량 형태로 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 주사가능한 용량 형태로 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.0001 mg부터 0.6 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.001 mg부터 0.005 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.005 mg부터 0.01 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.01 mg부터 0.3 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.2 mg부터 0.6 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 그의 아미노 말단 위에 CTP들이 없다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.2 mg부터 2 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 2 mg부터 6 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 4 mg부터 10 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 5 mg부터 15 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 0.2 mg부터 2 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 2 mg부터 6 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 4 mg부터 10 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 5 mg부터 15 mg까지의 범위를 가지는 투여량으로 개체에게 투여된다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 65%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 55%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 45%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 10%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 25%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 35%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 75%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 용량은 비-CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들을 사용하여 투여된 양보다 100%의 작동제의 양을 포함하는 것이다. 그러나, 용량이 비-CTP-변형된 폴리펩타이들 또는 그들의 단편들과 동일한 양의 작동제를 포함하더라도, 정상적인 작동제와 대비하여 그의 증가된 반감기 때문에 덜 빈번하게 투여될 것이라는 점이 개체에게 여전히 유리하다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 결합된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 치료적 유효량은 매일 한 번 투여되는, 체중 kg 당 50 내지 500 IU 사이 범위이다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 결합된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 치료적 유효량은 매일 한 번 투여되는, 체중 kg 당 150 내지 250 IU 사이 범위이다. 또 다른 구현예에서, 결합된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 다양한 수단에 의한 인간 환자에게로 투여를 위한 유효 강도로 제형화된다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 개체에서 순환하는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 활성을 20 내지 30 IU/dL로 만드는 유효량으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 개체에서 순환하는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 활성을 25 내지 50 IU/dL로 만드는 유효량으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 개체에서 순환하는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 활성을 50 내지 100 IU/dL로 만드는 유효량으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 개체에서 순환하는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 활성을 100 내지 200 IU/dL로 만드는 유효량으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 개체에서 순환하는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 활성을 10 내지 50 IU/dL로 만드는 유효량으로 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 CTP-변형된 폴리펩타이드는 개체에서 순환하는 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 활성을 20 내지 100 IU/dL로 만드는 유효량으로 투여된다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 주간을 기초로 하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 매주 두 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 격주를 기초로 하여 (격주에 한 번) 개체에게 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 매달 두 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 매달 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 일간을 기초로 하여 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 격일로 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 개체에게 3일마다 한 번 투여된다.
또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 4일마다 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 5일마다 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 6일마다 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 7 내지 14일마다 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 10 내지 20일마다 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 5 내지 15일마다 한 번 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드는 개체에게 15 내지 30일마다 한 번 투여된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들 치료법을 필요로 하는 만성 질환들로 고생하는 환자들의 순응을 증가시키는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 팩터로 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기를 증가시키는 것에 의한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도에서 감소를 가능하게 한다.
또 다른 구현예에서, 용어 순응은 부착을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법들은 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기를, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도를 감소시키는 결과를 가져오는 본 명세서에서 제공된 팩터 또는 증가분으로 증가시키는 단계에 의해 치료를 필요로 하는 환자들의 순응을 증가시키는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도의 감소는, 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 더욱 안정하게 만드는 CTP 변형들 및 이와 연속적인 본 명세서에서 제공된 팩터 또는 증가분으로 유체역학적 크기의 증가로 인해 달성된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도의 감소는, 폴리펩타이드 또는 그의 단편들의 반감기 (T1/ 2)를 증가시키는 CTP 변형들 및 이와 연속적인 본 명세서에서 제공된 팩터 또는 증가분으로 유체역학적 크기의 증가로 인해 달성된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도의 감소는, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 제거 시간을 증가시키거나 제거율을 감소시키는 결과를 가져오는 본 명세서에서 제공된 팩터 또는 증가분으로 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기를 증가시키는 단계에 의해 달성된다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 투여 빈도의 감소는, 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 AUC 척도를 증가시키는 결과를 가져오는 본 명세서에서 제공된 팩터 또는 증가분으로 폴리펩타이드 또는 그의 단편의 유체역학적 크기를 증가시키는 단계에 의해 달성된다.
경구적 투여는, 한 가지 구현예에서 정제들, 캡슐들, 로젠지들, 씹는 정제들, 현탁액들, 에멀전들 등을 포함하는 단위 용량 형태를 포함한다. 이러한 단위 용량 형태들은 본 명세서에서 제공된 바람직한 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들의 안전한 유효량을 포함하고, 각각은 한 가지 구현예에서 약 0.7 또는 3.5 mg부터 약 280 mg/70 kg까지, 또는 또 다른 구현예에서 약 0.5 또는 10 mg부터 약 210 mg/70 kg까지이다. 경구 투여를 위한 단위 용량 형태들의 제조에 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체들은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있다. 또 다른 구현예에서, 정제들은 전형적으로 칼슘 카보네이트, 소듐 카보네이트, 만니톨, 락토스, 및 셀룰로스와 같은 불활성 희석제들; 전분, 젤라틴 및 슈크로스와 같은 결합제들; 전분, 알긴산 및 크로스카멜로스와 같은 붕해제들; 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 및 탈크와 같은 윤활제들로서 통상적인 약제학적으로 적합한 아쥬반트들을 포함한다. 한 가지 구현예들에서 이산화실리콘과 같은 글리던트들은 분말-혼합물의 유동 특징들을 개선하는 데 사용될 수 있다. 한 가지 구현예에서, FD & C 염색제들과 같은 채색제들은 모양을 위해 첨가될 수 있다. 아스파탐, 사카린, 멘톨, 페퍼민트, 및 과일 향들과 같은 감미제들 및 향미제들은 씹는 정제들에 유용한 아쥬반트들이다. 캡슐들은 전형적으로 상기에 개시된 하나 이상의 고체 희석제들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 담체 구성성분들의 선택은 맛, 가격, 및 보관 안정성과 같은 이차적 고려사항들에 의존하고, 이는 본 발명의 목적을 위해 중요하지 않으며, 당업자에 의해 바로 시행될 수 있다.
한 가지 구현예에서, 경구적 용량 형태는 선정의된 방출 프로파일을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 경구적 용량 형태는 연장된 방출 정제들, 캡슐들, 로젠지들 또는 씹는 정제들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 경구적 용량 형태는 느린 방출 정제들, 캡슐들, 로젠지들 또는 씹는 정제들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 경구적 용량 형태는 즉시 방출 정제들, 캡슐들, 로젠지들 또는 씹는 정제들을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 경구적 용량 형태는 당업자에게 알려진 바와 같은 약제학적 활성 성분의 바람직한 방출 프로파일에 따라 제형화된다.
또 다른 구현예에서, 경구적 조성물들은 액체 용액들, 에멀전들, 현탁액들 등을 포함한다. 이러한 조성물들의 제조에 적합한 약제학적으로 허용가능한 담체들은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 또 다른 구현예에서, 액체 경구적 조성물들은 약 0.001%부터 약 0.933%까지 범위의 바람직한 화합물 또는 화합물들을 포함하거나, 또 다른 구현예에서 약 0.01%부터 약 10%까지 범위를 포함한다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 방법들에서 사용하는 조성물들은 용액들 또는 에멀전들을 포함하고, 이는 또 다른 구현예에서 본 발명의 화합물들, 선택적으로 국소적 비강내 투여를 목적으로 하는 다른 화합물들의 안전한 유효량을 포함하는 수용성 용액들 또는 에멀전들이다. 또 다른 구현예에서, 조성물들은 약 0.01%부터약 10.0%까지 범위의 주요 화합물, 더욱 바람직하게는 약 0.1%부터 약 2.0%까지 범위를 포함하고, 이는 비강내 경로에 의한 화합물들의 전신적 전달에 사용된다.
또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드가 근육 내로 주사된다 (근육내 주사). 또 다른 구현예에서, 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드가 피부 아래로 주사된다 (피하 주사). 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드가 근육 내로 주사된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 및 적어도 하나의 CTP 단위를 포함하는 폴리펩타이드가 피부 내로 주사된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편이 본 명세서에서 기술된 바와 같이 전신적 투여를 통해 투여된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드 또는 그의 단편이 본 명세서에서 기술된 바와 같이 정맥내 주사에 의해 투여된다. 또 다른 구현예에서, 투여는 비경구적, 호흡기로, 경구적, 국소적, 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하로, 비강내로, 경비강으로, 안구내, 안과적, 경막외, 볼, 직장, 경점막, 장 또는 골수내 주사들뿐만 아니라 경막내 또는 직접 뇌실내 투여를 포함하는 비경구적 전달일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 조제물은 전신적 방식이 아닌 국소적 방식으로 예를 들면 환자의 신체의 특이적 부위 내로 직접 조제물의 주사를 통해 투여된다.
한 가지 구현예에서, 투여의 경로는 장관일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 경로는 결막, 경피, 피부내, 동맥내, 질, 직장, 종양내, 경암 (parcanceral), 경점막, 근육내, 혈관내, 뇌실내, 두개내, 비강내, 설하, 또는 그들의 조합일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물들은 액체 조제물의 정맥내, 동맥내, 또는 근육내 주사에 의해 투여된다. 또 다른 구현예에서, 액체 제형물들은 용액들, 현탁액들, 분산제들, 에멀전들, 오일들 등을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 약제학적 조성물들은 정맥내로 투여되고, 따라서 정맥내 투여에 적합한 형태로 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물들은 동맥내로 투여되고, 따라서 동맥내 투여에 적합한 형태로 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물들은 근육내로 투여되고, 따라서 근육내 투여에 적합한 형태로 제형화된다.
또한, 또 다른 구현예에서 약제학적 조성물들은 신체 표면으로 국소적으로 투여되고, 따라서 국소적 투여에 적합한 형태로 제형화된다. 적합한 국소적 제형물들은 젤들, 연고들, 크림들, 로션들, 점적들 등을 포함한다. 국소적 투여를 위해, 본 발명의 화합물들은 추가적인 적절한 치료적 제제 또는 제제들과 조합되고, 약제학적 담체의 존재 또는 부재 시 생리학적으로 허용가능한 희석제에서 용액들, 현탁액들 또는 에멀전들로서 제조되고 적용된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 당해 기술분야에 잘 알려진 공정들에 의해, 예로 통상적인 혼합, 용해화, 과립화, 드라지화 (dragee-making), 분말화 (levigating), 에멀전화, 피막화, 포집화 또는 동결건조 공정들에 의해 제조된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명에 따라 사용하는 약제학적 조성물들은, 약제학적으로 사용될 수 있는 조제물들 내로 활성 성분들의 프로세싱을 용이하게 하는 부형제들 및 보조제들을 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체들을 사용하는 통상적인 방식으로 제형화된. 한 가지 구현예에서, 제형물은 선택된 투여 경로에 의존한다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 주사제들은 수용성 용액들에서 제형화된다. 한 가지 구현예에서, 본 발명의 주사제들은 행크 용액, 링거 용액, 또는 생리학적 염 완충액과 같은 생리학적으로 적합한 완충액들에서 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 경점막 투여를 위해 투과될 장벽에 적합한 침투제들 (penetrant)이 제형물에 사용된다. 이러한 침투제들은 일반적으로 당해 기술분야에서 알려져 있다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 조제물들은 예를 들면 볼루스 주사 또는 연속적 주입에 의한 비경구적 투여를 위해 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 주사를 위한 제형물들은 단위 용량 형태로, 예를 들면 앰풀로 또는 선택적으로 첨가된 보존제와 함께 다중투여 용기들로 포장된다. 또 다른 구현예에서, 조성물들은 오일성 운반체에 있는 현탁액들, 용액들 또는 에멀전들이고, 현탁화, 안정화 및/또는 분산화 제제들과 같은 제형화 제제들을 포함한다.
또 다른 구현예에서 조성물들은 또한 염화 벤즈알코니움 및 티머로잘 등과 같은 보존제들; 소듐 에데테이트 등과 같은 킬레이팅 제제; 포스페이트, 시트레이트 및 아세테이트와 같은 완충액들; 염화나트륨, 염화칼륨, 글리세린, 만니톨 등과 같은 강직성 제제들; 아스코브산, 아세틸시스틴, 소듐 메타비설포트 등과 같은 항산화제들; 방향제들; 셀룰로스 및 그의 유도체들을 포함하는 중합체들과 같은 점도 조절제들; 및 폴리비닐알코올 그리고 필요할 때 이들 수용성 조성물들의 pH를 조정하는 산 및 염기들을 포함한다.
한 가지 구현예들에서, 비경구적 투여를 위한 약제학적 조성물들은 물-용해성 형태로 활성을 가진 조제물의 수용성 용액들을 포함한다. 추가적으로, 활성 성분들의 현탁액들이 적절한 오일 또는 물을 기초로 하는 주사 현탁액들로서 제조될 수 있다. 적합한 지질친화성 용매들 또는 운반체들은 또 다른 구현예에서 참깨 오일과 같은 지방성 오일들, 또는 에틸 올레이트, 트리글리세레이트들 또는 리포좀들과 같은 합성 지방산 에스테르들을 포함한다. 수용성 주사 현탁액들은, 또 다른 구현예에서 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 소비톨 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 현탁액들은 또한 매우 농축된 용액들의 제조를 허용하도록 적합한 안정화제들 또는 활성 성분들의 용해도를 증가시키는 제제들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 활성을 가진 화합물은 소포체 (vesicle), 상세하게는 리포좀으로 전달될 수 있다 (Langer, Science 249: 1527-1533 (1990); Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez- Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327; J. E. Diederichs et al., Pharm./nd. 56 (1994) 267- 275 참조).
또 다른 구현예에서, 조절된 방출 시스템으로 전달된 약제학적 조성물은 정맥내 주입, 이식가능한 삼투 펌프, 경피적 패치, 리포좀들, 또는 기타 투여 방식들을 위해 제형화된다. 한 가지 구현예에서, 펌프가 사용된다 (Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88: 507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989) 참조). 또 다른 구현예에서, 중합체 물질들이 사용될 수 있다. 보다 또 다른 구현예에서, 조절된 방출 시스템은 치료적 표적, 예로 뇌와 근접하여 배치되고, 따라서 단지 전신적 투여량의 분획을 요구한다 (예를 들면, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984) 참조). 다른 조절된 방출 시스템들은 랭거의 리뷰에서 논의된다 (Langer, Science 249: 1527-1533 (1990).
또 다른 구현예에서, 활성 성분은 적합한 운반체로, 예를 들면 무균의 무-발열원 물을 기초로 하는 용액으로 재구성을 위해 사용 전에 분말 형태로 있다. 또 다른 구현예에서, 조성물들은 분무화 및 흡입 투여를 위해 제형화된다. 또 다른 구현예에서, 조성물들은 부착된 분무화 수단을 가지고 용기에 포함된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 조제물은 예로 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드들과 같은 통상적인 좌약 베이스들을 사용하여 좌약들 또는 정체 관장약들과 같은 직장 조성물들로 제형화된다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 맥락에서 사용에 적합한 약제학적 조성물들은 활성 성분들이 의도된 목적을 달성하는 유효량으로 포함되는 조성물들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 치료적 유효량은 질환의 증상들을 예방하거나, 완화시키거나, 개선하거나, 치료될 개체의 생존을 연장시키는 활성 성분들의 유효량을 의미한다.
한 가지 구현예에서, 치료적 유효량의 결정은 당업자들의 능력 범위에 속한다.
약제학적으로-허용가능한 담체들 또는 그의 구성성분들로서 작용할 수 있는 물질들의 일정 예들은 락토스, 포도당 및 슈크로스와 같은 당들; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분들; 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 및 메틸 셀룰로스와 같은 셀룰로스 및 그의 유도체들; 분말화된 트라칸스; 말트; 젤라틴; 탈크; 스테아르산 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제들; 칼슘 설페이트; 땅콩 오일, 면종자 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 디오브로민 오일과 같은 식물성 오일들; 프로필렌 글리콜, 글리세린, 소비톨, 만니톨, 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올들; 알긴산; 트윈TM 상표 에멀전화제들과 같은 에멀전화제들; 소듐 로릴 설페이트와 같은 습윤 제제들; 채색제들; 향미제들; 정제화 (tableting)제들; 안정화제들; 항산화제들; 보존제들; 무-발열원 물; 등장성 식염수; 및 포스페이트 완충액 용액들이다. 화합물과 결합하여 사용될 약제학적으로-허용가능한 담체의 선택은 기본적으로 투여될 화합물에 의해 결정된다. 한 가지 구현예에서, 주요 화합물이 주사될 경우라면, 약제학적으로 허용가능한 담체는 pH가 약 7.4로 조정되었던 혈액-적합한 현탁화 제제를 가진 무균의 생리학적 식염수이다.
또한, 조성물들은 결합제들 (예로, 아카시아, 옥수수 전분, 젤라틴, 카보머, 에틸 셀룰로스, 구아검, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸 셀룰로스, 포비돈), 붕해화 제제들 (예로, 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산, 이산화 실리콘, 소듐 크로스카멜로스, 크로스포비돈, 구아검, 소듐 전분 글리콜레이트), 다양한 pH 및 이온 강도의 완충액들 (예로, 트리스-HCl, 아세테이트, 포스페이트), 표면으로 흡수를 방지하는 알부민 또는 젤라틴과 같은 첨가제들, 계면활성제들 (예로, 트윈 20, 트윈 80, 플루로닉 F68, 담즙산 염들), 프로테아제 저해제들, 표면활성제들 (예로, 소듐 로릴 설페이트), 투과 증진제들, 용해화 제제들 (예로, 글리세롤, 폴리에틸렌 글리세롤), 항산화제들 (예로, 아스코브산, 소듐 금속비설파이트, 부틸화 하이드록시아니솔), 안정화제들 (예로, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스), 점성 증강제들 (예로, 카보머, 콜로이드성 이산화 실리콘, 에틸 설룰로스, 구아검), 감미제들 (예로, 아스파탐, 시트르산), 보존제들 (예로, 티머로살, 벤질 알코올, 파라벤들), 윤활제들 (예로, 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 로릴 설페이트), 유동-조력제들 (예로, 콜로이성 이산화 실리콘), 성형화제들 (예로, 디에틸 프탈레이트, 트리에틸 시트레이트), 에멀전화제들 (예로, 카보머, 하이드록시프로필 셀룰로스, 소듐 로릴 설페이트), 중합체 코팅제들 (예로, 폴록사머들 또는 폴록사민들), 코팅 및 필름 형성제들 (예로, 에틸 셀룰로스, 아크릴레이트들, 폴리메타아크릴레이트들) 및/또는 아쥬반트들을 더 포함한다.
시럽들, 엘리시르들, 에멀전들 및 현탁액들을 위한 담체들의 전형적인 구성성분들은 에탄올, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 액체 슈크로스, 소비톨 및 물을 포함한다. 현탁액의 경우, 전형적인 현탁화 제제들은 메틸 셀룰로스, 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 셀룰로스 (예로, AviceTM, RC-591), 트라칸스 및 소듐 알기네이트를 포함하고; 전형적인 습윤 제제들은 레시틴 및 폴리에틸렌 옥사이드 소비탄 (예로, 폴리솔베이트 80)을 포함한다. 전형적인 보존제들은 메틸 파라벤 및 소듐 벤조에이트를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 경구적 액체 조성물들은 또한 상기에 개시된 감미제들, 향미제들 및 채색제들과 같은 하나 이상의 구성성분들을 포함한다.
또한 조성물들은 폴리락트산, 폴리글리콜산, 하이드로젤 등과 같은 중합체 화합물들의 미립자 조제물들 내로 또는 위에, 또는 리포좀들, 마이크로에멀전들, 미셀들, 단일 층상 또는 다중 층상 소포들, 빈 적혈구들, 또는 스페로플라스트들 위에 활성 물질의 도입을 포함한다. 이러한 조성물들은 물리적 상태, 용해도, 안정성, 생체내 방출율, 및 생체내 제거율에 영향을 미친다.
또한 중합체들 (예로, 폴록사머들 또는 폴록사민들) 및 조직-특이적 수용체들, 리간드들 또는 항원들에게로 유도되는 항체들과 결합되거나 조직-특이적 수용체들의 리간드들과 결합된 화합물로 코팅된 미립자 조성물들이 본 발명에 의해 참작된다.
한 가지 구현예에서, 화합물들은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체들, 카복시메틸 셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈 또는 폴리프롤린과 같은 물-용해성 중합체들의 공유적 부착에 의해 변형된다. 또 다른 구현예에서, 변형된 화합물들은 해당하는 미변형된 화합물들보다 정맥내 주사 이후에 혈액에서 실질적으로 더 긴 반감기들을 나타낸다. 한 가지 구현예에서, 변형들은 또한 수용성 용액에서 화합물의 용해도를 증가시키고, 응집을 제거하고, 화합물의 물리적 및 화학적 안정성을 증진시키고, 화합물의 면역원성 및 반응성을 매우 감소시킨다. 또 다른 구현예에서, 바람직한 생체내 생물학적 활성은 미변형된 화합물로보다 덜 빈번하거나 더 낮은 투여량들로 이러한 중합체-화합물 외전물들의 투여에 의해 달성된다.
조제물의 유효량 또는 투여량은 처음에 시험관내 검정법들로부터 추정될 수 있다. 한 가지 구현예에서, 투여량은 동물 모델들에서 제형화될 수 있고, 이러한 정보는 인간들에서 유용한 투여량들을 더욱 정확하게 결정하는 데 사용될 수 있다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 활성 성분들의 독성 및 치료적 효능은 세포 배양들 또는 실험적 동물들에서 시험관내 표준 약제학적 절차들에 의해 결정될 수 있다. 한 가지 구현예에서, 이들 시험관내 및 세포 배양 검정법들로부터 획득된 데이타 및 동물 연구들은 인간에서 사용을 위한 용량 범위를 제형화하는 데 사용될 수 있다. 한 가지 구현예에서, 용량들은 채용되는 용량 형태 및 사용된 투여 경로에 의존하여 변화한다. 한 가지 구현예에서, 정확한 제형물, 투여 경로 및 용량은 환자의 병태의 견지에서 개별 의사에 의해 선택될 수 있다 (예로, Fingl, et al., (1975) "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1 참조).
한 가지 구현예에서, 치료될 병태의 중증도 및 반응성에 의존하여, 투여 (dosing)는 수일부터 수주까지 지속하는 치료의 과정으로, 또는 치료가 완료되거나 질환 상태의 감소가 달성될 때까지 단일한 또는 다수의 투여들로 이루어질 수 있다.
한 가지 구현예에서, 투여될 조성물의 양은 당연히 치료될 개체, 침범의 중증도, 투여의 방식, 처방하는 의사의 판단 등에 의존할 것이다.
한 가지 구현예에서, 적합한 약제학적 담체에서 제형화된 본 발명의 조제물을 포함하는 조성물들은 또한 제조되고, 적절한 용기에 포장되고, 지시된 병태의 치료에 대해 라벨을 가진다.
또 다른 구현예에서, 본 발명에서 기술된 바와 같은 폴리펩타이드 또는 그의 단편 또는 그의 변이체 (CTP-변형됨) 형태는 비이온성 표면 활성 제제들 (예로, 표면활성제들), 다양한 당들, 유기 폴리올들 및/또는 인간 혈청 알부민과 같은 복잡한 유기 부형제들 및 안정화제들과 조합으로 동결건조된 (예로, 냉동-건조된) 조제물이다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 무균의 물로 제조된, 본 명세서에서 제공된 동결건조된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 무균 PBS로 제조된 본 명세서에서 제공된 동결건조된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 무균의 0.9% NaClS로 제조된 본 명세서에서 제공된 동결건조된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편 그리고 인간 혈청 알부민, 폴리올들, 당들, 및 음이온성 표면 활성 안정화 제제들과 같은 복잡한 담체들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 CTP-폴리펩타이드 또는 그의 단편 그리고 락토바이온산 및 아세테이트/글리신 완충액을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-폴리펩타이드 또는 그의 단편 그리고 물에서 인터페론 조성물들의 용해도를 증가시키는 아르기닌 또는 글루타메이트와 같은 아미노산들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 동결건조된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들 그리고 글리신 또는 인간 혈청 알부민 (HSA), 완충액 (예로, 아세테이트) 및 등장성 제제 (예로, NaCl)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 동결건조된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들 그리고 포스페이트 완충액, 글리신 및 HSA를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 4 및 7.2 사이의 범위를 가지는 완충화된 용액들에 비치될 때 안정화된다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 4 및 8.5 사이의 범위를 가지는 완충화된 용액들에 존재한다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 6 및 7 사이의 범위를 가지는 완충화된 용액들에 존재한다. 또 다른 구현예에서, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 pH 약 6.5를 가지는 완충화된 용액들에 존재한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 안정화 제제로서 아미노산으로 안정화되고, 일정 경우들에서 염으로 (아미노산이 하전된 측쇄를 포함하지 않는 경우라면)이다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 아미노산이 되는 안정화제를 무게로 약 0.3% 및 5% 사이 범위로 포함하는 액체 조성물이다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 투여 정확성 및 산물 안전성을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 주사가능한 적용들에서 사용을 위한 생물학적으로 활성을 가진, 안전한 액체 제형물을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에서 기술된 바와 같은 비-동결건조된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 투여 전에 보관 및 운송을 용이하게 하는 액체 상태로 장기간 동안 보관을 허용하는 액체 제형물을 제공한다.
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 약제학적 조성물은 기질 물질로서 고체 지질들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같이 CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편들을 포함하는 주사가능한 약제학적 조성물은 기질 물질로서 고체 지질들을 제공한다. 또 다른 구현예에서, 분사 응고화 (spray congealing)에 의한 지질 미세입자들의 생산은 스파이저 (Speiser and al., Pharm. Res. 8 (1991) 47-54)에 의해 기술되었고, 경구 투여를 위한 지질 나노펠렛들으로 진행되었다 (Speiser 유럽 특허 제 EP 0167825호 (1990)). 또 다른 구현예에서, 사용된 지질들은 신체에 의해 잘 내성화된다 (예로, 비경구적 영양 공급을 위한 에멀전들에 존재하는 지방산들로 구성된 글리세라이드들).
또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 중합체 미세입자들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 나노입자들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 리포좀들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 지질 에멀전을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 미세구들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 지질 나노입자들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 양친화성 지질들을 포함하는 지질 나노입자들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 기술된 바와 같은, CTP-변형된 폴리펩타이드 또는 그의 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 약물, 지질 기질 및 표면활성제를 포함하는 지질 나노입자들을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 지질 기질은 적어도 50% w/w기 되는 모노글리세라이드 함량을 가진다.
한 가지 구현예에서, 본 발명의 조성물은 활성 성분을 포함하는 하나 이상의 단위 용량 형태들을 포함하는, FDA 승인된 키트와 같은 팩 또는 디스펜서 기기로 주어진다. 한 가지 구현예에서, 팩은 예를 들면 금속 또는 발포 팩과 같은 플라스틱 호일을 포함한다. 한 가지 구현예에서, 팩 또는 디스펜서 기기는 투여를 위한 지침서들이 동봉된다. 한 가지 구현예에서, 팩 또는 디스펜서는 약제들의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부기관에 의해 규정된 형태로의 용기와 연관된 통지가 동봉되고, 통지는 조성물들의 형태 또는 인간 또는 동물 투여의 정부기관에 의한 승인을 반영한다. 한 가지 구현예에서, 이러한 통지는 처방 약물들 또는 승인된 산물 삽입물에 대한 미국 식품의약품 기관에 의해 승인된 라벨이다.
한 가지 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리펩타이드들 또는 그들의 단편들은 각각의 제제 자체로의 치료와 대비하여 증가된 치료적 효과를 달성하도록 추가적인 활성 제제들과 함께 개인에게 제공될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 측정들 (예로, 상보적인 제제의 투여 및 선택)이 조합 치료법들과 연관된 부작용들을 피하기 위해 시도된다.
한 가지 구현예에서, 용어 "약"은 정량적 용어들에서 플러스 또는 마이너스 5%, 또는 또 다른 구현예에서 플러스 또는 마이너스 10%, 또는 또 다른 구현예에서 플러스 또는 마이너스 15%, 또는 또 다른 구현예에서 플러스 또는 마이너스 20%를 의미한다.
한 가지 구현예에서, 용어 "개체"는 병태 또는 그의 후유증을 위한 또는 이에 취약한 치료법을 필요로 하는 인간을 포함하는 포유동물을 말한다. 개체는 개들, 고양이들, 돼지들, 소들, 양들, 염소들, 말들, 래트들, 및 쥐들 그리고 인간들을 포함할 수 있다. 용어 "개체"는 모든 측면들에서 정상적인 개인을 배제하지 않는다.
다음의 도면들은 본 명세서의 일부를 구성하고 본 발명의 소정의 관점들을 더 기술하도록 포함되며, 본 발명들은 본 명세서에서 제시된 특정한 구현예들의 상세한 설명과 조합으로 이들 도면들의 하나 이상을 참조하여 더욱 잘 이해될 수 있다.
도 1은 6가지의 서로 다른 정제된 CTP-변형된 단백질들 및 그들의 해당하는 미가공 단백질들의 SDS-PAGE 분석을 나타낸 것이다. 1. CTP-hGH-CTP-CTP (MOD-4023), 2. 바이오트로핀 (rhGH), 3. 크기 마커, 4. CTP-EPO-CTP-CTP, 5. CTP-CTP-EPO, 6. CTP-CTP-EPO-CTP-CTP, 7. EPREX® (rEPO), 8. 크기 마커, 9. APO-A1, 10. 크기 마커, 11. Apo-CTP, 12. Apo-CTP-CTP, 13. 크기 마커.
도 2는 5가지의 서로 다른 정제된 CTP-변형된 단백질들 및 그들의 해당하는 미가공 단백질들의 SDS-PAGE 분석을 나타낸 것이다. 1. FⅨ-CTP-CTP-CTP, 2. 크기 마커, 3. FⅨ-CTP-CTP-CTP-CTP, 4. FⅨ-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP, 5. 모노닌® (rFⅨ), 6. 크기 마커, 7. FⅦa-CTP-CTP-CTP, 8. FⅦa-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP, 9. 크기 마커.
도 3은 MALDI-TOF에 의해 측정된 바, 비-글리코실화 (A) 및 글리코실화 CTP-변형된 단백질들 둘 다의 CTP 사본 1개의 분자량 (kDa)의 증가분을 나타낸 것이다.
도 4는 SEC-HPLC에 의해 측정된 바, 글리코실화 CTP-변형된 단백질들의 유체역학적 크기의 증가분을 그들의 해당하는 미가공 단백질들과 비교하여 나타낸 것이다. (A)는 유체역학적 크기의 전체 증가분을 보여주는 한편, (B)는 글리코실화 CTP의 사본 1개 당 계산된 증가분을 보여준다.
도 5는 SEC-HPLC 컬럼에 의해 측정된 바, 비-글리코실화 CTP-변형된 단백질들의 유체역학적 크기의 증가분을 그들의 해당하는 미가공 단백질들과 비교하여 나타낸 것이다. (A)는 유체역학적 크기의 전체 증가분을 보여주는 한편, (B)는 비-글리코실화 CTP의 사본 1개 당 계산된 증가분을 보여준다.
본 발명의 추가적인 목적들, 장점들, 및 새로운 특징들은 다음의 실시예들의 검토 시 당업자에게 자명해질 것이고, 이는 제한하도록 의도되지 않는다. 상기 본 명세서에서 기술된 바와 같이 그리고 하기 청구항 섹션에서 청구된 바와 같이 본 발명의 다양한 구현예들 및 관점들은 각각 다음의 실시예들에서 실험적인 지지를 확인시켜 주고 있다.
실시예들
재료들 및 방법들:
CTP-변형된 단백질들의 생산
인간 성장호르몬 (hGH), 에리트로포이에틴 (EPO), APO-A1, 인자 Ⅸ 및 인자 Ⅶ의 DNA 코딩 부위는 CTP 펩타이드의 DNA 서열과 라이게이션되었다. CTP 펩타이드는 표 2에 상술된 바와 같이, 단일한 사본으로 또는 일렬로 N-말단 및/또는 C-말단과 융합되었다. 조작된 플라스미드들은 단백질들의 유체역학적 부피를 증가시키는 데 중요한 역할을 담당하는 O-글리칸들의 적절한 구조화를 가능하게 하는 CHO 세포주에서 형질전환되고 발현되었다 (표 5 참조). 서로 다른 단백질들이 하기에 상술된 바와 같이 각각의 단백질에 대하여 독특하게 개발된 맞춤 공정들에 따라 정제되었다.
CTP -EPO- CTP - CTP : 정화된 수확물들이 블루 세파로스 컬럼 상에 로딩되었다. 용출된 산물은 희석되어 Q 세파로스 컬럼 상에 로딩되었다. Q 세파로스 컬럼으로부터 얻은 용출된 분획은 아미콘 원심분리 장치 (30 kDa 컷-오프)를 사용하는 초원심분리법에 의해 프로세싱되고 투석되었다. 농축되고 투석된 분획은 페닐 세파로스 컬럼 상에 로딩되었다. 페닐 세파로스로부터 얻은 용출된 분획은 아미콘 원심분리 장치 (30 kDa 컷-오프)로 초원심분리법에 의해 프로세싱되어 PBS pH 7에 대하여 투석되었다.
CTP - CTP -EPO 및 CTP - CTP -EPO- CTP - CTP : 정화된 수확물은 DEAE 세파로스 컬럼 상에 로딩되고 용출되었다. 용출된 분획은 암모니움 설페이트로 조정되고 페닐 세파로스 HS 컬럼 상에 로딩되었다. 용출 페닐은 농축되고 투석되었다. 다음 순서의 2가지 컬럼들은 유동-통과 방식이다: 하이드록시아파타이트 유형 I 40 μ 및 SP 세파로스. 최종 산물은 농축되고, 투석되었으며 -20℃에 보관되었다.
APO - CTP 및 APO - CTP - CTP : APO 단백질들의 이들 2가지 버전들은 친화 컬럼 (Capture Select Apo, Bac)으로 정제되었다. 정화된 수확물은 PBS로 1 : 1로 희석되고 컬럼으로부터 용출되었다. 용출물은 농축되고 PBS에 대하여 투석되었으며 -80℃에 보관되었다.
CTP - hGH - CTP - CTP : 정화된 수확물은 UFDF1를 사용하여 여과되었다. 바이러스 불활성화가 수행되었다. 첫 번째 크로마토그래피는 음이온 교환 크로마토그래피, DEAE 세파로스 FF. 두 번째 크로마토그래피의 레진은 페닐 세파로스이다. 두 번째 크로마토그래피의 용출물 풀은 투석 여과되고 UFDF-2에서 농축되었다. UFDF-2 단계는 유동-통과 방식으로 2가지 추가 크로마토그래피들, 세라믹 하이드록시아파타이트 유형 I 40 μM 및 SP 세파로스 FF에 의해 진행되었다. 나노여과법이 수행되었다. 산물 용액은 41 ± 1 mg/mL로 농축되고 투석되었다.
FIX- CTP - CTP - CTP : 트리스-HCl, pH 9가 정화된 수확물로 첨가되었다. 첫 번째 크로마토그래피 컬럼은 음이온 교환 Q 컬럼을 사용하여 수행되었다. 다음 순서의 컬럼은 헤파린 하이퍼 D이었다. 용출된 분획은 최종 pH 6.8을 가진 10 mM 소듐 포스페이트로의 최종 농도로 조정되었다. 마지막 크로마토그래피 단계는 CHT 레진 상에서 수행되었다. 용출된 분획은 농축되었고 TBS pH 7.5에 대하여 투석되었다.
FIX- CTP - CTP - CTP - CTP : 정화된 수확물은 농축되었고 투석되었다. 유일한 크로마토그래피 단계는 친화 크로마토그래피, 고정된 자칼린 (Jacalin)이다. 용출된 산물은 농축되었고 TBS pH 7.5에 대하여 투석되었다.
FIX- CTP - CTP - CTP - CTP - CTP : 정화된 수확물은 농축되었고 투석되었다. 유일한 크로마토그래피 단계는 친화 크로마토그래피, 고정된 자칼린 (Jacalin)이다. 용출된 산물은 농축되었고 TBS pH 7.5에 대하여 투석되었다.
APOA1 - CTP - CTP : 정화된 수확물은 농축되었고 투석되었다. 첫 번째 크로마토그래피는 음이온 교환 크로마토그래피, DEAE 세파로스 FF 컬럼을 사용하여 수행되었다. 두 번째 크로마토그래피 단계는 고정된 자칼린 레진 상에서 수행되었다. 용출물은 투석 여과되었고 UFDF-2로 TBS pH 7.4에 대하여 농축되었다.
APOA1 - CTP : 첫 번째 크로마토그래피는 친화 크로마토그래피, Capture-Select APO-AI 컬럼을 사용하여 수행되었다. 두 번째 크로마토그래피 단계는 고정된 자칼린 레진 상에서 수행되었다. 용출물은 투석 여과되었고 UFDF-2로 TBS pH 7.4에 대하여 농축되었다.
APOA1 : 희석된 수확물은 친화 크로마토그래피, Capture-Select APO-AI 상에 로딩되었다. 용출물은 투석 여과되었고 UFDF-2로 TBS pH 7.4에 대하여 농축되었다.
FVIIa - CTP - CTP - CTP : 정화된 수확물은 농축되고 여과되었다. 바이러스 불활성화가 수행되었다. 첫 번째 크로마토그래피는 친화 컬럼, Ⅶ Select를 사용하여 수행되었다. 용출된 분획은 다음 순서의 컬럼 - 세라믹 하이드록시아파타이트 (CHT) 상에 로딩 이전에 희석되었다. CHT 용출물은 페닐 세파로스 컬럼 상에 로딩되었다. 용출물은 투과 여과되었고 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼 상에서 활성화되었다. 컬럼은 다음으로 세척되었고 산물은 용출되었다. 나노여과가 수행되었다.
FVIIa - CTP - CTP - CTP - CTP - CTP : 정화된 수확물은 농축되고 여과되었다. 첫 번째 크로마토그래피는 친화 컬럼, Ⅶ Select를 사용하여 수행되었다. 용출된 분획은 다음 순서의 컬럼 - 세라믹 하이드록시아파타이트 (CHT) 상에 로딩되었다. 컬럼은 세척되었고 산물은 용출되었다. CHT 용출물은 페닐 세파로스 컬럼 상에 로딩되었다. 용출물은 투과 여과되고 농축되었다. 인자 Ⅶ는 음이온 교환 크로마토그래피 상에서 활성화되었다. 컬럼은 다음으로 세척되었고 산물은 용출되었다. 하기 표 2는 CTP-변형된 단백질의 모식적 설명을 나타낸다.
[표 2]
Figure 112021001830313-pat00015
CTP-변형된 단백질들의 탈글리코실화
CTP-변형된 단백질들의 탈글리코실화는 Glyko 시알리다제 A (카탈로그 번호 PZ PZGK80040, 프로자임사 (Prozyme)), O-글리카나제 (카탈로그 번호 PZ PZGK80090, 프로자임사) 및 N-글리카나제 (카탈로그 번호 PZGKE-5006A, 프로자임사)를 사용하여 수행되었다. 단백질은 시알리다제 A로 2시간 동안 (37℃에서) 소화되었고, 이후에 O-글리카나제로 또한 필요한 경우라면 N-글리카나제로 밤샘 동안 소화되었다.
MALDI-TOF에 의한 분자량 결정
CTP-변형된 단백질의 분자량 (Mw)은 REFLEX-Ⅳ 모델 (독일 브레먼, 브룩커 달토닉스사 (Bruker Daltonics))을 사용하는 MALDI-TOF 기술학에 의해 측정되었다. 매트릭스-지원된 레이저 탈착/이온화 - 비행 시간 질량 분광분석법 (MALDI-TOF MS)은 UV-광 흡수 매트릭스 및 단백질들 또는 펩타이드와 같은 생체분자의 공동-침전물은 레이저 펄스에 의해 조사된다. 이온화된 생체분자들은 전기장에서 가속되고 비행관으로 들어간다. 이 관에서 비행하는 동안, 서로 다른 분자들이 전하율에 대한 그들의 질량에 따라 분리되고 서로 다른 시간대에 검출기에 도달한다. 이러한 방식으로 각각의 분자는 분자량으로 전환될 수 있는 구별되는 신호를 수득한다. 본 방법은 400 및 350,000 Da 사이 범위의 분자적 질량들을 가진 서로 다른 단백질들 및 펩타이드의 특성화에 사용된다. 이것은 0.1 내지 0.01%의 정확도로 낮은 (10 - 15 내지 10 - 18몰) 정량들의 시료의 검출을 허용하는 매우 민감한 방법이다. 측정들은 분석적 리서치 서비스 유닛 (이스라엘 비어-쉐바, 벤-구리온 대학교 (Ben-Gurion University))에서 수행되었다
SEC 컬럼을 사용한 HPLC에 의한 유체역학적 크기의 분석
단백질들의 유체역학적 크기는 hGH, Epo 및 Apo 미가공 및 관련된 CTP-변형된 단백질들의 경우 TSKgel G2000SW SEC 컬럼 (카탈로그 번호 08540, 토소하스사 (TosoHaas)) 또는 인자 Ⅸ 및 인자 Ⅶ 미가공 및 관련된 CTP-변형된 단백질들의 경우 TSKgel G3000WXL SEC 컬럼 (카탈로그 번호 08541, 토소하스사)을 사용하는 HPLC (Dionex UltiMate 3000)TosoHaas)에 의해 측정되었다. H Mw 산정 키트 (카탈로그 번호 151-1901, 바이오래드사)가 단백질 크기를 측정하는 데 사용되었다. 결과들은 로 대수 맞춤으로 맞추어졌고 (y = a*In X + b) 서로 다른 단백질들의 유체역학적 크기들이 계산되었다.
결과들
실시예 1: 서로 다른 CTP-변형된 단백질들의 생산
11개의 서로 다른 CTP-변형된 단백질들이 CHO 세포주에 형질전환되고 발현되었다. 다양한 수확물들이 상기에 기술된 방법들에 따라 정제되었다. 정제된 단백질들은 도 1 및 도 2에 나타낸다.
실시예 2: MALDI-TOF 방법에 의한 분자량의 분석
서로 다른 글리코실화 및 비-글리코실화 CTP-변형된 단백질들의 분자량은 MALDI-TOF 기술학을 사용하여 결정되었고 그들의 해당하는 미가공 단백질들 (CTP와 융합되지 않은 그대로의 단백질들, hGH의 경우 바이오트로핀 (Biotropin), Epo의 경우 EPREX®, ApoAI, 인자 Ⅸ의 경우 Mononine®, 및 인자 Ⅶa의 경우 Novoseven®)과 비교되었다. 모든 미가공 및 비-글리코실화 단백질들에 대한 측정된 Mw은 단백질들의 아미노산 서열들을 기초로 한 이론적인 Mw과 잘 일치하였다. 비-글리코실화 및 글리코실화 CTP의 1개 사본 당 분자량들의 증가분들이 계산되었고 도 3a 및 3b에 각각 나타낸다. CTP의 1개 사본의 분자량에 대한 기여는 다음과 같이 계산되었다: 먼저 분자량의 증가분은 미가공 단백질들의 측정된 또는, hGH의 경우에 이론적인 분자량을 해당하는 CTP-변형된 단백질들의 측정된 분자량으로부터 차감하여 계산되었다. 다음으로, 계산된 증가분은 각각의 단백질의 경우에 CTP 사본들의 수로 나누어졌다. 예를 들면, MOD-4023 (N-말단에서 1개 CTP 사본 및 C-말단에서 일렬로 2개 CTP 사본들과 융합된 hGH)는 38,128의 분자량을 가지는 한편, 미가공 hGH는 22,000의 이론적인 분자량을 가진다. 이들 두 가지 단백질들의 차이는 각각의 글리코실화 CTP의 기여가 5.4 kDa인 점 (16.13을 3개 CTP 사본들로 나눔)을 의미하는 16.13 kDa이다. 모든 측정된 단백질들에서 비-글리코실화 CTP의 사본 1개의 평균 기여는 2.76 kDa ± 0.103이다 (도 3a, 표 3). 이러한 결과는 2.78 kDa인 단일한 CTP의 이론적인 Mw과 함께 정렬된다. 글리코실화 CTP는 다양한 측정된 단백질 간의 유의한 차이들이 없이도 평균 4.76kDa ± 0.422를 Mw에 기여한다 (도 3b, 표 3).
표 3은 비-글리코실화 및 글리코실화 CTP-변형된 단백질들 및 그들의 해당하는 미가공 단백질들의 MALDI-TOF 결과들을 나타낸다. ND - 미결정
Figure 112021001830313-pat00016
실시예 3: HPLC 방법에 의한 유체역학적 크기의 분석
유체역학적 부피는 크기 배제 컬럼을 통과할 때 단백질들의 정체 시간에 영향을 미치는 주요 매개변수이다. 따라서, 단백질 크기들은 HMw 젤 여과 산정 키트 (카탈로그 번호 151-1901, 바이오래드사)를 사용하는 SEC 컬럼에 의해 계산되었다. 표준 단백질들의 정체 시간은 SEC TSK 2000 및 TSK 3000 컬럼들에서 측정되었고 각각의 컬럼을 위한 % 상대오차 (%RE)가 분석적 방법들의 정확성을 결정하기 위하여 계산되었다. 산정 단백질들의 관찰된 Mw의 %RE가 계산되었고 산정 단백질들의 기지의 및 예상된 Mw과 비교되었다. 산정 곡선을 위한 계산된 Mw 및 %RE의 결과들은 TSK 2000 SEC 컬럼의 경우 표 4a에 그리고 TSK 3000 SEC 컬럼의 경우 표 4b에 나타낸다. 결과들은 %RE가 20% (≤20%) 미만 또는 이와 동등한 점을 보여주고, 단백질의 넓은 범위의 결정된 분자량에 대한 높은 정확성을 가리킨다.
표 4a는 TSK 2000을 사용한 H Mw 산정 곡선 결과들 및 계산된 %RE를 나타낸다. 산정 곡선 단백질들의 예상된 분자량은 사용된 시판 키트 (H Mw 산정 키트, 바이오래드사 카탈로그 번호 151-1901)에 의해 제공되었다.
표 4b는 TSK 3000 컬럼을 사용한 H Mw 산정 곡선 결과들 및 계산된 %RE를 나타낸다. 산정 곡선 단백질들의 예상된 분자량은 사용된 시판 키트 (H Mw 산정 키트, 바이오래드사 카탈로그 번호 151-1901)에 의해 제공되었다.
Figure 112021001830313-pat00017
Figure 112021001830313-pat00018
CTP-변형된 단백질들의 유체역학적 부피에 대한 글리코실화 CTP의 기여를 결정하기 위하여, 다양한 CTP-변형된 단백질들이 SEC 컬럼에 의해 분석되었고, 그들의 유체역학적 크기들이 계산되었다. 해당하는 재조합 단백질들: 바이오트로핀 rhGH), EPREX® (rEPO), ApoAI, Mononine® (rFⅨ) and Novoseven® (rFⅦa)가 그들의 CTP-변형된 해당하는 단백질들과 비교하여 단백질에 대한 글리코실화 CTP의 기여를 계산하기 위하여 분석되었다 (표 5, 도 4). 도 4a는 SEC 컬럼에 의해 측정된 바와 같이 미가공 단백질에 대한 CTP-변형된 단백질들의 유체역학적 크기의 전체 증가분을 나타낸다.
표 5는 CTP-변형된 단백질들 및 그들의 해당하는 미가공 단백질의 1개 CTP 사본의 SEC-HPLC 결과들 및 계산된 증가를 나타낸다.
Figure 112021001830313-pat00019
글리코실화 CTP의 1개 사본의 분자량에서 증가분은 미가공 단백질들의 측정된 유체역학적 크기를 그들의 해당하는 CTP-변형된 단백질들의 측정된 유체역학적 크기로부터 차감하여 계산되었다. 다음으로, 계산된 증가분은 각각의 단백질의 경우에 CTP 사본들의 수로 나누어졌다. 다양한 단백질들의 분자량에 대한 글리코실화 CTP들의 1개 사본의 계산된 기여는 표 4b에 나타낸다. 다양한 단백질은 글리코실화 CTP의 1개 사본 당 29 kDa 내지 53 kDa 사이 범위를 가지는 증가분들을 보여준다.
흥미롭게도 그리고 예기치 못하게도, FⅨ 및 FⅦa의 글리코실화 CTP들의 1개 사본의 기여는 다른 측정된 단백질들과 비교하여 43 내지 53 kDa (CTP 1개 사본 당)의 기여로 현저하게 더 높았다 (표 5). 글리코실화 CTP의 1개 사본 당 유체역학적 크기의 증가분은 MALDI-TOF에 의해 측정된 바와 같이 분자량에 대한 글리코실화 CTP의 1개 사본 당 4.76 kDa의 계산된 기여보다 훨씬 더 높다. 방법들 간의 계산된 Mw에서 차이들은 MALDI-TOF가 단백질의 실제 Mw를 측정하고 있는 반면, SEC-HPLC 측정은 단백질의 유체역학적 부피에 의해 영향을 받는 점으로부터 초래되고, 글리코실화 CTP가 이와 부착된 단백질들의 유체역학적 부피를 실질적으로 증가시키는 점을 제시한다. 유체역학적 부피의 크기는 MALDI-TOF에 의해 측정된 CTP 당 계산된 기여와 비교하여 약 6 내지 11배 더 높다. 분명하게, 변형될 단백질의 유체역학적 크기에 대한 CTP의 기여는 hGH 및 CTP-변형된 EPO 변이체들의 경우 더 낮지만 (대략 30kDa), FⅨ 및 FⅦ-CTP 변형된 변이체들의 경우 약간 더 높고, 놀랍게도 특정한 단백질에 첨가된 CTP들의 수에 의해 영향을 받지 않는다.
또한, 단백질의 Mw에 대한 비-글리코실화 CTP의 기여는 SEC-HPLC에 의해 결정되었다 (표 6, 도 5a 및 5b). 탈-글리코실화는 단백질들을 시알리다제 A (시알산을 제거함)를 37℃에서 2시간 동안 반응시키고 이후에 O-글리카나제 (O-글리칸들을 제거함)를 첨가하여 수행되었다. N-글리칸들을 포함하는 EPREX® (rEPO), Mononine® (rFⅨ), NovoSeven® (rFⅦ) 및 그들의 해당하는 CTP-변형된 단백질들의 경우, N-글리카나제가 밤샘 소화로 N-글리칸들을 제거하도록 첨가되었다. 다양한 단백질의 유체역학적 크기 또는 부피에 대한 비-글리코실화 CTP의 기여가 계산되었고 그의 해당하는 미가공 단백질과 비교되었으며, 예로 유체역학적 부피에 대한 비-글리코실화 CTP-변형된 폴리펩타이드들의 기여가 비-글리코실화 CTP-변형된 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 비-글리코실화 해당하는 미가공 단백질의 부피와 비교하여 계산되었다. 예를 들면, EPO의 경우 N- 및 O-글리칸들이 Eprex®으로부터 제거되었고, CTP-변형된 Epo 변이체들의 유체역학적 부피에서 증가가 계산되었고 그들의 분자량과 비교되었다.
도 5a는 미가공 단백질들의 유체역학적 부피에서 증가분을 나타내는 반면, 도 5b는 비-글리코실화 CTP-변형된 단백질들의 1개 사본의 기여를 나타낸다. 현저하게, 비-글리코실화 CTP는 CTP-변형된 단백질들의 유체역학적 크기를 해당하는 미가공 단백질들과 비교할 때 증가시킨다. 비-글리코실화 CTP의 1개 사본의 기여는 다양한 단백질들 간에 서로 다르고, 비-글리코실화 CTP의 1개 사본 당 8 kDa 내지 21 kDa 사이 범위를 가진다 (표 6). 28개 아미노산들로 구성되는 CTP의 이론적인 분자량은 2.78 kDa이고 측정된 분자량 (MALDI-TOF에 의함)도 역시 약 2.76 kDa인 점을 고려하여, 이들 결과들은 분자량에 대한 비-글리코실화 CTP의 기여가 예상된 것보다 더 높은 점을 제시한다. 또한, 글리코실화 CTP의 경우 유사하게 관찰된 바와 같이, 유체역학적 부피도 역시 비-글리코실화 CTP의 경우 예상된 것보다 훨씬 더 높은 점이 관찰되었다. 전반적으로, 단백질과 CTP를 부착하는 것은 CTP 골격 및 CTP 글리칸들 둘 다가 기여할 수 있는 유체역학적 부피의 증가를 가져온다.
또한 특정한 단백질에 첨가된 CTP들의 수는 그의 유체역학적 크기에 대한 기여에 영향을 미치지 않았던 점이 관찰되었다. 비-글리코실화 CTP의 가장 유의한 증가분은 단백질의 C-말단에서 CTP의 사본들이 가지는 Apo, FⅨ 및 FⅦa의 경우에 관찰되었다. C-말단에 CTP를 첨가하는 것이 유체역학적 부피에 대해 더 높은 기여를 유도한다는 이러한 연구 예기치 못하였다. 흥미롭게도 그리고 예기치 못하게도, Apo, FⅨ 및 FⅦa CTP-변형된 단백질들의 비-글리코실화 CTP의 1개 사본의 기여는 매우 유사하였고 ~ 20 kDa으로 측정되었지만 (표 6), 응고인자들의 글리코실화 CTP의 기여는 Apo 글리코실화 CTP와 비교하여 유의하게 더 높았다 (표 5).
표 6은 CTP-변형된 단백질들 및 그들의 해당하는 미가공 단백질의 1개 CTP 사본의 SEC-HPLC 결과들 및 계산된 증가를 나타낸다.
Figure 112021001830313-pat00020
본 연구는 글리코실화 CTP의 1개 사본이 유체역학적 부피에 대하여 적어도 28 (kDa)을 기여하는 한편 Mw의 증가분은 SEC-HPLC 및 MALDI-TOF를 사용하여 결정된 바와 같이 각각 4.76 (kDa) 및 0.422이다. CTP-변형된 단백질들의 유체역학적 부피에서 예기치 못한 크기는 CTP-변형된 단백질들의 관찰된 연장된 혈청 반감기 및 생물학적 활성의 증진에 대한 이유일 수 있다. 비-글리코실화 CTP는 유체역학적 부피에 대해 적어도 8 (kDa)를 기여하는 한편, 분자량 증가분은 2.76 (kDa) 0.103이었다. 흥미롭게도, 비-글리코실화 및 글리코실화 CTP 펩타이드의 Mw는 MALDI-TOF에 의해 측정된 바와 같이 모든 단백질들 간에 유사하였다. 또한 글리코실화 및 비-글리코실화 CTP 펩타이드-변형된 단백질들의 유체역학적 부피는 SEC-HPLC에 의해 측정된 바와 같이 모든 단백질들 간에 서로 달랐다. 이들 연구들은 서로 다른 자리에서 서로 다른 단백질들과 융합될 때 CTP 펩타이드의 Mw가 유사하더라도, SEC 컬럼 측정들에 의해 입증된 바와 같이 이와 부착된 서로 다른 단백질들의 유체역학적 부피의 예기치 못한 증가를 초래하는 점을 제시한다.
첨부된 도면들을 참조하여 본 발명의 바람직한 구현예들이 기술되었더라도, 본 발명은 명확한 구현예들에 제한되지 않으며, 다양한 변화들 및 변형들이 첨부된 청구항들에서 정의된 바와 같은 본 발명의 범주 및 정신을 벗어나지 않고도 당업자들에 의해 수행될 수 있는 것으로 이해될 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> Prolor Biotech Inc. <120> METHOD OF INCREASING THE HYDRODYNIAMIC VOLUME OF POLYPEPTIDES BY ATTACHING TO GONADOTROPHIN CARBOXY TERMINAL PEPTIDES <130> P-76221-PC <140> PCT/IL2013/050960 <141> 2013-11-20 <150> 61/728,662 <151> 2012-11-20 <160> 73 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP sequence <400> 1 Asp Pro Arg Phe Gln Asp Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 15 Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu 20 25 30 <210> 2 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP sequence <400> 2 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg 1 5 10 15 Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 20 25 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Truncated CTP sequence <400> 3 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro 1 5 10 <210> 4 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hGH signal peptide <400> 4 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala 20 25 <210> 5 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu 20 25 30 Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln 35 40 45 Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys 50 55 60 Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe 65 70 75 80 Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys 85 90 95 Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp 100 105 110 Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val 115 120 125 Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu 130 135 140 Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg 145 150 155 160 Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser 165 170 175 His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe 180 185 190 Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys 195 200 205 Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe 210 215 <210> 6 <211> 192 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hGH sequence <400> 6 Met Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu 1 5 10 15 Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe 20 25 30 Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn 35 40 45 Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn 50 55 60 Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser 65 70 75 80 Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser 85 90 95 Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr 100 105 110 Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg 115 120 125 Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr 130 135 140 Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn 145 150 155 160 Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr 165 170 175 Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe 180 185 190 <210> 7 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hGH sequence <400> 7 Met Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu 1 5 10 15 Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala 20 25 <210> 8 <211> 217 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu 20 25 30 Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln 35 40 45 Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys 50 55 60 Val Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe 65 70 75 80 Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys 85 90 95 Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp 100 105 110 Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val 115 120 125 Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu 130 135 140 Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg 145 150 155 160 Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser 165 170 175 His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe 180 185 190 Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys 195 200 205 Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe 210 215 <210> 9 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hGH-CTP <400> 9 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu 20 25 30 Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln 35 40 45 Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys 50 55 60 Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe 65 70 75 80 Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys 85 90 95 Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp 100 105 110 Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val 115 120 125 Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu 130 135 140 Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg 145 150 155 160 Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser 165 170 175 His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe 180 185 190 Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys 195 200 205 Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 210 215 220 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 225 230 235 240 Pro Ile Leu Pro Gln 245 <210> 10 <211> 273 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hGH-CTP-CTP <400> 10 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Phe Pro Thr Ile Pro Leu 20 25 30 Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln 35 40 45 Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys 50 55 60 Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe 65 70 75 80 Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys 85 90 95 Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp 100 105 110 Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val 115 120 125 Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu 130 135 140 Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg 145 150 155 160 Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser 165 170 175 His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe 180 185 190 Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys 195 200 205 Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 210 215 220 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 225 230 235 240 Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 260 265 270 Gln <210> 11 <211> 301 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-hGH-CTP-CTP <400> 11 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp 35 40 45 Thr Pro Ile Leu Pro Gln Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe 50 55 60 Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp 65 70 75 80 Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr 85 90 95 Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile 100 105 110 Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu 115 120 125 Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val 130 135 140 Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser 145 150 155 160 Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln 165 170 175 Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile 180 185 190 Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp 195 200 205 Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met 210 215 220 Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu 225 230 235 240 Gly Ser Cys Gly Phe Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 260 265 270 Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 275 280 285 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 290 295 300 <210> 12 <211> 285 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Truncated-CTP-hGH-CTP-CTP <400> 12 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe 35 40 45 Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp 50 55 60 Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr 65 70 75 80 Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile 85 90 95 Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu 100 105 110 Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val 115 120 125 Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser 130 135 140 Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln 145 150 155 160 Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile 165 170 175 Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp 180 185 190 Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met 195 200 205 Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu 210 215 220 Gly Ser Cys Gly Phe Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 225 230 235 240 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 245 250 255 Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 260 265 270 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 275 280 285 <210> 13 <211> 273 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-hGH-CTP <400> 13 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp 35 40 45 Thr Pro Ile Leu Pro Gln Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe 50 55 60 Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp 65 70 75 80 Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr 85 90 95 Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile 100 105 110 Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu 115 120 125 Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val 130 135 140 Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser 145 150 155 160 Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln 165 170 175 Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile 180 185 190 Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp 195 200 205 Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met 210 215 220 Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu 225 230 235 240 Gly Ser Cys Gly Phe Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 245 250 255 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 260 265 270 Gln <210> 14 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GH-CTP <400> 14 Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu 1 5 10 15 Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Lys Ala 20 25 30 Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp 35 40 45 Thr Pro Ile Leu Pro Gln Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe 50 55 60 Asp Asn Ala Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp 65 70 75 80 Thr Tyr Gln Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr 85 90 95 Ser Phe Leu Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile 100 105 110 Pro Thr Pro Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu 115 120 125 Leu Leu Arg Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val 130 135 140 Gln Phe Leu Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser 145 150 155 160 Asp Ser Asn Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln 165 170 175 Thr Leu Met Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile 180 185 190 Phe Lys Gln Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp 195 200 205 Ala Leu Leu Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met 210 215 220 Asp Lys Val Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu 225 230 235 240 Gly Ser Cys Gly Phe 245 <210> 15 <211> 853 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-hGH-CTP <400> 15 tctagaggac atggccaccg gcagcaggac cagcctgctg ctggccttcg gcctgctgtg 60 cctgccatgg ctgcaggagg gcagcgccag ctcttcttct aaggctccac ccccatctct 120 gcccagcccc agcagactgc cgggccccag cgacacaccc attctgcccc agttccccac 180 catccccctg agcaggctgt tcgacaacgc catgctgagg gctcacaggc tgcaccagct 240 ggcctttgac acctaccagg agttcgagga agcctacatc cccaaggagc agaagtacag 300 cttcctgcag aacccccaga cctccctgtg cttcagcgag agcatcccca cccccagcaa 360 cagagaggag acccagcaga agagcaacct ggagctgctg aggatctccc tgctgctgat 420 ccagagctgg ctggagcccg tgcagttcct gagaagcgtg ttcgccaaca gcctggtgta 480 cggcgccagc gacagcaacg tgtacgacct gctgaaggac ctggaggagg gcatccagac 540 cctgatgggc cggctggagg acggcagccc caggaccggc cagatcttca agcagaccta 600 cagcaagttc gacaccaaca gccacaacga cgacgccctg ctgaagaact acgggctgct 660 gtactgcttc agaaaggaca tggacaaggt ggagaccttc ctgaggatcg tgcagtgcag 720 aagcgtggag ggcagctgcg gcttcagctc cagcagcaag gcccctcccc cgagcctgcc 780 ctccccaagc aggctgcctg ggccctccga cacaccaatc ctgcctcagt gatgaaggtc 840 tggatgcggc cgc 853 <210> 16 <211> 937 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-hGH-CTP-CTP <400> 16 tctagaggac atggccaccg gcagcaggac cagcctgctg ctggccttcg gcctgctgtg 60 cctgccatgg ctgcaggagg gcagcgccag ctcttcttct aaggctccac ccccatctct 120 gcccagcccc agcagactgc cgggccccag cgacacaccc attctgcccc agttccccac 180 catccccctg agcaggctgt tcgacaacgc catgctgagg gctcacaggc tgcaccagct 240 ggcctttgac acctaccagg agttcgagga agcctacatc cccaaggagc agaagtacag 300 cttcctgcag aacccccaga cctccctgtg cttcagcgag agcatcccca cccccagcaa 360 cagagaggag acccagcaga agagcaacct ggagctgctg aggatctccc tgctgctgat 420 ccagagctgg ctggagcccg tgcagttcct gagaagcgtg ttcgccaaca gcctggtgta 480 cggcgccagc gacagcaacg tgtacgacct gctgaaggac ctggaggagg gcatccagac 540 cctgatgggc cggctggagg acggcagccc caggaccggc cagatcttca agcagaccta 600 cagcaagttc gacaccaaca gccacaacga cgacgccctg ctgaagaact acgggctgct 660 gtactgcttc agaaaggaca tggacaaggt ggagaccttc ctgaggatcg tgcagtgcag 720 aagcgtggag ggcagctgcg gcttcagctc cagcagcaag gcccctcccc cgagcctgcc 780 ctccccaagc aggctgcctg ggccctccga cacaccaatc ctgccacaga gcagctcctc 840 taaggcccct cctccatccc tgccatcccc ctcccggctg cctggcccct ctgacacccc 900 tatcctgcct cagtgatgaa ggtctggatg cggccgc 937 <210> 17 <211> 889 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-hGH-CTP-CTP <400> 17 tctagaggac atggccaccg gcagcaggac cagcctgctg ctggccttcg gcctgctgtg 60 cctgccatgg ctgcaggagg gcagcgccag ctcttcttct aaggctccac ccccgagcct 120 gcccttcccc accatccccc tgagcaggct gttcgacaac gccatgctga gggctcacag 180 gctgcaccag ctggcctttg acacctacca ggagttcgag gaagcctaca tccccaagga 240 gcagaagtac agcttcctgc agaaccccca gacctccctg tgcttcagcg agagcatccc 300 cacccccagc aacagagagg agacccagca gaagagcaac ctggagctgc tgaggatctc 360 cctgctgctg atccagagct ggctggagcc cgtgcagttc ctgagaagcg tgttcgccaa 420 cagcctggtg tacggcgcca gcgacagcaa cgtgtacgac ctgctgaagg acctggagga 480 gggcatccag accctgatgg gccggctgga ggacggcagc cccaggaccg gccagatctt 540 caagcagacc tacagcaagt tcgacaccaa cagccacaac gacgacgccc tgctgaagaa 600 ctacgggctg ctgtactgct tcagaaagga catggacaag gtggagacct tcctgaggat 660 cgtgcagtgc agaagcgtgg agggcagctg cggcttcagc tccagcagca aggcccctcc 720 cccgagcctg ccctccccaa gcaggctgcc tgggccctcc gacacaccaa tcctgccaca 780 gagcagctcc tctaaggccc ctcctccatc cctgccatcc ccctcccggc tgcctggccc 840 ctctgacacc cctatcctgc ctcagtgatg aaggtctgga tgcggccgc 889 <210> 18 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Oxyntomodulin <400> 18 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 19 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EPO peptide <400> 19 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu 20 25 30 Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 35 40 45 Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 50 55 60 Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 65 70 75 80 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 85 90 95 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 100 105 110 Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 115 120 125 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 130 135 140 Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile 145 150 155 160 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 165 170 175 Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 180 185 190 Arg Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 195 200 205 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 210 215 220 <210> 20 <211> 249 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EPO-CTP-CTP <400> 20 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu 20 25 30 Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 35 40 45 Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 50 55 60 Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 65 70 75 80 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 85 90 95 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 100 105 110 Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 115 120 125 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 130 135 140 Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile 145 150 155 160 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 165 170 175 Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 180 185 190 Arg Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 195 200 205 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser 210 215 220 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 225 230 235 240 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 245 <210> 21 <211> 277 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-EPO-CTP-CTP <400> 21 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ser Ser Ser Ser Lys 20 25 30 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 35 40 45 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser 50 55 60 Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile 65 70 75 80 Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val 85 90 95 Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly 100 105 110 Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 115 120 125 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu 130 135 140 Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 145 150 155 160 Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro 165 170 175 Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr 180 185 190 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu 195 200 205 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Ser Ser Ser 210 215 220 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 225 230 235 240 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 245 250 255 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 260 265 270 Pro Ile Leu Pro Gln 275 <210> 22 <211> 387 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EPO-CTP <400> 22 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu 20 25 30 Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 35 40 45 Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 50 55 60 Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 65 70 75 80 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 85 90 95 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 100 105 110 Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 115 120 125 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 130 135 140 Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile 145 150 155 160 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 165 170 175 Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 180 185 190 Arg Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 195 200 205 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ala Pro Pro 210 215 220 Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala 225 230 235 240 Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu 245 250 255 Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp 260 265 270 Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu 275 280 285 Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn 290 295 300 Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val 305 310 315 320 Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln 325 330 335 Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg 340 345 350 Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn 355 360 365 Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr 370 375 380 Gly Asp Arg 385 <210> 23 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-EPO <400> 23 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ser Ser Ser Ser Lys 20 25 30 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 35 40 45 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser 50 55 60 Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile 65 70 75 80 Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val 85 90 95 Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly 100 105 110 Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 115 120 125 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu 130 135 140 Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 145 150 155 160 Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro 165 170 175 Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr 180 185 190 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu 195 200 205 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 210 215 220 <210> 24 <211> 249 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-EPO-CTP <400> 24 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ser Ser Ser Ser Lys 20 25 30 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 35 40 45 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser 50 55 60 Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile 65 70 75 80 Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val 85 90 95 Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly 100 105 110 Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala 115 120 125 Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu 130 135 140 Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu 145 150 155 160 Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro 165 170 175 Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr 180 185 190 Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu 195 200 205 Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Ser Ser Ser 210 215 220 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 225 230 235 240 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 245 <210> 25 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EPO <400> 25 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu 20 25 30 Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu 35 40 45 Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu 50 55 60 Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg 65 70 75 80 Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu 85 90 95 Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser 100 105 110 Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly 115 120 125 Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu 130 135 140 Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile 145 150 155 160 Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu 165 170 175 Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp 180 185 190 Arg <210> 26 <211> 873 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> EPO-CTP-CTP <400> 26 tctagaggtc atcatggggg tgcacgaatg tcctgcctgg ctgtggcttc tcctgtccct 60 tctgtcgctc cctctgggcc tcccagtcct gggctcctct tcctcaaagg cccctccccc 120 gagccttcca agtccatccc gactcccggg gccctcggac accccaatat taccacaagc 180 cccaccacgc ctcatctgtg acagccgagt cctggagagg tacctcttgg aggccaagga 240 ggccgagaat atcacgacgg gctgtgctga acactgcagc ttgaatgaga atatcactgt 300 cccagacacc aaagttaatt tctatgcctg gaagaggatg gaggtcgggc agcaggccgt 360 agaagtctgg cagggcctgg ccctgctgtc ggaagctgtc ctgcggggcc aggccctgtt 420 ggtcaactct tcccagccgt gggagcccct gcagctgcat gtggataaag ccgtcagtgg 480 ccttcgcagc ctcaccactc tgcttcgggc tctgggagcc cagaaggaag ccatctcccc 540 tccagatgcg gcctcagctg ctccactccg aacaatcact gctgacactt tccgcaaact 600 cttccgagtc tactccaatt tcctccgggg aaagctgaag ctgtacacag gggaggcctg 660 caggacaggg gacagatcct cttcctcaaa ggcccctccc ccgagccttc caagtccatc 720 ccgactcccg gggccctccg acacaccaat cctgccacag agcagctcct ctaaggcccc 780 tcctccatcc ctgccatccc cctcccggct gcctggcccc tctgacaccc ctatcctgcc 840 tcagtgatga aggtcttctg gatccgcggc cgc 873 <210> 27 <211> 187 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg 20 25 30 Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg 35 40 45 Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu 50 55 60 Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val 100 105 110 Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu 115 120 125 Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys 130 135 140 Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser 145 150 155 160 His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr 165 170 175 Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 180 185 <210> 28 <211> 589 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 28 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcatgagct acaacctgct gggcttcctg cagaggtcca gcaacttcca 120 gtgccagaag ctgctgtggc agctgaacgg caggctggaa tactgcctga aggacaggat 180 gaacttcgac atcccagagg aaatcaagca gctgcagcag ttccagaagg aggacgccgc 240 cctgaccatc tacgagatgc tgcagaacat cttcgccatc ttcaggcagg acagcagcag 300 caccggctgg aacgagacca tcgtggagaa cctgctggcc aacgtgtacc accagatcaa 360 ccacctgaaa accgtgctgg aagagaagct ggaaaaggag gacttcacca ggggcaagct 420 gatgagcagc ctgcacctga agaggtacta cggcagaatc ctgcactacc tgaaggccaa 480 ggagtacagc cactgcgcct ggaccatcgt gagggtggag atcctgagga acttctactt 540 catcaacagg ctgaccggct acctgaggaa ctgatgagtc cgcggccgc 589 <210> 29 <211> 211 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Interferon <400> 29 Thr Phe Leu Gln Pro Phe Glu Ala Phe Ala Leu Ala Gln Gln Val Val 1 5 10 15 Gly Asp Thr Val Arg Val Val Asn Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln 20 25 30 Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr 35 40 45 Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys 50 55 60 Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg 65 70 75 80 Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln 85 90 95 Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe 100 105 110 Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile 115 120 125 Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys 130 135 140 Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys 145 150 155 160 Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His 165 170 175 Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg 180 185 190 Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr 195 200 205 Leu Arg Asn 210 <210> 30 <211> 639 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Interferon <400> 30 acattctaac tgcaaccttt cgaagccttt gctctggcac aacaggtagt aggcgacact 60 gttcgtgttg tcaacatgac caacaagtgt ctcctccaaa ttgctctcct gttgtgcttc 120 tccactacag ctctttccat gagctacaac ttgcttggat tcctacaaag aagcagcaat 180 tttcagtgtc agaagctcct gtggcaattg aatgggaggc ttgaatactg cctcaaggac 240 aggatgaact ttgacatccc tgaggagatt aagcagctgc agcagttcca gaaggaggac 300 gccgcattga ccatctatga gatgctccag aacatctttg ctattttcag acaagattca 360 tctagcactg gctggaatga gactattgtt gagaacctcc tggctaatgt ctatcatcag 420 ataaaccatc tgaagacagt cctggaagaa aaactggaga aagaagattt caccagggga 480 aaactcatga gcagtctgca cctgaaaaga tattatggga ggattctgca ttacctgaag 540 gccaaggagt acagtcactg tgcctggacc atagtcagag tggaaatcct aaggaacttt 600 tacttcatta acagacttac aggttacctc cgaaactga 639 <210> 31 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-CTP <400> 31 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg 20 25 30 Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg 35 40 45 Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu 50 55 60 Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val 100 105 110 Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu 115 120 125 Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys 130 135 140 Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser 145 150 155 160 His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr 165 170 175 Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Ser Ser Ser Lys 180 185 190 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 195 200 205 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 210 215 <210> 32 <211> 661 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-CTP <400> 32 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcatgagct acaacctgct gggcttcctg cagaggtcca gcaacttcca 120 gtgccagaag ctgctgtggc agctgaacgg caggctggaa tactgcctga aggacaggat 180 gaacttcgac atcccagagg aaatcaagca gctgcagcag ttccagaagg aggacgccgc 240 cctgaccatc tacgagatgc tgcagaacat cttcgccatc ttcaggcagg acagcagcag 300 caccggctgg aacgagacca tcgtggagaa cctgctggcc aacgtgtacc accagatcaa 360 ccacctgaaa accgtgctgg aagagaagct ggaaaaggag gacttcacca ggggcaagct 420 gatgagcagc ctgcacctga agaggtacta cggcagaatc ctgcactacc tgaaggccaa 480 ggagtacagc cactgcgcct ggaccatcgt gagggtggag atcctgagga acttctactt 540 catcaacagg ctgaccggct acctgaggaa cagctccagc agcaaggccc ctccaccttc 600 cctgcccagt ccaagccgac tccctgggcc ctccgataca ccaattctgc cacagtgatg 660 a 661 <210> 33 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-CTP-CTP <400> 33 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg 20 25 30 Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg 35 40 45 Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu 50 55 60 Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile 65 70 75 80 Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser 85 90 95 Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val 100 105 110 Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu 115 120 125 Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys 130 135 140 Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser 145 150 155 160 His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr 165 170 175 Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Ser Ser Ser Lys 180 185 190 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 195 200 205 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 210 215 220 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 225 230 235 240 Leu Pro Gln <210> 34 <211> 765 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IFN-CTP-CTP <400> 34 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcatgagct acaacctgct gggcttcctg cagaggtcca gcaacttcca 120 gtgccagaag ctgctgtggc agctgaacgg caggctggaa tactgcctga aggacaggat 180 gaacttcgac atcccagagg aaatcaagca gctgcagcag ttccagaagg aggacgccgc 240 cctgaccatc tacgagatgc tgcagaacat cttcgccatc ttcaggcagg acagcagcag 300 caccggctgg aacgagacca tcgtggagaa cctgctggcc aacgtgtacc accagatcaa 360 ccacctgaaa accgtgctgg aagagaagct ggaaaaggag gacttcacca ggggcaagct 420 gatgagcagc ctgcacctga agaggtacta cggcagaatc ctgcactacc tgaaggccaa 480 ggagtacagc cactgcgcct ggaccatcgt gagggtggag atcctgagga acttctactt 540 catcaacagg ctgaccggct acctgaggaa cagctccagc agcaaggccc ctccaccttc 600 cctgcccagt ccaagccgac tccctgggcc ctccgacaca ccaatcctgc cacagagcag 660 ctcctctaag gcccctcctc catccctgcc atccccctcc cggctgcctg gcccctctga 720 cacccctatc ctgcctcagt gatgaaggtc tggatccgcg gccgc 765 <210> 35 <211> 271 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN-CTP-CTP <400> 35 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 20 25 30 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 35 40 45 Gln Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe 50 55 60 Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys 65 70 75 80 Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu 85 90 95 Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu 100 105 110 Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp 115 120 125 Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile 130 135 140 Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe 145 150 155 160 Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly 165 170 175 Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp 180 185 190 Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg 195 200 205 Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 210 215 220 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 225 230 235 240 Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser 245 250 255 Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 260 265 270 <210> 36 <211> 849 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN-CTP-CTP <400> 36 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcagcagca gctccaaggc cccacccccc agcctgccca gccccagcag 120 actgccaggc cccagcgaca cccccatcct gccccagatg agctacaacc tgctgggctt 180 cctgcagagg tccagcaact tccagtgcca gaagctgctg tggcagctga acggcaggct 240 ggaatactgc ctgaaggaca ggatgaactt cgacatccca gaggaaatca agcagctgca 300 gcagttccag aaggaggacg ccgccctgac catctacgag atgctgcaga acatcttcgc 360 catcttcagg caggacagca gcagcaccgg ctggaacgag accatcgtgg agaacctgct 420 ggccaacgtg taccaccaga tcaaccacct gaaaaccgtg ctggaagaga agctggaaaa 480 ggaggacttc accaggggca agctgatgag cagcctgcac ctgaagaggt actacggcag 540 aatcctgcac tacctgaagg ccaaggagta cagccactgc gcctggacca tcgtgagggt 600 ggagatcctg aggaacttct acttcatcaa caggctgacc ggctacctga ggaacagctc 660 cagcagcaag gcccctccac cttccctgcc cagtccaagc cgactccctg ggccctccga 720 cacaccaatc ctgccacaga gcagctcctc taaggcccct cctccatccc tgccatcccc 780 ctcccggctg cctggcccct ctgacacccc tatcctgcct cagtgatgaa ggtctggatc 840 cgcggccgc 849 <210> 37 <211> 409 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN(CTP) <400> 37 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 20 25 30 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 35 40 45 Gln Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe 50 55 60 Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys 65 70 75 80 Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu 85 90 95 Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu 100 105 110 Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp 115 120 125 Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile 130 135 140 Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe 145 150 155 160 Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly 165 170 175 Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp 180 185 190 Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg 195 200 205 Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 210 215 220 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 225 230 235 240 Leu Pro Gln Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser 245 250 255 Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu 260 265 270 Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys 275 280 285 Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu 290 295 300 Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr 305 310 315 320 Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His 325 330 335 Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu 340 345 350 Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr 355 360 365 Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys 370 375 380 Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile 385 390 395 400 Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 405 <210> 38 <211> 1261 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN(CTP) <400> 38 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcagcagca gctccaaggc cccacccccc agcctgccca gccccagcag 120 gctgccaggc cccagcgaca cccccatcct gccccagatg agctacaacc tgctgggctt 180 cctgcagagg tccagcaact tccagtgcca gaaactgctg tggcagctga acggcaggct 240 ggaatactgc ctgaaggacc ggatgaactt cgacatcccc gaagagatca agcagctgca 300 gcagttccag aaagaggacg ccgccctgac catctacgag atgctgcaga acatcttcgc 360 catcttcagg caggacagca gcagcaccgg ctggaacgag accatcgtgg agaacctgct 420 ggccaacgtg taccaccaga tcaaccacct gaaaaccgtg ctggaagaga agctggaaaa 480 agaggacttc accaggggca agctgatgag cagcctgcac ctgaagaggt actacggcag 540 aatcctgcac tacctgaagg ccaaagagta cagccactgc gcctggacca tcgtgagggt 600 ggagatcctg cggaacttct acttcatcaa caggctgacc ggctacctga ggaacagctc 660 cagcagcaag gcccctccac cctccctgcc ctccccaagc agactgcccg gaccctccga 720 cacaccaatt ctgccacaga tgtcctacaa tctgctcgga tttctgcagc gctcctccaa 780 ctttcagtgt cagaagctcc tctggcagct caatggccgc ctggaatatt gtctgaaaga 840 cagaatgaat tttgacatcc cagaggaaat taaacagctc cagcagtttc agaaagaaga 900 tgctgctctc acaatctatg aaatgctcca gaatatcttt gcaatctttc gccaggacag 960 ctcctccacc gggtggaatg agacaattgt cgagaatctg ctcgccaatg tctatcatca 1020 gatcaatcac ctcaagacag tcctcgaaga aaaactcgaa aaagaagatt tcacacgcgg 1080 caaactgatg tcctccctgc atctgaagcg ctactatggg cgcatcctgc attatctgaa 1140 agctaaagaa tactcccact gtgcttggac aattgtgcgc gtcgagatcc tgagaaactt 1200 ttatttcatt aaccgcctga caggatacct gcgcaactga tgaaggtctg gatgcggccg 1260 c 1261 <210> 39 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN <400> 39 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 20 25 30 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 35 40 45 Gln Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe 50 55 60 Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys 65 70 75 80 Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu 85 90 95 Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu 100 105 110 Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp 115 120 125 Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile 130 135 140 Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe 145 150 155 160 Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly 165 170 175 Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp 180 185 190 Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg 195 200 205 Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 210 215 <210> 40 <211> 673 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN <400> 40 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcagcagca gctccaaggc cccacccccc agcctgccca gccccagcag 120 gctgccaggc cccagcgaca cccccatcct gccccagatg agctacaacc tgctgggctt 180 cctgcagagg tccagcaact tccagtgcca gaaactgctg tggcagctga acggcaggct 240 ggaatactgc ctgaaggacc ggatgaactt cgacatcccc gaagagatca agcagctgca 300 gcagttccag aaagaggacg ccgccctgac catctacgag atgctgcaga acatcttcgc 360 catcttcagg caggacagca gcagcaccgg ctggaacgag accatcgtgg agaacctgct 420 ggccaacgtg taccaccaga tcaaccacct gaaaaccgtg ctggaagaga agctggaaaa 480 agaggacttc accaggggca agctgatgag cagcctgcac ctgaagaggt actacggcag 540 aatcctgcac tacctgaagg ccaaagagta cagccactgc gcctggacca tcgtgagggt 600 ggagatcctg cggaacttct acttcatcaa caggctgacc ggctacctga ggaactgatg 660 agtccgcggc cgc 673 <210> 41 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN-CTP <400> 41 Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser 1 5 10 15 Thr Thr Ala Leu Ser Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 20 25 30 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 35 40 45 Gln Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe 50 55 60 Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys 65 70 75 80 Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu 85 90 95 Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu 100 105 110 Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp 115 120 125 Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile 130 135 140 Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe 145 150 155 160 Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly 165 170 175 Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp 180 185 190 Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg 195 200 205 Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 210 215 220 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 225 230 235 240 Leu Pro Gln <210> 42 <211> 763 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-IFN-CTP <400> 42 tctagaggac atgaccaaca agtgcctgct gcagatcgcc ctgctgctgt gcttcagcac 60 caccgccctg agcagcagca gctccaaggc cccacccccc agcctgccca gccccagcag 120 actgccaggc cccagcgaca cccccatcct gccccagatg agctacaacc tgctgggctt 180 cctgcagagg tccagcaact tccagtgcca gaagctgctg tggcagctga acggcaggct 240 ggaatactgc ctgaaggaca ggatgaactt cgacatccca gaggaaatca agcagctgca 300 gcagttccag aaggaggacg ccgccctgac catctacgag atgctgcaga acatcttcgc 360 catcttcagg caggacagca gcagcaccgg ctggaacgag accatcgtgg agaacctgct 420 ggccaacgtg taccaccaga tcaaccacct gaaaaccgtg ctggaagaga agctggaaaa 480 ggaggacttc accaggggca agctgatgag cagcctgcac ctgaagaggt actacggcag 540 aatcctgcac tacctgaagg ccaaggagta cagccactgc gcctggacca tcgtgagggt 600 ggagatcctg aggaacttct acttcatcaa caggctgacc ggctacctga ggaacagctc 660 cagcagcaag gcccctccac cttccctgcc cagtccaagc cgactccctg ggccctccga 720 tacaccaatt ctgccacagt gatgaaggtc tggatgcggc cgc 763 <210> 43 <211> 166 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IFN-beta <400> 43 Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg Ser Ser Asn Phe Gln 1 5 10 15 Ser Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg Leu Glu Tyr Cys Leu 20 25 30 Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Gln 35 40 45 Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile Tyr Glu Met Leu Gln 50 55 60 Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser Ser Thr Gly Trp Asn 65 70 75 80 Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val Tyr His Gln Ile Asn 85 90 95 His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu Lys Glu Asp Phe Thr 100 105 110 Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys Arg Tyr Tyr Gly Arg 115 120 125 Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser His Cys Ala Trp Thr 130 135 140 Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr Phe Ile Asn Arg Leu 145 150 155 160 Thr Gly Tyr Leu Arg Asn 165 <210> 44 <211> 242 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> APO-A1 <400> 44 Asp Glu Pro Pro Gln Ser Pro Trp Asp Arg Val Lys Asp Lys Ala Thr 1 5 10 15 Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln 20 25 30 Phe Glu Gly Ser Ala Gly Lys Gly Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn 35 40 45 Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly 50 55 60 Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly 65 70 75 80 Leu Arg Gly Glu Met Ser Lys Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val 85 90 95 Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu 100 105 110 Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly 115 120 125 Ala Arg Gln Lys Leu His Glu Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly 130 135 140 Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr 145 150 155 160 His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg 165 170 175 Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His 180 185 190 Ala Lys Ala Thr Glu His Leu Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro 195 200 205 Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln Gly Leu Leu Pro Val Leu Glu Ser Phe 210 215 220 Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn 225 230 235 240 Thr Gln <210> 45 <211> 444 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro 435 440 <210> 46 <211> 448 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro Gly Cys Gly Arg 435 440 445 <210> 47 <211> 1356 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 ctcgaggaca tggtctccca ggccctcagg ctcctctgcc ttctgcttgg gcttcagggc 60 tgcctggctg cagtcttcgt aacccaggag gaagcccacg gcgtcctgca ccggcgccgg 120 cgcgccaacg cgttcctgga ggagctgcgg ccgggctccc tggagaggga gtgcaaggag 180 gagcagtgct ccttcgagga ggcccgggag atcttcaagg acgcggagag gacgaagctg 240 ttctggattt cttacagtga tggggaccag tgtgcctcaa gtccatgcca gaatgggggc 300 tcctgcaagg accagctcca gtcctatatc tgcttctgcc tccctgcctt cgagggccgg 360 aactgtgaga cgcacaagga tgaccagctg atctgtgtga acgagaacgg cggctgtgag 420 cagtactgca gtgaccacac gggcaccaag cgctcctgtc ggtgccacga ggggtactct 480 ctgctggcag acggggtgtc ctgcacaccc acagttgaat atccatgtgg aaaaatacct 540 attctagaaa aaagaaatgc cagcaaaccc caaggccgaa ttgtgggggg caaggtgtgc 600 cccaaagggg agtgtccatg gcaggtcctg ttgttggtga atggagctca gttgtgtggg 660 gggaccctga tcaacaccat ctgggtggtc tccgcggccc actgtttcga caaaatcaag 720 aactggagga acctgatcgc ggtgctgggc gagcacgacc tcagcgagca cgacggggat 780 gagcagagcc ggcgggtggc gcaggtcatc atccccagca cgtacgtccc gggcaccacc 840 aaccacgaca tcgcgctgct ccgcctgcac cagcccgtgg tcctcactga ccatgtggtg 900 cccctctgcc tgcccgaacg gacgttctct gagaggacgc tggccttcgt gcgcttctca 960 ttggtcagcg gctggggcca gctgctggac cgtggcgcca cggccctgga gctcatggtc 1020 ctcaacgtgc cccggctgat gacccaggac tgcctgcagc agtcacggaa ggtgggagac 1080 tccccaaata tcacggagta catgttctgt gccggctact cggatggcag caaggactcc 1140 tgcaaggggg acagtggagg cccacatgcc acccactacc ggggcacgtg gtacctgacg 1200 ggcatcgtca gctggggcca gggctgcgca accgtgggcc actttggggt gtacaccagg 1260 gtctcccagt acatcgagtg gctgcaaaag ctcatgcgct cagagccacg cccaggagtc 1320 ctcctgcgag ccccatttcc ctgaggatgc ggccgc 1356 <210> 48 <211> 1442 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Factor VII-CTP <400> 48 ctcgaggaca tggtctccca ggccctcagg ctcctctgcc ttctgcttgg gcttcagggc 60 tgcctggctg cagtcttcgt aacccaggag gaagcccacg gcgtcctgca ccggcgccgg 120 cgcgccaacg cgttcctgga ggagctgcgg ccgggctccc tggagaggga gtgcaaggag 180 gagcagtgct ccttcgagga ggcccgggag atcttcaagg acgcggagag gacgaagctg 240 ttctggattt cttacagtga tggggaccag tgtgcctcaa gtccatgcca gaatgggggc 300 tcctgcaagg accagctcca gtcctatatc tgcttctgcc tccctgcctt cgagggccgg 360 aactgtgaga cgcacaagga tgaccagctg atctgtgtga acgagaacgg cggctgtgag 420 cagtactgca gtgaccacac gggcaccaag cgctcctgtc ggtgccacga ggggtactct 480 ctgctggcag acggggtgtc ctgcacaccc acagttgaat atccatgtgg aaaaatacct 540 attctagaaa aaagaaatgc cagcaaaccc caaggccgaa ttgtgggggg caaggtgtgc 600 cccaaagggg agtgtccatg gcaggtcctg ttgttggtga atggagctca gttgtgtggg 660 gggaccctga tcaacaccat ctgggtggtc tccgcggccc actgtttcga caaaatcaag 720 aactggagga acctgatcgc ggtgctgggc gagcacgacc tcagcgagca cgacggggat 780 gagcagagcc ggcgggtggc gcaggtcatc atccccagca cgtacgtccc gggcaccacc 840 aaccacgaca tcgcgctgct ccgcctgcac cagcccgtgg tcctcactga ccatgtggtg 900 cccctctgcc tgcccgaacg gacgttctct gagaggacgc tggccttcgt gcgcttctca 960 ttggtcagcg gctggggcca gctgctggac cgtggcgcca cggccctgga gctcatggtc 1020 ctcaacgtgc cccggctgat gacccaggac tgcctgcagc agtcacggaa ggtgggagac 1080 tccccaaata tcacggagta catgttctgt gccggctact cggatggcag caaggactcc 1140 tgcaaggggg acagtggagg cccacatgcc acccactacc ggggcacgtg gtacctgacc 1200 ggcatcgtga gctggggcca gggctgcgcc accgtgggcc acttcggcgt gtacaccagg 1260 gtgtcccagt acatcgagtg gctgcagaaa ctgatgagaa gcgagcccag acccggcgtg 1320 ctgctgagag cccccttccc cagcagcagc tccaaggccc ctccccctag cctgcccagc 1380 cctagcagac tgcctgggcc cagcgacacc cccatcctgc cccagtgagg atccgcggcc 1440 gc 1442 <210> 49 <211> 472 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Factor VII-CTP <400> 49 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro Ser Ser Ser Ser 435 440 445 Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro 450 455 460 Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 465 470 <210> 50 <211> 1535 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Factor VII-CTP-CTP <400> 50 ctcgaggaca tggtctccca ggccctcagg ctcctctgcc ttctgcttgg gcttcagggc 60 tgcctggctg cagtcttcgt aacccaggag gaagcccacg gcgtcctgca ccggcgccgg 120 cgcgccaacg cgttcctgga ggagctgcgg ccgggctccc tggagaggga gtgcaaggag 180 gagcagtgct ccttcgagga ggcccgggag atcttcaagg acgcggagag gacgaagctg 240 ttctggattt cttacagtga tggggaccag tgtgcctcaa gtccatgcca gaatgggggc 300 tcctgcaagg accagctcca gtcctatatc tgcttctgcc tccctgcctt cgagggccgg 360 aactgtgaga cgcacaagga tgaccagctg atctgtgtga acgagaacgg cggctgtgag 420 cagtactgca gtgaccacac gggcaccaag cgctcctgtc ggtgccacga ggggtactct 480 ctgctggcag acggggtgtc ctgcacaccc acagttgaat atccatgtgg aaaaatacct 540 attctagaaa aaagaaatgc cagcaaaccc caaggccgaa ttgtgggggg caaggtgtgc 600 cccaaagggg agtgtccatg gcaggtcctg ttgttggtga atggagctca gttgtgtggg 660 gggaccctga tcaacaccat ctgggtggtc tccgcggccc actgtttcga caaaatcaag 720 aactggagga acctgatcgc ggtgctgggc gagcacgacc tcagcgagca cgacggggat 780 gagcagagcc ggcgggtggc gcaggtcatc atccccagca cgtacgtccc gggcaccacc 840 aaccacgaca tcgcgctgct ccgcctgcac cagcccgtgg tcctcactga ccatgtggtg 900 cccctctgcc tgcccgaacg gacgttctct gagaggacgc tggccttcgt gcgcttctca 960 ttggtcagcg gctggggcca gctgctggac cgtggcgcca cggccctgga gctcatggtc 1020 ctcaacgtgc cccggctgat gacccaggac tgcctgcagc agtcacggaa ggtgggagac 1080 tccccaaata tcacggagta catgttctgt gccggctact cggatggcag caaggactcc 1140 tgcaaggggg acagtggagg cccacatgcc acccactacc ggggcacgtg gtacctgacc 1200 ggcatcgtga gctggggcca gggctgcgcc accgtgggcc acttcggcgt gtacaccagg 1260 gtgtcccagt acatcgagtg gctgcagaaa ctgatgagaa gcgagcccag acccggcgtg 1320 ctgctgagag cccccttccc cagcagcagc tccaaggccc ctccccctag cctgcccagc 1380 cctagcagac tgcctgggcc ctccgacaca ccaatcctgc cacagagcag ctcctctaag 1440 gcccctcctc catccctgcc atccccctcc cggctgccag gcccctctga cacccctatc 1500 ctgcctcagt gatgaaggtc tggatccgcg gccgc 1535 <210> 51 <211> 500 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor VII-CTP-CTP <400> 51 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro Ser Ser Ser Ser 435 440 445 Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro 450 455 460 Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro 465 470 475 480 Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro 485 490 495 Ile Leu Pro Gln 500 <210> 52 <211> 528 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor VII-CTP-CTP-CTP <400> 52 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro Ser Ser Ser Ser 435 440 445 Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro 450 455 460 Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro 465 470 475 480 Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro 485 490 495 Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro 500 505 510 Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 515 520 525 <210> 53 <211> 556 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor VII-CTP-CTP-CTP-CTP <400> 53 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro Ser Ser Ser Ser 435 440 445 Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro 450 455 460 Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro 465 470 475 480 Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro 485 490 495 Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro 500 505 510 Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 515 520 525 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg 530 535 540 Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 545 550 555 <210> 54 <211> 584 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor VII-CTP-CTP-CTP-CTP <400> 54 Met Val Ser Gln Ala Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Leu Gly Leu Gln 1 5 10 15 Gly Cys Leu Ala Ala Val Phe Val Thr Gln Glu Glu Ala His Gly Val 20 25 30 Leu His Arg Arg Arg Arg Ala Asn Ala Phe Leu Glu Glu Leu Arg Pro 35 40 45 Gly Ser Leu Glu Arg Glu Cys Lys Glu Glu Gln Cys Ser Phe Glu Glu 50 55 60 Ala Arg Glu Ile Phe Lys Asp Ala Glu Arg Thr Lys Leu Phe Trp Ile 65 70 75 80 Ser Tyr Ser Asp Gly Asp Gln Cys Ala Ser Ser Pro Cys Gln Asn Gly 85 90 95 Gly Ser Cys Lys Asp Gln Leu Gln Ser Tyr Ile Cys Phe Cys Leu Pro 100 105 110 Ala Phe Glu Gly Arg Asn Cys Glu Thr His Lys Asp Asp Gln Leu Ile 115 120 125 Cys Val Asn Glu Asn Gly Gly Cys Glu Gln Tyr Cys Ser Asp His Thr 130 135 140 Gly Thr Lys Arg Ser Cys Arg Cys His Glu Gly Tyr Ser Leu Leu Ala 145 150 155 160 Asp Gly Val Ser Cys Thr Pro Thr Val Glu Tyr Pro Cys Gly Lys Ile 165 170 175 Pro Ile Leu Glu Lys Arg Asn Ala Ser Lys Pro Gln Gly Arg Ile Val 180 185 190 Gly Gly Lys Val Cys Pro Lys Gly Glu Cys Pro Trp Gln Val Leu Leu 195 200 205 Leu Val Asn Gly Ala Gln Leu Cys Gly Gly Thr Leu Ile Asn Thr Ile 210 215 220 Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Phe Asp Lys Ile Lys Asn Trp Arg 225 230 235 240 Asn Leu Ile Ala Val Leu Gly Glu His Asp Leu Ser Glu His Asp Gly 245 250 255 Asp Glu Gln Ser Arg Arg Val Ala Gln Val Ile Ile Pro Ser Thr Tyr 260 265 270 Val Pro Gly Thr Thr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Arg Leu His Gln 275 280 285 Pro Val Val Leu Thr Asp His Val Val Pro Leu Cys Leu Pro Glu Arg 290 295 300 Thr Phe Ser Glu Arg Thr Leu Ala Phe Val Arg Phe Ser Leu Val Ser 305 310 315 320 Gly Trp Gly Gln Leu Leu Asp Arg Gly Ala Thr Ala Leu Glu Leu Met 325 330 335 Val Leu Asn Val Pro Arg Leu Met Thr Gln Asp Cys Leu Gln Gln Ser 340 345 350 Arg Lys Val Gly Asp Ser Pro Asn Ile Thr Glu Tyr Met Phe Cys Ala 355 360 365 Gly Tyr Ser Asp Gly Ser Lys Asp Ser Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly 370 375 380 Pro His Ala Thr His Tyr Arg Gly Thr Trp Tyr Leu Thr Gly Ile Val 385 390 395 400 Ser Trp Gly Gln Gly Cys Ala Thr Val Gly His Phe Gly Val Tyr Thr 405 410 415 Arg Val Ser Gln Tyr Ile Glu Trp Leu Gln Lys Leu Met Arg Ser Glu 420 425 430 Pro Arg Pro Gly Val Leu Leu Arg Ala Pro Phe Pro Ser Ser Ser Ser 435 440 445 Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro 450 455 460 Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro 465 470 475 480 Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro 485 490 495 Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro 500 505 510 Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 515 520 525 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg 530 535 540 Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser 545 550 555 560 Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro 565 570 575 Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 580 <210> 55 <211> 1404 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 55 gcgatcgcca tgcagcgcgt gaacatgatc atggcagaat caccaggcct catcaccatt 60 gccttttagg atatctactc agtgctgaat gtacagtttt tcttgatcat gaaaacgcca 120 acaaaattct gaatcggcca aagaggtata attcaggtaa attggaagag tttgttcaag 180 ggaaccttga gagagaatgt atggaagaaa agtgtagttt tgaagaagca cgagaagttt 240 ttgaaaacac tgaaagaaca actgaatttt ggaagcagta tgttgatgga gatcagtgtg 300 agtccaatcc atgtttaaat ggcggcagtt gcaaggatga cattaattcc tatgaatgtt 360 ggtgtccctt tggatttgaa ggaaagaact gtgaattaga tgtaacatgt aacattaaga 420 atggcagatg cgagcagttt tgtaaaaata gtgctgataa caaggtggtt tgctcctgta 480 ctgagggata tcgacttgca gaaaaccaga agtcctgtga accagcagtg ccatttccat 540 gtggaagagt ttctgtttca caaacttcta agctcacccg tgctgagact gtttttcctg 600 atgtggacta tgtaaattct actgaagctg aaaccatttt ggataacatc actcaaagca 660 cccaatcatt taatgacttc actcgagttg ttggtggaga agatgccaaa ccaggtcaat 720 tcccttggca ggttgttttg aatggtaaag ttgatgcatt ctgtggaggc tctatcgtta 780 atgaaaaatg gattgtaact gctgcccact gtgttgaaac tggtgttaaa attacagttg 840 tcgcaggtga acataatatt gaggagacag aacatacaga gcaaaagcga aatgtgattc 900 gaattattcc tcaccacaac tacaatgcag ctattaataa gtacaaccat gacattgccc 960 ttctggaact ggacgaaccc ttagtgctaa acagctacgt tacacctatt tgcattgctg 1020 acaaggaata cacgaacatc ttcctcaaat ttggatctgg ctatgtaagt ggctggggaa 1080 gagtcttcca caaagggaga tcagctttag ttctccagta ccttagagtt ccacttgttg 1140 accgagccac atgtcttcga tctacaaagt tcaccatcta taacaacatg ttctgtgctg 1200 gcttccatga aggaggtaga gattcatgtc aaggagatag tgggggaccc catgttactg 1260 aagtggaagg gaccagtttc ttaactggaa ttattagctg gggtgaagag tgtgcaatga 1320 aaggcaaata tggaatatat accaaggtat cccggtatgt caactggatt aaggaaaaaa 1380 caaagctcac ttgaacgcgg ccgc 1404 <210> 56 <211> 461 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr 1 5 10 15 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu 20 25 30 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 50 55 60 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 65 70 75 80 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 85 90 95 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 100 105 110 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 115 120 125 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 130 135 140 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 165 170 175 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 180 185 190 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 195 200 205 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 210 215 220 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 225 230 235 240 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 245 250 255 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 260 265 270 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 275 280 285 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 290 295 300 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 305 310 315 320 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 325 330 335 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 340 345 350 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 355 360 365 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 370 375 380 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 385 390 395 400 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 405 410 415 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 420 425 430 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr 450 455 460 <210> 57 <211> 1502 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP <400> 57 gcgatcgcca tgcagcgcgt gaacatgatc atggcagaat caccaggcct catcaccatc 60 tgccttttag gatatctact cagtgctgaa tgtacagttt ttcttgatca tgaaaacgcc 120 aacaaaattc tgaatcggcc aaagaggtat aattcaggta aattggaaga gtttgttcaa 180 gggaaccttg agagagaatg tatggaagaa aagtgtagtt ttgaagaagc acgagaagtt 240 tttgaaaaca ctgaaagaac aactgaattt tggaagcagt atgttgatgg agatcagtgt 300 gagtccaatc catgtttaaa tggcggcagt tgcaaggatg acattaattc ctatgaatgt 360 tggtgtccct ttggatttga aggaaagaac tgtgaattag atgtaacatg taacattaag 420 aatggcagat gcgagcagtt ttgtaaaaat agtgctgata acaaggtggt ttgctcctgt 480 actgagggat atcgacttgc agaaaaccag aagtcctgtg aaccagcagt gccatttcca 540 tgtggaagag tttctgtttc acaaacttct aagctcaccc gtgctgagac tgtttttcct 600 gatgtggact atgtaaattc tactgaagct gaaaccattt tggataacat cactcaaagc 660 acccaatcat ttaatgactt cactcgagtt gttggtggag aagatgccaa accaggtcaa 720 ttcccttggc aggttgtttt gaatggtaaa gttgatgcat tctgtggagg ctctatcgtt 780 aatgaaaaat ggattgtaac tgctgcccac tgtgttgaaa ctggtgttaa aattacagtt 840 gtcgcaggtg aacataatat tgaggagaca gaacatacag agcaaaagcg aaatgtgatt 900 cgaattattc ctcaccacaa ctacaatgca gctattaata agtacaacca tgacattgcc 960 cttctggaac tggacgaacc cttagtgcta aacagctacg ttacacctat ttgcattgct 1020 gacaaggaat acacgaacat cttcctcaaa tttggatctg gctatgtaag tggctgggga 1080 agagtcttcc acaaagggag atcagcttta gttcttcagt accttagagt tccacttgtt 1140 gaccgagcca catgtcttcg atctacaaag ttcaccatct ataacaacat gttctgtgct 1200 ggcttccatg aaggaggtag agattcatgt caaggagata gtgggggacc ccatgttact 1260 gaagtggaag ggaccagttt cttaactgga attattagct ggggtgaaga gtgtgcaatg 1320 aaaggcaaat atggaatata taccaaggta tcccggtatg tcaactggat taaggaaaaa 1380 acaaagctca ctagctccag cagcaaggcc cctcccccga gcctgccctc cccaagcagg 1440 ctgcctgggc cctccgacac accaatcctg ccacagtgat gaaggtctgg atccgcggcc 1500 gc 1502 <210> 58 <211> 489 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP <400> 58 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr 1 5 10 15 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu 20 25 30 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 50 55 60 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 65 70 75 80 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 85 90 95 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 100 105 110 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 115 120 125 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 130 135 140 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 165 170 175 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 180 185 190 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 195 200 205 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 210 215 220 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 225 230 235 240 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 245 250 255 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 260 265 270 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 275 280 285 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 290 295 300 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 305 310 315 320 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 325 330 335 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 340 345 350 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 355 360 365 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 370 375 380 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 385 390 395 400 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 405 410 415 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 420 425 430 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ser Ser Ser 450 455 460 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 485 <210> 59 <211> 1585 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP-CTP <400> 59 gcgatcgcca tgcagcgcgt gaacatgatc atggcagaat caccaggcct catcaccatc 60 tgccttttag gatatctact cagtgctgaa tgtacagttt ttcttgatca tgaaaacgcc 120 aacaaaattc tgaatcggcc aaagaggtat aattcaggta aattggaaga gtttgttcaa 180 gggaaccttg agagagaatg tatggaagaa aagtgtagtt ttgaagaagc acgagaagtt 240 tttgaaaaca ctgaaagaac aactgaattt tggaagcagt atgttgatgg agatcagtgt 300 gagtccaatc catgtttaaa tggcggcagt tgcaaggatg acattaattc ctatgaatgt 360 tggtgtccct ttggatttga aggaaagaac tgtgaattag atgtaacatg taacattaag 420 aatggcagat gcgagcagtt ttgtaaaaat agtgctgata acaaggtggt ttgctcctgt 480 actgagggat atcgacttgc agaaaaccag aagtcctgtg aaccagcagt gccatttcca 540 tgtggaagag tttctgtttc acaaacttct aagctcaccc gtgctgagac tgtttttcct 600 gatgtggact atgtaaattc tactgaagct gaaaccattt tggataacat cactcaaagc 660 acccaatcat ttaatgactt cactcgagtt gttggtggag aagatgccaa accaggtcaa 720 ttcccttggc aggttgtttt gaatggtaaa gttgatgcat tctgtggagg ctctatcgtt 780 aatgaaaaat ggattgtaac tgctgcccac tgtgttgaaa ctggtgttaa aattacagtt 840 gtcgcaggtg aacataatat tgaggagaca gaacatacag agcaaaagcg aaatgtgatt 900 cgaattattc ctcaccacaa ctacaatgca gctattaata agtacaacca tgacattgcc 960 cttctggaac tggacgaacc cttagtgcta aacagctacg ttacacctat ttgcattgct 1020 acaaggaata cacgaacatc ttcctcaaat ttggatctgg ctatgtaagt ggctggggaa 1080 gagtcttcca caaagggaga tcagctttag ttcttcagta ccttagagtt ccacttgttg 1140 accgagccac atgtcttcga tctacaaagt tcaccatcta taacaacatg ttctgtgctg 1200 gcttccatga aggaggtaga gattcatgtc aaggagatag tgggggaccc catgttactg 1260 aagtggaagg gaccagtttc ttaactggaa ttattagctg gggtgaagag tgtgcaatga 1320 aaggcaaata tggaatatat accaaggtat cccggtatgt caactggatt aaggaaaaaa 1380 caaagctcac tagctccagc agcaaggccc ctcccccgag cctgccctcc ccaagcaggc 1440 tgcctgggcc ctccgacaca ccaatcctgc cacagagcag ctcctctaag gcccctcctc 1500 catccctgcc atccccctcc cggctgcctg gcccctctga cacccctatc ctgcctcagt 1560 gatgaaggtc tggatccgcg gccgc 1585 <210> 60 <211> 517 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP-CTP <400> 60 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr 1 5 10 15 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu 20 25 30 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 50 55 60 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 65 70 75 80 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 85 90 95 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 100 105 110 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 115 120 125 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 130 135 140 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 165 170 175 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 180 185 190 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 195 200 205 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 210 215 220 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 225 230 235 240 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 245 250 255 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 260 265 270 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 275 280 285 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 290 295 300 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 305 310 315 320 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 325 330 335 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 340 345 350 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 355 360 365 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 370 375 380 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 385 390 395 400 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 405 410 415 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 420 425 430 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ser Ser Ser 450 455 460 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 485 490 495 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 500 505 510 Pro Ile Leu Pro Gln 515 <210> 61 <211> 545 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP-CTP-CTP <400> 61 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr 1 5 10 15 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu 20 25 30 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 50 55 60 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 65 70 75 80 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 85 90 95 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 100 105 110 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 115 120 125 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 130 135 140 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 165 170 175 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 180 185 190 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 195 200 205 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 210 215 220 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 225 230 235 240 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 245 250 255 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 260 265 270 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 275 280 285 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 290 295 300 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 305 310 315 320 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 325 330 335 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 340 345 350 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 355 360 365 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 370 375 380 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 385 390 395 400 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 405 410 415 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 420 425 430 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ser Ser Ser 450 455 460 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 485 490 495 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 500 505 510 Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 515 520 525 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 530 535 540 Gln 545 <210> 62 <211> 573 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP-CTP-CTP-CTP <400> 62 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr 1 5 10 15 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu 20 25 30 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 50 55 60 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 65 70 75 80 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 85 90 95 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 100 105 110 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 115 120 125 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 130 135 140 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 165 170 175 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 180 185 190 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 195 200 205 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 210 215 220 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 225 230 235 240 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 245 250 255 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 260 265 270 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 275 280 285 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 290 295 300 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 305 310 315 320 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 325 330 335 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 340 345 350 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 355 360 365 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 370 375 380 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 385 390 395 400 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 405 410 415 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 420 425 430 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ser Ser Ser 450 455 460 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 485 490 495 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 500 505 510 Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 515 520 525 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 530 535 540 Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 545 550 555 560 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 565 570 <210> 63 <211> 601 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> factor IX-CTP-CTP-CTP-CTP-CTP <400> 63 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr 1 5 10 15 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu 20 25 30 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn 35 40 45 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 50 55 60 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 65 70 75 80 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 85 90 95 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 100 105 110 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 115 120 125 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 130 135 140 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 165 170 175 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 180 185 190 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 195 200 205 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 210 215 220 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 225 230 235 240 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 245 250 255 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 260 265 270 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 275 280 285 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 290 295 300 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 305 310 315 320 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 325 330 335 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 340 345 350 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 355 360 365 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 370 375 380 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 385 390 395 400 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 405 410 415 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 420 425 430 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 435 440 445 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Ser Ser Ser 450 455 460 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 485 490 495 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 500 505 510 Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 515 520 525 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 530 535 540 Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser 545 550 555 560 Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser 565 570 575 Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly 580 585 590 Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 595 600 <210> 64 <211> 2413 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 64 tctagagtcg accccgccat ggagctgagg ccctggttgc tatgggtggt agcagcaaca 60 ggaaccttgg tcctgctagc agctgatgct cagggccaga aggtcttcac caacacgtgg 120 gctgtgcgca tccctggagg cccagcggtg gccaacagtg tggcacggaa gcatgggttc 180 ctcaacctgg gccagatctt cggggactat taccacttct ggcatcgagg agtgacgaag 240 cggtccctgt cgcctcaccg cccgcggcac agccggctgc agagggagcc tcaagtacag 300 tggctggaac agcaggtggc aaagcgacgg actaaacggg acgtgtacca ggagcccaca 360 gaccccaagt ttcctcagca gtggtacctg tctggtgtca ctcagcggga cctgaatgtg 420 aaggcggcct gggcgcaggg ctacacaggg cacggcattg tggtctccat tctggacgat 480 ggcatcgaga agaaccaccc ggacttggca ggcaattatg atcctggggc cagttttgat 540 gtcaatgacc aggaccctga cccccagcct cggtacacac agatgaatga caacaggcac 600 ggcacacggt gtgcggggga agtggctgcg gtggccaaca acggtgtctg tggtgtaggt 660 gtggcctaca acgcccgcat tggaggggtg cgcatgctgg atggcgaggt gacagatgca 720 gtggaggcac gctcgctggg cctgaacccc aaccacatcc acatctacag tgccagctgg 780 ggccccgagg atgacggcaa gacagtggat gggccagccc gcctcgccga ggaggccttc 840 ttccgtgggg ttagccaggg ccgagggggg ctgggctcca tctttgtctg ggcctcgggg 900 aacgggggcc gggaacatga cagctgcaac tgcgacggct acaccaacag tatctacacg 960 ctgtccatca gcagcgccac gcagtttggc aacgtgccgt ggtacagcga ggcctgctcg 1020 tccacactgg ccacgaccta cagcagtggc aaccagaatg agaagcagat cgtgacgact 1080 gacttgcggc agaagtgcac ggagtctcac acgggcacct cagcctctgc ccccttagca 1140 gccggcatca ttgctctcac cctggaggcc aataagaacc tcacatggcg ggacatgcaa 1200 cacctggtgg tacagacctc gaagccagcc cacctcaatg ccaacgactg ggccaccaat 1260 ggtgtgggcc ggaaagtgag ccactcatat ggctacgggc ttttggacgc aggcgccatg 1320 gtggccctgg cccagaattg gaccacagtg gccccccagc ggaagtgcat catcgacatc 1380 ctcaccgagc ccaaagacat cgggaaacgg ctcgaggtgc ggaagaccgt gaccgcgtgc 1440 ctgggcgagc ccaaccacat cactcggctg gagcacgctc aggcgcggct caccctgtcc 1500 tataatcgcc gtggcgacct ggccatccac ctggtcagcc ccatgggcac ccgctccacc 1560 ctgctggcag ccaggccaca tgactactcc gcagatgggt ttaatgactg ggccttcatg 1620 acaactcatt cctgggatga ggatccctct ggcgagtggg tcctagagat tgaaaacacc 1680 agcgaagcca acaactatgg gacgctgacc aagttcaccc tcgtactcta tggcaccgcc 1740 cctgaggggc tgcccgtacc tccagaaagc agtggctgca agaccctcac gtccagtcag 1800 gcctgtgtgg tgtgcgagga aggcttctcc ctgcaccaga agagctgtgt ccagcactgc 1860 cctccaggct tcgcccccca agtcctcgat acgcactata gcaccgagaa tgacgtggag 1920 accatccggg ccagcgtctg cgccccctgc cacgcctcat gtgccacatg ccaggggccg 1980 gccctgacag actgcctcag ctgccccagc cacgcctcct tggaccctgt ggagcagact 2040 tgctcccggc aaagccagag cagccgagag tccccgccac agcagcagcc acctcggctg 2100 cccccggagg tggaggcggg gcaacggctg cgggcagggc tgctgccctc acacctgcct 2160 gaggtggtgg ccggcctcag ctgcgccttc atcgtgctgg tcttcgtcac tgtcttcctg 2220 gtcctgcagc tgcgctctgg ctttagtttt cggggggtga aggtgtacac catggaccgt 2280 ggcctcatct cctacaaggg gctgccccct gaagcctggc aggaggagtg cccgtctgac 2340 tcagaagagg acgagggccg gggcgagagg accgccttta tcaaagacca gagcgccctc 2400 tgaacgcggc cgc 2413 <210> 65 <211> 794 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Met Glu Leu Arg Pro Trp Leu Leu Trp Val Val Ala Ala Thr Gly Thr 1 5 10 15 Leu Val Leu Leu Ala Ala Asp Ala Gln Gly Gln Lys Val Phe Thr Asn 20 25 30 Thr Trp Ala Val Arg Ile Pro Gly Gly Pro Ala Val Ala Asn Ser Val 35 40 45 Ala Arg Lys His Gly Phe Leu Asn Leu Gly Gln Ile Phe Gly Asp Tyr 50 55 60 Tyr His Phe Trp His Arg Gly Val Thr Lys Arg Ser Leu Ser Pro His 65 70 75 80 Arg Pro Arg His Ser Arg Leu Gln Arg Glu Pro Gln Val Gln Trp Leu 85 90 95 Glu Gln Gln Val Ala Lys Arg Arg Thr Lys Arg Asp Val Tyr Gln Glu 100 105 110 Pro Thr Asp Pro Lys Phe Pro Gln Gln Trp Tyr Leu Ser Gly Val Thr 115 120 125 Gln Arg Asp Leu Asn Val Lys Ala Ala Trp Ala Gln Gly Tyr Thr Gly 130 135 140 His Gly Ile Val Val Ser Ile Leu Asp Asp Gly Ile Glu Lys Asn His 145 150 155 160 Pro Asp Leu Ala Gly Asn Tyr Asp Pro Gly Ala Ser Phe Asp Val Asn 165 170 175 Asp Gln Asp Pro Asp Pro Gln Pro Arg Tyr Thr Gln Met Asn Asp Asn 180 185 190 Arg His Gly Thr Arg Cys Ala Gly Glu Val Ala Ala Val Ala Asn Asn 195 200 205 Gly Val Cys Gly Val Gly Val Ala Tyr Asn Ala Arg Ile Gly Gly Val 210 215 220 Arg Met Leu Asp Gly Glu Val Thr Asp Ala Val Glu Ala Arg Ser Leu 225 230 235 240 Gly Leu Asn Pro Asn His Ile His Ile Tyr Ser Ala Ser Trp Gly Pro 245 250 255 Glu Asp Asp Gly Lys Thr Val Asp Gly Pro Ala Arg Leu Ala Glu Glu 260 265 270 Ala Phe Phe Arg Gly Val Ser Gln Gly Arg Gly Gly Leu Gly Ser Ile 275 280 285 Phe Val Trp Ala Ser Gly Asn Gly Gly Arg Glu His Asp Ser Cys Asn 290 295 300 Cys Asp Gly Tyr Thr Asn Ser Ile Tyr Thr Leu Ser Ile Ser Ser Ala 305 310 315 320 Thr Gln Phe Gly Asn Val Pro Trp Tyr Ser Glu Ala Cys Ser Ser Thr 325 330 335 Leu Ala Thr Thr Tyr Ser Ser Gly Asn Gln Asn Glu Lys Gln Ile Val 340 345 350 Thr Thr Asp Leu Arg Gln Lys Cys Thr Glu Ser His Thr Gly Thr Ser 355 360 365 Ala Ser Ala Pro Leu Ala Ala Gly Ile Ile Ala Leu Thr Leu Glu Ala 370 375 380 Asn Lys Asn Leu Thr Trp Arg Asp Met Gln His Leu Val Val Gln Thr 385 390 395 400 Ser Lys Pro Ala His Leu Asn Ala Asn Asp Trp Ala Thr Asn Gly Val 405 410 415 Gly Arg Lys Val Ser His Ser Tyr Gly Tyr Gly Leu Leu Asp Ala Gly 420 425 430 Ala Met Val Ala Leu Ala Gln Asn Trp Thr Thr Val Ala Pro Gln Arg 435 440 445 Lys Cys Ile Ile Asp Ile Leu Thr Glu Pro Lys Asp Ile Gly Lys Arg 450 455 460 Leu Glu Val Arg Lys Thr Val Thr Ala Cys Leu Gly Glu Pro Asn His 465 470 475 480 Ile Thr Arg Leu Glu His Ala Gln Ala Arg Leu Thr Leu Ser Tyr Asn 485 490 495 Arg Arg Gly Asp Leu Ala Ile His Leu Val Ser Pro Met Gly Thr Arg 500 505 510 Ser Thr Leu Leu Ala Ala Arg Pro His Asp Tyr Ser Ala Asp Gly Phe 515 520 525 Asn Asp Trp Ala Phe Met Thr Thr His Ser Trp Asp Glu Asp Pro Ser 530 535 540 Gly Glu Trp Val Leu Glu Ile Glu Asn Thr Ser Glu Ala Asn Asn Tyr 545 550 555 560 Gly Thr Leu Thr Lys Phe Thr Leu Val Leu Tyr Gly Thr Ala Pro Glu 565 570 575 Gly Leu Pro Val Pro Pro Glu Ser Ser Gly Cys Lys Thr Leu Thr Ser 580 585 590 Ser Gln Ala Cys Val Val Cys Glu Glu Gly Phe Ser Leu His Gln Lys 595 600 605 Ser Cys Val Gln His Cys Pro Pro Gly Phe Ala Pro Gln Val Leu Asp 610 615 620 Thr His Tyr Ser Thr Glu Asn Asp Val Glu Thr Ile Arg Ala Ser Val 625 630 635 640 Cys Ala Pro Cys His Ala Ser Cys Ala Thr Cys Gln Gly Pro Ala Leu 645 650 655 Thr Asp Cys Leu Ser Cys Pro Ser His Ala Ser Leu Asp Pro Val Glu 660 665 670 Gln Thr Cys Ser Arg Gln Ser Gln Ser Ser Arg Glu Ser Pro Pro Gln 675 680 685 Gln Gln Pro Pro Arg Leu Pro Pro Glu Val Glu Ala Gly Gln Arg Leu 690 695 700 Arg Ala Gly Leu Leu Pro Ser His Leu Pro Glu Val Val Ala Gly Leu 705 710 715 720 Ser Cys Ala Phe Ile Val Leu Val Phe Val Thr Val Phe Leu Val Leu 725 730 735 Gln Leu Arg Ser Gly Phe Ser Phe Arg Gly Val Lys Val Tyr Thr Met 740 745 750 Asp Arg Gly Leu Ile Ser Tyr Lys Gly Leu Pro Pro Glu Ala Trp Gln 755 760 765 Glu Glu Cys Pro Ser Asp Ser Glu Glu Asp Glu Gly Arg Gly Glu Arg 770 775 780 Thr Ala Phe Ile Lys Asp Gln Ser Ala Leu 785 790 <210> 66 <211> 249 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-CTP-EPO <400> 66 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ser Ser Ser Ser Lys 20 25 30 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 35 40 45 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 50 55 60 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 65 70 75 80 Leu Pro Gln Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu 85 90 95 Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys 100 105 110 Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys 115 120 125 Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val 130 135 140 Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly 145 150 155 160 Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu 165 170 175 His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala 195 200 205 Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 210 215 220 Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 225 230 235 240 Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg 245 <210> 67 <211> 762 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-CTP-EPO <400> 67 atgggcgtgc acgagtgtcc tgcttggctg tggctgctgc tgagcctgct gtccctgcct 60 ctgggcctgc ctgtgctggg cagcagcagc tctaaggccc ctccacccag cctgcccagc 120 ccttctagac tgcctggccc cagcgacacc cccatcctgc ctcagagcag cagcagcaag 180 gccccaccac catccctgcc tagccccagc agactgccag gcccttccga taccccaatc 240 ctgccccagg cccctcccag actgatctgc gacagccggg tgctggaaag atacctgctg 300 gaagccaaag aggccgagaa catcaccacc ggctgcgccg agcactgcag cctgaacgag 360 aatatcaccg tgcccgacac caaagtgaac ttctacgcct ggaagcggat ggaagtgggc 420 cagcaggccg tggaagtgtg gcagggactg gccctgctga gcgaggccgt gctgagagga 480 caggccctgc tggtgaacag cagccagccc tgggagcccc tgcagctgca tgtggataag 540 gccgtgtccg gcctgcggag cctgaccaca ctgctgagag ccctgggcgc tcagaaagag 600 gccatctctc cccctgatgc cgcctctgcc gcccctctga gaaccatcac cgccgacacc 660 ttccggaagc tgttccgggt gtacagcaac ttcctgcggg gcaagctgaa gctgtacacc 720 ggcgaggcct gccggaccgg cgatagataa gcttggcgcg cc 762 <210> 68 <211> 305 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-CTP-EPO-CTP-CTP <400> 68 Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ser Ser Ser Ser Lys 20 25 30 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 35 40 45 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 50 55 60 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 65 70 75 80 Leu Pro Gln Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu 85 90 95 Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys 100 105 110 Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys 115 120 125 Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val 130 135 140 Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly 145 150 155 160 Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu 165 170 175 His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala 195 200 205 Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu 210 215 220 Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr 225 230 235 240 Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp Arg Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro 245 250 255 Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr 260 265 270 Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu 275 280 285 Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro 290 295 300 Gln 305 <210> 69 <211> 930 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP-CTP-EPO-CTP-CTP <400> 69 atgggcgtgc acgagtgtcc tgcttggctg tggctgctgc tgagcctgct gtccctgcct 60 ctgggcctgc ctgtgctggg cagcagcagc tctaaggccc ctccacccag cctgcccagc 120 ccttctagac tgcctggccc cagcgacacc cccatcctgc ctcagagcag cagcagcaag 180 gccccaccac catccctgcc tagccccagc agactgccag gcccttccga taccccaatc 240 ctgccccagg cccctcccag actgatctgc gacagccggg tgctggaaag atacctgctg 300 gaagccaaag aggccgagaa catcaccacc ggctgcgccg agcactgcag cctgaacgag 360 aatatcaccg tgcccgacac caaagtgaac ttctacgcct ggaagcggat ggaagtgggc 420 cagcaggccg tggaagtgtg gcagggactg gccctgctga gcgaggccgt gctgagagga 480 caggccctgc tggtgaacag cagccagccc tgggagcccc tgcagctgca tgtggataag 540 gccgtgtccg gcctgcggag cctgaccaca ctgctgagag ccctgggcgc tcagaaagag 600 gccatctctc cccctgatgc cgcctctgcc gcccctctga gaaccatcac cgccgacacc 660 ttccggaagc tgttccgggt gtacagcaac ttcctgcggg gcaagctgaa gctgtacacc 720 ggcgaggcct gccggaccgg cgatagaagc agctccagca aggctccacc ccccagcctg 780 ccatccccaa gtagactgcc cgggccctct gacacaccta tcctgccaca gtccagcagc 840 tccaaagctc ccccaccatc cctcccatcc ccatccagac tgcctggacc atccgacact 900 ccaattctgc ctcagtaagc ttggcgcgcc 930 <210> 70 <211> 295 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> APO-A1-CTP <400> 70 Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser 1 5 10 15 Gln Ala Arg His Phe Trp Gln Gln Asp Glu Pro Pro Gln Ser Pro Trp 20 25 30 Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp 35 40 45 Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln Phe Glu Gly Ser Ala Leu Gly Lys 50 55 60 Gln Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr 65 70 75 80 Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp 85 90 95 Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu Arg Gln Glu Met Ser Lys 100 105 110 Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe 115 120 125 Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu 130 135 140 Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu 145 150 155 160 Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala 165 170 175 Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp 180 185 190 Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn 195 200 205 Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu 210 215 220 Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln 225 230 235 240 Gly Leu Leu Pro Val Leu Glu Ser Phe Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala 245 250 255 Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn Thr Gln Ser Ser Ser Ser Lys 260 265 270 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 275 280 285 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 290 295 <210> 71 <211> 911 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> APO-A1-CTP <400> 71 atgaaggccg ccgtgctgac cctggccgtg ctgtttctga ccggctctca ggcccggcac 60 ttctggcagc aggacgagcc tccccagtcc ccctgggaca gagtgaagga cctggccacc 120 gtgtacgtgg acgtgctgaa ggactccggc agagactacg tgtcccagtt cgagggctct 180 gccctgggca agcagctgaa cctgaagctg ctggacaact gggactccgt gacctccacc 240 ttctccaagc tgcgcgaaca gctgggacct gtgacccagg aattctggga caacctggaa 300 aaagagacag agggcctgag acaggaaatg tccaaggacc tggaagaggt caaagccaag 360 gtgcagccct acctggacga cttccagaag aaatggcagg aagagatgga actgtaccgg 420 cagaaggtgg aacccctgcg ggccgagctg caggaaggcg ctagacagaa gctgcacgaa 480 ctgcaggaaa agctgtcccc cctgggcgag gaaatgcggg acagagccag agcccacgtg 540 gacgccctga gaacccacct ggccccctac tctgacgagc tgcggcagag gctggccgcc 600 agactggaag ccctgaaaga gaacggcgga gcccggctgg ccgagtacca cgctaaggct 660 accgagcacc tgtccaccct gtccgagaag gccaagcccg ccctggaaga tctgcggcag 720 ggcctgctgc ccgtgctgga atccttcaag gtgtccttcc tgtccgctct ggaagagtac 780 accaagaagc tgaacaccca gtcctccagc tccaaggccc ctccaccctc cctgcctagc 840 cctagtagac tgcctgggcc ctccgacacc cccatcctgc cccagtgatg aggatccgcg 900 gccgcgagct c 911 <210> 72 <211> 323 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> APO-A1-CTP-CTP <400> 72 Met Lys Ala Ala Val Leu Thr Leu Ala Val Leu Phe Leu Thr Gly Ser 1 5 10 15 Gln Ala Arg His Phe Trp Gln Gln Asp Glu Pro Pro Gln Ser Pro Trp 20 25 30 Asp Arg Val Lys Asp Leu Ala Thr Val Tyr Val Asp Val Leu Lys Asp 35 40 45 Ser Gly Arg Asp Tyr Val Ser Gln Phe Glu Gly Ser Ala Leu Gly Lys 50 55 60 Gln Leu Asn Leu Lys Leu Leu Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr 65 70 75 80 Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln Leu Gly Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp 85 90 95 Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr Glu Gly Leu Arg Gln Glu Met Ser Lys 100 105 110 Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala Lys Val Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe 115 120 125 Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu 130 135 140 Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu 145 150 155 160 Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala 165 170 175 Arg Ala His Val Asp Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp 180 185 190 Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn 195 200 205 Gly Gly Ala Arg Leu Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu 210 215 220 Ser Thr Leu Ser Glu Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln 225 230 235 240 Gly Leu Leu Pro Val Leu Glu Ser Phe Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala 245 250 255 Leu Glu Glu Tyr Thr Lys Lys Leu Asn Thr Gln Ser Ser Ser Ser Lys 260 265 270 Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser 275 280 285 Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro 290 295 300 Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile 305 310 315 320 Leu Pro Gln <210> 73 <211> 995 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> APO-A1-CTP-CTP <400> 73 atgaaggccg ccgtgctgac cctggccgtg ctgtttctga ccggctctca ggcccggcac 60 ttctggcagc aggacgagcc tccccagtcc ccctgggaca gagtgaagga cctggccacc 120 gtgtacgtgg acgtgctgaa ggactccggc agagactacg tgtcccagtt cgagggctct 180 gccctgggca agcagctgaa cctgaagctg ctggacaact gggactccgt gacctccacc 240 ttctccaagc tgcgcgaaca gctgggacct gtgacccagg aattctggga caacctggaa 300 aaagagacag agggcctgag acaggaaatg tccaaggacc tggaagaggt caaagccaag 360 gtgcagccct acctggacga cttccagaag aaatggcagg aagagatgga actgtaccgg 420 cagaaggtgg aacccctgcg ggccgagctg caggaaggcg ctagacagaa gctgcacgaa 480 ctgcaggaaa agctgtcccc cctgggcgag gaaatgcggg acagagccag agcccacgtg 540 gacgccctga gaacccacct ggccccctac tctgacgagc tgcggcagag gctggccgcc 600 agactggaag ccctgaaaga gaacggcgga gcccggctgg ccgagtacca cgctaaggct 660 accgagcacc tgtccaccct gtccgagaag gccaagcccg ccctggaaga tctgcggcag 720 ggcctgctgc ccgtgctgga atccttcaag gtgtccttcc tgtccgctct ggaagagtac 780 accaagaagc tgaacaccca gtcctccagc tccaaggccc ctccaccctc cctgcctagc 840 cctagtagac tgcctgggcc ctccgacaca ccaatcctgc cacagagcag ctcctctaag 900 gcccctcctc catccctgcc atccccctcc cggctgcctg gcccctctga cacccctatc 960 ctgcctcagt gatgaaggtc tggatccgcg gccgc 995

Claims (45)

  1. 재조합 폴리펩타이드의 유체역학적 크기를 증가시켜 재조합 폴리펩타이드의 혈청 반감기를 증가시키는 방법으로서,
    상기 재조합 폴리펩타이드는 인간 성장 호르몬(hGH)이고,
    상기 방법은
    (i) 상기 hGH의 아미노 말단에 1개의 카르복시 말단 펩타이드(CTP) 단위를 및 상기 hGH의 카르복시 말단에 2개의 CTP 단위를 재조합적으로 융합하는 단계; 및
    (ii) CHO(Chinese hamster ovary) 숙주 세포에서 상기 재조합 CTP-변형된 폴리펩타이드를 발현시키되, 상기 발현은 상기 CTP-단위를 글리코실화하는 것을 포함하고, 상기 글리코실화는 상기 CTP 단위를 글리코실화하는 것을 포함하며, 이로써 글리코실화된 CTP 단위당 28 내지 52 kDa만큼 상기 hGH의 유체 역학적 크기(hydrodynamic size)를 증가시키는 단계로서, 상기 hGH의 유체 역학적 크기 증가에 의해 상기 hGH의 혈청 반감기가 증가되는 단계
    를 포함하고,
    상기 CTP-변형된 hGH는 상기 1개의 CTP의 아미노 말단에 부착된 신호 펩타이드를 선택적으로 포함하는,
    재조합 폴리펩타이드의 혈청 반감기를 증가시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, CTP-변형된 hGH가 신호 펩타이드를 포함하는, 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 CTP-변형된 hGH의 아미노산 서열이 서열번호 11에 기재된 것인, 방법.
  4. 제1항에 있어서, CTP-변형된 hGH가 신호 펩타이드가 결여된, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 CTP-변형된 hGH의 아미노산 서열이 서열번호 11의 아미노산 27-301에 기재된 것인, 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 CTP-변형된 hGH가 서열번호 16의 11-913의 핵산 서열 또는 서열번호 16의 89-913의 핵산 서열에 의해 암호화된 것인, 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 글리코실화가 O-글리코실화인, 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 O-글리코실화는 α-글리코시드 연결에 의한 단백질 사슬의 세린(Ser) 또는 트레오닌(Thr)과 GalNAc 부착인, 방법.
  9. 제7항에 있어서, 상기 O-글리코실화가 코어 1 글리코실화, O-퓨코실화, O-만노실화 또는 O-글리코실화인, 방법.
  10. 제7항에 있어서,
    상기 O-글리코실화는 1개 내지 60개의 갈락토스 분자의 첨가에 의해 진행되거나;
    상기 O-글리코실화는 1개 내지 120개의 시알산 분자의 첨가에 의해 진행되거나; 또는
    이들의 조합인, 방법.
  11. 제1항에 있어서, 상기 CTP들 중 하나 이상이 링커를 통해 상기 폴리펩타이드에 부착되는, 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 링커가 펩타이드 결합인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유체역학적 부피의 증가는 상기 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 증가시키거나, 상기 폴리펩타이드의 투여 빈도를 감소시키거나, 상기 폴리펩타이드의 곡선 하 면적(AUC)을 확장하는 것인, 방법.
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
KR1020217000464A 2012-11-20 2013-11-20 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법 KR102341581B1 (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261728662P 2012-11-20 2012-11-20
US61/728,662 2012-11-20
PCT/IL2013/050960 WO2014080401A2 (en) 2012-11-20 2013-11-20 Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
KR1020157016362A KR102202255B1 (ko) 2012-11-20 2013-11-20 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157016362A Division KR102202255B1 (ko) 2012-11-20 2013-11-20 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210016042A KR20210016042A (ko) 2021-02-10
KR102341581B1 true KR102341581B1 (ko) 2021-12-21

Family

ID=50776635

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157016362A KR102202255B1 (ko) 2012-11-20 2013-11-20 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법
KR1020217000464A KR102341581B1 (ko) 2012-11-20 2013-11-20 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157016362A KR102202255B1 (ko) 2012-11-20 2013-11-20 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법

Country Status (20)

Country Link
US (1) US9808534B2 (ko)
EP (2) EP2922867B1 (ko)
JP (2) JP6416106B2 (ko)
KR (2) KR102202255B1 (ko)
CN (3) CN105121459A (ko)
AU (1) AU2013349239B2 (ko)
BR (2) BR112015011583B1 (ko)
CA (1) CA2891393A1 (ko)
CL (1) CL2015001347A1 (ko)
EA (1) EA033788B1 (ko)
ES (1) ES2882890T3 (ko)
HU (1) HUE055348T2 (ko)
IL (1) IL264700B (ko)
MX (1) MX363326B (ko)
MY (1) MY172997A (ko)
PE (2) PE20151087A1 (ko)
PL (1) PL2922867T3 (ko)
PT (1) PT2922867T (ko)
SG (3) SG10202010383YA (ko)
WO (1) WO2014080401A2 (ko)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
JP6242819B2 (ja) * 2012-02-14 2017-12-06 オプコ バイオロジクス リミテッド 長時間作用型凝固因子およびその生成方法
EA201491898A1 (ru) * 2012-04-19 2015-08-31 Опко Байолоджикс Лтд. Варианты оксинтомодулина пролонгированного действия и способы получения указанных вариантов
EA033788B1 (ru) 2012-11-20 2019-11-26 Opko Biologics Ltd Способ увеличения гидродинамического объема полипептида путем присоединения карбоксиконцевого пептида гонадотропина
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
CN105461810A (zh) * 2014-08-31 2016-04-06 复旦大学 一种长效的重组人粒细胞集落刺激因子的及其制备方法和用途
MY184625A (en) 2014-12-10 2021-04-09 Opko Biologics Ltd Methods of producing long acting ctp-modified growth hormone polypeptides
AU2015358890B2 (en) * 2014-12-10 2019-06-13 Opko Biologics Ltd. Methods of producing long acting CTP-modified growth hormone polypeptides
AU2016280867B2 (en) 2015-06-19 2020-02-27 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
CN106397570B (zh) * 2015-07-31 2019-11-15 袁武梅 一种羧基末端肽及长效干扰素
CN106397571A (zh) * 2015-07-31 2017-02-15 李金松 一种新型羧基末端肽及长效白介素7
CN107759697B (zh) * 2016-08-19 2023-03-24 安源医药科技（上海）有限公司 制备融合蛋白的方法
CN106279437B (zh) * 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
WO2021078834A1 (en) * 2019-10-22 2021-04-29 Genethon Chimeric acid-alpha glucosidase polypeptides and uses thereof

Family Cites Families (131)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
NL154599B (nl) 1970-12-28 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking.
US3901654A (en) 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors
US3853987A (en) 1971-09-01 1974-12-10 W Dreyer Immunological reagent and radioimmuno assay
US3867517A (en) 1971-12-21 1975-02-18 Abbott Lab Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies
NL171930C (nl) 1972-05-11 1983-06-01 Akzo Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van haptenen, alsmede testverpakkingen.
US3850578A (en) 1973-03-12 1974-11-26 H Mcconnell Process for assaying for biologically active molecules
US3935074A (en) 1973-12-17 1976-01-27 Syva Company Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4034074A (en) 1974-09-19 1977-07-05 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG)
US3984533A (en) 1975-11-13 1976-10-05 General Electric Company Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction
US4098876A (en) 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
US4879219A (en) 1980-09-19 1989-11-07 General Hospital Corporation Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies
JPS5781447A (en) 1980-11-11 1982-05-21 Toyo Jozo Co Ltd Human chorionic gonadotropic hormone c-terminal fragment
US4853332A (en) 1982-10-19 1989-08-01 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of biologically active proteins
US5011771A (en) 1984-04-12 1991-04-30 The General Hospital Corporation Multiepitopic immunometric assay
DE3421468A1 (de) 1984-06-08 1985-12-19 Dr. Rentschler Arzneimittel Gmbh & Co, 7958 Laupheim Lipidnanopellets als traegersystem fuer arzneimittel zur peroralen anwendung
US4666828A (en) 1984-08-15 1987-05-19 The General Hospital Corporation Test for Huntington's disease
US4911691A (en) 1984-09-21 1990-03-27 Menlo Care, Inc. Assembly for adminstering IV solution
US4801531A (en) 1985-04-17 1989-01-31 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis
DE122007000007I1 (de) 1986-04-09 2007-05-16 Genzyme Corp Genetisch transformierte Tiere, die ein gewünschtes Protein in Milch absondern
US5118666A (en) 1986-05-05 1992-06-02 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
DE68917883T2 (de) 1988-05-06 1995-02-23 Toray Industries Stabile interferon-beta-zusammensetzung.
US5272057A (en) 1988-10-14 1993-12-21 Georgetown University Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase
US5338835A (en) 1989-02-21 1994-08-16 Washington University CTP-extended form of FSH
US5705478A (en) 1989-02-21 1998-01-06 Washington University Covalently linked β subunits of the glycoprotein hormones as antagonists
US5792460A (en) 1989-02-21 1998-08-11 Washington University Modified glycoprotein hormones having a CTP at the amino terminus
DE69029799T2 (de) 1989-02-21 1997-05-28 Univ Washington Modifizierte formen von fortpflanzungshormonen
US6225449B1 (en) 1991-10-04 2001-05-01 Washington University Hormone analogs with multiple CTP extensions
US5464764A (en) 1989-08-22 1995-11-07 University Of Utah Research Foundation Positive-negative selection methods and vectors
US5192659A (en) 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
US7217689B1 (en) 1989-10-13 2007-05-15 Amgen Inc. Glycosylation analogs of erythropoietin
US5126324A (en) 1990-06-07 1992-06-30 Genentech, Inc. Method of enhancing growth in patients using combination therapy
US6028177A (en) 1991-10-04 2000-02-22 Washington University Methods of detecting single-chain forms of the glycoprotein hormone quartet
US5281521A (en) 1992-07-20 1994-01-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified avidin-biotin technique
PT695307E (pt) 1993-04-20 2000-05-31 Univ Washington Farmacos de proteinas e peptidos modificados
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5605976A (en) 1995-05-15 1997-02-25 Enzon, Inc. Method of preparing polyalkylene oxide carboxylic acids
US6737515B2 (en) 1993-11-19 2004-05-18 Washington University Follicle stimulating hormone-glycosylation analogs
US6238890B1 (en) 1994-02-18 2001-05-29 Washington University Single chain forms of the glycoprotein hormone quartet
US5935924A (en) 1994-04-15 1999-08-10 Genentech, Inc. Treatment of congestive heart failure
US5541110A (en) 1994-05-17 1996-07-30 Bristol-Myers Squibb Cloning and expression of a gene encoding bryodin 1 from Bryonia dioica
MX9601320A (es) 1994-08-12 1997-05-31 Univ Washington Formas de cadena unica de cuarteto de hormona de glicoproteina.
US6083725A (en) 1996-09-13 2000-07-04 Transkaryotic Therapies, Inc. Tranfected human cells expressing human α-galactosidase A protein
US20050032211A1 (en) 1996-09-26 2005-02-10 Metabogal Ltd. Cell/tissue culturing device, system and method
TW518235B (en) 1997-01-15 2003-01-21 Akzo Nobel Nv A gonadotropin-containing pharmaceutical composition with improved stability on prolong storage
US6310183B1 (en) 1997-09-10 2001-10-30 Novo Nordisk A/S Coagulation factor VIIa composition
US6103501A (en) 1997-11-17 2000-08-15 Washington University Single chain glycoprotein hormones comprising two β and one α subunits and recombinant production thereof
TR200101087T2 (tr) 1998-10-16 2001-09-21 Biogen, Inc. İnterferon beta-füzyon proteinleri ve kullanımları
US6514729B1 (en) 1999-05-12 2003-02-04 Xencor, Inc. Recombinant interferon-beta muteins
JO2291B1 (en) 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
AU2001233299A1 (en) * 2000-02-04 2001-08-14 Esperion Therapeutics Inc. Methods for treating alzheimer's disease
US20020127652A1 (en) 2000-02-11 2002-09-12 Schambye Hans Thalsgard Follicle stimulating hormones
US7094566B2 (en) 2000-03-16 2006-08-22 Amgen Inc., IL-17 receptor like molecules and uses thereof
US20030036181A1 (en) 2000-06-30 2003-02-20 Okkels Jens Sigurd Peptide extended glycosylated polypeptides
US7118737B2 (en) 2000-09-08 2006-10-10 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Polymer-modified synthetic proteins
ES2382636T3 (es) 2000-10-31 2012-06-12 Surmodics Pharmaceuticals, Inc. Método para producir composiciones para la administración mejorada de moléculas bioactivas
WO2002038609A2 (en) 2000-11-10 2002-05-16 Proteopharma Aps Apolipoprotein conjugates
DE60136958D1 (de) 2000-12-01 2009-01-22 Takeda Pharmaceutical Verfahren zur herstellung einer zubereitung mit einer bioaktiven substanz
JP4409135B2 (ja) 2000-12-01 2010-02-03 武田薬品工業株式会社 生理活性物質含有製剤の製造法
PL209550B1 (pl) 2000-12-07 2011-09-30 Lilly Co Eli Heterogenne białko fuzyjne, kompozycja farmaceutyczna do leczenia pacjentów z cukrzycą insulinoniezależną i kompozycja do leczenia pacjentów z otyłością
JP3946638B2 (ja) 2000-12-11 2007-07-18 シージェイ コーポレーション 生体内エリスロポエチン活性が増強された融合蛋白質
KR101229995B1 (ko) 2000-12-11 2013-02-06 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
US8637077B2 (en) 2000-12-28 2014-01-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Sustained-release preparation
JP5160005B2 (ja) 2000-12-28 2013-03-13 武田薬品工業株式会社 徐放性製剤
US6987172B2 (en) * 2001-03-05 2006-01-17 Washington University In St. Louis Multifunctional single chain glycoprotein hormones comprising three or more β subunits
US6887462B2 (en) 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
EP1390053A2 (en) 2001-04-25 2004-02-25 Hernan F. Acevedo Hcg formulation
US6824769B2 (en) 2001-08-28 2004-11-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Optimal compositions and methods thereof for treating HCV infections
GB0121709D0 (en) 2001-09-07 2001-10-31 Imp College Innovations Ltd Food inhibition agent
US7795210B2 (en) 2001-10-10 2010-09-14 Novo Nordisk A/S Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods
JP4583029B2 (ja) 2001-10-29 2010-11-17 クルセル ホランド ベー ヴェー 所定の翻訳後修飾を有する蛋白質の製造方法及び製造手段
KR100467751B1 (ko) 2001-12-03 2005-01-24 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
ES2425738T3 (es) 2001-12-21 2013-10-17 Human Genome Sciences, Inc. Proteínas de fusión de la albúmina
US7173113B2 (en) 2002-01-31 2007-02-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Long-acting hormone and growth factor compositions and uses thereof
US7081446B2 (en) 2002-01-31 2006-07-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Long-acting follicle stimulating hormone analogues and uses thereof
GB0206048D0 (en) 2002-03-14 2002-04-24 Croda Int Plc Use
GB2403476A (en) * 2002-05-13 2005-01-05 Modigenetech Ltd CTP-extended erythropoietin
US20070298041A1 (en) 2002-06-28 2007-12-27 Tomlinson Ian M Ligands That Enhance Endogenous Compounds
MXPA05000658A (es) 2002-07-17 2005-08-19 Biogen Idec Inc Terapias para la insuficiencia renal utilizando interferon-beta.
US7459435B2 (en) 2002-08-29 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US8129330B2 (en) 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US7459436B2 (en) 2002-11-22 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
WO2004073749A1 (ja) 2003-02-19 2004-09-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited 徐放性製剤用の分散剤
JP4683319B2 (ja) 2003-02-19 2011-05-18 武田薬品工業株式会社 徐放性製剤用の分散剤
PT1620118E (pt) 2003-04-08 2014-10-16 Yeda Res & Dev Fármacos peguilados de modo reversível
SG155777A1 (en) 2003-04-09 2009-10-29 Neose Technologies Inc Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
WO2005035761A1 (en) 2003-10-16 2005-04-21 Compugen Ltd. Splice variants of preproglucagon, glucagon-like peptide-1 and oxyntomodulin
US7649084B2 (en) 2003-11-12 2010-01-19 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Recombinant glycoproteins related to feline thyrotropin
DK1696947T3 (en) 2003-12-19 2014-03-17 Hoffmann La Roche APPLICATION OF ERYTHROPOIETIN IN THE TREATMENT OF DISORDERS OF THE IRON DISTRIBUTION IN CHRONIC INFLAMMATORY INTESTINAL DISEASES
WO2005094873A1 (en) 2004-03-19 2005-10-13 Baxter International Inc. Factor ixa for the treatment of bleeding disorders
US20080206270A1 (en) 2004-07-08 2008-08-28 Minev Boris R Enhancing Class I Antigen Presentation With Synthetic Sequences
WO2006018204A1 (en) 2004-08-17 2006-02-23 Zlb Behring Gmbh Modified vitamin k dependent polypeptides
EP1802645A4 (en) 2004-09-27 2009-01-14 Cornell Res Foundation Inc RECOMBINANT BIFUNCTIONAL PROTEIN FROM HUMAN LUTROPINE RECEPTOR, HUMAN CHORION GONADOTROPIN B SUBUNIT AND THEIR USES
CN101724071A (zh) 2004-10-08 2010-06-09 杜门蒂斯有限公司 抗肿瘤坏死因子受体1的单域抗体及其使用方法
GB0521621D0 (en) 2005-10-24 2005-11-30 Domantis Ltd Tumor necrosis factor receptor 1 antagonists for treating respiratory diseases
EP1728798A1 (en) 2005-06-01 2006-12-06 ZLB Behring GmbH Coagulation factor X polypeptides with modified activation properties
ATE553124T1 (de) 2005-06-13 2012-04-15 Imp Innovations Ltd Oxyntomodulinanaloga und ihre wirkungen auf das fressverhalten
US8759290B2 (en) 2005-10-18 2014-06-24 Biocon Limited Oral glucagon-like peptide conjugates for metabolic diseases
US7553941B2 (en) 2006-02-03 2009-06-30 Modigene Inc Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8450269B2 (en) * 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US8476234B2 (en) * 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8048848B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
US8304386B2 (en) * 2006-02-03 2012-11-06 Prolor Biotech, Inc. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US7928058B2 (en) 2006-02-22 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Pharmaceutical composition comprising oxyntomodulin derivatives and a method for reducing body weight using the composition
TW200806317A (en) 2006-03-20 2008-02-01 Wyeth Corp Methods for reducing protein aggregation
EP2423306A1 (en) 2006-06-19 2012-02-29 Catalyst Biosciences, Inc. Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
AT505262A1 (de) 2007-06-12 2008-12-15 Apeiron Biolog Forschungs Und Rekombinantes ace2 polypeptid
EP2225372A2 (en) 2007-12-05 2010-09-08 Novozymes A/S Polypeptides having endoglucanase activity and polynucleotides encoding same
MX2011000847A (es) 2008-08-06 2011-02-25 Novo Nordisk Healthcare Ag Proteinas conjugadas con eficacia prolongada in vivo.
EP2898900B1 (en) 2008-09-19 2017-11-15 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of ziconotide
CN102413990A (zh) 2009-02-27 2012-04-11 钴领无限公司 模块化自动工具配送机
US8828953B2 (en) 2009-04-20 2014-09-09 NaZura BioHealth, Inc. Chemosensory receptor ligand-based therapies
DE102009031992A1 (de) 2009-07-06 2011-01-13 Paul Hartmann Ag Vorrichtung zur Unterdrucktherapie von Wunden
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
KR101382593B1 (ko) 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물
CN104023739A (zh) 2011-06-02 2014-09-03 Opko生物科学有限公司 长效glp-1/胰高血糖素受体激动剂
EA201491898A1 (ru) * 2012-04-19 2015-08-31 Опко Байолоджикс Лтд. Варианты оксинтомодулина пролонгированного действия и способы получения указанных вариантов
CN109096387B (zh) 2012-06-04 2021-11-30 奥普科生物制品有限公司 聚乙二醇化的oxm变体
EA033788B1 (ru) 2012-11-20 2019-11-26 Opko Biologics Ltd Способ увеличения гидродинамического объема полипептида путем присоединения карбоксиконцевого пептида гонадотропина
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Endocrinology, vol.151, pp.4410~4417(2010)*

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201503879QA (en) 2015-06-29
EP2922867A4 (en) 2016-08-03
WO2014080401A3 (en) 2014-09-25
JP2016501198A (ja) 2016-01-18
KR102202255B1 (ko) 2021-01-13
PL2922867T3 (pl) 2021-12-06
JP2019038812A (ja) 2019-03-14
CN114317505A (zh) 2022-04-12
SG10201610223PA (en) 2017-02-27
AU2013349239A1 (en) 2015-07-09
PE20210171A1 (es) 2021-01-29
EP2922867B1 (en) 2021-07-21
PT2922867T (pt) 2021-10-29
SG10202010383YA (en) 2020-11-27
CL2015001347A1 (es) 2015-09-04
AU2013349239B2 (en) 2018-04-12
EP3848386A1 (en) 2021-07-14
KR20150110486A (ko) 2015-10-02
MY172997A (en) 2019-12-18
MX363326B (es) 2019-03-20
BR122020018510B1 (pt) 2023-03-14
EA033788B1 (ru) 2019-11-26
CN112661863A (zh) 2021-04-16
MX2015006302A (es) 2016-03-11
KR20210016042A (ko) 2021-02-10
JP6416106B2 (ja) 2018-10-31
EP2922867A2 (en) 2015-09-30
CN105121459A (zh) 2015-12-02
CA2891393A1 (en) 2014-05-30
BR112015011583B1 (pt) 2023-03-14
IL264700B (en) 2022-03-01
EA201590994A1 (ru) 2016-03-31
ES2882890T3 (es) 2021-12-03
BR112015011583A2 (ko) 2017-08-15
PE20151087A1 (es) 2015-08-28
US20140316112A1 (en) 2014-10-23
WO2014080401A2 (en) 2014-05-30
US9808534B2 (en) 2017-11-07
HUE055348T2 (hu) 2021-11-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102341581B1 (ko) 생식샘자극 호르몬 카복시 말단 펩타이드들과 부착하여 폴리펩타이드들의 유체역학적 부피를 증가시키는 방법
JP6430592B2 (ja) 長期作用性凝固因子およびそれを製造する方法
ES2706734T3 (es) Hormona del crecimiento de acción prolongada y métodos para producir la misma
KR20180094114A (ko) 돌연변이된 절단된 폰 빌레브란트 인자
RU2746943C2 (ru) Полипептиды длительного действия и способы их получения и введения
AU2015201906B2 (en) Long-acting coagulation factors and methods of producing same
RU2798845C2 (ru) Полипептиды длительного действия и способы их получения и введения

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant