KR102126140B1 - 고순도 콜라겐 입자의 제조 및 이의 용도 - Google Patents

고순도 콜라겐 입자의 제조 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102126140B1
KR102126140B1 KR1020187002475A KR20187002475A KR102126140B1 KR 102126140 B1 KR102126140 B1 KR 102126140B1 KR 1020187002475 A KR1020187002475 A KR 1020187002475A KR 20187002475 A KR20187002475 A KR 20187002475A KR 102126140 B1 KR102126140 B1 KR 102126140B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
supercritical
collagen
sulfonic acid
delete delete
scf
Prior art date
Application number
KR1020187002475A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20180021851A (ko
Inventor
준-지에 왕
페이-후아 차이
카이-치 쿠
다르-젠 시에
Original Assignee
아크로 바이오메디컬 컴퍼니 엘티디
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 아크로 바이오메디컬 컴퍼니 엘티디 filed Critical 아크로 바이오메디컬 컴퍼니 엘티디
Publication of KR20180021851A publication Critical patent/KR20180021851A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102126140B1 publication Critical patent/KR102126140B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3612—Cartilage, synovial fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/20—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/362—Skin, e.g. dermal papillae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3645—Connective tissue
    • A61L27/3654—Cartilage, e.g. meniscus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
    • A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
    • A61L2400/12—Nanosized materials, e.g. nanofibres, nanoparticles, nanowires, nanotubes; Nanostructured surfaces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/06—Materials or treatment for tissue regeneration for cartilage reconstruction, e.g. meniscus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/34—Materials or treatment for tissue regeneration for soft tissue reconstruction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/40—Preparation and treatment of biological tissue for implantation, e.g. decellularisation, cross-linking

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Prostheses (AREA)

Abstract

여기 개시된 내용은 콜라겐 입자의 제조 방법에 관한 것이다. 각 콜라겐 입자는 그 안의 콜라겐 섬유의 완전성이 비교적 온전한, 약 10-250μm 입자 크기를 가지는 것을 특징으로 한다.

Description

고순도 콜라겐 입자의 제조 및 이의 용도
본 출원은 2015년 8월 11일자로 출원된 미국 가출원 제62/203,904호의 우선권을 주장하며, 이는 본 명세서에서 그 전체가 참고로 인용된다.
본 발명은 일반적으로 콜라겐을 생산하는 방법 분야, 특히 세포가 성장하기위한 생물학적 지지체로서 사용, 예를 들어, 성형 수술 (예를 들어, 미용 수술), 연조직 확대술 (예 : 얼굴 라인 및 주름 완화)을 위한 주사용 피부 필러, 또는 상처 치유를 촉진하기 위한 상처 드레싱의 사용에 적합한 콜라겐 입자를 생산하는 개선된 방법에 관한 것이다.
콜라겐은 피부와 같은 결합 조직의 피브릴(fibril)의 주요 구성 성분으로서 척추 동물에서 발생하는 불용성 섬유질 단백질이다. 콜라겐을 얻는 기존의 과정은 시간이 오래 걸리고 비효율적이며 때로는 콜라겐의 완전성을 파괴하여 미용 수술이나 상처 치료에 임플란트로 사용하려는 생물학적 스캐폴드로는 적합하지 않다. 또한, Zyderm 및 Zyplast라는 이름으로 판매되는 것과 같은 대부분의 상업적으로 이용 가능한 콜라겐은 소의 피부에서 수확되고, 이는 많은 숙주, 특히 자가면역 질환 병력이 있는 사람들에 대한 심한 알레르기 반응 때문에 모든 환자에게 사용될 수 없다. 또한, 소의 콜라겐은 주사 부위에서 장기 체류를 나타내지 않으므로 주기적인 터치-업(touch-up) 주사가 요구된다. 소 콜라겐의 짧은 체류는 소 가죽에서 추출될 때 파괴되는 콜라겐의 완전성에 기인하며, 이로 인해 콜라겐이 숙주에 의해 쉽게 흡수되는 것으로 여겨진다.
Cosmoderm 및 Cosmoplast와 같은 인간 기원 콜라겐이 개발되었지만, 제한된 소스(즉, 할례의 인간 포피) 때문에 매우 비싸다. 대안적으로, 환자는 지방 흡입 절차로 추출한 자신의 지방 조직에서 유래된 콜라겐을 사용할 수 있으며, 즉각적인 사용을 위해 주사용 형태로 가공하거나 나중에 사용할 수 있도록 보관할 수 있다. 그러나, 그들 또한 콜라겐의 완전성이 분리 공정 중에 파괴된다는 점에서, 소 콜라겐과 동일한 결함을 겪고 있다.
따라서, 관련 분야에서는 콜라겐의 천연 구조 및 형태가 분리 과정 중에 보존되는, 콜라겐 생성의 개선된 제조 방법이 요구되어 왔으며, 이렇게 제조된 콜라겐 산물은 현저한 면역 반응을 유도하지 않으면서 숙주 세포가 성장할 수 있는 3 차원 스캐폴드를 제공할 수 있다.
본 개시는 본 발명자들에 의해 콜라겐 입자의 제조시 상기한 문제점을 극복하기 위해 창안된 것으로서, 특히, 동물의 피부 (예를 들어, 돼지 또는 소의 피부)로부터 콜라겐의 본래의 형태를 갖는 것을 특징으로하는 콜라겐 입자의 제조에 유용하다.
따라서, 본 개시의 제 1 양태는 콜라겐 입자를 제조하는 방법을 제공하는 것이다. 이 방법은,
(1) 약 0.1-1㎜의 두께를 갖는 동물 피부에 탈세포화(decellularization) 공정을 가하는 단계;
(2) 단계 (1)의 탈세포화된 동물 피부에 비이온성 계면활성제를 포함하는 수용액을 처리하는 단계;
(3) 상기 (2)의 수용액 처리된 동물 피부에 프로테아제 처리를 실시하는 단계;
(4) 단계 (3)의 프로테아제 처리된 동물 피부에 뉴클레아제 처리를 실시하는 단계;
(5) 단계 (4)의 뉴클레아제 처리된 동물 피부를 탈이온화(de-ionization)하는 단계;
(6) 단계 (5)의 탈이온화된 동물 피부에 화학적 제거 공정을 가하여 콜라겐 매트릭스를 생성시키는 단계; 및
(7) 단계 (6)의 콜라겐 매트릭스를 약 10 내지 250μm 크기의 콜라겐 입자를 생성하도록 과립화(granulation) 공정을 실시하는 단계로 구성된다.
일부 실시예에 따르면, 단계 (1)에서, 약 0.1-1mm의 두께를 갖는 동물 피부는 약 100 ~ 500bar의 압력하에 약 20분 내지 5일 동안 30-50℃ 사이 온도에서 초임계 유체 (SCF) 처리를 실시한다.
상기 SCF는 초임계 이산화탄소(scCO2), 초임계 아산화 질소(scN2O), 초임계 수(scH2O), 초임계 알칸, 초임계 알켄, 초임계 알콜 또는 초임계 아세톤 중 어느 하나일 수 있다. 일 예시에서, SCF는 scCO2이다. 또 다른 예에서, SCF는 scN2O이다.
하나의 바람직한 구현예에 따르면, 탈세포화 공정은 온도가 약 37℃이고, 압력이 약 350 bar 인 조건에서 20분 동안 수행된다.
일부 구체예에 따라, 단계 (2)에서, 단계 (1)의 탈세포화된 동물 피부는 옥틸페놀 에톡실레이트 (예 : Triton X 시리즈), 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 폴록사머, 노녹시놀, 세틸 알콜 및 알킬폴리글루코시드로부터 구성된 군에서 선택되는 계면 활성제를 함유하는 수용액으로 처리된다. 선택적으로, 수용액은 라우릴 술폰산, 도데실 술폰산, 소듐 도데실 설페이트(SDS), 도데실 벤젠 술폰산, 트리데실 벤젠 술폰산, 알킬-페녹시 벤젠 디술폰산, 나프탈렌 술폰산, 알킬-나프탈렌 술폰산, 및 알케닐-나프탈렌과 같은 음이온성 계면 활성제를 추가로 포함 할 수 있다. 여전히 선택적으로, 수용액은 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드 등과 같은 염을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 바람직한 예에서, 음이온성 계면 활성제는 소듐 도데실 설페이트(SDS)이다.
일부 구체예에 따라, 단계 (3)의 프로테아제는 펩신, 트립신, 키모트립신, 파파인, 키모파파인, 브로멜라인, 악티니다인(actinidain), 프로테이나아제A, 프로테이나아제K, 펩티다아제, 피신(ficin), 캘파인(calpain), 카스파제(caspase) 및 이들의 조합물을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 구체예에 따라, 단계 (4)에서, 단계 (3)의 프로테아제 처리된 동물 피부는 DNA 뉴클레아제 또는 RNA 뉴클레아제인 뉴클레아제로 처리된다.
선택적으로, 단계 (4)의 생성물은 단계 (2)의 수용액으로 추가로 처리될 수 있으며, 이는 옥틸페놀 에톡실레이트 (예 : Triton X 시리즈), 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 폴록사머, 노녹시놀, 세틸 알콜 및 알킬폴리글루코시드를 포함하는 군에서 선택된 비이온성 계면활성제를 포함한다. 하나의 바람직한 예에서, 수용액은 1% 트리톤 X-100을 포함한다. 여전히 선택적으로, 상기 수용액은 라우릴 술폰산, 도데실 술폰산, 도데실 벤젠 술폰산, 트리데실 벤젠 술폰산, 알킬-페녹시 벤젠 디술폰산, 나프탈렌 술폰산, 알킬-나프탈렌 술폰산, 및 알케닐-나프탈렌과 같은 음이온성 계면 활성제를 추가로 포함할 수 있다. 여전히 선택적으로, 수용액은 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드 등과 같은 염을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 바람직한 예에서, 음이온성 계면 활성제는 소듐 도데실 설페이트(SDS)이다.
일부 구체예에 따라, 단계 (5)에서, 단계 (4)의 뉴클레아제 처리된 동물 피부를 과산화수소 용액으로 1시간 동안 처리한다.
일부 구체예에 따라, 단계 (6)에서, 화학적 제거 공정은 단계 (5)의 탈이온화된 생성물을 약 100 ~ 500bar의 압력하에 약 20분 내지 5일 동안 30-50℃ 사이 온도에서 초임계 유체 (SCF) 처리를 실시함을 포함한다.
상기 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 (scCO2), 초임계 아산화질소 (scN2O), 초임계 수 (scH2O), 초임계 알칸, 초임계 알켄, 초임계 알콜 또는 초임계 아세톤 중 어느 하나일 수 있다. 일 예시에서, SCF는 scCO2이다. 또 다른 예에서, SCF는 scN2O이다.
바람직한 실시예에 따르면, 화학적 제거 공정은 공용매(co-solvent)의 존재하에서, 온도가 약 37℃이고 압력이 약 350 bar 인 조건에서 약 60분 동안 수행된다. 일 예에서, 공용매는 1:10의 부피비로 SCF로 적용되는 에탄올이다.
또 다른 구현예에 따르면, 단계 (7)에서, 상기 과립화 공정은 단계 (6)의 콜라겐 매트릭스를 절단 또는 분쇄하여 수행되고, 이에 의해 약 10 내지 250μm의 입자 크기를 갖는 콜라겐 입자를 제조한다. 이렇게 생성된 콜라겐 입자는 그 본래의 구조 및 형태가 보존된 콜라겐으로 구성되어, 피험자에 적용된 후 세포가 성장할 수 있게 하는 3 차원 바이오-스캐폴드로서 제공될 수 있다.
따라서, 본 발명의 두 번째 양태는 대상의 피부 상태를 치료하는 방법을 제공하는 것으로, 이 때, 피부 상태는 피부의 상처, 주름(line) 및/또는 함몰인 상태이다. 상기 방법은 본 발명의 방법에 의해 제조된 콜라겐 입자를 피부 아래에 충분한 양으로 투여하여 피부 상태를 개선 또는 향상시키는 것을 포함한다. 상기 피부 상태는 피부의 상처, 주름(line) 및/또는 함몰(depression)일 수 있다. 상처의 예로는 비제한적으로 수술 상처 (예: 절개), 궤양 및 피부 또는 기타 조직이 손상되거나, 잘리거나, 구멍이 나거나 찢어지는 신체에 대한 임의의 다른 손상이 포함된다. 피부(예를 들어, 얼굴 피부) 상의 주름(라인) 및/또는 함몰은 비제한적으로 안면 주름(frown lines), 입 주위 주름, 걱정 주름(worry lines), 눈가 주름(crows feet), 미소 주름(smile lines) 및 여드름 또는 상처로 인한 얼굴 흉터(facial scarring)를 포함한다. 하나의 바람직한 구체예에서, 상기 콜라겐 입자는 대상의 연조직을 증대시키기 위한 진피 충진제로서 사용되며, 32 게이지 이하의 바늘과 같은 바늘로 주사함으로써 대상에게 투여된다. 다른 구체예에서, 상기 콜라겐 입자는 상처 드레싱으로 사용되며, 상처의 상부에 콜라겐 입자를 고르게 퍼지게 하는 도구(어플리케이터, applicator)에 의해 대상에게 투여된다.
따라서, 본 개시의 제 3 양태는 미용 수술 중에 전술한 피부 상태를 치료하기 위한 키트를 제공하는 것이다. 키트에 포함된 구성 요소는 다음과 같다 : 용기, 본 방법으로 생성된 콜라겐 입자, 이 때 상기 콜라겐 입자 내의 콜라겐 섬유의 완전성이 상대적으로 온전하고 각 입자의 직경이 약 10 내지 250μm인 것을 특징으로 하며; 그리고 본 개시의 콜라겐 입자를 사용하는 방법을 사용자에게 지시하기 위해 용기와 관련된 범례(legend)를 포함한다. 상기 범례는 팜플렛, 테이프, CD, VCD 또는 DVD 형태일 수 있다.
본 개시의 하나 이상의 실시예의 세부 사항은 이하의 첨부된 설명에서 설명된다. 본 발명의 다른 특징 및 이점은 상세한 설명 및 청구항으로부터 명백해질 것이다.
전술한 일반적인 설명 및 하기의 상세한 설명은 모두 예시적인 것으로서, 청구된 본 발명의 추가 설명을 제공하기 위한 것임을 이해해야 한다.
본 명세서에 통합되어 그 일부를 구성하는 첨부 도면은 본 발명의 다양한 양태의 다양한 예시적 시스템, 방법 및 다른 예시적인 실시예를 도시한다. 본 설명은 첨부 도면에 비추어 이해되는 다음의 상세한 설명으로부터 더 잘 이해 될 것이다.
도 1은 본 개시의 일 실시예에 따른, (A) 50 X 및 (B) 20,000 X의 배율에서 각각 취한 본 콜라겐 입자의 전기현미경 (EM) 사진이다; 그리고
도 2는 본 개시의 일 실시예에 따른, (A) 12시간 및 (B) 72시간 동안 3T3 세포를 재-세포화(recellularizing)한 후의 본 콜라겐 입자의 EM 사진이며, EM 사진은 각각 ( A) 2,000 X 및 (B) 4,000 X 배율에서 취하였다.
첨부된 도면과 관련하여 이하에 제공되는 상세한 설명은 본 개시의 설명으로 의도되었으며, 본 개시가 구성되거나 이용될 수 있는 유일한 형태를 나타내기 위한 것이 아니다.
단수 형태는 본문에서 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함하는 것으로 여기서 사용된다.
본 발명의 넓은 범위를 설명하는 수치 범위 및 파라미터가 근사값임에도 불구하고, 특정 실시예에 기재된 수치는 가능한 한 정확하게 보고된다. 그러나 임의의 수치는 본질적으로 각각의 시험 측정에서 발견된 표준 편차로 인해 필연적으로 발생하는 특정 오류를 포함한다. 또한, 여기에서 사용되는 용어 "약"은 일반적으로 주어진 값 또는 범위의 10%, 5%, 1% 또는 0.5% 이내를 의미한다. 대안적으로, 상기 용어 "약"은 당업자가 고려할 때 평균의 허용 가능한 표준 오차 이내를 의미한다. 작동/작업 예 이외에, 또는 달리 명시하지 않는 한, 여기에 개시되는 재료의 양, 시간의 지속 시간, 온도, 작동 조건, 양의 비율 등과 같은 모든 수치 범위, 양, 값 및 백분율 모든 예에서 "약"이라는 용어로 변형된 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 달리 지시되지 않는 한, 본 개시 및 첨부된 청구 범위에 기재된 수치 파라미터는 원하는 바에 따라 변할 수 있는 근사치이다. 최소한 각 수치 파라미터는 적어도 보고된 유효 자릿수의 수와 일반적인 반올림 기술을 적용하여 해석되어야 한다.
본 발명은 특히, 콜라겐 입자의 신규한 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조 된 신규한 콜라겐 입자 및 이와 같이 제조된 콜라겐 입자의 신규 용도에 관한 것이다.
본 개시의 제 1 양태는 콜라겐의 천연 구조 및 형태가 보존된 콜라겐 입자를 제조하는 새로운 방법을 포함하며, 따라서 일단 콜라겐 입자가 숙주에 주입되면, 숙주 조직 세포가 성장하기 위한 최적의 미세 환경이 제공될 수 있다.
따라서, 본 방법은 적어도 다음 단계를 포함한다 :
(1) 약 0.1-1 ㎜의 두께를 갖는 동물 피부에 탈세포화 공정을 가하는 단계;
(2) 단계 (1)의 탈세포화된 동물 피부에 비이온성 계면활성제를 포함하는 수용액을 처리하는 단계;
(3) 상기 (2)의 수용액 처리된 동물 피부에 프로테아제 처리를 실시하는 단계;
(4) 단계 (3)의 프로테아제 처리된 동물 피부에 뉴클레아제 처리를 실시하는 단계;
(5) 단계 (4)의 뉴클레아제 처리된 동물 피부를 탈이온화(de-ionization)하는 단계;
(6) 단계 (5)의 탈이온화된 동물 피부에 화학적 제거 공정을 가하여 콜라겐 매트릭스를 생성시키는 단계; 및
(7) 단계 (6)의 콜라겐 매트릭스를 약 10 내지 250μm 크기의 콜라겐 입자를 생성하도록 과립화(granulation) 공정을 실시하는 단계.
본 발명의 방법을 개시하기 전에, 바람직하게는 동물을 스키닝(skinning)하여 수득한 동물 피부를 세척, 탈모 및 탈지방화한다. 바람직하게는, 본원에서 사용하기에 적합한 동물은 돼지, 소(cattle), 암소(cows), 황소(bulls), 양, 염소, 당나귀, 토끼, 오리, 거위 및 가금(fowl)을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 가축이다. 탈모 및 탈지방화 공정은 관련 기술 분야에 공지된 임의의 기계적 또는 화학적 방법에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 동물의 피부 (예 : 돼지 껍질(porcine rind))를 산으로 처리하여 털을 제거할 수 있지만, 동물의 피부를 효소 (예 : 리파아제) 또는 화학 물질 (예 : 세제)로 처리하여 지방을 제거할 수 있고, 선택적으로, 기계적으로 절단하여 제거할 수 있다.
다음에, 탈모 및 탈지방화된 동물 피부의 표층을 피부 채취기(dermatome)로 제거함으로써, 두께가 약 0.1 내지 1mm 인 동물 피부, 예를 들면, 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9 및 1.0mm; 보다 바람직하게는 약 0.2 내지 0.6mm, 예컨대 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 및 0.6mm; 가장 바람직하게는 약 0.3mm의 두께를 가지는 동물 피부를 제조한다. 이렇게 제조된 동물 피부는 본 방법에 사용된다.
선택적으로, 0.1 내지 1mm 사이의 두께를 갖는 상기 제조된 동물 피부는 0 내지 55℃의 온도에서 약 0.1 내지 24시간 동안 알칼리제로 처리되어 남아있는 모발 및/또는 지방을 제거한다. 본 방법에 사용하기에 적합한 알칼리제의 예로는 비제한적으로 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 우레아, 황화 나트륨, 티오아세트산 칼슘 등이 포함되나, 이에 한정되는 것은 아니다. 동물 피부는 두께가 약 0.1-0.6mm 인 돼지 껍질(porcine rind)이 바람직하며, 약 1시간 동안 4℃에서 약 0.1-1 N의 수산화나트륨 용액으로 처리한다.
단계 (1)에서, 0.1-1mm 사이의 두께를 갖는 동물 피부는 탈세포화 공정을 거친다. 탈세포화 공정은 콜라겐의 물리적 및 생화학적 특성을 보존하면서 동물의 피부에서 세포 물질을 제거하기 위한 목적으로 수행되므로, 조직 스캐폴드로 더 좋을 수 있다. 따라서, 단계 (1)에서, 0.1-1mm 사이의 두께를 갖는 동물 피부는 약 100 - 500 bar, 예를 들어, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 및 500 bar; 바람직하게는 약 150 - 450 bar, 예를 들어 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 및 450 Bar; 그리고, 더 바람직하게는 약 200-400 Bar, 예를 들어 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 및 400 Bar 의 압력하에 초임계유체 (SCF)의 처리를 실시한다. 또한, 단계 (1) 은 온도 30-50℃ 사이, 예를 들어, 30, 31, 32, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 및 50℃; 바람직하게는 35-45℃ 사이, 예를 들어 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 및 45℃에서; 약 20분 내지 5일 동안, 예를 들어, 20, 30, 40, 50, 및 60분; 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 및 24시간; 2, 3, 4, 및 5일 동안 수행된다. 일부 실시예에서, 0.1 내지 1mm 사이의 두께를 갖는 동물 피부는 SCF로 약 1 내지 24시간 동안 처리된다. 다른 실시예에서, 0.1 내지 1mm 사이의 두께를 갖는 동물 피부는 약 2 내지 5일 동안 SCF로 처리된다.
상기 SCF는 초임계 이산화탄소 (scCO2), 초임계 아산화 질소 (scN2O), 초임계 수 (scH2O), 초임계 알칸, 초임계 알켄, 초임계 알콜 또는 초임계 아세톤 중 어느 하나일 수 있다. 일 예시에서, SCF는 scCO2이고, 이는 scCO2가 약 350 Bar에서 37℃의 온화한 임계 조건을 가지며, 따라서 체온 (즉, 37℃) 또는 그 근처에서 생물학적 물질이 제거될 수 있게 한다. 또 다른 바람직한 예에서, SCF는 scN2O이다.
다음 단계 (2)에서, 단계 (1)의 탈세포화된 동물 피부를 비이온성 계면활성제를 함유하는 수용액으로 세척하여 임의의 잔류 세포 물질을 제거한다. 수용액에 사용될 수 있는 적합한 비이온성 계면 활성제의 예는 옥틸페놀 에톡실레이트 (예 : Triton X 시리즈), 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 폴록사머, 노녹시놀, 세틸 알콜 및 알킬폴리글루코시드 등을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 바람직하게는, 비이온성 계면활성제는 옥틸페놀 에톡실레이트, 즉, Triton X 시리즈로 비제한적으로 Triton X-15, Triton X-35, Triton X-45, Triton X-100, Triton X-102 , Triton X-114 등을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에 따르면, 상기 비이온 계면 활성제는 Triton X-100이며, 수용액 중에 약 0.1-10%(wt%), 예를 들어, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10%(wt%)의 농도로 존재한다. 바람직하게는, 상기 비이온성 계면활성제는 수용액 중에 약 0.5 내지 5%(wt%), 예컨대 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4 또는 5%(wt%)의 농도로 존재한다. 하나의 바람직한 구체예에 따라, 상기 수용액은 약 1%(wt) Triton X-100을 함유한다.
선택적으로, 상기 수용액은 라우릴 술폰산, 도데실 술폰산, 도데실 벤젠 술폰산, 트리데실 벤젠 술폰산, 알킬-페녹시 벤젠 디술폰산, 나프탈렌 술폰산, 알킬-나프탈렌 술폰산, 및 알케닐-나프탈렌과 같은 음이온성(anionic) 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 여전히 선택적으로, 수용액은 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드 등과 같은 염을 추가로 포함할 수 있다. 하나의 바람직한 예에서, 음이온성 계면 활성제는 소듐 도데실 설페이트(SDS)이다.
다음으로, 단계 (3)에서, 단계 (2)의 수용성 용액 세척된 동물 피부를 프로테아제로 효소적으로 분해시킨다. 본 단계에서의 효소 분해 처리(enzymatic digestion treatment)는 온건하여 콜라겐 섬유의 본래 구조와 형태를 보존한다. 단계 (4)에서 사용될 수 있는 적합한 프로테아제의 예는 펩신, 트립신, 키모트립신, 파파인, 키모파파인, 브로멜라인, 악티니다인(actinidain), 프로테이나아제A, 프로테이나아제 K, 펩티다아제, 피신(ficin), 캘파인(calpain), 카스파제(caspase) 또는 이들의 조합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 하나의 예에서, 상기 프로테아제는 펩신이다. 또 다른 예에서, 상기 프로테아제는 트립신과 케모트립신의 혼합물이다. 바람직하게는, 상기 프로테아제는, 약 0.001 - 0.1%(wt%), 예를 들어 0.001, 0.002, 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 및 0.1% (wt%); 더 바람직하게는, 약 0.002 - 0.05% (wt), 예를 들어 0.002, 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 및 0.05%(wt%)의 농도로 존재한다. 하나의 바람직한 구체예에 따라, 단계 (2)의 수용액으로 세척된 동물 피부는 약 0.05% (wt%)의 펩신으로 약 8 내지 24시간 동안, 예를 들어 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 및 24시간; 바람직하게는 약 12 내지 20시간, 예를 들어 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20시간 동안 분해된다.
단계 (4)에서, 단계 (3)의 생성물은 DNA 뉴클레아제 또는 RNA 뉴클레아제, 바람직하게는 비특이적 DNA/RNA 뉴클레아제일 수 있는 뉴클레아제로 처리된다. 본 개시의 일부 구현예에 따르면, 단계 (3)의 생성물은 37℃에서 약 1시간 동안 뉴클레아제로 처리된다.
선택적으로, 단계 (4)의 생성물은 단계 (3)의 뉴클레아제 처리된 생성물로부터 임의의 잔류 갈락토실 잔기를 제거하기 위해, 알파-갈락토시다제와 같은 글리코시드 가수 분해 효소(glycoside hydrolase)로 추가로 처리될 수 있다.
여전히 선택적으로, 단계 (4)의 생성물을 임의의 잔류 세포 물질을 제거하기 위해 전술한 바와 같은 수용액으로 추가로 처리할 수 있다. 바람직하게는, 수용액은 1% Triton X-100을 함유하고, SDS와 같은 음이온성 계면활성제를 추가로 함유 할 수 있다.
다음 단계 (5)에서, 단계 (4)의 생성물은, 단계 (4)의 뉴클레아제 처리된 동물 피부를 과산화수소 용액으로 약 0.5 - 5시간, 예를 들어, 약 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5 및 5시간 동안 처리하는 것을 포함하는, 탈-이온화 공정의 처리를 받는다. 바람직하게는, 과산화수소는 상기 용액에서 약 0.1-3%(wt%), 예를 들어 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3% (wt%) 농도로 존재한다. 하나의 바람직한 구체예에 따라, 단계 (4)의 생성물을 약 1 시간 동안 1% 과산화수소 용액으로 처리한다.
다음에, 단계 (6)에서, 단계 (5)의 생성물에 화학적 제거 공정을 실시하는데, 이는 단계 (5)의 탈이온된 생성물을 초임계 유체로 처리하는 것을 포함한다. 상기 단계 (2)의 전술된 동물 피부 조건과 유사하게, 동일 또는 상이한 초임계 유체가 약 100 내지 500 bar의 압력 하에서 30 내지 50℃의 온도에서 약 20분 내지 5 일동안 본 단계에서 사용될 수 있다. 일 예시에서, 상기 SCF는 scCO2이다. 또 다른 예에서, SCF는 scN2O이다. 하나의 바람직한 구체예에 따라, SCF가 공용매와 함께 단계 (5)의 생성물에 적용되고, 상기 화학적 제거 공정은 온도가 약 37℃, 압력은 약 350 Bar, 약 60분 동안 수행된다. 상기 공용매는 C1-4 알콜일 수 있고, 이는 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 이소부탄올, sec-부탄올, t-부탄올 및 시클로부탄올을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 바람직한 예에서, 상기 공용매는 에탄올이고, 1:20 내지 1:4, 예를 들어 1:20, 1:19, 1:18, 1:17, 1:16, 1:15, 1:14, 1:13, 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 및 1:4의 부피비로 SCF로 적용된다. 하나의 바람직한 구체예에서, 상기 에탄올은 SCF로 1:19의 부피비로 적용된다. 다른 실시예에서, 상기 에탄올은 SCF로 1:10의 부피비로 적용된다. 또 다른 실시예에서, 상기 에탄올은 SCF로 1:4의 부피비로 적용된다.
최종 단계 (7)에서, 단계 (6)의 생성물을 과립화하여 주사로 투여하기에 적합한 목적하는 콜라겐 입자를 생성시킨다. 상기 과립화 공정은 액체 질소의 존재하에 단계 (6)의 생성물 (즉, 콜라겐 매트릭스)을 절단(cutting), 연삭(grinding) 또는 전단(shearing)에 의해 수행하여 약 10 내지 250μm 예를 들어, 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 및 250μm의 입자 크기를 갖는 콜라겐 입자를 생성한다. 하나의 바람직한 실시예에서, 상기 콜라겐 입자는 약 50-100μm, 예를 들어, 약 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 및 100μm 크기를 가진다. 다른 실시예에서, 상기 콜라겐 입자는 약 100-150μm, 예를 들어 약 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 및 150μm 크기를 가진다. 또 다른 실시예에서, 상기 콜라겐 입자는 약 150-250μm, 예를 들어, 약 150, 155, 160, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 및 250μm 크기를 가진다. 따라서, 제조된 콜라겐 입자는 콜라겐 섬유의 본래의 구조 및 형태가 보존된 콜라겐 섬유를 갖는 것을 특징으로 하여, 본 개시의 콜라겐 입자가 세포 성장을 가능하게 하는 바이오-스캐폴드로서 제공될 수 있다.
이와 같이하여 제조된 콜라겐 입자는 진피 충전제(dermal fillers)로서 사용되어, 32 게이지 이하의 바늘, 예를 들면, 32, 30, 29, 28, 27, 26s, 26, 25, 24, 23, 22s, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 또는 7 게이지 바늘을 사용하여 대상의 목적하는 부위(예, 얼굴)에 투여된다. 한 예에서, 본 콜라겐 입자는 30 게이지의 바늘로 주입되었다. 다른 예에서, 현재의 콜라겐 입자는 27 게이지의 바늘로 주입되었다.
대안적으로, 이와 같이 생성된 콜라겐 입자는, 제한되지는 않지만 상처의 상부에 현재의 콜라겐 용액을 균일하게 분무하는 어플리케이터의 사용에 의해 상처 드레싱으로서 사용될 수 있고 대상의 상처에 투여될 수 있는데, 상처는 외과적 상처(예, 절개), 궤양 및 피부 또는 다른 조직이 손상되거나, 잘리거나, 구멍이 뚫리거나, 찢어지는 신체의 다른 손상; 비제한적으로 안면 주름(frown lines), 입 주위 주름, 걱정 주름(worry lines), 눈가 주름(crows feet), 미소 주름(smile lines) 및 여드름 또는 상처를 포함하는 얼굴 피부 상 주름(라인) 및/또는 함몰을 포함한다.
본 발명의 방법은 다음의 점에서 종래의 방법과 차별화되는데, 제조 중 콜라겐 매트릭스를 안정화시키기 위한 가교 결합제의 사용 또는 염의 첨가를 필요로 하지 않으며, 또한 이렇게 생성된 콜라겐 매트릭스로부터 콜라겐 섬유를 추출하는 것을 요구하지 않는다; 대신에, 본원에서 생성된 전체 콜라겐 매트릭스는 직접적으로 과립화 공정을 거쳐 각 콜라겐 입자가 직경 약 10 내지 250μm인 목적하는 콜라겐 입자를 제조한다. 본 발명의 방법에 의해 제조된 각 콜라겐 입자는 콜라겐 섬유의 완전성이 유지된 콜라겐 섬유로 이루어지므로, 본 발명의 콜라겐 입자는 숙주 세포의 그 위에서의 성장을 위한 생물학적 스케폴드로서 사용하기에 적합하다.
따라서, 본 개시의 추가 양태는 대상의 피부 상태를 치료하는 방법을 제공하는 것이고, 이 때, 상기 피부 상태는 피부 상 상처, 주름 및/또는 함몰이다. 상기 방법은 피부 상태를 개선시키거나 향상시키기 위해, 본 개시의 콜라겐 입자를 대상의 피부 아래에 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 본 콜라겐 입자는 상처 치유, 피부 상 주름 및/또는 함몰(depression)의 완화(soothing) 촉진, 특히 비제한적으로 외과적 상처(예, 절개), 궤양 및 피부 또는 다른 조직이 손상되거나, 잘리거나, 구멍이 뚫리거나, 찢어지는 신체의 다른 손상을 포함하는 상처 치유; 비제한적으로 안면 주름(frown lines), 입 주위 주름, 걱정 주름(worry lines), 눈가 주름(crows feet), 미소 주름(smile lines) 및 여드름 또는 상처를 포함하는 얼굴 피부 상 주름(라인) 및/또는 함몰 완화를 촉진하는데 적합하다.
당업자에게 본 발명을 사용하기 위한 도구를 제공하기 위해, 본 개시의 콜라겐 입자는 전술한 피부 상태를 치료하는데 사용하기 위한 키트로 조립된다. 한 실시예에서, 본 발명은 본 발명의 콜라겐 입자를 사용하여 안면 미용 수술에 사용하기 위한 키트를 제공한다. 또 다른 실시예에서, 본 발명은 본 발명의 콜라겐 입자를 사용하여 대상의 상처를 치료하기 위한 키트를 제공한다.
키트에 포함된 성분은 다음과 같다 : 용기, 본 발명의 임의의 실시 예에 기술된 절차에 따라 제조된 콜라겐 입자, 이 때 상기 콜라겐 입자 내의 콜라겐 섬유의 완전성이 상대적으로 온전하고 각 입자의 직경이 약 10 내지 250μm인 것을 특징으로 하며; 그리고 용기 및 본 개시의 콜라겐 입자를 사용하는 방법 지시에 관련된 범례(legend)를 포함한다. 상기 범례는 팜플렛, 테이프, CD, VCD 또는 DVD 형태일 수 있다.
이하, 본 발명을 다음의 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명하지만, 이들 실시예에 한정되는 것이 아니라 설명을 목적으로 제공된다. 이들은 전형적으로 사용될 수 있는 것들이지만, 당업자에게 알려진 다른 절차, 방법론 또는 기술이 대안적으로 사용될 수 있다.
[ 실시예 ]
재료 및 방법
세포배양
NIH-3T3 섬유 아세포를 10% FBS(fetal bovine serum), 100 units/ml 페니실린 및 100㎎/㎖ 스트렙토마이신을 포함하는 보충제가 첨가된 DMEM-고 글루코오스 배지에서 37℃에서 5% CO2의 가습 분위기 하 배양하였다.
콜라겐 입자에 대한 재세포화 ( Recellularization )
3T3 세포를 80% 컨플루언트로 성장시킨 다음, 효소 처리 (1mM EDTA 중 0.25% 트립신) 및 5분 동안 500 x g에서 원심 분리하여 수확하였다. 수집된 세포를 배양 배지에 재현탁하고 SCF-처리된 콜라겐 입자에 1x103 cells/mL의 농도로 씨딩하고 상기 입자를 24-웰 배양 플레이트에 두고 12, 24, 48 또는 72시간 동안 인큐베이터에서 배양하여 세포가 표면에 부착되었는지 확인하였다. 3T3 세포가 성장된 콜라겐 입자를 2.5% 글루타르알데히드에 1.5시간 동안 침지시켜 고정하고, 1% 옥시뮴 테트라옥사이드(oximum tetraoxide)에 1.5 시간 동안 침지시키고, 이어서 알코올에 침지해서 탈수시켰다.
동물
뉴질랜드 백색 토끼 (각각 0.5 또는 2 Kg 이상의 중량)를 파이로젠(pyrogen) 연구 및 피하내 자극(intracutaneous irritation) 연구에 사용하였다; ICR 마우스(BioLASCO Taiwan Co., Ltd., 각각 약 17-23g 중량)는 피부 민감성 연구에 사용되었고, 기니피그 (약 300-500g 중량)도 상기 피부 민감성 연구에 사용되었다. 상기 토끼(1 마리/케이지), 마우스 (5 마리/케이지), 및 기니피그 (5 마리/ 케이지)를 동물 시설에서 유지시켰고, 음식과 물은 자유롭게 주어졌고, 동물 시설의 온도와 습도는 각각 18-26℃ 및 30-75%로 유지되었다. 뉴질랜드 흰 토끼의 체온은 매일 기록되었고 체온이 39.8℃를 초과하지 않았고, 최고 체온과 최저 체온의 차이가 1℃ 이상이 되지 않은 동물을 파이로젠 연구에 선택하였다. 각 테스트가 시작되기 전에 모든 동물을 검역 대상으로 삼고 순응시켰다.
실시예 1: 콜라겐 입자의 제조 및 특성 결정
1.1 콜라겐 매트릭스의 제조
탈모 및 탈지된 돼지 껍질(porcine rind) 0.2-0.4 mm를 4℃에서 24시간 동안 건조시킨 다음, 350 bar, 37℃에서 40 내지 180분 동안 scCO2를 처리하여 잔류 세포 물질을 제거하였다.
다음으로, 탈세포화된 돼지 껍질을, 초음파 처리, 세척, 효소 분해 및 세척을 포함하여 실온 (약 22 내지 28℃)에서 다양한 처리를 수행하였다. 간단히 말하면, 탈세포화된 돼지 껍질을 1시간 동안 초음파 처리하고 (0.1 M Tris), 100 rpm의 속도로 22시간 동안 진탕하고, 다시 1시간 동안 초음파 처리하였다. 그런 다음, 초음파처리된 돼지 껍질을 물 (10분/세척, 2회 세척), 1% Triton X-100을 포함하는 용액 (속도 100 rpm, 24시간 진탕) 및 물(각각 10분 세척, 총 2회 세척) 순서로 세척하여 불순물을 제거하고 콜라겐 매트릭스를 생성한다. 상기 콜라겐 매트릭스를 1시간 동안 펩신 용액 (0.5M 아세트산 중 0.01% 펩신)으로 처리한 다음, 물로 세척 (10분/세척, 2회 세척)하고 100 rpm의 속도로 진탕하였다(shaking).
상기 콜라겐 매트릭스를 DNAase 용액 (0.3U/㎠)으로 37℃에서 1시간 처리한 후, 1% Triton X-100 (100rpm의 속도로 24시간 동안 진탕) 및 물 (약 10분/세척, 2회 세척)로 상온(약 22 내지 28℃)에서 세척하였다. 그 후, 상기 콜라겐 매트릭스를 1% H2O2 용액에 두고, 65 rpm의 속도로 1시간 동안 진탕시킨 후, 실온 (약 22-28 ℃)에서 물로 세척 (10분/세척, 2회 세척)하고, 37℃에서 약 8-30분 동안 진공 건조시켰다. 그 다음, 10% (vol%) 에탄올의 존재하에 350 bar, 37℃에서 60분 동안 scCO2로 추가로 처리하고; 25℃의 물에서 10분간 재수화하고, 37℃에서 약 8-30분간 진공 건조시켰다.
1.2 콜라겐 입자의 제조
실시예 1.1의 재수화된 콜라겐 매트릭스를 슬라이스하여 Freezer/Mill (6770/6870, 5-25 cycles)를 이용해 입자로 분쇄(mill)하였다. 이렇게 생성된 콜라겐 입자를 감마선 (10-50 kGy)으로 조사하고 사용할 때까지 멸균된 상태로 저장하였다.
전자현미경 (EM) 분석은 이렇게 생성된 콜라겐 입자 각각이 비교적 완전한 피브릴 구조를 보유함을 나타냈다 (도 1).
1.3 실시예 1.2의 콜라겐 입자는 3T3 세포의 성장을 지지함
실시예 1.2의 콜라겐 입자는 "재료 및 방법"에 기재된 절차에 따라 재세포화시켰다. 실시예 1.2의 콜라겐 입자의 다공성은 새로 씨딩된 3T3 세포(도 2, 패널 A)의 성장을 지지하는 우수한 생물학적 스캐폴드로서 작용하였고, 전체 입자는 72시간 동안 배양된 후 3T3 세포로 덮였다 (도 2 , 패널 B).
실시예 2 : 실시예 1의 콜라겐 입자의 알레르기 테스트
본 발명의 콜라겐 입자가 숙주에 임의의 알레르기 반응을 일으킬 잠재적 가능성을 평가하기 위해, 실시예 1.1의 콜라겐 매트릭스로부터 콜라겐 추출물을 제조한 후, 관련 승인 절차, 특히 ISO 10993-10, 11에 따라 파이로젠 연구, 피부 민감성 연구, 급성 시스템 주사 연구 및 경피적 자극 연구 등을 포함하는 다양한 알레르기 시험에 사용하였다.
2.1 콜라겐 추출물의 제조
실시예 1.1 (3 x 4 cm)의 콜라겐 매트릭스를 50℃에서 72시간 동안 0.9% 식염수 또는 면실유에 일정한 교반 (150 rpm)으로 침지시켜 식염수 중 콜라겐 추출물 또는 면실유 중 콜라겐 추출물을 제조하였다. 콜라겐 매트릭스/0.9% 식염수 또는 면실유의 표면 비율은 약 1 cm2/1 mL였다.
2.2 Pyrogen 연구
파이로젠 연구는 미국 약전 USP36 / NF31 (151)에 개시된 프로토콜에 따라 수행되었다. 간략하게, 본 연구에서는 6 마리의 수컷 뉴질랜드 백색 토끼 (> 1.5 ㎏, 대조군에서 3마리 토끼 및 시험군에서 3마리 토끼)를 사용하였고, 실시예 2.1의 식염수 중 콜라겐 추출물 10 mL/Kg를 각 토끼의 귀 정맥에 주입하였다. 상기 대조군의 토끼는 0.9% 식염수 주입만을 받았다. 상기 투여는 10분만에 완료되었다. 시험군 토끼의 체온은 콜라겐 추출물 투여 후 각각 1, 1.5, 2, 2.5 및 3시간 후에 측정하였다.
대조군 토끼의 체온은 각각 39.1℃, 38.8℃ 및 38.8℃이었고 (표 1), 식염수 중 콜라겐 추출물을 투여한 후의 시험군 토끼의 체온은 약간의 변동을 보였다. 그러나, 상기 변동은 여전히 실시예 1의 콜라겐 매트릭스로부터 유도된 콜라겐 추출물이 발열 물질이 없다(pyrogen free)는 것을 나타내는 허용 범위 (표 2) 내에 있는 것으로 간주 되었다.
Figure 112018008855582-pct00001
Figure 112018008855582-pct00002
2.3 피부 감작 (민감성, sensitization ) 연구
피부 감작 연구는 ISO 10993-10에 기재된 프로토콜에 따라 수행되었다. 30 마리의 수컷 기니피그를 4 군으로 무작위로 배정하였다, 즉, 대조군 1 (N = 5), 대조군 2 (N = 5), 치료군 1 (N = 10) 및 치료군 2 (N = 10)의 4 군으로 하였다. 시험 전에, 시험용 동물의 뒤쪽에 있는 모피를 전자 면도기로 목에서 견갑골 부분으로 잘라내었고, 각 동물의 왼쪽에는 A, B, C로 각각 지정된 3 개의 잘린(clipped) 부분이 생겼고, A, B, C로 각각 지정된 3개의 잘려진 영역이 비슷한 방식으로 오른쪽에 만들어졌으며 각 영역의 크기는 약 2 x 2 cm2이었다.
치료 1일에, 각 군의 동물은 각각의 잘린 영역에서 "도입 (I) 기간"에 대해 표 3 또는 표 4에 표시된 각각의 용액 0.1 mL를 피내 주사를 받았다. 1 주일 후, 동물이 자극 반응을 나타내지 않으면 10%의 소듐 도데실 설페이트(sodium dodecyl sulfate, SDS)을 주사 부위에 적용한 다음, 동일한 주사 영역을 표 3 또는 표 4의 "도입 (II) 기간"에 표시된 용액 0.2mL를 미리 담근(pre-soaked) 패치로 덮었다. "도입 (II) 기간"에서 치료 2주 후에, 동물의 하부 후면의 모피가 견갑골에서 엉덩이 부위로 클리핑되었고, 이 털이 없는 부위의 적절한 부위를 선택하여 표 3 또는 표 4에 표시된 "챌린지 기간"동안 0.1mL의 용액으로 미리 담근 패치로 덮었다.
Figure 112018008855582-pct00003
Figure 112018008855582-pct00004
클리핑된 영역의 피부를 챌린지 후 24시간 및 48시간 후에 관찰하여 자극 및/또는 알레르기 반응을 나타내는 영역이 있는지를 관찰하였다. 그 결과, 대조군이나 치료군의 어느 동물들도 시험 영역에서 눈에 보이는 자극 징후를 나타내지 않았다. 따라서, 본 발명의 상기 콜라겐 추출물은 시험용 기니피그의 피부에 지연 과민 반응을 일으키지 않았다.
2.4 경피적 자극( Intracutaneous irritation ) 연구
이 자극 연구는 ISO 10993-10에 제시된 프로토콜에 따라 수행되었다. 간단히 말해, 뉴질랜드 수컷 흰쥐 6 마리 (>2 Kg, 대조군 3 마리, 실험군 3 마리)를 본 연구에 사용하였다. 연구 이전에, 시험 동물의 뒤쪽에 있는 모피를 전자 면도기로 클리핑 (clipping) 하였다. 처리 일에, 실시예 2.1의 식염수 중의 약 0.2 mL 콜라겐 추출물을 각 토끼의 좌측 5개 부위에 주사하고; 실시예 2.1의 면실유 중 약 0.2 mL 콜라겐 추출물을 각 토끼의 우측 5개의 다른 부위에 주입하였다. 상기 대조군의 토끼는 0.2mL의 0.9% 식염수 또는 면실유 주입을 동일한 부위에서 받았다. 이어서, 투여 후 24, 48 및 72시간에 동물을 관찰하여 처리 부위에서 진피 반응이 일어났는지 확인하였다.
대조군 동물 또는 치료군 동물에서 피내 자극의 유의한 임상 징후는 발견되지 않았고, 사망률도 발견되지 않았다. 따라서, 콜라겐 추출물의 단일 국부(topical) 적용은 뉴질랜드 화이트 토끼에서 경피적(intracutaneous) 자극을 일으키지 않았다.
2.5 급성 시스템 주입 연구
이 급성 시스템 주사 연구는 ISO 10993-11에 기재된 프로토콜에 따라 수행되었다. 20 마리의 기니피그를 무작위로 4 군으로, 즉 대조군 1 (N = 5), 대조군 2 (N = 5), 치료군 1 (N = 5) 및 치료군 2 (N = 5)의 4 군으로 배정하였다.
치료 1일째에, 치료 1 군의 동물에는 식염수 중 콜라겐 추출물을 단일 용량 정맥내 주사한 반면 (50 mL/Kg), 치료 2 군의 동물에는 면실유 중 콜라겐 추출물을 단일 용량 복강내 투여를 받았다(50mL/Kg). 대조군-1 및 대조군-2의 동물은 각각 0.9% 식염수 및 면실유를 투여받았다. 그 다음, 마우스는 투여 후 4, 24, 48 및 72시간에 각각 독성 관찰을 받았다.
대조군 동물 또는 치료군 동물에서 중대한 임상 증상의 독성은 발견되지 않았으며, 사망률도 발견되지 않았다. 따라서, 콜라겐 추출물의 단일 적용은 시험 동물에서 독성 반응을 일으키지 않았다.
상기 실시예의 설명은 단지 예로서 주어지며 당업자에 의해 다양한 변형이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다. 상기 명세서, 실시예 및 데이터는 본 발명의 예시적인 실시예의 구조 및 사용에 대한 완전한 설명을 제공한다. 본 발명의 다양한 실시예가 특정 정도로, 또는 하나 이상의 개별 실시 예를 참조하여 상술되었지만, 당업자는 본 개시 내용의 개념 또는 범위를 벗어나지 않고 개시된 실시예에 대한 많은 변형을 행할 수 있다.

Claims (24)

  1. 다음을 포함하는, 콜라겐 입자를 제조하는 방법:
    (1) 0.1-1㎜의 두께를 갖는 돼지 피부에 100 ~ 500 bar의 압력하에 20분 내지 5일 동안 30-50℃ 사이 온도에서 초임계 유체(SCF)를 처리하는 단계, 이 때 상기 초임계 유체(SCF)는 초임계 이산화탄소(scCO2), 초임계 아산화 질소(scN2O), 초임계 수(scH2O), 초임계 알칸, 초임계 알켄, 초임계 알콜 또는 초임계 아세톤 중 어느 하나임;
    (2) 단계 (1)의 초임계 유체(SCF) 처리된 돼지 피부에 옥틸페놀 에톡실레이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트, 폴록사머, 노녹시놀, 세틸 알콜 및 알킬폴리글루코시드로 구성된 군에서 선택되는 비이온성 계면활성제를 포함하는 수용액을 처리하는 단계;
    (3) 단계 (2)의 수용액 처리된 돼지 피부에 프로테아제 처리를 실시하는 단계로, 프로테아제는 펩신, 트립신, 키모트립신, 파파인, 키모파파인, 브로멜라인, 악티니다인(actinidain), 프로테이나아제 A, 프로테이나아제 K, 펩티다아제, 피신(ficin), 캘파인(calpain), 카스파제(caspase) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되며;
    (4) 단계 (3)의 프로테아제 처리된 돼지 피부에 뉴클레아제 처리를 실시하는 단계로, 뉴클레아제는 DNA 뉴클레아제 또는 RNA 뉴클레아제이며;
    (5) 단계 (4)의 뉴클레아제 처리된 돼지 피부를 과산화수소 용액으로 1시간 동안 처리하는 단계;
    (6) 단계 (5)의 과산화수소 처리된 돼지 피부에 100 ~ 500 bar의 압력하에 20분 내지 5일 동안 30-50℃ 사이 온도에서 초임계 유체(SCF) 처리하여 잔류를 제거 하여 콜라겐 매트릭스를 생성시키는 단계; 및
    (7) 단계 (6)의 콜라겐 매트릭스를 10 내지 250μm 크기의 콜라겐 입자를 생성하도록 과립화(granulation) 공정을 실시하는 단계.
  2. 제 1항에 있어서, 초임계 유체(SCF)는 초임계 이산화탄소(scCO2) 또는 초임계 아산화 질소(scN2O)인 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 단계 (2)의 수용액은 염 또는 라우릴 술폰산, 도데실 술폰산, 소듐 도데실 설페이트(SDS), 도데실 벤젠 술폰산, 트리데실 벤젠 술폰산, 알킬-페녹시 벤젠 디술폰산, 나프탈렌 술폰산, 알킬-나프탈렌 술폰산, 및 알케닐-나프탈렌으로 구성된 군에서 선택되는 음이온성 계면 활성제를 추가로 포함하는 방법.
  4. 제 1항에 있어서, 단계 (4)의 생성물을 단계 (2)의 수용액으로 추가로 처리하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 수용액은 염 또는 라우릴 술폰산, 도데실 술폰산, 소듐 도데실 설페이트(SDS), 도데실 벤젠 술폰산, 트리데실 벤젠 술폰산, 알킬-페녹시 벤젠 디술폰산, 나프탈렌 술폰산, 알킬-나프탈렌 술폰산, 및 알케닐-나프탈렌으로 구성된 군에서 선택되는 음이온성 계면 활성제를 추가로 포함하는 방법.
  6. 제 1항에 있어서, 단계 (6)에서, 초임계 유체(SCF)는 공용매와 함께 단계 (5)의 과산화수소 처리된 돼지 피부에 적용되는 방법.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 공용매가 에탄올인 방법.
  8. 제 1항에 있어서, 초임계 유체(SCF) 처리는 온도가 37℃이고, 상기 압력은 350 bar 인 방법.
  9. 제 1항에 있어서, 단계 (7)의 과립화 공정은 액체 질소의 존재하에 단계 (6)의 콜라겐 매트릭스를 절단 또는 분쇄하여 수행되어 10-250μm의 크기를 갖는 콜라겐 입자를 생성시키는 방법.
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
KR1020187002475A 2015-08-11 2016-08-11 고순도 콜라겐 입자의 제조 및 이의 용도 KR102126140B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562203904P 2015-08-11 2015-08-11
US62/203,904 2015-08-11
PCT/CN2016/094634 WO2017025054A1 (en) 2015-08-11 2016-08-11 Preparation of high purity collagen particles and used thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20180021851A KR20180021851A (ko) 2018-03-05
KR102126140B1 true KR102126140B1 (ko) 2020-06-24

Family

ID=57982971

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187002475A KR102126140B1 (ko) 2015-08-11 2016-08-11 고순도 콜라겐 입자의 제조 및 이의 용도
KR1020187002482A KR102116620B1 (ko) 2015-08-11 2016-08-11 무세포 연골 이식편의 제조 및 그 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020187002482A KR102116620B1 (ko) 2015-08-11 2016-08-11 무세포 연골 이식편의 제조 및 그 용도

Country Status (9)

Country Link
US (2) US11185610B2 (ko)
EP (2) EP3334835B1 (ko)
JP (2) JP6587702B2 (ko)
KR (2) KR102126140B1 (ko)
CN (2) CN108025111B (ko)
ES (1) ES2891828T3 (ko)
HK (2) HK1246358A1 (ko)
TW (2) TWI600660B (ko)
WO (2) WO2017025053A1 (ko)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101954905B1 (ko) * 2016-08-08 2019-03-08 주식회사 도프 지방흡입 유출물로부터 초임계공정을 이용하여 콜라겐을 분리하는 방법
JP7012950B2 (ja) * 2016-11-17 2022-01-31 地方独立行政法人東京都立産業技術研究センター 生体組織孔閉鎖用、潰瘍保護用及び血管塞栓療術用ゾル
CN107164298A (zh) * 2017-06-02 2017-09-15 广州新诚生物科技有限公司 超临界流体技术制备软组织去细胞基质的方法
TWI712687B (zh) * 2018-09-11 2020-12-11 亞果生醫股份有限公司 去細胞器官及其製備方法
TWI694817B (zh) * 2019-06-12 2020-06-01 亞果生醫股份有限公司 去細胞骨移植物及包含該去細胞骨移植物之人工移植組件
CN112143243A (zh) * 2019-06-28 2020-12-29 柏登生医股份有限公司 鳞片衍生生活用品及其制造方法
CN111214704B (zh) * 2020-02-25 2022-02-25 南通大学 一种超临界流体萃取反应制备脱细胞神经移植物的方法
CN114190075B (zh) * 2020-07-13 2022-12-20 爱恩斯生物科技(昆山)有限公司 水合态无细胞化皮肤替代材料及其制造方法
CN112113786B (zh) * 2020-09-22 2022-08-12 北京小米移动软件有限公司 检测方法及装置、测试设备、存储介质
CN112604030A (zh) * 2020-12-03 2021-04-06 广东省医疗器械研究所 一种脱细胞基质、骨修复支架及其制备方法
CN113244439A (zh) * 2021-06-24 2021-08-13 北京欣康研医药科技有限公司 一种无抗原胶原聚集体及其制备方法
AU2022316212A1 (en) * 2021-07-21 2024-01-25 Organogenesis Inc. Porcine collagen compositions and methods of use thereof
CN113577389A (zh) * 2021-08-06 2021-11-02 中国医学科学院整形外科医院 一种来自猪耳软骨的脱细胞软骨材料及制备方法和应用
EP4403568A1 (en) * 2021-09-17 2024-07-24 Acro Biomedical Company. Ltd. Use of collagen particles to promote hair follicle formation or angiogenesis
TWI791290B (zh) * 2021-09-17 2023-02-01 亞果生醫股份有限公司 膠原蛋白顆粒於促進毛囊生成或血管生成之用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011042794A2 (en) * 2009-10-07 2011-04-14 Kerecis Ehf A scaffold material for wound care and/or other tissue healing applications
JP2014519906A (ja) * 2011-05-27 2014-08-21 コーマトリックス カーディオバスキュラー， インコーポレイテッド 滅菌された無細胞の細胞外マトリックス組成物及びその作製方法
WO2014181886A1 (ja) * 2013-05-07 2014-11-13 一般財団法人化学及血清療法研究所 粒子状脱細胞化組織を含むハイブリッドゲル

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2699408B1 (fr) * 1992-12-21 1995-03-24 Bioland Procédé de traitement de tissus osseux et biomatériaux implantables correspondants.
FR2735372B1 (fr) * 1995-06-13 1997-09-05 Bioland Nouvelles utilisations d'un courant de dioxyde de carbone supercritique a titre d'agent antiviral
US6613278B1 (en) * 1998-11-13 2003-09-02 Regeneration Technologies, Inc. Tissue pooling process
US20080077251A1 (en) * 1999-06-07 2008-03-27 Chen Silvia S Cleaning and devitalization of cartilage
CN1116794C (zh) * 2000-07-13 2003-08-06 胡杰 制备软骨移植体的方法
US7008591B2 (en) * 2001-10-17 2006-03-07 Edwards Lifesciences Corporation Supercritical fluid extraction process for tissue preparation
US9216236B2 (en) * 2005-03-07 2015-12-22 Technion Research & Development Foundation Limited Natural tissue-derived decellularized matrix and methods of generating and using same
CN100348277C (zh) * 2005-08-09 2007-11-14 中国人民解放军第三军医大学 成骨细胞特异性转录因子－2基因修饰的组织工程化骨的构建方法
JP2007105081A (ja) * 2005-10-11 2007-04-26 Japan Health Science Foundation 超臨界二酸化炭素による移植用生体組織の脱細胞処理
EP2031968B1 (en) * 2006-04-21 2017-11-22 Wake Forest University Health Sciences Structurally modified acellular tissue engineering scaffolds and methods of production
CN101332312B (zh) * 2007-06-29 2013-09-11 上海国睿生命科技有限公司 组织工程化移植物的处理方法
US20090062233A1 (en) 2007-08-09 2009-03-05 Xin Ji Modified starch material of biocompatible hemostasis
US20100209943A1 (en) * 2007-10-10 2010-08-19 David Goldberg Measurement Of Protease Activity In Post-Mortem Meat Samples
KR100947553B1 (ko) * 2008-02-14 2010-03-12 주식회사 바이오랜드 생체조직 이식재 및 그의 제조 방법
US7771652B2 (en) * 2008-04-11 2010-08-10 Novasterilis, Inc. Combined use of an alkaline earth metal compound and a sterilizing agent to maintain osteoinduction properties of a demineralized bone matrix
JP5429708B2 (ja) * 2009-03-23 2014-02-26 学校法人福岡大学 生体組織再生用移植材およびその製造方法
CA2770490C (en) * 2009-08-11 2024-04-16 The Johns Hopkins University Compositions and methods for implantation of processed adipose tissue and processed adipose tissue products
TW201112948A (en) * 2009-08-18 2011-04-16 Lifecell Corp Method for processing tissues
WO2011031827A2 (en) * 2009-09-09 2011-03-17 Cook Biotech Incorporated Manufacture of extracellular matrix products using supercritical or near supercritical fluids
CN102085390B (zh) * 2009-12-07 2014-08-27 上海国睿生命科技有限公司 软骨脱细胞基质及其制备方法和用途
US8926710B2 (en) * 2010-10-25 2015-01-06 Warsaw Orthopedic, Inc. Osteoinductive bone graft injectable cement
WO2012141454A2 (en) * 2011-04-12 2012-10-18 Hans Biomed. Cor. Graft materials derived from mammalian cartilage
KR101269618B1 (ko) * 2011-04-12 2013-06-05 한스바이오메드 주식회사 포유류의 연골조직에서 유래한 생체이식재
US9623051B2 (en) * 2011-04-15 2017-04-18 The Regents Of The University Of California Decellularized extracellular matrix
US20130079494A1 (en) * 2011-09-22 2013-03-28 Tyco Healthcare Group Lp Processing Tissue Utilizing Supercritical Fluid
KR101329411B1 (ko) * 2012-05-31 2013-11-14 주식회사 엘지생활건강 피부투과성 펩타이드
GB201215725D0 (en) * 2012-09-04 2012-10-17 Univ Leeds Composite connective tissue and bone implants
CN103223194A (zh) * 2013-01-15 2013-07-31 广州莱德尔生物科技有限公司 一种用于软骨损伤修复的软骨移植物及其制备方法
CN104174068B (zh) * 2013-05-22 2016-02-17 烟台正海生物科技股份有限公司 一种生物型软骨修复材料及其制备方法
MX2016001247A (es) 2013-07-30 2016-08-17 Musculoskeletal Transplant Foundation Matrices derivadas de tejido suave acelular y metodos para preparar las mismas.
US20150328561A1 (en) * 2014-05-16 2015-11-19 Battelle Energy Alliance, Llc Methods for separating bio-oils
CN104107456B (zh) * 2014-07-09 2016-05-25 四川大学 无抗原胶原聚集体及其制备方法
CN104189944B (zh) * 2014-09-05 2017-02-15 四川大学 高纯度天然胶原纤维及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011042794A2 (en) * 2009-10-07 2011-04-14 Kerecis Ehf A scaffold material for wound care and/or other tissue healing applications
JP2014519906A (ja) * 2011-05-27 2014-08-21 コーマトリックス カーディオバスキュラー， インコーポレイテッド 滅菌された無細胞の細胞外マトリックス組成物及びその作製方法
WO2014181886A1 (ja) * 2013-05-07 2014-11-13 一般財団法人化学及血清療法研究所 粒子状脱細胞化組織を含むハイブリッドゲル

Also Published As

Publication number Publication date
CN107849596B (zh) 2022-02-25
EP3328455A4 (en) 2019-04-03
TWI641683B (zh) 2018-11-21
KR20180021853A (ko) 2018-03-05
ES2891828T3 (es) 2022-01-31
KR102116620B1 (ko) 2020-05-29
CN108025111A (zh) 2018-05-11
TW201712026A (zh) 2017-04-01
CN107849596A (zh) 2018-03-27
EP3328455B1 (en) 2021-07-07
HK1248149A1 (zh) 2018-10-12
JP6587702B2 (ja) 2019-10-09
EP3334835A1 (en) 2018-06-20
US10881761B2 (en) 2021-01-05
KR20180021851A (ko) 2018-03-05
WO2017025053A1 (en) 2017-02-16
JP2018523467A (ja) 2018-08-23
HK1246358A1 (zh) 2018-09-07
JP2018527047A (ja) 2018-09-20
TW201710493A (zh) 2017-03-16
US20200040030A1 (en) 2020-02-06
EP3328455A1 (en) 2018-06-06
EP3334835B1 (en) 2024-10-02
CN108025111B (zh) 2021-04-16
EP3334835A4 (en) 2019-05-01
TWI600660B (zh) 2017-10-01
WO2017025054A1 (en) 2017-02-16
JP6889118B2 (ja) 2021-06-18
US11185610B2 (en) 2021-11-30
US20180369449A1 (en) 2018-12-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102126140B1 (ko) 고순도 콜라겐 입자의 제조 및 이의 용도
US6696074B2 (en) Processing fetal or neo-natal tissue to produce a scaffold for tissue engineering
US5397353A (en) Implant tissue
AU2002309898A1 (en) EB matrix production from fetal tissues and its use for tissue repair
US20120297550A1 (en) Process for sterilizing acellular soft tissue with irradiation
US20100323440A1 (en) Process for sterilizing acellular soft tissue under pressure
US20100296969A1 (en) Process for sterilizing acellular soft tissue under vacuum
CN108355172A (zh) 一种软组织修复用脱细胞罗非鱼皮仿生基质及其制备方法和应用
EP4403568A1 (en) Use of collagen particles to promote hair follicle formation or angiogenesis
WO2008097882A1 (en) Treatment of soft tissue to increase porosity
RU2353397C2 (ru) Биорассасываемая коллагеновая матрица, способ ее получения и применение
US20220047774A1 (en) Decellularized muscle matrices and methods for making and using same
TWI791290B (zh) 膠原蛋白顆粒於促進毛囊生成或血管生成之用途
CN112915259B (zh) 一种两段式加压复合流体多层次脱脂的结构性蛋白器官修补膜片、制法、脱脂方法及处理剂
EP1414368B1 (en) Eb matrix production from fetal tissues and its use for tissue repair
TW202228614A (zh) 一種結構性蛋白器官修補膜及其處理方法與處理劑
CN113893389B (zh) 重组胶原蛋白-脱钙骨基质微粒双相凝胶软组织填充剂及其制备方法
KR20240038958A (ko) 유두-유륜 복합체의 재건을 위한 생물학적 보형물
CN117582553A (zh) 一种用于生物组织内细胞去除的方法
JP2000290130A (ja) 高級化粧原料の新規な製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant