KR102013788B1 - 인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류 - Google Patents
인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102013788B1 KR102013788B1 KR1020170145448A KR20170145448A KR102013788B1 KR 102013788 B1 KR102013788 B1 KR 102013788B1 KR 1020170145448 A KR1020170145448 A KR 1020170145448A KR 20170145448 A KR20170145448 A KR 20170145448A KR 102013788 B1 KR102013788 B1 KR 102013788B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- hegf
- vector
- microalgae
- ptd
- protein
- Prior art date
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 claims abstract description 74
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 claims abstract description 74
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 241000206744 Phaeodactylum tricornutum Species 0.000 claims description 22
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 16
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 10
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N Glutamine Chemical compound OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 7
- 108020005345 3' Untranslated Regions Chemical group 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 2
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 2
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 2
- 231100000245 skin permeability Toxicity 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009010 Bradford assay Methods 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- ZWQVYZXPYSYPJD-RYUDHWBXSA-N Glu-Gly-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZWQVYZXPYSYPJD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N SYBR Green I Chemical compound CN(C)CCCN(CCC)C1=CC(C=C2N(C3=CC=CC=C3S2)C)=C2C=CC=CC2=[N+]1C1=CC=CC=C1 CGNLCCVKSWNSDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 108091000085 chlorophyll binding Proteins 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- SJWWTRQNNRNTPU-ABBNZJFMSA-N fucoxanthin Chemical compound C[C@@]1(O)C[C@@H](OC(=O)C)CC(C)(C)C1=C=C\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)C(=O)C[C@]1(C(C[C@H](O)C2)(C)C)[C@]2(C)O1 SJWWTRQNNRNTPU-ABBNZJFMSA-N 0.000 description 1
- AQLRNQCFQNNMJA-UHFFFAOYSA-N fucoxanthin Natural products CC(=O)OC1CC(C)(C)C(=C=CC(=CC=CC(=CC=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C(=O)CC23OC2(C)CC(O)CC3(C)C)C)CO)C(C)(O)C1 AQLRNQCFQNNMJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9706—Algae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF], i.e. urogastrone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
본 명세서는 서열번호 1의 프로모터; 및 인간 상피세포 성장인자(hEGF)를 코딩하는 유전자를 포함하는 hEGF 발현구역;을 포함하는 벡터, 상기 벡터로 형질전환된 미세조류, 상기 형질전환된 미세조류를 이용하여 hEGF 단백질 및 PTD-hEGF 단백질 중 어느 하나 이상을 생산하는 방법 및 상기 생산방법에 따라 제조된 hEGF 단백질 및 PTD-hEGF 단백질 중 어느 하나 이상을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 일측면에 따라 생산된 hEGF 단백질 및 PTD-hEGF 단백질은 기존 대장균에서 생산되는 hEGF 단백질과 달리 내성독성의 위험을 원천 봉쇄할 수 있어, 친환경 화장품의 원료로 사용될 수 있다.
Description
본 명세서는 인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류로, 특히 서열번호 2 또는 5로 표시되는 염기서열을 포함하는 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 페오닥틸룸 트리코뉴튬(Phaeodactylum tricornutum)에 관한 것이다.
인간상피세포 성장인자(hEGF)는 주름개선 화장품의 주 원료로 사용되는 기능성 단백질이다. 현재 대부분의 hEGF는 대장균에서 생산되어 사용되고 있다. 그러나 대장균은 내성독소(endotoxin)를 포함하고 있기 때문에 이에 따른 위험성을 내포하고 있다.
따라서, 내성독소에 따른 위험성을 원척적으로 제거한 기존의 대장균 생산 hEGF 원료의 대체제가 필요한 실정이다.
상기와 같은 문제점에 착안하여, 본 발명의 발명자들은 내성독성의 가능성을 원천 봉쇄하면서, 효과적으로 hEGF 단백질을 생산할 수 있는 방법에 관한 연구를 하여 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명의 일 측면은, 서열번호 2의 인간 상피세포 성장인자(hEGF)를 코딩하는 염기서열을 포함하는 벡터를 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은, 서열번호 5의 피부 침투성 인간 상피세포 성장인자(PTD-hEGF)를 코딩하는 염기서열을 포함하는 벡터를 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은, 서열번호 6 또는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을포함하는 벡터를 제공하고자 한다.
본 발명의 다른 측면은, 상기 벡터로 형질전환된 미세조류를 제공하고자 한다.
본 발명의 또 다른 측면은, 상기 형질전환된 미세조류를 이용하여 hEGF 단백질 또는 PTD-hEGF를 생산하는 방법을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은, 서열번호 1의 프로모터; 및 인간 상피세포 성장인자(hEGF)를 코딩하는 유전자를 포함하는 hEGF 발현구역;을 포함하는, 벡터를 제공한다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 His-tag 서열 및 TEV site 서열을 더 포함하는, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 피부침투성 펩타이드 서열인 PTD 서열을 더 포함하는, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 서열번호 2로 표시되는 염기서열인, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 서열번호 5로 표시되는 염기서열인, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 벡터는 서열번호 6으로 표시되는 염기서열을포함하는, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 벡터는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는, 벡터일 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 상기 어느 하나에 따른 벡터로 형질전환된 미세조류를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 미세조류는 페오닥틸룸 트리코뉴튬(Phaeodactylum tricornutum)인, 미세조류일 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 미세조류는 수탁번호 KCTC 13382BP 또는 KCTC 13383BP으로 기탁된 것을 특징으로 하는, 미세조류일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 형질전환된 미세조류를 이용하여 인간상피세포 성장인자(hEGF) 단백질을 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 인간상피세포 성장인자(hEGF)단백질은 피부 침투성 인간상피세포 성장인자(PTD-hEGF)단백질인, 방법일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 생산 방법에 따라 생산된 hEGF 단백질 또는 PTD-hEGF단백질을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 화장료 조성물은 주름개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 형질전환된 미세조류를 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 미세균주는 내성독성 없이 hEGF 또는 PTD-hEGF단백질을 생산할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따라 생산된 hEGF 또는 PTD-hEGF 단백질은 기존의 대장균에 의해 생산된 hEGF 단백질을 대체할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따라 생산된 hEGF 또는 PTD-hEGF 단백질은 피부침투성이 우수하다.
본 발명의 일 측면에 따라 생산된 hEGF 또는 PTD-hEGF 단백질을 포함하는 화장료 조성물은 주름개선 효과가 우수하다.
도 1은 본 발명 실시예에 따른 벡터 구성으로, GS: glutamin synthase (promoter), TEV: tabacco etch virus (TEV cleavage site), 3-UTR: 3 terminal untranslated region (termintor), FcpB: Fucoxanthin/chlorophyll binding protein B (promoter), shble: zeocin resistance gene (selection marker)이다.
도 2는 유전자 삽입여부를 cDNA-PCR로 확인한 결과로, 도 2a가 hEGF이며, 도 2b가 PTD-hEGF 의 cDNA-PCR 결과이다.
도 3은 mRNA 발현을 확인한 결과로, 도 3a가 hEGF 이며, 도 3b가 PTD-hEGF 의 qRT-PCR 결과이다.
도 4는, 단백질 발현결과를 확인한 것으로, SDS-PAGE (위) 및 Western blot (아래) 결과이다.
도 5는 세포 활성을 측정하기 위한 본 발명 실험예 4의 MTT 분석결과이다.
도 2는 유전자 삽입여부를 cDNA-PCR로 확인한 결과로, 도 2a가 hEGF이며, 도 2b가 PTD-hEGF 의 cDNA-PCR 결과이다.
도 3은 mRNA 발현을 확인한 결과로, 도 3a가 hEGF 이며, 도 3b가 PTD-hEGF 의 qRT-PCR 결과이다.
도 4는, 단백질 발현결과를 확인한 것으로, SDS-PAGE (위) 및 Western blot (아래) 결과이다.
도 5는 세포 활성을 측정하기 위한 본 발명 실험예 4의 MTT 분석결과이다.
"인간 상피세포 성장인자(human epidermal growth factor, hEGF 또는 EGF)"는 유로가스트론(urogastrone)으로 알려진 53개의 아미노산과 3개의 이황화물(disulfide) 결합을 갖는 분자량 6045 Da의 폴리펩타이드로서, 주로 장관 점막, 각막 표피 조직, 폐 표피 조직의 재생 및 분화를 자극함으로써, 표피 증식, 혈관형성 촉진 및 상처치유력 증강, 위산 분비 억제 역할 등을 하는 것으로 알려져 있다. 이러한 기능으로 인하여 hEGF는 상처 치료제로 개발되어 광범위하게 사용되고 있으며 최근에는 hEGF의 주름 개선이나 노화 방지 효과가 증명되어 기능성 화장품 원료로도 각광 받고 있다.
본 발명의 일측면에 따르면, 미세조류로부터 hEGF를 생산할 경우 내성독소에 의한 위험성을 원천적으로 제거할 수 있으며, 기존의 대장균 생산 hEGF 원료의 대체제로 사용 할 수 있다. 또한 피부침투성을 증가시켜 효율을 증대시킨 피부침투성 인간상피세포 성장인자(PTD-hEGF) 역시 미세조류로부터 생산할 수 있다. 이러한 미세조류 생산 hEGF 및 PTD-hEGF는 최근 화장품 트렌드인 친환경적 및 천연화 추세에 부합하는 화장품 원료로 사용할 수 있다.
이하 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명의 일측면은, 서열번호 1의 프로모터; 및 인간 상피세포 성장인자(hEGF)를 코딩하는 유전자를 포함하는 hEGF 발현구역;을 포함하는, 벡터를 제공한다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 His-tag 서열 및 TEV site 서열을 더 포함하는, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 피부침투성 펩타이드 서열인 PTD 서열을 더 포함하는, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 서열번호 2로 표시되는 염기서열인, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 hEGF 발현구역은 서열번호 5로 표시되는 염기서열인, 벡터일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 벡터는 서열번호 6으로 표시되는 염기서열을 포함하는, 벡터일 수 있다. 구체적으로 상기 서열번호 6은 GS promotor서열, His-tag서열, TEV 서열, EGF 서열, 3'-UTR 서열 및 Shble cassete를 포함한다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 벡터는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는, 벡터일 수 있다. 구체적으로 상기 서열번호 7로 표시되는 염기서열은 GS promotor서열, His-tag서열, TEV 서열, PTD 서열, EGF 서열, 3'-UTR 서열 및 Shble cassete를 포함한다.
상기 Shble cassete는 FcpB, Shble 및 3'-UTR 포함를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 상기 어느 하나에 따른 벡터로 형질전환된 미세조류를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 미세조류는 페오닥틸룸 트리코뉴튬(Phaeodactylum tricornutum)인, 미세조류일 수 있다. 상기 페오닥틸룸 트리코뉴튬은 국외 미세조류 은행으로부터 용이하게 입수가 가능하다. 구체적으로, 분양기관인 UTEX에서 분양번호 UTEX 646으로 Phaeodactylum tricornutum (Bohlin)을 분양받아 사용할 수 있으며, 분양기관인 CCAP에서 분양번호 CCAP1052/6로 Phaeodactylum tricornutum (Bohlin)을 분양받아 사용할 수 있으며, 분양기관인 CCMP에서 분양번호 CCMP2559로 Phaeodactylum tricornutum을 분양받아 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 측면에서, 상기 미세조류는 수탁번호 KCTC 13382BP 또는 KCTC 13383BP으로 기탁된 미세조류일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이때, 수탁번호 KCTC 13382BP로 기탁된 미세조류는 목적 단백질인 EGF를 생산할 수 있는 미세조류이고, 수탁번호 KCTC 13383BP로 기탁된 미세조류는 목적 단백질인 PTD-EGF를 생산할 수 있는 미세조류이다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 형질전환된 미세조류를 이용하여 인간상피세포 성장인자(hEGF) 단백질을 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 인간상피세포 성장인자(hEGF)단백질은 피부 침투성 인간상피세포 성장인자(PTD-hEGF)단백질인, 방법일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 생산 방법에 따라 생산된 hEGF 단백질 또는 PTD-hEGF단백질을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 상기 화장료 조성물은 주름개선용 화장료 조성물일 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 상기 형질전환된 미세조류를 포함하는 키트를 제공한다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 프로모터 서치 및 선별
(1) 실험방법
미세조류인 Phaeodactylum tricornutum에서 발현량이 높은 단백질을 선별하여 그 promoter 부분을 사용하였으며, 구체적으로 하기와 같은 방법으로 프로모터를 서치하였다.
- P. tricornutum (Bohlin) UTEX 646 을 UTEX (utex.org) 로부터 분양받았다.
-상기 P. tricornutum 균주를 200 mL F/2 배지 (50% 인공해수) 에 배양하였다.
-상기 배양액 50 mL를 취하여 원심분리를 통해 cell pellet을 얻은 후, 초음파 분쇄를 통해 세포 파쇄하였다.
- 원심분리 (17000 rpm, 15 분)를 통해 파쇄 찌꺼기를 제거하고 상등액을 취하여 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단백질 분리하였다.
- 전기영동 결과 단백질 띠가 진한 5개로부터 단백질을 다시 추출하여 LC-MS/MS 분석 진행하였다.
- P. tricornutum에서 발현량이 높은 단백질 선별 후, genomic DNA 정보로부터 promoter 지역 선정하였다.
(2) 실험결과_단백질 발현 promoter 선별: Glutamin synthase promoter
- P. tricornutum에서 과발현 되는 단백질 분석 결과 glutamin synthase가 가장 과발현 되는 것으로 분석되어 glutamin synthase promoter를 사용하기로 하였다.
실시예 2. 벡터 구성
벡터 구성은 하기와 같은 방법으로 준비하였다.
- F/2 배지 (50% 인공해수)에서 배양한 P. tricornutum 배양액 50 mL를 취하여 cell pellet을 얻은 후, 이로부터 genomic DNA (gDNA)를 추출하였다.
- 추출한 gDNA로부터 PCR을 통해 상기 실시예 1에서 선별한 promoter 부분의 DNA을 확보하였다.
- 상기 promoter 부분을 포함하여 EGF 발현 vector를 도 1 과 같이 구성하여, 목적 단백질인 EGF를 생산할 수 있는 벡터 및 PTD-EGF를 생산할 수 있는 벡터를 구성하였다.
-상기 벡터를 구성하는 서열은 하기 표 1와 같았다.
서열번호 1 | GS promotor |
서열번호 2 | His-TEV-EGF |
서열번호 3 | 3'-UTR |
서열번호 4 | Shble cassete (FcpB, Shble, 3'-UTR을 포함) |
서열번호 5 | His-TEV-PTD-EGF |
실시예 3. 미세조류 형질전환
미세조류 형질전환은 하기와 같은 방법으로 실시하였다.
- 상기 실시예 2에서의 목적 단백질 생산용 Vector는 E. coli DH5a (NEB® 5-alpha Competent E. coli) 를 통해 대량으로 확보하였다.
- Miniprep 방법 및 phenol/chloroform 유전자 정제법을 활용하여 P. tricornutum 형질전환에 필요한 고순도 vector를 준비하였다.
- 고순도 vector를 금나노입자에 코팅한 후, 입자투사장치 (Particle bombardment)를 통해 P. tricornutum으로 목적 단백질 발현 vector를 전달함으로써 형질전환 시켰다.
- 상기 형질전환체는 항생제 zeocin (100 ㎍/mL) 이 함유된 F/2 배지에서 선별 진행하였다.
- 상기 선별된 미세조류에 대하여 하기에 개시한 실험예를 통하여 최종 선별한 형질전환 미세조류는 각각 수탁번호 KCTC 13382BP 및 KCTC 13383BP로 기탁하였다. 이때, 상기 수탁번호 KCTC 13382BP로 기탁된 미세조류는 목적 단백질인 EGF를 생산할 수 있는 미세조류(Phaeodactylum tricornutum, PT-GSp-O-HTE)이고, 수탁번호 KCTC 13383BP로 기탁된 미세조류는 목적 단백질인 PTD-EGF를 생산할 수 있는 미세조류(Phaeodactylum tricornutum, PT-GSp-O-HTPE)이다.
실험예. hEGF 및 PTD-hEGF 발현 확인
상기 실시예 3을 통해 선별된 P. tricornutum 형질전환체로부터 hEGF 및 PTD-hEGF의 발현 여부는 삽입 유전자의 mRNA발현 및 단백질 발현을 통해 확인하였으며, 구체적으로 하기 실험예 1 내지 3을 통해 확인하였다.
실험예 1. cDNA PCR을 통해 유전자 삽입 여부 확인
(1) 실험방법
- 상기 실시예 3에서, 형질전환 과정을 통해 얻어진 미세조류 형질전환체 중 hEGF 및 PTD-hEGF 각각 25개의 형질전환체를 선별하여 배양하였다. 배양 중 잘 자라는 형질전환체 10개씩 선별하여 cDNA PCR을 진행하였다.
- cDNA PCR은 미세조류 형질전환체로부터 RNeasy Plant Mini Kit (QIAGEN)을 통해 RNA 추출 후, QuantiTect Reverse Transcription Kit (QIAGEN)을 통해 cDNA를 합성하였다.
- 준비된 cDNA와 EGF 염기서열에 대응하는 primer (EGF mRNA 확인) 및 PTD- EGF 염기서열에 대응하는 primer를 혼합하여 taq polymerase (i-StarTaq™ DNA Polymerase)를 통해 PCR을 진행하였다.
- 대조군으로 EGF 염기 서열이 없는 vector 를 형질전환한 blank 형질전환체를 사용하였다.
(2) cDNA-PCR결과
- 삽입 유전자 최종길이는 HIS-TEV-hEGF의 경우는 243 bp 이고 HIS-TEV-PTD-hEGF의 경우는 297 bp임을 확인하였다.
- DNA 전기영동 결과는 도 2에 도시하였다. 도 2a가 hEGF이며, 도 2b가 PTD-hEGF 의 cDNA-PCR 결과이다. 확인 결과 비슷한 위치에서 목적 유전자 띠를 확인할 수 있었다.
- 대조군으로는 목적 유전자가 삽입되지 않은 빈 vector 를 삽입한 형질전환체 (Blank)사용하였는데, 여기서는 목적 유전자 띠를 확인하지 못하였다.
실험예 2. quantitative real-time PCR (qRT-PCR) 을 통한 messenger RNA (mRNA) 발현 정도 확인
(1) 실험방법
- 실험예 1에서, cDNA PCR에서 실험한 동일한; hEGF 및 PTD-hEGF 발현; 미세조류 형질전환체 각각 10개의 cDNA를 사용하여 qRT-PCR을 진행하였다.
- 준비된 cDNA와 EGF 염기서열에 대응하는 primer (EGF mRNA 확인) 및 PTD- EGF 염기서열에 대응하는 primer를 혼합하고, LightCycler® 480 SYBR Green I Master (Roche) 키트를 사용하여 qRT-PCR을 진행하였다.
- qRT-PCR은 LightCycler® 480 Instrument II를 사용하였다.
- 대조군으로 wild type 및 EGF 염기 서열이 없는 vector 를 형질전환한 blank 형질전환체를 사용하였다.
(2) qRT-PCR 결과
- 결과는 도 3에 도시하였다. 도 3a가 hEGF 이며, 도 3b가 PTD-hEGF 의 qRT-PCR 결과이다.
- 대조군으로 사용한 WT(wild type) 및 Blank보다 hEGF 및 PTD-hEGF 생성 형질전환체에서 hEGF의 mRNA 발현량이 더 큰 것을 확인 할 수 있었다.
실험예 3. EGF-abtibody를 활용한 Western blot을 통한 목적 단백질의 발현 여부는 확인
(1) 실험방법
- 상기 실험예 2에서, mRNA 발현량이 높은 P. tricornutum 형질전환체를 선별 하여 EGF antibody (ab9695, Abcam) 를 이용하여 Western blot을 진행하였다.
- 상기 실시예 3에서, 형질전환체 배양액 50 mL를 취하여 cell pellet 얻은 후, 초음파 분쇄법에 의해 세포 분쇄하였다.
- 상등액을 SDS-PAGE를 진행후 Western blot을 통해 EGF 발현을 확인하였다.
- 대조군으로 EGF염기 서열이 없는 vector 를 형질전환한 blank 형질전환체를 사용하였다.
(2) Western blot 결과
- 결과는 도 4에 도시하였다. 도 4는 단백질 발현결과를 확인한 것으로, SDS-PAGE (위) 및 Western blot (아래) 결과이다.
- 단백질 분자량 10 kDa 근처에서 목적 단백질의 밴드 확인 할 수 있었으며, His-TEV-hEGF (9.25 kDa), His-TEV-PTD-hEGF (11.64 kDa)이다.
- 대조군인 Blnak에서는 상기와 같은 단백질 발현을 확인하지 못하였다.
실험예 4. MTT 분석 (세포 활성 측정)
(1) 실험방법
- 상기 실험예 2, 3에서, hEGF및 PTD-hEGF 발현량이 높은 형질전환체 배양액 50 mL를 취하여 cell pellet 얻은 후, 초음파 분쇄법에 의해 세포 분쇄하였다.
- 원심분리 (17000 rpm, 15 min)을 통해 찌꺼기를 제거하고, 상등액을 취하였다.
- 상등액 상태에서 Bradford assay를 통해 총 단백질 농도를 측정하였다.
- hEGF 발현 여부는 MTT 분석 (세포 활성 시험)을 통해 측정하였다. MTT 분석은 하기와 같은 실험방법으로 실험하였다.
- BALB/3T3 cell (ATCC; The Global Bioresource Center 에서 분양받음)을 96 well 플레이트에 분주하여 24시간 CO2 incubator에 둔 후, 다음 날 PBS로 well을 세척해주었다.
- 단백질 추출액을 농도별로 처리하고, 24시간 CO2 incubator에서 방치 후, 다음 날 MTT시약 (EZ-Cytox, DOGEN)을 처리하였다.
- CO2 incubator에 3시간 반응 후, 상등액 제거하고 DMSO를 100ul씩 넣어준 상태에서 흡광도 (540 nm)를 측정하였다.
- 실험결과는 도 5와 같았다. hEGF의 경우 인간상피세포의 분화 및 활성을 촉진시키는 역할을 하였다. MTT 분석을 통해 세포 활성을 측정할 때 hEGF 및 PTD-hEGF를 처리하면 인간상피세포 활성이 높게 나타나게 됨을 확인하였다.
- 실제 대조군과 비교했을 때, P. tricornutum hEGF 생성 형질전환체 및 PTD-hEGF 생성 형질전환체의 세포 추출액을 첨가했을 때 세포 활성이 증가한 것을 확인할 수 있었다.
- 또한 PTD-hEGF 생성 형질전환체의 세포 추출물을 처리한 경우가 hEGF 생성 형질전환체 세포 추출물 처리 시보다 세포 활성 증대효과가 더 있는 것으로 보아, PTD에 의한 투과촉진에 의한 효율 증대임을 확인할 수 있었다.
<110> KOREA INSTITUTE OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
<120> A vector for expressing hEGF or PTD-hEGF and microalgae
transformed with the same
<130> 17P638IND
<160> 7
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 997
<212> DNA
<213> Phaeodactylum tricornutum
<220>
<221> promoter
<222> (1)..(997)
<400> 1
tggtgccgtt gatgccgtgg ctctgcaaaa gagtcgaacg ccatgatggt atccgacggc 60
ttgcttggtg ggagggcgga aaccttgaaa aaacgccgtc tcgtggtgtg attcggaagg 120
caccgctttg gaattggtgg agaatagtgg aagtgtaaat gtgtttggga aggtcgagaa 180
ccatcggaac cggtggcacg atcgccgttg gatagtagtc acattagtag cggtcctcct 240
catgttccaa tccgttcgat cctgttcggt agcgacggaa cgaccggacg gaccggacgt 300
gtgttgtgtt tccttttggc cttttggttt cttcgggcca gaaagagggg gtcgacggtt 360
ggttcggcga aaggacagac agaccgattt ttgacggcgt ttggaatttg ttgtgttcaa 420
aatttccaaa ggcaataagg aacgcaccga acaagggacc taattgctgt cgtcatcgaa 480
gaagtaaatg cgtgacatca cagaagcggc aaagttccgc cgaggagatc ggaacttgat 540
gaagtttgga tacgtctcgc cgtcccggaa ccagcagaat cgacgaaggc ctgccatttt 600
gcgtagactt tcccggtgtt ggtccgtaga cggatagaga acgtacaggt atggttctac 660
ggcgacagaa gatccaccga cgcgagagag aaattttggg gaatggatct tttggaacgg 720
accctcagat ccgaacccga ctcaaccgac cgaagtaatc gcccccaaaa ttacagtaag 780
tcacacacag acaacaccag tccccccaaa ggaaccccag ttgcaccaag caaaacacac 840
acaccaaatt cgaacacgac gcaccctcgt gcaggcagca accacgatat cctgatcgat 900
cacaacgtat aaagcgtgtg tccgcgttct gcctccctac ctaacacaca cactcgtata 960
ctctctcata tacacaccac atcccaaact tccaagc 997
<210> 2
<211> 243
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> His-TEV-EGF
<400> 2
atgggcagca gccaccacca ccaccaccac agcagcggcg actacgacat ccccaccggt 60
gaaaacctgt acttccaggg caacagtgac tccgaatgcc ccctgtccca cgacggatac 120
tgcctccacg acggtgtgtg catgtacatt gaagccttgg acaagtacgc ctgcaactgt 180
gtcgtcggct acatcggaga acgttgtcag taccgtgacc tgaagtggtg ggaactgcgc 240
taa 243
<210> 3
<211> 330
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-UTR
<400> 3
cagaagcgtg ctatcgaact caaccaggga cgtgcggcac aaatgggcat ccttgctctc 60
atggtgcacg aacagttggg agtctctatc cttccttaaa aatttaattt tcattagttg 120
cagtcactcc gctttggttt cacagtcagg aataacacta gctcgtcttc accatggatg 180
ccaatctcgc ctattcatgg tgtataaaag ttcaacatcc aaagctagaa cttttggaaa 240
gagaaagaat atccgaatag ggcacggcgt gccgtattgt tggagtggac tagcagaaag 300
tgaggaaggc acaggatgag ttttctcgag 330
<210> 4
<211> 862
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Shble cassete
<400> 4
acataccttc agcgtcgtct tcactgtcac agtcaactga cagtaatcgt tgatccggag 60
agattcaaaa ttcaatctgt ttggacctgg ataagacaca agagcgacat cctgacatga 120
acgccgtaaa cagcaaatcc tggttgaaca cgtatccttt tgggggcctc cgctacgacg 180
ctcgctccag ctggggcttc cttactatac acagcgcgca tatttcacgg ttgccagatg 240
tcaagatggc caagttgacc agtgccgttc cggtgctcac cgcgcgcgac gtcgccggag 300
cggtcgagtt ctggaccgac cggctcgggt tctcccggga cttcgtggag gacgacttcg 360
ccggtgtggt ccgggacgac gtgaccctgt tcatcagcgc ggtccaggac caggtggtgc 420
cggacaacac cctggcctgg gtgtgggtgc gcggcctgga cgagctgtac gccgagtggt 480
cggaggtcgt gtccacgaac ttccgggacg cctccgggcc ggccatgacc gagatcggcg 540
agcagccgtg ggggcgggag ttcgccctgc gcgacccggc cggcaactgc gtgcacttcg 600
tggccgagga gcaggactga accttcctta aaaatttaat tttcattagt tgcagtcact 660
ccgctttggt ttcacagtca ggaataacac tagctcgtct tcaccatgga tgccaatctc 720
gcctattcat ggtgtataaa agttcaacat ccaaagctag aacttttgga aagagaaaga 780
atatccgaat agggcacggc gtgccgtatt gttggagtgg actagcagaa agtgaggaag 840
gcacaggatg agttttctcg ag 862
<210> 5
<211> 297
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> His-TEV-PTD-EGF
<400> 5
atgggcagca gccaccacca ccaccaccac agcagcggcg actacgacat ccccaccggt 60
gaaaacctgt acttccaggg cagacaaatc aagatttggt tccaaaaccg tcgtatgaag 120
tggaagaaga ccggtaacag tgactccgaa tgccccctgt cccacgacgg atactgcctc 180
cacgacggtg tgtgcatgta cattgaagcc ttggacaagt acgcctgcaa ctgtgtcgtc 240
ggctacatcg gagaacgttg tcagtaccgt gacctgaagt ggtgggaact gcgctaa 297
<210> 6
<211> 4767
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EGF expression vector
<400> 6
catatgtggt gccgttgatg ccgtggctct gcaaaagagt cgaacgccat gatggtatcc 60
gacggcttgc ttggtgggag ggcggaaacc ttgaaaaaac gccgtctcgt ggtgtgattc 120
ggaaggcacc gctttggaat tggtggagaa tagtggaagt gtaaatgtgt ttgggaaggt 180
cgagaaccat cggaaccggt ggcacgatcg ccgttggata gtagtcacat tagtagcggt 240
cctcctcatg ttccaatccg ttcgatcctg ttcggtagcg acggaacgac cggacggacc 300
ggacgtgtgt tgtgtttcct tttggccttt tggtttcttc gggccagaaa gagggggtcg 360
acggttggtt cggcgaaagg acagacagac cgatttttga cggcgtttgg aatttgttgt 420
gttcaaaatt tccaaaggca ataaggaacg caccgaacaa gggacctaat tgctgtcgtc 480
atcgaagaag taaatgcgtg acatcacaga agcggcaaag ttccgccgag gagatcggaa 540
cttgatgaag tttggatacg tctcgccgtc ccggaaccag cagaatcgac gaaggcctgc 600
cattttgcgt agactttccc ggtgttggtc cgtagacgga tagagaacgt acaggtatgg 660
ttctacggcg acagaagatc caccgacgcg agagagaaat tttggggaat ggatcttttg 720
gaacggaccc tcagatccga acccgactca accgaccgaa gtaatcgccc ccaaaattac 780
agtaagtcac acacagacaa caccagtccc cccaaaggaa ccccagttgc accaagcaaa 840
acacacacac caaattcgaa cacgacgcac cctcgtgcag gcagcaacca cgatatcctg 900
atcgatcaca acgtataaag cgtgtgtccg cgttctgcct ccctacctaa cacacacact 960
cgtatactct ctcatataca caccacatcc caaacttcca agcgaattcg atatcatggg 1020
cagcagccac caccaccacc accacagcag cggcgactac gacatcccca ccggtgaaaa 1080
cctgtacttc cagggcaaca gtgactccga atgccccctg tcccacgacg gatactgcct 1140
ccacgacggt gtgtgcatgt acattgaagc cttggacaag tacgcctgca actgtgtcgt 1200
cggctacatc ggagaacgtt gtcagtaccg tgacctgaag tggtgggaac tgcgctaatc 1260
tagagtcgac ctgcaggcat gcaagcttca gaagcgtgct atcgaactca accagggacg 1320
tgcggcacaa atgggcatcc ttgctctcat ggtgcacgaa cagttgggag tctctatcct 1380
tccttaaaaa tttaattttc attagttgca gtcactccgc tttggtttca cagtcaggaa 1440
taacactagc tcgtcttcac catggatgcc aatctcgcct attcatggtg tataaaagtt 1500
caacatccaa agctagaact tttggaaaga gaaagaatat ccgaataggg cacggcgtgc 1560
cgtattgttg gagtggacta gcagaaagtg aggaaggcac aggatgagtt ttctcgagac 1620
ataccttcag cgtcgtcttc actgtcacag tcaactgaca gtaatcgttg atccggagag 1680
attcaaaatt caatctgttt ggacctggat aagacacaag agcgacatcc tgacatgaac 1740
gccgtaaaca gcaaatcctg gttgaacacg tatccttttg ggggcctccg ctacgacgct 1800
cgctccagct ggggcttcct tactatacac agcgcgcata tttcacggtt gccagatgtc 1860
aagatggcca agttgaccag tgccgttccg gtgctcaccg cgcgcgacgt cgccggagcg 1920
gtcgagttct ggaccgaccg gctcgggttc tcccgggact tcgtggagga cgacttcgcc 1980
ggtgtggtcc gggacgacgt gaccctgttc atcagcgcgg tccaggacca ggtggtgccg 2040
gacaacaccc tggcctgggt gtgggtgcgc ggcctggacg agctgtacgc cgagtggtcg 2100
gaggtcgtgt ccacgaactt ccgggacgcc tccgggccgg ccatgaccga gatcggcgag 2160
cagccgtggg ggcgggagtt cgccctgcgc gacccggccg gcaactgcgt gcacttcgtg 2220
gccgaggagc aggactgaac cttccttaaa aatttaattt tcattagttg cagtcactcc 2280
gctttggttt cacagtcagg aataacacta gctcgtcttc accatggatg ccaatctcgc 2340
ctattcatgg tgtataaaag ttcaacatcc aaagctagaa cttttggaaa gagaaagaat 2400
atccgaatag ggcacggcgt gccgtattgt tggagtggac tagcagaaag tgaggaaggc 2460
acaggatgag ttttctcgag gccggtctcc ctatagtgag tcgtattaat ttcgataagc 2520
caggttaacc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt gcgtattggg 2580
cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg 2640
gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga 2700
aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 2760
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 2820
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 2880
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 2940
ggaagcgtgg cgctttctca atgctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 3000
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 3060
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 3120
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 3180
tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 3240
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 3300
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 3360
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 3420
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 3480
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 3540
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc 3600
gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata 3660
ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg 3720
gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc 3780
cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct 3840
acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa 3900
cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt 3960
cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca 4020
ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac 4080
tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca 4140
atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt 4200
tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc 4260
actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca 4320
aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata 4380
ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc 4440
ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc 4500
cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca tgacattaac ctataaaaat 4560
aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg cgtttcggtg atgacggtga aaacctctga 4620
cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag cggatgccgg gagcagacaa 4680
gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg gctggcttaa ctatgcggca 4740
tcagagcaga ttgtactgag agtgcac 4767
<210> 7
<211> 4821
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PTD-EGF expression vector
<400> 7
catatgtggt gccgttgatg ccgtggctct gcaaaagagt cgaacgccat gatggtatcc 60
gacggcttgc ttggtgggag ggcggaaacc ttgaaaaaac gccgtctcgt ggtgtgattc 120
ggaaggcacc gctttggaat tggtggagaa tagtggaagt gtaaatgtgt ttgggaaggt 180
cgagaaccat cggaaccggt ggcacgatcg ccgttggata gtagtcacat tagtagcggt 240
cctcctcatg ttccaatccg ttcgatcctg ttcggtagcg acggaacgac cggacggacc 300
ggacgtgtgt tgtgtttcct tttggccttt tggtttcttc gggccagaaa gagggggtcg 360
acggttggtt cggcgaaagg acagacagac cgatttttga cggcgtttgg aatttgttgt 420
gttcaaaatt tccaaaggca ataaggaacg caccgaacaa gggacctaat tgctgtcgtc 480
atcgaagaag taaatgcgtg acatcacaga agcggcaaag ttccgccgag gagatcggaa 540
cttgatgaag tttggatacg tctcgccgtc ccggaaccag cagaatcgac gaaggcctgc 600
cattttgcgt agactttccc ggtgttggtc cgtagacgga tagagaacgt acaggtatgg 660
ttctacggcg acagaagatc caccgacgcg agagagaaat tttggggaat ggatcttttg 720
gaacggaccc tcagatccga acccgactca accgaccgaa gtaatcgccc ccaaaattac 780
agtaagtcac acacagacaa caccagtccc cccaaaggaa ccccagttgc accaagcaaa 840
acacacacac caaattcgaa cacgacgcac cctcgtgcag gcagcaacca cgatatcctg 900
atcgatcaca acgtataaag cgtgtgtccg cgttctgcct ccctacctaa cacacacact 960
cgtatactct ctcatataca caccacatcc caaacttcca agcgaattcg atatcatggg 1020
cagcagccac caccaccacc accacagcag cggcgactac gacatcccca ccggtgaaaa 1080
cctgtacttc cagggcagac aaatcaagat ttggttccaa aaccgtcgta tgaagtggaa 1140
gaagaccggt aacagtgact ccgaatgccc cctgtcccac gacggatact gcctccacga 1200
cggtgtgtgc atgtacattg aagccttgga caagtacgcc tgcaactgtg tcgtcggcta 1260
catcggagaa cgttgtcagt accgtgacct gaagtggtgg gaactgcgct aatctagagt 1320
cgacctgcag gcatgcaagc ttcagaagcg tgctatcgaa ctcaaccagg gacgtgcggc 1380
acaaatgggc atccttgctc tcatggtgca cgaacagttg ggagtctcta tccttcctta 1440
aaaatttaat tttcattagt tgcagtcact ccgctttggt ttcacagtca ggaataacac 1500
tagctcgtct tcaccatgga tgccaatctc gcctattcat ggtgtataaa agttcaacat 1560
ccaaagctag aacttttgga aagagaaaga atatccgaat agggcacggc gtgccgtatt 1620
gttggagtgg actagcagaa agtgaggaag gcacaggatg agttttctcg agacatacct 1680
tcagcgtcgt cttcactgtc acagtcaact gacagtaatc gttgatccgg agagattcaa 1740
aattcaatct gtttggacct ggataagaca caagagcgac atcctgacat gaacgccgta 1800
aacagcaaat cctggttgaa cacgtatcct tttgggggcc tccgctacga cgctcgctcc 1860
agctggggct tccttactat acacagcgcg catatttcac ggttgccaga tgtcaagatg 1920
gccaagttga ccagtgccgt tccggtgctc accgcgcgcg acgtcgccgg agcggtcgag 1980
ttctggaccg accggctcgg gttctcccgg gacttcgtgg aggacgactt cgccggtgtg 2040
gtccgggacg acgtgaccct gttcatcagc gcggtccagg accaggtggt gccggacaac 2100
accctggcct gggtgtgggt gcgcggcctg gacgagctgt acgccgagtg gtcggaggtc 2160
gtgtccacga acttccggga cgcctccggg ccggccatga ccgagatcgg cgagcagccg 2220
tgggggcggg agttcgccct gcgcgacccg gccggcaact gcgtgcactt cgtggccgag 2280
gagcaggact gaaccttcct taaaaattta attttcatta gttgcagtca ctccgctttg 2340
gtttcacagt caggaataac actagctcgt cttcaccatg gatgccaatc tcgcctattc 2400
atggtgtata aaagttcaac atccaaagct agaacttttg gaaagagaaa gaatatccga 2460
atagggcacg gcgtgccgta ttgttggagt ggactagcag aaagtgagga aggcacagga 2520
tgagttttct cgaggccggt ctccctatag tgagtcgtat taatttcgat aagccaggtt 2580
aacctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct 2640
tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca 2700
gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 2760
atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 2820
ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 2880
cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc 2940
tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 3000
gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 3060
aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 3120
tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 3180
aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 3240
aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 3300
ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 3360
ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 3420
atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 3480
atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 3540
tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 3600
gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg 3660
tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 3720
gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 3780
cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 3840
gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc 3900
atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc ccaacgatca 3960
aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg 4020
atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc agcactgcat 4080
aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc 4140
aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg 4200
gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg 4260
gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt 4320
gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca 4380
ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg aatactcata 4440
ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac 4500
atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa 4560
gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt 4620
atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg 4680
cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt 4740
cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc ggcatcagag 4800
cagattgtac tgagagtgca c 4821
Claims (15)
- 서열번호 1의 프로모터; 및
인간 상피세포 성장인자(hEGF)를 코딩하는 유전자를 포함하는 hEGF 발현구역;을 포함하는, 벡터.
- 제 1항에 있어서,
상기 hEGF 발현구역은 His-tag 서열 및 TEV site 서열을 더 포함하는, 벡터.
- 제 1항에 있어서,
상기 hEGF 발현구역은 피부침투성 펩타이드 서열인 PTD 서열을 더 포함하는, 벡터.
- 제 1항에 있어서,
상기 hEGF 발현구역은 서열번호 2로 표시되는 염기서열인, 벡터.
- 제 1항에 있어서,
상기 벡터는 서열번호 6로 표시되는 염기서열을 포함하는, 벡터.
- 제 3항에 있어서,
상기 hEGF 발현구역은 서열번호 5로 표시되는 염기서열인, 벡터.
- 제 6항에 있어서,
상기 벡터는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 포함하는, 벡터.
- 제 1항 내지 제 7항 중 어느 하나에 따른 벡터로 형질전환된 미세조류.
- 제 8항에 있어서,
상기 미세조류는 페오닥틸룸 트리코뉴튬(Phaeodactylum tricornutum)인, 미세조류.
- 제 9항에 있어서,
상기 미세조류는 수탁번호 KCTC 13382BP 또는 KCTC 13383BP로 기탁된 것을 특징으로 하는, 형질전환된 미세조류.
- 제 8항에 따른 형질전환된 미세조류를 이용하여 인간상피세포 성장인자(hEGF) 단백질을 생산하는 방법.
- 제 11항에 있어서,
상기 인간상피세포 성장인자(hEGF)단백질은 피부 침투성 인간상피세포 성장인자(PTD-hEGF)단백질인, 방법.
- 삭제
- 삭제
- 제 8항에 따른 형질전환된 미세조류를 포함하는 키트.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP17866684.8A EP3536790B1 (en) | 2016-11-04 | 2017-11-03 | Vector for expressing human epidermal growth factor or skin-permeable human epidermal growth factor, and microalgae transformed with vector |
PCT/KR2017/012437 WO2018084650A1 (ko) | 2016-11-04 | 2017-11-03 | 인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020160146839 | 2016-11-04 | ||
KR20160146839 | 2016-11-04 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20180050237A KR20180050237A (ko) | 2018-05-14 |
KR102013788B1 true KR102013788B1 (ko) | 2019-08-23 |
Family
ID=62187929
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020170145448A KR102013788B1 (ko) | 2016-11-04 | 2017-11-02 | 인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP3536790B1 (ko) |
KR (1) | KR102013788B1 (ko) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102211740B1 (ko) * | 2019-07-01 | 2021-02-04 | 한국과학기술연구원 | 파에오닥틸룸 트리코르누툼(Phaeodactylum tricornutum)의 신규 프로모터 HASP1와 이의 신호 펩타이드 및 이의 용도 |
EP3845555A1 (en) * | 2019-12-31 | 2021-07-07 | Algaeprona Inc. | Vector for producing and expressing human growth factor and microalgae transformed with the vector |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5102789A (en) * | 1989-03-15 | 1992-04-07 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Production of epideramal growth factor in pichia pastoris yeast cells |
WO1994025592A1 (en) * | 1993-04-26 | 1994-11-10 | Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd. | A novel gene coding human epidermal growth factor and process for preparing the same |
KR20000075076A (ko) | 1999-05-28 | 2000-12-15 | 최태진 | 형질전환된 미세조류를 이용하여 외래 단백질을 생산하는 방법 |
KR100377397B1 (ko) * | 1999-12-23 | 2003-03-26 | 주식회사 대웅 | 레티놀 및 표피성장인자를 함유하는 피부보호 화장료 조성물 |
KR100500172B1 (ko) * | 2002-10-02 | 2005-07-07 | 주식회사 대웅 | 사람 표피성장인자 및 락토카인을 포함하는 피부 보호용화장료 조성물 |
KR20040056365A (ko) * | 2002-12-23 | 2004-06-30 | (주)케어젠 | 재조합 인간 표피성장인자를 함유하는 화장료 조성물 |
KR100729830B1 (ko) | 2005-03-24 | 2007-06-19 | 바이오스펙트럼 주식회사 | 페너트라틴을 이용하여 단백질의 세포투과를 증진시키는대장균용발현벡터 |
KR20120034927A (ko) * | 2010-10-04 | 2012-04-13 | 주식회사 바이오셀트란 | 피부투과성 인간 상피세포 성장인자 및 그 생산방법 |
WO2012060666A2 (ko) | 2010-11-04 | 2012-05-10 | 한국생명공학연구원 | 효모에서 인체 상피세포 성장인자를 대량 생산하는 방법 |
TR201814868T4 (tr) * | 2012-08-23 | 2018-10-22 | Transalgae Israel Ltd | Transgenik mikroalgler ve bunların, proteinlerin oral yolla alımına yönelik kullanımı. |
KR101602689B1 (ko) * | 2013-11-14 | 2016-03-11 | 주식회사 엘지생활건강 | 혈소판유래성장인자 b서브유닛의 융합단백질을 포함하는 피부개선용 화장료 조성물 |
KR101574204B1 (ko) | 2013-12-02 | 2015-12-04 | 서울대학교 산학협력단 | 코돈 최적화된 인간 상피세포 성장인자를 발현하는 형질전환 조류 및 이의 제조 방법 |
KR101772045B1 (ko) | 2014-07-10 | 2017-08-28 | 강원대학교산학협력단 | 표피성장인자 유래의 펩타이드 단편을 포함하는 상처 치료 또는 피부 주름형성 억제용 조성물 |
-
2017
- 2017-11-02 KR KR1020170145448A patent/KR102013788B1/ko active IP Right Grant
- 2017-11-03 EP EP17866684.8A patent/EP3536790B1/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20180050237A (ko) | 2018-05-14 |
EP3536790A4 (en) | 2020-06-17 |
EP3536790A1 (en) | 2019-09-11 |
EP3536790B1 (en) | 2021-08-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2713526T3 (es) | Procedimiento de producción de ésteres alquílicos de ácidos grasos usando microorganismos que tienen capacidad de producir aceite | |
CN110055224B (zh) | 一种基因修饰的免疫细胞及其制备方法和应用 | |
CN110747198B (zh) | 毕赤酵母生产重组人源ⅱ型胶原蛋白单链的方法 | |
TW200530262A (en) | Microbially expressed xylanases and their use as feed additives and other uses | |
CN111886029B (zh) | 破坏linc复合物以治疗核纤层蛋白病 | |
KR102013788B1 (ko) | 인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류 | |
US20020045185A1 (en) | Secreted neural adhesion proteins | |
CN111088176B (zh) | 产β-胡萝卜素的基因工程菌及其应用 | |
CN107090466A (zh) | 双sgRNA表达质粒及其文库的构建方法 | |
KR20210010484A (ko) | 재조합 단백질의 개선된 분비를 위한 sec 변형 균주 | |
CN114585392A (zh) | 通过抑制linc复合物治疗/预防疾病 | |
KR102269272B1 (ko) | 장기면역 강화 유전자가 삽입된 구제역 a형 방어항원이 발현되는 재조합 바이러스 및 이를 포함하는 백신조성물 | |
CN113717962A (zh) | 用于水稻基因编辑的CasΦ-2蛋白及其表达盒子和表达载体 | |
CN111149730A (zh) | 一种快速培育多能干细胞荧光标记斑马鱼纯合个体的方法 | |
CN101967475B (zh) | 一种基于位点特异性重组的基因打靶载体快速构建方法 | |
CN111549048A (zh) | 用于细菌asd基因平衡致死系统的表达质粒及其应用 | |
CN113754783B (zh) | 重组rlk在植物免疫调节中的应用 | |
KR102224580B1 (ko) | 유전자 발현 및 억제가 동시에 가능한 핵산 구조체 | |
WO2018084650A1 (ko) | 인간상피세포 성장인자 또는 피부침투성 인간상피세포 성장인자 발현용 벡터 및 상기 벡터로 형질전환된 미세조류 | |
KR102543061B1 (ko) | 사카로미세스 세레비시아에서 브라제인을 고발현하기 위한 재조합 발현 벡터 및 이를 이용한 브라제인의 대량 생산방법 | |
CN109957551B (zh) | 表达人β-防御素2的重组痘苗病毒及其应用 | |
CN108753727A (zh) | 一种gpcr靶向药物筛选系统及其构建和应用 | |
CN113186264A (zh) | 一种特异性识别iyvlvmlvl肽段的荧光pcr引物组及其应用 | |
CN109371058A (zh) | 一种杨树质体表达系统的建立方法 | |
CN111965367A (zh) | Hip-55在作为gpcr偏向药物靶点中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant |