CN113754783B

CN113754783B - 重组rlk在植物免疫调节中的应用

Info

Publication number: CN113754783B
Application number: CN202111062576.7A
Authority: CN
Inventors: 蔡易; 余国志; 黄燕; 郭晋雅; 许婷; 李君浩; 张怀渝; 黄安琪; 姚慧鹏
Original assignee: Chengdu Lvxinuo Biotechnology Co ltd; Sichuan Agricultural University
Current assignee: Chengdu Lvxinuo Biotechnology Co ltd; Sichuan Agricultural University
Priority date: 2021-09-10
Filing date: 2021-09-10
Publication date: 2022-12-13
Anticipated expiration: 2041-09-10
Also published as: CN113754783A

Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及重组RLK在植物免疫调节中的应用。所述重组RLK在增强植物flg22诱导信号传导能力中的应用。所述重组RLK为FLS2胞外域和跨膜域与PEPR1激酶域组成的重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明所述重组RLK可激发高强度信号，增强植物响应flg22诱导的PTI信号传导能力，提高植物抵抗病原菌侵染。

Description

重组RLK在植物免疫调节中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及重组RLK在植物免疫调节中的应用。

背景技术

病原微生物侵染植物时被植物识别所诱发的先天免疫主要包括2个层次：一是由定位于植物细胞膜上的模式识别受体(Pattern recognition receptors，PRRs)通过特异性识别病原菌分子模式(Pathogen associated molecular patterns，PAMPs)后向细胞内传递信号，激活体内多条信号通路，进而引发植物下游防卫反应，达到抵御病原菌入侵的目的，这个过程称为病原菌模式分子引发的免疫反应(PAMP-triggered immunity，PTI)。

当病原菌入侵植物时，其PAMPs会被植物细胞膜上的PRRs识别，PRRs传导信号后引发下游免疫反应的激活。具体来说，大多数PRRs的胞外结构域作为信号识别中心可特异性识别病原菌保守分子模式PAMPs，并通过自身的跨膜结构域将识别的信号传递到胞内的激酶结构域，即信号级联中心。磷酸化作用的参与将信号逐级传导放大，进而诱导相关免疫反应的发生。

类受体蛋白激酶(Receptor-like protein kinases，RLKs)是其中一类PRRs，RLK家族中目前研究比较多的RLKs识别的PAMP大多为多肽。

多数的RLKs都具有以下四种结构域：①胞外受体结合域(Extracellular ligand-binding domain，ECLB)，顾名思义该域具有结合信号分子的能力，结合发生后受体因二聚化而激活，导致胞内激酶域级联反应的发生，被称为信号结合中心。②跨膜结构域(Transmembrane domain，TM)，胞外与胞内两部分通过跨膜结构域连接起来，一般含有22-28个氨基酸，是将信号由胞外传递到胞内的工具。③N端信号肽(N-terminal signalpeptide，SP)，这也是一个位于胞外区的结构域，但并不是所有RLKs都有，比如表皮生长因子型RLKs。该结构域的功能是协助合成过程中的蛋白质稳定在内质网上，再利用此蛋白形成的信号肽来对胞外的信号进行识别，因此，该结构域也被称作信号识别中心。④蛋白激酶接触反应域(Protein kinase catalytic domain，PKC)，属于胞内结构域，含有11个保守氨基酸序列，是信号级联反应中心，具有的磷酸化位点可在接受信号后发生磷酸化。

目前，人们虽然鉴定了多个属于LRR-RLK家族的PRRs，但是关于PRRs的激酶区域激发的信号强弱分析，目前尚未有相关研究和报道。

发明内容

本发明主要目的在于提供重组RLK在植物免疫调节中的应用，本发明筛选得到了具有激发高强度信号的重组RLK，将所述重组RLK在植物中表达，可增强植物响应flg22诱导的信号传导能力。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供一种重组RLK在植物免疫调节中的应用，所述重组RLK在增强植物响应flg22诱导信号传导能力中的应用。所述重组RLK为FLS2胞外域和跨膜域与PEPR1激酶域组成的重组蛋白，该重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步地，所述应用包括以下任意一种：

1)在诱导PTI下游反应，提高植物胼胝质的积累中的应用；

2)在调控WRKY33高表达，提高植物抵抗病原菌侵染中的应用；

3)在增强MAPK磷酸化中的应用。

进一步地，重组RLK的表达载体为pUBQ-pCamBia1305-3FLAG。

与现有技术相比，本发明具有以下优势：

本发明提供了FLS2胞外域和跨膜域与PEPR1激酶域组成的重组蛋白在植物免疫调节中具有重要的应用，所述重组蛋白可激发高强度信号，增强植物响应flg22诱导信号的传导能力，提高植物抵抗病原菌侵染。

附图说明

构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。

图1重组质粒电泳结果图；

图2重组质粒酶切检测结果图；

图3转基因植株中目的基因的相对表达量；

图4转基因植株蛋白免疫印迹分析；

图5各转基因植株中胼胝质积累情况图；

图6各转基因植株中FRK1的相对表达量；

图7各转基因植株中WRKY33的相对表达量；

图8各转基因植物侵染P.s.t DC3000后病原菌生长量；

图9各转基因植株响应flg22诱导的MAPKs激活表达。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。

实施例

(1)rRLK稳定表达载体的构建

利用前期构建的35S::FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP瞬时表达载体质粒为模板，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，通过设计带终止密码子的克隆引物扩增出FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP片段，进而将FLS2 NT，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，与PEPR1 KD，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，利用无缝克隆法克隆到表达载体pUBQ-pCamBia1305-3FLAG中，该表达载体的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，构建成融合基因表达载体：UBQ::FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP。野生型FLS2核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；扩增以上所述基因的引物序列如下表1所示。

表1引物序列

构建所得质粒及酶切位点如下表2所示，重组质粒PCR扩增结果、双酶切验证结果分别如图1、图2所示。

表2重组质粒及双酶切位点

(2)转基因植物的构建和筛选

质粒的热击转化

将重组质粒与农杆菌GV3101感受态细胞进行热击转化，具体方法如下：

1)将目的质粒100ng用移液枪加入感受态细胞中，轻轻吹打混匀避免破坏感受态细胞，然后置于冰上放置30min；

2)在液氮中低温处理1min，然后立刻37℃水浴5min；

3)将950μL无抗生素YEB液体培养基加入到转化完的菌液中，在转速200rpm的摇床中培养4h培养温度为28℃；

4)将培养后的菌液放入离心机5,000rpm离心2min，收集菌体，再用100μL的YEB培养基将菌体重新悬浮，涂在同时含有农杆菌的抗性Rif和载体抗性Kan两种抗生素的YEB平板上，晾干，封口胶封板，28℃烘箱倒置培养48h；

5)挑选单菌落进行PCR鉴定，获得阳性克隆菌落。

拟南芥的浸花法转化

1)将上步阳性农杆菌按比例转接到200ml含有Rif、Kan两种抗生素的液体培养基中，放入28℃摇床摇菌培养14h-18h；

2)至使用分光光度计测定OD600≈0.8，室温4,500rpm离心15min集菌；

3)用当天配制好的70mL含5％蔗糖以及0.01％Silwet-77的溶液重悬菌体；

4)选取长日照植物房生长条件下的5周大小的已抽苔、花苞较多的fls2突变体植株进行转化，首先剪去已长出的果荚，将植株放倒使其花序浸泡在农杆菌菌液中15sec，然后用遮光塑料盖罩住浸泡过的拟南芥，避光处理两天后揭开塑料盖，正常培养。30-35天后，收获T₀代种子。

转基因植物的筛选

将T₀代种子放至37℃烘箱干燥3-5天后，取适量在超净工作台用种子消毒液消毒后铺在含有Hygromycin抗生素的1/2MS固体培养平板上，吹干密封。放至光照培养箱2周后，观察到长出4片真叶的阳性幼苗，挑出移植到土上，单株收种。将所收单株T₁代种子点在1/2MS板上，按遗传分离比选取阳性苗:阴性苗≈3:1的单拷贝插入转基因株系，移栽培养后单株收种。若再将其子代种子点在1/2MS板上，表现为全部成活，则鉴定为纯合转基因株系。

在T₂代转基因植物中鉴定出分别过表达野生型FLS2-GFP的纯合株系4个、FLS2NT-PEPR1 KD-GFP的纯合株系5个。

在1/2MS固体培养基上培养上述获得的所有转基因纯合株系，10天左右提取RNA，以反转录获得的cDNA为模板进行实时荧光定量PCR检测，从转录水平分析各目标转基因的基因表达量。结果如图3所示，各个rRLK转基因以及同一转基因的不同纯合株系中转基因的表达量都存在一定的差异。设定以野生型FLS2-GFP#2为对照材料(图3箭头所示)，参照其转基因的表达量，选取FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP#1和#4为后续实验待测株系。

进一步，通过土壤培养待测植株4周后提取植物总蛋白，利用蛋白免疫印迹方法检测了上述转基因纯合株系中对应转基因蛋白的表达水平。如图4所示，各转基因蛋白都能正常表达，而参考丽春红染色结果可以发现，各纯合株系蛋白表达水平高低与基因表达结果基本一致。因此，结合各转基因的转录水平和蛋白表达水平分析，鉴定出的FLS2 NT-PEPR1KD-GFP#1和#4纯合转基因株系可作为检测株系，以野生型FLS2-GFP#2为对照材料展开生物功能性研究。

所述生物功能性研究包括：检测以上植株响应flg22诱导的胼胝质积累、抗病相关基因表达量分析、病原菌侵染试验、MAPK磷酸化试验。

1)flg22诱导的胼胝质积累

经flg22诱导后进行了转基因植株背景下叶片胼胝质积累的观察实验。在实验中，以H₂O和elf18分别作为阴性和阳性对照，结果如图5所示，flg22诱导后各转基因株系叶片中均有不同程度的胼胝质积累。而与对照材料相比，在重组转基因表达水平略低的前提下，FLS2NT-PEPR1 KD-GFP的各株系叶片中均检测到更高水平的胼胝质积累，表明PEPR1 KD在响应flg22诱导的PTI下游反应中具有比野生型FLS2 KD更强的信号传导能力，从而导致了更多的胼胝质积累。

2)抗病相关基因表达量分析

利用RT-PCR检测了各转基因株系背景下flg22诱导的PTI下游抗病相关基因FRK1和WRKY33的表达量。在经1μmol flg22诱导处理一天后，提取固体1/2MS培养基上生长10d的幼苗RNA，再以反转录获得的cDNA为模板进行实时荧光定量PCR检测。以野生型FLS2KD调控FRK1的表达量为对照，PEPR1 KD调控FRK1表达能力更强，两株系分别是对照组FLS2 KD的247.8％、515％，并且具有显著性差异(*0.01<P<0.05)，如图6所示。

以FLS2 KD调控WRKY33的表达量为对照，PEPR1 KD调控WRKY33表达能力也更加突出，两株系分别为对照的460％、545.4％，且为极显著差异(**P<0.01)，如图7所示。

3)病原菌侵染试验

检测了各个转基因株系对P.s.t.DC3000细菌病原菌的抗病能力强弱。实验发现在细菌初始侵染量一致的前提下，P.s.t.DC3000侵染第3天检测出FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP#1和#4与野生型FLS2-GFP#2株系相比均表现出更强的抗病能力，如图8所示。

4)MAPK磷酸化试验

利用蛋白免疫技术检测了在抗病信号增强型的FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP背景下flg22诱导的MAPK激活。结果如图9所示，FLS2 NT-PEPR1 KD-GFP#4在1μmol flg22处理第15min后MPK3和MPK6的磷酸化程度被显著增强，虽然在第30min稍有减少但是磷酸化程度依然明显强于对照组。上述结果表明，PEPR1 KD通过MAPK级联反应途径来介导植物PTI下游的抗病免疫反应。

上述生物学功能研究发现，与野生型FLS2的激酶域相比，PEPR1激酶域展现出更强的抗病信号转导能力从而赋予了相应的转基因植物更强的抗病防御反应。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 四川农业大学成都绿信诺生物科技有限公司

<120> 重组RLK在植物免疫调节中的应用

<130>

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1162

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Met Lys Leu Leu Ser Lys Thr Phe Leu Ile Leu Thr Leu Thr Phe Phe

1 5 10 15

Phe Phe Gly Ile Ala Leu Ala Lys Gln Ser Phe Glu Pro Glu Ile Glu

20 25 30

Ala Leu Lys Ser Phe Lys Asn Gly Ile Ser Asn Asp Pro Leu Gly Val

35 40 45

Leu Ser Asp Trp Thr Ile Ile Gly Ser Leu Arg His Cys Asn Trp Thr

50 55 60

Gly Ile Thr Cys Asp Ser Thr Gly His Val Val Ser Val Ser Leu Leu

65 70 75 80

Glu Lys Gln Leu Glu Gly Val Leu Ser Pro Ala Ile Ala Asn Leu Thr

85 90 95

Tyr Leu Gln Val Leu Asp Leu Thr Ser Asn Ser Phe Thr Gly Lys Ile

100 105 110

Pro Ala Glu Ile Gly Lys Leu Thr Glu Leu Asn Gln Leu Ile Leu Tyr

115 120 125

Leu Asn Tyr Phe Ser Gly Ser Ile Pro Ser Gly Ile Trp Glu Leu Lys

130 135 140

Asn Ile Phe Tyr Leu Asp Leu Arg Asn Asn Leu Leu Ser Gly Asp Val

145 150 155 160

Pro Glu Glu Ile Cys Lys Thr Ser Ser Leu Val Leu Ile Gly Phe Asp

165 170 175

Tyr Asn Asn Leu Thr Gly Lys Ile Pro Glu Cys Leu Gly Asp Leu Val

180 185 190

His Leu Gln Met Phe Val Ala Ala Gly Asn His Leu Thr Gly Ser Ile

195 200 205

Pro Val Ser Ile Gly Thr Leu Ala Asn Leu Thr Asp Leu Asp Leu Ser

210 215 220

Gly Asn Gln Leu Thr Gly Lys Ile Pro Arg Asp Phe Gly Asn Leu Leu

225 230 235 240

Asn Leu Gln Ser Leu Val Leu Thr Glu Asn Leu Leu Glu Gly Asp Ile

245 250 255

Pro Ala Glu Ile Gly Asn Cys Ser Ser Leu Val Gln Leu Glu Leu Tyr

260 265 270

Asp Asn Gln Leu Thr Gly Lys Ile Pro Ala Glu Leu Gly Asn Leu Val

275 280 285

Gln Leu Gln Ala Leu Arg Ile Tyr Lys Asn Lys Leu Thr Ser Ser Ile

290 295 300

Pro Ser Ser Leu Phe Arg Leu Thr Gln Leu Thr His Leu Gly Leu Ser

305 310 315 320

Glu Asn His Leu Val Gly Pro Ile Ser Glu Glu Ile Gly Phe Leu Glu

325 330 335

Ser Leu Glu Val Leu Thr Leu His Ser Asn Asn Phe Thr Gly Glu Phe

340 345 350

Pro Gln Ser Ile Thr Asn Leu Arg Asn Leu Thr Val Leu Thr Val Gly

355 360 365

Phe Asn Asn Ile Ser Gly Glu Leu Pro Ala Asp Leu Gly Leu Leu Thr

370 375 380

Asn Leu Arg Asn Leu Ser Ala His Asp Asn Leu Leu Thr Gly Pro Ile

385 390 395 400

Pro Ser Ser Ile Ser Asn Cys Thr Gly Leu Lys Leu Leu Asp Leu Ser

405 410 415

His Asn Gln Met Thr Gly Glu Ile Pro Arg Gly Phe Gly Arg Met Asn

420 425 430

Leu Thr Phe Ile Ser Ile Gly Arg Asn His Phe Thr Gly Glu Ile Pro

435 440 445

Asp Asp Ile Phe Asn Cys Ser Asn Leu Glu Thr Leu Ser Val Ala Asp

450 455 460

Asn Asn Leu Thr Gly Thr Leu Lys Pro Leu Ile Gly Lys Leu Gln Lys

465 470 475 480

Leu Arg Ile Leu Gln Val Ser Tyr Asn Ser Leu Thr Gly Pro Ile Pro

485 490 495

Arg Glu Ile Gly Asn Leu Lys Asp Leu Asn Ile Leu Tyr Leu His Ser

500 505 510

Asn Gly Phe Thr Gly Arg Ile Pro Arg Glu Met Ser Asn Leu Thr Leu

515 520 525

Leu Gln Gly Leu Arg Met Tyr Ser Asn Asp Leu Glu Gly Pro Ile Pro

530 535 540

Glu Glu Met Phe Asp Met Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Leu Ser Asn

545 550 555 560

Asn Lys Phe Ser Gly Gln Ile Pro Ala Leu Phe Ser Lys Leu Glu Ser

565 570 575

Leu Thr Tyr Leu Ser Leu Gln Gly Asn Lys Phe Asn Gly Ser Ile Pro

580 585 590

Ala Ser Leu Lys Ser Leu Ser Leu Leu Asn Thr Phe Asp Ile Ser Asp

595 600 605

Asn Leu Leu Thr Gly Thr Ile Pro Gly Glu Leu Leu Ala Ser Leu Lys

610 615 620

Asn Met Gln Leu Tyr Leu Asn Phe Ser Asn Asn Leu Leu Thr Gly Thr

625 630 635 640

Ile Pro Lys Glu Leu Gly Lys Leu Glu Met Val Gln Glu Ile Asp Leu

645 650 655

Ser Asn Asn Leu Phe Ser Gly Ser Ile Pro Arg Ser Leu Gln Ala Cys

660 665 670

Lys Asn Val Phe Thr Leu Asp Phe Ser Gln Asn Asn Leu Ser Gly His

675 680 685

Ile Pro Asp Glu Val Phe Gln Gly Met Asp Met Ile Ile Ser Leu Asn

690 695 700

Leu Ser Arg Asn Ser Phe Ser Gly Glu Ile Pro Gln Ser Phe Gly Asn

705 710 715 720

Met Thr His Leu Val Ser Leu Asp Leu Ser Ser Asn Asn Leu Thr Gly

725 730 735

Glu Ile Pro Glu Ser Leu Ala Asn Leu Ser Thr Leu Lys His Leu Lys

740 745 750

Leu Ala Ser Asn Asn Leu Lys Gly His Val Pro Glu Ser Gly Val Phe

755 760 765

Lys Asn Ile Asn Ala Ser Asp Leu Met Gly Asn Thr Asp Leu Cys Gly

770 775 780

Ser Lys Lys Pro Leu Lys Pro Cys Thr Ile Lys Gln Lys Ser Ser His

785 790 795 800

Phe Ser Lys Arg Thr Arg Val Ile Leu Ile Ile Leu Gly Ser Ala Ala

805 810 815

Ala Leu Leu Leu Val Leu Leu Leu Val Leu Ile Leu Thr Cys Cys Leu

820 825 830

Arg Arg Arg Lys Gly Arg Pro Glu Lys Asp Ala Tyr Val Phe Thr Gln

835 840 845

Glu Glu Gly Pro Ser Leu Leu Leu Asn Lys Val Leu Ala Ala Thr Asp

850 855 860

Asn Leu Asn Glu Lys Tyr Thr Ile Gly Arg Gly Ala His Gly Ile Val

865 870 875 880

Tyr Arg Ala Ser Leu Gly Ser Gly Lys Val Tyr Ala Val Lys Arg Leu

885 890 895

Val Phe Ala Ser His Ile Arg Ala Asn Gln Ser Met Met Arg Glu Ile

900 905 910

Asp Thr Ile Gly Lys Val Arg His Arg Asn Leu Ile Lys Leu Glu Gly

915 920 925

Phe Trp Leu Arg Lys Asp Asp Gly Leu Met Leu Tyr Arg Tyr Met Pro

930 935 940

Lys Gly Ser Leu Tyr Asp Val Leu His Gly Val Ser Pro Lys Glu Asn

945 950 955 960

Val Leu Asp Trp Ser Ala Arg Tyr Asn Val Ala Leu Gly Val Ala His

965 970 975

Gly Leu Ala Tyr Leu His Tyr Asp Cys His Pro Pro Ile Val His Arg

980 985 990

Asp Ile Lys Pro Glu Asn Ile Leu Met Asp Ser Asp Leu Glu Pro His

995 1000 1005

Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Asp Ser Thr Val

1010 1015 1020

Ser Thr Ala Thr Val Thr Gly Thr Thr Gly Tyr Ile Ala Pro Glu

1025 1030 1035

Asn Ala Phe Lys Thr Val Arg Gly Arg Glu Ser Asp Val Tyr Ser

1040 1045 1050

Tyr Gly Val Val Leu Leu Glu Leu Val Thr Arg Lys Arg Ala Val

1055 1060 1065

Asp Lys Ser Phe Pro Glu Ser Thr Asp Ile Val Ser Trp Val Arg

1070 1075 1080

Ser Ala Leu Ser Ser Ser Asn Asn Asn Val Glu Asp Met Val Thr

1085 1090 1095

Thr Ile Val Asp Pro Ile Leu Val Asp Glu Leu Leu Asp Ser Ser

1100 1105 1110

Leu Arg Glu Gln Val Met Gln Val Thr Glu Leu Ala Leu Ser Cys

1115 1120 1125

Thr Gln Gln Asp Pro Ala Met Arg Pro Thr Met Arg Asp Ala Val

1130 1135 1140

Lys Leu Leu Glu Asp Val Lys His Leu Ala Arg Ser Cys Ser Ser

1145 1150 1155

Asp Ser Val Arg

1160

<210> 2

<211> 7772

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggatccatga agttactctc aaagaccttt ttgatattaa ctctcacctt cttcttcttt 60

ggcattgcac tagcgaaaca gagctttgaa ccagagatcg aagctttgaa atccttcaag 120

aatggtattt ccaacgaccc tttaggagta ttatcagatt ggaccatcat cggttcgtta 180

cgacactgta attggaccgg aatcacctgc gatagtaccg gacatgtagt ctcggtttcc 240

ttgctggaga agcaacttga aggtgttctg tctccagcca tagcgaatct cacctatctc 300

caggttcttg atctcacttc aaatagtttt accggcaaaa taccggctga aataggaaag 360

ttaaccgagc ttaaccagct tattctgtac ctaaactatt tctctggttc gattccttct 420

ggaatctggg agcttaagaa tattttctat cttgatctta gaaataattt gttgtccggt 480

gatgttcctg aggaaatctg caaaaccagt tctttggtat tgattgggtt tgattacaac 540

aacttaaccg ggaaaatacc agaatgctta ggagatttgg ttcatctcca aatgtttgta 600

gcagctggta accatttaac tggttcgatt ccggtatcaa ttggtactct ggctaattta 660

acggatttag acctgagtgg taaccagtta accggaaaaa taccgagaga ttttggaaat 720

ctcttgaact tacagtctct cgttttaact gaaaacttgt tggaaggaga tataccagct 780

gagatcggaa actgctcgag cttggtccaa cttgagcttt acgataacca gttaaccggg 840

aaaataccag ctgaattagg gaatttggtt cagctgcaag cactccggat atacaagaac 900

aaacttactt cttcaattcc atcttcattg ttccggttaa ctcagttaac ccatttgggg 960

ttatcagaaa accatttggt tggaccgata tcagaagaaa tcggttttct tgagtcactt 1020

gaagtcctca cacttcattc caacaacttc acaggagagt ttccacagtc catcacaaac 1080

ttgaggaact tgacagtcct aacggtgggg ttcaataata tttccggtga gctcccggcg 1140

gatctagggc ttcttacaaa ccttcggaac ctttcagcgc acgacaatct tcttaccgga 1200

ccaatacctt ccagcataag taactgcacc ggtcttaaac tcctggacct gtctcacaac 1260

caaatgactg gcgagatccc gcggggtttc ggaaggatga atcttacgtt catttctatt 1320

gggaggaatc atttcaccgg tgaaattcca gatgatatct tcaactgttc aaacttggaa 1380

actcttagtg tggcagataa caacttaaca ggaactctca agccattaat tgggaagctt 1440

caaaaactca ggattttgca agtttcatat aactctctca ctggaccgat tcctcgagaa 1500

atcgggaatc tgaaagattt gaatatcttg taccttcact ctaatggttt cacagggaga 1560

atcccgagag agatgtcgaa tctcactctc ctccaggggc taaggatgta ttcaaatgat 1620

cttgaaggtc caattcctga agaaatgttt gatatgaagc tactctcagt tcttgatctt 1680

tccaacaaca aattctcagg tcaaattcct gccttgttct ccaagcttga atcgcttacc 1740

tacttgagtc ttcaaggaaa caaattcaac gggtctatcc ctgcaagcct taagtcgctt 1800

tcgcttctca acacattcga tatctccgac aatcttctca ctggaaccat ccctggagag 1860

ctgttagctt ctttgaaaaa catgcagctt tacctcaact tctcaaacaa cttgttgact 1920

ggaaccatcc caaaggagct tggaaagctt gaaatggttc aagaaatcga cctttcaaac 1980

aatctctttt ctgggtctat tccaagatct ttacaggcct gcaaaaatgt gttcacactg 2040

gatttttcgc agaacaatct ctcgggtcat ataccagatg aagtcttcca aggcatggat 2100

atgatcataa gcttgaacct ttcaaggaac agtttctctg gagaaatccc tcagagcttc 2160

gggaacatga cgcatttggt ctccttggat ctctctagta acaatctcac tggtgaaatt 2220

ccagagagtc tcgccaatct ttcgactctg aaacatctca aactagcttc aaacaacctc 2280

aaaggccatg ttcctgaatc cggggtgttc aaaaacatca acgcctctga tctaatggga 2340

aacacagatc tctgtggtag caagaagcct ctcaagccat gtacgatcaa gcagaagtcg 2400

agccacttct cgaagagaac cagagtcatc ctgattattc ttggatcagc cgcggctctt 2460

cttcttgtcc tgcttcttgt tctgattcta acctgttgcg tcgacctacg tcgtcgcaaa 2520

ggaagaccag agaaagatgc ttatgtcttc actcaggagg aaggcccatc tttgttgttg 2580

aacaaagttc ttgcagcaac tgacaatcta aatgaaaagt acaccattgg aagaggagct 2640

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gtattcgcgt ctcacatccg cgctaaccag agtatgatga gggagattga tacaatcggt 2760

aaagtcaggc acaggaatct gattaagtta gaagggtttt ggctgaggaa agacgacggt 2820

ttaatgctgt atagatacat gccaaaagga agtctttacg acgttctcca cggtgttagc 2880

ccgaaagaaa atgtgctaga ctggtctgca cggtacaatg tagcacttgg tgtcgctcat 2940

ggactagcct atctacacta tgactgccat cccccgattg ttcaccgtga catcaaacca 3000

gagaacatac tcatggactc agatttggag cctcacattg gggatttcgg tttggctcgc 3060

cttcttgatg actcaacggt ttcaactgca actgttacag gcaccaccgg ctacattgca 3120

ccagaaaacg ctttcaaaac cgtgagggga agagaatcag acgtttacag ttatggagtc 3180

gtgttacttg agctggttac gaggaagaga gcggtggaca aatctttccc ggaaagtaca 3240

gatatagtaa gctgggtgag atctgccttg agcagcagca acaacaatgt ggaggatatg 3300

gtaacaacaa tcgtcgatcc gattctcgtg gacgagcttc tggattcgag tcttagggag 3360

caggtgatgc aagtgacgga actggcactg agttgtacac agcaagatcc ggcaatgaga 3420

ccaacgatga gagatgcggt gaaactgttg gaagatgtga aacatctggc aagaagctgc 3480

tcctctgatt cagttcgggg taccatggtg agcaagggcg aggagctgtt caccggggtg 3540

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gtgaagttcg agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat cgacttcaag 3900

gaggacggca acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca caacgtctat 3960

atcatggccg acaagcagaa gaacggcatc aaggtgaact tcaagatccg ccacaacatc 4020

gaggacggca gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat cggcgacggc 4080

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gacgttccag actacgcttg actgcagatc gttcaaacat ttggcaataa agtttcttaa 4320

gattgaatcc tgttgccggt cttgcgatga ttatcatata atttctgttg aattacgtta 4380

agcatgtaat aattaacatg taatgcatga cgttatttat gagatgggtt tttatgatta 4440

gagtcccgca attatacatt taatacgcga tagaaaacaa aatatagcgc gcaaactagg 4500

ataaattatc gcgcgcggtg tcatctatgt tactagatcc gatgataagc tgtcaaacat 4560

gagaattcgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc gctcacaatt 4620

ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta atgagtgagc 4680

taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa cctgtcgtgc 4740

cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct 4800

tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca 4860

gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 4920

atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt 4980

ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 5040

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tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 5340

aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct 5400

aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc 5460

ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 5520

ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 5580

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atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa 5700

tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag 5760

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tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga 5880

gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg aagggccgag 5940

cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa 6000

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gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt 6780

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gcagctctcg gctccctctc cccttgctcc gt 7772

<210> 3

<211> 2498

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atgaagttac tctcaaagac ctttttgata ttaactctca ccttcttctt ctttggcatt 60

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<210> 4

<211> 993

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ctacgtcgtc gcaaaggaag accagagaaa gatgcttatg tcttcactca ggaggaaggc 60

ccatctttgt tgttgaacaa agttcttgca gcaactgaca atctaaatga aaagtacacc 120

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attgatacaa tcggtaaagt caggcacagg aatctgatta agttagaagg gttttggctg 300

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ctccacggtg ttagcccgaa agaaaatgtg ctagactggt ctgcacggta caatgtagca 420

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ttcccggaaa gtacagatat agtaagctgg gtgagatctg ccttgagcag cagcaacaac 780

aatgtggagg atatggtaac aacaatcgtc gatccgattc tcgtggacga gcttctggat 840

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<210> 5

<211> 9717

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

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aatcctgttg ccggtcttgc gatgattatc atataatttc tgttgaatta cgttaagcat 120

gtaataatta acatgtaatg catgacgtta tttatgagat gggtttttat gattagagtc 180

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ggatatattg gcgggtaaac ctaagagaaa agagcgttta ttagaataac ggatatttaa 360

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gggcgatcaa aggcacgcgc atcggcggtg aggttgccga ggcgctggcc gggtacgagc 2100

tgcccattct tgagtcccgt atcacgcagc gcgtgagcta cccaggcact gccgccgccg 2160

gcacaaccgt tcttgaatca gaacccgagg gcgacgctgc ccgcgaggtc caggcgctgg 2220

ccgctgaaat taaatcaaaa ctcatttgag ttaatgaggt aaagagaaaa tgagcaaaag 2280

cacaaacacg ctaagtgccg gccgtccgag cgcacgcagc agcaaggctg caacgttggc 2340

cagcctggca gacacgccag ccatgaagcg ggtcaacttt cagttgccgg cggaggatca 2400

caccaagctg aagatgtacg cggtacgcca aggcaagacc attaccgagc tgctatctga 2460

atacatcgcg cagctaccag agtaaatgag caaatgaata aatgagtaga tgaattttag 2520

cggctaaagg aggcggcatg gaaaatcaag aacaaccagg caccgacgcc gtggaatgcc 2580

ccatgtgtgg aggaacgggc ggttggccag gcgtaagcgg ctgggttgtc tgccggccct 2640

gcaatggcac tggaaccccc aagcccgagg aatcggcgtg acggtcgcaa accatccggc 2700

ccggtacaaa tcggcgcggc gctgggtgat gacctggtgg agaagttgaa ggccgcgcag 2760

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acccgcgata gtcgcagcat catggacgtg gccgttttcc gtctgtcgaa gcgtgaccga 3000

cgagctggcg aggtgatccg ctacgagctt ccagacgggc acgtagaggt ttccgcaggg 3060

ccggccggca tggccagtgt gtgggattac gacctggtac tgatggcggt ttcccatcta 3120

accgaatcca tgaaccgata ccgggaaggg aagggagaca agcccggccg cgtgttccgt 3180

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aagatcgtaa agagcgaaac cgggcggccg gagtacatcg agatcgagct agctgattgg 3420

atgtaccgcg agatcacaga aggcaagaac ccggacgtgc tgacggttca ccccgattac 3480

tttttgatcg atcccggcat cggccgtttt ctctaccgcc tggcacgccg cgccgcaggc 3540

aaggcagaag ccagatggtt gttcaagacg atctacgaac gcagtggcag cgccggagag 3600

ttcaagaagt tctgtttcac cgtgcgcaag ctgatcgggt caaatgacct gccggagtac 3660

gatttgaagg aggaggcggg gcaggctggc ccgatcctag tcatgcgcta ccgcaacctg 3720

atcgagggcg aagcatccgc cggttcctaa tgtacggagc agatgctagg gcaaattgcc 3780

ctagcagggg aaaaaggtcg aaaaggtctc tttcctgtgg atagcacgta cattgggaac 3840

ccaaagccgt acattgggaa ccggaacccg tacattggga acccaaagcc gtacattggg 3900

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aactctttaa aacttattaa aactcttaaa acccgcctgg cctgtgcata actgtctggc 4020

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ccaggcaatc taccagggcg cggacaagcc gcgccgtcgc cactcgaccg ccggcgccca 4200

catcaaggca ccctgcctcg cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca 4260

gctcccggag acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca 4320

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gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc aggaaagaac 4620

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ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg 4740

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tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc 4860

gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc 4920

aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac 4980

tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt 5040

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ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt 5220

ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg 5280

atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc 5340

atgcattcta ggtactaaaa caattcatcc agtaaaatat aatattttat tttctcccaa 5400

tcaggcttga tccccagtaa gtcaaaaaat agctcgacat actgttcttc cccgatatcc 5460

tccctgatcg accggacgca gaaggcaatg tcataccact tgtccgccct gccgcttctc 5520

ccaagatcaa taaagccact tactttgcca tctttcacaa agatgttgct gtctcccagg 5580

tcgccgtggg aaaagacaag ttcctcttcg ggcttttccg tctttaaaaa atcatacagc 5640

tcgcgcggat ctttaaatgg agtgtcttct tcccagtttt cgcaatccac atcggccaga 5700

tcgttattca gtaagtaatc caattcggct aagcggctgt ctaagctatt cgtataggga 5760

caatccgata tgtcgatgga gtgaaagagc ctgatgcact ccgcatacag ctcgataatc 5820

ttttcagggc tttgttcatc ttcatactct tccgagcaaa ggacgccatc ggcctcactc 5880

atgagcagat tgctccagcc atcatgccgt tcaaagtgca ggacctttgg aacaggcagc 5940

tttccttcca gccatagcat catgtccttt tcccgttcca catcataggt ggtcccttta 6000

taccggctgt ccgtcatttt taaatatagg ttttcatttt ctcccaccag cttatatacc 6060

ttagcaggag acattccttc cgtatctttt acgcagcggt atttttcgat cagttttttc 6120

aattccggtg atattctcat tttagccatt tattatttcc ttcctctttt ctacagtatt 6180

taaagatacc ccaagaagct aattataaca agacgaactc caattcactg ttccttgcat 6240

tctaaaacct taaataccag aaaacagctt tttcaaagtt gttttcaaag ttggcgtata 6300

acatagtatc gacggagccg attttgaaac cgcggtgatc acaggcagca acgctctgtc 6360

atcgttacaa tcaacatgct accctccgcg agatcatccg tgtttcaaac ccggcagctt 6420

agttgccgtt cttccgaata gcatcggtaa catgagcaaa gtctgccgcc ttacaacggc 6480

tctcccgctg acgccgtccc ggactgatgg gctgcctgta tcgagtggtg attttgtgcc 6540

gagctgccgg tcggggagct gttggctggc tggtggcagg atatattgtg gtgtaaacaa 6600

attgacgctt agacaactta ataacacatt gcggacgttt ttaatgtact gaattaacgc 6660

cgaattaatt cgggggatct ggattttagt actggatttt ggttttagga attagaaatt 6720

ttattgatag aagtatttta caaatacaaa tacatactaa gggtttctta tatgctcaac 6780

acatgagcga aaccctatag gaaccctaat tcccttatct gggaactact cacacattat 6840

tatggagaaa ctcgagcttg tcgatcgaca gatccggtcg gcatctactc tatttctttg 6900

ccctcggacg agtgctgggg cgtcggtttc cactatcggc gagtacttct acacagccat 6960

cggtccagac ggccgcgctt ctgcgggcga tttgtgtacg cccgacagtc ccggctccgg 7020

atcggacgat tgcgtcgcat cgaccctgcg cccaagctgc atcatcgaaa ttgccgtcaa 7080

ccaagctctg atagagttgg tcaagaccaa tgcggagcat atacgcccgg agtcgtggcg 7140

atcctgcaag ctccggatgc ctccgctcga agtagcgcgt ctgctgctcc atacaagcca 7200

accacggcct ccagaagaag atgttggcga cctcgtattg ggaatccccg aacatcgcct 7260

cgctccagtc aatgaccgct gttatgcggc cattgtccgt caggacattg ttggagccga 7320

aatccgcgtg cacgaggtgc cggacttcgg ggcagtcctc ggcccaaagc atcagctcat 7380

cgagagcctg cgcgacggac gcactgacgg tgtcgtccat cacagtttgc cagtgataca 7440

catggggatc agcaatcgcg catatgaaat cacgccatgt agtgtattga ccgattcctt 7500

gcggtccgaa tgggccgaac ccgctcgtct ggctaagatc ggccgcagcg atcgcatcca 7560

tagcctccgc gaccggttgt agaacagcgg gcagttcggt ttcaggcagg tcttgcaacg 7620

tgacaccctg tgcacggcgg gagatgcaat aggtcaggct ctcgctaaac tccccaatgt 7680

caagcacttc cggaatcggg agcgcggccg atgcaaagtg ccgataaaca taacgatctt 7740

tgtagaaacc atcggcgcag ctatttaccc gcaggacata tccacgccct cctacatcga 7800

agctgaaagc acgagattct tcgccctccg agagctgcat caggtcggag acgctgtcga 7860

acttttcgat cagaaacttc tcgacagacg tcgcggtgag ttcaggcttt ttcatatctc 7920

attgcccccc gggatctgcg aaagctcgag agagatagat ttgtagagag agactggtga 7980

tttcagcgtg tcctctccaa atgaaatgaa cttccttata tagaggaagg tcttgcgaag 8040

gatagtggga ttgtgcgtca tcccttacgt cagtggagat atcacatcaa tccacttgct 8100

ttgaagacgt ggttggaacg tcttcttttt ccacgatgct cctcgtgggt gggggtccat 8160

ctttgggacc actgtcggca gaggcatctt gaacgatagc ctttccttta tcgcaatgat 8220

ggcatttgta ggtgccacct tccttttcta ctgtcctttt gatgaagtga cagatagctg 8280

ggcaatggaa tccgaggagg tttcccgata ttaccctttg ttgaaaagtc tcaatagccc 8340

tttggtcttc tgagactgta tctttgatat tcttggagta gacgagagtg tcgtgctcca 8400

ccatgttatc acatcaatcc acttgctttg aagacgtggt tggaacgtct tctttttcca 8460

cgatgctcct cgtgggtggg ggtccatctt tgggaccact gtcggcagag gcatcttgaa 8520

cgatagcctt tcctttatcg caatgatggc atttgtaggt gccaccttcc ttttctactg 8580

tccttttgat gaagtgacag atagctgggc aatggaatcc gaggaggttt cccgatatta 8640

ccctttgttg aaaagtctca atagcccttt ggtcttctga gactgtatct ttgatattct 8700

tggagtagac gagagtgtcg tgctccacca tgttggcaag ctgctctagc caatacgcaa 8760

accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga 8820

ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt tagctcactc attaggcacc 8880

ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca 8940

atttcacaca ggaaacagct atgaccatga ttacgaattc cgacgagtca gtaataaacg 9000

gcgtcaaagt ggttgcagcc ggcacacacg agtcgtgttt atcaactcaa agcacaaata 9060

cttttcctca acctaaaaat aaggcaatta gccaaaaaca actttgcgtg taaacaacgc 9120

tcaatacacg tgtcatttta ttattagcta ttgcttcacc gccttagctt tctcgtgacc 9180

tagtcgtcct cgtcttttct tcttcttctt ctataaaaca atacccaaag agctcttctt 9240

cttcacaatt cagatttcaa tttctcaaaa tcttaaaaac tttctctcaa ttctctctac 9300

cgtgatcaag gtaaatttct gtgttcctta ttctctcaaa atcttcgatt ttgttttcgt 9360

tcgatcccaa tttcgtatat gttctttggt ttagattctg ttaatcttag atcgaagacg 9420

attttctggg tttgatcgtt agatatcatc ttaattctcg attagggttt catagatatc 9480

atccgatttg ttcaaataat ttgagttttg tcgaataatt actcttcgat ttgtgatttc 9540

tatctagatc tggtgttagt ttctagtttg tgcgatcgaa tttgtagatt aatctgagtt 9600

tttctgatta acagggtacc cggggatcct ctagagtcga cctgcaggac tacaaagacc 9660

atgatggaga ctataaggat cacgacatcg attacaagga cgatgacgat aagtgag 9717

<210> 6

<211> 3522

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

atgaagttac tctcaaagac ctttttgata ttaactctca ccttcttctt ctttggcatt 60

gcactagcga aacagagctt tgaaccagag atcgaagctt tgaaatcctt caagaatggt 120

atttccaacg accctttagg agtattatca gattggacca tcatcggttc gttacgacac 180

tgtaattgga ccggaatcac ctgcgatagt accggacatg tagtctcggt ttccttgctg 240

gagaagcaac ttgaaggtgt tctgtctcca gccatagcga atctcaccta tctccaggtt 300

cttgatctca cttcaaatag ttttaccggc aaaataccgg ctgaaatagg aaagttaacc 360

gagcttaacc agcttattct gtacctaaac tatttctctg gttcgattcc ttctggaatc 420

tgggagctta agaatatttt ctatcttgat cttagaaata atttgttgtc cggtgatgtt 480

cctgaggaaa tctgcaaaac cagttctttg gtattgattg ggtttgatta caacaactta 540

accgggaaaa taccagaatg cttaggagat ttggttcatc tccaaatgtt tgtagcagct 600

ggtaaccatt taactggttc gattccggta tcaattggta ctctggctaa tttaacggat 660

ttagacctga gtggtaacca gttaaccgga aaaataccga gagattttgg aaatctcttg 720

aacttacagt ctctcgtttt aactgaaaac ttgttggaag gagatatacc agctgagatc 780

ggaaactgct cgagcttggt ccaacttgag ctttacgata accagttaac cgggaaaata 840

ccagctgaat tagggaattt ggttcagctg caagcactcc ggatatacaa gaacaaactt 900

acttcttcaa ttccatcttc attgttccgg ttaactcagt taacccattt ggggttatca 960

gaaaaccatt tggttggacc gatatcagaa gaaatcggtt ttcttgagtc acttgaagtc 1020

ctcacacttc attccaacaa cttcacagga gagtttccac agtccatcac aaacttgagg 1080

aacttgacag tcctaacggt ggggttcaat aatatttccg gtgagctccc ggcggatcta 1140

gggcttctta caaaccttcg gaacctttca gcgcacgaca atcttcttac cggaccaata 1200

ccttccagca taagtaactg caccggtctt aaactcctgg acctgtctca caaccaaatg 1260

actggcgaga tcccgcgggg tttcggaagg atgaatctta cgttcatttc tattgggagg 1320

aatcatttca ccggtgaaat tccagatgat atcttcaact gttcaaactt ggaaactctt 1380

agtgtggcag ataacaactt aacaggaact ctcaagccat taattgggaa gcttcaaaaa 1440

ctcaggattt tgcaagtttc atataactct ctcactggac cgattcctcg agaaatcggg 1500

aatctgaaag atttgaatat cttgtacctt cactctaatg gtttcacagg gagaatcccg 1560

agagagatgt cgaatctcac tctcctccag gggctaagga tgtattcaaa tgatcttgaa 1620

ggtccaattc ctgaagaaat gtttgatatg aagctactct cagttcttga tctttccaac 1680

aacaaattct caggtcaaat tcctgccttg ttctccaagc ttgaatcgct tacctacttg 1740

agtcttcaag gaaacaaatt caacgggtct atccctgcaa gccttaagtc gctttcgctt 1800

ctcaacacat tcgatatctc cgacaatctt ctcactggaa ccatccctgg agagctgtta 1860

gcttctttga aaaacatgca gctttacctc aacttctcaa acaacttgtt gactggaacc 1920

atcccaaagg agcttggaaa gcttgaaatg gttcaagaaa tcgacctttc aaacaatctc 1980

ttttctgggt ctattccaag atctttacag gcctgcaaaa atgtgttcac actggatttt 2040

tcgcagaaca atctctcggg tcatatacca gatgaagtct tccaaggcat ggatatgatc 2100

ataagcttga acctttcaag gaacagtttc tctggagaaa tccctcagag cttcgggaac 2160

atgacgcatt tggtctcctt ggatctctct agtaacaatc tcactggtga aattccagag 2220

agtctcgcca atctttcgac tctgaaacat ctcaaactag cttcaaacaa cctcaaaggc 2280

catgttcctg aatccggggt gttcaaaaac atcaacgcct ctgatctaat gggaaacaca 2340

gatctctgtg gtagcaagaa gcctctcaag ccatgtacga tcaagcagaa gtcgagccac 2400

ttctcgaaga gaaccagagt catcctgatt attcttggat cagccgcggc tcttcttctt 2460

gtcctgcttc ttgttctgat tctaacctgt tgcaagaaaa aagaaaaaaa gattgaaaat 2520

tcatcagagt cctcattacc ggatttggat tcagctctga aactgaagag atttgaacca 2580

aaagagttgg agcaagcaac agattcattc aacagtgcca acatcattgg ctcaagcagc 2640

ttaagcacag tgtacaaagg tcagctagaa gatgggacag tgattgcagt aaaagtattg 2700

aatctaaagg aattctctgc agaatcagac aagtggttct acacagaagc taaaacattg 2760

agccaactaa aacatcgaaa cctggtgaag atcttagggt ttgcgtggga aagcggcaaa 2820

acgaaagctt tagtgcttcc atttatggag aatggaaact tggaggacac cattcacggc 2880

tctgcagcac cgattgggtc gcttttagaa aaaatcgatc tttgtgttca tatcgcaagc 2940

ggaatcgatt atcttcattc tggatatggt tttcccatcg ttcattgtga tctgaagcca 3000

gctaatatac tccttgacag tgaccgcgtt gctcacgtaa gcgattttgg aactgctcgg 3060

attctaggtt tccgcgaaga tggaagcacc acagcttcaa catcagcctt cgagggtaca 3120

attggatact tagctccaga gtttgcttat atgaggaaag tgacaacaaa agccgatgta 3180

ttcagcttcg ggatcataat gatggagctg atgacgaaac agagaccaac ttcgttgaat 3240

gatgaagatt cacaagacat gactttgcgc caattggtgg agaaatcgat tggaaatgga 3300

agaaaaggga tggttagggt tcttgatatg gaactcgggg actctattgt ttctctgaaa 3360

caggaagagg ctattgaaga ctttctgaag ctttgtttgt tctgtacaag ctctagacct 3420

gaagatcgac ctgatatgaa cgagattctt acacatctga tgaaacttag aggcaaagcg 3480

aattcatttc gagaagatcg taacgaggat cgagaagttt ag 3522

Claims

1.重组RLK在植物免疫调节中的应用，其特征在于，所述重组RLK在增强转基因拟南芥flg22诱导信号传导能力中的应用；

所述重组RLK为RLK激酶域PEPR1 KD与FLS2胞外域和跨膜域组成的重组蛋白，其氨基酸序列如 SEQ ID No.1 所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下任意一种：

1）在诱导PTI下游反应，提高转基因拟南芥胼胝质的积累中的应用；2）在调控WRKY33高表达，提高转基因拟南芥抵抗病原菌侵染中的应用；

3）在增强MAPK磷酸化中的应用。