KR101424361B1 - 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증의 예방 또는 치료용 조성물 및 염증을 예방 또는 개선하는 효과를 가지는 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화합물은 융모요막 모델에서 신생혈관형성 억제활성을 가지고 기존 염증을 억제하는 활성이 있는 것으로 알려진 5-ASA나 찰콘화합물과 비교하였을 때 염증을 억제하는 효과가 더 높았으며, 염증질환의 일종인 염증성 장질환의 치료효과를 규명하였다는 점에 특징이 있다. 따라서 본 발명에 따른 하이드록시 챨콘 화합물은 각종 염증 질환의 치료 및 예방을 위한 약학적 용도로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 염증질환의 증상을 개선 및 예방할 수 있는 식품학적 용도로 사용할 수 있다.

Description

하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염 조성물{Composition comprising an hydroxychalcone compounds as an active ingredient for anti inflammatory activity}

본 발명은 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증질환의 예방 또는 치료용 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.

염증반응은 생체나 조직에 물리적 작용이나 화학적 물질, 세균 감염 등의 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상부위를 수복 재생하려는 기전이며, 일단 자극이 가해지면 국소적으로 히스타민, 세로토닌, 브래디키닌, 프로스타글라딘, 류코트리엔과 같은 혈관 활성 물질이 유리되어 혈관 투과성이 증대되면서 염증을 유발한다. 그러나 지속적인 염증반응은 도리어 점막손상을 촉진하고, 그 결과 일부에서는 암 발생 등의 질환을 이끈다.

대식세포는 선천면역뿐만 아니라 획득면역 등 다양한 숙주반응에 관여하여 항상성 유지에 관여하는 것으로 알려져 있으며, 염증반응 시에는 NO(Nitric Oxide)와 사이토카인을 생산하여 감염초기에 생체방어에 중요한 역할을 한다. 내독소로 잘 알려진 LPS(lipopolysaccharide)는 그람 음성균의 세포외막에 존재하며, RAW 264.7과 같은 마크로파지(macrophage) 또는 단핵구(monocyte)에서 TNF-α, 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-1β(IL-1β)와 같은 염증성 사이토카인들을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 또한 이러한 염증매개 물질의 형성은 포스포리파아제A2(phospholipase A2)의 활성으로 인해 아라키돈산이 프로스타글라딘으로 바뀌는 과정 및 NO형성 과정으로 이어지게 된다. 체내 염증과정에서는 과량의 NO 및 프로스타글라딘E₂(PGE₂) 등의 염증인자가 iNOS 및 COX-2에 의해 형성된다. 이 중 NO는 체내 방어기능, 신호전달기능, 신경독성, 혈관확장 등의 다양한 생리 기능을 가지고 있다. 일반적인 NO의 형성은 박테리아를 죽이거나 종양을 제거시키는 중요한 역할을 하지만, 염증상태에서 iNOS에 의해 과잉 생성된 NO는 혈관 투과성, 부종 등의 염증반응을 촉진시킬 뿐만 아니라 염증매개체의 생합성을 촉진하여 염증을 심화시키는 것으로 알려져 있다. PGE_2는 염증반응, 면역반응, 그리고 혈관형성(angiogenesis)을 촉진하는 등 암 발생에도 깊이 관여하고 있는 것으로 알려져 있다.

이러한 기전의 작용으로 현재까지 항염증 약물의 사용으로 인해 통증의 완화를 초래해 왔으며, 비마약성 진통제의 대부분 역시 항염증 효과를 가지므로 급성 및 만성 염증 질환의 치료에 적절히 사용되어 왔다. 그러나 부작용 때문에 장기적으로 사용되기가 곤란하며, 결과적으로 현재까지의 치료법에 부작용의 심각성이 너무 크기 때문에 새롭게 개선된 치료제 개발은 필수적이고 시급하다고 할 수 있다.

염증성 장질환(inflammatory bowel disease)은 장관에 염증을 일으키는 질환을 총칭하는 용어로 궤양성 대장염, 크론병, 베체트병, 장결핵, 아메바 장염, 방사선 장염, 약제유발 장염 등이 있으나, 일반적으로 염증성 장질환은 만성 특발성 염증성 질환인 궤양성 대장염과 크론병을 말한다. 궤양성 대장염은 대장의 점막에 진무름(미란)이나 궤양이 연속적으로 형성되는 질환으로, 혈변, 점혈변, 설사, 복통이 일어나고, 중증인 경우에는 발열, 체중감소, 빈혈 등의 전신성의 증상이 나타난다. 또한, 크론병은 입에서 항문에 이르는 소화관의 임의의 부위에 궤양 등의 병변이 비연속적으로 발생하는 질환으로서, 복통, 설사, 혈변과 더불어, 중증의 경우에는 발열, 하혈, 체중감소, 전신권태감, 빈혈 등의 증상이 나타난다. 궤양성 대장염 및 크론병 모두 일시적으로 증상이 좋아지다가, 재발이 반복하는 만성 난치성 질환이다. 이들 질환의 병인으로서는 유전적 요인이나 면역이상, 식사 등의 환경인자가 관여한다는 지적이 있지만, 원인은 아직 불분명하다.

종래, 궤양성 대장염 및 크론병의 발생율은 서양인에게 높다고 알려져 있었지만, 최근, 식습관 등의 생활습관의 변화로 인해 우리나라 등 동양에서도 환자수가 급증하고 있다. 그렇지만, 원인이 불문명한 이유도 있어 근본적 치료법은 확립되어 있지 않다. 이 때문에 완전한 치료를 목표로 하는 것이 아니라, 증상의 진행을 지연 및 완화시키고, 이러한 상태를 가능한 한 장기간 유지하는 약제가 사용되고 있는 실정이다. 이러한 대중요법을 위한 약제로서, 주로 아미노살리실산제제, 부신피질 스테로이드제, 면역억제제, TNF-a 단일클론항체 등이 사용되고 있지만, 다양한 부작용이 보고되고 있다. 예를 들어, 아미노살리실산제제로서 자주 사용하는 설파살라진은 구역질, 구토, 식욕부진, 발진, 두통, 간장해, 백혈구 감소, 이상 적혈구, 단백뇨, 설사 등의 부작용이 보고되고 있다. 부신피질스테로이드제인 프레드니솔론은 경구투여, 관장, 좌약, 정맥 주사 등으로 사용되지만, 위궤양이나 장기사용에 의한 대퇴 골두 괴사 등 부작용이 강하다. TNF-a 단일클론항체인 Infliximab는 1998년 미국 FDA로부터 크론병 치료제로 허가를 받은 후 크론병 환자들을 치료하기 위해 사용되었으나, 범혈구 감소, 약물유발 낭창, B형 간염/결핵 재활성 등의 부작용이 나타난다. 또한, 미국 FDA는 infliximab와 다른 종양괴사인자(Tumor Necrosis Factor, TNF) 저해제들을 사용하는 경우 림프종과 다른 암의 위험이 증가될 수 있음을 의사들에게 경고하고 있다. 따라서, 현재 사용하고 있는 염증성 장질환 치료제보다 우수한 효과, 안전하고 부작용이 적은 새로운 염증성 장질환 치료제 개발이 절실히 요구된다.

한국공개특허 제2011-0130546호 한국등록특허 제1050020호

따라서 본 발명의 목적은 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 하이드록시 챨콘 화합물 및 식품학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 0.1uM 내지 20uM의 농도로 포함될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 염증질환은 위염, 대장염, 신장염, 간염 및 염증성 장질환으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 염증성 장질환은 크론병, 베체트병에 수반되는 장 병변, 궤양성 대장염, 출혈성 직장 궤양 및 회장 낭염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태일 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 융모요막 모델에서 신생혈관형성 억제활성을 가지고 기존 염증을 억제하는 활성이 있는 것으로 알려진 5-ASA나 찰콘화합물과 비교하였을 때 염증을 억제하는 효과가 더 높았으며, 염증질환의 일종인 염증성 장질환의 치료효과를 규명하였다는 점에 특징이 있다. 따라서 본 발명에 따른 하이드록시 챨콘 화합물은 각종 염증 질환의 치료 및 예방을 위한 약학적 용도로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 염증질환의 증상을 개선 및 예방할 수 있는 식품학적 용도로 사용할 수 있다.

도 1a 및 도 1b는 VEGF로 유도된 신생혈관형성에 대한 본 발명에 따른 화합물10-15의 억제효과를 나타낸 것이고(대조군과 비교시 ^* P<0.05; VEGF-처치군과 비교시 ^# P<0.05),
도 2a 및 도 2b는 VEGF로 유도된 신생혈관형성에 대한 본 발명에 따른 화합물 16-24 의 억제효과를 나타낸 것이다(대조군과 비교시 ^* P<0.05; VEGF-처치군과 비교시 ^# P<0.05).
도 3은 TNF-α으로 유도된 염증성 반응에 대한 본 발명에 따른 화합물 억제효과를 나타낸 것이다.
도 4는 TNBS로 유도된 염증성장질환 유도 동물모델에 본 발명의 화합물을 처리하고 체중의 변화가 있는지 여부를 측정한 결과이다.
도 5는 TNBS를 5일 투여한 후 시험동물의 대장을 적출하여 관찰한 결과이다.
도 6은 TNBS를 5일 투여한 후 시험동물의 대장을 적출한 뒤 조직 무게를 측정한 결과이다.
도 7은 장염증에 대한 지표로서 염증세포의 침윤정도를 알아보기 위하여 장점막에서 MPO활성을 측정한 결과이다.

본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.

이러한 사실을 입증하기 위해 본 발명자들은 본 발명의 일실시예를 통해 다음과 같은 실험을 수행하였는데 in vivo에서의 항혈관신생효과를 확인하기 위하여 융모요막(CAM) 분석을 실시한 결과, 본 발명 화합물에서 신생혈관형성이 강력하게 억제되었음을 알 수 있었고 특히 화합물 19, 21, 22에서 가장 높은 활성을 보임을 알 수 있었다(표 1 참조).

또한, 다른 일실시예에 의하면 TNF-α에 의해 유발된 염증성 반응을 하이드록시 챨콘 화합물이 기존 염증을 억제하는 활성이 있는 것으로 알려져 있는 5-ASA (20mM) 이나 찰콘(DPhP, 10μM)보다 확연히 억제함을 알 수 있었다(도 3 참조).

나아가 본 발명자들은 염증질환의 일종인 염증성 장질환 유발 동물모델을 제작하여 하이드록시 챨콘 화합물이 염증성 장 질환을 치료할 수 있는지를 확인한 결과 기존 염증성 장질환의 치료제로 사용되던 sulfasalazine의 활성 대사체인 5-ASA와 찰콘 화합물 보다 치료 효과가 좋음을 알 수 있었다(도 4 내지 도 7 참조).

따라서 하이드록시 챨콘 화합물은 비정상적으로 증식된 혈관신생으로 기인된 질환을 예방 및 치료할 수 있음을 알 수 있었다.

본원에서 정의되는 “혈관신생으로 기인한 질환”은 종양, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양, 각막이식 거부증, 류마티스성 관절염, 골관절염, 패혈증성 관절염, 건선, 이상 창상 유합, 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 동맥경화증, 재협착증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화 및 암의 침윤과 전이로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상, 바람직하게는, 종양, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양 또는 각막이식 거부증을 포함한다.

본 발명의 하이드록시 챨콘 화합물은 혈관신생으로 기인된 질환을 치료할 수 있지만 보다 자세하게는 염증질환의 예방 또는 치료용 조성물로 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 조성물이 예방 또는 치료할 수 있는 염증 질환의 종류로는 이에 제한되지는 않으나 위염, 대장염, 신장염, 간염 및 염증성 장질환을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물들은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.

염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가 염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 달리 지시되지 않는 한 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 본 발명의 화합물의 제조방법은, 당업계에 공지된 합성방법으로 제조가능하며, 하기의 반응식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만, 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[반응식 1]

Scheme 1. Synthesis of hydroxychalcones.

Reagents and conditions: (i) KOH (10 equiv) / NaOH (5 equiv), EtOH, 224 h, 20 °C, 3694% yield; (ii) BF₃Et₂O(0.5equiv),Dioxane,2h,20°C,74%yield.

예를 들어, EtOH 중 동일 몰량의 아릴메틸케톤(aryl methyl ketone; acetophenone, 2'/ 3'/ 4'-hydroxyacetophenone, 6 (R¹=a-d)) 및 아릴 메틸 알데히드(aryl methyl aldehyde; benzaldehyde, 2/ 3/ 4-hydroxy benzaldehyde, 7 (R2=a-d)) 용액에 KOH 또는 NaOH의 50% 수성 용액을 첨가하고 촉매 축합반응(Claisen - Schmidt condensation reaction)으로 합성가능하다.

상기와 같은 방법으로 수득한 본 발명의 화합물은 닭의 융모요막 모델에서 혈관내피성장인자와 같은 신생혈관형성 유도물질의 처리에 따른 신생혈관형성을 강력하게 억제함을 확인하여 혈관신생으로 인한 질환 특히 염증 질환의 치료 및 예방용 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.01 내지 99% 중량으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 이에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 적어도 면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 화합물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 그러므로 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 및 직장, 또는 정맥 등의 방법을 통하여 투여 할 수 있다.

또한 본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 건강기능식품은 염증 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 화합물을 첨가 가능한 식품형태는 캔디류의 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 또는 건강보조 식품류인 식품 등을 포함한다.

본 발명의 화합물은 염증 질환의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ml를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물의 혼합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 화합물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 참고예 1>

실험 준비

출발물질 및 시약은 Aldrich Chemical Co., Junsei 또는 기타 회사로부터 구입하여 사용하였으며, 추가 정제없이 사용하였다. HPLC 급(grade) 아세토미트릴(acetonitrile; ACN) 및 메탄올을 회사(Burdick and Jackson, USA)로부터 구입하였고, 박층크로마토그래피(Thin-layer chromatography; TLC) 및 컬럼크로마토그래피는 (CC)는 Kieselgel 60 F₂₅₄(Merck) 및 실리카겔(silica gel; Kieselgel 60,230-400mesh, Merck)를 각각 사용하였고 방향환을 갖는 모든 화합물은 UV광(단파장 및 장파장 모두)을 갖는 TLC 플레이트상에서 시각화하였다. NMR 스펙트럼을 ¹H-NMR은 기기(Bruker AMX250; 250MHz, FT) 및 ¹³C-NMR은 62.5MHz을 이용하였다. 화학이동은(chemical shifts) TMS로부터 이동을 측정하였다. (Chemical shifts(δ)는 ppm 및 결합상수(coupling constants, J)는 Hz로 표시함). 융점은 (Melting points) 기기부착(electrothermal 1A9100 digital melting point apparatus) 된 개방형 모세관 튜브로 보정었이 사용하였다.

HPLC 분석은 2개의 기기(Shimadzu LC-10AT pumps gradient-controlled HPLC system, Shimadzu system controller (SCL-10A VP) 및 photo diode array detector(SPD-M10A VP) 장착, Shimadzu Class VP program사용)를 사용하고 일정 부피시료(10 μL)를 일정조건(경사희석법: 10분간 A중 B를 50% 내지 100% 및 A 중 B를 150분간 100% 내지 50%로 유속량: 1.0 mL/min,t 254 nm UV 검출, 이동상 A 는 20 mM ammonium formate (AF) 처리 이차 증류수이고 B는 20 mM AF 처리 물중 90% ACN 용매임.)의 컬럼(X- Terra5μMreverse-phaseC₁₈column(4.6ⅹ250 mm)에 주입하였다. 화합물 순도는 백분율(percent; %)로 표기하였다.

< 실시예 1>

일반적 합성과정

하기 실시예 화합물들을 하기 방법 A 내지 C에 따라 KOH/ NaOH/ BF₃-Et₂O 촉매 축합반응 (Claisen -Schmidt condensation reaction)으로 합성하였다.

1-1. 방법 A

EtOH 중 동일 몰량의 아릴메틸케톤(aryl methyl ketone; acetophenone, 2'/ 3'/ 4'-hydroxyacetophenone) 및 아릴 메틸 알데히드(aryl methyl aldehyde; benzaldehyde, 2/ 3/ 4-hydroxy benzaldehyde) 용액에 KOH (10 당량)의 50% 수성 용액을 첨가하고 20 °C에서 2 내지 24시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 6 M 수성 HCl 용액 (pH 를 2로 조정)으로 중화하고, 에틸아세테이트로 추출, 및 물 및 염수로 세척하였다. 추가로 재결정법 또는 컬럼크로마토그래피법으로 정제하여 순수 고체 화합물들을 수득하였다.

1-2. 방법 B

6 M 수성 NaOH 용액 (5 당량)을 사용하는 점만 제외하고 방법 A와 유사하게 합성하였다.

1-3. 방법 C

고량의 디옥산(dioxane) 중 동일 몰량의 아릴메틸케톤(aryl methyl ketone; 4'-hydroxyacetophenone) 및 아릴 메틸 알데히드(aryl methyl aldehyde; 4-hydroxybenzaldehyde) 용액에 BF₃-Et₂O (0.5 equiv) 을 첨가하고 20 °C에서 2시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트로 추출, 및 물 및 염수로 세척하였다. 추가로 컬럼크로마토그래피법으로 정제하여 순수 고체 화합물들을 수득하였다.

< 실시예 2>

1-(2- 히드록시페닐 )-3-페닐프로페논(1-(2- Hydroxyphenyl )-3- phenylpropenone , 10)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 2'-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.40mL, 20.00mmol) 및 벤즈알데히드 (2.02mL, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논 (2.72g, 60.7%, 12.1mmol)을 수득하였다.

mp 97.197.8 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.46

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 12.84 (s, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 7.96 (d, J=15.5Hz, 1H,CO-C=CH), 7.95 (dd, J=8.1, 1.6Hz, 1H, 1-phenyl 6'-H), 7.70 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=C), 7.70-7.66 (m, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.51 (ddd, J=8.6, 7.3, 1.6Hz, 1H, 1-phenyl 4'-H), 7.46-7.43 (m, 3H, 3-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.05 (dd, J=8.4, 0.9Hz, 1H, 1-phenyl 3'-H), 6.99 (ddd, J=8.1, 7.2, 1.2Hz 1H, 1-phenyl 5'-H).

¹³C- NMR (62.5 MHz, CDCl₃)δ 193.72, 163.57, 145.48, 136.43, 134.54, 130.94, 129.64, 129.04, 128.66, 120.04, 119.97, 188.86, 118.63.

< 실시예 3>

1-(3- 히드록시페닐 )-3- 페닐프로페논 (1-(3- Hydroxyphenyl )-3- phenylpropenone , 11)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 3'-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 4.08g, 30.00mmol) 및 벤즈알데히드 (benzaldehyde, 3.03 mL, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논 (5.90g, 87.7%, 26.3mmol)을 수득하였다.

mp 120.2120.6 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane 1:2v/v):0.35

HPLC 순도: 100%

¹H -NMR (250 MHz, CDCl₃)δ7.86 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-C=CH), 7.66-7.62 (m, 3H, 3-phenyl H-2, H-6, 1-phenyl H-2), 7.60 (d, J=7.8Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.55 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-CH=C), 7.44-7.41 (m, 3H, 3-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.38 (t, J=7.8Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 7.15 (dd, J=8.0, 2.4Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.59 (br, 1H, 1-phenyl 3-OH).

¹³C- NMR (62.5 MHz, CDCl₃) δ 190.87, 156.43, 145.52, 139.44, 134.69, 130.73, 129.91, 128.97, 128.56, 121.87, 120.99, 120.50, 115.19.

< 실시예 4>

1-(4- 히드록시페닐 )-3- 페닐프로페논 (1-(4- Hydroxyphenyl )-3- phenylpropenone , 12)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 4'-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72 g, 20.00 mmol) 및 벤즈알데히드 (benzaldehyde, 2.02 mL, 20.00 mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 밝은 황색 고체상의 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논 (3.85g,86.1%,17.2mmol)을 수득하였다.

mp 180.0180.7 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.40

HPLC 순도: 100%

¹H-NMR (250 MHz, DMSO-d ₆)δ10.46 (br, 1H, 1-phenyl 4-OH), 8.08 (d, J=8.5Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.93 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.857.84 (m, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.70 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=C), 7.457.42 (m, 3H, 3-phenyl H-3, H-4, H-5), 6.90 (d, J=8.5Hz, 2H, 1-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.32, 162.48, 142.95, 135.10, 131.45, 130.56, 129.27, 129.12, 128.95, 122.29, 115.61.

< 실시예 5>

3-(2- 히드록시페닐 )-1- 페닐프로페논 (3-(2- Hydroxyphenyl )-1- phenylpropenone , 13)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 아세토페논(acetophenone, 2.33 mL, 20.00 mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.09 mL, 20.00 mL)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 녹황색 고체상의 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논 (3.95 g, 88.2%, 17.6 mmol)을 수득하였다.

mp 149.9150.6 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.37

HPLC 순도: 98%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.31 (br, 1H, 3-phenyl 2-OH), 8.108.06 (m, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 8.07 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.87 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=C), 7.85 (dd, J=7.3, 1.4Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.687.52 (m, 3H, 1-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.26 (dt, J=8.2, 1.5Hz, 1H, 3-phenyl H-4), 6.94 (dd, J=8.2, 0.8Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 6.89 (t, J=7.2Hz, 1H, 3-phenyl H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.75, 157.51, 139.80, 138.13, 133.19, 132.37, 129.05, 128.96, 128.60, 121.57, 121.12, 119.68, 116.46.

< 실시예 6>

3-(3- 히드록시페닐 )-1- 페닐프로페논 (3-(3- Hydroxyphenyl )-1- phenylpropenone , 14)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 아세토페논(acetophenone, 1.16 mL, 10.00 mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 1.22 g, 10.00 mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 밝은 황색 고체상의 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논 (2.11 g, 94.1%, 9.4 mmol)을 수득하였다.

mp 170.1170.9 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.35

HPLC 순도: 98%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.67 (br, 1H, 3-phenyl 3-OH), 8.15-8.11 (m, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.87 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.697.53 (m, 3H, 1-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.67 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=C), 7.337.24 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.22 (br, 1H, 3-phenyl H-2), 6.87 (ddd, J=7.7, 2.1, 1.0Hz, 1H, 3-phenyl H-4).

¹³C NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.45, 158.00, 144.53, 137.79, 136.13, 133.35, 130.12, 129.02, 128.72, 122.09, 120.07, 118.08, 115.50.

< 실시예 7>

3-(4- 히드록시페닐 )-1- 페닐프로페논 (3-(4- Hydroxyphenyl )-1- phenylpropenone , 15)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 아세토페논(acetophenone, 2.33 mL, 20.00 mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44 g, 20.00 mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논 (3.78g,84.5%,16.9mmol)을 수득하였다.

mp 174.2175.0 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2,v/v):0.34

HPLC 순도: 95%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.14 (br, 1H, 3-phenyl 4-OH), 8.128.08 (m, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.75 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.70 (d, J=15.4Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.697.51 (m, 4H, 1-phenyl H-3, H-4, H-5, CO-CH=C), 6.84 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C-NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.20, 160.41, 144.77, 138.16, 133.06, 131.29, 128.95, 128.56, 125.97, 118.66, 116.05.

< 실시예 8>

1,3- 비스(2-히드록시페닐l)프로페논 (1,3- Bis (2- hydroxyphenyl )propenone, 16)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 2-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 1.80mL, 15.00mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 1.57mL, 15.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논 (2.98 g, 82.8%, 12.4 mmol)을 수득하였다.

mp 173174 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.46

HPLC 순도: 100%

¹H-NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 12.93 (s, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 8.24 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.96 (dd, J=8.1, 1.3Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.89 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.64 (dd, J=7.7, 1.3Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.50 (td, J=8.8, 1.4Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 7.30 (td, J=8.8, 1.5Hz, 3-phenyl H-4), 7.05 (dd, J=8.4, 0.8Hz, 1H, 1-phenyl H-3), 7.00 (t, J=7.3Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 6.95 (td, J=8.1, 1.0Hz, 3-phenyl H-5), 6.87 (d, J=8.0Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 5.73 (s, 1H, 3-phenyl 2-OH).

¹³C-NMR (62.5 MHz, CDCl₃)δ 194.47, 163.52, 155.51, 141.00, 136.31, 132.05, 130.14, 129.82, 122.03, 121.26, 121.14, 120.14, 118.85, 118.55, 116.51.

< 실시예 9>

1-(2- 히드록시페닐 )-3-(3- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(2- Hydroxyphenyl )-3-(3-hydroxyphenyl)propenone, 17)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 2-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 3.61mL, 30.00mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.66g, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논 (6.49g, 90.2%, 27.0mmol)을 수득하였다.

mp 180181 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.38

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.44 (s, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 9.65 (s, 1H, 3-phenyl 3-OH), 8.23 (dd, J=8.4, 1.5Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.96 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.76 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.55 (td, J=8.4, 1.3Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 7.34-7.26 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.24 (s, 1H, 3-phenyl H-2), 7.01-6.95 (m, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.90 (dt, J=7.6, 1.1Hz, 1H, 3-phenyl H-4).

¹³C NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 193.76, 161.94, 157.96, 145.21, 136.49, 135.93, 131.10, 130.16, 121.92, 121.07, 120.39, 119.41, 118.38, 117.91, 115.69.

< 실시예 10>

1-(2- 히드록시페닐 )-3-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(2- Hydroxyphenyl )-3-(4-hydroxyphenyl)propenone, 18)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 2-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.40mL, 20.00mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44g, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논 (1.91g, 39.8%, 7.9mmol)을 수득하였다.

mp 163164 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:1v/v):0.43

HPLC 순도: 95%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.81 (br, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 10.27 (br, 1H, 3-phenyl 4-OH), 8.26 (d, J=7.2Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.89 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.83 (d, J=16.4Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.79 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.54 (td, J=8.1, 1.0Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 7.01-6.95 (m, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.86 (d, J=8.4Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C-NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 193.81, 162.35, 160.89, 145.95, 136.40, 131.82, 130.91, 125.80, 120.75, 119.31, 117.98, 117.86, 116.16.

< 실시예 11>

1-(2- 히드록시페닐 )-1-(3- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(2- Hydroxyphenyl )-1-(3-hydroxyphenyl)propenone, 19)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 3-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 4.08g, 30.00mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.13mL, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 녹색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논 (6.35g, 88.2%, 26.4 mmol)을 수득하였다.

mp 173174 °C;

R _f (ethylacetate/n-Hexane1:1v/v):0.47

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.00 (br, 2H, 1-phenyl 3'-OH, 3-phenyl 2-OH), 8.02 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.83 (dd, J=8.1, 1.3Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.79 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.55 (d, J=7.7Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.40 (t, J=2.2Hz, 1H, 1-phenyl H-2), 7.35 (t, J=7.9Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 7.26 (td, J=8.5, 1.5Hz, 1H, 3-phenyl H-4), 7.05 (ddd, J=8.0, 2.4, 0.7Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.94 (dd, J=8.2, 0.8Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 6.85 (t, J=7.7Hz, 1H, 3-phenyl H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.66, 157.91, 157.46, 139.68, 139.58, 132.23, 130.08, 129.10, 121.58, 121.38, 120.26, 119.66, 119.56, 116.44, 114.73.

< 실시예 12>

1,3- 비스(3-히드록시페닐l)프로페논 (1,3- Bis (3- hydroxyphenyl )propenone,20)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 3-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 4.08g, 30.00mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.66g, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논(5.90g, 82.0%, 24.5mmol)을 수득하였다.

mp 226227 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane 1:1 v/v):0.43

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.74 (br, 2H, 1-phenyl 3'-OH, 3-phenyl 3-OH), 7.77 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.63 (d, J=15.4Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.62 (d, J=7.6Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.43 (s, 1H, 1-phenyl H-2), 7.35 (t, J=7.9Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 7.30-7.23 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.19 (s, 1H, 3-phenyl H-2), 7.06 (dd, J=8.0, 2.3Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.87 (d, J=7.4Hz, 1H, 1-phenyl H-4).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.35, 157.97, 144.34, 139.24, 136.18, 130.15, 122.24, 120.55, 120.09, 119.83, 118.04, 115.46, 114.81.

< 실시예 13>

1-(3- 히드록시페닐 )-3-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(3- Hydroxyphenyl )-3-(4-hydroxyphenyl)propenone, 21)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 3-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44g, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논 (2.10g, 43.8%, 8.7mmol)을 수득하였다.

mp 245246 °C;

R _f (ethylacetate/n-Hexane1:1v/v):0.42

HPLC 순도: 99%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆)δ 9.94 (br, 2H, 1-phenyl 3'-OH, 3-phenyl 4-OH), 7.73 (d, J=8.5Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.63 (d, J=17.5Hz, 2H, CO-CH=CH), 7.59 (d, J=7.7Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.41 (s, 1H, 1-phenyl H-2), 7.34 (t, J=7.9Hz, 1-phenyl H-5), 7.04 (dd, J=8.0, 2.3Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.83 (d, J=8.4Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.14, 160.36, 157.90, 144.57, 139.63, 131.23, 130.01, 125.99, 120.18, 119.61, 118.82, 116.05, 114.72.

< 실시예 14>

3-(2- 히드록시페닐 )-1-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (3-(2- Hydroxyphenyl )-1-(4-hydroxyphenyl)propenone, 22)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 4-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.09mL, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 적색 고체상의 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논(1.74g, 36.4%, 7.3mmol)을 수득하였다.

mp 197198 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:1v/v):0.33

HPLC 순도: 97%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.32 (br, 2H, 1-phenyl 4'-OH, 3-phenyl 2-OH), 8.02 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 8.01 (d, J=15.9Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.84 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.83 (d, J=8.8Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.24 (td, J=8.4, 1.4Hz, 1H, 3-phenyl H-4), 6.92 (d, J=7.5Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 6.89-6.81 (m, 3H, 3-phenyl H-5, 1-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.62, 162.16, 157.20, 138.37, 131.85, 131.14, 129.58, 128.70, 121.79, 121.12, 119.57, 116.36, 115.54.

< 실시예 15>

3-(3- 히드록시페닐 )-1-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (3-(3- Hydroxyphenyl )-1-(4-hydroxyphenyl)propenone, 23)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 4-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44g, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 연황색 고체상의 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논(3.95g, 82.3%, 16.4mmol)을 수득하였다.

mp 261262 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:1v/v):0.47

HPLC 순도: 95%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.49 (br, 1H, 1-phenyl 4'-OH) 9.64 (br, 1H, 3-phenyl 3-OH), 8.06 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.83 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.59 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.29-7.23 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.18 (s, 1H, 3-phenyl H-2), 6.89 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.85-6.82 (m, 1H, 3-phenyl H-4).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.36, 162.43, 157.94, 143.22, 136.40, 131.43, 130.10, 129.33, 122.13, 119.91, 117.74, 115.62, 115.37.

< 실시예 16>

1,3- 비스(4-히드록시페닐l)프로페논 (1,3- Bis (4- hydroxyphenyl ) propenone ,24)의 제조

상기 실시예 1의 방법 C에 따라 4-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.66g, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논(4.41g, 74.4%, 18.3mmol)을 수득하였다.

mp 226227 °C; R _f (ethylacetate:n-hexane1:1v/v):0.35

HPLC 순도: 99%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.21 (br, 2H, 1-phenyl 4'-OH, 3-phenyl 4-OH), 8.04 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.71 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.68 (d, J=14.3Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.62 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 6.88 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.83 (d, J=8.5Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.25, 162.13, 160.04, 143.39, 131.16, 130.96, 129.64, 126.20, 118.73, 115.99, 115.51.

< 참고예 2>

실험재료 및 시약, 기기 분석

유정란은 백자토종닭 농장 (청송,한국)에서 구입하여 사용하였으며, 코티존 아세테이트(cortisone acetate)는 알드리치사(Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, 혈관내피성장인(VEGF, vascular endothelial growth factor)는 알앤디(R&D systems, Minneapolis, MN, USA)로부터 구입하였고, 와트만 필터 디스크(whatman filter disc)는 와트만사(Whatman, UK)로부터 구입하였다.

< 실험예 1>

CAM 분석을 통한 화합물의 혈관신생 억제효과 분석

생체내 시험상 (in vivo)에서의 항혈관신생효과를 확인하기 위하여, 융모요막(chorioallantoic membrane, CAM) 분석을 실시하였다(Nguyen M et al., Microvascular Res ., 47, pp31-40, 1994).

닭의 유정란을 온도 37℃, 상대습도 55%를 유지해주면서 배양시켜 10일째에 기낭(air sac) 부위에 피하주사침 (hypodermic needle, 녹십자의료공업, 한국)을 이용하여 첫 번째 작은 구멍을 뚫고, 창(window)을 낼 유정란의 평평한 부위에 두 번째 구멍을 뚫었다.

첫 번째 구멍인 기낭 부위의 구멍을 통해 공기를 빼냄으로써, 융모요막 (CAM)이 유정란의 껍질로부터 분리가 되게 하여 이 부위를 회전연마기(grinding wheel, Multipro 395JA, Dremel, Mexico)로 절단하여 약 1.0cm² 크기의 창을 만들었다.

다음으로, 와트만 필터 디스크(whatman filter disk #1, whatman사, USA)에 코티존 아세테이트(cortisone acetate) 3 ㎎/㎖을 처리하여 건조시킨 후 혈관내피성장인자(VEGF)는 20 ng/CAM의 농도로, 또는 인터루킨-8(IL-8)은 10 ng/CAM의 농도로 적셔두었다.

개개 디스크는 VEGF 또는 대조용 용매를 함유한 10μl of PBS에서 현탁하고 디스크들을 성장중인 CAMs에 위치하였다. 만들어 둔 창을 통해 필터 디스크를 혈관 위에 얹고, 본 발명의 실시예 1의 화합물들을 30분 후에 CAMs에 국소적으로 첨가하고, 약물-처치 CAM들을 3일간 배양하였다.

약물처리 3일 뒤, 필터 디스크가 얹힌 CAM 부분을 떼어내어 인산완충용액을 이용하여 씻어준 후, 입체현미경(Stemi SV6 stereomicroscope, Carl Zeiss, Germany)과 Image-Pro Plus software(Media Cybernetics; Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 이미지를 촬영하여 혈관 가지의 개수를 측정하고 자료를 분석하였다.

본 실험결과, 생체내에서 VEGF로 유도된 신생혈관형성을 본 발명에 따른 화합물들이 강력하게 억제함을 확인하였으며(표 1참조), 신생 혈관 가지점(blood vessel branch points)들은 PBS-처치군에 비교하여 VEGF에 의하여 유의적으로 증가하였다. CAM에 대한 본 발명 화합물들의 처치는 VEGF로 유도된 신생혈관형성을 배양 후에 그 숫자 및 소혈관 길이 면에서 현격하게 저해함을 확인할 수 있었다(도 1a, 1b, 및 도 2a, 2b 참조). 특히 화합물 15는 1 /CAM에서 생체내에서 가장 강력한 항-신생혈관형성 활성을 나타냈다(66%).

또한 화합물 19는 화합물들 중에 가장 강력한 저해활성(89%)을 나타냈고, 유사하게 화합물 21 및 22도 강력한 저해활성을 나타냈다 (각각, 80% 및 87%)

< 실험예 2>

하이드록시 챨콘 화합물의 염증 억제 효과 분석

본 발명에서 합성한 상기 챨콘 화합물들에 대한 약리학적 효능으로서 항염 효과가 있는지 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.

염증성 장질환의 세포 모델로 HT-29 사람 대장 상피세포와 U937 사람 단핵구 세포를 이용하였다.

우선, HT-29 세포(American Type Culture Collections, Rockville, MA, USA)를 10% 태아소혈청(FBS), 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 2 mmol/L 글루타민을 함유한 RPMI 1640에서 배양하고, 95% 공기 및 5% CO2의 환경 하 37℃에서 상기 세포주를 배양하였다. 이하의 실험은 36계대 이하인 세포를 사용하였으며 세포들은 0.25% 트립신 및 1% EDTA를 함유한 D-PBS(Dulbecco's phosphate buffered saline)를 이용하여 주단위로 계대배양 하였다. 배양 배지는 이틀마다 교체하였고 배양 플레이트에 컨플루언트하게 자라게 한 후, 1:5 비율로 분할하여 서브컬쳐 하였다.

실험을 위하여, 혈청 함유 배지를 포함하는 플라스틱 세포배양 웰에 세포를 분주하고, 24시간 동안 부착시켰다. 그 후, 모든 실험은 혈청 없는 조건에서 수행하였다.

각 세포는 TNF-α의 자극 1시간 전에 상기 실시예에서 제조한 화합물 중에서 No. 19 화합물로 전처리하였고, 각 화합물들의 스탁 용액은 디메틸설폭사이드(DMSO)로 용해한 것을 사용하였다. 이때 실험 배지에 사용된 DMSO의 최종 최대농도는 0.1% 이하가 되도록 하였다. 또한 한대조군과 TNF-α만으로 처리된 세포는 0.1% DMSO를 함유한 실험 배지로 전처리하였으며, 양성 대조군으로 20mM의 5-아미노살리실산(5-ASA)을 사용하였는데, 5-ASA는 IBD(염증성 장질환)에서 활성화된 염증성 서열을 저해하는 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

TNF-α에 의해 HT-29 세포에 u937 단핵구가 부착하는 것은 염증성 장질환의 대표적인 in vitro 모델로서 염증의 시작 단계이다. 따라서 약물에 의해 TNF-α로 유도된 단핵구의 장 상피세포에 부착을 억제하면 장염, 즉 염증성장질환 억제효능이 있는 것이다. 상기와 같은 실험을 수행한 결과, TNF-α에 의해 HT-29 세포에 u937 단핵구가 부착되는 염증성 반응이 유의성 있게 나타나는 것을 확인하였으며 하이드록시찰콘 화합물 19(10μM)를 처리한 군의 경우, 염증반응을 억제하는 활성이 있는 것으로 알려져 있는 5-ASA (20mM) 이나 찰콘(DPhP, 10μM)보다 더 우수한 항염 활성을 갖는 것을 알 수 있었다(도 3 참조).

< 실험예 3>

하이드록시 챨콘 화합물에 의한 염증성 장질환 치료 효과

<3-1> 염증성 장 질환 동물 모델 제작 및 본 발명의 화합물 처리

본 발명자들은 본 발명의 하이드록시 챨콘 화합물이 염증성 장 질환에 치료효과가 있는지 확인하기 위해 염증성 장 질환 동물 모델을 대상으로 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저 염증성 장 질환이 유도된 동물모델을 제작하기 위해, 시험동물은 7 주령 된 Sprague Dawley 종을 Samtaco Bio Korea로부터 구입하여 2일간 일반 고형사료로 안정화 시킨 후 실험에 이용하였으며, 실험 기간 중 사료와 물을 자유로이 공급하였고, 사육실의 온도는 25 ± 1℃, 상대습도는 50 ± 10%로 유지시켰다. 점등관리는 자동조명조절기에 의해 12시간 명암주기(light-dark cycle)로 조절하였다.

실험군은 각 군당 6 마리로 하여 평균체중이 180 ± 10 g이 되도록 난괴법(randomized block design)에 의하여 5군(대조군, TNBS 단독 투여군, TNBS + 5-ASA 100 ㎎/㎏ 투여군, TNBS + 하이드록시찰콘 화합물 No.19를 1 ㎎/㎏ 투여군, TNBS + 하이드록시찰콘 화합물 No.19를 10 ㎎/㎏ 투여군, TNBS + 찰콘 10 ㎎/㎏ 투여군, TNBS + 찰콘 50 ㎎/㎏ 투여군)으로 나누어 실험하였다. 여기서 상기 TNBS( trobencene sulfonic acid)는 염증성 장 질환을 유발시키는 물질로 알려져 있다.

24 시간 절식한 시험동물을 diethyl ether로 마취하고, polyethylene catheter를 연결한 1㎖ 주사기를 이용하여 항문을 통하여 대장의 관강내에 50% (v/v) 에탄올로 희석한 3% TNBS 0.8 ㎖을 천천히 주입한 후, 항문으로 3% TNBS가 새어 나오는 것을 방지하기 위하여 시험동물을 거꾸로 세운 상태에서 60 초 동안 정치시켰다. 대조군은 vehicle (50% (v/v) ethanol)만을 다른 실험군과 마찬가지 방법으로 주입하였다.

약물의 효과를 조사하기 위하여 절식 24 시간 후에 TNBS 처치 후 다음날부터 5 일 동안 약물을 복강으로 하이드록시찰콘 화합물 No.19를 1 ㎎/㎏ 혹은 10 ㎎/㎏ 로 매일 일정한 시간에 일회 투여하였으며, 비교 시험물질은 염증성 장질환 치료제로 가장 잘 알려진 sulfasalazine의 활성 대사체인 5-ASA와 찰콘 화합물을 양성 대조군으로 사용하였다.

<3-2> 몸무게 측정

모든 시험동물들은 TNBS 투여 후 7일째 희생시켰고, 육안으로 보이는 궤양과 염증성 장질환(대장염)의 심각성은 실험에 참가하지 않은 두 명의 조사자에 의해 평가되었다. 시험동물의 대장을 적출하여 항문으로부터 5 ~ 6 ㎝ 사이의 조직을 1 ㎝ 길이로 잘라서 조직의 장 무게 및 MPO 활성을 측정하고 조직검사를 실시하는데 사용하였다.

또한, 모든 실험동물은 Digital mass meter를 이용하여 절식단계부터 TNBS 투여 및 약물 투여과정 동안 각 랫드의 체중 변화를 관찰하였다.

체중 180 ~ 190 g인 랫드에 3% TNBS를 이용하여 장내에 염증을 유발한 대장염 모델에서 TNBS 처리 전의 몸무게를 기준으로 5 일 간 매일 일정시간에 몸무게의 변화를 관찰한 결과, 도면 4에서 보는 바와 같이 vehicle 처리 대조군은 계속해서 몸무게가 증가함을 보이고 TNBS 군은 계속하여 몸무게가 감소하며 5 일째부터 몸무게가 약간 회복되었으나, 정상군과 비교했을 때 몸무게가 현저히 감소되었다. 양성대조군 5-ASA 100 ㎎/㎏을 처리한 군은 4 일째부터 몸무게가 서서히 회복되어 TNBS 단독 투여군에 비해 몸무게가 증가하였다. TNBS 처리 후 하이드록시찰콘 화합물 19를 1 ㎎/㎏을 복강 투여한 경우는 3 일째까지 몸무게 감소현상이 나타났으며, 4 일째부터 서서히 회복되어 TNBS 단독 처리군에 비하여 몸무게가 증가하였다. 하이드록시찰콘 화합물 19는 염증성 장질환 치료제로 알려져 있는 5-ASA 보다 몸무게 회복이 더 크게 나타났음을 알 수 있었다(도 4 참조).

<3-3> 육안 관찰

본 발명자들은 5일간의 약물투여가 끝난 후에 대장을 적출하여 육안으로 살펴 본 결과, TNBS를 처리한 시험동물의 대장은 대조군에 비하여 부종과 충혈이 관찰되었으며, 충수돌기의 부종과 울혈 및 유착현상이 나타났다.

양성대조군 5-ASA 100 ㎎/㎏ 투여한 군에서는 TNBS 단독 투여군과 비교하여 육안적 증상과 다른 기관들 사이의 유착이나 대장의 충혈도 현저히 억제되었음을 알 수 있었다.

한편, 본 발명의 하이드록시찰콘 화합물 No.19를 처리한 군은 TNBS 단독 처리군에 비해 부종과 충혈이 월등히 감소된 것으로 관찰되었고, 특히 하이드록시찰콘 화합물 19을 10 ㎎/㎏으로 처리군한 군의 경우 아무것도 처리하지 않은 정상군과 거의 유사한 형태를 보이는 것으로 관찰되었다. 따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 하이드록시챨콘 화합물이 염증성 장질환으로 인한 대장의 부종과 충혈을 매우 효과적으로 억제할 수 있다는 사실을 알 수 있었고 이러한 효과는 종래 염증성 장질환 치료제로 알려져 있는 5-ASA보다 더 치료 효과가 우수하다는 것을 알 수 있었다(도 5 참조).

<3-4> 시험동물의 조직 무게 측정

시험동물의 대장을 적출하여 조직 무게를 측정한 결과, vehicle 처리 대조군에 비해 TNBS 단독 처리군의 경우 부종이 있는 장의 무게가 유의적으로 증가하였다. 양성 대조군인 5-ASA 100 ㎎/㎏를 처리한 군에서는 장의 무게가 TNBS 처리군에 비해 유의적으로 감소하였고 하이드록시찰콘 화합물 19를 처리한 군에서는 대조군 수준보다 더 경감된 증상을 보임을 알 수 있었다(도 6 참조).

<3-5> MPO ( myeloperoxidase ) activity 측정

본 발명자들은 장염증에 대한 지표로서 염증세포의 침윤정도를 알아보기 위하여 장점막에서 MPO활성을 측정하였다.

MPO(myeloperoxidase)는 호중구에서 주로 발견되는 효소로서 조직에서 MPO의 활성은 호중구 침윤 지표가 되며, 이는 곧 염증반응의 지표로써 염증성 대장염에 의한 장 손상 수치와 상관성을 나타낸다.

본 발명자들은 MPO 활성을 측정하기 위해서 MPO assay kit를 이용하였으며, 대장 조직을 차가운 PBS로 세척하고 무게를 측정하여 조직의 무게 10 ㎎ 당 lysis buffer(pH7.4, 200 mM NaCl, 5 mM EDTA, 10 mM Tris, 10% glycerol) 200 ㎕를 첨가한 후 tissue homogenizer (Bio homogenizer M133, BIOSPEC PRODUCTS Inc. USA)를 이용하여 30 초간 균질화하였다.

균질화한 시료를 1500 × g, 15분으로 2 번 원심분리하여 상등액을 얻은 다음, 이 상등액을 MPO ELISA kit (HK210, Hycult Biotechnology, Netherlands)를 이용하여 MPO 활성을 측정하였다.

즉, anti-mouse MPO antibody가 코팅된 96 웰에 상기 상등액을 100 ㎕를 첨가하여 실온에서 1 시간 반응하고, wash buffer로 3 회 반복 세척하였다. 여기에 reconstituted tracer를 100 ㎕ 첨가하여 실온에서 1시간 반응하고 3회 반복 세척한 다음, streptavidin-peroxidase conjugate 100 ㎕를 첨가하였다.

실온에서 1 시간 반응한 후, 세척하고 TMB substrate solution 100 ㎕를 첨가하였다. 반응 30분 후에 stop solution 100 ㎕를 첨가하여 반응을 정지시킨 후 450 nm에서 흡광도를 측정하였으며, MPO 활성도는 25℃에서 1 분 동안 물에서 과산화수소 1 μM이 환원되는 수치를 의미하고 이것을 대장 조직 균질액 1 ㎖에 포함된 MPO 양으로 계산하였다.

그 결과, 대조군에 비해 TNBS 단독 처리군에서 MPO 활성이 현저히 높게 나타났으며 5-ASA 100 ㎎/㎏ 투여군에서 MPO 활성이 유의적으로 감소하였다. 하이드록시찰콘 화합물 19를 1 ㎎/㎏ 투여군에서 TNBS 단독 처리군에 비해 MPO 활성이 낮게 관찰되었으며 특히 1 ㎎/㎏의 경우 5-ASA 100 ㎎/㎏ 보다 우수하게 조직의 MPO 활성을 억제함을 알 수 있었다(도 7 참조).

하기에 본 발명의 화합물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

화합물 19.............................................200 mg

유당..................................................100 mg

탈크...................................................10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

화합물 21............................................200 mg

옥수수전분...........................................100 mg

유당.................................................100 mg

스테아린산 마그네슘....................................2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

화합물 22............................................200 mg

결정성 셀룰로오스......................................3 mg

락토오스............................................14.8 mg

마그네슘 스테아레이트................................0.2 mg

통상의 캅셀제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캅셀제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

화합물 15............................................200 mg

만니톨...............................................180 mg

주사용 멸균 증류수..................................2974 mg

Na₂HPO_{4 ,}12H₂O...........................................26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

화합물 19............................................200 mg

이성화당...............................................10 g

만니톨..................................................5 g

정제수.................................................적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

화합물 21............................................1000 mg

비타민 혼합물...........................................적량

비타민 A 아세테이트....................................70 ㎍

비타민 E..............................................1.0 ㎎

비타민 B1............................................0.13 ㎎

비타민 B2............................................0.15 ㎎

비타민 B6.............................................0.5 ㎎

비타민 B12............................................0.2 ㎍

비타민 C...............................................10 ㎎

비오틴.................................................10 ㎍

니코틴산아미드........................................1.7 ㎎

엽산...................................................50 ㎍

판토텐산 칼슘.........................................0.5 ㎎

무기질 혼합물...........................................적량

황산제1철............................................1.75 ㎎

산화아연.............................................0.82 ㎎

탄산마그네슘.........................................25.3 ㎎

제1인산칼륨............................................15 ㎎

제2인산칼슘............................................55 ㎎

구연산칼륨.............................................90 ㎎

탄산칼슘..............................................100 ㎎

염화마그네슘.........................................24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

화합물 22............................................1000 mg

구연산...............................................1000 ㎎

올리고당...............................................100 g

매실농축액...............................................2 g

타우린...................................................1 g

정제수를 가하여..................................전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (6)

1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 장 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

제1항에 있어서,
상기 화합물은 조성물에 0.1uM 내지 20uM의 농도로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 염증성 장 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

삭제

제1항에 있어서,
상기 염증성 장질환은 크론병, 베체트병에 수반되는 장 병변, 궤양성 대장염, 출혈성 직장 궤양 및 회장 낭염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 염증성 장 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논을 유효성분으로 포함하는 염증성 장 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.

제5항에 있어서,
상기 식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 것을 특징으로 하는 염증성 장 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.

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