KR101424360B1

KR101424360B1 - 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암용 조성물

Info

Publication number: KR101424360B1
Application number: KR1020120158480A
Authority: KR
Inventors: 이응석; 김정애; 강유라
Original assignee: 영남대학교 산학협력단
Priority date: 2012-07-03
Filing date: 2012-12-31
Publication date: 2014-08-01
Also published as: WO2014007447A1; KR101424361B1; KR20140005081A; KR20140005080A

Abstract

본 발명은 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암 조성물 및 암을 예방 또는 개선하는 효과를 가지는 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화합물은 융모요막 모델에서 신생혈관형성 억제활성을 가지고 특히 종양 형성에 의한 혈관신생을 억제하였으며 종양의 성장을 억제시키는 작용을 통해 우수한 항암 활성을 가지는 특징이 있다. 따라서 본 발명에 따른 하이드록시 챨콘 화합물은 각종 암 질환의 치료 및 예방을 위한 약학적 용도로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 암 증상을 개선 및 예방할 수 있는 식품학적 용도로 사용할 수 있다.

Description

하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암용 조성물{Composition comprising an hydroxychalcone compounds as an active ingredient for anti-cancer activity}

본 발명은 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암 조성물 및 암을 예방 또는 개선하는 효과를 가지는 건강기능식품에 관한 것이다.

지난 30여 년 간 전 세계적으로 암의 생성원인 및 치료법 연구에 막대한 투자가 이루어졌음에도 불구하고 전체적으로 암의 발생률 및 사망률은 줄어들지 않았다. 따라서 암 정복을 위한 대안으로 이제는 예방의 중요성이 강조되고 있으며, 특히 아스피린과 같은 비(非)스테로이드성 소염제들(Nonsteroidal anti-inflammatory drugs; NSAIDs)의 암 예방 효과가 밝혀지면서 독성이 없는 안전한 화합물을 이용하여 암화 과정을 억제 및 제어하려는 이른바 화학암예방(Chemoprevention)이 암 발생률 및 사망률을 실질적으로 낮출 수 있는 새로운 전략으로 부각되고 있다.

화학암예방(chemoprevention)이란 독성이 없는 안전한 화학물질이나 그 혼합물을 이용하여 정상세포의 암화를 억제, 지연 또는 역전시킴으로써 암을 예방하려는 새로운 전략으로, 이는 암환자들에게 항암제를 투여하여 치료하는 기존의 화학요법(chemotherapy)과는 다른 개념으로서 암과의 전쟁을 승리로 이끄는 중요한 전략으로 간주되고 있으며, 이러한 화학암예방으로 사용될 수 있는 안전성이 검증된 여러 약용식물 및 식품 유래 화합물들에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있다.

또한, 많은 역학 연구를 통해 탄수화물이나 섬유소와 같은 macronutrients나 비타민, 미네랄과 같은 micronutrients 들이 암의 발생률을 낮춘다는 사실이 밝혀지게 되었다. 특히 녹황색 채소나 과일에 풍부하게 들어 있는 항산화 비타민들(Vit. A, Vit. C. and Vit. E)이나 베타-케로틴 등의 비타민 전구물질들이 암 예방에 효과가 있다는 것은 익히 잘 알려져 있다. 이와 같은 항산화 비타민들이나 미량원소들의 암 예방 효과를 체계적으로 검증하기 위한 일련의 임상실험들이 미국 국립 암 연구소 등의 주도하에 활발히 진행되고 있다.

세계에서 식도암과 위암발생률이 가장 높은 중국의 린샨(Linxian) 지역에 거주하는 40세에서 69세 주민 29,584명을 대상으로 한 실험 결과, 하루 권장량의 비타민 E, 베타-케로틴, 셀레늄을 매일 섭취한 사람들의 암으로 인한 사망률은 대조군에 비해 훨씬 낮았다고 보고된 바 있다. 그러나 우리가 일상적으로 섭취하는 야채나 과일에는 항산화 비타민 외에도 수많은 암 예방 작용이 있는 화합물들이 들어 있다. 식물유래 화학물질을 일컫는 파이토케미컬(Phytochemical)은 비록 영양적인 가치는 비타민에 미치지 못할지라도 암을 예방하는 효과는 오히려 항산화 비타민들보다 우수한 경우도 많다고 하는데, 이들은 대부분 식물의 2차 대사산물로서 그중에는 해충이나 주변의 동물 또는 자외선으로부터 스스로를 보호하기 위해 만들어진 것들도 많다.

한편, 세포는 외부의 스트레스에 적응하기 위하여 스스로 방어체계를 구축하고 있는데, 특히 활성산소종(ROS)에 의한 산화적 스트레스에 의해 일차적으로 세포내 항산화 체계가 소모될 경우 이를 보강하기 위한 일련의 항산화 유전자들의 유도가 수반된다. 또한, 항산화반응과 제 2상 항독소 효소에 관련된 유전자의 발현은 각각의 유전자 프로모터에서 발견되는 특이한 염기서열인 Antioxidant Response Element(ARE)에 의해서 전사단계가 조절되어지는데, ARE에 의해서 조절되는 주요효소로는 Heme Oxygenase 1 (HO-1), NAD(P)H:Quinine Oxidoreductase-1 (NQO1), Glutathione S-Transferase (GST), γ-GlutamylCysteine Synthetase (γ-GCS), Thioredoxin Reductase-1, Thioredoxin 등이 있다. 이러한 ARE를 통한 전사의 활성은 주로 basic region leucine Zipper (bZIP) 구조를 공유하는 NF-E2-related factor 2 (Nrf2)에 의해 조절되어지며, Nrf2와 ARE 신호전달계의 상위단계 조절 요인으로는 Mitogen-Activated Protein Kinase(MAPK), Protein Kinase C, Phosphatidylinositol 3-Kinase 등이 중요하게 대두되고 있다. 실제로 활성산소종을 생성하는 여러 약제나 항생제들에 유도된 화학적 스트레스는 MAPK 신호전달계의 활성화를 초래하고, 이어서 스트레스성 효소들 뿐 아니라 제 2상 항독소 효소들을 포함한 Nrf2-Maf-defendant ARE 유전자들의 활성화가 발생하여 생체방어 기능을 갖거나 세포성장이나 세포고사를 조절하는 것으로 보고되고 있다. NQO1은 DT- diaphorase로 불리우며 NADH 혹은 NADPH 의존 두 전자 환원제로 생체 이물질 대사에 중요한 효소로써, 여러 종류의 quinone에서 두 개의 전자를 환원하여 각기 해당하는 hydroquinone유도체를 생성하며 환원된 hydroquinone의 화화적 특성에 따라NQO1의 기능이 달라져서 독성이 감소하고 배설되기 쉬워지기도 하지만, 산소 분자와 반응하여 활성 산소를 만들고 DNA의 알킬화과정에 관여하기도 한다. HO-1은 HSP계의 한 종류로 저산소상태, UV 방사선, 카드뮴, 납, 수은과 같은 중금속이나 활성산소종 등의 다양한 스트레스성 자극에 반응하여 생체방어 기능을 갖는 것으로 알려져 있고, 세포성장이나 세포고사를 조절하는 역할을 하여서 실제 HO-1 억제제를 투여했을 때 암성장이 억제됨이 보고되었으며 이러한 기전은 ARE인 Nrf2에 의한 전사의 활성을 통해 유도되는 것으로 알려져 있다.

이러한 암 예방 기능을 제대로 평가하기 위해서는 암화 과정에 대한 정확한 이해가 필수적이다. 개시(initiation), 촉진(promotion), 진행(progression) 단계로 구분되는 다단계 암화 과정 중 개시는 매우 짧은 기간에 발생할 수 있으며, 개시과정에서 한번 돌연변이가 일어난 DNA나 세포는 다시 원상태로 회복될 수 없는 비가역적인 단계이므로 암개시화를 차단하는 것만으로는, 실질적인 암 예방 효능을 기대하기 어렵다. 반면에, 촉진 단계는 가역적이고 통상 오랜 기간에 걸쳐 진행되며, 그 과정을 차단 또는 지연시킬 수 있을 뿐 아니라 경우에 따라서는 본래의 정상세포상태로 되돌릴 수 도 있다. 진행 단계는 양성 종양세포 중 일부가 변형되어다른 조직으로의 침투 및 전이가 이루어지는 비가역적 단계이다.

따라서 효과적인 암 예방 효능을 기대하기 위해서는 가역적 과정인 촉진 단계를 저해 또는 역전시키는 것이 가장 바람직할 것이다. 발암 촉진 단계는 산화적 스트레스로 인한 세포의 항상성 저해를 수반하므로, 산화적 조직 손상을 반영하는 분자지표 탐색을 통해 발암 촉진과의 관련성을 규명하고 이를 제어하는 기술을 확립하는 것이 화학암예방 전략 수립에 중요하다.

한국등록특허 제10-0614222호 한국공개특허 제10-2011-0019262호

따라서 본 발명의 목적은 암을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있는 하이드록시 챨콘 화합물을 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 하이드록시 챨콘 화합물 및 식품학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 0.1uM 내지 20uM의 농도로 포함되어 있을 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 암은 간암, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 직장암, 췌장암, 뇌암, 피부암 및 근시 안과 종양으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 화합물은 혈관신생을 억제하고 종양의 성장을 억제하는 활성을 갖는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태일 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 융모요막 모델에서 신생혈관형성 억제활성을 가지고 특히 종양 형성에 의한 혈관신생을 억제하였으며 종양의 성장을 억제시키는 작용을 통해 우수한 항암 활성을 가지는 특징이 있다. 따라서 본 발명에 따른 하이드록시 챨콘 화합물은 각종 암 질환의 치료 및 예방을 위한 약학적 용도로 사용할 수 있을 뿐만 아니라 암 증상을 개선 및 예방할 수 있는 식품학적 용도로 사용할 수 있다.

도 1a 및 도 1b는 VEGF로 유도된 신생혈관형성에 대한 본 발명에 따른 화합물10-15의 억제효과를 나타낸 것이고(대조군과 비교시 ^* P<0.05; VEGF-처치군과 비교시 ^# P<0.05),
도 2a 및 도 2b는 VEGF로 유도된 신생혈관형성에 대한 본 발명에 따른 화합물 16-24 의 억제효과를 나타낸 것이다(대조군과 비교시 ^* P<0.05; VEGF-처치군과 비교시 ^# P<0.05).
도 3은 본 발명에 따른 화합물의 혈관신생 및 종양 성장 억제 효과를 나타낸 결과이다.

본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.

우리나라 사망률의 1위를 차지하는 암은 국민 건강에 위협적인 존재이며, 발병하여 계속 진행되는 경우 수술, 약물, 그리고 방사선 요법을 통해 치료하여야 한다. 그러나 약물 투여 시 나타나는 후유증이 심각하여 항상 후유증으로 인한 문제가 일어나기 때문에 본 발명자들은 부작용이 없는 신규한 약물을 개발하기 위하여 노력하던 중 본 발명 하이드록시 챨콘 화합물이 혈관신생을 억제하는 활성이 높다는 사실을 확인함으로써, 하이드록시 챨콘 화합물을 암의 예방 및 치료용 조성물로 사용할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.

이러한 사실을 입증하기 위해 본 발명자들은 본 발명의 일실시예를 통해 다음과 같은 실험을 수행하였는데 in vivo에서의 항혈관신생효과를 확인하기 위하여 융모요막(CAM) 분석을 실시한 결과, 본 발명 화합물에서 신생혈관형성이 강력하게 억제되었음을 알 수 있었고 특히 화합물 19, 21, 22에서 가장 높은 활성을 보임을 알 수 있었다(표 1 참조).

나아가 본 발명자들은 실제로 항암 효과가 있는지 확인하기 위하여 대장암세포에 본 발명의 화합물을 처리한 결과 종양 형성에 의한 혈관신생이 억제되었으며 종양의 성장 또한 억제됨을 확인하였다. 또한, 양성 대조군인 U4312이나 찰콘(DPhP)의 동일 농도로 처리한 경우보다 더 우수한 종양억제 효과를 보임을 알 수 있었다(도 3 참조).

따라서 하이드록시 챨콘 화합물은 비정상적으로 증식된 혈관신생으로 기인된 질환을 예방 및 치료할 수 있음을 알 수 있었다.

본원에서 정의되는 “혈관신생으로 기인한 질환”은 종양, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양, 각막이식 거부증, 류마티스성 관절염, 골관절염, 패혈증성 관절염, 건선, 이상 창상 유합, 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 동맥경화증, 재협착증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화 및 암의 침윤과 전이로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상, 바람직하게는, 종양, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양 또는 각막이식 거부증을 포함한다.

본 발명의 하이드록시 챨콘 화합물은 혈관신생으로 기인된 질환을 치료할 수 있지만 보다 자세하게는 항암용 조성물로 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 조성물이 예방 또는 치료할 수 있는 암 질환의 종류로는 이에 제한되지는 않으나 간암, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 직장암, 뇌암, 피부암 및 췌장암을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 대장암일 수 있다.

또한, 본 발명의 화합물들은 당해 기술 분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.

염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가 염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.

이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산 (lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산, 바닐릭산, 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이 때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 달리 지시되지 않는 한 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨 염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 본 발명의 화합물의 제조방법은, 당업계에 공지된 합성방법으로 제조가능하며, 하기의 반응식들에 도시된 방법에 의해 화학적으로 합성될 수 있지만, 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[반응식 1]

Scheme 1. Synthesis of hydroxychalcones.

Reagents and conditions: (i) KOH (10 equiv) / NaOH (5 equiv), EtOH, 224 h, 20 °C, 3694% yield; (ii) BF₃Et₂O(0.5equiv),Dioxane,2h,20°C,74%yield.

예를 들어, EtOH 중 동일 몰량의 아릴메틸케톤(aryl methyl ketone; acetophenone, 2'/ 3'/ 4'-hydroxyacetophenone, 6 (R¹=a-d)) 및 아릴 메틸 알데히드(aryl methyl aldehyde; benzaldehyde, 2/ 3/ 4-hydroxy benzaldehyde, 7 (R2=a-d)) 용액에 KOH 또는 NaOH의 50% 수성 용액을 첨가하고 촉매 축합반응(Claisen - Schmidt condensation reaction)으로 합성가능하다.

상기와 같은 방법으로 수득한 본 발명의 화합물은 닭의 융모요막 모델에서 혈관내피성장인자와 같은 신생혈관형성 유도물질의 처리에 따른 신생혈관형성을 강력하게 억제함을 확인하여 혈관신생으로 인한 질환 특히 암의 치료 및 예방용 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.01 내지 99% 중량으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 이에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 적어도 면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 화합물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 그러므로 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 및 직장, 또는 정맥 등의 방법을 통하여 투여 할 수 있다.

또한 본 발명은 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 1-(4-히드록시페닐)-3-페닐프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논, 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논 또는 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논으로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 화합물을 포함하는 건강기능식품은 암 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 화합물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 화합물을 첨가 가능한 식품형태는 캔디류의 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 또는 건강보조 식품류인 식품 등을 포함한다.

본 발명의 화합물은 암의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ml를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물의 혼합물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 화합물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 참고예 1> 실험 준비

출발물질 및 시약은 Aldrich Chemical Co., Junsei 또는 기타 회사로부터 구입하여 사용하였으며, 추가 정제없이 사용하였다. HPLC 급(grade) 아세토미트릴(acetonitrile; ACN) 및 메탄올을 회사(Burdick and Jackson, USA)로부터 구입하였고, 박층크로마토그래피(Thin-layer chromatography; TLC) 및 컬럼크로마토그래피는 (CC)는 Kieselgel 60 F₂₅₄(Merck) 및 실리카겔(silica gel; Kieselgel 60,230-400mesh, Merck)를 각각 사용하였고 방향환을 갖는 모든 화합물은 UV광(단파장 및 장파장 모두)을 갖는 TLC 플레이트상에서 시각화하였다. NMR 스펙트럼을 ¹H-NMR은 기기(Bruker AMX250; 250MHz, FT) 및 ¹³C-NMR은 62.5MHz을 이용하였다. 화학이동은(chemical shifts) TMS로부터 이동을 측정하였다. (Chemical shifts(δ)는 ppm 및 결합상수(coupling constants, J)는 Hz로 표시함). 융점은 (Melting points) 기기부착(electrothermal 1A9100 digital melting point apparatus) 된 개방형 모세관 튜브로 보정었이 사용하였다.

HPLC 분석은 2개의 기기(Shimadzu LC-10AT pumps gradient-controlled HPLC system, Shimadzu system controller (SCL-10A VP) 및 photo diode array detector(SPD-M10A VP) 장착, Shimadzu Class VP program사용)를 사용하고 일정 부피시료(10 μL)를 일정조건(경사희석법: 10분간 A중 B를 50% 내지 100% 및 A 중 B를 150분간 100% 내지 50%로 유속량: 1.0 mL/min,t 254 nm UV 검출, 이동상 A 는 20 mM ammonium formate (AF) 처리 이차 증류수이고 B는 20 mM AF 처리 물중 90% ACN 용매임.)의 컬럼(X- Terra5μMreverse-phaseC₁₈column(4.6ⅹ250 mm)에 주입하였다. 화합물 순도는 백분율(percent; %)로 표기하였다.

< 실시예 1> 일반적 합성과정

하기 실시예 화합물들을 하기 방법 A 내지 C에 따라 KOH/ NaOH/ BF₃-Et₂O 촉매 축합반응 (Claisen -Schmidt condensation reaction)으로 합성하였다.

1-1. 방법 A

EtOH 중 동일 몰량의 아릴메틸케톤(aryl methyl ketone; acetophenone, 2'/ 3'/ 4'-hydroxyacetophenone) 및 아릴 메틸 알데히드(aryl methyl aldehyde; benzaldehyde, 2/ 3/ 4-hydroxy benzaldehyde) 용액에 KOH (10 당량)의 50% 수성 용액을 첨가하고 20 °C에서 2 내지 24시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 6 M 수성 HCl 용액 (pH 를 2로 조정)으로 중화하고, 에틸아세테이트로 추출, 및 물 및 염수로 세척하였다. 추가로 재결정법 또는 컬럼크로마토그래피법으로 정제하여 순수 고체 화합물들을 수득하였다.

1-2. 방법 B

6 M 수성 NaOH 용액 (5 당량)을 사용하는 점만 제외하고 방법 A와 유사하게 합성하였다.

1-3. 방법 C

고량의 디옥산(dioxane) 중 동일 몰량의 아릴메틸케톤(aryl methyl ketone; 4'-hydroxyacetophenone) 및 아릴 메틸 알데히드(aryl methyl aldehyde; 4-hydroxybenzaldehyde) 용액에 BF₃-Et₂O (0.5 equiv) 을 첨가하고 20 °C에서 2시간동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸아세테이트로 추출, 및 물 및 염수로 세척하였다. 추가로 컬럼크로마토그래피법으로 정제하여 순수 고체 화합물들을 수득하였다.

< 실시예 2>

1-(2- 히드록시페닐 )-3-페닐프로페논(1-(2- Hydroxyphenyl )-3- phenylpropenone , 10)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 2'-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.40mL, 20.00mmol) 및 벤즈알데히드 (2.02mL, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-3-페닐프로페논 (2.72g, 60.7%, 12.1mmol)을 수득하였다.

mp 97.197.8 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.46

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 12.84 (s, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 7.96 (d, J=15.5Hz, 1H,CO-C=CH), 7.95 (dd, J=8.1, 1.6Hz, 1H, 1-phenyl 6'-H), 7.70 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=C), 7.70-7.66 (m, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.51 (ddd, J=8.6, 7.3, 1.6Hz, 1H, 1-phenyl 4'-H), 7.46-7.43 (m, 3H, 3-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.05 (dd, J=8.4, 0.9Hz, 1H, 1-phenyl 3'-H), 6.99 (ddd, J=8.1, 7.2, 1.2Hz 1H, 1-phenyl 5'-H).

¹³C- NMR (62.5 MHz, CDCl₃)δ 193.72, 163.57, 145.48, 136.43, 134.54, 130.94, 129.64, 129.04, 128.66, 120.04, 119.97, 188.86, 118.63.

< 실시예 3>

1-(3- 히드록시페닐 )-3- 페닐프로페논 (1-(3- Hydroxyphenyl )-3- phenylpropenone , 11)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 3'-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 4.08g, 30.00mmol) 및 벤즈알데히드 (benzaldehyde, 3.03 mL, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논 (5.90g, 87.7%, 26.3mmol)을 수득하였다.

mp 120.2120.6 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane 1:2v/v):0.35

HPLC 순도: 100%

¹H -NMR (250 MHz, CDCl₃)δ7.86 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-C=CH), 7.66-7.62 (m, 3H, 3-phenyl H-2, H-6, 1-phenyl H-2), 7.60 (d, J=7.8Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.55 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-CH=C), 7.44-7.41 (m, 3H, 3-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.38 (t, J=7.8Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 7.15 (dd, J=8.0, 2.4Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.59 (br, 1H, 1-phenyl 3-OH).

¹³C- NMR (62.5 MHz, CDCl₃) δ 190.87, 156.43, 145.52, 139.44, 134.69, 130.73, 129.91, 128.97, 128.56, 121.87, 120.99, 120.50, 115.19.

< 실시예 4>

1-(4- 히드록시페닐 )-3- 페닐프로페논 (1-(4- Hydroxyphenyl )-3- phenylpropenone , 12)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 4'-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72 g, 20.00 mmol) 및 벤즈알데히드 (benzaldehyde, 2.02 mL, 20.00 mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 밝은 황색 고체상의 1-(3-히드록시페닐)-3-페닐프로페논 (3.85g,86.1%,17.2mmol)을 수득하였다.

mp 180.0180.7 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.40

HPLC 순도: 100%

¹H-NMR (250 MHz, DMSO-d ₆)δ10.46 (br, 1H, 1-phenyl 4-OH), 8.08 (d, J=8.5Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.93 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.857.84 (m, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.70 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=C), 7.457.42 (m, 3H, 3-phenyl H-3, H-4, H-5), 6.90 (d, J=8.5Hz, 2H, 1-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.32, 162.48, 142.95, 135.10, 131.45, 130.56, 129.27, 129.12, 128.95, 122.29, 115.61.

< 실시예 5>

3-(2- 히드록시페닐 )-1- 페닐프로페논 (3-(2- Hydroxyphenyl )-1- phenylpropenone , 13)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 아세토페논(acetophenone, 2.33 mL, 20.00 mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.09 mL, 20.00 mL)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 녹황색 고체상의 3-(2-히드록시페닐)-1-페닐프로페논 (3.95 g, 88.2%, 17.6 mmol)을 수득하였다.

mp 149.9150.6 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.37

HPLC 순도: 98%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.31 (br, 1H, 3-phenyl 2-OH), 8.108.06 (m, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 8.07 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.87 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=C), 7.85 (dd, J=7.3, 1.4Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.687.52 (m, 3H, 1-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.26 (dt, J=8.2, 1.5Hz, 1H, 3-phenyl H-4), 6.94 (dd, J=8.2, 0.8Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 6.89 (t, J=7.2Hz, 1H, 3-phenyl H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.75, 157.51, 139.80, 138.13, 133.19, 132.37, 129.05, 128.96, 128.60, 121.57, 121.12, 119.68, 116.46.

< 실시예 6>

3-(3- 히드록시페닐 )-1- 페닐프로페논 (3-(3- Hydroxyphenyl )-1- phenylpropenone , 14)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 아세토페논(acetophenone, 1.16 mL, 10.00 mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 1.22 g, 10.00 mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 밝은 황색 고체상의 3-(3-히드록시페닐)-1-페닐프로페논 (2.11 g, 94.1%, 9.4 mmol)을 수득하였다.

mp 170.1170.9 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.35

HPLC 순도: 98%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.67 (br, 1H, 3-phenyl 3-OH), 8.15-8.11 (m, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.87 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.697.53 (m, 3H, 1-phenyl H-3, H-4, H-5), 7.67 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=C), 7.337.24 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.22 (br, 1H, 3-phenyl H-2), 6.87 (ddd, J=7.7, 2.1, 1.0Hz, 1H, 3-phenyl H-4).

¹³C NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.45, 158.00, 144.53, 137.79, 136.13, 133.35, 130.12, 129.02, 128.72, 122.09, 120.07, 118.08, 115.50.

< 실시예 7>

3-(4- 히드록시페닐 )-1- 페닐프로페논 (3-(4- Hydroxyphenyl )-1- phenylpropenone , 15)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 아세토페논(acetophenone, 2.33 mL, 20.00 mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44 g, 20.00 mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 3-(4-히드록시페닐)-1-페닐프로페논 (3.78g,84.5%,16.9mmol)을 수득하였다.

mp 174.2175.0 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2,v/v):0.34

HPLC 순도: 95%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.14 (br, 1H, 3-phenyl 4-OH), 8.128.08 (m, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.75 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.70 (d, J=15.4Hz, 1H, CO-C=CH ), 7.697.51 (m, 4H, 1-phenyl H-3, H-4, H-5, CO-CH=C), 6.84 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C-NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.20, 160.41, 144.77, 138.16, 133.06, 131.29, 128.95, 128.56, 125.97, 118.66, 116.05.

< 실시예 8>

1,3- 비스(2-히드록시페닐l)프로페논 (1,3- Bis (2- hydroxyphenyl )propenone, 16)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 2-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 1.80mL, 15.00mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 1.57mL, 15.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1,3-비스(2-히드록시페닐l)프로페논 (2.98 g, 82.8%, 12.4 mmol)을 수득하였다.

mp 173174 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.46

HPLC 순도: 100%

¹H-NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 12.93 (s, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 8.24 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.96 (dd, J=8.1, 1.3Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.89 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.64 (dd, J=7.7, 1.3Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.50 (td, J=8.8, 1.4Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 7.30 (td, J=8.8, 1.5Hz, 3-phenyl H-4), 7.05 (dd, J=8.4, 0.8Hz, 1H, 1-phenyl H-3), 7.00 (t, J=7.3Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 6.95 (td, J=8.1, 1.0Hz, 3-phenyl H-5), 6.87 (d, J=8.0Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 5.73 (s, 1H, 3-phenyl 2-OH).

¹³C-NMR (62.5 MHz, CDCl₃)δ 194.47, 163.52, 155.51, 141.00, 136.31, 132.05, 130.14, 129.82, 122.03, 121.26, 121.14, 120.14, 118.85, 118.55, 116.51.

< 실시예 9>

1-(2- 히드록시페닐 )-3-(3- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(2- Hydroxyphenyl )-3-(3-hydroxyphenyl)propenone, 17)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 2-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 3.61mL, 30.00mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.66g, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-3-(3-히드록시페닐)프로페논 (6.49g, 90.2%, 27.0mmol)을 수득하였다.

mp 180181 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:2v/v):0.38

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.44 (s, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 9.65 (s, 1H, 3-phenyl 3-OH), 8.23 (dd, J=8.4, 1.5Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.96 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.76 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.55 (td, J=8.4, 1.3Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 7.34-7.26 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.24 (s, 1H, 3-phenyl H-2), 7.01-6.95 (m, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.90 (dt, J=7.6, 1.1Hz, 1H, 3-phenyl H-4).

¹³C NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 193.76, 161.94, 157.96, 145.21, 136.49, 135.93, 131.10, 130.16, 121.92, 121.07, 120.39, 119.41, 118.38, 117.91, 115.69.

< 실시예 10>

1-(2- 히드록시페닐 )-3-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(2- Hydroxyphenyl )-3-(4-hydroxyphenyl)propenone, 18)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 2-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.40mL, 20.00mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44g, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논 (1.91g, 39.8%, 7.9mmol)을 수득하였다.

mp 163164 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:1v/v):0.43

HPLC 순도: 95%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 12.81 (br, 1H, 1-phenyl 2'-OH), 10.27 (br, 1H, 3-phenyl 4-OH), 8.26 (d, J=7.2Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.89 (d, J=15.7Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.83 (d, J=16.4Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.79 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.54 (td, J=8.1, 1.0Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 7.01-6.95 (m, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.86 (d, J=8.4Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C-NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 193.81, 162.35, 160.89, 145.95, 136.40, 131.82, 130.91, 125.80, 120.75, 119.31, 117.98, 117.86, 116.16.

< 실시예 11>

1-(2- 히드록시페닐 )-1-(3- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(2- Hydroxyphenyl )-1-(3-hydroxyphenyl)propenone, 19)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 3-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 4.08g, 30.00mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.13mL, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 녹색 고체상의 1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논 (6.35g, 88.2%, 26.4 mmol)을 수득하였다.

mp 173174 °C;

R _f (ethylacetate/n-Hexane1:1v/v):0.47

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.00 (br, 2H, 1-phenyl 3'-OH, 3-phenyl 2-OH), 8.02 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.83 (dd, J=8.1, 1.3Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.79 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.55 (d, J=7.7Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.40 (t, J=2.2Hz, 1H, 1-phenyl H-2), 7.35 (t, J=7.9Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 7.26 (td, J=8.5, 1.5Hz, 1H, 3-phenyl H-4), 7.05 (ddd, J=8.0, 2.4, 0.7Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.94 (dd, J=8.2, 0.8Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 6.85 (t, J=7.7Hz, 1H, 3-phenyl H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.66, 157.91, 157.46, 139.68, 139.58, 132.23, 130.08, 129.10, 121.58, 121.38, 120.26, 119.66, 119.56, 116.44, 114.73.

< 실시예 12>

1,3- 비스(3-히드록시페닐l)프로페논 (1,3- Bis (3- hydroxyphenyl )propenone,20)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 3-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 4.08g, 30.00mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.66g, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1,3-비스(3-히드록시페닐l)프로페논(5.90g, 82.0%, 24.5mmol)을 수득하였다.

mp 226227 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane 1:1 v/v):0.43

HPLC 순도: 100%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 9.74 (br, 2H, 1-phenyl 3'-OH, 3-phenyl 3-OH), 7.77 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.63 (d, J=15.4Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.62 (d, J=7.6Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.43 (s, 1H, 1-phenyl H-2), 7.35 (t, J=7.9Hz, 1H, 1-phenyl H-5), 7.30-7.23 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.19 (s, 1H, 3-phenyl H-2), 7.06 (dd, J=8.0, 2.3Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.87 (d, J=7.4Hz, 1H, 1-phenyl H-4).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.35, 157.97, 144.34, 139.24, 136.18, 130.15, 122.24, 120.55, 120.09, 119.83, 118.04, 115.46, 114.81.

< 실시예 13>

1-(3- 히드록시페닐 )-3-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (1-(3- Hydroxyphenyl )-3-(4-hydroxyphenyl)propenone, 21)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 3-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44g, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논 (2.10g, 43.8%, 8.7mmol)을 수득하였다.

mp 245246 °C;

R _f (ethylacetate/n-Hexane1:1v/v):0.42

HPLC 순도: 99%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆)δ 9.94 (br, 2H, 1-phenyl 3'-OH, 3-phenyl 4-OH), 7.73 (d, J=8.5Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.63 (d, J=17.5Hz, 2H, CO-CH=CH), 7.59 (d, J=7.7Hz, 1H, 1-phenyl H-6), 7.41 (s, 1H, 1-phenyl H-2), 7.34 (t, J=7.9Hz, 1-phenyl H-5), 7.04 (dd, J=8.0, 2.3Hz, 1H, 1-phenyl H-4), 6.83 (d, J=8.4Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 189.14, 160.36, 157.90, 144.57, 139.63, 131.23, 130.01, 125.99, 120.18, 119.61, 118.82, 116.05, 114.72.

< 실시예 14>

3-(2- 히드록시페닐 )-1-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (3-(2- Hydroxyphenyl )-1-(4-hydroxyphenyl)propenone, 22)의 제조

상기 실시예 1의 방법 A에 따라 4-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 2-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.09mL, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 적색 고체상의 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논(1.74g, 36.4%, 7.3mmol)을 수득하였다.

mp 197198 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:1v/v):0.33

HPLC 순도: 97%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.32 (br, 2H, 1-phenyl 4'-OH, 3-phenyl 2-OH), 8.02 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 8.01 (d, J=15.9Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.84 (d, J=15.8Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.83 (d, J=8.8Hz, 1H, 3-phenyl H-6), 7.24 (td, J=8.4, 1.4Hz, 1H, 3-phenyl H-4), 6.92 (d, J=7.5Hz, 1H, 3-phenyl H-3), 6.89-6.81 (m, 3H, 3-phenyl H-5, 1-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.62, 162.16, 157.20, 138.37, 131.85, 131.14, 129.58, 128.70, 121.79, 121.12, 119.57, 116.36, 115.54.

< 실시예 15>

3-(3- 히드록시페닐 )-1-(4- 히드록시페닐 ) 프로페논 (3-(3- Hydroxyphenyl )-1-(4-hydroxyphenyl)propenone, 23)의 제조

상기 실시예 1의 방법 B에 따라 4-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 3-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 2.44g, 20.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 연황색 고체상의 3-(3-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논(3.95g, 82.3%, 16.4mmol)을 수득하였다.

mp 261262 °C;

R _f (ethylacetate/n-hexane1:1v/v):0.47

HPLC 순도: 95%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.49 (br, 1H, 1-phenyl 4'-OH) 9.64 (br, 1H, 3-phenyl 3-OH), 8.06 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.83 (d, J=15.6Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.59 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.29-7.23 (m, 2H, 3-phenyl H-5, H-6), 7.18 (s, 1H, 3-phenyl H-2), 6.89 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.85-6.82 (m, 1H, 3-phenyl H-4).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.36, 162.43, 157.94, 143.22, 136.40, 131.43, 130.10, 129.33, 122.13, 119.91, 117.74, 115.62, 115.37.

< 실시예 16>

1,3- 비스(4-히드록시페닐l)프로페논 (1,3- Bis (4- hydroxyphenyl ) propenone ,24)의 제조

상기 실시예 1의 방법 C에 따라 4-히드록시아세토페논(hydroxyacetophenone, 2.72g, 20.00mmol) 및 4-히드록시벤즈알데히드 (hydroxybenzaldehyde, 3.66g, 30.00mmol)를 채용하여 하기 물성치를 갖는 황색 고체상의 1,3-비스(4-히드록시페닐l)프로페논(4.41g, 74.4%, 18.3mmol)을 수득하였다.

mp 226227 °C; R _f (ethylacetate:n-hexane1:1v/v):0.35

HPLC 순도: 99%

¹H- NMR (250 MHz, DMSO-d ₆) δ 10.21 (br, 2H, 1-phenyl 4'-OH, 3-phenyl 4-OH), 8.04 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-2, H-6), 7.71 (d, J=8.6Hz, 2H, 3-phenyl H-2, H-6), 7.68 (d, J=14.3Hz, 1H, CO-CH=CH), 7.62 (d, J=15.5Hz, 1H, CO-CH=CH), 6.88 (d, J=8.7Hz, 2H, 1-phenyl H-3, H-5), 6.83 (d, J=8.5Hz, 2H, 3-phenyl H-3, H-5).

¹³C- NMR (62.5 MHz, DMSO-d ₆) δ 187.25, 162.13, 160.04, 143.39, 131.16, 130.96, 129.64, 126.20, 118.73, 115.99, 115.51.

< 참고예 2> 실험재료 및 시약, 기기 분석

유정란은 백자토종닭 농장 (청송,한국)에서 구입하여 사용하였으며, 코티존 아세테이트(cortisone acetate)는 알드리치사(Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며, 혈관내피성장인(VEGF, vascular endothelial growth factor)는 알앤디(R&D systems, Minneapolis, MN, USA)로부터 구입하였고, 와트만 필터 디스크(whatman filter disc)는 와트만사(Whatman, UK)로부터 구입하였다.

< 실험예 1> CAM 분석을 통한 화합물의 혈관신생 억제효과 분석

생체내 시험상 (in vivo)에서의 항혈관신생효과를 확인하기 위하여, 융모요막(chorioallantoic membrane, CAM) 분석을 실시하였다(Nguyen M et al., Microvascular Res ., 47, pp31-40, 1994).

닭의 유정란을 온도 37℃, 상대습도 55%를 유지해주면서 배양시켜 10일째에 기낭(air sac) 부위에 피하주사침 (hypodermic needle, 녹십자의료공업, 한국)을 이용하여 첫 번째 작은 구멍을 뚫고, 창(window)을 낼 유정란의 평평한 부위에 두 번째 구멍을 뚫었다.

첫 번째 구멍인 기낭 부위의 구멍을 통해 공기를 빼냄으로써, 융모요막 (CAM)이 유정란의 껍질로부터 분리가 되게 하여 이 부위를 회전연마기(grinding wheel, Multipro 395JA, Dremel, Mexico)로 절단하여 약 1.0cm² 크기의 창을 만들었다.

다음으로, 와트만 필터 디스크(whatman filter disk #1, whatman사, USA)에 코티존 아세테이트(cortisone acetate) 3 ㎎/㎖을 처리하여 건조시킨 후 혈관내피성장인자(VEGF)는 20 ng/CAM의 농도로, 또는 인터루킨-8(IL-8)은 10 ng/CAM의 농도로 적셔두었다.

개개 디스크는 VEGF 또는 대조용 용매를 함유한 10μl of PBS에서 현탁하고 디스크들을 성장중인 CAMs에 위치하였다. 만들어 둔 창을 통해 필터 디스크를 혈관 위에 얹고, 본 발명의 실시예 1의 화합물들을 30분 후에 CAMs에 국소적으로 첨가하고, 약물-처치 CAM들을 3일간 배양하였다.

약물처리 3일 뒤, 필터 디스크가 얹힌 CAM 부분을 떼어내어 인산완충용액을 이용하여 씻어준 후, 입체현미경(Stemi SV6 stereomicroscope, Carl Zeiss, Germany)과 Image-Pro Plus software(Media Cybernetics; Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 이미지를 촬영하여 혈관 가지의 개수를 측정하고 자료를 분석하였다.

본 실험결과, 생체내에서 VEGF로 유도된 신생혈관형성을 본 발명에 따른 화합물들이 강력하게 억제함을 확인하였으며(표 1참조), 신생 혈관 가지점(blood vessel branch points)들은 PBS-처치군에 비교하여 VEGF에 의하여 유의적으로 증가하였다. CAM에 대한 본 발명 화합물들의 처치는 VEGF로 유도된 신생혈관형성을 배양 후에 그 숫자 및 소혈관 길이 면에서 현격하게 저해함을 확인할 수 있었다(도 1a, 1b, 및 도 2a, 2b 참조). 특히 화합물 15는 1 /CAM에서 생체내에서 가장 강력한 항-신생혈관형성 활성을 나타냈다(66%).

또한 화합물 19는 화합물들 중에 가장 강력한 저해활성(89%)을 나타냈고, 유사하게 화합물 21 및 22도 강력한 저해활성을 나타냈다 (각각, 80% 및 87%)

< 실험예 2> 본 발명 화합물의 혈관신생 억제 활성 및 종양 성장 억제 효과 분석

본 발명자들은 실험예 1를 통해 본 발명의 15개 화합물들이 생체 내에서 혈관신생억제효과가 높음을 확인하였고, 나아가 이들 화합물이 실제로 항암 활성을 갖는지 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 수행하였다.

우선, 닭의 유정란을 배양시킨 9일째에 창을 만들고 디스크(disc) 대신 HT-29사람유래 대장암 세포를 matrigel과 1:1로 혼합한 다음, 상기 본 발명의 실시예에서 합성한 화합물들 중, 하이드록시찰콘 화합물 NO. 19, 21 및 22를 각각 대장암 세포에 처리하였는데, 이때 상기 세포는 1.5X10⁶ 세포/CAM의 밀도로 접종시켰다. 접종 5일 뒤 종양이 형성된 CAM 부분을 떼어내어 인산완충용액을 이용하여 씻어준 후, 입체현미경(Stemi SV6 stereomicroscope, Carl Zeiss, Germany)과 Image-Pro Plus software(Media Cybernetics; Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 이미지를 촬영하여 혈관 가지의 개수를 측정하고 종양을 분리하여 무게를 측정함으로써 신생혈관 및 암의 성장에 미치는 본 발명에 따른 화합물의 영향을 분석하였다.

그 결과, 본 발명의 화합물인 NO.19, 21 및 22의 처리에 의해 종양의 형성에 역할을 하는 혈관신생 작용이 억제된 것으로 나타났으며, 종양의 성장 또한 억제된 것을 확인할 수 있었다.

또한 이러한 결과는 양성 대조군으로 사용한 VEGF 수용체의 억제제인 SU 4312을 처리한 군과 찰콘(DPhP) 화합물을 동일 농도로 처리한 경우에 비해서도 더 우수한 종양억제 효과가 있음을 알 수 있었다(도 3 참조).

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명에 따른 상기 15개의 화합물이 종양으로 유도되는 혈관신생을 효과적으로 억제할 수 있을 뿐만 아니라, 종양의 성장도 함께 억제할 수 있어 새로운 항암제의 용도로 사용할 수 있음을 알 수 있었다.

하기에 본 발명의 화합물을 함유하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

화합물 19.............................................200 mg

유당..................................................100 mg

탈크...................................................10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

화합물 21............................................200 mg

옥수수전분...........................................100 mg

유당.................................................100 mg

스테아린산 마그네슘....................................2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

화합물 22............................................200 mg

결정성 셀룰로오스......................................3 mg

락토오스............................................14.8 mg

마그네슘 스테아레이트................................0.2 mg

통상의 캅셀제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캅셀제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

화합물 15............................................200 mg

만니톨...............................................180 mg

주사용 멸균 증류수..................................2974 mg

Na₂HPO₄ _,12H₂O...........................................26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

화합물 19............................................200 mg

이성화당...............................................10 g

만니톨..................................................5 g

정제수.................................................적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

화합물 21............................................1000 mg

비타민 혼합물...........................................적량

비타민 A 아세테이트....................................70 ㎍

비타민 E..............................................1.0 ㎎

비타민 B1............................................0.13 ㎎

비타민 B2............................................0.15 ㎎

비타민 B6.............................................0.5 ㎎

비타민 B12............................................0.2 ㎍

비타민 C...............................................10 ㎎

비오틴.................................................10 ㎍

니코틴산아미드........................................1.7 ㎎

엽산...................................................50 ㎍

판토텐산 칼슘.........................................0.5 ㎎

무기질 혼합물...........................................적량

황산제1철............................................1.75 ㎎

산화아연.............................................0.82 ㎎

탄산마그네슘.........................................25.3 ㎎

제1인산칼륨............................................15 ㎎

제2인산칼슘............................................55 ㎎

구연산칼륨.............................................90 ㎎

탄산칼슘..............................................100 ㎎

염화마그네슘.........................................24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

화합물 22............................................1000 mg

구연산...............................................1000 ㎎

올리고당...............................................100 g

매실농축액...............................................2 g

타우린...................................................1 g

정제수를 가하여..................................전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논으로부터 선택된 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

제1항에 있어서,
상기 화합물은 조성물에 0.1uM 내지 20uM의 농도로 포함되어 있는 것을 특징으로 하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

삭제

제1항에 있어서,
상기 화합물은 혈관신생을 억제하고 종양의 성장을 억제하는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 대장암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

1-(2-히드록시페닐)-1-(3-히드록시페닐)프로페논, 1-(3-히드록시페닐)-3-(4-히드록시페닐)프로페논, 3-(2-히드록시페닐)-1-(4-히드록시페닐)프로페논으로부터 선택된 화합물을 유효성분으로 포함하는 대장암의 예방 또는 개선용 건강기능식품.

삭제

제5항에 있어서,
상기 식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태인 것을 특징으로 하는 대장암의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품.