KR101686431B1 - 잔대 잎 추출물을 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 잔대 잎 추출물을 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더 상세하게는 잔대의 여러 부위 중 잎을 추출한 추출물을 사용함으로써 염증 치료 효과가 현저히 우수한, 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 잔대 잎 추출물은 세포 독성이 없으면서도, 잔대 뿌리 추출물보다 염증매개물질인 일산화질소 및 인터루킨-6의 생성을 저해하는 효과가 매우 유의적으로 우수한 바, 염증성 질환 치료용 약학적 조성물 또는 염증성 질환 개선용 식품 조성물의 제조에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

잔대 잎 추출물을 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물{A COMPOSITION COMPRISING EXTRACTS OF ADENOPHORA TRIPHYLLA FOR PREVENTING OR TREATING OF INFLAMMATORY DISEASE}
본 발명은 잔대 잎 추출물을 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더 상세하게는 잔대의 여러 부위 중 잎을 추출한 추출물을 사용함으로써 염증 치료 효과가 현저히 우수한, 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
염증은 조직의 손상, 외부의 자극 또는 다양한 감염원에 대한 생체조직의 방어 반응의 하나로, 혈관과 체액 내의 각종 염증 매개 인자 및 다양한 면역 세포의 유기적 상호작용으로 인한 효소 활성화, 염증매개물질 분비, 세포 침윤 및 체액 삼출, 순환 장애, 조직의 변질 및 과증식 등 일련의 복합적인 병리 현상이다. 염증반응의 과정은 초기에 대식세포가 상처부위로 모여들어 침입한 세균을 공격한 후, 상처부위에 혈장이 축적되고 혈류가 증가되어 발열, 홍반, 부종, 통증 현상 등의 외적 증상이 일어나게 된다. 이러한 염증 반응이 지속적으로 또는 과도하게 일어나면 오히려 질환의 주요 병리현상(과민성 알러지 질환, 만성 염증 질환)으로 진행되며, 심각한 이상 장애를 초래하게 된다.
대부분의 염증 질환의 치료제로서 널리 사용되고 있는 제제인 비스테로이드성 소염제(non-steroidal antiinflammatory drugs, NSAIDS)는 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)라고 하는 아라키돈산(arachidonic acid)으로부터 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생합성에 관여하는 효소 활성을 억제함으로써, 항염증 작용을 나타내는데, 주 치료작용 외에 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기하기므로 장기간의 사용에 있어서 제약이 따르는 실정이다(Rainsford KD., Subcell biochem., 42, pp3-27, 2007; Guruprasad P. Aithal.,Rheumatology., 7, pp139-150, 2011; Praveen P. N. Rao et al., Pharmaceuticals., 3, pp1530-1549, 2010).
따라서, 부작용이 거의 없어 장기간 사용하는데 무리가 없으면서도 항염증 효능에 탁월한 새로운 소염 진통제의 개발이 널리 요구되고 있으며, 이는 최근 천연 자원으로부터의 효능 검증을 통한 소재 개발 연구가 활성화되고 있는 이유이기도 하다.
Rainsford KD., Subcell biochem., 42, pp 3-27, 2007 Guruprasad P. Aithal.,Rheumatology., 7, pp 139-150, 2011 Praveen P. N. Rao et al., Pharmaceuticals., 3, pp 1530-1549, 2010
본 발명의 목적은, 잔대의 다양한 부위 중, 잎 부분만을 추출한 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 염증 치료 효능이 현저히 우수한, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 잔대 잎 추출물의 추출 용매는 물, 탄소수 1~4개의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 하나일 수 있고, 상기 저급 알코올은 에탄올 일 수 있다.
상기 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 급성 기관지염, 기관지염, 급성 세기관지염, 만성 세기관지염, 대장염, 치질, 통풍, 간직성 척추염, 류마티스 염, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있고, 바람직하게는 급성 기관지염, 기관지염, 급성 세기관지염 및 만성 세기관지염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있다.
또한, 상기 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 잔대 잎 추출물은 세포 독성이 없으면서도, 잔대 뿌리 추출물에 비하여 염증매개물질인 일산화질소 및 인터루킨-6의 생성을 저해하는 효과가 매우 유의적으로 우수한 바, 염증성 질환 치료용 약학적 조성물 또는 염증성 질환 개선용 식품 조성물의 제조에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 RAW264.7 세포에 대한 잔대 잎 추출물 및 뿌리 추출물의 독성 여부를 나타낸 그래프이다(대조군 : 처리물질 없음).
도 2는 RAW264.7 세포에 LPS로 염증반응을 유도한 후 생성된 일산화질소의 생성량을 측정한 결과이다.
도 3은 RAW264.7 세포에 LPS로 염증반응을 유도한 후 생성된 IL-6의 생성량을 측정한 결과이다.
도 4는 BEAS-2B 세포에 대한 잔대 잎 추출물 및 뿌리 추출물의 독성 여부를 나타낸 그래프이다(음성대조군 : 처리물질 없음).
도 5는 BEAS-2B 세포에 TNF-α로 염증반응을 유도한 후 생성된 IL-6의 생성량을 측정한 결과이다.
도 6은 BEAS-2B 세포에 LPS로 염증반응을 유도한 후 생성된 IL-6의 생성량을 측정한 결과이다.
본 발명은 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 잔대 잎 추출물은 이에 한정되지는 않지만, 물, 탄소수 1~4개의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 하나의 용매로 추출될 수 있고, 바람직하게는 에탄올로 추출될 수 있다.
상기 염증성 질환은 이에 한정되지는 않지만, 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 간직성 척추염, 류마티스 염, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있다. 바람직하게는 상기 염증성 질환이 급성 기관지염, 기관지염, 급성 세기관지염 및 만성 세기관지염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 기관지 염증성 질환일 수 있다. 본 발명의 잔대 잎 추출물은 염증성 질환 중에서도 기관지 염증성 질환 치료 효과가 매우 뛰어나다.
본 발명의 잔대 잎 추출물은 리포폴리사카라이드(LPS, lipopolysaccharide)로 염증을 유도한 대식 세포에서 염증성 매개불질인 일산화질소(NO) 및 인터루킨-6(IL-6)의 생성을 잔대 뿌리 추출물보다 매우 유의적으로 저해한다. 또한, LPS 또는 TNF-α로 염증을 유도한 기관지상피세포에서도, 본 발명의 잔대 잎 추출물은 잔대 뿌리 추출물보다 IL-6의 생성을 매우 유의적으로 저해한다. 즉, 본 발명의 잔대 잎 추출물은 잔대 뿌리 추출물보다 염증성 질환 치료 효과가 현저히 우수하다.
염증반응의 유도물질들 중에서 LPS는 백혈구와 같은 면역세포와 상호작용을 하며, 단핵세포의 대식세포들에 있어서 iNOS 이소 형태의 활성화에 의한 산화질소 농도의 증대에 의한 염증 반응에 있어서 중요한 역할을 하고 있다(Korhonen R. et al., Curr Drug Targets Inflamm Allergy., 4, pp471-79, 2005). LPS는 그람 음성 세균의 외막(outer membrane)에 존재하는 엔도톡신(endotoxin)이며, TLR4(toll-like receptor 4)와의 결합은 IL-6(interleukin-6) 및 케모카인(chemokines) 등 많은 사이토카인 유전자의 활성화를 이끄는 신호전달을 개시하고, 이는 그 부분의 염증을 유도한다(Dobrovolskaia MA, et al., J Immunol., 170, pp508-19, 2003; Ji Y, et al., Cell Physiol Biochem., 25, pp631-640, 2010).
체내 염증과정에서는 과량의 NO가 NOS (NO synthase)에 의해 형성된다. 일반적인 NO의 형성은 박테리아를 죽이거나 종양을 제거시키는 중요한 역할을 하지만 (Weis, Z. A., Biochem J., 316, p209, 1996), 염증상태에서 iNOS (inducible NO synthase)에 의해 생성된 NO는 혈관 투과성, 부종 등의 염증반응을 촉진시킬 뿐만 아니라 염증매개체의 생합성을 촉진하여 염증을 심화시키는 것으로 알려져 있다 (Mu, M. M., J. Endotoxin Res.7, p431, 2001).
본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용가능한 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물은 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.
또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 상기 잔대 잎 추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 20 mg/kg의 양을 일일 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다.
또한, 이러한 추출물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명은 또한, 잔대 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물이 예방 또는 개선할 수 있는 염증성 질환은 상기 약학적 조성물에서 설명한 바와 동일하다.
본 발명에 따른 식품 조성물의 종류에 특별한 제한은 없지만, 예컨대 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 잔대 잎 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 조성물 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.0001 내지 99.9중량%로 가할 수 있고, 바람직하게는 0.001 내지 90중량% 포함될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 잔대 잎 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다.
상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
그 밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 특별히 제한되지 않지만, 본 발명의 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 - 잔대 추출물 제조
잔대(천안 풍세면 잔대 재배농가)를 구입하여 잎 부분을 분리한 후, 잎 15g에 10배(v/w)의 80% 주정(150 mL)을 가하고 16시간 동안 교반 추출한 후, 다시 3시간 교반 추출하여 잔대 잎 추출물을 제조하였다. 잔대 뿌리 추출물은 상기 잎 추출물 제조방법과 동일한 방법으로 제조하였다.
실험예 1. 대식세포(RAW 264.7)에 대한 항염증 효과
1-1. RAW 264.7에 대한 세포 독성 여부
RAW 264.7 세포(한국세포주은행)를 소태아혈청(fetal bovine serum) 10% 첨가한 DMEM(Gibco) 배지에 2×105세포수/mL의 농도로 현탁하여 200㎕씩 96 웰 플레이트(96-well plate)에 접종하여 부착하였다. 그 후에 잔대 잎 및 뿌리의 추출물을 각각 1000㎍/㎖의 농도로 처리하고 20시간 배양하였다. 5mg/㎖의 MTT 용액을 웰당 20㎕씩 첨가한 후 4시간을 더 배양하였다. 상등액을 제거한 후, DMSO를 100㎕씩 첨가한 다음, 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존률은 PBS를 처리한 음성 대조군을 100%로 하여 하기 식에 따라 계산하였다. 결과를 도 1에 기재하였다.
* 세포생존율(%)=(추출물 처리군 흡광도 값/음성 대조군 흡광도 값) × 100
상기 도 1에서 잔대의 잎 및 뿌리 추출물은 대식세포인 RAW 264.7 세포에 대해서 세포 독성이 거의 없음을 확인하였다.
1-2. 일산화질소( NO ) 생성 저해능
RAW 264.7 세포에 LPS를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에 대한 억제 효과를 알아보기 위해, 유도성 일산화질소의 생성량을 측정하였다. DMEM 배지에 소태아혈청(FBS)을 10% 첨가하고, 세포를 2 ×105세포수/mL의 농도로 현탁하여 200㎕씩 96 웰 플레이트(96-well plate)에 접종하여 부착하였다. 24시간 동안 부착시킨 후, 잔대 잎 추출물 및 뿌리 추출물을 각각 1000㎍/㎖ 농도로 처리하여 1시간 동안 배양한 후, 200ng/㎖ 농도의 리포폴리사카라이드(LPS, lipopolysaccharide)를 처리하여 20시간 동안 배양하였다.
일산화질소 생성량을 측정하기 위해, 배양 후 생성된 상층액 100㎕를 회수하여 동일한 부피의 그리스 시약(Griess reagent)를 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후, 550nm에서의 흡광도를 측정하였다. 동일 배지에 녹인 여러 농도의 아질산나트륨 표준 곡선을 이용하여 각 실험군의 아질산염(nitrite) 양을 정량하였다. NO 생성량 측정 결과는 하기 표 1 및 도 2에 기재하였다.
일산화질소 생성량
(M)		 LPS 처리 대조군에 대한 감소율(%)
무처리 대조군 1.25±0 -
LPS 처리 대조군 14.58±0.14 0
LPS + 잎 추출물 6.91±0.43 52.6
LPS + 뿌리 추출물 9.3±0.26 36.2
상기 표 1에서 잎 추출물의 일산화질소 생성 감소 효과가 뿌리 추출물보다 약 1.45배 높은 것을 확인할 수 있다. 또한, 통계적으로 유의성을 검정(실험예 1-4에 기재)한 결과를 도 2에 표시하였는데, 도 2에서 잎 추출물이 뿌리 추출물보다 유의미하게 효과가 높다는 것을 확인할 수 있다.
1-3. IL-6 분비 저해능
상기 실험예 1-2에서 LPS 처리한 RAW264.7 세포에서의 IL-6 생성량을 측정하기 위하여 ELISA kit(Mouse IL-6 ELISA kit, BD Biosceinces)을 사용하였으며, 제조사의 방법에 따라 함량을 측정하였고, 결과는 표 2 및 도 3에 기재하였다.
IL-6 생성량
(pg/㎖)		 LPS 처리 대조군에 대한 감소율(%)
무처리 대조군 29.29±17.5 -
LPS 처리 대조군 19251.52±344.18 0
LPS + 잎 추출물 12332.32±1540.50 35.9
LPS + 뿌리 추출물 15089.90±904.20 21.6
상기 표 2에서 잎 추출물의 IL-6 생성 억제효과가 뿌리 추출물 약 1.66배 높은 것을 확인할 수 있다. 또한, 통계적으로 유의성을 검정(실험예 1-4에 기재)한 결과를 도 3에 표시하였는데, 도 3에서 잎 추출물이 뿌리 추출물보다 유의미하게 효과가 높다는 것을 확인할 수 있다.
1-4. 통계처리
본 발명의 실험예에서 수행한 분석 결과는 평균표준오차로 표시하였고, 유의성은 원-웨이 아노바(one-way ANOVA)를 이용하여 던컨의 중다범위검정(테스트(Duncan's multiple test)으로 분석하였다. p<0.05 수준에서 유의성 여부를 검정하였고, 유의성 정도는 소문자 알파벳으로 구별하여 표시하였다.
실험예 2. 기관지상피세포(BEAS-2B)에서의 항염증 효과
2-1. BEAS-2B 세포에 대한 독성 여부
BEAS-2B 세포(ATCC)를 BEGM™ BulletKit™(Lonza CC-3170) 배지에 3×104세포수/mL의 농도로 현탁하여 200㎕씩 96 웰 플레이트(96-well plate)에 접종하여 부착하였다. 그 후에 잔대 잎 및 뿌리의 추출물을 각각 1000㎍/㎖의 농도로 처리하고 20시간 배양하였다. 5mg/㎖의 MTT 용액을 웰당 20㎕씩 첨가한 후 4시간을 더 배양하였다. 상등액을 제거한 후, DMSO를 100㎕씩 첨가한 다음, 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존률은 PBS를 처리한 음성 대조군을 100%로 하여 하기 식에 따라 계산하였다. 결과를 도 1에 기재하였다.
*세포생존율(%)=(추출물 처리군 흡광도 값/음성 대조군 흡광도 값) × 100
결과는 도 4에 기재하였다. 도 4에서 본 발명의 잔대 추출물이 BEAS-2B 세포에 대하여 독성이 없는 것을 확인할 수 있다.
2-2. TNF -α로 유도된 IL -6 분비 저해능
BEAS-2B 세포에 TNF-α를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에 대한 억제 효과를 알아보기 위해, IL-6의 생성량을 측정하였다. BEGM™ BulletKit™(Lonza CC-3170) 세포를 3 × 104세포수/mL의 농도로 현탁하여 200㎕씩 96 웰 플레이트(96-well plate)에 접종하여 부착하였다. 24시간 동안 부착시킨 후, 잔대 잎 추출물 및 뿌리 추출물을 각각 1000㎍/㎖ 농도로 처리하여 1시간 동안 배양한 후, 10ng/㎖ 농도의 TNF-α를 처리하여 20시간 동안 배양하였다.
IL-6 생성량을 측정하기 위하여 ELISA kit(Human IL-6 ELISA kit, BD Biosceinces)을 사용하였으며, 제조사의 방법에 따라 함량을 측정하였다. IL-6 생성량 측정 결과는 도 5에 기재하였다.
잎 추출물 및 뿌리 추출물 처리군 모두에서 IL-6 생성량이 저해되었는데, 특히 잎 추출물은 뿌리 추출물보다도 IL-6 생성을 현저히 더 억제하는 것을 표 3 및 도 5에서 확인할 수 있다.
IL-6 생성량
(pg/mL)		 TNF-α 처리 대조군에 대한 감소율(%)
무처리 대조군 21.25±13.19 -
TNF-α 처리 대조군 237.62±7.36 0
TNF-α + 잎 추출물 169.88±10.34 28
TNF-α + 뿌리 추출물 226.90±8.27 4
상기 표 3에서 TNF-α로 잎 추출물의 IL-6 생성 억제효과가 뿌리 추출물의 약 7배 정도로 높은 것을 확인할 수 있다. 또한, 통계적으로 유의성을 검정(실험예 1-4에 기재)한 결과를 도 5에 표시하였는데, 도 5에서 뿌리 추출물의 IL-6 감소 효과는 유의미하지 않고, 잎 추출물의 IL-6 감소 효과만 유의미하게 높은 것을 확인할 수 있다.
2-3. LPS 로 유도된 IL -6 분비 저해능
BEAS-2B 세포에 LPS를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에 대한 억제 효과를 알아보기 위해, IL-6의 생성량을 측정하였다. BEGM™ BulletKit™(Lonza CC-3170)배지에 세포를 3×104세포수/mL의 농도로 현탁하여 200㎕씩 96 웰 플레이트(96-well plate)에 접종하여 부착하였다. 24시간 동안 부착시킨 후, 잔대 잎 추출물 및 뿌리 추출물을 각각 1000㎍/mL 농도로 처리하여 1시간 동안 배양한 후, 200ng/mL 농도의 LPS를 처리하여 20시간 동안 배양하였다.
IL-6 생성량 측정은 상기 실험예 2-2와 동일하다. 본 실험예의 결과는 도 6에 기재하였다.
LPS로 자극을 가한 경우에도, 상기 실험예 2-2와 마찬가지로 잎 추출물의 IL-6 생성 억제효과는 뿌리 추출물보다 유의적으로 더 억제하는 것을 하기 표 4 및 도 6에서 확인할 수 있다.
IL-6 생성량
(pg/mL)		 LPS 처리 대조군에 대한 감소율(%)
무처리 대조군 22.03±6.42 -
LPS 처리 대조군 125.15±6.62 0
LPS + 잎 추출물 68.42±7.44 45.6
LPS + 뿌리 추출물 91.81±1.65 27
상기 표 4에서 TNF-α로 잎 추출물의 IL-6 생성 억제효과가 뿌리 추출물 약 1.7배 높은 것을 확인할 수 있다. 또한, 통계적으로 유의성을 검정(실험예 1-4에 기재)한 결과를 도 6에 표시하였는데, 도 5에서 잎 추출물의 IL-6 감소 효과는 뿌리 추출물보다 유의미하게 높은 것을 확인할 수 있다.
2-4. 통계처리
본 실험예 2의 통계처리는 상기 실험예 1의 통계처리 방법과 동일하다.

Claims (6)

  1. 잔대(Adenophora triphylla) 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서,
    상기 염증성 질환이 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 급성 기관지염, 기관지염, 급성 세기관지염, 만성 세기관지염, 대장염, 치질, 통풍, 간직성 척추염, 류마티스 염, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이고,
    잔대 잎 추출물은 염증 매개물질인 일산화질소(NO), 및 인터루킨-6(IL-6)의 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 잔대 잎 추출물의 추출 용매가 물, 탄소수 1~4개의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 하나인, 약학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 저급알코올이 에탄올인, 약학적 조성물.
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 염증성 질환이 급성 기관지염, 기관지염, 급성 세기관지염 및 만성 세기관지염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인, 약학적 조성물.
  6. 잔대(Adenophora triphylla) 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물로서,
    상기 염증성 질환이 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 급성 기관지염, 기관지염, 급성 세기관지염, 만성 세기관지염, 대장염, 치질, 통풍, 간직성 척추염, 류마티스 염, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome) 및 다발성 경화증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상이고,
    잔대 잎 추출물은 염증 매개물질인 일산화질소(NO), 및 인터루킨-6(IL-6)의 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
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