KR101167677B1 - 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 NO 및 TNF-α 의 생성을 억제하고, iNOS 및 COX-2의 발현을 억제하며, NF-kB의 전이를 억제하며, Th2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 감소시키는 효과를 가짐으로써, 상기 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 염증관련 질환, 알레르기 및 천식의 예방 및 치료를 위한 의약품 또는 건강기능식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus), 염증, 천식, NO, NF-kB, iNOS, COX-2, IL-4, IL-13

Description

엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물{A composition comprising extracts of Elaeocarpus petiolatus for prevention and treatment of inflammatory diseases}
본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
염증(inflammation)이란 외부 감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 뜻한다. 구체적으로, 외부 세균이 특정 조직에 침입하여 증식을 하게 되면 생체의 백혈구가 이를 인지하여 증식된 외부 세균을 활발히 공격하게 되는데, 이 과정 중 발생되는 백혈구의 사해가 균에 의하여 침입받은 조직에 축적됨과 동시에 백혈구에 의하여 사멸된 침입균의 세포 파괴물이 침입받은 조직 내로 융해되어 농양이 형성된다. 염증에 의한 농양의 치료는 소염작용을 통하여 촉진될 수 있는데, 소염작용이란 항균제를 이용하여 침입균의 증식을 억제하거나 농양 중에 축적된 이물질들을 탐식하는 대식세포(macrophage)를 활성화하여 상기 이물질들을 소화 및 배설하는 대식세포의 기능을 항진시키는 등의 염증 치료 촉진작용이다.
일반적으로 염증반응은 생체의 세포나 조직에 기질적 변화를 가져오는 침습으로 인한 손상을 수복 및 재생하기 위한 생체방어 반응과정이고, 이 반응과정에는 국소의 혈관, 체액의 각종 조직세포 및 면역세포 등이 작용한다. 정상적으로 외부 침입균에 의하여 유도되는 염증반응은 생체를 보호하기 위한 방어 시스템인 반면, 비정상적으로 과도한 염증반응이 유도되면 다양한 질환들이 나타나게 되는데, 이러한 질환들을 염증질환이라 한다. 상기 염증질환은 외부자극에 의하여 활성화된 표적세포로부터 분비되는 다양한 염증 매개물질이 염증을 증폭 및 지속시켜 인체의 생명을 위협하는 질환으로서 급성염증, 류마티스관절염과 같은 관절내에서의 질환, 건선 등의 형태로 나타나는 피부질환 및 기관지 천식 등의 알러지성 염증질환 등을 포함한다.
나이트릭 옥사이드는 나이트릭 옥사이드 합성효소(NOS)에 의해 L-아르기닌(L-arginine)이 산화되어 생성되는데, 염증과정의 매개체로서 병원성 DNA를 손상시키는 방어작용을 함으로써 항상성을 유지하는 역할을 한다(Kou and Schroder, Annuals of Surgery 221, 220-235, 1995). NOS 중에서 유도성 나이트릭옥사이드 합성효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS)는 세포내에서 NO의 과생산에 아주 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져있다. 포스타글란딘 E2(PGE2)과 류코트리엔 또한 아라키도닉산으로부터 생성되는 염증 매개체로서 특히, PGE2는 사이클로 옥사 이드 합성효소(cyclooxygenase-2 enzyme; COX-2)에 의해 생성되며 주로 대식세포와 단핵구세포에서 많이 생성되는데, 대식세포는 LPS와 같은 염증성 제제에 의해 빠르게 유도된다는 것이 밝혀졌다.
염증을 유도하는 사이토카인과 매개체들은 핵의 요소에 의해 조절된다. 그 예로 NF-κB(nuclear factor-kappa B)는 Rel 유전자계(Rel gene family)의 핵단백질로서 7가지가 있고, 세포질에서는 IκB(inhibitory kappa B)와 결합되어 불활성인 형태로 존재하나, 유해산소(reactive oxygen), TNF-α(tumor necrosis factor-a)과 같은 케모카인(chemokines) 및 LPS와 같은 다양한 자극에 의해 IκB 키나제가 활성화된 후 인산화 과정을 통해 IκB가 떨어져 나가게 된다. p50과 p65의 헤테로다이머(heterodimer)로 구성된 NF-κB는 활성화 된 후, 핵으로 이동하여 염증반응을 유도하는 유전자(종양괴사인자나 사이클로옥사이드 합성효소) 발현을 촉진시키는 것으로 알려져 있다(Oh GT et al., Artherosclerosis, 159(1):17-26, 2001; Epstein FH et al., The New England Journal of Medicine, 336(15):1066-1071, 1997; Zhang WJ et al., FASEB J, 15(130):2423-2431, 2001; Denk A et al., J. Biol. Chem., 276(30):28451-28458, 2001; Sahnoun Z et al., Phsiology, 53(4):315-339, 1998; Lindner V Pathobiology, 66(6):311-320, 1998; Landry DB et al., Am. J. Pathol., 151(4):1085-1095, 1997; ; Gerritsen ME et al., Am. J. Pathol.,147(2):p278-292, 1995).
만성 기도염증(chronic airway inflammation)과 기도 과민반응성(bronchial hyperresponsiveness)이 특징인 천식(asthma)은 대부분 알레르기성 질환으로 기도 의 광범위한 협착에 의해 발생하는 천명(喘鳴), 호흡곤란, 기침 등의 임상 증세들은 자연히 혹은 치료에 의해 가역적으로 호전될 수 있다(Minoguchi K and Adachi M. Pathophysiology of asthma. In: Cherniack NS, Altose MD, Homma I, editors. Rehabilitation of the patient with respiratory disease. New York: McGraw-Hill, pp97-104, 1999). 따라서 천식에서의 염증반응은 염증세포들이 합성, 분비하는 사이토카인에 의해 유발되며, 이들은 염증반응을 유지하는데에도 중요한 역할을 한다.
병태생리학적인 면에서 천식은 TH2 면역세포에서 생성하는 사이토카인(인터루킨-4, 인터루킨-13)에 의해 염증세포가 증식, 분화 및 활성화되어 기도 및 기도주변 조직으로 이동, 침윤하여 나타나는 만성 염증질환으로 인식되고 있다(Elias JA, et al., New insights into the pathogenesis of Asthma., J. Clin. Invest., 111, pp291-297, 2003).
현재 염증 치료제로는 부신피질 호르몬 성분을 이용한 덱사메타손(Dexamethasone) 및 코티손(cortisone) 등이 있다. 그러나 이들은 염증 치료제로서 작용을 하기는 하나, 독성이 강하며 부작용으로서 부종과 같은 증상을 일으키기도 한다. 또한, 염증 원인에 대하여 선택적으로 작용하지 못하여 심한 면역억제를 유발하는 문제가 생기는 경우도 있다(Check WA & Kaliner MA, Am. Rev. Respir. Dis., 141:44-51. 1990).
지금까지 일류가 개발한 약제 중 가장 강력한 항염증 작용을 지니고 있는 약 제는 스테로이드 제제이다. 그러나 장기적으로 사용할 때 반드시 부작용을 수반하게 된다. 따라서 천식 치료에 있어 스테로이드제는 처음 사용할 때 놀라울 정도의 효과를 발휘하여 증상을 완전 소실시켜버리지만 이는 잠시일 뿐이고, 증상은 스테로이드 사용을 중지함과 함께 다시 나타나며 반복사용과 함께 증상은 더욱 심해져 간다. 스테로이드제의 부작용으로는 둥근 다혈성의 얼굴, 체액의 저류, 부신억제, 감염에 대한 감수성의 증가와 기타 정신병, 백내장, 녹내장, 소화성 궤양, 창상치유지연, 초기 감염의 재활성화 등의 많은 부작용을 가지고 있다(Check WA & Kaliner MA, Am. Rev. Respir. Dis., 141:44-51. 1990).
따라서 천연식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 의약품이나, 별도의 정제 과정 없이 안전하게 섭취할 수 있으며 염증을 억제할 수 효과가 있고, 용이하게 식품에 이용할 수 있는 물질에 대한 연구가 필요한 실정이다.
한편, 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus)는 일본에서 피부의 건조를 막아주어 주름을 개선하는 효과가 있음이 보고된바 있으며, 그 외 엘리오카퍼스(Elaeocarpus)의 다른 종이 일본에서 헤어 성장 촉진, 유럽 및 미국에서 상기 식물에서 추출한 탄닌성분이 사람의 레트로바이러스의 역전사효소를 저해하여 항바이러스 효과를 나타낸다는 보고가 있으나, 상기 종에 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus)는 기재되어 있지 않다.
이에, 본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물이 염증 유발에 의해 급격히 증가한 NO 및 TNF-α 생성, iNOS 및 COX-2 발현 및 NF-κB 활성 억제, 및 Th 2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과를 가지며, 식물에서 유래한 세포독성이 없는 안전한 물질로서, 알레르기 및 천식 등을 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 또는 건강식품의 유효성분으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증관련 질환, 알레르기 및 천식의 예방 및 치료를 위한 약학적 조성물 또는 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 피부 외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물은 우수한 항염증 및 항천식 활성을 가지고, 세포독성이 거의 없으므로, 염증관련 질환, 알레르기 및 천식 등의 예방 및 치료를 위한 의약품, 가공식품, 기능성 식품, 식품첨가제, 기능성 음료, 또는 음료첨가제 등의 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "염증"이란 외부 감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 뜻한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개체"는 본 발명의 조성물을 투여하여 염증성 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 염증성 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방 법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus)에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축한 후 건조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus)는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 엘리오카퍼스 페티오라투스는 잎, 줄기 또는 뿌리가 모두 이용가능하다.
상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C4 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 엘리오카퍼스 페티오라투스 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 30 내지 100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 3 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증 발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 NO 생성 저해 효과를 가지는지 알아보기 위해, 대식세포에 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide, LPS)를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에서 NO의 생성 정도를 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 측정한 결과, LPS만 처리한 세포에 비해 LPS와 함께 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 처리한 세포에서 NO의 생성량이 현저히 감소하였으며, 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 처리 농도에 비례하여 NO의 생성량이 감소함을 확인하였다(도 1 참조).
또한, 본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 iNOS 및 COX-2의 발현 저해 효과를 가지는지 알아보기 위해, 대식세포에 리포폴리사카라이드(LPS)를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에서 iNOS 및 COX-2의 발현 정도를 형광염색법(Immunofluoresence)으로 측정한 결과, LPS만 처리한 세포에 비해 LPS와 함께 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 처리한 세포에서 iNOS 및 COX-2의 발현량이 현저히 감소함을 확인하였다(도 2 참조).
또한, 본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 종양괴사인자(tumor necrosis factor-α; TNF-α)의 생성을 억제하는 효과를 가지는지 알아보기 위해, 대식세포에 리포폴리사카라이드(LPS)를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에서 TNF-α의 생성량을 효소면역학적 분석키트(mouse TNF-α Enzymen Immunometric Assay Kit)를 이용하여 측정한 결과, LPS만 처리한 세포에 비해 LPS와 함께 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 처리한 세포에서 TNF-α의 생성량이 현저히 감소하였으며, 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 처리 농도에 비례하여 TNF-α의 생성량이 감소함을 확인하였다(도 3 참조).
또한, 본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 NF-kB가 핵으로 전이를 저해하는 효과를 가지는지 알아보기 위해, 대식세포에 리포폴리사카라이드(LPS)를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에서 면역형광염색법을 이용하여 NF-kB의 전이를 관찰한 결과, LPS만 처리한 세포에 비해 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 함께 처리한 세포에서 NF-kB가 핵내에서 적게 관찰되었음을 확인하였다(도 4 참조).
또한, 본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 사이토카인 생성 억제 효과를 가지는지 알아보기 위해, 비장세포에 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 농도별로 첨가하여 배양한 후, 콘카나발린 A(Concanavalin A)을 첨가한 다음, ELISA kit를 사용하여 IL-4 및 IL-13의 함량을 측정하였다. 그 결과, ConA에 의해 유도되는 사이토카인의 양이 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 함께 처리한 군에서는 농도의존적으로 감소되었음을 확인하였다(도 5 및 도 6 참조).
또한, 본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 세포독성을 알아보기 위해, MTT 검사를 수행한 결과, 상기 추출물은 50 ㎍/㎖ 이하의 농도에서 세포독성이 거의 없는 것으로 나타났다(표 1 참조).
따라서, 본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물이 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 NO 및 TNF-a 의 생성을 억제하고, iNOS 및 COX-2의 발현을 억제하며, NF-kB의 전이를 억제하며, Th2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 감소시키는 효과를 가지며, 세포독성이 거의 없으므로, 염증관련 질환, 알레르기 및 천식의 예방 및 치료용 약학적 조성물로 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 함유하는 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
즉, 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결 합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투 여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 양을 기준으로 0.0001 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 염증성 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 염증성 질환에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 예방 방법을 제공한다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 염증 유발에 의해 급격히 증가한 NO 및 TNF-α 생성, iNOS 및 COX-2 발현 및 NF-κB 활성 억제, 및 Th 2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과를 가지며, 세포독성이 없는 안전한 물질로써, 알레르기 및 천식 등을 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
상기 약학적으로 유효한 양이란 0.0001 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏이며, 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체 중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여기간, 투여방법, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 그보다 바람직하게는 쥐, 토끼, 기니아피크, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.
상기 투여 방법은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사, 자궁내 경막 주사, 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사 또는 흉부내 주사에 의해 투여될 수 있다.
상기 염증성 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 피부외용제를 제공한다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 염증 유발에 의해 급격히 증가한 NO 및 TNF-α 생성, iNOS 및 COX-2 발현 및 NF-κB 활성 억제, 및 Th 2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과를 가지며, 세포독성이 없는 안전한 물질로써, 알레르기 및 천식 등을 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 및 치료용 피부외용제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
상기 염증성 질환에는 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 궤양성 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 다양한 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
상기 피부 외용제에 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 투여량은 0.0001 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 ㎎/㎏이며, 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 투여기간, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
또한, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다,
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 염증 유발에 의해 급격히 증가한 NO 및 TNF-α 생성, iNOS 및 COX-2 발현 및 NF-κB 활성 억제, 및 Th 2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과를 가지며, 세포독성이 없는 안전한 물질로써, 알레르기 및 천식 등을 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 화장료 조성물로 사용하는 경우, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
아울러, 본 발명은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 염증 유발에 의해 급격히 증가한 NO 및 TNF-α 생성, iNOS 및 COX-2 발현 및 NF-κB 활성 억제, 및 Th 2 유형 IL-4와 IL-13 사이토카인의 양을 현저하게 낮추는 효과를 가지며, 세포독성이 없는 안전한 물질로써, 알레르기 및 천식 등을 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 및 개선용 건강식품의 성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
상기 염증성 질환에는 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 궤양성 대장염, 치질, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 다양한 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 건강식품은 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절 하게 사용될 수 있다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물 제조
<1-1> 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물
본 발명자들은 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus)[PebNO. PB000180; CodeNo. YAAS0083-2; 중국, Yunnan Academy of Agricultural Sciences(운남성 농과원)] 전초 10 ㎏을 건조 및 분쇄하여 분말화한 후, 엘리오카퍼스 페티오라투스 시료에 메탄올 20 ℓ를 가한 후 상온에서 순환시키면서 24시간 동안 추출하여 여과 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3회 반복하여 상층액을 모은 후, 감압농축하여 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물 1.2 ㎏을 수득하였다.
<1-2> 엘리오카퍼스 페티오라투스 에탄올 추출물
상기 실시예 <1-1>의 제조방법에서 메탄올 대신 에탄올을 사용하여 엘리오카퍼스 페티오라투스 에탄올 추출물 1.0 kg을 수득하였다.
<1-3> 엘리오카퍼스 페티오라투스 물 추출물
상기 실시예 <1-1>의 제조방법에서 메탄올 대신 물을 사용하여 엘리오카퍼스 페티오라투스 물 추출물 1.0 kg을 수득하였다.
<실험예 1> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물에 대한 세포독성실험
본 발명자들은 생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 소태아혈청(Fetal Bovine Serum) 5% 첨가한 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco사) 배지에 1 × 105 세포수/ml의 농도로 현탁하여 100 ul씩 96웰 플레이트(96 well plate)에 접종하여 부착하였다. 4시간 후에 추출물을 농도별(6.25, 12.5, 25, 50 ug/ml)로 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후, 5 mg/ml의 MTT용액을 웰당 10 ul씩 첨가한 후 4시간 더 배양을 하고, 상기 배양이 끝난 후, 상등액을 제거한 후, DMSO를 100 ul씩 첨가한 다음, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존률은 DMSO를 0.1% 처리한 음성대조군를 100%로 하여 하기 [수학식 1]에 따라 계산하였다.
세포생존율(%) = (추출물을 처리한 흡광도 570 ㎚ 값 / 음성대조군 흡광도 570 ㎚ 값) × 100
그 결과, 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 50 ug/ml 이하의 농도에서 세 포독성이 거의 없음을 확인하였다(표 1).
시료 (ug/ml) 세포생존율 (%)
음성대조군 100.0 ± 2.42
실시예 <1-1> 추출물 6.25 ug/ml 99.79 ± 0.47
실시예 <1-1> 추출물 12.5 ug/ml 95.47 ± 5.75
실시예 <1-1> 추출물 25 ug/ml 93.16 ± 1.89
실시예 <1-1> 추출물 50 ug/ml 98.41 ± 2.83
실시예 <1-2> 추출물 50 ug/ml 97.89 ± 2.55
실시예 <1-3> 추출물 50 ug/ml 98.56 ± 1.78
<실험예 2> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 NO 생성 저해 효과
본 발명자들은 Raw264.7 세포에 LPS를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에 대한 억제 효과를 알아보기 위하여, 유도성 나이트릭 옥사이드의 생성량을 측정하였다. 페놀레드(phenol-Red)가 들어있지 않은 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco사) 배지에 소태아혈청(Fetal Bovine Serum)을 5% 첨가하고, 세포를 5 × 104 세포를 현탁하여 96웰 플레이트(96 well plate)에 접종하였다. 4시간 동안 부착시킨 후, 본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물을 각각 6.25, 12.5, 25, 50 ug/ml의 농도로 처리하여 1시간 동안 배양한 후에 1 ug/ml의 리포폴리사카라이드(LPS, lipopolysaccharide, Sigma사)를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상층액 100 μl를 회수하여 새로운 96웰 플레이트에 넣고, 그리스 시약(Griess reagent, Sigma사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 측정기(microplate reader, Bio-Rad사)로 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 아질산나트륨(sodium nitrite)을 이용하여 검량선을 작성하고, 이를 기준으로 배양액 내의 나이트릭 옥사이드 생성량을 구하였으며, 리포폴리사카라이드를 처리한 군의 나이트릭 옥사이드 생성량을 100%로 하여 각 시료의 저해율을 퍼센트로 나타내었다.
그 결과, 표 2 및 도 1에서 보는 바와 같이, 리포폴리사카이드를 처리한 군에 비해 시료를 처리한 군에서 나이트릭 옥사이드 생산량이 현저히 감소하였고, 특히 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 처리농도에 비례하여 나이트릭 옥사이드의 생성량이 감소함을 확인하였다(표 2 및 도 1).
시료 (ug/ml) NO 생성량 (uM)
DMSO 7
LPS 37
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 6.25 μg/ml 31
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 12.5 μg/ml 27
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 25 μg/ml 25
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 50 μg/ml 23
LPS + 실시예 <1-2> 추출물 25 μg/ml 26
LPS + 실시예 <1-2> 추출물 50 μg/ml 25
LPS + 실시예 <1-3> 추출물 25 μg/ml 27
LPS + 실시예 <1-3> 추출물 50 μg/ml 26
<실험예 3> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 iNOS 및 COX-2 단백질의 발현 저해 효과
본 발명자들은 LPS를 처리한 RAW264.7 세포에서 iNOS 및 COX-2 단백질의 발현저해 효과를 면역형광염색(Immunofluoresence)법으로 확인하였다. 약 2 × 104개의 세포를 퍼머녹스 챔버 플라스틱 슬라이드(Permanox chambered plastic slides; Nunc, USA)에서 분주하고, 상기 <실험예 2>의 방법으로 배양한 후 상등액을 제거하였다. 이후 4℃에서 30분간 에탄올로 고정하였고, 인산완충액(PBS)으로 세척한 후, 3% 소혈청알부민(bovine serum albumin)으로 실온에서 30분간 차단하였다. 차단 후, 1차 항체[항-iNOS 항체(1 : 100) 또는 항-Cox-2 항체(1 : 100)]를 4℃에서 하루 동안 반응시켰다. 인산완충액으로 3번 세척한 이후에 COX-2 항체에는 텍사스레드(Texas red; Santa Cruz Biotechnology, USA))가 연결된 2차 항체(Santa Cruz Biotechnology, USA)를, iNOS 항체에는 알렉스 488(Alexa Fluor 488; Invitrogen, USA)이 연결된 2차 항체를 실온의 암조건에서 3시간 동안 반응하였다. 인산완충액으로 3번 세척한 다음, 프로롱 골드 안티페드 용액(ProLong Gold Antifade reagent, Invitrogen, USA)으로 마운팅한 후 공초점 현미경(LSM510m Carl Zeiss, Germany)으로 촬영하였다.
그 결과, 도 2에서 보는 바와 같이 LPS만 처리한 세포에 비해 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물을 함께 처리한 세포에서 iNOS와 COX-2의 발현이 현저히 감소한 것을 확인하였다(도 2).
<실험예 4> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 TNF-α 생성 저해 효과
본 발명자들은 리포폴리사카라이드를 처리한 Raw264.7 세포에서의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 염증 저해 효과를 확인하기 위하여, 리포폴리사카라이드로 유도된 종양괴사인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α)의 생성량을 마우스 종양괴사인자를 효소면역학적 분석키트(mouse TNF-α Enzymen Immunometric Assay Kit; Assay designs, USA)를 이용하여 측정하였다. 실험방법으로는 상기 <실험예 2>의 방법으로 Raw264.7세포를 배양한 후, 상층액 50 ㎕를 회수하여 마우스 면역글로불린이 코팅된 96 웰플레이트에 분주하여 2시간 동안 교반하며 반응시켰다. 그런 다음, 세척용액으로 4회 세척한 다음, 제 1차 항체인 항-TNF-α 항체를 50 ㎕씩 분주한 후 2시간 반응시켰다. 반응 후에 세척을 하고 제 2차 항체를 분주하고 30분간 반응시켰다. 다시 세척한 후 기질을 넣어 30분간 반응시킨 다음, 발색 정도를 마이크로플레이트 측정기로 450 nm에서 측정하였다.
그 결과, 표 3 및 도 3에서 보는 바와 같이 LPS를 처리한 군에서 TNF-α의 양이 증가하였고, LPS에 의해 증가된 TNF-α의 양이 처리된 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 농도에 따라 감소함을 확인하였다(표 3 및 도 3).
시료 (ug/ml) TNF-α 생성량 (pg/ml)
DMSO 0
LPS 412
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 6.25 μg/ml 295
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 12.5 μg/ml 228
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 25 μg/ml 206
LPS + 실시예 <1-1> 추출물 50 μg/ml 180
LPS + 실시예 <1-2> 추출물 25 μg/ml 210
LPS + 실시예 <1-2> 추출물 50 μg/ml 184
LPS + 실시예 <1-3> 추출물 25 μg/ml 208
LPS + 실시예 <1-3> 추출물 50 μg/ml 185
<실험예 5> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 NF-kB의 억제 효과
본 발명자들은 LPS를 처리한 RAW264.7 세포에서 NF-kB가 핵으로 전이를 저해하는 효과를 면역형광염색법으로 확인하였다. 상기 <실험예 3>의 방법으로 세포를 처리하였고, 제 1차 항체[항-NF-kB 항체(1 : 100)]를 상온에서 3시간 동안 반응시켰다. 제 2차 항체로는 텍사스레드(Texas red; Santa Cruz Biotechnology, USA))가 연결된 항체(Santa Cruz Biotechnology, USA)를 실온의 암조건에서 2시간 동안 반응하였다.
그 결과, 도 4에서 보는 바와 같이 LPS만 처리한 세포에 비해 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물을 함께 처리한 세포에서 NF-kB가 핵내에서 적게 관찰되었음을 확인하였다(도 4).
<실험예 6> 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물의 사이토카인 생성 저해 효과
본 발명자들은 BALB/c 마우스(오리엔트, 대한민국)에서 비장을 무균적으로 떼어내어 10% 우태아혈청(FBS), 25 mM HEPES, 2 mM 글루타민(glutamine), 페니실린(100 U/㎖) 및 스트렙토마이신(100 μg/㎖)을 포함하고 있는 RPMI 1640 배지(GibcoBRL, USA)에서 갈아서 단일세포현탁액(single cell suspension)으로 만들었다. 준비된 비장 세포 현탁액은 실온에서 1500 rpm으로 10분간 원심 분리한 뒤 상층액을 버리고 적혈구 분해용액(Red blood cell lysis buffer) 1 ㎖을 넣고 37℃ 에서 10분간 분해시켰다. 이 용액에 10 ㎖ PBS를 더하여 섞은 후, 실온에서 1500 rpm으로 5분간 원심 분리한 뒤 상층액을 버리는 과정을 2회 반복하였다. 마지막에 PBS 대신 10% 우태아혈청(GIBCO BRL, USA)을 첨가한 RPMI 1640 배지를 사용 하여 부유시켰다. 세포수를 1 × 106 세포/㎖로 맞춘 후, 세포부유액 200 ㎕를 96웰 플레이트에 각각 분주하였고, 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물을 농도별(0, 6.25, 12.5, 50 ug/ml)로 첨가한 후, 습윤배양기에서 5% CO2, 37℃ 조건으로 1시간 배양한 후, 세포에서 인터루킨-4(IL-4)와 인터루킨-13(IL-13)을 유도하기 위해 콘카나발린 A(Concanavalin A, Sigma, USA) 를 2 ㎍/㎖ 농도로 첨가하였고, 습윤배양기에서 5% CO2, 37℃에서 24시간 배양하였다. IL-4와 IL-13의 함량을 측정하기 위하여 각각의 사이토카인에 특정 반응하는 ELISA kit(R&D Systems, Minneapolis, USA)를 사용하였으며, 제조사의 방법에 따라 각 사이토카인의 함량을 측정하였다. 대조군은 Con A를 처리하지 않았다.
그 결과, 도 5 및 도 6에서 보는 바와 같이 ConA에 의해 유도되는 사이토카인의 양이 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물을 함께 처리한 군에서는 농도의존적으로 감소되었다(도 5 및 도 6).
<제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 150 ㎎
대두추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2> 식품의 제조
<2-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<2-4> 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-5> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 실시예 <1-3>의 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예 <1-3>의 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
실시예 <1-3>의 추출물(3 중량부),
영지(0.5 중량부),
지황(0.5 중량부)
<제조예 3> 음료의 제조
<3-1> 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 실시예 <1-3>의 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<3-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 실시예 <1-3>의 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<3-3> 과일 주스의 제조
본 발명의 실시예 <1-3>의 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
상기와 같이, 본 발명의 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 항염증에 탁월한 효과가 있으므로 염증성 질환의 예방 및 치료에 관련된 약제, 또는 염증 개선용 기능성 식품 및 기능성 사료첨가제의 개발과 이들을 이용한 개선 또는 치료 방법 연구에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 RAW264.7 세포에서 LPS로 유도된 NO의 생성에 대한 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 메탄올 추출물의 억제효과를 나타낸 그래프이다(P값(*)은 0.05 (＃)은 0.005 이하):
-: DMSO만 투여한 음성대조군;
+: LPS로 유도된 양성대조군;
6.25: 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물 6.25μg/ml을 처리한 후 LPS로 유도;
12.5: 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물 12.5μg/ml을 처리한 후 LPS로 유도;
25: 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물 25μg/ml을 처리한 후 LPS로 유도; 및,
50: 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물을 50μg/ml 처리한 후 LPS로 유도.
도 2는 RAW264.7 세포에서 LPS로 유도된 COX-2와 iNOS의 단백질 발현에 대한 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물의 억제 효과를 면역형광염색법으로 나타낸 그림이다.
도 3은 RAW264.7 세포에서 LPS로 유도된 TNF-α의 생성에 대한 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물의 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 RAW264.7 세포에서 LPS로 유도된 NF-kB 단백질이 세포질에서 핵으로 의 이동에 대한 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물의 저해 효과를 면역형광염색법으로 나타낸 그림이다.
도 5는 비장세포에서 ConA로 유도된 세포의 사이토카인 중 IL-4에 대한 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물의 저해 효과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 비장세포에서 ConA로 유도된 세포의 사이토카인 중 IL-13에 대한 엘리오카퍼스 페티오라투스 메탄올 추출물의 저해 효과를 나타낸 그래프이다.

Claims (10)

  1. 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 엘리오카퍼스 페티오라투스 추출물은 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 염증성 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염 및 중이염으로 구성된 군으로부터 선택된 염증성 질환의 예방 및 치료용 피부 외용제.
  6. 삭제
  7. 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부염, 알레르기, 및 아토피로 구성된 군으로부터 선택된 염증성 피부 질환의 예방 및 개선용 화장료 조성물.
  8. 삭제
  9. 엘리오카퍼스 페티오라투스(Elaeocarpus petiolatus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 건강식품.
  10. 제 9항에 있어서, 상기 염증성 질환은 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환의 예방 및 개선용 건강식품.
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