KR101363413B1 - 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 함초 및 노근의 혼합 추출물은 천연물질로 세포독성이 없으며 콜라게나아제 활성 저해 효과 및 콜라겐 생성 촉진효과가 뛰어나고, 피부에 투여시 피부 주름 및 피부결을 개선할 수 있으므로, 피부 노화 방지용 화장료로 유용하게 이용할 수 있다.

Description

함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 화장료 조성물{A cosmetic composition comprising the complex extract of Salicornia Herbacea L. and Phragmitis Rhizoma}

본 발명은 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

함초는 우리 나라 서해안이나 남해안, 백령도, 제주도, 울릉도와 같은 섬 지방의 바닷물이 닿는 해안이나 갯벌 염전 부근에 무리지어 자란다. 식물학적 분류로는 명아주과(Chenopodiaceae)에 속하며 우리말로는 퉁퉁하고 마디마디 튀어나온 풀이라 하여 퉁퉁마디(Salicornia Herbacea L.)라고 한다. 중국의 의학 책인 신농경본초경에는 맛이 몹시 짜다고도 하여 함초, 또는 몹시 희귀하고 신령스러운 풀로 여겨 신초라고 적혀 있다. 높이는 10~40㎝로 줄기는 마디가 많고 가지는 2~3번 갈라져서 마주보는데, 가지는 다육질로 비대하고 진한 녹색이며, 6~8월에 가지 끝에 녹색으로 보일 듯 말 듯 꽃이 핀다. 10월에 납작하고 까만 열매가 맺히며 가을이 되면 함초 전체가 붉은 홍자색으로 변한다. 함초는 일본에서는 천연기념물로 보호받고 프랑스에서는 아주 고급 샐러드 요리로 쓰인 것으로 알려졌다(김태정. 한국의 야생화, 2권 섬·바닷가에 피는 꽃, 국일미디어. 1996:94-98.). 그러나 함초 추출물과 피부 노화와의 관계에 관한 연구는 아직까지 보고된 바 없다.

노근은 키가 큰 갈대(Phragmitis communis Trin.)의 근경을 말한다. 말린 노근은 납작하고 원기둥 모양으로 표면에 광택이 있고 황백색이며 마디부분은 비교적 단단하고 또렷한 황홍색이며 마디 사이에 세로주름이 있고, 늦은 봄이나 초여름 또는 가을에 채취하여 진흙과 수염뿌리를 제거하고 피막을 벗겨서 신선할 때 쓰거나 볕에 말려 사용한다. 노근은 열을 내리고 진액을 생기게 하여 구역질을 멎게 하는 효능이 있고, 열병에 의한 구토, 식도암, 폐농양을 치료하고 복어독을 해독하는데 사용되어왔다. 또한 자외선 차단작용을 하고, 멜라닌 세포의 증식을 촉진하여 두발을 검고 윤기 있게 할 수 있으며 미백 크림으로 사용하면 피부에 미백작용 및 영양을 공급한다고 보고되어 있다. 노근의 생리활성 연구로는 우선 추출물 대상으로는 혈청내 포도당, 인슐린 및 지질 합성에 미치는 영향이 보고되었고, streptozotocin 투여에 의한 랑게르한스선 A 세포내 글루카곤 과립들의 증가를 억제시키는 작용과 B세포내 인슐린 탈과립을 억제시키는 효과가 보고되었다. 또한, 갈대 근경 메탄올 추출물이 혈중 콜레스테롤과 포도당을 낮추는 효과가 있음도 보고되어있다. 그러나 노근 추출물과 피부 노화와의 관계에 관한 연구는 아직까지 보고된 바 없다.

피부의 노화는 크게 내인적 노화(Intrinsic aging)와 외인적 노화(Extrinsic aging)로 대별된다(Cosmetics &Toiletories, 111:31-37(1996)).　내인적 노화는 나이가 듦에 따라 피부의 생리적 기능이 점차 저하되어 자연적으로 나타나는 노화 현상으로 임상학적으로 탄력이 감소하고, 피부결이 거칠어지며, 깊은 주름이 생기고 색소가 침착되는 특징이 있다(Arch Dermatol., 130:87-95(1994)).　외인적 노화는 자외선, 활성 산소종(Reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외인적 요인에 의해 발생하는 노화 현상을 말한다.　이러한 요인들에 의해 피부의 노화가 급속히 진행되며, 그 결과 피부 표면에 거친 주름이 생성되고 피부결이 거칠어 지며 피부의 탄력이 현저히 감소하게 된다.

피부의 노화 기작을 규명하기 위한 여러 연구들이 진행되어 여러 가지 피부 노화의 원인들이 밝혀졌다.　피부가 온도의 변화, 습도의 저하 또는 바람 등에 의해 건조하게 되면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 생리 활성이 저하되어 노화가 촉진된다.　또한, 유해 활성산소종 또는 자유 라디칼에 피부가 노출되면 체내의 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 피부를 구성하는 여러 단백질들의 변형을 유발하게 된다.　

이 중 피부 주름은 피부 수분 함유량, 교원질 단백질의 함유량 및 외부 환경에 대한 면역작용 능력 등 여러 가지 요소들에 의해서 나타나는 피부 노화의 대표적인 현상이다. 상기 요소들 중 피부 주름에 가장 큰 영향을 미치는 요인은 교원질 단백질 함유량인 콜라겐의 변화로 알려져 있다. 콜라겐은 피부 진피의 대부분(피부 전체 건조 중량의 약 70-80%)을 차지하고 있으며 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력 및 탄력성 등에 관여한다(Journal of the American Academy of Dermatology, 21:610-613(1989)).　

콜라겐은 연령이 증가할수록, 그리고 자외선에 노출이 많이 될수록 양적 감소를 보인다.　이러한 콜라겐은 고령화 및 자외선 조사에 의한 광노화에 의해 감소하며, 일반적으로 80세에는 20세에 비해 65% 정도 감소하여 피부의 두께가 얇아지고, 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다(Arthur K. Balin 등,"Aging and the skin", 1989).

콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라서 분류되는데, 이들 중에서 가장 특징이 잘 알려진 것은 타입 I, II, III 그리고 IV이다.　콜라겐 타입 I과 III는 진피층의 세포간질의 구성성분을 이루고 콜라겐 타입 IV는 DEJ(Dermal Epidermal Junction)의 주요 구성물질이 된다.　DEJ는 피부의 표피층과 진피층 사이에 위치하여 두 층간의 물질 투과와 수송을 조절해주며 인접한 세포의 분화를 조절하며 피부의 견고성을 유지시켜준다.　피부의 주요 구조적 성분인 콜라겐과 엘라스틴은 자연적 또는 외부 자극에 의해 구조가 변성되거나 생합성 량이 감소하게 되는데 이로 인해 피부 노화가 가속화된다. 또한 콜라게나아제의 발현량과 활성 역시 피부 노화를 가속화 시키는 주요 요인이다.

따라서 콜라겐을 타깃으로 하여 피부 주름을 개선하기 위한 콜라겐 합성 촉진물질에 관한 많은 연구가 이루어졌으며, 레티노인산(Retinoic acid), 표피성장인자(Epidermal growth factor: EGF), TGF(Transforming growth factor, 형질전환성장인자; Cardinale G. et al., Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974), 동물 태반 유래의 단백질(JP8-231370), 베툴린산(Betulinic acid(JP8-208424)), 클로렐라 추출물(JP9-40523, JP10-36283, 섬유아세포 증식 촉진작용) 등을 피부 주름을 개선하기 위하여 사용할 수 있음이 알려져 있다. 특히 표피성장인자는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포 세포증식의 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손 시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에 상처치유 효과가 우수하다. 또한 레티놀은 콜라겐 합성과 분해억제에 매우 효과적이며 레티놀의 피부주름개선 효과는 미국 특허 제4,603,146호 및 제4,877,805호 등에 명시되어 있다. 그러나 레티노인산의 경우 불안정하고, 피부 적용 시 자극, 발적 등의 안정성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다.

따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 합성능 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 합성 촉진제를 이용한 피부 노화 방지물질의 개발이 절실히 요망되고있다.

본 발명의 목적은 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명자들은 피부 노화 방지 효과를 나타내는 천연물들을 예의 연구하던 중, 함초 및 노근 혼합 추출물이 인체에 무해할 뿐 아니라 우수한 작용을 나타내며, 특정 용매로 추출된 혼합 추출물이 우수한 작용 효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 혼합 추출물이 수 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올을 추출용매로하여 추출된 것인, 피부 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 알코올이 메틸알코올 또는 에틸알코올인, 피부 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 혼합 추출물이 수 또는 에틸아세테이트 용매를 이용한 분획 추출물인, 피부 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은, 상기 함초 및 노근이 1: 1 내지 1:3 중량비로 혼합된, 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 혼합 추출물이 피부결 또는 피부 주름을 개선하는 것인 피부 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 혼합 추출물이 피부 콜라겐의 생성을 촉진하는 것인, 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 1) 함초 및 노근을 수 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올로 80~100℃에서 추출하여 함초 및 노근의 혼합 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 1) 단계의 혼합추출물을 헥산에서 분획하여 수층을 얻고 이로부터 수 분획 추출물을 얻는 단계;를 추가적으로 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 1) 단계의 혼합추출물을 헥산에서 분획한 후, 수층을 얻는 단계; 및 상기 수층에 에틸아세테이트를 투여하고 분획하여 에틸아세테이트 분획 추출물을 얻는 단계;를 추가적으로 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

삭제

본 발명의 함초 및 노근의 혼합 추출물은 천연물질로 세포독성이 없으며 콜라게나아제 활성 저해 효과 및 콜라겐 생성 촉진효과가 뛰어나고, 피부에 투여시 피부 주름 및 피부결을 개선할 수 있으므로, 피부 노화 방지용 화장료로 유용하게 이용할 수 있다.

도 1 내지 도 4는 함초 또는 노근의 단일 추출물 및 함초 및 노근의 혼합 추출물의 콜라게나아제 활성 억제율을 용매에 따라 확인한 결과를 나타낸 도이다(도 1: 에틸알코올 추출, 도 2: 에틸아세테이트 분획추출, 도 3: 부탄올 분획추출, 도 4: 수 분획추출)
도 5 내지 도 7은 함초 또는 노근의 단일 추출물 및 함초 및 노근의 혼합 추출물의 콜라겐 생성 촉진율을 용매에 따라 확인한 결과를 나타낸 도이다(도 5: 에틸알코올 추출, 도 6: 에틸아세테이트 분획추출, 도 7: 수 분획추출)

본 발명은 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 함초 및 노근의 혼합 추출물은 천연물질로 세포독성이 없으며 콜라게나아제 활성 저해 효과 및 콜라겐 생성 촉진효과가 뛰어나고, 피부에 투여시 피부 주름 및 피부결을 개선할 수 있으므로, 피부 노화 방지용 화장료로 유용하게 이용할 수 있다.

상기 혼합 추출물은 수, 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매(예를 들어, 함수알코올, 함수글리세린, 함수에틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 함수 부틸렌글리콜)중에서 선택된 것일 수 있고, 수, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올 또는 함수알코올에서 선택된 용매로 추출되는 것이 바람직하다.

상기 알코올은 메틸알코올 또는 에틸알코올일 수 있으며 에틸알코올이 더욱 바람직하다.

상기 혼합 추출물은 함초 및 노근을 1: 1 내지 1: 5의 중량비로 혼합하여 추출한 추출물일 수 있으며, 바람직하게는 1: 1 내지 1:3 중량비로 혼합하여 추출한 혼합 추출물일 수 있다.

상기 추출물은 추출용매를 이용한 추출 또는 추출용매를 이용한 분획을 이용하여 얻을 수 있는 추출물을 모두 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물 또는 분획 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함할 수 있다. 예를 들어, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다.

본 발명의 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 혼합 추출물은 함초 및 노근을 혼합하여 추출한 추출물 뿐만 아니라, 함초 및 노근 각각의 성분을 추출한 후 혼합한 조성물도 포함할 수 있다.

또한 본 발명은 1) 함초 및 노근을 수 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올로 80~100℃에서 추출하여 함초 및 노근의 혼합 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 1) 함초 및 노근을 수 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올로 80~100℃에서 추출하여 함초 및 노근의 혼합 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법에 있어서 상기 1) 단계의 혼합추출물을 헥산에서 분획한 후, 수층을 얻고 이로부터 수 분획 추출물을 얻는 단계;를 추가적으로 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
또한 본 발명은 상기 1) 단계의 혼합추출물을 헥산에서 분획한 후, 수층을 얻는 단계; 및 상기 수층에 에틸아세테이트를 투여하고 분획하여 에틸아세테이트 분획 추출물을 얻는 단계;를 추가적으로 포함하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.

삭제

상기 1) 단계에 사용되는 함초 및 노근은 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한없이 사용할 수 있다.

상기 1) 단계의 추출은 진탕 추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출 방법을 이용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는 함초 및 노근의 건조물을 세절하여 혼합하고, 그 건조 중량의 1~15배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 알코올 또는 이들 알코올과 물과의 혼합용매 중에서 선택된 추출용매를 부가하여 유효성분을 추출한 후, 감압농축기로 농축하여 수득할 수 있다.

상기 추출의 추출온도는 50 내지 120 ℃인 것이 바람직하며, 80 내지 100℃인 것이 더욱 바람직하다. 또한, 추출시간은 2 내지 12시간인 것이 바람직하다.

상기 혼합 추출물은 100~ 500메쉬로 여과하여 제조될 수 있고, 300 메쉬를 이용하는 것이 바람직하다.

추가적으로 1 내지 5일간 실온에서 방치하여 침전물을 가라앉히는 공정을 상기 혼합 추출물의 제조방법에 이용할 수 있으며, 이를 통해 얻어진 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GF/C 150mm 여과지로 2번 여과시키는 것이 바람직하다. 또한 추출 후 농축 단계가 10 내지 100℃에서 이루어질 수 있으며 50℃에서 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하다.

상기 분획은 헥산(n-Hexane)을 1 내지 2L 투여하고 교반하고 정치시켜 얻을 수 있으며, 이러한 교반 후 정치과정을 1 내지 10회, 바람직하게는 2 내지 5회 반복하여 분획을 얻을 수 있다.

본 발명에서, 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 노화 방지용 화장료조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 메이크업 베이스, 파운데이션, 염모제, 샴푸, 린스 및 바디 세정제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 함초 및 노근 혼합 추출물을 사용하여 통상의 화장료 제조방법에 따라, 다양한 형태로 제조될 수 있으며, 화장료 조성물 분야에서 통상적으로 사용되는 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 특히 화장수, 로션, 크림, 에센스 형태로 제조되는 것이 바람직하다.

본 발명의 화장료 조성물에서 함초 및 노근 혼합 추출물은 화장료 조성물의 총 액상 중량에 대하여 0.1중량%~10중량%의 양을 화장료에 첨가될 수 있고, 또한 화장료 조성물의 총 건조중량에 대하여 0.001∼5중량%, 바람직하게는 0.01∼3중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다.

이상 본 명세서에 기재된 수치값은 달리 명시되어 있지 않은 한 균등범위까지 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 제제예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예, 제제예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 제제예 또는 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

비교 실시예 - 추출용매 별 함초 , 노근 단일 추출물 제조

비교실시예 1 내지 6- 함초 단일 추출물 제조

비교실시예 1.

채취, 건조한 후 세절한 함초 1Kg에 70% 에틸알코올 20㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80℃로 5시간 중탕조건하에서 추출하였다. 뜨거울 때 300 메쉬로 여과하여 약재와 추출물을 분리한 후, 오염되지 않도록 밀봉하여 3일간 실온에서 방치하고 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GF/C 293mm 여과지로 2번 여과시켰다. 얻어진 함초 에틸알코올 추출물을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 동결건조기(일신랩 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 164.9g을 얻었다.

비교실시예 2.

비교실시예 1에서 추출하여 농축 건조한 추출물 164.9g을 증류수 2L에 분산시킨 후 헥산(n-Hexane) 2L를 투여하고 교반한 후 정치시켜 두층으로 분리하였다. 상기와 동일한 방법으로 헥산 분액을 5회 반복하여 모은 헥산층을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 동결건조기(일신랩 제품)를 이용하여 건조시켜 함초 헥산 분획물을 건조 중량 18.5g로 얻었다.

비교실시예 3 내지 6.

상기 비교실시예 2에서 얻어지는 헥산 층의 하층부인 수층을 분리하고 다음 표 1과 같은 용매를 사용하여 분획 추출하였다. 실시예 2에서 헥산으로 분획한 후 하층부에 남은 수층을 분리하여 순차적으로 하기 표 1의 용매를 실시예 2와 동일하게 동일 양을 투여하여 분액한 결과 실시예 3 내지 6의 분획 추출물을 수득하였고, 추출물을 상기 비교실시예 2와 동일한 방법으로 건조시켜 하기 표 1과 같은 건조 중량을 얻었다.

[표 1]

비교실시예 7 내지 12- 노근 단일 추출물

비교실시예 7.

채취, 건조 한 후 세절한 노근 1Kg에 70% 에틸알코올 20㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80℃로 5시간 중탕조건하에서 추출한 후 뜨거울때 300메쉬로 여과하여 약재와 추출물을 분리하였다. 그 후 오염되지 않도록 밀봉하여 3일간 실온에서 방치하였으며 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GF/C 293mm 여과지로 2번 여과시켰다. 얻어진 노근의 에틸알코올 추출물을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 동결건조기(일신랩 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 152.0g을 얻었다.

비교실시예 8.

상기 비교실시예 7에서 추출하여 농축 건조한 추출물 152g을 증류수 2L에 분산시킨 후 헥산(n-Hexane) 2L를 투여하고 교반 후 정치시켜 두층으로 분리하였다. 상기와 동일한 방법으로 헥산 분액을 5회 반복하여 모은 헥산층을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후, 동결건조기(일신랩 제품)를 이용하여 건조시켜 노근 헥산 분획물을 건조 중량 19.1g으로 얻었다.

비교실시예 9 내지 12.

상기 비교실시예 8에서 얻어지는 헥산 층의 하층부인 물층을 분리하여 다음 표 2과 같은 추출 용매를 사용하여 분획추출하였다. 비교실시예 8에서 헥산으로 분획한 후 하층부에 남은 수층에 순차적으로 하기 표 2의 용매를 실시예 8과 동일한 방법으로 분액한 결과 비교실시예 9 내지 12의 분획 추출물을 수득하였다. 그 결과는 하기 표 2와 같다.

[표 2]

실시예 1 내지 6- 추출용매 별 함초 및 노근 혼합 추출물 제조

실시예 1 .

채취, 건조 한 후 세절한 함초 330g 과 노근 670g의 총 1Kg을 계량하고 이에 70% 에틸알콜 40㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 80℃로 5시간 중탕조건하에서 추출한 후 뜨거울때 300메쉬로 여과하여 약재와 추출물을 분리한 후, 오염되지않도록 밀봉하여 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GF/C 293mm 여과지로 2번 여과시켰다. 함초 및 노근의 혼합 추출물을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 동결건조기(일신랩 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 148.8g을 얻었다.

실시예 2 .

실시예 1에서 추출하여 농축 건조한 추출물 148.8g을 증류수 2L에 분산시킨 후 헥산(n-Hexane) 2L를 투여하고 교반 후 정치시켜 두층으로 분리하였다. 이러한 헥산 분액을 5회 반복하여 모은 헥산층을 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 동결건조기(일신랩 제품)를 이용하여 건조시켜 함초 및 노근 혼합 헥산 분획물을 건조 중량 16.3g로 얻었다.

실시예 3 내지 6.

상기 실시예 2에서 얻어지는 헥산 층의 하층부인 물층을 분리하여 다음 표 3과 같은 추출 용매를 사용하여 분획 추출하였다. 실시예 2에서 헥산으로 추출 후 하층부에 남은 수층에 순차적으로 하기 표 3의 용매를 실시예 2와 동일한 방법으로 투여하여 분액한 결과 실시예 3 내지 6의 분획 추출물을 수득하였다. 그 결과는 하기 표 3과 같다.

[표 3]

제제예 1. 노근 및 함초 혼합 추출물을 이용한 화장료의 제조

1.1 화장수의 제조

노근 및 함초의 혼합 추출물 분말(실시예 4)를 함유한 화장수(스킨로션)를 1kg 제조하였다. 사용된 원료 및 함량은 하기 표 4와 같다.

[표 4]

구체적으로 정제수에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 방부제를 순서대로 투입하고 교반하여 용해시켰으며, 폴리옥시에틸렌경화피마자유를 60℃ 로 가열하여 용해시켰다. 용해물에 향료를 투입하여 용해시켰으며, 이를 다시 정제수에 혼합하였다. 마지막으로 본 발명의 실시예 4의 함초 및 노근의 혼합 추출물의 분말과 에탄올을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켜 화장수를 제조하였다.

1.2. 로션의 제조

노근 및 함초의 혼합 추출물 분말(실시예 4)를 함유한 로션을 하기의 표 5의 함량으로 1kg 제조하였다.

[표 5]

구체적으로, 상기 표 5의 함량으로 프로필렌글리콜, 카르복시폴리머, 방부제, 정제수를 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 밀납, 폴리소르베이트 60, 솔비탄 세스퀴올레이트, 유동 파라핀, 소르비탄 스테아레이트, 친유형 모노스테아린산 글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트를 80~85℃ 사이로 가열 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 트리에탄올아민을 투여하고 교반기를 이용하여 교반하면서 중화시키고 50℃까지 냉각한 뒤 향료를 투입하고 35℃까지 냉각한 뒤 함초 및 노근 혼합 추출물 분말(실시예 4)을 투입하여 25℃까지 냉각하고 숙성시켜 영양로션을 제조하였다.

1.3. 크림 제조

함초 및 노근 혼합 추출물 분말(실시예 4)을 함유한 크림을 하기의 표 6의 함량으로 1kg 제조하였다.

[표 6]

구체적으로는, 상기와 표 6과 같은 함량의 카르복시비닐폴리머, 부틸렌글리콜, 트리에탄올아민, 방부제, 정제수를 혼합교반하면서 80 ~ 85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 스테아린산, 세틸알콜, 글리세릴모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트, 솔비탄세스퀴올레이트, 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트, 왁스, 유동파라핀, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드를 80 ~ 85℃사이로 가열하여 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 글리세린을 투입하고 교반기를 이용하여 교반하면서 중화시켰으며 35℃까지 냉각한 후 함초 및 노근 혼합 추출물 분말(실시예 4)을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시켜 영양크림을 제조하였으며 이를 처방예로 사용하였다.

함초 및 노근 혼합 추출물 분말(실시예 4)을 갖지 않는 것을 제외하고 상기와 동일한 방법으로 비교처방예의 영양크림을 제조하였다.

1.4. 에센스 제조

함초 및 노근 혼합 추출물 분말(실시예 4)을 함유한 에센스를 하기의 표 7의 함량으로 1kg 제조하였다.

[표 7]

구체적으로, 상기 표 7과 같은 함량으로 시토 스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 글리세라마이드, 스테아레스-4 및 콜레스테롤을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질을 제조하였다. 이 비이온계 양친매성 지질과 함초 및 노근 혼합 추출물 분말(실시예 4), 디세틸포스페이트, 마카다미아 오일 및 정제수를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과시키고 이어 마카다미아 오일을 50~60℃로 가온하여 천천히 첨가하여 균질화였으며 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그 후, 카르복시비닐폴리머, 산탄검, 방부제, 정제수를 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켜 에센스를 제조하였다.

실험예 1. 세포독성 및 세포 증식효과 확인

상기 비교실시예 1 내지 12의 단일 추출물 및 실시예 1 내지 6의 혼합 추출물을 이용하여 제조된 추출물 건조 분말을 이용하여 혼합 추출물의 세포 증식 효과를 측정하였다. 세포(파이브로블라스트, 3T3)를 96 웰 마이크로플레이트에 5,000세포/웰로 분주하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도별 각각0.01, 0.1, 1.0(%,W/V))로 투여하여 72시간 동안 배양하였다. 그 후 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 투여하고 4시간 동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액(acidic isopropanol)을 가하고 5분간 교반한 후, 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식률을 계산하였다.

세포증식률은 하기 식1을 이용하여 산출하였다.

[식 1]

식 1에 의해 산출된 비교실시예 1 내지 12 및 실시예 1 내지 6의 세포증식률(%)을 표 8에 나타내었다.

[표 8]

표 8에 나타낸 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100%로 하였을 때, 각 추출물의 헥산 분획 추출물(비교실시예 2, 8 및 실시예 2), 메틸렌클로라이드분획 추출물(비교실시예 3, 9 및 실시예 3), 부탄올 분획 추출물(비교실시예 5, 11 및 실시예 5)의 경우에는 세포 독성이 함께 동반되는 것으로 확인되었다. 이와 비교하여 각 단일, 혼합물의 에틸알코올 추출물(비교실시예 1, 7 및 실시예 1) 및 각 단일 및 혼합추출물의 에틸아세테이트 분획 추출물(비교실시예 4, 10 및 실시예 4), 수 분획 추출물(비교실시예 6, 12 및 실시예 6)의 경우에는 모두 세포 무독성이며, 높은 농도에서도 우수한 세포증식효과가 있음을 확인하였다.

실험예 2. 콜라게나아제 활성억제 효과

상기 비교실시예 1 내지 12 및 실시예 1 내지 6에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 콜라게나아제 활성억제 효과를 다음과 같은 방법으로 확인하였다. 콜라게나아제(SIGMA C5138) 0.1mg을 0.1M 트리스 완충액(Tris Buffer, pH 7.1) 1㎖에 용해시키고, 콜라겐(SIGMA C9879) 0.5mg을 0.1M 트리스 완충액(Tris Buffer, pH 7.1) 1㎖에 용해시켰으며, 비교실시예 1 내지 12 및 실시예 1 내지 6에서 제조된 추출물을 100ml 용량플라스크에 각각 500μg, 1,500μg, 2,000μg가 되도록 계량하여 주입한 후, 최종 부피가 100ml가 되도록 증류수를 주입하여 최종 농도가 5, 15, 20μg/ml가 되도록 준비하였다. 상기와 같이 농도별로 준비된 추출물 시료 0.05㎖, 콜라게나아제 0.05㎖ 및 콜라겐 0.4㎖를 시험관에 투여하고 37℃ 수욕에서 30분간 반응시킨 후, 25mM 시트르산(Citric acid)용액을 1㎖ 가하여 반응을 종료시켰다. 반응이 종료된 시험관에 에틸아세테이트 5㎖를 주입하여 진탕하고, 3000rpm 으로 5분간 원심분리한 후 320nm에서 에틸아세테이트 층의 흡광도를 측정하였다. 6번 반복 실험한 결과의 평균을 데이터로 사용하였다.

콜라게나아제 활성억제 효과는 하기 식2에 의해 산출되었다.

[식 2]

상기 식2에 의해 산출된 콜라게나아제 활성억제 효과를 하기 표 9 및 도 1 내지 4 에 나타내었다.

[표 9]

표 9에서 확인할 수 있는 바와 같이 콜라게나아제 활성억제율은 에틸알코올을 용매로 추출한 함초, 노근의 단일 및 혼합 추출물(비교실시예 1, 7 및 실시예 1)(도 1) 및 각 단일 및 혼합추출물의 에틸아세테이트 분획 추출물(비교실시예 4, 10 및 실시예 4)(도 2), 부탄올 분획 추출물(비교실시예 5, 11 및 실시예 5)(도 3), 수 분획 추출물(비교실시예 6, 12 및 실시예 6)(도 4)의 모든 농도에서 혼합 추출물의 콜라게나아제 활성억제 효과가 단일 추출물의 효과보다 우수함을 확인하였다. 함초 및 노근의 혼합추출물의 경우, 특히 5μg/ml의 낮은 농도에서도 단일 추출물과 비교하여 더 높은 콜라게나아제 활성 억제효과를 나타내었으며 결과적으로 콜라게나아제 50% 활성억제 농도도 모든 실시예에서 함초 및 노근의 혼합 추출물이 동일 조건의 단일 추출물의 비교실시예보다 낮은 값을 가졌다.

특히 혼합추출물의 에틸아세테이트 분획 추출물(실시예 4) 및 수 분획 추출물은 콜라게나아제 50% 활성억제 농도(IC₅₀)가 각각 10.1μg/ml 및 11μg/ml로 나타나 다른 추출 용매를 이용한 혼합추출물과 비교해도 월등히 우수한 활성억제 효과를 보였다. 이와 대조적으로 헥산 분획 추출물(비교실시예 2, 8 및 실시예 2), 메틸렌클로라이드 분획 추출물(비교실시예 3, 9 및 실시예 3)의 경우에는 콜라게나아제의 활성억제 효과가 없거나 농도를 높인 경우에만 매우 낮은 정도의 효과가 있는 것으로 나타났다.

상기 실험예 1 및 2와 같이 헥산 분획 추출물 및 메틸렌클로라이드 분획 추출물은 콜라게나아제 활성 억제효과가 낮을 뿐만 아니라 세포독성이 있는 것으로 나타났고, 부탄올 분획 추출물은 콜라게나아제 활성 억제효과가 높더라도 세포독성이 있는 것으로 확인되었으므로 이하 실험에서는 에틸알코올 추출물, 에틸아세테이트 분획 추출물, 수 분획 추출물을 사용하였다.

실험예 3. 콜라겐 생성촉진 효과확인

상기 비교실시예 1, 4, 6, 7, 10, 12 및 실시예 1, 4, 6에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 콜라겐생성 촉진효과를 크리스탈 바이올렛 어세이(Crystal Violet assay)의 방법을 이용하여 측정하였다. 이 방법은 세포의 증식에 어떠한 영향을 주는지 알아보는 방법으로, 이를 통해 세포 증식과 단백질 합성 능력을 확인할 수 있다. 크리스탈 바이올렛 염색약은 단백질과 결합하는 시약으로, 단백질과 결합하는 시약의 특성을 이용하여 세포의 단백질 합성능력 그리고 콜라겐 합성 능력을 측정한다. 구체적으로 세포는 스위스 알비뇨 마우스 세포(3T6 Fibroblast)를 사용하여 실험하였다. 96 웰 마이크로플레이트 (96 well micro plate)에 5,000/웰(well)의 3T6 파이브로블라스트(Ficroblast) 를 분주하였다. 단일 및 혼합 추출물의 시료를 0.5, 5, 200, 400㎍/㎖ 농도가 되도록 각각 제조한 후, 24시간 후에 시료를 투여하여 72시간 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양하였다. 이 후 배양액을 조심스럽게 제거하고 살린-포스페이트 완충용액(PBS solution)으로 96 웰 마이크로플레이트를 세척하고, 37℃에서 30분간 건조하였다. 그리고 크리스탈 바이올렛 시약을 가하여 실온에서 5분간 염색을 하고 염색약을 증류수로 잘 세척한 후, 결합된 염색약을 0.2M 인산(Phosphoric acid)과 에탄올을 가하여 녹이고, 5분간 방치한 후 590nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시효 주입량만큼 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였다. 대조군의 콜라겐 합성을 100%로 하고, 시료 투입 실험군의 콜라겐 합성을 계산하였다. 콜라겐 생성 촉진 효과는 하기와 같은 식 3을 이용하여 산출하였으며 6회 실험 결과를 데이터로 사용하였다.

[식 3]

결과는 하기 표 10 및 도 5 내지 도 7에 나타내었다.

[표 10]

표 10 및 도 5 내지 7에서 확인할 수 있는 바와 같이 콜라겐 생성 촉진효과를 확인한 결과, 에틸알코올을 용매로 한 혼합추출물(실시예 1), 혼합 추출물의 에틸아세테이트 분획 추출물(실시예 4) 및 혼합추출물의 수 분획 추출물(실시예 6) 이 모든 농도에서 동일 조건의 함초 또는 노근 단일 추출물의 콜라겐 생성촉진 효과보다 우수함을 확인할 수 있었다. 특히 혼합추출물의 에틸아세테이트 분획 추출물(실시예 6)은 400μg/ml 농도에서 콜라겐생성촉진효과가 254.3%로 나타나 대조군과 비교하여 2배 이상의 콜라겐 생성 촉진효과를 보여 매우 우수한 활성억제 효과가 있음을 확인하였으며, 수 추출물의 경우, 비교실시예 6의 함초 단일 분획 추출물이 200μg/ml 용량 이상에서는 콜라겐 생성촉진 효과가 떨어지는 것과 비교하여 본 발명의 혼합 분획 추출물의 경우 용량 의존적으로 꾸준히 효과가 증가하는 것을 확인하였다.

실험예 4. 주름 개선 효과

상기 제제예 1.3에서 제조된 추출물 건조분말을 함유하는 영양크림의 주름 개선효과를 확인하였다. 구체적으로 35세 이상의 여성 10명을 대상으로 얼굴을 좌, 우로 나누어 제제예 1.3에서 제조된 영양크림(처방예)과 실시예 4 추출물 미 함유 대조군(비교 처방예)을 각각 나누어주고 매일 2회씩 2개월간 0.2g을 2ㅧ2㎠의 면적에 도포하게 하였다. 처방예 또는 대조군을 사용하기 전 및 도포 후 2개월 시점에 각각 항온 항습(22±2℃, 50±5% Humidity)실에서 실리콘(Silflo ; Flexico Ltd., England)을 이용하여 피검자의 시험 부위의 레플리카(Replica)를 제작하였다. 이렇게 제작된 레플리카(Replica)는 주름의 깊이를 측정하는 컴퓨터 영상 시스템인 스킨 비져메터(Skin Visiometer, 모델명 : SV600, 제작사 : Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 사용하여 분석하였으며 그 결과는 R1~R5의 값으로 표시하였다. 여기서 R1~R3는 깊은 주름의 정도를 나타내는 것이며, R4~R5는 피부 거칠음의 정도를 나타내는 것이다.

상기에서 측정된 R1~R5의 값을 하기 식에 대입하여 주름감소율을 산출하였다.

[식 4]

결과를 표 11 및 표 12에 나타내었다.

표 11 은 함초 및 노근 혼합 추출물을 포함하는 제제예 1.3의 영양크림을 도포한 후의 주름 감소율을 나타내며, 표 12는 대조군의 주름 감소율을 나타낸다.

[표 11]

[표 12]

상기의 표 11및 표 12에 나타난 바와 같이, 비교처방예를 피부에 도포한 경우에 비하여 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 처방예를 피부에 도포한 경우에 깊은 주름(R1~R3)의 감소 및 피부 거칠음(R4~R5)의 감소가 확연하게 나타남을 알 수 있다. 이러한 결과로부터 함초 및 노근 혼합 추출물이 콜라겐 생성을 촉진할 뿐만 아니라 실제로 피부의 주름을 감소시키고, 피부결을 개선하는 효과가 있음을 확인하였다.

Claims (10)

1. 함초 및 노근의 혼합 추출물을 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 수 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올 추출물인, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
3. 제 2항에 있어서, 상기 알코올은 메틸알코올 또는 에틸알코올인, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 혼합 추출물은 수 또는 에틸아세테이트 용매 분획 추출물인, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 함초 및 노근은 1:1 내지 1:3 중량비로 혼합된 것인, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
6. 삭제
7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 함초 및 노근 혼합 추출물은 피부 콜라겐의 생성을 촉진하는 것인, 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
8. 1) 함초 및 노근을 수 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올로 50~90℃에서 추출하여 함초 및 노근의 혼합 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
9. 제 8항에 있어서,
   상기 1) 단계의 혼합추출물을 헥산에서 분획하여 수층을 얻고 이로부터 수 분획 추출물을 얻는 단계;를 추가적으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
10. 제 8항에 있어서,
    상기 1) 단계의 혼합추출물을 헥산에서 분획한 후, 수층을 얻는 단계; 및
    상기 수층에 에틸아세테이트를 투여하고 분획하여 에틸아세테이트 분획 추출물을 얻는 단계;를 추가적으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.

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