CN116270379B - 一种能够使皮肤美白的芦根提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种能够使皮肤美白的芦根提取物及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：将干燥的芦根浸提，热回流提取，得到浸膏；将浸膏分散在适量蒸馏水中，依次萃取，将萃取得到的水层经过D101大孔吸附树脂吸附，然后洗脱，将乙醇洗脱部分溶解在甲醇中，将可溶物上样与硅胶柱中，用洗脱剂洗脱，经TLC分析合样，得到7个流份1‑7；将得到的流份5上ODS柱，梯度洗脱得到23个流份Frs1‑Frs23；将步骤流份Frs16用反相高效液相色谱法，进行等度洗脱得到了无定型固体即芦根提取物。本发明的芦根提取物可以用于制备减少皮肤黑色素生成以及促使皮肤美白的美白化妆品等相关领域，为渴望皮肤增白的爱美人士提供一种新的药物。

Description

一种能够使皮肤美白的芦根提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种能够使皮肤美白的芦根提取物及其制备方法和应用。
背景技术
近年来，随着科技、民生水平的提升，人们对美白产品有了更高的要求。目前的美白产品中的化学美白成分常存在细胞毒性、致敏性等潜在不安全因素，而天然美白成分相对安全、健康。因此，寻找美白效果明显、作用时间长、无毒无刺激的天然美白产物成为了化妆品领域研究的热点。
研究表明，紫外线照射、自由基等因素会促进色素沉着，主要涉及5大信号通路，其中MITF是多种信号传导路径的最终靶向目标，其下游靶基因为TYR、TRP-1、TRP-2，因此MITF是黑色素生成的主要调节因子。通过抑制α-MSH-MC1R通路、Wnt通路、NO通路或促进PI3K/Akt信号通路或调控MAPK通路(促进ERK和JNK磷酸化或抑制p38磷酸化)，可减少MITF表达，进而下调黑色素合成。目前，抑制色素沉积，有两个大方向：一是通过细胞毒作用选择性杀死黑素细胞；二是通过黑色素合成和转运的各个途径抑制黑色素生成，包括直接抑制酪氨酸酶等关键酶活性、下调关键酶表达或者抑制酪氨酸酶的转运及破坏黑素小体内环境稳态抑制黑色素合成。从安全角度而言，主要以后者为主。因此，根据沉着的诱因和机制，具有抗氧化、酪氨酸酶抑制活性、无细胞毒性的天然成分是潜在的美白产品成分。
据报道，芦根的化学成分复杂，有多糖、黄酮类、蒽醌类、甾体类等多种，其中多糖类、黄酮类具有一定的抗氧化活性，因此，对芦根中的活性成分进行精炼提取，寻找高效提取、效果稳定、安全健康的美白、抗氧化组合物，可作为潜在美白药物应用于市场，造福爱美人士。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够使皮肤美白的芦根提取物及其制备方法和应用，制得的芦根提取物可以用于制备减少皮肤黑色素生成以及促使皮肤美白的美白化妆品等相关领域，为渴望皮肤增白的爱美人士提供一种新的药物。
为实现上述目的，本发明提供了一种能够使皮肤美白的芦根提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥的芦根浸提，然后进行热回流提取，得到浸膏；
(2)将浸膏分散在适量蒸馏水中，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水层；
(3)将水层经过D101大孔吸附树脂吸附，吸附水层的D101大孔吸附树脂用水和乙醇洗脱，得到水和乙醇洗脱部分；
(4)将乙醇洗脱部分溶解在甲醇中，将可溶物上样与硅胶柱中，用洗脱剂洗脱，经TLC分析合样，得到7个流份1-7；
(5)将得到的流份5上ODS柱，梯度洗脱得到23个流份Frs1-Frs23；
(6)将步骤流份Frs16用反相高效液相色谱法，进行等度洗脱得到了无定型固体即芦根提取物。
优选的，步骤(1)中，使用95％乙醇浸提，使用95％乙醇和60％乙醇热回流提取。
优选的，步骤(3)中，所用的乙醇为95％的乙醇溶液。
优选的，步骤(4)中，洗脱剂为乙酸乙酯-甲醇混合溶液。
优选的，步骤(5)中，梯度洗脱时用甲醇-水进行梯度洗脱。
优选的，步骤(6)中，等度洗脱以甲醇-水6:94进行。
一种上述方法制备的芦根提取物。
芦根提取物，其结构式为：
一种芦根提取物的应用，用于皮肤美白产品。
本发明的有益效果：
(1)本发明制得的芦根提取物可以用于制备减少皮肤黑色素生成以及促使皮肤美白的美白化妆品等相关领域，为渴望皮肤增白的爱美人士提供一种新的药物。
(2)本发明提供的一种芦根提取物的制备方法，提取高效，制得的芦根提取物以芦根为原料制得，不存在不明确的成分，安全性好，相比普通美白产品，无副作用。
下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
图1为本发明的芦根提取物对斑马鱼胚胎处理的流程图；
图2为本发明的芦根提取物对抑制皮肤黑色素生成和美白的作用图；
图3为本发明的芦根提取物在浓度梯度下作用于斑马鱼皮肤的美白效果图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明进一步描述。
实施例
一种能够使皮肤美白的芦根提取物的制备，包括以下步骤：
(1)将干燥的芦根用95％乙醇浸提，然后用95％乙醇和60％乙醇热回流提取，得到浸膏。
(2)将得到的浸膏分散在适量蒸馏水中，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，分别得到了石油醚萃取物，乙酸乙酯萃取物，正丁醇萃取物和水层。
(3)将水层经过D101大孔吸附树脂吸附，吸附水层的D101大孔吸附树脂用水和95％乙醇洗脱，得到水和95％乙醇洗脱部分。
(4)将95％乙醇洗脱部分溶解在甲醇中，将可溶物上样于硅胶柱中，用乙酸乙酯-甲醇洗脱，经TLC分析合样，得到7个流份，7个流份按照分离时流份收集的顺序依次编号1-7。
(5)将7个部分中的流份5上ODS柱，用甲醇-水进行梯度洗脱，得到23个流份，23个流份按照分离时流份收集的顺序依次编号Frs1-Frs23。
(6)将23个流份中的流份Frs16用反相高效液相色谱法，以甲醇-水6:94进行等度洗脱得到了无定型固体即为芦根提取物。
上述芦根提取物为(1'S,2'S)-丁香基甘油3'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((1'S,2'S)-Syringyl glycerol 3'-O-β-D-glucopyranoside)，结构式如图所示：
芦根提取物经核磁鉴定，具体数据如下。
1H NMR(CD3OD,400MHz):δ6.71(2H,s,H-2,6),4.62(1H,d,J＝6.32Hz,H-1'),3.81(1H,m,H-2'),3.72(1H,dd,J＝10.52,5.64Hz,H-3'a),3.55(1H,dd,J＝10.52,3.76Hz,H-3'b),4.23(1H,d,J＝7.68Hz,H-1”),3.21-3.34(4H,m,H-2”-5”),3.81(1H,m,H-6”a),3.63(1H,dd,J＝11.84,5.52Hz,H-6”b),3.85(6H,s,-OCH3)。
芦根提取物的美白效果实验
使用斑马鱼胚胎定性观察皮肤黑色素减少实验，使用的斑马鱼胚胎是受精后12小时的斑马鱼胚胎。所有的检测均在受精后48小时进行。
斑马鱼野生型品系Tu为非转基因、无荧光、无心脏及其他器官性状的野生型斑马鱼品系，公众可以购买获得也可以自北京大学熊敬维老师实验室获得用于重复本实验。
1.斑马鱼胚胎的制备与饲养
将野生型品系Tu的成年斑马鱼置于28±0.5℃的环境中饲养，光照循环周期为14h光照/10h黑暗。成年斑马鱼按照雌雄比例1:1置于配鱼缸中，插入隔板将空间等体积分配，雌雄成年斑马鱼分别置于隔板两侧。次日清晨移除隔板，给予光照刺激，雌雄成年斑马鱼在配鱼缸内自由活动。一段时间后收集斑马鱼胚胎，置于E3培养液(5mM NaCl，0.17mM KCl，0.4mM CaCl2和0.33mM MgSO4)中。将收集到的斑马鱼胚胎置于28±0.5℃的培养箱中生长，挑出死卵并每天更换培养液。
2.斑马鱼模型构建以及芦根提取物处理
将受精后12h的斑马鱼胚胎在体式荧光显微镜(Nikon SMZ800N)下挑选出健康状态良好的斑马鱼胚胎用于实验，然后将所挑选的斑马鱼胚胎随机分为空白对照组、阳性对照组、实验组放置于24孔板中，每孔5枚，溶液体系为1ml，每组设有2个复孔，按照下述方法进行培养。
a.空白对照组：将挑选的胚胎置于E3培养液(5mM NaCl，0.17mM KCl，0.4mM CaCl2和0.33mM MgSO4)中，置于28±0.5℃的培养箱中培养处理36h，得到黑色素生成不受影响且生长发育正常的斑马鱼胚胎，作为空白对照组。
b.阳性对照组：将挑选的胚胎分别置于200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml、1500ug/ml、2000ug/ml的熊果苷培养液(由固态熊果苷与E3培养液配置成2mg/ml的母液，再用E3培养液对母液进行相应稀释，获得所需的浓度梯度)中，置于28±0.5℃的培养箱中培养处理36h，得到黑色素生成受不同浓度熊果苷培养液影响的斑马鱼胚胎，作为阳性对照组。
c.实验组：将挑选的胚胎分别置于200ug/ml、400ug/ml、600ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml、1500ug/ml、2000ug/ml的芦根提取物培养液(由固态芦根提取物与E3培养液配置成2mg/ml的母液，再用E3培养液对母液进行相应稀释，获得所需的浓度梯度)中，置于28±0.5℃的培养箱中培养处理36h，得到黑色素生成受芦根提取物培养液影响的斑马鱼胚胎，作为实验组。
3.检测方法
将培养后的各组斑马鱼胚胎于受精后48h在体式荧光显微镜(Nikon SMZ800N)下定性观察皮肤美白情况。结果如图2所示。
图2为芦根提取物对抑制皮肤黑色素生成和美白的作用图，从图2可以看出，空白对照组的斑马鱼胚胎皮肤表面有较多的黑色素生成，阳性对照组熊果苷的斑马鱼胚胎皮肤黑色素有些许减少，但效果并不显著，而实验组芦根提取物处理的斑马鱼胚胎皮肤美白效果明显，强于同等浓度熊果苷。；图3为不同浓度的芦根提取物作用于斑马鱼皮肤的美白效果图，如图3所示，芦根提取物的浓度为1500ug/ml时其美白效果最佳。
综上，芦根提取物处理可以显著减少斑马鱼皮肤黑色素的生成，表明芦根提取物具有促进皮肤美白的效果。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (1)

1.一种能够使皮肤美白的芦根提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将干燥的芦根使用95%乙醇浸提，然后用95%乙醇和60%乙醇热回流提取，得到浸膏；
（2）将得到的浸膏分散在适量蒸馏水中，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水层；
（3）将水层经过D101大孔吸附树脂吸附，吸附水层的D101大孔吸附树脂用水和95%乙醇洗脱，得到水和95%乙醇洗脱部分；
（4）将95%乙醇洗脱部分溶解在甲醇中，将可溶物上样于硅胶柱中，用乙酸乙酯-甲醇洗脱，经TLC分析合样，得到7个流份，7个流份按照分离时流份收集的顺序依次编号1-7；
（5）将7个部分中的流份5上ODS柱，用甲醇-水进行梯度洗脱，得到23个流份，23个流份按照分离时流份收集的顺序依次编号Frs1-Frs23；
（6）将23个流份中的流份Frs16用反相高效液相色谱法，以甲醇-水6:94进行等度洗脱得到了无定型固体即为芦根提取物；
芦根提取物为：
。
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