CN104274355B - 含有草绿盐角草和芦根的复合提取物的化妆品组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于皮肤老化预防的化妆品组合物及其制造方法,所述化妆品组合物含有草绿盐角草和芦根的复合提取物。本发明的草绿盐角草和芦根的复合提取物是天然产物,因此不表现出细胞毒性,而表现出优异的胶原酶活性抑制效果和优异的胶原生成促进效果,当施用于皮肤时,能够改善皮肤皱纹和皮肤质地,因此可适于用作用于皮肤老化预防的化妆品。
Description
技术领域
本发明涉及用于皮肤老化预防的化妆品组合物及其制造方法,所述化妆品组合物含有草绿盐角草(Salicornia Herbacea L.)和芦根(Phragmites Rhizome)的复合提取物。
背景技术
海蓬子(glasswort)丛生于韩国西南海岸和岛屿(如Jeju岛、Baekryeongdo岛和Ulleungdo岛)的靠近海滨和盐碱滩处。海蓬子的植物学分类为藜科(Chenopodiaceae),由于它是丰满多节的植物,在韩国被称为Tungtungmadi(Salicornia Herbacea L.)。中国医书《神农本草经》中,因海蓬子明显的咸味将其记载为saltwort,因其明显的稀缺和神秘将其记载为神的植物(Angelica Utilis Makino)。海蓬子的高度为10-40cm,其茎部具有大量的节和两或三个分支。分支是肉质的并呈深绿色,在六月至八月开放绿色的小花。海蓬子在秋天变为紫红色,在十月产生扁平的黑色种子。在日本,海蓬子被视为自然的纪念物,已知其用于法国豪华沙拉拼盘中(KIM TaeJeong,韩国野花第二册,岛屿和海滨见到的花草,GukIl Midia1996年出版,94-98页)。然而,关于草绿盐角草提取物和皮肤老化的关系的研究尚未有报道。
芦根指的是高大的芦苇(Phragmites communis Trin.)的根茎(rhizome)。干芦根具有圆筒形状,表面光滑,颜色灰白。其节部相对坚硬并带有黄红色,节间带有竖直的褶皱。在晚春或初夏或秋季收集芦根,去除泥和须根,并将根皮(velamen)剥离,从而被新鲜使用或在阳光下干燥后使用。芦根在使用流出的树脂来降低发热和解决恶心呕吐方面是有效的,已被用于治疗发烧、食道癌和肺脓肿引起的恶心呕吐,并用于对河豚毒素进行解毒。芦根具有紫外线防护功能和黑素细胞增殖促进功能,可令头发乌黑有光泽。此外,已经报道当作为美白乳霜使用时,芦根表现出皮肤美白功能,并为皮肤提供营养。就芦根的生物学研究而言,首先,已报道芦根提取物对于胰岛素、脂质和血清中的葡萄糖的合成的效果,并报道了该提取物抑制A-细胞中胰高血糖素升高的功能和在胰岛的B-细胞中抑制由链脲霉素的给予引起的胰岛素的脱粒的效果。此外,还报道了芦根的甲醇提取物表现出降低血液中的胆固醇和葡萄糖浓度的效果。然而,关于芦根提取物和皮肤老化的关系进行的研究尚未有报道。
皮肤老化宽泛地分为内部老化和外部老化(Cosmetics&Toiletories,111,第31-37页,1996)。内部老化是随着年龄增大皮肤生理功能逐渐降低引起的自然老化过程,临床特征为皮肤弹性降低、皮肤粗糙和皮肤上形成皱纹以及发生皮肤色素沉积(ArchDermatol.,130,第87-95页,1994)。外部老化是指由外部因素如紫外线、活性氧和压力引起的老化过程。由这些因素引起的皮肤老化进展迅速,作为结果,在皮肤表面形成皱纹、皮肤粗糙、皮肤弹性显著降低。
因此,为探究皮肤老化的机制已进行了深入的研究,并揭示了各种皮肤老化的因素。当由于温度改变、湿度降低或风造成皮肤干燥时,作为抵抗外部的保护墙的皮肤的生物活性降低,从而皮肤的老化加速。此外,当皮肤暴露在有害的活性氧或自由基中时,机体中氧化产生过氧化脂质,因此造成对组成皮肤的各种蛋白的改性。
其中,皮肤皱纹是由各种因素(如皮肤的含湿量、胶原蛋白的含量和对外部环境的免疫能力)造成的皮肤老化的代表性特征。已知在上述因素中,对皮肤皱纹影响最大的因素是胶原(即胶原蛋白的含量)的改变。胶原作为皮肤真皮的主要成分(约70-80%的皮肤总干重),涉及真皮的皮肤弹性、组织连接和拉伸强度(Journal of the American Academy ofDermatology,21,第610-613页(1989))。
随着年龄增大和频繁暴露在紫外线中,胶原的量减少。变老和紫外辐射导致的光老化造成胶原减少,与20岁相比,通常在80岁时胶原减少约65%,因此皮肤的厚度变得更薄,认为这与皮肤皱纹的形成密切相关(Arthur K.Balin等,“Aging and the skin”,1989)。
依其形式和结构特征对胶原进行分类,在特征方面,I型、II型、III型和IV型是其最为众所周知的。I型和III型胶原是构成真皮细胞基质的成分,IV型胶原是真皮表皮连接部(DEJ)的主要成分。DEJ位于表皮和真皮之间,控制两层之间物质的传递和输运,控制相邻细胞的细胞分化,并维持皮肤强度。天然或外部刺激导致皮肤主要结构成分的胶原和弹性蛋白具有被修饰的结构或降低的生物合成量,因此加速了皮肤的老化。此外,胶原酶的表达量和活性也是加速皮肤老化的主要因素。
因此,对于胶原合成促进材料的大量研究已经将胶原作为目标材料来改善皮肤皱纹。作为结果,已知可用视黄酸、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF,Cardinale G.等,Adv.Enzymol.,41,第425页,1974)、来自胎盘哺乳动物的蛋白(JP8-231370)、桦木酸(JP8-208424)、小球藻提取物(JP9-40523和JP10-36283,成纤维细胞生长促进作用)等来改善皮肤皱纹。具体而言,表皮生长因子作为上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞细胞增殖的强促进剂,当上皮细胞缺失时,促进上皮细胞的迁移和增殖,从而表现出优异的伤口愈合效果。此外,视黄醇对于胶原的合成和抑制分解具有显著的作用,美国专利4,603,146和4,877,805等公开了所述视黄醇对于皮肤皱纹改善的效果。然而,视黄酸非常不稳定,并且当施用于皮肤时导致皮肤病问题(例如刺激和皮肤发红),因此,其可用量是受限制的。小球藻提取物等在促进皮肤的胶原合成方面表现欠佳,因此实际上很难期望该小球藻提取物具有改善皮肤功能的效果。
因此,希望开发皮肤老化预防物质,该皮肤老化预防物质使用新的胶原合成促进剂,所述促进剂对于机体是安全的,并表现出比现有的胶原合成促进剂更好的效果。
发明内容
本发明的目的在于提供用于皮肤老化预防的化妆品组合物,所述化妆品组合物含有草绿盐角草和芦根的复合提取物。
本发明的另一目的在于提供制造用于皮肤老化预防的化妆品组合物的方法,所述化妆品组合物含有草绿盐角草和芦根的复合提取物。
同时,本发明的目的不限于上述目的,可在不偏离本发明的精神和领域的情况下对本发明的目的进行多方面的扩展。
本发明人就表现出皮肤老化预防效果的天然产物进行了深入研究,作为结果,发现草绿盐角草和芦根的复合提取物不仅对人体无害,还表现出优异的皮肤老化预防效果,特别是用特定溶剂提取的复合提取物表现出优异的皮肤老化预防效果,从而完成了本发明。
本发明提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,所述化妆品组合物含有草绿盐角草和芦根的复合提取物。
本发明还提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,其中,使用水或具有1-4个碳原子的醇作为提取溶剂提取出所述复合提取物。
本发明还提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,其中,所述醇为甲醇或乙醇。
本发明还提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,其中,所述复合提取物是使用水或乙酸乙酯溶剂进行分级分离后的提取物。
本发明还提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,其中,以1:1至1:3的重量比将草绿盐角草和芦根进行混合。
本发明还提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,其中,所述复合提取物改善了皮肤质地或皮肤皱纹。
本发明还提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,其中,所述复合提取物促进了皮肤胶原的生成。
本发明还提供了制造用于皮肤老化预防的化妆品组合物的方法,所述方法包括:1)使用水或具有1-4个碳原子的醇,在80-100℃提取草绿盐角草和芦根,从而获得草绿盐角草和芦根的复合提取物的步骤。
本发明还提供了制造用于皮肤老化预防的化妆品组合物的方法,所述方法还包括:在己烷中将步骤1)获得的复合提取物分级分离后获得水层的步骤,以及通过将乙酸乙酯或水加入水层并对水层分级分离,获得分级分离提取物的步骤。
同时,本发明的目的不限于上述目的,可在不偏离本发明的精神和领域的情况下对本发明的目的进行多方面的扩展。
本发明的草绿盐角草和芦根的复合提取物是天然产物,因此不表现出细胞毒性,而表现出优异的胶原酶活性抑制效果和优异的胶原生成促进效果,当施用于皮肤时,能够改善皮肤皱纹和皮肤质地,因此可适于用作用于皮肤老化预防的化妆品。
附图说明
由以下配有附图的具体说明,本发明的上述和其它目的、特征和优势将更清楚,其中:
图1-4是表明草绿盐角草或芦根的单提取物和草绿盐角草和芦根的复合提取物在胶原酶活性抑制率方面的结果图,结果随溶剂而不同(图1:乙醇提取,图2:乙酸乙酯分级分离提取,图3:丁醇分级分离提取,图4:水分级分离提取);
图5-7是表明草绿盐角草或芦根的单提取物和草绿盐角草和芦根的复合提取物在胶原生成促进率方面的结果图,结果随溶剂而不同(图5:乙醇提取,图6:乙酸乙酯分级分离提取,图7:水分级分离提取)。
具体实施方式
在本申请文件中公开的本发明实施方式的特定结构或功能描述仅为示例性地描述本发明实施方式的目的,本发明的实施方式可以各种形式实施,不应被解读为对本文所述实施方式的限制。
在本发明中,可应用各种修改并可实现各种方式,因此在附图中示例性地说明并在本申请文件中具体描述了特定实施方式。然而,本发明并非意在特定的公开形式,将理解的是,本发明包括包含在本发明的精神和技术范围的全部改变、等同方式或替换方式。
本申请中使用的术语仅为描述特定实施方式,并非意在对本发明进行限定。只要它们在上下文中明确区分,单数表述包括复数表述。在本申请中,应理解的是,诸如“包括(comprising)”、“含有(including)”的术语意在表示存在申请文件中所述的特征、数字、步骤、操作、构成要素、部分或其组合,不排除存在或添加一个或多个其它特征、数字、步骤、操作、构成要素、部分或其组合。
除非以不同方式定义,本文所使用的全部术语(包括技术和科学术语)具有与本发明所属领域技术人员所理解的相同的含义。这些术语如在一般使用的词典中所定义的,应解读为具有与相关领域中具有的相同的含义,除非在本申请中另有明确定义,它们不应被解读为具有理想或过于正式的意思。
本发明提供了用于皮肤老化预防的化妆品组合物,所述化妆品组合物含有草绿盐角草和芦根的复合提取物。
本发明的草绿盐角草和芦根的复合提取物是天然产物,因此不表现出细胞毒性,而表现出优异的胶原酶活性抑制效果和优异的胶原生成促进效果,当施用于皮肤时,能够改善皮肤皱纹和皮肤质地,因此可适于用作用于皮肤老化预防的化妆品。
可使用一种溶剂提取所述复合提取物,所述溶剂选自于水、醇、乙酸乙酯、甘油、乙二醇、丙二醇、丁二醇以及上述溶剂的混合溶剂(例如,水和醇的混合物、水与甘油的混合物、水和乙二醇的混合物、水和水合丙二醇(hydrated propylene glycol)的混合物、以及水和丁二醇的混合物),优选使用选自于水、具有1-4个碳原子的无水醇、具有1-4个碳原子的水合醇的溶剂进行所述提取。
所述醇可以是甲醇或乙醇,更优选乙醇。
所述复合提取物可以是以1:1至1:5的重量比、优选1:1至1:3的重量比将草绿盐角草和芦根进行混合提取的提取物。
所述提取物可包括使用提取溶剂提取以及使用提取溶剂分级分离而获得的全部提取物。此外,本发明的提取物不仅可包括使用上述提取溶剂获得的提取物和分级分离提取物,还可包括通过一般纯化过程获得的提取物。例如,本发明的提取物包括通过各种附加进行的纯化过程获得的级分,所述附加进行的纯化过程例如使用具有特定分子截止值的超滤膜进行分离,通过各种色谱分析进行分离(设计为根据大小、电荷、疏水性或亲和性进行分离)。
可通过附加过程将本发明的提取物制造为粉末形式,所述附加过程例如减压蒸馏、冷冻脱水或喷雾脱水。
本发明的复合提取物可含有通过分别提取草绿盐角草和芦根成分、并随后将两种成分混合在一起而获得的组合物,以及通过将草绿盐角草和芦根混合后再对其共同提取而获得的组合物。
此外,本发明提供了制造用于皮肤老化预防的化妆品组合物的方法,所述方法包括:1)使用水或具有1-4个碳原子的醇,在80-100℃提取草绿盐角草和芦根,从而获得草绿盐角草和芦根的复合提取物的步骤。
此外,本发明提供了制造用于皮肤老化预防的化妆品组合物的方法,除了1)使用水或具有1-4个碳原子的醇,在80-100℃提取草绿盐角草和芦根,从而获得草绿盐角草和芦根的复合提取物的步骤外,所述方法还包括在己烷中将步骤1)获得的复合提取物分级分离后获得水层的步骤,以及通过将乙酸乙酯或水加入水层并对水层分级分离,获得分级分离提取物的步骤。
上述步骤1)所使用的草绿盐角草和芦根并没有特别限制,可使用种植或市售可得的草绿盐角草和芦根。
可通过震荡提取法、Soxhlet提取法或回流提取法进行步骤1)的提取,但所述方法不限于此。优选地,可通过如下方法获得提取物。将干燥的草绿盐角草和芦根切成小片并混合,并以1-15倍于草绿盐角草和芦根干重的体积将提取溶剂(所述提取溶剂选自于水、具有1-4个碳原子的醇以及水和醇的混合溶剂)加入其中,提取其活性成分,随后使用真空浓缩仪将提取物浓缩。
在上述提取中,提取温度优选50-120℃、更优选80-100℃,提取时间优选2-12小时。
可通过使用100-500目筛、优选300目筛过滤,从而制造复合提取物。
在复合提取物的制造方法中,可附加使用处理沉淀的过程,所述处理沉淀的过程为通过将提取物室温静置1-5天,优选使用Advantec5号滤纸和Whatman GF/C150mm滤纸对由此获得的沉淀过滤两次。此外,可使用真空浓缩仪或旋转真空蒸发器在10-100℃、优选在50℃进行提取后的浓缩步骤。
可通过在提取物中加入1-2L正己烷,对混合物进行搅拌并随后将混合物静置而获得所述级分。可将所述搅拌和静置过程重复1-10次、优选2-5次获得所述级分。
含有草绿盐角草和芦根的复合提取物的、用于皮肤老化预防的化妆品组合物可以是制剂,所述制剂选自于由如下制剂所组成的组剂:柔肤洗液、收敛洗液、营养洗液、营养霜、按摩霜、精华素、眼霜、眼精华素、洁肤霜、洁肤乳、洁肤水、面膜、粉饼、润肤洗液、润肤霜、润肤油、润肤精华素、化妆粉底、粉底霜、染发剂、洗发液、护发素和沐浴露。
可根据常用的化妆品制造方法,使用草绿盐角草和芦根的复合提取物,将本发明的化妆品组合物制造为多种形式,本发明的化妆品组合物还可含有常用的添加剂,例如稳定剂、增溶剂、维生素、色素和香料。
优选将本发明的化妆品组合物制造为洗液、乳液、乳霜或精华素形式。
向本发明的化妆品组合物中加入的草绿盐角草和芦根的复合提取物可占化妆品组合物液体总重的0.1-10wt%,并且可占化妆品组合物总干重的0.001-5wt%、优选0.01-3wt%。
除非另有说明,本申请文件中描述的数值应理解为包括等同的范围。
在下文中,对优选的实施例、制剂实施例和实验实施例进行了描述。然而,如下描述的实施例、制剂实施例和实验实施例的目的仅在于更容易地理解本发明,而本发明并不限于如下实施例、制剂实施例和实验实施例。
实施例
比较例:使用相应的提取溶剂,制备草绿盐角草和芦根的单提取物
比较例1-6:制备草绿盐角草单提取物
比较例1
在配有冷凝器的提取器中加入70%乙醇20kg以及经收集干燥并切成小片的草绿盐角草1kg,在双层蒸锅中,在加热条件下80℃提取5小时。通过用300目筛过滤,趁热将提取物和药草分离,气密密封,并在室温下静置3天,使用Advantec5号滤纸和Whatman GF/C293mm滤纸将沉淀过滤两次。使用真空浓缩器在50℃将由此获得的草绿盐角草乙醇提取物浓缩,随后使用冷冻干燥器(由ilShinBioBase制造)进行干燥,由此获得干重为164.9g的提取物。
比较例2
在2L的蒸馏水中,将上述比较例1中提取、浓缩并干燥的164.9g提取物分散,在其中加入2L正己烷,对混合物进行搅拌并静置,由此将生成物分为两层。以与上述相同的方式进行五次正己烷分级分离,收集正己烷层,使用真空浓缩器在50℃对所述正己烷层进行浓缩,随后使用冷冻干燥器(由ilShinBioBase制造)进行干燥,由此获得干重为18.5g的草绿盐角草正己烷级分。
比较例3-6
对上述比较例2获得的正己烷层下层的水层进行分离,并使用如下表1中示出的溶剂对所述水层进行分级分离提取。将上述比较例2中用正己烷分级分离后保留在下层的水层分离,以与上述比较例2相同的方式和剂量按顺序加入如下表1示出的溶剂进行分级分离,由此获得比较例3-6的分级分离提取物,用与比较例2相同的方式对由此获得的提取物进行干燥,由此获得的提取物的干重在如下表1中示出。
表1
溶剂 | 产量(g) | |
比较例3 | 二氯甲烷 | 12.8 |
比较例4 | 乙酸乙酯 | 8.8 |
比较例5 | 丁醇 | 27.7 |
比较例6 | 水 | 93.6 |
比较例7-12:制备芦根单提取物
比较例7
在配有冷凝器的提取器中加入70%乙醇20kg以及经收集干燥并切成小片的芦根1kg,在双层蒸锅中,在加热条件下80℃提取5小时。通过用300目筛过滤,趁热将提取物和药草分离,气密密封,并在室温下静置3天,使用Advantec5号滤纸和Whatman GF/C293mm滤纸将沉淀过滤两次。使用真空浓缩器在50℃将由此获得的芦根乙醇提取物浓缩,随后使用冷冻干燥器(由ilShinBioBase制造)进行干燥,由此获得干重为152.0g的提取物。
比较例8
在2L的蒸馏水中,将上述比较例7中提取、浓缩并干燥的152.0g提取物分散,在其中加入2L正己烷,对混合物进行搅拌并静置,由此将生成物分为两层。以与上述相同的方式进行五次正己烷分级分离,收集正己烷层,使用真空浓缩器在50℃对所述正己烷层进行浓缩,随后使用冷冻干燥器(由ilShinBioBase制造)进行干燥,由此获得干重为19.1g的芦根的正己烷级分。
比较例9-12
对上述比较例8获得的正己烷层下层的水层进行分离,并使用如下表2中示出的溶剂对所述水层进行分级分离提取。将上述比较例8中用正己烷分级分离后保留在下层的水层分离,以与上述比较例8相同的方式和剂量按顺序加入如下表2示出的溶剂进行分级分离,由此获得比较例9-12的分级分离提取物。结果在表2中示出。
表2
溶剂 | 产量(g) | |
比较例9 | 二氯甲烷 | 8.6 |
比较例10 | 乙酸乙酯 | 10.6 |
比较例11 | 丁醇 | 31.7 |
比较例12 | 水 | 74.5 |
实施例1-6:使用相应的提取溶剂,制备草绿盐角草和芦根的复合提取物
实施例1
在配有冷凝器的提取器中加入70%乙醇40kg以及经收集干燥并切成小片的草绿盐角草(330g)和芦根(670g)共1kg,在双层蒸锅中,在加热条件下80℃提取5小时。通过用300目筛过滤,趁热将提取物和药草分离,气密密封,并在室温下静置3天,使用Advantec5号滤纸和Whatman GF/C293mm滤纸将沉淀过滤两次。使用真空浓缩器在50℃将由此获得的草绿盐角草和芦根的复合提取物浓缩,随后使用冷冻干燥器(由ilShinBioBase制造)进行干燥,由此获得干重为148.8g的提取物。
实施例2
在2L的蒸馏水中,将上述实施例1中提取、浓缩并干燥的148.8g提取物分散,在其中加入2L正己烷,对混合物进行搅拌并静置,由此将生成物分为两层。以与上述相同的方式进行五次正己烷分级分离,收集正己烷层,使用真空浓缩器在50℃对所述正己烷层进行浓缩,随后使用冷冻干燥器(由ilShinBioBase制造)进行干燥,由此获得干重为16.3g的草绿盐角草和芦根的正己烷级分。
实施例3-6
对上述实施例2获得的正己烷层下层的水层进行分离,并使用如下表3中示出的溶剂对所述水层进行分级分离提取。将上述实施例2中用正己烷分级分离后保留在下层的水层分离,以与上述实施例2相同的方式和剂量按顺序加入如下表3示出的溶剂进行分级分离,由此获得实施例3-6的分级分离提取物。结果在如下表3中示出。
表3
溶剂 | 产量(g) | |
实施例3 | 二氯甲烷 | 5.9 |
实施例4 | 乙酸乙酯 | 13.6 |
实施例5 | 丁醇 | 26.6 |
实施例6 | 水 | 74.0 |
制剂实施例1:使用草绿盐角草和芦根的复合提取物制备化妆品
1.1制备洗液
使用如下表4中示出含量的材料,制备1kg含有草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)的洗液。
表4
编号 | 材料 | 含量(wt%) |
1 | 草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4) | 1.0 |
2 | 甘油 | 3.0 |
3 | 丁二醇 | 2.0 |
4 | 丙二醇 | 2.0 |
5 | 硬化蓖麻油聚氧乙烯醚 | 1.0 |
6 | 乙醇 | 10.0 |
7 | 防腐剂 | 0.4 |
8 | 香料 | 痕量 |
9 | 纯水 | 加至100 |
具体而言,在纯水中按顺序加入甘油、丁二醇、丙二醇和防腐剂并搅拌使之溶解,在60℃加热溶解硬化蓖麻油聚氧乙烯醚。在溶解的原料中加入香料,将生成物再次与纯水混合。最后,将本发明实施例4获得的草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末和乙醇加入生成物并充分搅拌,随后老化,由此制造洗液。
1.2制备乳液
使用如下表5中示出含量的材料,制备1kg含有草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)的乳液。
表5
编号 | 材料 | 含量(wt%) |
1 | 草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4) | 1.0 |
2 | 蜂蜡 | 1.0 |
3 | 聚山梨醇酯60 | 1.5 |
4 | 山梨坦倍半油酸酯 | 0.5 |
5 | 液体石蜡 | 10.0 |
6 | 山梨坦硬脂酸酯 | 1.0 |
7 | 单硬脂酸甘油酯,亲脂性 | 0.5 |
8 | 硬脂酸 | 1.5 |
9 | 甘油硬脂酸酯/PEG-400硬脂酸酯 | 1.0 |
10 | 丙二醇 | 3.0 |
11 | 羧基聚合物(carboxy-polymer) | 0.1 |
12 | 三乙醇胺 | 0.2 |
13 | 防腐剂 | 0.4 |
14 | 香料 | 痕量 |
15 | 纯水 | 加至100 |
具体而言,按照上述表5示出的含量将丙二醇、羧基聚合物、防腐剂和纯水混合在一起,在加热至80-85℃的同时加以搅拌,将混合物导入制造机,随后操作乳化机,将蜂蜡、聚山梨醇酯60、山梨坦倍半油酸酯、液体石蜡、山梨坦硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯(亲脂性)、硬脂酸和甘油硬脂酸酯/PEG-400硬脂酸酯加热至80-85℃溶解,随后乳化。当乳化作用完成后,在其中加入三乙醇胺,使用搅拌器搅拌从而中和生成物。随后,将生成物冷却至50℃,在其中加入香料并冷却至35℃。随后,在其中加入草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)并冷却至25℃,随后使得生成物老化,由此制备营养乳液。
1.3制备乳霜
使用如下表6中示出含量的材料,制备1kg含有草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)的乳霜。
表6
具体而言,按照上述表6示出的含量将羧基乙烯基聚合物、丁二醇、三乙醇胺、防腐剂和纯水混合在一起,加热至80-85℃时搅拌,将混合物导入制造机,随后操作乳化机,将硬脂酸、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、聚氧乙烯山梨坦单硬脂酸酯、山梨坦倍半油酸酯、单硬脂酸甘油酯/甘油硬脂酸酯/聚氧乙烯硬脂酸酯、蜂蜡、液体石蜡、角鲨烷和辛酸/癸酸甘油三酯加热至80-85℃溶解,随后乳化。当乳化作用完成后,在其中加入甘油,使用搅拌器搅拌从而中和生成物,随后将生成物冷却至35℃。随后,在其中加入草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)并冷却至25℃,随后使得生成物老化,由此制备营养霜。由此获得的营养霜用作处方例。
用与上述同样的方式制备比较处方例的营养霜,只是不加入草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)。
1.4制备精华素
使用如下表7中示出含量的材料,制备1kg含有草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)的精华素。
表7
编号 | 材料 | 含量(wt%) |
1 | 草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4) | 1.0 |
2 | 谷甾醇 | 1.7 |
3 | 聚甘油-2油酸酯 | 1.5 |
4 | 甘油酯 | 0.7 |
5 | 硬脂醇聚醚-4(Steareth-4) | 1.2 |
6 | 胆固醇 | 1.5 |
7 | 双十六烷基磷酸 | 0.4 |
8 | 浓缩甘油 | 5.0 |
9 | 澳洲坚果油 | 15.0 |
10 | 羧基乙烯基聚合物 | 0.2 |
11 | 黄原胶 | 0.2 |
12 | 防腐剂 | 0.4 |
13 | 纯水 | 加至100 |
具体而言,在恒温下按照上述表7所示的含量将谷甾醇、聚甘油-2油酸酯、甘油酯、硬脂醇聚醚-4和胆固醇匀化,从而制备非离子型两亲脂质。将该非离子型两亲脂质和草绿盐角草和芦根的复合提取物粉末(实施例4)、双十六烷基磷酸、澳洲坚果油和纯水混合在一起,恒温下匀化,使得生成物通过微流化机,随后,将澳洲坚果油加热至50-60℃并将其缓慢加入所述生成物,使得生成物匀化并再次通过微流化机。随后,在生成物中加入将羧基乙烯基聚合物、黄原胶、防腐剂和纯水并分散,从而使得混合物保持稳定,随后使得生成物老化,由此制备精华素。
实验实施例1:细胞毒性和细胞增殖效果的确认
对由上述比较例1-12的单提取物制备的提取物粉末以及由上述实施例1-6的复合提取物制备的提取物粉末的细胞增殖效果进行了评价。将细胞(成纤维细胞,3T3)分散于96孔微板中,使得每孔中为5000个细胞,在恒温浴中培养30分钟,随后在其中分别加入浓度为0.01、0.1和1.0(%,w/v)的每种提取物样品,培养72小时。随后,在其中加入噻唑蓝并再次培养4小时。将培养液全部弃去,在微板的相应孔中加入反应终止液(酸性异丙醇),搅动5分钟,随后测定其在570nm的吸光度。对照组在细胞生长的优化条件下培养相同的时间,所述优化条件为加入与样品量相同的10%胎牛血清(FBS)替代样品。通过将对照组的细胞增殖率设定为100%,计算添加样品组的细胞增殖率。
使用如下公式1计算细胞增殖率。
[公式1]
细胞增殖率(%)=(使用提取物处理后的吸光度-对照组的吸光度)/(对照组的吸光度)×100
使用公式1计算的基于比较例1-12和实施例1-6的细胞增殖率(%)在表8中示出。
表8
如表8所示,当将优化细胞生长条件下的细胞增殖率设定为100%时,对于各提取物的正己烷分级分离提取物(比较例2和8、实施例2)、二氯甲烷分级分离提取物(比较例3和9、实施例3)、丁醇分级分离提取物(比较例5和11、实施例5)的情况,确认了其细胞增殖伴有细胞毒性。另一方面,确认了各单取物和复合提取物的全部乙醇提取物(比较例1和7、实施例1)、以及各单提取物和复合提取物的乙酸乙酯分级分离提取物(比较例4和10、实施例4)和水分级分离提取物(比较例6和12、实施例6)不表现出细胞毒性,而表现出优异的细胞增殖效果。
实验实施例2:胶原酶活性抑制效果
根据如下方法,对上述比较例1-12和上述实施例1-6制备的提取物干燥粉末对胶原酶活性抑制效果进行了评价。将0.1mg胶原酶(SIGMA C5138)溶解于1ml 0.1M Tris缓冲液(pH为7.1),将0.5mg胶原(SIGMA C9879)溶解于1ml 0.1M Tris缓冲液(pH为7.1)。在100ml烧瓶中加入500μg、1500μg和2000μg的上述比较例1-12和上述实施例1-6中制备的每种提取物干燥粉末,用蒸馏水将烧瓶中的终体积调节至100ml,从而每种提取物的终浓度为5μg/ml、15μg/ml和20μg/ml。在试管中加入0.05ml由此获得的每种提取物样品、0.05ml胶原酶和0.4ml胶原,在37℃水浴中反应30分钟,随后在其中加入1ml25mM柠檬酸终止反应。随后,在试管中加入5ml乙酸乙酯,震荡试管并在3000rpm离心分离5分钟。测定生成物在320nm的吸光度。实验重复6次,将平均结果作为实验数据。
使用如下公式2计算胶原酶活性抑制效果。
[公式2]
抑制率(%)=[1-(样品的吸光度-样品的空白值)÷(对照组的吸光度-对照组的空白值)×100]
使用上述公式2计算的胶原酶活性抑制效果的结果在如下表9和图1-4中示出。
表9
从表9可以看出,对于使用乙醇作为溶剂(比较例1和7、实施例1)(图1)提取草绿盐角草和芦根的单提取物和复合提取物、以及相应的单提取物和复合提取物的乙酸乙酯分级分离提取物(比较例4和10、实施例4)(图2)、丁醇分级分离提取物(比较例5和11、实施例5)(图3)和水分级分离提取物(比较例6和12、实施例6)(图4)的情况,确认了复合提取物的胶原酶活性抑制效果在全部浓度下优于单提取物的效果。特别是即使浓度低至5μg/ml,与单提取物相比,草绿盐角草和芦根的复合提取物表现出更好的胶原酶活性抑制效果。作为结果,在全部实施例中,草绿盐角草和芦根的复合提取物对胶原酶的50%抑制浓度也低于相同条件下的单提取物。
具体而言,与使用其它提取溶剂的复合提取物相比,复合提取物的乙酸乙酯分级分离提取物(实施例4)和水分级分离提取物表现出更好的胶原酶活性抑制效果,二者对胶原酶的50%抑制浓度(IC50)分别为10.1μg/ml和11μg/ml。另一方面,正己烷分级分离提取物(比较例2和8、实施例2)和二氯甲烷分级分离提取物(比较例3和9、实施例3)不表现出胶原酶活性抑制效果或仅在高浓度表现出较低程度的效果。
如上述实验实施例1和2所述,正己烷分级分离提取物和二氯甲烷分级分离提取物表现出细胞毒性以及低的胶原酶活性抑制效果,丁醇分级分离提取物表现出高的胶原酶活性抑制效果,然而也表现出细胞毒性。因此使用乙醇提取物、乙酸乙酯分级分离提取物和水分级分离提取物进行下面的实验。
实验实施例3:确认胶原生成促进效果
使用结晶紫分析方法,对由上述比较例1、4、6、7、10和12以及上述实施例1、4和6制备的提取物干燥粉末的胶原生成促进效果进行评价。该方法是测定材料对于细胞增殖的效果的方法。通过这种方法可确认细胞增殖能力和细胞的蛋白合成能力。结晶紫染料是与蛋白结合的试剂,这样的性质使得能够用于测定细胞的蛋白合成能力和胶原合成能力。具体而言,实验中使用Swiss albino制造的小鼠细胞(3T6成纤维细胞)。将3T6成纤维细胞分散于96孔微板中,使得每孔中为5000个细胞。制备单提取物和复合提取物的样品,使得浓度分别为0.5、5、200和400μg/ml,24小时后将其加入孔中,在5%CO2培养箱中对生成物培养72小时。随后,小心弃去培养液,用磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液对96孔微板进行清洗,在37℃下干燥30分钟。随后,在其中加入结晶紫试剂,染色5分钟,用去离子水洗去染料。加入0.2M磷酸和乙醇溶解结合的染料,将生成物静置5分钟。测定其在590nm的吸光度。对照组在细胞生长的优化条件下培养相同的时间,所述优化条件为加入与样品量相同的10%胎牛血清(FBS)替代样品。通过将对照组的胶原合成率率设定为100%,计算添加样品组的胶原合成率。使用如下公式3计算胶原生成促进效果,用6次实验获得的结果作为实验结果。
[公式3]
胶原生成促进效果(%)=(用提取物处理后的吸光度-对照组的吸光度)/(对照组的吸光度)×100
结果在如下表10和图5-7中示出。
表10
从表10以及图5-7可以看出,对于使用乙醇作为溶剂(实施例1)提取的复合提取物、复合提取物的乙酸乙酯分级分离提取物(实施例4)和复合提取物的水分级分离提取物(实施例6)的情况,确认了其胶原生成促进效果在全部浓度下优于相同条件下的草绿盐角草或芦根的单提取物。具体而言,确认了复合提取物的乙酸乙酯分级分离提取物(实施例4)表现出明显优异的胶原生成促进效果,在浓度为400μg/ml时高达254.3%,与对照组相比超过2倍。草绿盐角草单提取物的水分级分离提取物(比较例6)的胶原生成促进效果在浓度高于2000μg/ml时下降,从而确认了根据本发明的复合提取物的分级分离提取物中,胶原生成促进效果以浓度依赖的方式提高。
实验实施例4:皱纹改善效果
对含有上述制备例1.3制备的提取物干燥粉末的营养霜的皱纹改善效果进行了评价。具体而言,在10位年龄超过35岁的女性受试者的左侧和右侧脸颊上2×2cm2的区域施用0.2g制备例1.3中制备的营养霜(处方例)和0.2g不含有实施例4提取物的对照乳霜(比较处方例),每天两次共两个月。在恒温恒湿的房间(温度为22±2°,湿度为50±5%)中,在使用处方例和比较处方例之前以及使用2个月后,使用硅酮(Silflo,由Flexico Ltd,England制造)制备受试者测试区域的复制品。使用计算机图像处理系统Skin-Visiometer(SV600,由Courge+Khazaka electronic GmbH,Germany制造)对由此制备的复制品进行分析。结果以R1-R5的值表示。这里,R1-R3表明皱纹的程度,R4和R5表明皮肤的粗糙程度。
通过将上述测得的R1-R5值代入如下公式计算皱纹减少率。
[公式4]
皱纹减少率(%)=[(使用前测得的值-使用两个月后测得的值)/(使用前测得的值)]×100
结果在表11和表12中示出。
表11示出施用制备例1.3的营养霜(含有草绿盐角草和芦根的复合提取物)后的皱纹减少率,表12示出施用对照乳霜后的皱纹减少率。
表11
R1减少率 | R2减少率 | R3减少率 | R4减少率 | R5减少率 | |
受试者1 | 42.14 | 49.12 | 45.05 | 42.07 | 30.12 |
受试者2 | 51.99 | 54.01 | 39.98 | 43.84 | 37.91 |
受试者3 | 52.16 | 52.22 | 49.25 | 38.02 | 27.69 |
受试者4 | 50.01 | 50.31 | 45.86 | 41.79 | 31.15 |
受试者5 | 41.21 | 42.56 | 35.31 | 31.96 | 21.05 |
受试者6 | 9.08 | 14.01 | 14.93 | 11.55 | 19.08 |
受试者7 | 11.06 | 10.22 | 5.05 | 0 | 21.09 |
受试者8 | 3.11 | 3.55 | 0 | 0 | 37.96 |
受试者9 | 35.89 | 13.97 | 35.22 | 34.29 | 18.55 |
受试者10 | 50.28 | 51.09 | 39.88 | 38.05 | 21.73 |
平均值 | 34.69 | 34.11 | 31.05 | 28.16 | 26.63 |
标准误 | 5.83 | 6.23 | 5.33 | 5.23 | 2.23 |
表12
R1减少率 | R2减少率 | R3减少率 | R4减少率 | R5减少率 | |
受试者1 | 8.11 | 6.65 | 6.34 | 9.22 | 13.32 |
受试者2 | 3.33 | 6.13 | 6.22 | 10.99 | 13.29 |
受试者3 | 6.99 | 6.66 | 7.98 | 13.91 | 8 |
受试者4 | 8.2 | 7.64 | 10.89 | 15.94 | 14.72 |
受试者5 | 9.01 | 6.67 | 7.96 | 6.68 | 10.89 |
受试者6 | 8.12 | 7.68 | 13.1 | 8.77 | 6.12 |
受试者7 | 7.58 | 8.13 | 9.56 | 0 | 13.98 |
受试者8 | 8.09 | 9.01 | 6.11 | 12.89 | 18.01 |
受试者9 | 11,08 | 8.99 | 11.28 | 17.74 | 14.33 |
受试者10 | 8.88 | 8.02 | 10.05 | 14.66 | 17.01 |
平均值 | 7.94 | 7.56 | 8.95 | 11.08 | 12.97 |
标准误 | 0.59 | 0.30 | 0.72 | 1.56 | 1.11 |
如表11和表12所示,与施用比较处方例的情况相比,在施用含有草绿盐角草和芦根的复合提取物的处方例的情况下,确认了皱纹的减少(R1-R3)和皮肤粗糙度的减少(R4和R5)更明显。上述结果验证了草绿盐角草和芦根的复合提取物不仅促进了胶原的生成,还表现出皮肤皱纹减少效果和皮肤质地改善效果。
参照优选的实施方式对本发明进行了具体描述。然而,本领域技术人员将理解的是,可在所附权利要求及其等同物定义的范围内,在不偏离本发明的原理和精神下对这些实施方式进行修改。
Claims (4)
1.一种用于皮肤老化预防的化妆品组合物,所述化妆品组合物含有草绿盐角草和芦根的复合提取物,
其中,所述复合提取物是以1:1至1:3的重量比将所述草绿盐角草和所述芦根进行混合提取的提取物;
所述复合提取物是水提取物或醇提取物,或者所述复合提取物是水的分级分离提取物或乙酸乙酯溶剂的分级分离提取物;
所述醇为甲醇或乙醇。
2.一种制造用于皮肤老化预防的化妆品组合物的方法,所述方法包括:
1)使用水或具有1-4个碳原子的醇,在50-90℃提取以1:1至1:3的重量比混合的草绿盐角草和芦根,从而获得草绿盐角草和芦根的复合提取物;
在己烷中将所述步骤1)获得的所述复合提取物分级分离后获得水层;以及
通过将乙酸乙酯或水加入所述水层并对所述水层进行分级分离,获得分级分离提取物。
3.权利要求1所述的化妆品组合物在制备用于改善皮肤质地或皮肤皱纹的化妆品中的用途。
4.权利要求1所述的化妆品组合物在制备用于促进皮肤胶原的生成的化妆品中的用途。
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
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