JP7174736B2 - ダイダイの地上部の発酵抽出物 - Google Patents
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Description
a)少なくとも1種のアルコール溶媒および/または水を用いて植物(この場合はキトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部)を抽出するステップと;
b)a)で得られた混合物を、例えばふるい分けによってろ過して、植物残渣を除去するステップと;
c)任意選択で、ステップb)で得られた混合物を脱色するステップと;
d)溶媒を除去し、抽出物を濃縮するステップと
を含む。
a)2cm未満の細かさに粉砕したオレンジブロッサム粉末を、75℃で脱イオン水で2回、最低2時間抽出するステップであって、植物/溶媒の比が1対10(重量/重量)である、ステップと;
b)混合物を4μmまでろ過するステップと;
c)得られた混合物を活性炭と1時間接触させることによって脱色し、次いで、1μmまで精密ろ過して、炭素残渣を除去するステップと;
d)抽出物を、乾物含量が15%(重量/重量)近くに達するまで、水の一部を真空蒸発で除去することによって濃縮するステップと;
d’)混合物を0.2μmでろ過するステップと;
e)混合物を2重量%の発酵練り粉と共に37℃で24~48時間発酵させるステップであって、前記発酵練り粉が、ステップd)の前で得られた抽出物の一部を水中において30%乾物になるまで濃縮し、37℃で2時間の第1の発酵で10重量%の乾燥サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)酵母を添加することによって得られるステップと;
f)次いで、発酵抽出物を1μmでろ過し、その後、希釈して、1~10重量%の乾物を含有する抽出物を得、保存性を向上させるためにこれに0.7%のフェノキシエタノールまたは20%の1,3-プロパンジオール(10%乾物/70%水、重量/重量比)を添加するステップと
を含む。
本発明によるダイダイを抽出する方法:
1)乾燥させたオレンジブロッサムの花を2cm未満の細かさに破砕する;
2)次いで、オレンジブロッサム粉末を75℃で脱イオン水で2回、最低2時間抽出し、植物/溶媒の比は1対10(重量/重量)である;
3)混合物を100pmでふるいにかけて、植物残渣を除去し、次いで一晩静置し、再び4μmまでろ過する;
4)得られた混合物を活性炭と1時間接触させることによって脱色して、クロロフィルおよびキサントフィルなどの色素を除去する;
5)脱色した混合物を、精密ろ過(1μmまで)によって炭素残渣と分離する;
6)抽出物を、乾物含量が15%(重量/重量)近くに達するまで、水の一部を真空蒸発で除去することによって濃縮する;
7)混合物を0.2μmでろ過して、細かな粒子および残留細菌を除去する;
8)抽出物の発酵用発酵練り粉を調製するために、ステップ6)の前で得られた抽出物の一部を水中において30%乾物になるまで濃縮し、次いで、10重量%の乾燥酵母サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)を添加する。混合物を室温で2時間撹拌する。この混合物が発酵練り粉を構成する。
9)2重量%の発酵練り粉をステップ6)からの混合物に添加する;
10)撹拌しながら暗所において室温で24~48時間発酵させた後、発酵抽出物を一晩静置して、生じた気泡を除去する;
11)次いで、発酵抽出物を1μmでろ過し、その後、希釈して、10%の乾物を含有する抽出物を得、保存性を向上させるために0.7%のフェノキシエタノールまたは20%の1,3-プロパンジオール(10%乾物/70%水、重量/重量比)を添加し、全体を0.2μmでろ過する。
本発明によるダイダイ抽出物で処理された正常なヒトケラチノサイトにおける酸化ストレス応答経路の活性化
3人の異なるドナー(19~30歳)からの正常なヒト表皮ケラチノサイトを24ウェルプレートに接種し、SFM補足ケラチノサイト培地において37℃、5%CO2で48時間培養した。次いで、細胞を0.4%のダイダイ抽出物と一緒に24時間インキュベートし、またはインキュベートしなかった(対照)。条件はn=2で行った。インキュベーションの終わりに、培養上清を除去し、細胞単層をPBSですすいだ。全RNAを、供給元の推奨に従ってTripure(登録商標)単離試薬を使用して抽出した。RNAの量および質をキャピラリー電気泳動(2100 Bioanalyzer、Agilent)によって評価した。相補的DNAを合成し、トランスクリプトームをAffymetrix GeneChip Human Transcriptome Array2.0で生成した。発現が少なくとも2倍に調節されている遺伝子のバイオインフォマティクス分析を、Ingenuity Pathway Analysisソフトウェア(IPA(登録商標)、Qiagen)を使用して行った。このソフトウェアは、Ingenuity Knowledgeデータベース内の分子間相互作用、生物学的ネットワーク、および標準経路に関する情報を収集する。
ダイダイ抽出物によって調節された生物学的経路を図1に示す。ケラチノサイトにおいてダイダイ抽出物が活性化する主要な細胞機能は、31の遺伝子が関与する酸化ストレスへの応答のNRF2経路である。この生物学的経路で過剰発現している遺伝子のリストを表1に示す。
本発明によるダイダイ抽出物で処理された正常なヒトケラチノサイトにおける酸化ストレスの低減
27歳のドナーからの正常なヒト表皮ケラチノサイトを6ウェルプレートに播種し、37℃、5%CO2で72時間培養した。次いで、細胞を0.4%のダイダイ抽出物と一緒に24時間インキュベートし、またはインキュベートせずに(対照)、その後、細胞を50μMのメナジオン重亜硫酸ナトリウム(Sigma)で処理することによって酸化ストレスを誘発させた。酸化ストレスを、MitoSOX赤色ミトコンドリア超酸化物インジケータ(Red Mitochondrial Superoxide Indicator)(Life technologies)蛍光プローブを使用して観察する。ストレスを誘発させた1.5時間後に培養物の写真を撮影し、蛍光シグナルの強度を定量した。
ダイダイ抽出物で処理した後、対照条件と比較して、シグナル強度の63%低下が観察された(図2)。
化粧用組成物
以下の組成物を当業者にとっては従来の方法で調製することができる。以下に示す量は、重量パーセンテージで表している。大文字の成分は、INCIの指示に従って識別している。
なお、本発明には、以下の実施形態が包含されるものとする。
[1]発酵抽出物である、キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部の抽出物。
[2]キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部の抽出物をサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)種に属する酵母で発酵させるステップを含む方法によって入手可能な、キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部の発酵抽出物。
[3]前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)種の酵母が、前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)である、前記[2]に記載の抽出物。
[4]前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)の酵母が、IOC Fizz+菌株の酵母である、前記[3]に記載の抽出物。
[5]前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)の酵母が、IOC Divine菌株の酵母である、前記[3]に記載の抽出物。
[6]前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)の酵母が、IOC18-2007菌株の酵母である、前記[3]に記載の抽出物。
[7]前記キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)抽出物が、花抽出物である、前記[1]から[6]のいずれか一項に記載の抽出物。
[8]キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部の発酵抽出物を得る方法であって、
a)少なくとも1種のアルコール溶媒および/または水を用いてキトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部を抽出するステップと、
b)a)で得られた混合物をろ過して、植物残渣を除去するステップと、
c)任意選択で、ステップb)から得られた混合物を脱色するステップと、
d)抽出溶媒を除去し、得られた抽出物を濃縮するステップと、
e)キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)から得られた抽出物をサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)種に属する酵母によって発酵させるステップと
を含む、方法。
[9]前記発酵させるステップが、前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の菌株を用いた濃縮キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)抽出物の発酵から調製された発酵練り粉によって行われる、前記[8]に記載の方法。
[10]前記[1]から[7]のいずれか一項に記載のキトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の抽出物を含む、化粧用組成物。
[11]皮膚の老化を防止/低減するための、前記[1]から[7]のいずれか一項に記載の抽出物の美容的使用。
[12]抗酸化活性剤としての、および/または酸化ストレスを阻止/低減するための、および/または皮膚を解毒するための、前記[1]から[7]のいずれか一項に記載の抽出物の美容的使用。
Claims (10)
- サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)による発酵花抽出物である、キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部の抽出物。
- 前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)が、前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)である、請求項1に記載の抽出物。
- 前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)の酵母が、IOC Fizz+菌株の酵母である、請求項2に記載の抽出物。
- 前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)の酵母が、IOC Divine菌株の酵母である、請求項2に記載の抽出物。
- 前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の変種バヤヌス(bayanus)の酵母が、IOC18-2007菌株の酵母である、請求項2に記載の抽出物。
- キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の地上部の発酵抽出物を得る方法であって、
a)少なくとも1種のアルコール溶媒および/または水を用いてキトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の花を抽出するステップと、
b)a)で得られた混合物をろ過して、植物残渣を除去するステップと、
c)任意選択で、ステップb)から得られた混合物を脱色するステップと、
d)抽出溶媒を除去し、得られた抽出物を濃縮するステップと、
e)キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)から得られた抽出物をサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)種に属する酵母によって発酵させるステップと
を含む、方法。 - 前記発酵させるステップが、前記サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の菌株を用いた濃縮キトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)抽出物の発酵から調製された発酵練り粉によって行われる、請求項6に記載の方法。
- 請求項1から5のいずれか一項に記載のキトルス・アウランティウム(Citrus aurantium)の抽出物を含む、化粧用組成物。
- 皮膚の老化を防止/低減するための、請求項1から5のいずれか一項に記載の抽出物の美容的使用。
- 抗酸化活性剤としての、および/または酸化ストレスを阻止/低減するための、および/または皮膚を解毒するための、請求項1から5のいずれか一項に記載の抽出物の美容的使用。
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