KR102440849B1

KR102440849B1 - 비터 오렌지 지상부의 발효 추출물

Info

Publication number: KR102440849B1
Application number: KR1020200063906A
Authority: KR
Inventors: 다비드 레강뇌; 알리스 토리비오; 프랑수아 르죈; 엠마뉴엘 보우이스소우-카디오; 가엘 장드롱노
Original assignee: 샤넬 파르퓜 보트
Priority date: 2019-05-28
Filing date: 2020-05-27
Publication date: 2022-09-05
Also published as: EP3744339A1; EP3744339B1; JP7174736B2; KR20200136843A; US20200375883A1; CN112006951A; US11331264B2; JP2020193198A

Abstract

본 발명은 시트러스 아우란티움(Citrus aurantium) 지상부의 발효 추출물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 피부 노화를 방지하기 위할 뿐만 아니라, 항산화 활성제, 산화 스트레스를 방지/감소시키거나 및/또는 피부를 해독하기 위한, 시트러스 아우란티움 발효 추출물의 용도에 관한 것이다.

Description

비터 오렌지 지상부의 발효 추출물{FERMENTED EXTRACT OF AERIAL PARTS OF BITTER ORANGE}

본 발명은 비터 오렌지(Citrus aurantium) 지상부(aerial parts)의 발효 추출물, 이를 수득하기 위한 방법, 이를 함유하는 화장료 또는 피부학적 조성물 및 다양한 화장료 용도에 관한 것이다.

피부는 주로 3개의 층, 즉 가장 표면으로부터 시작하여 표피, 진피 및 피하로 이루어진다.

표피는 특히 케라티노사이트(대다수), 멜라노사이트 (피부 색소 침착에 관여함) 및 랑게르한스(Langerhans) 세포로 구성된다. 그 기능은 외부 환경으로부터 본체를 보호하고, 특히 미생물 또는 화학 물질의 침투를 느리게 하고, 피부에 함유된 물의 증발을 방지하기 위한 것이다.

이를 위해, 케라티노사이트는 분화의 마지막 단계에서 표피 형태의 기저층에 위치한 케라티노사이트, 죽은 세포인 각질 세포가 세라미드와 같이 단백질 및 지질로 구성된 각질 막(cornified envelope)의 형태로 완전히 케라틴화 형성하는 동안 성숙 지향적인 연속 과정을 거친다. 이 분화 과정 동안, 각질세포 표피 지질이 추가로 형성되고, 이어서 각질층 내의 이중층(시트)으로서 조직화된다. 앞서 언급한 각질 막과 함께, 이들은 표피의 장벽 기능에 관여한다.

피부 노화에 따라 피부가 얇아지고, 부피와 탄성을 상실하며, 그 장벽 기능이 손상된다.

자유 라디칼의 생성은 피부 노화 가속의 주요 요인 중 하나이다. 자유 라디칼의 생성은 주로 자외선 노출, 오염 및 기후 변화의 결과이다. 이는 산화 스트레스 (oxidative stress) 를 유도하는데, 이는 단백질, 지방산은 물론 세포의 DNA와 같은 신체의 여러 구성 요소의 열화의 원인이 된다.

이들 자유 라디칼은 산화방지제의 작용에 의해 중화될 수 있다. 피부 노화를 제거하는 공지된 방법 중 하나는 이러한 산화방지제를 함유하는 화장료 조성물을 피부에 도포하는 것이다.

가능한 한 합성 성분을 적게 포함하는 천연 제품에 대해 끊임 없이 커지는 소비자들의 경향과 함께 화학 산업에서 화합물에 대해 심하게 증대되는 규제의 관점에서, 식물 추출물로부터 활성 성분이 현재 선호되고 있다.

일반적으로, 피부 노화 및 산화 스트레스의 유해한 영향에 효과적으로 대처할 수 있는 식물 기원의 신규한 산화방지제 분자가 실질적으로 요구된다.

따라서, 제1 측면에 있어서, 본 발명은 시트러스 아우란티움(Citrus aurantium)의 지상부의 발효 추출물에 관한 것이다.

상기 추출액은 사카로마이세스 세레비지에 종 효모로 시트러스 아우란티움(Citrus aurantium)의 지상부의 추출물을 발효시키는 단계를 포함하는 추출방법에 의해 얻어질 수 있다.

따라서, 본 발명은 또한 사카로마이세스 세레비지에 종에 속하는 효모에 의해 시트러스 아우란티움(Citrus aurantium)의 지상부의 추출물을 발효시키는 단계를 포함하는 공정으로 얻을 수 있는 시트러스 아우란티움(Citrus aurantium)의 지상부의 발효 추출물에 관한 것이다.

다른 양태에 따르면, 본 발명은 또한 생리학적으로 허용가능한 매질 중에 전술한 하나 이상의 시트러스 아우란티움의 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물 및/또는 피부학적 조성물에 관한 것이다.

마지막으로, 본 발명은 또한 피부 노화의 방지/감소, 산화방지 활성제, 산화 스트레스의 방지/감소 및/또는 피부의 해독을 위한 전술한 추출물의 용도에 관한 것이다.

본 출원인은 비터 오렌지(Citrus aurantium)의 지상부의 추출물이 현저한 항산화 능력을 갖는다는 것을 입증하였다. 이 추출물은 발효 추출물, 즉 발효 단계를 포함하는 추출 공정에 의해 수득된다는 특수성을 갖는다. 본 출원에서 입증된 바와 같이, 이러한 추출물은 산화 스트레스 반응 경로, 특히 핵 인자 에리트로이드-2-관련 인자 2 (NRF2) 경로를 활성화시킴으로써 세포에서 자유 라디칼의 함량을 감소시킨다.

도 1 은 본 발명에 따른 비터 오렌지 추출물에 의해 케라티노사이트에서 변조된 상이한 생물학적 경로를 보여주는 다이아그램이다.
도 2는 본 발명에 따른 비터 오렌지 추출물로 처리 후 케라티노사이트에서 산화 스트레스의 감소를 도시한 도면이다.

제1 측면에 따르면, 본 발명은 발효 시트러스 아우란티움(Citrus aurantium)의 지상부 추출물에 관한 것이다. 이 추출물은 사카로마이세스 세레비지에 종에 속하는 효모를 이용하여 시트러스 아우란티움의 추출물을 발효시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 얻을 수 있다.

일반적으로 "비터 오렌지" 또는 비가라디아(Bigaradia)로 알려진 시트러스 아우란티움은 운향과(Rutaceae)의 목질 식물이다. 이는 가시가 있는 상록수로서 3 내지 10 미터의 크기이고 향기있는 꽃과 식용 과일을 갖는다. 본 발명에 따른 추출물은 시트러스 아우란티움의 지상부로 터 얻은 추출물, 즉 꽃, 입, 과일, 과일 또는 이들의 혼합물로부터 얻어진 추출물이다. 바람직한 구체예에서, 상기 추출물은 "오렌지 꽃(orange blossoms)"이라고도 하는, 시트러스 아우란티움의 꽃으로부터 얻은 추출물이다.

본 명세서에서, "발효" 추출물이라는 용어는 발효 단계를 거친 추출물을 지칭하기 위해 사용된다. 본 발명의 문맥에서, 이 발효 단계는 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 종에 속하는 효모로 수행된다.

사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 종의 효모는 널리 공지되어 있으며, 특히 음식 산업, 특히 식빵 제조 분야 또는 알코올성 음료의 발효를 위한 분야, 예를 들어 포도주 양조학 분야에서 널리 공지되어 있다. 당업자는 본 발명을 구현하기 위해 이러한 효모를 얻는 방법을 알고 있다.

특정 구체예에서, 상기 효모는 변종 사카로마이세스 세레비지에 변종 바야누스에 속하며, 이 효모는 IOC Fizz+, IOC Divine, IOC 18-2007 또는 이들의 혼합물로 시판되는 효모 균주 중에서 선택된다. 이들 모든 균주는 Institut Francais de la Vigne et du Vin[French Insitute in Vine and Wine]에 의해 열거되어 있으며, 통상의 기술자가 쉽게 접근할 수 있다.

IOC Fizz+ 효모 균주는 번호 LYCC 6022: LA CLAIRE CGC62 및 LYCC 6039: LA CLAIRE SP665 하에서 Institut Pasteur에 위탁된(deposited) 2개 효모의 혼합물이다.

IOC Divine 균주는 번호 LYCC 7000 하에서 Institut Pasteur 에서 위탁된 균주에 상응하고, 균주 18-2007은 번호 CNCM I-5320 하에서 Institut Pasteur 에 위탁된 균주에 상응한다.

본 발명에 따른 효모 균주는 건조 형태, 액체 형태 또는 효모 크림의 형태일 수 있다.

특정 구체예에서, 사카로마이세스 세레비지에 변종 바야누스 균주는 건조 형태이다.

일반적으로 발효 단계는 발효하고자 하는 용액에 대하여 사카로마이세스 세레비지에 변종 바야누스 균주를 1 내지 5 질량%, 특히 발효하고자 하는 용액에 대해 2 내지 3 질량%, 보다 구체적으로는 발효시킬 용액에 대해 2 중량%로 사용하여 수행한다.

특정 실시양태에서, 발효 단계는 누룩(leaven)에 의해 수행될 수 있다. 이러한 누룩은 사카로마이세스 세레비지에 효모바야누스 균주로 농축된 시트러스 아우란티움 추출물을 발효시켜 제조된다. 일반적으로 누룩에 이용되는 추출물은 5 내지 30% 정도의 건조 물질 함량으로 농축된다.

본 실시예에 따르면, 상기 발효 단계는 이러한 누룩을 시트러스 아우란티움 추출물에 첨가함으로써 수행된다. 누룩 사용으로 인해 발효 개시가 가능하게 되고 이에 따라 발효 단계의 동력학이 개선된다.

전형적으로, 누룩은 중량 10 중량%의 사카로마이세스 세레비지에 건조 효모로 물 내에서 5 내지 50 중량%, 특히 15 내지 30 중량%로 농축된 시트러스 아우란티움 추출물을 실온(또는 대안적으로 37 ℃)에서 약 2 시간 동안 발효시킴으로써 제조된다. 본 발명의 방법에 따른 발효 단계를 위해 시트러스 아우란티움 추출물에 1 내지 5 중량%, 바람직하게는 2 중량%의 누룩이 첨가된다.

본 발명에 따른 발효 추출물을 수득하기 위해 사용되는 시트러스 아우란티움 추출물은 통상의 기술자에게 공지된 임의의 추출 공정에 의해 수득될 수 있다.

전형적으로, 식물 추출물의 제조 방법은 하기 단계를 포함한다;

a) 하나 이상의 알코올성 용매 및/또는 물로 식물(이 경우 시트러스 아우란티움의 지상부)을 추출하는 단계;

b) 식물 잔류물을 제거하기 위하여, a)에서 수득된 혼합물을 예를 들어 채로 여과하는 단계;

c) 선택적으로, 단계 b)에서 수득된 혼합물을 탈색하는 단계; 및

d) 용매를 제거하고 추출물을 농축하는 단계.

본 발명의 시트러스 아우란티움의 발효 추출물을 얻기 위하여, 단계 e)는 단계 a) 내지 d) 이후에 전형적으로 추가되는데, 단계 e)는 사카로마이세스 세레비지에 종에 속하는 효모로 단계 d)로부터 얻은 추출물을 발효시키는 단계를 포함한다.

단계 a)는 5 cm 미만, 바람직하게는 2 cm 미만의 입자 크기로 수득되도록 식물, 전형적으로 그의 꽃 및/또는 잎을 분쇄하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

추출 단계는 알코올성 용매 및/또는 물로 구성된 하나 이상의 추출 용매로 수행된다. 추출 용매는 선택된 식물에 의존한다. 전형적인 식물/용매 비는 1 내지 10(중량/중량)이다.

특정 실시양태에서, 알코올성 용매는 96° 에탄올이다.

추출 용매는 0 내지 100 부피%의 물과 0 내지 100 부피%의 알코올성 용매를 함유할 수 있다. 특정 실시 양태에서, 추출 용매는 100% 물을 포함하고, 다른 실시 양태에서는 100% 에탄올을 포함한다. 추출 용매는 또한 50 부피%의 물 및 50 부피%의 에탄올을 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 물은 탈이온수일 수 있다. 본 발명에 있어서, 추출 용매는 전형적으로는 탈이온수일 수 있다.

추출 단계는 1 시간 이상, 바람직하게는 2 시간 이상, 특히 3 시간 이상 지속되고, 1 회 또는 2 회 반복될 수 있다.

전술한 바와 같이, 추출 공정은 단계 b)로부터의 혼합물을 탈색하는 단계를 포함할 수 있다. 이 단계의 목적은 엽록소 및 크산토필와 같이 추출물에 존재하는 안료를 제거하는 것이다. 당업자들은 이들 안료를 제거하는 여러 방법에 익숙하다. 탈색은 예를 들어 혼합물을 활성탄과 접촉시켜 수행할 수 있다. 탈색 후, 혼합물을 여과하여 탄소 잔류물을 제거한다.

전형적으로, 단계 d)는 추출물을 물 대비 건조 물질의 비율이 5 내지 30%, 바람직하게는 15 내지 30% 의 범위로 농축하는 단계를 포함한다.

이 농축 단계는 전형적으로 추출 용매(알코올 용매 및/또는 물)의 증발에 의해 수행된다. 이러한 추출은 예를 들어 진공하에서 수행될 수 있다.

상기 d) 단계로부터 얻은 시트러스 아우란티움 추출물, 즉, 농축된 시트러스 아우란티움 추출물을 이용하여 전술한 누룩을 제조할 수 있다.

전술한 공정은 단계 d)와 단계 e) 사이에 단계 d')를 추가로 포함할 수 있으며, 여기서 농축된 추출물을 함유하는 혼합물은 곱게 여과하여(전형적으로 2 ㎛ 또는 0.2 ㎛에서도), 미세 입자와 잔류 박테리아를 제거한다.

이러한 공정은 f) 상기 발효 추출물을 여과한 후 희석하여 건조 물질 1 내지 15 중량%, 특히 건조 물질 약 10 중량%를 함유하는 추출물을 수득하는 단계를 더 포함할 수 있다. 이 추출물은 투명하고 안정한 수용액의 형태일 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명에 따라 시트러스 아우란티움의 발효 추출물을 얻는 방법은 하기 단계를 포함한다:

a) 2 cm 미만인 오렌지 꽃 가루를 식물/용매의 중량비가 1 내지 10인 탈이온수로 75 ℃ 에서 2 시간 이상 추출하는 단계;

b) 상기 혼합물을 4 ㎛까지 여과하는 단계;

c) 상기 생성된 혼합물을 활성탄과 접촉시켜 1 시간 동안 탈색한 후, 1 ㎛까지 미세 여과하여 탄소 잔류물을 제거하는 단계;

d) 건조 물질 함량이 15%(중량/중량)에 도달할 때까지 진공건조로 물을 제거하여 추출물을 농축하는 단계;

d') 상기 혼합물을 0.2 ㎛ 에서 여과하는 단계;

e) 상기 d) 단계 이전에 얻은 추출물의 일부를 물 내의 건조 물질이 30%가 되도록 농축하고 건조 중량 10 중량%의 사카로마이세스 세레비지에 효모를 첨가하여 37 ℃ 에서 2시간 동안 1차 발효하여 얻은 누룩으로, 37 ℃에서 24 내지 48시간 동안 상기 추출물을 발효시키는 단계;

f) 이어서 발효 추출물을 1 ㎛에서 여과한 후 희석하여, 보다 나은 보전을 위해 0.7% 페녹시에탄올 또는 20% 1,3-프로판디올(10% 건조 물질/70% 물, 중량/중량 비율)이 첨가되는, 1 내지 10 중량%의 건조 물질을 함유하는 추출물을 수득하는 단계.

본 발명에 따른 발효 추출물은 우수한 항산화 특성을 갖는다. 하기 실시예에서 입증된 바와 같이(특히 실시예 2 및 3 참조), 케라티노사이트와 같은 피부 세포에서의 산화 스트레스를 상당히 감소시킨다. 특히, 이는 산화 스트레스에 대한 반응 경로인 것으로 알려진 핵 인자 에리트로이드-2-관련 인자 2 (NRF2) 경로를 활성화시킨다. NRF2는 항산화 반응 요소(ARE)로 알려진 조절 서열에 대한 결합을 통해 항산화 효소에 대한 유전자 코딩의 발현을 가능하게 하는 전사 인자이다. 따라서, 이러한 경로의 활성화는 산화방지제의 작용을 통해 조직의 자유 라디칼 함량을 감소시키는 효과를 갖는다.

전술한 바와 같이, 자유 라디칼의 생성 및 이러한 생성이 발생하는 산화 스트레스는 피부 노화 가속의 주요 인자 중 하나이다.

프리 라디칼 감소에 따른 산화 스트레스의 감소는 피부 및/또는 진피 내 조직 손실로 인한 주름 및 미세 라인, 견고성 손실 및 탄성의 손실과 같은 피부 노화 징후; 표피 및/또는 진피 내 세포 재생의 감소 및 감소된 미세순환으로 인한 광채 손실, 멜라닌 합성의 오작동과 관련된 색소 침착 스폿의 발현, 또는 각질층의 장벽 기능 감소 및 표피 재생의 슬로다운으로 인한 피부 건조를 방지한다.

이와 같이 다른 측면에 따르면, 본 발명은 피부 노화의 예방/감소에 대한 시트러스 아우란티움의 지상부 발효 추출물의 용도에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 항산화 활성제 및/또는 산화 스트레스의 방지/감소 및/또는 피부의 해독에 대한 시트러스 아우란티움의 지상부 발효 추출물의 용도에 관한 것이다.

"산화방지제" 활성제는 항 자유 라디칼 특성, 즉 자유 라디칼을 중화시킬 수 있는 능력, 특히 이들 자유 라디칼에 연결된 산화 반응을 갖는 화합물이다. 이러한 중화는 조직에서 자유 라디칼의 함량을 감소시킨다.

"산화 스트레스"는 조직에서 자유 라디칼과 산화방지제 사이의 과도한 양적 불균형이다. 따라서, 산화방지제 활성제의 공급에 의한 자유 라디칼의 중화는 이러한 산화 스트레스를 감소시키는데 도움을 준다. 하기 실시예 3은 산화 스트레스를 측정하는 방법, 특히 산화 스트레스에 대한 산화방지제 활성제의 효과를 보여준다.

피부의 자유 라디칼 및 산화 스트레스의 감소는 피부를 해독, 즉 "해독" 효과를 얻는데 도움을 준다. "해독" 이라는 용어는 피부 상의 자유 라디칼의 유해한 효과를 감소시키는 효과를 의미한다.

본 발명에 따른 추출물은 유리하게는 화장료 또는 피부학적 조성물에 혼입될 수 있다. 따라서, 다른 측면에 따르면, 본 발명은 화장료적으로로 또는 약학적으로 허용가능한 비히클 중에, 본 발명에 따른 시트러스 아우란티움 부분의 알코올성 추출물을 포함하는 화장료 조성물 또는 피부학적 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 추출물은 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001 내지 10 중량%, 특히 조성물의 총 중량을 기준으로 0.01 내지 10 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%의 비율로 화장료 조성물이나 피부학적 조성물에 함유된다. 상기 화장료 또는 피부학적 조성물은 특히 국소 적용에 적합할 수 있다.

유리하게는, 상기 화장료 또는 피부학적 조성물은 분말, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 현탁액, 용액, 로션, 크림, 수성 또는 하이드로알코올 겔, 폼, 혈청, 에어로졸용 용액 또는 분산액, 또는 지질 소포 분산액의 형태일 수 있다.

에멀젼의 경우, 이는 유중수 또는 수중유 에멀젼일 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 또는 피부학적 조성물은 또한 다양한 성분들과 투여 형태에 따라 선택된 용매를 포함할 수 있다.

예를 들어 물(바람직하게는 탈염수), 에탄올과 같은 알코올, 또는 에톡시디글리콜 또는 디에틸렌 글리콜 모노메틸 에테르와 같은 디에틸렌 글리콜 에테르를 들 수 있다.

상기 화장료 조성물은 또한 본 발명에 따른 추출물 이외에, 예를 들어 연화제 또는 습윤제, 겔화 및/또는 증점제, 계면활성제, 오일, 활성제, 염료, 방부제, 산화방지제, 활성제, 유기 또는 무기 분말, 선스크린 및 향료로부터 선택된 하나 이상의 화합물과 같이 이 분야에서 통상적인 1 종 이상의 첨가제를 포함할 수 있다.

특히, 상기 조성물은 하기를 함유할 수 있다:

- 예를 들어 글리세린, 글리콜, KF6011(Shin Etsu)라는 이름으로 판매되는 것과 같은 수용성 실리콘 및 Resplanta Jojoba(Res Pharma)라는 이름으로 판매되는 것과 같은 수용성 호호바로로부터 선택될 수 있는 하나 이상의 연화제 또는 습윤제.

상기 연화제 또는 습윤제는 조성물의 총 중량에 대해 0 내지 30 중량%, 바람직하게는 2 내지 10 중량% 범위의 함량으로 조성물에 존재할 수 있다.

- 예를 들어 셀룰로오스 유도체, 식물 기원의 검(구아, 로커스트 빈, 알지네이트, 카라기난, 펙틴), 미생물 기원(크산탄), 점토(라포나이트), INCI 명칭으로 "암모늄 아크릴로일디메틸타우레이트/vp 공중합체" 및 암모늄 아크릴로일디메틸-타우레이트/베헤네스-25 메타크릴레이트 공중합체" (클라리언트사에 의해 Aristoflex AV 및 HMB라는 이름으로 시판되는 것과 같은)로 정의된 물질로부터 선택된, 수상(aqueous phase)용의 하나 이상의 겔화제 및/또는 증점제.

상기 겔화 및/또는 증점제는 조성물의 총 중량을 기준으로 0 내지 10 중량% 범위의 함량으로 조성물에 존재할 수 있다.

- 바람직하게는 비이온성인 하나 이상의 계면활성제로서, 조성물의 총 중량에 대해 0 내지 8 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 3 중량% 범위의 함량으로 존재할 수 있다.

- 오일로는 일반적으로 알려져 있는 상온에서 액상인 하나 이상의 지방, 휘발성 또는 비휘발성, 탄화수소 또는 실리콘, 선형, 환형 또는 분지형, 예를 들어 이소도데칸, 사이클로펜타디메틸실록산, 디메티콘, 이소노닐 이소노나노에이트 또는 펜타에리스리틸 테트라이소스테아레이트으로서, 바람직하게는 조성물의 총 중량에 대해 0 내지 약 10 중량%, 바람직하게는 0.5 내지 5 중량%의 양으로 존재할 수 있다.

- 생물학적 활성을 갖는 천연 또는 합성 기원의 하나 이상의 활성제, 예를 들어 비타민, 미량 원소, 알란토인, 식물 단백질, 식물 추출물, 보습제, 항노화 방지제, 항산화제, 광택 증진제 및 이들의 혼합물로부터 선택된다. 특히, 상기 활성제는 바닐라 플라니폴리아(Vanilla planifolia) 과일 물, 니아신아미드, 히알루론산 및 이의 유도체, 효모 추출물 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.

- 하나 이상의 수용성 염료, 예를 들어 폰소 디소듐 염, 알리자린 그린 디소듐 염, 퀴놀린 옐로우, 아마란스 트리소듐 염, 타트라진 디소듐 염, 로다민 모노소듐 염, 푹신 또는 크산토필 디소듐 염을 들 수 있고, 바람직하게는 조성물의 총 중량에 대해 0 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다.

또한, 화장료에 통상적으로 사용되는 다른 첨가제들, 예를 들어 당 기술분야에서 잘 알려진 방부제, 산화방지제 또는 향료가 본 발명에 따른 조성물에 존재할 수 있다.

당업자는 이들 모든 가능한 첨가제 중에서 그 특성을 갖도록 조성물에 첨가되는 화합물의 성질 및 양을 모두 선택할 수 있다.

본 발명은 하기 비제한적인 실시예에 의해 설명될 것이다.

실시예

실시예 1 - 본 발명에 따른 비터 오렌지의 추출 공정

1) 건조된 오렌지 꽃을 분쇄하여 2 cm 미만의 분말로 분쇄하고;

2) 상기 오렌지 꽃 분말을 식물/용매의 비율이 1 내지 10(중량/중량)인 탈이온수로 2 시간 이상 75 ℃에서 2회 추출하고;

3) 상기 혼합물을 100 ㎛에서 체질하여 식물 잔류물을 제거한 다음, 밤새 정치시키고 다시 4 ㎛ 로 여과하고;

4) 생성된 혼합물을 활성탄과 1 시간 동안 접착시켜 탈색하여 클로로필 및 크산토필과 같은 안료를 제거하고;

5) 탈색된 혼합물을 미세여과(1 ㎛)하여 탄소 잔류물로부터 분리시키고;

6) 건조 물질의 함량이 15%(중량/중량)에 도달할 때까지 진공 증발시켜 물을 제거하여 추출물을 농축시키고;

7) 상기 혼합물을 0.2 ㎛ 에서 여과하여 미세 입자 및 잔류 박테리아를 제거하고;

8) 6) 단계 이전에 얻은 추출물의 일부를 물 내의 건조 물질이 30%가 되도록 농축하고 건조 중량 10 중량%의 사카로마이세스 세레비지에 변종 바야누스 효모를 첨가하여 추출물을 발혀시키기 위한 누룩을 준비하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 37 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이 혼합물이 누룩을 구성한다.

9) 2% 의 누룩을 단계 6)으로부터 얻은 혼합물에 첨가하였다.

10) 암실에서 교반하면서 실온에서 24 내지 48 시간 발효시킨 후, 발효 추출물을 밤새 정치시켜 형성된 기체 버블을 제거하였다.

11) 이어서, 발효 추출물을 1 ㎛ 에서 여과시킨 다음, 희석하여 10% 건조 물질을 함유하는 추출물을 얻었다. 더 양호한 보존을 위해 0.7% 페녹시에탄올 또는 20% 1,3-프로판디올을 첨가하고(10% 건조 물질/70% 물, 중량/중량 비율), 전체를 0.2 ㎛ 에서 여과하였다.

The contents of the orange blossom extract are given in Table 1 below.

오랜지 꽃 추출물의 함량을 하기 표 1 에 나타내었다.

분자 집단 (Molecular family)	분자	통상적인 추출물	발효 추출물
사카라이드	프럭토오스, 글루코오스, 수크로오스	2.20%	0.00%
유기 및 기타 산	시테프린, 스타치드린, 비닉 애시드, 말릭 애시드	1.24%	1.32%
플라보노이드	네오에리오시트린, 나리루틴, 나린진, 헤스페레틴 글루코오스,세스페리딘, 네오헤스페리딘	2.43%	4.40%
기타	기타	4.13%	4.64%

표 1은 본 발명의 방법에 따라 얻은 비터 오렌지 추출물의 조성 성분이다.

상술한 바와 같이, 본 발명에 따른 방법은 오렌지 꽃의 추출물로부터 단당을 완전히 제거한다. 본 발명에 따른 방법은 추출물의 폴리페놀 함량을 크게 증가시킨다.

실시예 2 - 본 발명에 따른 비터 오렌지 추출물로 처리된 정상적인 인간의 케라티노사이트에서의 산화 스트레스 반응 경로의 활성화

프로토콜:

3명의 다른 공여자(19 내지 30 세)로부터 정상적인 인간 표피 케라티노사이트를 24-웰 플레이트에 접종하고, 37 ℃, 5% CO₂에서 48 시간 동안 SFM-상보 케라노사이트 배지에서 배양하였다. 그 후, 세포를 24 시간 동안 0.4% 비터 오렌지 추출물로 배양하였고, 배양하지 않은 군을 대조군으로 하였다. n=2의 조건으로 수행하였고, 배양 말기에 배양 상층액을 제거하고, 세포 단층을 PBS 로 헹구었다. 총 RNA는 공급자의 권고에 따라 Tripure® 분리 시약을 사용하여 추출하였다. RNA의 양과 품질은 모세관 전기영동(2100 Bioanalyzer, Agilent)으로 평가하였다. 상보성 DNA를 합성하고, 전사체(transcriptome)를 Affymetrix GeneChip Human Transcriptome Array 2.0 상에서 제조하였다. 발현이 2 배 이상 조절되는 유전자의 생물정보학 분석을 진위 경로 분석 소프트웨어 (IPA^®, Qiagen) 를 사용하여 수행하였다. 이 소프트웨어는 진위 지식 데이터베이스 내의 분자-대-분자 상호작용, 생물학적 네트워크 및 표준 경로에 대한 정보를 수집한다.

결과:

비터 오렌지 추출물에 의해 변조된 생물학적 경로는 도 1 에 도시되어 있다. 케라티노사이트 내의 비터 오렌지 추출물에 의해 활성화되는 주요 세포 기능은 관련된 31개의 유전자로 산화 스트레스에 대한 반응의 NRF2 경로이다. 이 생물학적 경로에서 과발현된 유전자의 목록은 표 2에 제시되어 있다.

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기호	엔트레즈 진 네임 (Entrez Gene Name)	Expr Fold Change
GCLC	글루타메이트-시스테인 리가아제 촉매소단위체(catalytic subunit)	8.330
GPX2	글루타티온 페록시다아제 2	5.240
MGST1	마이크로솜 글루타티온 S-트랜스퍼라아제 1	5.210
NQO1	NAD(P)H 퀴논 디하이드로제나아제 1	5.120
ABCC2	ATP 바인딩 카세트 서브패밀리 C 멤버 2	4.510
PIK3C2B	포스파티딜리노시톨-4-포스페이트 3-키나아제 촉매소단위체 타입 2 베타	4.140
GSR	글루타티온-디설파이드 리덕타아제	3.690
ABCC1	ATP 바인딩 카세트 서브패밀리 C 멤버 1	3.210
CBR1	카르보닐 리덕타아제 1	3.030
TXNRD1	티오레독신 리덕타아제 1	2.840
GSTM3	글루타티온 S-트랜스퍼라아제 mu 3	2.830
GSTA4	글루타티온 S-트랜스퍼라아제 알파 4	2.800
FTH1	패리틴 헤비 체인 1	2.780
SOD2	수퍼옥사이드 디스뮤타아제 2	2.750
DNAJB1	DnaJ 히트 쇼크 프로테인 패밀리 (Hsp40) 멤버 B1	2.590
EPHX1	에폭사이드 하이드로라아제 1	2.490
GSTM4	글루타티온 S-트랜스퍼라아제 mu 4	2.400
DNAJC3	DnaJ 히트 쇼크 프로테인 패밀리 (Hsp40) 멤버 C3	2.380
HSPB8	히트 쇼크 프로테인 패밀리 B (스몰) 멤버 8	2.370
GCLM	글루타메이트-시스테인 리가아제 마디파이어 소단위체	2.270
PRDX1	퍼옥시레독신 1	2.230
FKBP5	FK506 바인딩 프로테인 5	2.200
FTL	페리틴 라이트 체인	2.190
TXN	티오레독신	2.070

실시예 3 - 본 발명에 따른 비터 오렌지 추출물로 처리된 정상적인 인간의 케라티노사이트에서의 산화 스트레스의 감소

프로토콜

27세 공여자로부터 정상적인 인간 표피 케라티노사이트를 6-웰 플레이트에 접종하고 37 ℃, 5% CO₂에서 72 시간 동안 배양하였다. 이어서, 세포를 50 μM 메나디온 소듐 비설파이트(menadione sodium bisulfite) (Sigma)로 처리한 세포를 처리하여, 산화 스트레스가 유도되기 전에 24 시간 동안 0.4% 비터 오렌지 추출물로 배양하였다. 배양하지 않은 군은 대조군으로 하였다. MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator(Life technologies) 형광 프로브를 사용하여 산화 스트레스를 관찰하였다. 스트레스 후 1.5 시간 동안 배양물의 사진을 찍고, 형광 신호의 강도를 정량하였다.

결과

대조군 조건(도 2)과 비교하여 비터 오렌지 추출물로 처리한 후에는 신호 강도가 63% 감소한 것으로 관찰되었다.

실시예 4 - 화장료 조성물

하기 조성물은 통상의 방법으로 제조될 수 있다. 하기 나타낸 양은 중량%이다. 대문자로 표시된 성분은 INCI 지정에 따라 정의하였다.

4A-오일/물 에멀젼

INCI name	(% W/W)
호호바 에스테르	1-10
림난테스 알바 (메도우폼) 씨 오일	1-10
Undecane & tridecane & tocopherol & helianthus annuus (sunflower) seed oil 운데칸 및 트리데칸 및 토코페롤 및 헬리안터스 안누스(해바라기) 씨오일	1-10
부티로스퍼멈 파키 버터(Butyrospermum parkii butter (LIPEX SHEASOFT)	1-10
카멜리아 키씨 씨 오일	1-10
부티로스퍼멈 파키 버터 추출물 (LIPEX SHEA TRIS)	1-10
세틸 에틸헥사노에이트	1-5
디이소스테아릴 다이머 디리놀리에이트 (SCHERCEMOL DISD)	1-10
소듐 아크릴레이트 코폴리머 및 레시틴	0.1-5
아모디메치콘	0.1-2
글리세릴 스테아레이트 및 PEG-100 스테아레이트	0.1-5
카보머	0.01-5
알칼리진 폴리사카라이드	1-10
실리카	0.1-10
소듐 히알루로네이트	0.01-3
글리세린	1-30
폴리콰터늄-51	1-10
아데노신	0.1-0.5
니아신아미드	0.1-5
팔미토일 트리펩타이드-1 및 팔미토일 테트라펩타이드-7	1-5
호밀(Rye) 씨 추출물	1-5
본 발명에 따른 추출물	0.001-10
아스코르빌 글루코사이드	0.001-5
글리콜 (카프릴릴 글리콜 및/또는 펜틸렌 글리콜 및/또는 부틸렌 글리콜 및/또는 프로판디올)	0,1-10
물	Qs 100

4b - 오일/물 크림 에멀젼

INCI name	(% w/w)
베헤닐 알코올	1-5
세틸 알코올	0.1-5
페닐 트리메치콘	1-5
디메치콘 및 디메치콘/비닐 디메치콘 크로스폴리머	1-30
엑토인	0.1-5
PPG-2 미리스틸 에테르 프로피오네이트	1-10
티타늄 디옥사이드	1-20
징크 디옥사이드	1-20
디에틸아미노 히드록시벤조일 헥실 벤조에이트 (Uvinul A+)	1-5
비스-에틸헥실옥시페놀 메톡시페닐 트리아진 (Tinosorb S)	1-5
(티노소르브 M)	1-5
에틸 헥실 메톡시신나메이트	1-7.5
폴리실리콘-11	1-5
실리카	1-5
라우로일 리신	1-5
C20-22 알킬 포스페이트 및 C20-22 알코올	0.5-5
글리세릴 스테아레이트 & PEG-100 스테아레이트	0.5-5
소듐 아크릴레이트 / 소듐 아크릴로일디메틸타우레이트 코폴리머	0.1-5
하이드로제네이티드 스타치 히드롤리세리트 및 말토올리고실 글루코사이드	0.1-10
잔탄 검	0,01-2
한천(Agar)	0.1-5
아데노신	0.1-0.5
니아신아미드	0.1-5
호밀(Rye) 씨 추출물	0.1-5
팔미토일 테트라펩타이드-7	1-5
바닐라 플라니폴리아 과즙(fruit water)	0.1-2
바닐라 플라니폴리아 꽃 추출물	0.1-2
효모 추출물	1-3
사카라이드 아이소머레이트	1-5
본 발명에 따른 추출물	0.001-10
감초 추출물	0.001-5
물	Qs 100

이들 조성물은 매일, 아침 및/또는 저녁에 피부에 적용될 수 있다.

Claims

시트러스 아우란티움(Citrus aurantium)의 꽃의 발효 추출물로,
상기 추출물은 사카로마이세스 세레비지에 변종 바야누스(Saccharomyces cerevisiae variety Bayanus)로 발효된, 시트러스 아우란티움의 꽃의 발효 추출물.
삭제
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삭제
삭제
삭제
다음 단계를 포함하는, 시트러스 아우란티움의 지상부의 발효 추출물을 얻는 방법:
a) 하나 이상의 알코올성 용매 및/또는 물로 시트러스 아우란티움의 지상부를 추출하는 단계;
b) 식물 잔류물을 제거하기 위하여, 상기 a) 단계에서 수득된 혼합물을 여과하는 단계;
c) 선택적으로, 상기 b) 단계에서 수득된 혼합물을 탈색하는 단계;
d) 상기 추출 용매를 제거하고 추출 결과물을 농축하는 단계; 및
e) 사카로마이세스 세레비지 변종 바야누스(Saccharomyces cerevisiae variety Bayanus)에 속하는 효모로 상기 시트러스 아우란티움으로부터 얻어진 추출물을 발효시키는 단계.
제8항에 있어서, 상기 발효 단계는 사카로마이세스 세레비지에 변종 바야누스의 균주로 농축된 시트러스 아우란티움 추출물을 발효함으로부터 제조된 누룩으로 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 따른 시트러스 아우란티움의 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
제1항에 따른 발효 추출물을 포함하는 피부 노화를 방지 또는 감소시키기 위한 화장료 조성물.
제1항에 따른 발효 추출물을 포함하는 산화방지 활성제로 사용을 위한, 또는 산화 스트레스의 방지 또는 감소 또는 피부의 해독을 위한 화장료 조성물.