KR20190048931A - 단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 단삼을 흑효모 균사체를 이용하여 발효시킨 단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 유효성분 중 magnesium lithospermate B를 높은 수율로 수득한 단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 항산화 효과, 보습, 피부 장벽 개선 효과가 우수하고, 온도변화에 대해 변색과 분리 및 침전이 발생하지 않는 우수한 안정성을 갖는다.

Description

단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING EXTRACT OF SALIVA MILTIORRHIZA}

본 발명은 단삼 추출물을 흑효모 균사체로 발효한 단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 항산화 및 보습, 피부 장벽 개선 효과가 탁월한 화장료 조성물에 대한 것이다.

화장료의 목표는 아름답고 건강한 피부를 유지하는 것으로, 나이가 들면서 자연적으로 생기는 피부의 노화를 지연시키는데 있다. 일반적으로 노화는 자유라디칼(free radical)에 의한 생체물질의 산화적 손상에 기인한다. 즉, 과산화수소, 히드록시 라디칼, 슈퍼옥사이드 라디칼 등의 활성산소와 같은 반응성이 높은 자유 라디칼은 세포막을 구성하는 지질을 과산화시켜 세포막을 파괴하고 단백질을 산화시키며 핵산을 공격하여 산화적 손상을 일으켜 생체물질을 파괴하고 결국 세포를 죽게 한다. 노화로 인해 가장 크게 나타나는 피부 특성은 주름과 탄력저하, 피부의 칙칙함을 들 수 있다. 또한, 주름과 탄력 저하 외에도 40대 이후가 되면 얼굴색이 맑지 않고 칙칙하고 어두운 경우가 많다.

특히나 젊은 여성들의 경우에는 출산을 경험하면서 어혈이 생기고, 혈액순환장애가 생기면서 이로 인해 신진대사 능력이 떨어지고, 피부가 쉽게 거칠어지고 칙칙해지는 현상이 발생한다. 신진대사 능력이 떨어지고 피부가 거칠어지면 수분량 또한 쉽게 줄어들게 되는데 일반적으로 피부의 수분량은 진피층에서는 70% 정도이나 표피층으로 갈수록 감소하여 각질세포층에서는 약 10 내지 30%가 된다. 각질세포층에서는 천연보습 인자(Natural Moisturizing Factor: NMF)라고 하는 친수성의 수분 보유 능력을 가진 물질이 존재하여 피부의 보습에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 정상적인 각질세포층은 수분이 10 내지 30% 정도가 유지되면 피부는 매끄럽고 부드러우며, 신체 보호기능을 정상적으로 발휘하게 된다.

따라서 피부 각질세포층의 수분함량을 적절히 유지하는 것도 피부 노화를 예방하는데 매우 중요하나, 다른 천연 보습인자인 피롤리돈 카르복실산 나트륨(PCA-Na), 젖산나트륨(Sodium lactate), 요소 등은 전해성이 강해 화장료의 유화 안정성을 해치는 문제점이 있다. 아미노산, 콜라겐, 엘라스틴 등도 보습 능력이 있다고 하나 보습능력에 한계가 있었다. 각질층의 수분을 보유할 수 있는 능력은 피지성분과 아미노산, 젖산, 요소 및 무기염 등으로 이루어진 천연보습인자(NMF)에 의해 조절되어질 수 있는데, 피부 외용제에서 천연 보습인자와 같이 안전하면서도 사용성이 우수하고, 보습효과가 높은 물질의 개발이 화장품에서 중요한 연구과제 중 하나이다. 또한, 항산화작용을 갖는 것으로 알려진 물질은 아스코르빈산(ascorbic acid), 디엘-알파토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타-카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 등이 있으나 이러한 물질들은 합성품으로 사용되기 때문에, 장기간 사용하거나 다량으로 사용 시 피부 안전성의 문제를 일으킬 수 있으므로 보다 안전하고 유용하게 피부에 적용할 수 있는 새로운 항산화 화장료의 개발이 절실하게 요구되고 있는 실정이다.

따라서 피부 노화와 보습 개선에 대한 연구는 지속적으로 진행될 것으로 예상되며 이러한 피부의 문제점을 해결하고 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

이를 위해 여러 천연식물 성분들의 피부생리활성을 검색하여 안전성이 우수하고 피부 미용 효과가 우수한 물질들을 개발하기 위한 연구가 현재 활발히 진행되고 있다.

한국공개특허 제2010-0113716호에서는 단삼, 당귀, 수세미 등을 포함하는 화장료 조성물을 개시하고 있다.

본 발명의 목적은 기존의 미용 화장료가 가진 문제점에 대한 위험성을 줄이고, 천연물질에 미량으로 존재하는 유용한 유효 성분의 함량을 증가시켜 피부에 보습과, 피부 탄력 등의 다양한 생리활성 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 천연 추출물인 단삼 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 magnesium lithospermate B 함량이 증대된 단삼 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 천연 추출물을 이용하여 인체에 무해하여 안전성이 매우 뛰어나며, magnesium lithospermate B 함량이 증대된 단삼 흑효모 발효액을 유효성분으로 함유함으로써 항산화, 보습, 피부 장벽 개선 효과를 가지게 되었다.

본 발명은 단삼 추출물을 흑효모 균사체로 발효하여 제조된 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로 더욱 상세하게는 단삼을 흑효모 균사체로 발효하여 magnesium lithospermate B의 성분 함량이 증가된 단삼 흑효모 발효 추출액을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

단삼은 꿀풀과에 속하는 다년생 식물로써 중국과 한국에서 한약으로 오랫동안 사용되어 그 안정성이 증명되었고, 다양한 질환을 치료하기 위해 전 세계에서 많이 사용되고 있다. 옛날에는 항생제 대용으로 사용하였다. 단삼은 red 세이지, 차이니즈 세이지, 단센 등으로도 알려져 있으며, 특히 단삼의 뿌리는 중국 전통 약학에서 높은 평가를 받고 있다.

본 발명의 단삼 추출물은 단삼나무의 다양한 기관 또는 부분(예 잎, 가지, 꽃, 뿌리, 줄기, 열매 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하고, 바람직하게는 전초 또는 열매로부터 얻은 추출물이고, 가장 바람직하게는 열매로부터 얻은 추출물을 의미한다.

한편, 본 발명의 단삼 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있다. 즉, 단삼의 추출물은 물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜, 헥산 및 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출하거나 단삼을 상기 용매를 이용하여 추출한 후, 이를 혼합하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 상기 용매는 알코올이 좋으며, 더욱 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하는 것이 좋다. 그리고 상기 추출 용매의 적합한 양은 단삼 건조 중량의 1 ~ 15배이며, 더욱 바람직하게는 5 ~ 10배이며, 가장 바람직하게는 7배이다.

한편, 본 발명의 단삼 추출물은 상숭한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라 통상적인 정제 과정을 거친 추출물일 수 있다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 단삼 추출물에 포함된다고 해석된다. 또한, 본 발명의 단삼 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수도 있다.

흑효모(Aureobasidium pullulans)는 맥주, 포도주 등을 만드는데 사용되는 미생물로서, 곰팡이나 버섯 무리이지만 균사가 없고, 광합성능이나 운동성도 가지지 않는 단세포 생물의 총칭이다. 이는 5천 년 전부터 인간이 식품에 이용해 온 미생물이며, 효모 자체는 값싼 지방이나 단백질원으로 사용된다. 비타민 B군을 풍부하게 함유하고 있고, 비타민 D를 함유하는 것도 있다. 또한, 흑효모균은 베타-글루칸(β-Glucan)을 생산하는 미생물로 흑효모발효물 자체만으로도 보습효과, 항산화, 진정효과를 나타낸다고 한다. 흑효모 베타-글루칸(β-glucan)은 항암, 인슐린 분비 억제 등의 생리 활성이 있는 것으로 알려져 있는 성분이 다량 함유되어 있다.

그리고 본 발명의 단삼 흑효모 발효액은 제조된 단삼 추출물을 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 상기 흑효모(Aureobasidium pullulans)로 발효시켜 얻은 것을 의미한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 화장료 조성물에 첨가되는 단삼 흑효모 발효액의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30.0 중량%이며, 바람직하게는 0.001 내지 25.0 중량%이며, 가장 바람직하게는 0.1 내지 10.0 중량%이다. 상기 단삼 흑효모 발효액의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 항산화, 보습, 피부 장벽 개선효과가 나타나지 않으며, 30 중량% 초과인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으며, 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. 그리고 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 제조예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 제조예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 제조예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 제조예 1> 단삼 추출물 제조

단삼을 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 100메시의 체를 이용하여 미세하게 만들었다. 단삼 분쇄물을 100g/L가 되도록 70% 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #3 여과지로 여과 후, 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 단삼 추출물(제조예 1)을 제조하였다.

<제조예 2> 단삼 발효 추출물 제조

단삼을 발효하여 추출물로 제조한 것으로서, 단삼을 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 이것을 20g/L되게 단삼을 사카로미세스 속 (사카로미세스 세레비시아 KCTC 7904) 균주 배양액에 첨가하였다. 여기에 탄소원으로 포도당 2%(W/V)를 첨가하였으며, 펩톤 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여, 37℃에서, pH 5-7로 유지하면서 바람직하게는 pH 6으로 유지하면서, 1~7일간 바람직하게는 5일간 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거하였다.

배양균이 1차 제거된 단삼 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료 된 추출액을 농축조로 이송하여 여과된 추출물을 감압농축하고 이를 동결 건조하였다. 이 파우더를 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 단삼 발효 추출물(제조예 2)을 제조하였다.

<제조예 3> 단삼 흑효모 발효액의 제조

제조예 1에서 제조한 단삼 감압농축물 5g에 탄소원으로 포도당 2%(W/V)를 첨가하였으며, 펩톤 0.5%(W/V)를 추가로 첨가하여 멸균하였다. 여기에 20g/L되게 흑효모(Aureobasidium pullulans) 균주 배양액을 접종하여 배양하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 7일간, 37℃, pH 6으로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 후 더 이상 배양이 되지 않도록 멸균(121℃, 15분, 1.5기압)하였다.

발효 후 배양균을 1차 제거한 단삼 발효물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #3 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 상기 추출단계에서 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압농축 또는 동결 건조하였다. 동결건조물을 50% 글리세린을 이용하여 2%(W/V)가 되게 녹여 단삼 흑효모 발효액(제조예 3)을 제조하였다.

<제형예 1>

단삼 흑효모 발효액(제조예3)을 함유한 화장료 중 크림의 제형예는 하기 표 1에 나타내었다.

성분	함량 (단위:중량%)
단삼 흑효모 발효액(제조예 3)	5.0
글리세린	5.0
소듐히아루로네이트	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
디메치콘	2.0
트리에탄올아민	1.0
친유형모노스테아린글리세린	2.0
세테아릴알코올	2.2
스테아릭애씨드	1.5
소르비탄스테아레이트	0.6
소듐마그네슘실리케이트	0.1
베타인	3.0
방부제	미량
향	미량
색소	미량
정제수	잔량
계	100

<비교 제형예 1>

단삼 흑효모 발효액을 함유하지 않은 크림의 비교 제형예 1은 하기 표 2에 나타내었다.

성분	함량 (단위:중량%)
글리세린	5.0
소듐히아루로네이트	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
디메치콘	2.0
트리에탄올아민	1.0
친유형모노스테아린글리세린	2.0
세테아릴알코올	2.2
스테아릭애씨드	1.5
소르비탄스테아레이트	0.6
소듐마그네슘실리케이트	0.1
베타인	3.0
방부제	미량
향	미량
색소	미량
정제수	잔량
계	100

<비교 제형예 2>

단삼 흑효모 발효액(제조예2)을 함유한 화장료 중 크림의 비교 제형예 2는 하기 표 3에 나타내었다.

성분	함량 (단위:중량%)
단삼 흑효모 발효액(제조예 2)	5.0
소듐히아루로네이트	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
디메치콘	2.0
트리에탄올아민	1.0
친유형모노스테아린글리세린	2.0
세테아릴알코올	2.2
스테아릭애씨드	1.5
소르비탄스테아레이트	0.6
소듐마그네슘실리케이트	0.1
베타인	3.0
방부제	미량
향	미량
색소	미량
정제수	잔량
계	100

<비교 제형예 3>

단삼 흑효모 발효액(제조예1)을 함유한 화장료 중 크림의 비교 제형예 2는 하기 표 4에 나타내었다.

성분	함량 (단위:중량%)
단삼 흑효모 발효액(제조예 1)	5.0
소듐히아루로네이트	4.0
폴리소르베이트 60	1.5
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
디메치콘	2.0
트리에탄올아민	1.0
친유형모노스테아린글리세린	2.0
세테아릴알코올	2.2
스테아릭애씨드	1.5
소르비탄스테아레이트	0.6
소듐마그네슘실리케이트	0.1
베타인	3.0
방부제	미량
향	미량
색소	미량
정제수	잔량
계	100

< 실험예 1> 단삼의 유효성분( 트리테르페노이드 계열의 물질) 함량측정

제조예 1 내지 3의 단삼의 각각의 페놀 화합물의 물질의 함량을 표 5과 같이 HPLC를 이용하여 분석하였다.

시간	물	아세토니트릴
0	80	20
5	80	20
25	72	28
35	67	33
40	59	41
45	20	80
47	20	80
50	80	20

분석컬럼은 optipack C18, 컬럼온도 30℃, 자외선 검출기 흡광도 파장은 203nm에서 분석하였고 그 결과를 아래의 표 6에 나타내었다.

	제조예 1	제조예 2	제조예 3	함량
magnesium lithospermate B	3.02	3.25	4.85	%

제조예 1 내지 3의 단삼의 유효성분 함량 측정 결과, 본 발명의 단삼을 흑효모 균사체를 이용하여 발효시켜 추출된 단삼 흑효모 발효액(제조예 3)의 magnesium lithospermate B 성분이 다른 추출 조건(제조예 1 내지 2)과 비교하여 크게 증가한 것을 확인할 수 있었다.

<실험예 2> 항산화 효과 측정

본 발명의 제조예 1 내지 3에서 제조한 추출물에 대하여 항산화작용을 펜톤반응(Fenton reaction)에 의한 지질 과산화반응계(lipid peroxidation system)을 이용한 티오바르비츄릭산법(TBA assay)로 측정하였다. 즉, 에틸리놀레이트 10 ㎕, 0.2% 소디움도데실설폭시드(SDS), 염화제일철 10μmol, 과산화수소 2μmol을 함유하는 25mM 트리즈마(Trizma)염산/0.75mM 염화칼륨완충액 5㎖에 제조예 1 내지 3에서 제조한 추출물의 디메틸설폭시드(DMSO) 시험용액을 가한 후 55도에서 16시간 동안 항온 시킨 후, 4% 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 50㎕를 가하여 반응을 정지시켰다. 이 용액 0.3㎖를 시험관에 넣고 0.05N 염산 3.0㎖, 0.67% 티오바르비츄릭산(TBA)용액을 가하고 30분간 끓였다. 이 반응액을 냉각시킨 후 85% 부탄올 4.0ml을 가하고 원심분리 후 부탄올 층의 흡광도를 535nm에서 측정하였고 각 추출물의 항산화 효과는 다음의 수학식 1로 산출하였다. 그 결과는 표 7에 나타내었다.

시험물질	항산화 효과(%)
	실험농도(10㎍/ml)	실험농도(50㎍/ml)	실험농도(100㎍/ml)
제조예1	21	48	60
제조예2	27	50	62
제조예3	42	64	84

제조예 1 내지 3의 단삼 추출물들의 항산화 효과는 대부분 높은 활성을 나타냈으며, 특히 본 발명에 따른 제조예 3의 항산화 효과가 매우 우수한 것을 알 수 있다.

또한, 제조예 1 내지 3의 단삼 추출물과 기존 항산화제인 아스코르빈산(ascorbic acid), 디엘-알파토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타카로틴(β-carotene) 및 디부틸히드록실톨루엔(BHT)의 항산화 작용을 실험예 2와 같은 방법으로 측정하여 50% 억제농도인 IC₅₀을 비교하였다. 그 결과는 하기 표 8에 나타내었다.

시험물질	IC50(10㎍/ml)
제조예1	50.5
제조예2	48.4
제조예3	34.3
아스코르빈산 (ascorbic acid)	21.90
디엘-알파토코페롤 (dl-a-tocopherol)	3.36
베타카로틴 (β-carotene)	29.8
디부틸히드록실톨루엔 (BHT)	<1

제조예 1 내지 3의 단삼 추출물들은 다른 항산화제들에 비교할만한 높은 활성을 나타내었으며, 특히 제조예 3이 높은 활성을 나타내는 것을 알 수 있다. 특히 이러한 단삼 추출물들은 천연물 혼합물임에도 불구하고 유의할만한 항산화 활성을 가지고 있음을 알 수 있다.

<실험예 3> 단삼 흑효모 발효액의 피부 보습 개선 효과의 평가

단삼 흑효모 발효액 크림(제형예 1) 및 비교제형예 1 내지 비교제형예 3의 크림의 주름 개선 효과를 다음과 같이 평가하였다. 피부 질환이 없는 20~40대 25명을 대상으로 1조 당 20명씩 2개 조로 나누고, 각 조별로 상기 제형예 1 및 비교제형예 1 내지 3의 크림의 영양크림을 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다. 미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24℃, 습도 40%)에서 corneometer(CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도 증가율(%)을 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.

실험제품	1주 후	2주 후	3주 후
제형예 1	43	48	52
비교제형예 1	17	20	24
비교제형예 2	26	30	35
비교제형예 3	19	25	31

상기 표 9에 나타난 바와 같이 단삼 흑효모 발효액을 함유한 크림(제형예 1)의 경우, 비교제형예 1 내지 3에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였다. 일반적으로 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 상기의 결과는 단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료가 그렇지 않은 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인시켜 준 것이다. 본 화장료를 피부에 도포한 대부분의 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.

<실험예 4> 단삼 흑효모 발효액의 피부 장벽 개선 효과의 평가

본 발명의 단삼 흑효모 발효액을 함유하는 화장료의 피부 장벽 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 본 실험예는 제형예 1의 화장료를 사람을 대상으로 경피수분손실량(TEWL : Trans-Epidemal Water Loss)을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 비교실험을 행하여 평가하였다. 20 ~ 40대 여성 40명을 대상으로 오른쪽과 왼쪽 얼굴에 각 시료를 바르고 눈가에서 3cm 우측으로 1cm 아래로 떨어진 부위를 바르기 전과 바른 후 1시간, 2시간, 4시간, 6시간의 경피수분손실량을 Tewameterr(TM300, Courage and Khazaka Electronic Co., Germany)를 이용하여 3회 측정하여 평균값을 사용하여 경피수분손실량을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.

구분	1시간	2시간	4시간	6시간
제형예 1	15.3	14.9	12.1	8.9
비교제형예 1	17.9	16.7	13.6	11.4
비교제형예 2	18.9	17.3	15.2	14.2

상기 표 10에 나타낸 바와 같이, 경피수분손실량을 측정한 결과, 단삼 흑효모 발효액을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 경피수분손실량이 감소한 것으로 보아, 피부장벽 개선에 더 좋은 효과가 있음을 알 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (6)

1. 단삼 추출물을 흑효모 균사체로 발효한 단삼 흑효모 발효액을 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
2. 단삼 추출물을 흑효모 균사체로 발효한 단삼 흑효모 발효액을 포함하는 피부 보습용 화장료 조성물.
3. 단삼 추출물을 흑효모 균사체로 발효한 단삼 흑효모 발효액을 포함하는 피부장벽 개선용 화장료 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 상기 단삼 추출물을 20 내지 40℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 상기 흑효모로 발효시켜 얻은 것인, 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단삼 추출물은 단삼을 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출한 것인, 화장료 조성물.
6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단삼 흑효모 발효액은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대해 0.0001 내지 30.0 중량%의 양으로 함유되는, 화장료 조성물.