KR101321731B1

KR101321731B1 - 눈 알레르기 치료

Info

Publication number: KR101321731B1
Application number: KR1020087026545A
Authority: KR
Inventors: 젝디시 파라스램프리아; 아브너 인거만; 프랑스 얀센스; 안톤 미겐스
Original assignee: 비스타콘 파머수티컬즈, 엘엘씨
Priority date: 2006-03-31
Filing date: 2007-03-26
Publication date: 2013-10-30
Also published as: JP2013144703A; SG170044A1; US20080051385A1; PL2004196T3; US20140107102A1; US20120094978A1; BRPI0710085A2; WO2007117971A2; DK3150209T3; EA200870396A1; US10617695B2; EP3150209A1; IL194473A0; EP2004196A2; WO2007117971A3; EP3150209B1; EA016221B1; JP5292277B2; CA2648115C; JP2015131820A

Abstract

알카프타딘 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 눈 알레르기 및 염증 및 이들의 증상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물, 키트 및 방법을 제공한다.

Description

눈 알레르기 치료 {OCULAR ALLERGY TREATMENTS}

본 발명은 안구 증상의 치료 또는 예방에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 알카프타딘 (alcaftadine) 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산의 조성물, 및 눈 염증 및 눈 알레르기의 치료 또는 예방을 위한 이러한 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다.

본 출원은 2006년 3월 31일자로 출원된 "눈 알레르기 치료"라는 명칭의 가출원의 미국 특허출원 제60/788,185호의 우선권을 주장하는 비가출원의 미국 특허출원 제11/688,016호의 일부 계속 출원이다.

안구 표면의 알레르기성 질환은 계절성 알레르기성 결막염 ("SAC"), 통년성 알레르기성 결막염 ("PAC"), 춘계 각결막염 및 아토피성 각결막염을 포함한 다양한 병적 상태를 포함한다. 일반 인구 20% 이상이 어떤 형태의 눈 알레르기를 앓고 있는 것으로 평가된다. 이들 중, 약 90%는 SAC, PAC 또는 이들 두 가지를 모두 앓고 있다.

눈 알레르기 반응은 가장 흔히 20세 내지 40세의 성인에게 영향을 미치는 IgE 의존성 (타입 I) 과민성 염증 반응이다. 감염되기 쉬운 개인에 있어서, 안구 표면에 대한 알레르겐의 초기 노출에 의해, 알레르겐 특이적 면역 항체 (IgE)의 생 산이 촉진된다. 그 때 IgE는 안구 점막의 나이브 (naive) 비만 세포의 막결합성 FcεR-1 수용체에 결합된다. 비만 세포는 히스타민 및 프로테오글리칸을 포함한 다수의 미리 형성된 전달물질을 함유하는 과립구이다. 일단 비만 세포가 활성화되면, 프로스타글란딘 D2, 류코트리엔, 및 혈소판 응집 인자를 포함하는 새로 생성된 화학전달물질이 생성된다. IgE로 코팅된 비만 세포에 대한 알레르겐의 후속 노출에 의해, 비만 세포의 과립 내에 함유된 미리 형성되거나 새로이 생성된 전달물질이 방출된다.

알레르기성 결막염의 임상 증상은 가려움, 충혈, 안검 종창, 결막 부종 및 눈물 흘림을 포함한다. 히스타민은 알레르기 반응의 일차 전달물질이다. 비만 세포 탈과립 후에, 히스타민은 결막에 위치하는 수용체에 결합한다. 히스타민의 신경 세포 성의 H1 수용체에 대한 결합은 가려움을 포함한다. 맥관 내피 세포의 H1 및 H2 수용체의 활성화에 의해, 혈관 확장을 유도하며, 염증 매개 물질, 예컨대 IL-1α 및 IL-1β의 혈관으로의 이동 및 백혈구의 결막 조직으로의 후속 동원을 촉진시키는 혈관 투과성을 증대시킨다. 히스타민 수용체의 활성화에 의해, 안구 충혈, 결막 부종, 안검 종창, 및 혈관에서 주위 조직으로의 액체 침출을 유도하며, 이로써 염증을 일으킨다. 이로써, 백혈구, 예컨대 호산구 및 호중구의 결막 조직으로의 주화성에 의해, 조직 손상을 더욱 유발시킨다.

역사적으로, 항히스타민제는 눈 알레르기성 질환의 치료의 주력약이 되어 왔다. 이들 요법은 효능, 특이성 및 작용 지속 시간이 다르다. 제 1 세대 항히스타민제, 예컨대 페니라민 및 안타졸린은 이들의 작용 발현이 신속히 일어나는 것으로 알려져 있다. 불행히도, 이러한 화합물은 또한 안구 불쾌감을 일으키고, 이들의 효능은 불과 몇시간 후에 감소된다. 제 2 세대 H1 길항제, 예컨대 레보카바스틴 및 에마다스틴은 안구 불쾌감을 덜 나타내며, 약간 더 긴 작용 지속 시간을 갖는다. 그러나, 이들 화합물은 항염증작용이 제한되어 있으며, 염증 반응의 만기 성분을 거의 억제하지 않는다.

현재, 눈 알레르기 관리를 위한 가장 효과적인 요법은 약물, 예컨대 올로파타딘, 케토티펜 및 아젤라스틴으로, 이들은 항히스타민 특성 및 비만 세포 안정화 특성을 갖는다. 이러한 요법은 일반적으로 내성이 양호하고, 이들의 효과는 8 내지 12 시간까지 지속될 수 있다. 알레르기 반응의 단일 성분에만 작용하는 화합물 보다 우수한 것으로 보고되어 있지만, 이들 화합물은 종종 다수의 눈 알레르기 증상을 경감시킬 수 없다.

안구 충혈, 결막 부종 및 안검 종창에 대한 약물 효과에 의해, 기존 요법을 상당히 개선시킨다. 게다가, 대부분의 새로운 안과용 항알레르기제는 안과용 항알레르기제는 제한된 작용 지속 시간을 갖기 때문에, 1일 2회 투여되어야 한다. 긴 작용 지속 시간을 갖는 국소용 제제는 1일 1회 주입될 수 있기 때문에 유리할 것이다. 따라서, 유사한 안전성 프로파일을 제공하면서, 부위에서 이점, 효능 및 작용 지속 시간을 제공할 수 있는 새로운 요법이 요구된다. 본 발명은 이러한 목적 및 다른 목적에 관한 것이다.

본 발명은 환자의 눈에 알카프타딘을 투여함으로써, 눈 알레르기를 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 본 명세서에 기재된 발명은 알카프타딘이 다수의 상이한 눈 알레르기 증상을 치료하거나 예방하여, 특히 눈 알레르기의 치료 또는 예방에 유용하게 한다는 놀라운 발견에 적어도 부분적으로 기초하고 있다. 본 발명의 방법, 안과용 조성물, 및 키트는 활성 약물의 최소 체내 흡수를 이용하여, 눈 알레르기의 임상 증상 및 안구 염증을 완화시킨다. 눈에 대한 국소성 투여를 위해 제형화한 경우에 우수한 안전성 프로파일 및 내성과 함께, 이러한 특성의 예외적인 조합으로, 약물을 특히 눈 알레르기의 치료 또는 예방에 유용하게 할 수 있다. 구체적으로는, 본 발명은 환자의 눈에 유효량의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 투여하는 것을 포함하는 눈 알레르기의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다.

화학명 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복스알데히드로도 알려진 알카프타딘은 하기 화학식을 갖는다:

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화합물 및 이의 제조방법은 본 명세서에 전체로서 참조로 포함되는 미국 특허 제5,468,743호에 개시되어 있다. 본 발명의 바람직한 방법 및 안과용 조성물은 화학식 I의 알카프타딘 화합물을 포함하지만, 그 대신에 알카프타딘 염으로서 존재할 수 있다. 알카프타딘의 약제학적으로 허용가능한 염은 유기산 및 무기산으로 생성될 수 있다. 적절한 산은 아세트산, 4-아세트아미도 벤조산, 벤젠술폰산, 캠퍼술폰산, 시트르산, 2,3:4,6-디-O-이소프로필리덴-2-케토-L-굴론산 일수화물, 포름산, 푸마르산, 염산, 브롬화수소산, 락트산, 말레산, L-(-)말산, 말산, 말론산, 만델산, 메탄술폰산, 나프탈렌술폰산, 질산, 옥살산, 프탈산, 인산, 프로피온산, DL-피로글루탐산, 사카린, 살리실산, 숙신산, 황산, 타르타르산, 트리플루오로아세트산, L-(+)타르타르산, 및 톨루엔술폰산을 포함하나, 이들에 한정되지 않는다.

본 명세서에 사용된 용어 "눈 알레르기"는 병원성 알레르겐으로 인한 안구 표면의 알레르기성 질환을 말한다. 알레르기성 결막염은 보다 흔한 눈 알레르기이며, 계절성 알레르기성 결막염 ("SAC"), 통년성 알레르기성 결막염 ("PAC"), 춘계 각결막염 및 아토피성 각결막염을 포함한 다양한 병적 상태를 포함한다.

눈 알레르기의 "임상 증상"으로는 가려움, 안구 충혈, 안검 종창, 결막 부종, 눈물 흘림, 및 비염, 코막힘, 콧물, 코 가려움 및 귀/입천장 가려움, 및 재채기를 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 본 발명의 방법이 적어도 2개의 임상 증상, 더욱 바람직하게는 적어도 3개, 보다 바람직하게는 4개 이상의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 본 발명의 방법은 알레르기성 결막염과 관련된 하기의 임상 증상 중 적어도 하나를 치료하거나 예방한다: 눈 가려움, 안구 충혈, 결막 부종, 눈물 흘림, 안검 종창, 코막힘, 또는 콧물. 바람직하게는 본 발명의 방법은 눈 가려움 및 안구 충혈을 치료하거나 예방하고; 눈 가려움, 안구 충혈, 및 결막 부종을 치료하거나 예방하며; 눈 가려움, 안구 충혈, 결막 부종, 및 눈물 흘림을 치료하거나 예방하고; 눈 가려움, 안구 충혈, 결막 부종, 눈물 흘림, 및 안검 종창을 치료하거나 예방하며; 눈 가려움, 안구 충혈, 결막 부종, 눈물 흘림, 안검 종창, 및 코막힘을 치료하거나 예방하고; 눈 가려움, 안구 충혈, 결막 부종, 눈물 흘림, 안검 종창, 코막힘, 및 콧물을 치료하거나 예방하며; 코막힘 및 콧물을 치료하거나 예방한다.

본 명세서에 사용된 용어 "환자"는 포유 동물, 바람직하게는 인간을 포함한 동물을 말한다. 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 "유효량"은 눈 알레르기 증상을 치료하거나 예방하는데 요구되는 물질의 양이다. 유효량은 환자에 있어서 원하는 반응을 유도하도록 단독으로 또는 하나 이상의 병용 약물과 혼합한 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 능력에 따라 환자에 따라 다를 수 있다. 유효량을 결정하는 다른 인자로는 궁극적으로는 주치의의 재량에 의한 적절한 용량과 함께, 완화할 병상 또는 증상의 중증도, 호르몬 레벨, 연령, 성별, 환자 체중, 환자 상태, 치료할 병적 상태의 중증도, 동시 투약 요법 또는 이후에 특정한 환자에 행해지는 규정식, 및 당업자가 인지할 다른 인자를 포함하나, 이들에 한정되지 않는다. 용법·용량은 향상된 치료 반응을 제공하도록 조절될 수 있다. 유효량은 또한 성분이 독성 작용 또는 악영향이 치료에 유익한 효과에 의해 해소되는 양이다. 대부분의 환자에 대해서는 0.25% 안용액의 50 ㎕ 드롭이 알카프타딘 0.125 mg을 함유하는 것이 바람직하다. 약물 100%가 체내 흡수되는 것으로 가정하면, 각 눈에 1일 1회를 의미하는 점안약을 양측에 사용한 70 kg의 사람은 0.25 mg/d, 또는 3.57 ㎍/kg/day의 용량이 취해질 것이다. 전체량이 흡수되지 않기 때문에, 실제 전신 노출이 낮을 것으로 가정하는 것이 타당하다. 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 유효량이 약 0.25 mg 미만 내지 약 0.015 mg 이상, 바람직하게는 약 0.030 내지 약 0.14 mg, 더욱 바람직하게는 약 0.075 mg 내지 약 0.125 mg인 것이 바람직하다.

본 명세서에 용어 "약제학적으로 허용가능한"은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물과 함께 사용되는 경우에, 통상 독성을 나타내거나 환자에게 유해하지 않는 물질을 말하며, 본 발명은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물이 본 명세서에 기재된 정의된 안과용 조성물로서 제형화되는 경우를 포함한다.

알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물은 약물을 약제학적으로 허용가능한 제형으로 환자의 눈에 전달할 수 있는 투여 경로에 의해 환자에 투여될 수 있다. 따라서, 약물은 본 명세서에 정의된 안과용 조성물, 또는 유효량의 약물을 환자의 눈에 단기간 또는 장기간 전달에 적합한 다른 제제, 디바이스 또는 메카니즘의 형태로 환자에 투여될 수 있다. 약물은 콘택트 렌즈, 펑크털 플러그 (punctal plug), 또는 안구 인서트를 포함하나, 이들에 한정되지 않는 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 함유하거나 이들로 코팅된 안과용 인서트로 환자에게 투여될 수 있다. 바람직한 본 발명의 방법에 있어서, 약물은 안과용 용액 또는 현탁액 (즉, 점안약), 안과용 연고, 또는 안과용 겔로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 안과용 조성물의 형태로 국소적으로 투여된다.

또한, 본 발명은 유효량의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는 안구 염증의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 임상 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 약제학적으로 허용가능한 염, 및 유효량"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. 용어 "안구 염증"은 눈의 앞부분의 임의의 부분의 염증을 말한다. 이러한 안구 염증은 하기 건성 각막염, 콘택트 렌즈 착용, 세균 감염, 진균 감염, 또는 바이러스 감염 또는 이들의 조합체 중 어느 것으로 인한 것일 수 있다. 안구 염증의 흔한 원인은 세균 감염 또는 바이러스 감염이다.

또한, 본 발명은 유효량의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기 또는 안구 염증과 관련된 기계적 증상 (mechanistic symptom)을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 환자 약제학적으로 허용가능한, 약제학적으로 허용가능한 염, 유효량, 눈 알레르기, 및 안구 염증"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. "기계적 증상"은 병상, 예컨대 눈 알레르기 또는 안구 염증의 증상을 유도하거나 억제하는 세포 반응이다. 기계적 증상은 혈관 누출, 결막 상피 폐쇄 소대 (conjunctival epithelial tight junction)의 완전성 (integrity)의 감소, H₄ 수용체 조절, 및 비만 세포 분해를 포함하나, 이들에 한정되지 않는다. 본 발명의 바람직한 방법은 적어도 두 가지의 기계적 증상을 치료하거나 예방하고, 더욱 바람직하게는 적어도 세 가지의 기계적 증상을 치료하거나 예방하며, 보다 바람직하게는 적어도 네 가지의 기계적 증상을 치료하거나 예방한다. 예를 들면, 바람직한 방법은 혈관 누출, 및 결막 상피 폐쇄 소대의 결막 상피 폐쇄 소대의 완전성의 감소의 감소를 치료하거나 예방하고; 혈관 누출, 결막 상피 폐쇄 소대의 완전성의 감소, 및 H₄ 수용체 조절을 치료하거나 예방하며; 혈관 누출, 결막 상피 폐쇄 소대의 완전성의 감소, H₄ 수용체 조절, 및 비만 세포 분해를 치료하거나 예방한다.

또한, 본 발명은 유효량의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 코에 투여하는 것을 포함하는 눈 알레르기의 코 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 약제학적으로 허용가능한 염, 눈 알레르기, 및 유효량"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. 알레르기의 "코 증상"은 상술한 임상 증상의 서브세트이며, 비염, 코막힘, 콧물, 코 가려움, 및 재채기를 들 수 있다. 흔한 코 증상은 콧물 및 코막힘이다.

알카프타딘은 본 명세서에 정의된 안과용 조성물, 또는 유효량의 약물을 환자의 코, 바람직하게는 환자의 콧구멍에 단기간 또는 장기간 전달에 적합한 다른 제제, 디바이스 또는 메카니즘의 형태로 환자에 투여될 수 있다. 본 발명의 바람직한 방법에 있어서, 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물은 안과용 용액 또는 현탁액 (즉, 점비약 및 스프레이), 안과용 연고, 또는 안과용 겔 (본 명세서에 정의된)로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 안과용 조성물의 형태로 국소적으로 환자의 콧구멍에 투여된다.

또한, 본 발명은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는 눈 알레르기의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 임상 증상, 눈 알레르기, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

본 명세서에 사용된 용어 "안과용 조성물"은 눈에 투여하기에 적합한 약제학적으로 허용가능한 제제, 전달 디바이스, 메카니즘 또는 시스템을 말한다. 용어 "안과용 조성물"은 용액, 현탁액, 겔, 연고, 콘택트 렌즈, 임플란트, 스프레이, 데포 (depot), 또는 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 눈에 단기간 또는 장기간 전달에 적합한 다른 형태의 제제, 디바이스 또는 메카니즘을 포함하나, 이들에 한정되지 않는다. 경구 또는 주사 제제와는 대조적으로, 안과용 조성물은 각종 반응, 예를 들면, 결막 및 각막의 염증, 안검 폐쇄, 눈물 분비 및 통증 반응을 유도하는 것을 막는 약제학적으로 허용가능한 안과용 비히클의 사용을 포함하는, 눈에 대한 이들의 사용과 관련된 특정한 기술 특성을 나타낸다. 본 발명의 바람직한 안과용 조성물은 유리하게는 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 함유하는 안과용 용액 또는 현탁액 (즉, 점안약), 안과용 연고, 또는 안과용 겔의 형태이다. 선택된 특정 형태에 따라, 조성물은 각종 첨가제, 예컨대 완충액, 등장제, 가용화제, 방부제, 점증제, 킬레이트제, 산화방지제, 및 pH 조절제를 함유할 수 있다.

적절한 방부제의 예로는 클로로부탄올, 데하이드로아세트산나트륨, 염화벤잘코늄, 염화세틸피리디늄, 페네틸 알콜, 파라하이드록시벤조산 에스테르 및 염화벤제토늄을 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 점증제는 예를 들면, 메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 폴리비닐알콜, 카복시메틸셀룰로스, 황산콘드로이틴, 및 이들의 염 중에서 선택될 수 있다. 적절한 가용화제로는 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리소르베이트 80, 및 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트를 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 전형적인 킬레이트제로는 에데트산나트륨, 시트르산, 전체로서 본 명세서에 포함되는 2006년 3월 17일자로 출원된 "산화적으로 불안정한 약제학적 조성물을 안정화시키는 방법"이라는 명칭의 미국 특허출원 제60/783,557호 및 이의 대응하는 비가출원에 기재된 안정화제를 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 안정화제로는 예를 들면, 에데트산나트륨 및 아황산수소나트륨을 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다.

유용한 pH 조절제는 통상 예를 들면, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 시트르산, 인산, 아세트산, 및 염산 중에서 선택된다. 안과용 조성물의 pH는 약 5 내지 약 8, 더욱 바람직하게는 약 6.5 내지 약 7.5의 범위일 수 있다. 보다 바람직하게는, 안과용 조성물의 pH는 약 7.0이다. 유용한 완충액으로는 붕산염 완충액, 인산염 완충액, 탄산염 완충액, 및 아세트산염 완충액을 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 안과용 조성물 중의 완충액의 농도는 선택된 특정 완충액에 따라, 약 1 mM 내지 약 150 mM 이상으로 변화할 수 있다. 바람직하게는, 완충액 농도는 100 미만, 더욱 바람직하게는 약 1 mM 내지 약 25 mM이며, 약 1 mM 내지 약 20 mM의 농도가 더욱 바람직하다.

본 명세서에 사용된 용어 "비히클"은 안과 용도에 적합한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 것으로 의도된다. "부형제"는 하나 이상의 벌크를 제공하고, 만족스러운 처리 특성을 부여하며, 용해 속도를 조절하는 것을 돕고, 아니면 추가의 바람직한 특성을 조성물에 부여하는 성분을 말한다. 특히, 예를 들면, 본 명세서에 전체로서 포함되는 문헌 [참조: Handbook of Pharmaceutical Excipients, (American Pharmaceutical Association, Washington, D. C. and Pharmaceutical Press, London, England, 4^th ed. 2003)]에 기재된 당업자에게 공지된 화합물이 이 용어에 포함된다. 특히, 부형제는 안과용 조성물이 활성 성분을 동반하는 눈물 분비를 유발하지 않도록 선택된다. 허용가능한 부형제는 원하는 제제에 따라 이들을 선택하는 방법을 인지하는 당업자에게 공지되어 있다.

농도, 양, 비율, 및 다른 수치 데이터가 범위 포맷으로 본 명세서에 표현되거나 나타내는 경우에는, 이러한 범위 포맷이 단지 편의 및 간결을 위해 사용되되므로, 범위의 한계값으로서 명시된 수치를 포함할 뿐만 아니라, 각 수치 및 서브 범위가 명시되는 것처럼 범위 내에 포함되는 각 개별 수치 또는 서브 범위도 포함되도록 유연성 있게 해석된다. 실례로서, "약 1 중량% 내지 약 10 중량%"의 농도 범위는 약 1 중량% 내지 약 10 중량%의 명시된 농도뿐만 아니라, 지시 범위 내의 개별 농도 및 서브 범위도 포함하는 것으로 해석된다. 따라서, 개별 농도, 예컨대 2 중량%, 5 중량%, 및 8 중량%, 및 서브 범위, 예컨대 1 중량% 내지 3 중량%, 5 중량% 내지 9 중량% 등이 이 수치 범위에 포함된다. 본 명세서에 사용된 용어 "약"은 지시값의 약 플러스 마이너스 10 퍼센트를 의미하므로, "약 50 중량%"는 약 45 중량% 내지 55 중량%를 나타낸다.

전형적으로, 본 발명의 안과용 조성물 중의 알카프타딘의 농도는 약 0.005 중량% 내지 약 10.0 중량%이며, 약 0.005 내지 약 0.4 중량%의 농도가 바람직하고, 약 0.1 중량% 내지 약 0.35 중량%의 농도가 특히 바람직하다. 0.25% 안용액의 50 ㎕ 드롭은 알카프타딘 0.125 mg을 함유한다. 약물 100%가 체내 흡수되는 것으로 가정하면, 각 눈에 1일 1회를 의미하는 점안약을 양측에 사용한 70 kg의 사람은 0.25 mg/d, 또는 3.57 ㎍/kg/day의 용량이 취해질 것이다. 전체량이 흡수되지 않기 쉽기 때문에, 실제 전신 노출이 낮을 것으로 가정하는 것이 타당하다. 바람직하게는, 알카프타딘의 유효량은 약 3.5 ㎍/kg/day 이상 약 7.1 ㎍/kg/day 미만이다.

또한, 본 발명은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기의 기계적 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 기계적 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 안구 염증의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 임상 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염, 안구 염증, 및 안과용 조성물은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 안구 염증의 기계적 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "알카프타딘, 기계적 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염, 안구 염증, 안과용 조성물"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 포함한다. 용어 "안과용 조성물, 알카프타딘, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. 상기 안과용 조성물이 본 명세서에 정의된 비히클을 추가로 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 눈 알레르기의 임상 증상의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 있어서의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함한다. 용어 "알카프타딘, 임상 증상, 눈 알레르기, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 안구 염증의 임상 증상의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 있어서의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함한다. 용어 "알카프타딘, 임상 증상, 안구 염증, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 눈 알레르기 또는 안구 염증의 기계적 증상의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 있어서의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함한다. 용어 "알카프타딘, 기계적 증상, 눈 알레르기, 안구 염증, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 포장 재료로 제조되는 용기 내에 포함된, 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 포함하는 키트를 포함한다. 용어 "안과용 조성물, 알카프타딘, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. 약제학적으로 허용가능한 포장 재료로는 저밀도 폴리에틸렌 ("LDPE"), 고밀도 폴리에틸렌 ("HDPE"), 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리카보네이트, 폴리에스테르 (예컨대, 폴리에틸렌 테레프탈레이트 및 폴리에틸렌 나프탈레이트), 나일론, 폴리(염화비닐), 폴리(염화비닐리덴), 폴리(테트라플루오로에틸렌) 및 당업자에게 공지된 다른 재료를 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. LDPE 또는 HDPE로 제조되는 가요성 바틀이 특히 바람직하다. 이러한 재료의 시판 공급원은 듀퐁 (DuPont) 20 시리즈 특수 폴리에틸렌(DuPont 제), 테나이트 (Tenite) 폴리에틸렌 1830F 내츄럴 (Eastman Chemical Company 제), 푸렐 (Purell) 1840 폴리에틸렌 (Basell 제)을 들 수 있으나, 이들에 한정되지 않는다. 특히 바람직한 재료는 듀퐁^TM 20-6064 (E. I. du Pont de Nemours and Company 제, (Wilmington, DE))이고, 바람직한 LDPE 포장 재료는 인젝션 블로 성형 프로세스에 의해 안과용 조성물을 함유하는 가요성 드로퍼 바틀 (flexible dropper bottle)을 제조하기 위해 통상 사용되며, 미국 식품의약국 (U.S. Food and Drug Administration)에 의해 이러한 사용이 승인되어 있다. 키트는 알카프타딘을 함유하는 안과용 조성물의 다수회 용량 또는 알카프타딘의 단회 용량을 포함할 수 있다.

충전하기 전에, 이러한 바틀은 관례대로 감마선 조사 또는 에틸렌 옥사이드 가스에 의해, 당업자에게 공지된 방법으로 멸균된다. 그러나, 본 발명자들은 놀랍게도 감마선 조사로 멸균된 바틀이 활성 성분의 안정성을 감소시킬 수 있기 때문에, 감마선 조사를 이용하는 대신에, 에틸렌 옥사이드 가스로 LDPE 바틀을 멸균하는 것이 바람직하다는 것을 알아냈다.

6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 ("CAS # 147083-93-0")은 하기 화학식을 갖는다:

.

화학식 II의 화합물은 미국 특허 제5,468,743호에 개시되었다. 바람직한 방법 및 안과용 조성물은 도시된 화학식 II를 포함하나, 화학식 II는 방법, 및 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물로서 안과용 조성물에 존제할 수 있다.

구체적으로는, 본 발명은 유효량의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 임상 증상, 눈 알레르기, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. 용어 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 "유효량"은 눈 알레르기 증상을 치료하거나 예방하는데 요구되는 이러한 물질의 양이다. 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 유효량에 관하여 상술한 바와 같이, 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 유효량은 환자에 있어서 원하는 반응을 유도하도록 단독으로 또는 하나 이상의 병용 약물과 혼합한 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 및 이들의 혼합물의 능력에 따라 환자에 따라 다를 수 있다. 유효량을 결정하는데 사용되는 인자는 당업자에게 공지되어 있고, 이들 인자의 일부는 본 명세서에 기재되어 있다. 화학식 II의 화합물의 유효량이 약 0.25 mg 미만 내지 약 0.015 mg 이상, 바람직하게는 약 0.030 내지 약 0.14 mg, 더욱 바람직하게는 약 0.075 mg 내지 약 0.125 mg인 것이 바람직하다. 바람직하게는, 본 발명의 안과용 조성물 내 화학식 II의 화합물의 농도는 약 0.005 중량% 내지 약 10 중량%, 보다 바람직하게는 약 0.1 중량% 내지 약 0.4 중량%, 특히 바람직하게는 약 0.2 중량% 내지 약 0.35 중량%일 수 있다.

또한, 본 발명은 유효량의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 안구 염증의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 임상 증상, 안구 염증 환자, 약제학적으로 허용가능한, 약제학적으로 허용가능한 염, 및 유효량"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 유효량의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기 또는 안구 염증과 관련된 기계적 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 약제학적으로 허용가능한 염, 유효량, 기계적 증상, 눈 알레르기, 및 안구 염증"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 유효량의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 환자의 코에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기의 코 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 약제학적으로 허용가능한 염, 코 증상, 및 유효량"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 임상 증상, 환자, 안과용 조성물, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 눈 알레르기의 기계적 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 기계적 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 안구 염증의 임상 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 임상 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염, 안구 염증, 및 안과용 조성물"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 환자의 눈에 투여하는 것을 포함하는, 안구 염증의 기계적 증상을 치료하거나 예방하는 방법을 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 기계적 증상, 환자, 약제학적으로 허용가능한, 및 약제학적으로 허용가능한 염, 안구 염증, 안과용 조성물"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 포함한다. 용어 "안과용 조성물, 화학식 II의 화합물, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다. 상기 안과용 조성물이 추가로 본 명세서에 정의된 비히클을 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명은 눈 알레르기의 임상 증상의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 있어서의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 임상 증상, 눈 알레르기 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 안구 염증의 임상 증상의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 있어서의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 임상 증상, 안구 염증, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 눈 알레르기 또는 안구 염증의 기계적 증상의 치료 또는 예방용 약제의 제조에 있어서의 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물의 용도를 포함한다. 용어 "화학식 II의 화합물, 기계적 증상, 눈 알레르기, 안구 염증, 약제학적으로 허용가능한 염"은 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

또한, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 포장 재료로 제조되는 용기 내에 포함된, 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물, 다형체, 프로드럭, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 안과용 조성물을 포함하는 키트를 포함한다. 용어 "안과용 조성물, 알카프타딘, 약제학적으로 허용가능한 염 및 약제학적으로 허용가능한 포장 재료"는 모두 이들의 상술한 의미 및 바람직한 범위를 갖는다.

본 발명은 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명된다. 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

실시예 1: 알카프타딘 안과용 용액

알카프타딘을 함유하는 안과용 용액을 표 1에 따라 제조하였다. 멸균 보증을 위해, 용액을 미리 에틸렌 옥사이드 멸균을 행한 LDPE 바틀에 충전하기 전에 0.22 마이크론 멸균 필터를 통과시켰다.

표 1:

실시예 2: 항알레르기 활성

알레르기성 결막염 (부종 및 홍반)의 급성기 반응에 대한 알카프타딘의 효과를, 래빗 피부 스쿠아메 (squame)에 전신적으로 감작되어, 래빗 알레르겐으로 17일 후에 국소적으로 챌린지된 기니피그의 다른 공지된 항알레르겐의 효과와 비교하였다.

체중이 약 230 내지 250 g인 마취된 수컷 알비노 기니피그 (Dunkin-Hartley)의 좌측 대퇴 사두근에 정제된 래빗 알레르겐 50 ㎕로 근육내로 주사하였다. 래빗 알레르겐은 Al(OH)₃가 흡착된 래빗 스쿠아메 (Halab, Brussels, Belgium)로 구성되고, 이를 균질화시키고, 멸균 생리식염수를 함유한 방부제 클린 (0.5% (V/V) 페놀)으로 세정하였다.

알카프타딘을 챌린지를 행하기 24 시간 및 1 시간 전에 0.005 mg/kg 내지 1.0 mg/kg 범위의 용량으로 각 눈에 경구 투여하였다. 옥사토마이드, 케토티펜, 아스테미졸, 세티리진, 로라타딘 및 테르페나딘을 포함하는 다른 테스트 화합물을 0.1 mg/kg 및 1.0 mg/kg의 용량으로 투여하였다.

감작 후 17일째에, 100% 정상 래빗 혈청 25 ㎕를 주입하여, 좌측 눈을 챌린지하였다. 알레르겐 챌린지와 동시에, 밀리포어 여과시킨 탈이온수에 용해된 1.5 mg/ml 히스타민 디하이드로클로라이드 (98%, Sigma) 25 ㎕를 우측 눈에 주입하였다.

첼린지 후 30분 후에, 부종 및 홍반을 숙련 기술자에 의해 양쪽 눈의 안검 및 안구 결막에서 평가하여, 없음 (0), 약함 (1), 보통 (2), 심함 (3), 또는 아주 심함 (4)으로 스코어하였다. 알카프타딘은 0.1 mg/kg의 용량에서 개시되는 급성 알레르기 증상을 상당히 완화시켰다. 본 테스트에서, 알카프타딘은 옥사토마이드, 케토티펜 및 테르페나딘 보다 강력하고 (당량 mg/kg 기준으로), 아스테미졸, 세티리진 및 로라타딘 보다 상당히 강력한 것으로 밝혀졌다.

실시예 3: 알레르기성 결막염에 있어서의 국소성 알카프타딘의 활성

알카프타딘은 능동성 아나필락시스의 뮤린 모델에서 알레르기성 결막염의 징후 및 증상을 예방하는 하는 것으로 나타났다.

체중이 12.55 내지 17.73 그램인 5 내지 7 주령의 수컷 SWR/J 마우스 (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine)를, 처리 및 챌린지 2주째 및 이전에 복강내 투여에 의해, 쇼트 랙위드 (short ragweed) 알레르겐 (Greer Labs, Inc., Lenoir, NC) 50 ㎍ 및 수산화알루미늄 (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA) 1 mg으로 된 현탁액의 100 ㎕ 용량으로 감작시켰다.

14일째에, 마우스는 처음에 이들이 처리 투여 및 챌린지 전에 심한 염증을 보이지 않는다는 것을 확보하도록 기초 조사에 주어졌다. 그 다음에, 인산염 완충 식염수 중의 1.5 mg 쇼트 랙위드 알레르겐으로 안구 챌린지를 행하기 전에, 마우스의 눈에 알카프타딘 0.0625% 안과용 용액, 양성 대조약 (케토티펜 0.05%와 페니라민 0.5%의 혼합물을 포함하는 안과용 용액), 또는 플라시보를 국소적으로 투여하였다.

알레르겐 챌린지 15 분 후에, 마우스를 결막 충혈, 결막 부종, 눈물 흘림, 및 안검 부종으로 스코어함으로써, 알레르기성 결막염의 임상적 징후에 대하여 평가하였다. 임상적 징후의 중증도를 표준화된 0-2 스케일을 이용하여, 숙련 기술자에 의해 스코어하였다. 알카프타딘은 가려움, 충혈, 결막 부종 및 안검 부종을 예방하는데 있어서는 양성 대조약 보다 훨씬 더 효과적이고, 알카프타딘은 눈물 흘림을 예방하는데 있어서는 양성 대조약 만큼 효과적이며, 플라시보 보다 훨씬 더 효과적이었다.

실시예 4: 인간에 있어서의 알카프타딘 안과용 용액의 효과

실시예 1의 알카프타딘 안과용 용액의 세 가지 농도 각각의 단회 투여에 대한 항알레르기 효과를, 알레르기성 결막염의 병력이 있는 성인 지원자에 대하여 행해진 결막 알레르겐 챌린지 ("CAC")로 평가하였다. 대상을 알레르겐 챌린지에 대한 반응성을 확인하도록 2회 체재 (visit) 후에 선택하였다. 각종 통상적인 알레르겐, 예컨대 고양이 헤어, 고양이 비듬, 수목 화분 등 중 적어도 하나에 대한 양성 피부 테스트 및 안구 반응이 행해진 대상은 본 연구에 적격이었다. 그 다음에, 알카프타딘, 파타놀 (PATANOL)® 올로파타딘 하이드로클로라이드 안과용 용액 0.1% (Alcon, Inc., Forth Worth, TX) 또는 비히클을 양측 주입한 지 16 시간 및 15 분 후에 2회의 분리 체재 시에 각 눈에 재구성된 시판용 알레르겐을 주입함으로써, 대상을 알레르겐으로 챌린지하여, 임상 반응을 평가하였다.

눈 가려움의 예방:

챌린지 16 시간 전에 알카프타딘을 투여한 환자는 눈 가려움의 용량 의존성 억제 효과를 나타내었다. 모든 농도의 알카프타딘은 5 포인트 스케일 (즉, 덜 가려움)을 이용한 대상 평가에 기초한 평균 가려움 스코어가 챌린지 3, 5 및 7 분 후에 비히클 또는 파타놀 보다 낮게 나타났다. 처리 15 분 후에 챌린지 시에, 알카프타딘으로 처리된 대상은 플라시보와 비교하여, 눈 가려움의 용량 의존성 억제 효과를 나타내내고, 0.25% 처리 그룹은 비히클 또는 파타놀 보다 가려움 스코어가 낮게 나타났다.

결막 충혈의 예방:

챌린지 16 시간 이전에 알카프타딘을 투여한 환자도 결막 충혈의 용량 의존성 억제 효과를 나타내었다. 5 포인트 스케일을 이용한 연구자 평가에 기초하여, 챌린지 7, 15 및 20 분 후에 평가를 행하였다. 모든 농도의 알카프타딘은 대부분의 평가 시간에 평균 결막 충혈 스코어의 다양한 감소도를 나타내었다. 처리 15 분 후의 챌린지 시에, 0.25% 처리 그룹은 비히클 또는 파타놀 보다 가려움 스코어가 낮게 나타났다.

코 증상의 예방:

CAC로 유발된 코 증상의 예방에 대하여 유사한 결과가 관찰되었다. 재채기, 콧물, 가려움 (코 및/또는 귀/입천장) 및 코막힘의 코 증상을 표준화 스케일을 이용하여 대상에 대하여 평가하였다. 모든 농도의 알카프타딘은 다수의 시점에서 코막힘 및 콧물이 어느 정도의 완화를 나타내었다. 이들 인원수는 종종 플라시보나, 경우에 따라서는 실 대조약 (active control) (p≤ 0.05)에 대하여 통계적 유의성에 이르렀다. 코, 입천장 및 귀의 가려움에 대한 파라미터에 대하여, 유사한 결과 가 입증되었다. 재채기에 대한 효과는 본 연구에서 입증되지 않았으나, 베이스라인 재채기 발생률 (처리 전)은 너무 낮아서 1회 나타나는 경우의 치료 효과를 검출할 수 없을 것 같았다. 요약하면, 개시 및 체재 기간에서의 대부분의 시점에서 콧물, 코막힘, 및 입천장/귀의 가려움이 상당히 감소되었다.

실시예 5: 감마선 조사에 의한 멸균 효과

알카프타딘은 산화되기 쉬우며, 일차 분해물은 하기의 N-옥사이드 구조로서 동정되었다. 일차 산화 분해 피크로서의 N-옥사이드 구조의 존재는 합성적으로 제조된 N-옥사이드 구조와 동일한 HPLC 상대 체류 시간을 갖는 것으로 확인되고, 또한 질량 분석을 이용하여 확인되었다.

LDPE 바틀을 멸균하는데 사용되는 감마선 조사 프로세스의 효과를 조사하기 위해, 알카프타딘의 화학 안정성을 감마선 조사되거나 멸균되지 않은 바틀의 상이한 로트를 사용하여 조사하였다.

재료 및 방법:

하기 재료를 본 연구에 사용하였다.

2.5 mg/ml 알카프타딘 용액

멸균되지 않은 5 ml LDPE 바틀 (DUPONT 20-6064) (Bunder Glas GmbH 제 (Germany))

멸균되지 않은 5 ml LDPE 바틀 (DUPONT 20-6064) (Rexam 제 (France))

멸균된 (25 kGy로 감마선 조사됨) LDPE 바틀 (DUPONT 20-6064) (Bunder Glas GmbH 제)

신틸레이션 바이알 - 테플론으로 코팅된 캡을 갖는 20 ml 투명 글래스

밀렉스 (Millex) GV 시린지 필터 유닛

결과:

멸균되지 않은 바틀 (Rexam 또는 Bunder Glas) 또는 감마선 조사된 바틀 (Bunder Glas)에 보관된 알카프타딘 용액에 대한 화학 안정성 결과를 표 2에 요약한다. 모든 샘플을 5O℃로 보관한 지 6 및 14일 후에 HPLC로 분석하였다. 노광량은 보관시에 조절되지 않았다. 용액을 Rexam 바틀 (멸균되지 않음), Bunder Glas 바틀 (γ선 조사로 멸균되거나 멸균되지 않음) 또는 글래스 바이알에 보관하였다.

표 2:

*샘플은 관찰된 높은 분석값과 일치하는 것으로, 심한 증발을 나타내었다

결론:

감마선 조사된 Bunder Glas 바틀에 보관된 알카프타딘은 글래스 바이알 및 멸균되지 않은 Rexam 및 Bunder Glas 바틀과 비교하여, N-옥사이드 생성 레벨이 상당히 증가되었음을 나타내었다. 이러한 데이터로부터, 감마선 조사 멸균 프로세스가 폴리에틸렌 바틀에 화학적 또는 물리적 변화를 유발시킴으로써 산화의 일차 원인이 될 수 있음을 시사한다.

실시예 6: 에틸렌 옥사이드를 이용한 멸균 효과

멸균되지 않은 Rexam 및 Bunder Glas 바틀을 에틸렌 옥사이드를 사용하여 멸균하였다. 안정성 연구를 개시하고, 에틸렌 옥사이드 레벨을 AppTec (Marietta, Georgia)에 의해 물 추출 테스트 방법 (ANSI/AAMI/ISO: 10993-7)을 이용하여, <1 ppm (주위 조건하에서)으로 측정하였다.

재료 및 방법:

알카프타딘 용액 2.5 mg/ml를 본 연구에 사용하였다. 바틀을 표 3에 나타내는 프로토콜에 따라, 에틸렌 옥사이드를 사용하여 멸균하였다:

표 3:

결과:

에틸렌 옥사이드로 멸균된 Rexam 및 Bunder Glas 바틀에 보관된 알카프타딘에 대한 화학 안정성 결과를 표 4에 요약한다.

표 4:

결론: 주위 광 조건하에 5O℃에서의 14 일간의 보관에 따르면, 알카프타딘은 감마선으로 조사된 바틀 보다 에틸렌 옥사이드로 멸균된 Bunder Glas 바틀에서 N-옥사이드 레벨이 상당히 낮다. 본 연구에서, Rexam 바틀에서의 N-옥사이드 생성량은 5O℃에서 14일간의 보관 후에는 글래스 바이알에서 관찰된 것과 유사하고 (각각 0.025% 및 0.028%), Bunder Glas 바틀 (0.074%)에서 약간 높다.

실시예 7: 비만 세포 탈과립에 대한 알카프타딘의 효과

알카프타딘의 세포 안정화 퍼텐셜을 비만 세포 안정화를 행하는 이의 능력을 조사하는 방법으로서 RBL-CCR1 (래트 호염기구성 백혈병-케모카인 수용체-1) 세포주를 이용하여 평가하였다. 세포 안정화 퍼텐셜에 대한 항알레르기약을 평가하기 위한 호염기구성 세포주의 용도가 잘 확립되어 있다. 생리적으로, 호염기구는 IgE 가교를 포함하는 유사한 탈과립 프로세스를 통해 방출되는 미리 형성된 염증 매개 물질을 함유하는 비만 세포와 유사하다. 이들 세포주를 용이하게 입수할 수 있기 때문에, 이들은 비만 세포주에서 안정화 분석을 행함에 있어서 효율을 나타낸다.

배양된 RBL-CCR1 세포를 항 DNP IgE에 감작시켰다. 감작에 이어서, 세포를 여러 농도의 알카프타딘 또는 이의 주요 활성 대사산물 (0.083%, 0.0083% 및 0.00083%) 또는 안과용 비히클 (플라시보)로 처리하고, DNP 및/또는 MIP-1α (마크로파지 염증성 단백질-1α, 탈과립 인핸서)로 자극하여, 탈과립을 유도하였다. 또한 D-DEM (둘베코 변형 이글 배지) 중의 10× 및 100× 플라시보 대조 용액 (안과용 비히클 용액)을 사용하였다.

DNP-HSA (인간 혈청 알부민에 컨쥬게이트된 2,4-디니트로페닐 합텐) 단독 및 MIP-1α 단독으로 자극한 바, 상당한 레벨의 탈과립이 유발되지 않았다. 그러나, 동시 자극으로 활발한 탈과립 반응을 유도하였다. 세 가지의 모든 탈과립 자극 (DNP-HAS 단독, MIP-1α, 및 동시 자극)에 의해, 최고 농도의 모약물 (parent drug), 대사산물, 및 플라시보는 예기치 않은 상당한 탈과립을 일으켰다.

동시 자극 분석에 있어서, 0.0083% 및 0.00083%은 동시 자극 대조군 및 음성 대조군 (각각, 플라시보 10× [D-MEM 중의 비히클 3.3%] 및 플라시보 100× [D-MEM 중의 비히클 0.33%])과 비교하여, 세포 안정화가 우수하였다. 이러한 우수성은 통계적으로 유의하였다 (양 농도에 대하여 p<0.0001). 0.0083% 및 0.00083% 농도의 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)로 처리한 바, 또한 동시 자극 대조군 및 음성 대조군 (각각, 플라시보 10× 및 플라시보 100×)과 비교하여, 세포 안정화가 우수하였다. 게다가, 통계적 유의성을 달성하였다 (양 농도에 대하여 p<0.0001). 또한, 플라시보 10× 단독으로 처리하였더니, 동시 자극 대조군과 비교하여, 약간의 안정화를 나타내었으며, 효과는 통계적으로 유의하였다 (p<0.05).

알카프타딘 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)의 첨가로, 10× 용량 레벨에서 안정화 효과가 향상되었는데, 이는 막 안정화에서의 테스트 약제의 양성 결과를 입증한다. 안정화는 100× 희석 레벨에서는 관찰되지 않았다. 전체적으로 보아, 본 연구의 결과는 알카프타딘 및 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)이 효과적인 막안정제임을 시사한다.

실시예 8: 인간 H₄ 수용체에 대한 알카프타딘의 효과

인간 히스타민 H₄ 수용체 (H₄R)에 대한 알카프타딘 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)의 약리 활성을 조사하였다. H₄R은 동정된 제 4 히스타민 수용체로, 주로 호산구, T 세포, 수지상 세포, 호염기구 및 비만 세포, 알레르기 반응의 발생 및 영속화와 밀접하게 관련된 세포 종류에 발현되는 것으로 나타난다. H₄R은 비만 세포, 호산구 및 수지상 세포 주화성을 매개하는 것으로 보여지며, 수지상 세포 및 T 세포로부터 사이토카인 생산을 행할 수 있다. 수용체에 대한 길항제는 명백히 생체 내에서 항염증성을 나타내며, 천식 및 대장염의 동물 모델에서 효과가 있다. H₄R에 결합시켜, 이들이 수용체의 작용제인지 길항제인지를 나타내기 위해 수용체로 트랜스펙션된 세포를 이용하여, 알카프타딘 및 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)을 테스트하였다.

알카프타딘 및 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)을 결합 분석을 위해 100% 디메틸술폭사이드 (DMSO) 중에 10 mM로, 세포 분석을 위해 Na/K 인산염 완충액, pH 7.0 중에 10 mM로 준비하였다. 인간 H₄ 수용체로 트랜스펙션된 SK-N-MC 세포의 세포 펠릿을 20 mM Tris-HCl/0.5 mM 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) pH 8.0 (TE 완충액) 중에서 균질화시켰다. 800 g으로 원심분리 후에 수집한 상청액을 30,000으로 30 분간 다시 원심분리하였다. 펠릿을 TE 완충액 중에서 다시 균질화시켰다. 경합 결합 연구에 관해서는, 막을 25℃에서 45 분간 테스트 화합물을 함유하거나 함유하지 않는 10 nM [³H]히스타민으로 인큐베이션하였다. 비특이적 결합을 100 μM 냉각 히스타민으로 정의하였다. K_i 값을 [³H]히스타민에 대한 5 nM의 실험적으로 결정된 K_d 값 및 10 nM의 리간드 농도에 기초하여 쳉 (Cheng) 및 프루소프 (Prusoff)에 따라 계산하였다. 7개의 농도의 화합물을 10^-11 내지 10^-5 M에 걸쳐서 테스트하였으며, 각 농도에 대하여 3회 행하였다. 3회 행한 값을 평균하여, IC_5O (50% 억제 농도) 곡선을 산출하였다. 이러한 분석을 2회 행하여, 그 결과를 2개의 런의 평균값으로 나타낸다. 리포터 유전자 콘스트럭트 및 인간 H₄ 수용체 풀 코딩 영역을 발현하는 SK-N-MC 세포주를 생성시켰다. 리포터 유전자는 환상 아데노신 모노포스페이트 (cAMP) 응답 배열의 조절하의 β-갈락토시다아제이었다. 세포를 분석 전날 밤에 96-웰 플레이트에 두었다. 길항제를 히스타민을 첨가하기 10분 전에 가했는데, 세포 배지에 직접 가하였다. 포르스콜린 (5 μM 최종 농도)를 히스타민 첨가 후 10분 후에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 6 시간 동안 인큐베이터에 되돌려 놓았다. 그 다음에, 배지를 흡인하고, 세포를 0.1× 분석 완충액 (10 mM 인산나트륨, pH 8, 0.2 mM MgSO₄, 0.01 mM MnCl₂)으로 용해시켜, 실온에서 10 분간 인큐베이션하였다. 그 다음에, 세포를 0.5% 트리톤 및 40 mM β-머캅토에탄올을 함유하는 1× 분석 완충액 100 ㎕로 10 분간 인큐베이션하였다. 1 mg/mL 기질 용액 (클로로페놀 레드 β-D-갈락토피라노시드; Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN) 25 ㎕를 사용하여 착색시켰다. 흡광도 570 nm에서 마이크로플레이트 리더에서 컬러를 정량 (quantitation)하였다. 작용제 측정을 위해, 히스타민 부재하에 10^-11 내지 10^-4 M의 화합물의 적정을 중복하여 행하였다. 중복하여 행한 값을 평균하여, 포르스콜린에 의한 환상 AMP 제조 억제에 대한 EC_5O (유효 농도 50)를 계산하는데 사용하였다. 이러한 분석을 3회 반복하였다. 길항제 측정을 위해, 1.2, 3.7, 11, 33, 및 100 μM 화합물의 존재하에 10^-10 내지 10^-3 M의 히스타민 의 적정을 중복하여 행하였다. 중복으로 행한 것을 평균하고, 화합물의 각각의 상이한 농도에서의 히스타민에 대한 EC_5O을 쉴드 (Schild) 플롯에 사용하여, pA₂값을 유도하는데, 이는 히스타민 EC_5O을 2배로 시프트하는데 필요한 화합물의 농도의 네가티브 로그이다.

[³H]-히스타민 결합을 히스타민 H₄ 수용체로 안정하게 트랜스펙션된 SK-N-MC 세포의 막으로 이동시키는 능력을 알카프타딘 및 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)에 대하여 테스트하였다. [³H]-히스타민과의 경합은 화합물이 수용체에 결합할 수 있다는 것을 나타낸다. 결합 곡선으로부터, 알카프타딘이 2.9 μM의 평균 K_i 값과 함께 수용체에 결합하는 반면에, 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)은 10 μM 이하의 농도에서 수용체에 결합하지 않는다는 것을 알 수 있었다.

알카프타딘 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4- 피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)이 H₄ 수용체 작용제인지를 테스트하기 위해, 기능 분석을 인간 히스타민 H₄ 수용체로 트랜스펙션된 SK-N-MC 세포에 대하여 행하였다. 포르스콜린에 의해 유도되는 cAMP 증가를 억제하는 화합물의 능력을 평가하였다. 그 결과로부터, 히스타민이 수용체의 작용제이며, 포르스 콜린에 의해 유도되는 cAMP 레벨의 용량 의존성 억제의 원인이 된다는 것을 알 수 있었다. 그러나, 알카프타딘도 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)도 cAMP 레벨의 억제를 나타내지 않으므로, 어느 쪽도 100 μM 이하의 농도에서 H₄ 수용체의 작용제가 아니다라는 것을 알 수 있었다.

알카프타딘 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4- 피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)이 H₄ 수용체의 길항제인지를 테스트하기 위해, 포르스콜린에 의해 유도되는 cAMP 증가에 대한 히스타민 억제의 EC₅₀을 시프트하는 화합물의 능력을 인간 히스타민 H₄ 수용체로 트랜스펙션된 SK-N-MC 세포에서 평가하였다. 그 결과로부터, 알카프타딘의 농도 증가가 H₄ 수용체의 히스타민 조절에 대한 EC₅₀의 증가를 유도하는 히스타민 (HA) 용량 반응 곡선에 있어서의 평행 우측 시프트를 일으키는 것을 알 수 있었다. 이러한 효과는 알카프타딘이 수용체의 경쟁적 길항제인 것을 나타낸다. 쉴드 플롯의 x 절편은 5.6의 pA₂ 값을 제공하며, 이는 히스타민 EC₅₀에서의 2배 시프트를 유도하는데 필요한 길항제 농도의 네가티브 로그를 나타낸다. 이론적으로는, pA₂ 값은 pK_i와 동일해야 하며, 이는 실제로 관찰된다 (5.6 대 5.5). 알카프타딘 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)은 100 μM 이하의 농도에서 어떠한 시프트도 일으키지 않았으며, 이 는 수용체에 결합하는 이의 무능력과 일치한다.

이러한 결과는 알카프타딘이 2.9 μM의 평균 K_i 값과 함께 수용체에 결합한다는 것을 나타낸다. 알카프타딘도 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0)도 100 μM 이하의 농도에서 H₄ 수용체의 작용제가 아니다. 그러나, 알카프타딘, 알카프타딘 또는 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산 (CAS # 147083-93-0) (100 μM 이하)이 아니면, 2.9 μM의 K_i 값 및 5.6의 pA₂ 값과 함께 인간 히스타민 H₄ 수용체의 길항제이다.

실시예 9: 결막 상피의 완전성에 대한 알카프타딘의 효과

결막 상피의 완전성을 유지하는 알카프타딘의 능력을 조사하기 위해, 밀착 결합 단백질 ZO-1 및 E-카드헤린의 발현 변화 (E-카드헤린 유도 및 ZO-1에 대한 초점성에서 광범성으로의 정성적 변화)를 특정한 결막 알레르겐 챌린지에 따라 평가하였다. 이러한 변화는 결막 및 다른 상피 조직의 투과성 증가와 관련되어 있다. 생체내 실험에서 알카프타딘 (챌린지 1 및 2 시간 전에 국소 투여)이 이들 단백질의 조절에 어떤 영향을 미치는가를 조사하였다.

마우스를 복강내 투여 (0, 7, 및 15일째) 및 점안약 주입 (8 및 15일째)을 통해 수산화알루미늄 중의 쇼트 랙위드 (SRW)로 감작시켰다. 20일째에, 마우스를 SRW 만을 함유하는 점안약으로 감작시켰다. 27일째에, 마우스를 챌린지 1 및 2 시간 전에 5㎕ 알카프타딘 또는 비히클로 국소적으로 처리하였다. SRW를 양쪽 눈에 국소적으로 주입하였다. 나이브 안구에서의 이들 단백질의 발현도 모니터하였다. 밀착 결합 단백질 ZO-1 및 E-카드헤린의 발현 변화도 SRW로 결막 알레르겐 챌린지 를 행한 후 1 시간 후에 관찰하였다. ZO-1 및 E-카드헤린에 대하여 특이적인 FITC에 컨쥬게이트된 모노클로날 항체를 이용하여, 단백질을 검출하여, 공초점 현미경법 (Ziess)으로 시각화하였다. 나이브 안구는 감작되거나 챌린지되지 않은 마우스의 것이었다.

나이브 (챌린지 및 처리를 행하지 않음) ZO-1 및 E-카드헤린 단백질은 초점성 정성적 성질을 나타내었다. 그러나, 이를 비히클로 처리된 단백질과 비교하면, 비히클로 처리된 단백질은 광범성 정성적 변화를 나타내었다. 초점성에서 광범성 염색으로의 전이는 상피의 투과성 증가와 관련되어 있다. 나이브 ZO-1 및 E-카드헤린 단백질과 알카프타딘으로 처리된 단백질을 비교한 결과, 정성적 성질에 최소한도의 차이를 나타낸다. ZO-1 및 E-카드헤린 단백질의 이미지는 나이브 (음성 대조군) 및 알카프타딘 처리와 차이가 없거나 최소 한도의 차이를 나타내는 반면에, 비히클 처리와는 명백한 차이가 있었다.

이러한 결과는 알카프타딘이 결막 상피 폐쇄 소대의 완전성을 유지하고 (초점성 ZO-1 발현으로 대표되는), 특정한 결막 알레르겐 챌린지에 따라 통상 관찰되는 E-카드헤린 발현의 유도를 억제하는 것을 시사한다.

실시예 10: 혈관 누출 및 세포 침윤물에 대한 알카프타딘의 효과

알레르기성 염증을 2개의 다른 단계, 초기 및 후기로 분리할 수 있다. 초기 염증 반응은 비만 세포 탈과립에 의해 빠르게 일어나고, 혈관 내피세포 갭핑 및 누 출 (즉, 종창) 및 가려움을 특징으로 한다. 후기 염증 반응은 비만 세포 탈과립 약 24 시간 후에 피크에 이르며, 세포 침윤물 (호산구 및 호중구)의 출현을 특징으로 한다. 호산구 및 호중구는 염증 반응 후기를 누승 (exponentiation)하는데 크게 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 염증 부위에 이를 때에, 이들 세포는 각종 퍼옥시다아제, 및 침입 병원체를 전멸시키는 기능을 하는 다른 항미생물 인자를 방출하지만, 중증 또는 만성 염증인 경우에, 주위 조직을 손상시키고, 또한 전염증성 메디에이터의 방출을 일으킨다.

국소적 치료가 알레르기성 결막염의 뮤린 모델의 초기 및 후기 알레르기성 염증을 감소시킬 수 있는지를 결정하도록 알카프타딘 안과용 용액을 평가하였다. 에반스 블루 염료 누출량을 이용하여, 초기 염증 반응 시의 혈관 투과성에 대한 효과를 평가하였다. 결막을 24 시간째에 취해, 염색하고, 호중구 및 호산구 침윤의 존재를 평가하여, 후기 항염증 활성을 평가하였다.

모든 마우스를 복강내 투여 (0, 7, 및 14일째) 및 점안약 주입 (8 및 15일째)을 통해 수산화알루미늄 중의 쇼트 랙위드 (SRW)로 감작시켰다. 20일째에, 마우스를 SRW의 점안약으로 다시 감작시켰다.

27일째에, 알카프타딘 2.5 mg/ml 또는 비히클의 임상 용량의 2개의 국소적 투여량을 챌린지 1 및 2 시간 전에 주입하였다. 알카프타딘 및 비히클을 랜덤화 코드에 기초한 처리 암 (arm)으로서 5㎕ 포화 용량으로 국소적으로 투여하였다. 처리 암은 다음과 같았다:

1. 음성 대조군. 감작됨, 챌린지 행하지 않음, 미처리 (음성 대조군) (N=12)

2. 감작됨, 챌린지 행함, 미처리 (양성 대조군) (N=12)

3. 감작된, 챌린지 행함, 알카프타딘 2.5 mg/ml 처리 (N=10)

4. 감작됨, 챌린지 행함, 비히클 처리 (N=12)

알카프타딘 처리 암을 제외한 N=6 동물에 대하여 알레르겐 챌린지를 행하여, 에반스 블루 염료 삼출에 의해, 혈관 누출량을 측정하였다. N=4 동물을 희생시켜 테스트하였다 (2 마리의 동물이 이 절차 시에 죽었다). 처리군을 T 테스트를 이용하여 비교하고, p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 고려되었다. 결막 알레르겐 챌린지 (CAC) 후 24 시간후에 남아 있는 동물, 처리 암 당 N=6에 대하여 절개를 행하여, 원개 부위의 호산구 및 호중구 동원을 평가하였다. 마이크로톰에서 자르기 전에 동결 또는 플라스틱 블록으로서 조직을 처리하였다. 호산구 및 호중구의 수를 Giemsa 또는 H&E 염색된 절편의 광학 현미경법 또는 세포 특이적 모노클로날 항체를 이용한 면역조직화학에 의해 측정하였다. 처리군을 T 테스트를 이용하여 비교하고, p<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 고려되었다

음성 대조군 (챌린지를 행하지 않은 그룹 - 그룹 1)과 챌린지를 행하나 미처리된 (그룹 2) 그룹 간에는 유의차가 없었다. 그러나, 예상했던 대로, 높은 스코어의 혈관 누출을 갖는 그룹 2와는 수치적 차이가 있었다. 비히클 처리 (그룹 4) 그룹과 알카프타딘 처리 (그룹 3) 그룹 간에는 유의차 (p < 0.05)가 있었는데, 알카프타딘은 비히클과 비교하여 혈관 누출을 성공적으로 예방한다는 것이다. 예상했던 대로, 음성 대조군 (챌린지를 행하지 않은 그룹 - 그룹 1)과 미처리되나 챌린 지를 행한 그룹 (그룹 2) 간에는 유의차가 있었다. 알카프타딘 (그룹 3)은 대조군과 비교하여, 호산구 또는 호중구 동원을 예방하지 않았다.

혈관 누출에 관해서는, 혈관 누출의 전형적인 유도는 그룹 2 (챌린지를 행하나 미치리됨)에서 관찰되지 않았다. 그러나, 알카프타딘은 비히클 단독으로 처리된 마우스와 비교하여, CAC를 행하여 혈관 누출을 그다지 억제시키지 않았다. 이전의 연구에 대한 관찰에 기초하여, 그룹 2의 저 레벨의 혈관 누출은 비정형적이며, 대부분 생체 내 실험과 관련된 실험 오차로 인한 것 같다. 알카프타딘으로 처리된 동물에서의 혈관 누출 감소는 이러한 결막 알레르겐 챌린지 모델에서의 알카프타딘에 관한 치료적 역할을 지지한다.

음성 대조군과 양성 대조군 간의 유의차는 모델이 예상했던 대로 작용했다는 것을 시사한다. 그러나, 사용된 용량에서, 알카프타딘은 감작된 마우스에서 알레르겐 챌린지를 행한 알레르기성 결막염의 뮤린 모델에 있어서, 후기 반응에서 호산구 또는 호중구 동원을 억제하지 않는다.

본 연구의 결과는 알카프타딘이 결막 알레르겐 챌린지에 따라 혈관 누출을 그다지 억제하지 않았다는 것을 나타낸다. 그러나, 감작된 마우스에서 알레르겐 챌린지를 행한 알레르기성 결막염의 뮤린 모델에 있어서, 후기 반응에서 호산구 또는 호중구 동원을 억제하지 않는다는 것으로 나타난다.

실시예 11: 환자의 알카프타딘의 전신 레벨

환자에게 7일간 알카프타딘의 0.25% 안과용 용액으로 양쪽에 투여하였다. 투약 전, 및 1일 및 7일째에 약제 주입 후 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 및 18 시간 후에, 환자의 혈장 중 농도를 평가하였다. 알카프타딘의 혈장 농도가 빠르게 C_max에 이르고, 투약 후 3 시간 후에 정량 하한값 (0.01 ng/mL) 이하로 감소하였다. 평균 C_max 값 (임의의 시점에서 측정된 최고값)은 상당히 낮고, 1일째의 평균값은 0.051 ng/mL이며, 7일째의 평균값은 0.060 ng/mL이고; 최대 혈장 농도는 모든 대상에 대하여 0.12 ng/mL 미만이었다.

실시예 12: 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산의 전신 레벨

환자에게 7일간 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산의 0.25% 안과용 용액으로 양쪽에 투여하였다. 투약 전, 및 1일 및 7일째에 약제 주입 후 0.25, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 및 18 시간 후에, 환자의 혈장 중 농도를 평가하였다. 6,11-디하이드로-11-(1-메틸-4-피페리디닐리덴)-5H-이미다조[2,1-b][3]벤즈아제핀-3-카복실산의 혈장 농도가 빠르게 C_max에 이르고, 투약 후 12 시간 후에 정량 하한값 (0.1 ng/mL) 이하로 감소하였다. 1일째의 평균 C_max 값은 3.228 ng/mL이며, 7일째의 평균 C_max 값은 2.175 ng/mL이고; 최대 혈장 농도는 7.23 ng/mL이었다.

본 명세서에 인용되거나 기재된 각각의 특허, 특허 출원 및 공보의 전체 개시는 본 명세서에서 참조로 포함된다.

당업자는 다양한 변경 및 변형이 본 발명의 바람직한 실시형태에 대하여 이뤄질 수 있고, 이러한 변경 및 변형이 본 발명의 범위를 이탈하지 않고서 이뤄질 수 있음을 인지할 것이. 따라서, 첨부된 청구의 범위는 본 발명의 참된 정신 및 범위 내에 속하는 것으로 이러한 모든 동등한 변형을 망라하는 것으로 의도된다.

Claims

0.005 중량% 내지 10 중량%의 알카프타딘, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물 또는 이들의 혼합물 및 안과용 담체를 포함하는, 안구 알레르기 또는 안구 염증의 임상 증상 치료 또는 예방용 안과용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 0.1 중량% 내지 0.4 중량%의 알카프타딘, 또는 0.2 중량% 내지 0.35 중량%의 알카프타딘을 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 알카프타딘의 함량이 0.015 mg 초과 0.25 mg 미만인 조성물.
제1항에 있어서, 알카프타딘의 함량이 0.075 mg 내지 0.125 mg인 조성물.
제1항에 있어서, 알카프타딘의 함량이 1.0 mg/mL 내지 5.0 mg/mL인 조성물.
제5항에 있어서, 알카프타딘의 함량이 2.5 mg/mL인 조성물.
제1항에 있어서, 알카프타딘의 투여량이 3.5 ㎍/kg/day 이상 7.1 ㎍/kg/day 미만인 조성물.
0.005 중량% 내지 10 중량%의 하기 화학식 II의 화합물, 이의 약제학적으로 허용가능한 염, N-옥사이드, 수화물, 용매화물 또는 이들의 혼합물 및 안과용 담체를 포함하는, 안구 알레르기 또는 안구 염증의 임상 증상 치료 또는 예방용 안과용 약제학적 조성물:

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제8항에 있어서, 0.1 중량% 내지 0.4 중량%의 화학식 II의 화합물, 또는 0.2 중량% 내지 0.35 중량%의 화학식 II의 화합물을 포함하는 조성물.
제8항에 있어서, 화학식 II의 화합물의 함량이 0.015 mg 초과 0.25 mg 미만인 조성물.
제8항에 있어서, 화학식 II의 화합물의 함량이 0.075 mg 내지 0.125 mg인 조성물.
제8항에 있어서, 화학식 II의 화합물의 함량이 1.0 mg/mL 내지 5.0 mg/mL인 조성물.
제12항에 있어서, 화학식 II의 화합물의 함량이 2.5 mg/mL인 조성물.
제8항에 있어서, 화학식 II의 화합물의 투여량이 3.5 ㎍/kg/day 이상 7.1 ㎍/kg/day 미만인 조성물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 완충액, 등장제, 방부제 또는 킬레이트제를 추가로 포함하는 조성물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 염화나트륨, 인산나트륨, 염화벤잘코늄 또는 에데트산이나트륨을 추가로 포함하는 조성물.
제1항 또는 제8항에 있어서, 안구 알레르기가 알레르기성 결막염인 조성물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 용액, 현탁액, 겔 또는 연고 형태인 조성물.
제1항 또는 제8항에 있어서, 임상 증상이 눈 가려움, 안구 충혈, 안검 종창, 결막 부종, 눈물 흘림, 비염, 코막힘, 콧물, 코 가려움, 귀/입천장 가려움 및 재채기로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제1항 또는 제8항에 있어서, 적어도 2개의 임상 증상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물.
제20항에 있어서, 적어도 2개의 임상 증상은 눈 가려움 및 안구 충혈인 조성물.
제1항 또는 제8항에 있어서, 적어도 3개의 임상 증상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물.
제22항에 있어서, 적어도 3개의 임상 증상이 눈 가려움, 안구 충혈, 안검 종창, 결막 부종 및 눈물 흘림으로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제1항 또는 제8항에 있어서, 안구 알레르기 또는 안구 염증과 연관된 기계적 증상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물.
제24항에 있어서, 기계적 증상이 혈관 누출, 결막 상피 폐쇄 소대의 완전성의 감소, H4 수용체 조절 및 비만 세포 분해로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제1항 또는 제8항에 있어서, 안구 알레르기 또는 안구 염증의 코 증상을 치료하거나 예방하기 위한 조성물.
제26항에 있어서, 코 증상이 비염, 코막힘, 콧물, 코 가려움 및 재채기로 구성되는 그룹 중에서 선택되는 조성물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 감마선 조사 또는 에틸렌 옥사이드 가스에 의해 멸균된 조성물.
약제학적으로 허용가능한 포장(packaging) 물질로 제조되는 용기(container) 내에 함유된, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 안구 알레르기 또는 안구 염증의 임상 증상 치료 또는 예방용 안과용 약제학적 조성물을 포함하는 키트.
제29항에 있어서, 안과용 약제학적 조성물이 용액, 현탁액, 겔 또는 연고 형태인 키트.
제29항에 있어서, 약제학적으로 허용가능한 포장 물질이 저밀도 폴리에틸렌 또는 고밀도 폴리에틸렌인 키트.
제29항에 있어서, 용기가 안과용 약제학적 조성물로 충전되기 전에 에틸렌 옥사이드 가스에 의해 멸균되는 것을 특징으로 하는 키트.
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