CN101460176B

CN101460176B - 眼变态反应治疗

Info

Publication number: CN101460176B
Application number: CN2007800202497A
Authority: CN
Inventors: J·帕拉斯拉姆普里亚; A·因格尔曼; F·詹森斯; A·梅根斯
Original assignee: Vistakon Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Johnson and Johnson Vision Care Inc
Priority date: 2006-03-31
Filing date: 2007-03-26
Publication date: 2012-11-28
Anticipated expiration: 2027-03-26
Also published as: UA94938C2; AR111697A2; CN101460176A

Abstract

治疗或预防眼变态反应和炎症及其症状的组合物、药盒和方法，其包含阿卡他定或其可药用盐。

Description

眼变态反应治疗

发明领域

本发明涉及眼科病症的治疗或预防。更具体而言，本发明涉及阿卡他定(alcaftadine)或6，11二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉(piperdinylidene))-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸的组合物，以及用这类组合物治疗或预防眼炎症和变态反应的方法。

相关申请

本申请为美国申请专利系列号为11/688,016的非临时申请的部分继续申请，其要求享有2006年3月31日提交的发明名称为“Ocular AllergyTreatments”的美国申请专利系列号为60/788185的临时申请的优先权。

背景

眼睛表面的变应性紊乱包括各式各样的病理学病症，包括季节性变态反应性结膜炎(“SAC”)、常年变态反应性结膜炎(“PAC”)、春天角膜结膜炎和特异反应性角膜结膜炎。据估计普通人群中20％以上遭受某种形式的眼变态反应。其中，大约90％遭受SAC、PAC或这两种疾病。

眼变态反应是一种IgE依赖性的(I型)超敏性炎性反应，最通常影响20至40岁之间的成人。在易感个体中，过敏原与眼睛表面的最初接触刺激过敏原特异性免疫抗体(IgE)的产生。然后IgE与眼粘膜中膜结合的FcεR-1受体na

ve肥大细胞结合。肥大细胞是一种粒细胞，含许多预先形成的介质，包括组胺和蛋白多糖。一旦肥大细胞被激活，新形成的化学介质就形成，其包括前列腺素D2、白细胞三烯和血小板凝聚因子。随后过敏原与IgE覆盖的肥大细胞接触，导致肥大细胞微粒内所含的预先形成和新形成的介质释放。

变态反应性结膜炎的临床症状包括眼睑的发痒、红肿、肿胀、结膜水肿和流泪。组胺是该变态反应中的主要介质。肥大细胞脱粒后，组胺与位于结膜内的受体结合。组胺与神经细胞上的H1受体结合诱发痒感。血管内皮上的H1和H2受体的激活诱发血管舒张并增加血管通透性，促进炎症介质如IL-1α和IL-1β迁移进入血管内且继发粒细胞补充到结膜组织内。组胺受体的激活导致眼睛充血、结膜水肿、眼睑肿胀以及体液由血管渗入周围的组织，从而导致炎症。粒细胞如嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞进入结膜组织内的趋化性从而导致进一步的组织损伤。

历史上，抗组胺药曾经是治疗眼睛变态反应病的主要支持。这类治疗在作用的效力、特异性和持续时间方面不同。第一代抗组胺药如非尼拉敏和安他唑啉因其作用迅速而众所周知。不幸地，这类化合物还引起眼睛不适且其效力只在几小时之后减弱。第二代H1拮抗剂如左卡巴斯汀和emadastine存在较小的眼睛不适和具有稍微较长的作用持续时间。然而，这类化合物具有有限的抗炎作用，且对抑制炎性反应的晚期成分几乎没有作用。

目前，对眼变态反应治疗最有效的治疗是诸如奥洛他定、酮替芬和氮

斯汀的药物，其兼有抗组胺和稳定肥大细胞的性能。这类治疗通常耐受性好且其作用能持续高达8至12小时。尽管有报道优于仅仅影响变态反应单一成分的化合物，但这类化合物通常不能减轻一种以上的眼变态反应症状。

一种药物对眼睛发红、结膜水肿和眼睑肿胀的影响提供超过现有治疗的明显改善。另外，由于大部分新型眼科抗过敏剂具有有限的作用持续时间，因而需要每天给药两次。具有较长作用持续时间的局部用制剂将是有利的，因为它可以是每天滴入一次。因此，需要能在作用的效力和持续时间方面提供益处同时提供类似安全特性的新治疗。本发明涉及这些目的和其它目的。

发明详述

本发明包括通过将阿卡他定施用于患者的眼睛来治疗或预防眼变态反应的方法。本文中描述的发明至少部分基于以下的意外发现：阿卡他定治疗或预防多种眼变态反应的不同症状，使其尤其对治疗或预防眼变态反应有用。本发明的方法、眼用组合物和药盒以活性药物的最小全身吸收来减轻眼变态反应和眼睛炎症的临床症状。当被配制用于局部给药到眼睛时，这种不同寻常的性能与优良的安全特性和耐受性的结合，使得该药物尤其对眼变态反应的治疗或预防有用。特别地，本发明包括治疗或预防眼变态反应临床症状的方法，包括施用有效量的阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药、或其混合物于患者的眼睛。

阿卡他定，化学名称亦称6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-甲醛，具有下面的化学式：

式I。

该化合物及其制备方法公开于美国专利US5,468,743，在所有的情况下全文引入本文作为参考。本发明的优选方法和眼用组合物含式I化合物阿卡他定，但作为选择可以以阿卡他定盐的形式存在。阿卡他定的可药用盐可由有机酸和无机酸形成。适宜的酸包括但不限于乙酸，4-乙酰胺基苯甲酸，苯磺酸，樟脑磺酸，柠檬酸，2，3:4，6-二-O-异丙叉-2-酮-古洛糖酸一水合物，甲酸，富马酸，盐酸，氢溴酸，乳酸，马来酸，L-(-)苹果酸，苹果酸，丙二酸，扁桃酸，甲磺酸，萘磺酸，硝酸，草酸，酞酸，磷酸，丙酸，DL-焦谷氨酸，糖精，水杨酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，三氟乙酸，L-(+)酒石酸和甲苯磺酸。

本文中所用的术语“眼变态反应”指由病原性的过敏原所引起的眼睛表面的变应性紊乱。变态反应性结膜炎是优选的眼变态反应，且包括各式各样的病理学病症，包括季节性变态反应性结膜炎(“SAC”)、常年变态反应性结膜炎(“PAC”)、春天角膜结膜炎和特异反应性角膜结膜炎。

眼变态反应的“临床症状”包括但不限于眼睛发痒、眼睛发红、眼睑肿胀、结膜水肿、流泪、以及鼻炎、鼻充血、流鼻涕、鼻瘙痒以及耳/腭瘙痒、和打喷嚏。优选本发明的方法治疗或预防至少两种、更优选至少三种、更优选四种以上的临床症状。例如，本发明的方法治疗或预防下列中的至少一种与变态反应性结膜炎相关的临床症状：眼睛发痒、眼睛发红、结膜水肿、流泪、眼睑肿胀、鼻充血或流鼻涕。优选地本发明的方法治疗或预防眼睛发痒和眼睛发红；治疗或预防眼睛发痒、眼睛发红和结膜水肿；治疗或预防眼睛发痒、眼睛发红、结膜水肿和流泪；治疗或预防眼睛发痒、眼睛发红、结膜水肿、流泪和眼睑肿胀；治疗或预防眼睛发痒、眼睛发红、结膜水肿、流泪、眼睑肿胀和鼻充血；治疗或预防眼睛发痒、眼睛发红、结膜水肿、流泪、眼睑肿胀、鼻充血和流鼻涕；治疗或预防鼻充血和流鼻涕。

本文中所用的术语“患者”，指动物，包括哺乳动物，优选为人。“有效量”的阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物，为治疗或预防眼变态反应的症状所需要的物质的量。有效量在患者与患者之间可能有差异，取决于阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物，单独或与一种或多种组合药联合在患者身上产生期望的反应的能力。决定有效量的其它因素将包括但不限于疾病状态或所要缓解的病症的严重程度、激素水平、患者的年龄、性别、体重、患者的状态以及所治疗病理病症的严重程度，再加上特定患者的同时使用的药物或特定的饮食，以及本领域普通技术人员认识到的其它因素，适宜的剂量最终由主治医师判断。可对给药方案进行调整以提供改善的治疗响应。有效量还要考虑成分的任何有毒或有害作用要被治疗有益作用超过。对于大多数患者优选50μL一滴的0.25％眼用溶液含0.125mg的阿卡他定。假如100％的药物被全身吸收，一个70kg的人，双眼使用滴眼剂(指在每只眼睛中使用)，每天一次，将接受0.25mg/d或每天3.57μg/kg的剂量。由于可能不是全部的量将被吸收，因此假定实际的全身接触将较低是合理的。优选阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的有效量，在小于约0.25mg和大于或等于约0.015mg之间，更优选在约0.030mg和约0.14mg之间，更优选在约0.075mg和约0.125mg之间。

本文中所用的术语“可药用”指当与本发明阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物使用时一般对患者无毒或无害的物质，包括当阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物配制成眼科组合物的形式时，如本文中定义。

阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物，可以任何能输送药物至患者眼部的给药途径、以任何可药用剂型施用于患者。因此，药物可以以本文中定义的眼科组合物的形式、或任何其它适于将有效量的药物短期或长期输送至患者眼睛的制剂、装置或机械装置(mechanism)施用于患者。药物可以以含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物或用它们包衣的眼科插入物，包括但不限于隐形眼镜、punctal塞子、或眼睛插入物，施用于患者。在本发明优选的方法中，药物以眼科组合物的形式局部施用，所述眼科组合物选自眼用溶液或混悬液(即滴眼剂)、眼用药膏或眼用凝胶剂。

另外，本发明包括治疗或预防眼炎症临床症状的方法，包括施用有效量的阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药、或其混合物于患者的眼睛。术语阿卡他定、临床症状、患者、可药用的、可药用盐和有效量都具有它们前述的含义和优选范围。术语眼炎症指眼睛前部任何部分的炎症。这类眼炎症可由下列中的任何原因或下列原因中的任何组合所引起：干眼、佩戴隐形眼镜、细菌感染、真菌感染、或病毒感染。优选的眼炎症病因是细菌感染或病毒感染。

此外本发明包括治疗或预防与眼变态反应或眼炎症相关的机理症状的方法，包括施用有效量的阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药、或其混合物于患者的眼睛。术语阿卡他定、患者、可药用的、可药用盐、有效量、眼变态反应和眼炎症都具有它们前述的含义和优选范围。“机理症状”是引起或抑制诸如眼变态反应或眼炎症的疾病状态的症状的细胞反应。机理症状包括但不限于血管渗漏、结膜上皮紧密接合的完整性降低、H4受体的调节、以及肥大细胞降解。本发明的优选方法治疗或预防至少两种机理症状，更优选治疗或预防至少三种机理症状，更优选治疗或预防至少四种机理症状。例如优选的方法治疗或预防血管渗漏、和结膜上皮紧密接合的完整性降低；治疗或预防血管渗漏、结膜上皮紧密接合的完整性降低、和H4受体的调节；治疗或预防血管渗漏、结膜上皮紧密接合的完整性降低、H4受体的调节、和肥大细胞降解。

进一步地，本发明包括治疗或预防眼变态反应的鼻症状的方法，包括施用有效量的阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药、或其混合物于患者的鼻部。术语阿卡他定、患者、可药用的、可药用盐、眼变态反应和有效量都具有它们前述的含义和优选范围。变态反应性的“鼻症状”为如上定义的临床症状的子集，包括鼻炎、鼻充血、流鼻涕、鼻部瘙痒和打喷嚏。优选的鼻部症状是流鼻涕和鼻充血。

阿卡他定可以如上文所述的眼用组合物的形式或适于短期或长期将有效量药物递送至患者鼻部(优选患者的鼻孔)的任何其它制剂、装置或机械装置施用于患者。在本发明优选的方法中，将阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物以眼用组合物的形式局部施用于患者的鼻孔，眼用组合物的形式选自眼用溶液或混悬液(即，滴鼻剂和喷雾剂)、眼用药膏或眼用凝胶剂(如本文中定义的)。

进一步地本发明包括治疗或预防眼变态反应临床症状的方法，包括施用含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药、或其混合物的眼用组合物于患者的眼睛。术语阿卡他定、临床症状、眼变态反应、患者、可药用的和可药用盐都具有它们前述的含义和优选范围。

本文中所用的术语“眼用组合物”指适于施用于眼的任何可药用的制剂、递送装置、机械装置或系统。术语“眼用组合物”包括但不限于溶液、混悬液、凝胶剂、膏剂、隐形眼镜、植入物、喷雾剂、贮药库或适于将阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物短期或长期递送至眼部的任何其它类型的制剂、装置或机械装置。与口服或可注射制剂相反，眼用组合物显示出与它们施用于眼部相关的特定技术性能，包括避免诱发各种反应的可药用眼用赋形剂的使用，各种反应例如结膜和角膜的刺激、眼睑的闭合(closure)、眼泪的分泌以及疼痛反应。优选的本发明眼用组合物有利地为含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用溶液或混悬液(即，滴眼剂)、眼用药膏或眼用凝胶剂的形式。取决于所选择的特定形式，组合物可含各种添加剂如缓冲剂、等渗剂(isotonizing agents)、增溶剂、防腐剂、增粘剂、螯合剂、抗氧化剂以及pH调节剂。

适宜的防腐剂的实例包括但不限于氯丁醇、脱氢醋酸钠、苯扎氯铵、十六烷基吡啶鎓氯化物、苯乙醇、对羟基苯甲酸酯、以及苄索氯铵。增粘剂可以选自，例如甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、羧甲基纤维素、硫酸软骨素、以及它们的盐。适宜的增溶剂包括但不限于，聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙二醇、聚山梨酯80和聚氧化乙烯单硬脂酸酯。典型的螯合剂包括但不限于，依地酸钠、柠檬酸、美国专利申请号60/783,557(2006年3月17日提交的，发明名称为＂使氧化不稳定的药物组合物稳定的方法(Methods forStabilizing Oxidatively Unstable Pharmaceutical Compositions)＂)及其相应的非临时申请中定义的稳定剂，在此全文引入作为参考。稳定剂包括但不限于，例如，依地酸钠和亚硫酸氢钠。

有用的pH调节剂通常选自，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、柠檬酸、磷酸、乙酸、以及盐酸。眼用组合物的pH可从约5至约8，更优选从约6.5至约7.5。更优选地，眼用组合物的pH为约7.0。有用的缓冲剂包括但不限于硼酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、碳酸盐缓冲剂、以及醋酸盐缓冲剂。眼用组合物中缓冲剂的浓度可从约1mM至约150mM或更高变化，取决于所选择的特定缓冲剂。优选地，缓冲剂的浓度小于100，更优选为约1mM至约25mM，更优选浓度为约1mM至约20mM。

本文中所用的术语“赋形剂(vehicle)”是指包括任何适于眼用的载体、稀释剂或赋形剂(excipient)。“赋形剂(excipient)”指提供一个或多个整体(bulk)、赋予令人满意的加工性能、有助于控制溶出速率、以及赋予组合物其它合乎需要的特性的成分。该术语尤其包括本领域的普通技术人员熟知的化合物，例如在

Handbook of Pharmaceutical Excipients，(American PharmaceuticalAssociation，Washington，D.C.and Pharmaceutical Press，London，England，4^thed.2003)中描述的化合物，在此全文引入作为参考。特别地，对赋形剂进行选择使得眼用组合物不引起眼泪的分泌，那将带走活性成分。可接受的赋形剂为本领域技术人员所熟知，本领域技术人员将知道如何根据期望的制剂来选择它们。

当浓度、量、百分比及其它数字资料在本文中以范围的形式表述或给出时，应理解为这样的范围形式仅仅是为了方便和简洁而使用的，因此要灵活地解释为不仅包括范围边界值明确地叙述的数值，而且包括范围内的每一个单个数值或包含的子区间，如同每个数值和子区间被明确地叙述一样。作为例证说明，“约1重量％至约10重量％”的浓度范围要解释为不仅包括约1重量％至约10重量％明确叙述的浓度，而且包括所述范围内的单个的浓度和子区间。因此，单个的浓度如2重量％、5重量％和8重量％、以及子区间如1重量％至3重量％、5重量％至9重量％等等都将包括在该数值范围内。本文中所用的术语“约”指增或减所述值的大约百分之十，因此“约50％重量”指大约45％至55％重量。

典型地，本发明眼用组合物中阿卡他定的浓度将是约0.005％重量至约10.0％重量，优选为约0.005至约0.4％的浓度，特别优选为约0.1％至约0.35％的浓度。50μL一滴的0.25％眼用溶液含0.125mg的阿卡他定。假如100％的药物被全身吸收，一个70kg的人，双眼使用滴眼剂(指在每只眼睛中使用)，每天一次，将接受0.25mg/d、或每天3.57μg/kg的剂量。由于可能不是全部的量将被吸收，因此假定实际的全身接触将较低是合理的。

进一步地，本发明还包括一种治疗或预防眼睛变态反应机理性症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语阿卡他定、机理性症状、患者、可药用的以及可药用盐，都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括一种治疗或预防眼睛炎症临床症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语阿卡他定、临床症状、患者、可药用的以及可药用盐、眼睛炎症、以及眼用组合物，都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括一种治疗或预防眼睛炎症机理性症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语阿卡他定、机理性症状、患者、可药用的以及可药用盐、眼睛炎症、以及眼用组合物，都具有它们上述的含义和优选的范围。

进一步地，本发明包括包含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语眼用组合物、阿卡他定、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。优选所述眼用组合物还包含在本文中定义的赋形剂。

更进一步地，本发明包括阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物在制备治疗或预防眼睛变态反应的临床症状的药物中的用途。术语阿卡他定、临床症状、眼睛变态反应、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物在制备治疗或预防眼睛炎症的临床症状的药物中的用途。术语阿卡他定、临床症状、眼睛炎症、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物在制备治疗或预防眼睛变态反应或眼睛炎症的机理性症状的药物中的用途。术语阿卡他定、机理性症状、眼睛变态反应、眼睛炎症、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括包含眼用组合物的药盒，其中包括包含阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物，装在由可药用包装材料制造的容器内。术语眼用组合物、阿卡他定、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。可药用包装材料包括但不限于低密度聚乙烯(“LDPE”)、高密度聚乙烯(“HDPE”)、聚丙烯、聚苯乙烯、聚碳酸酯、聚酯(如聚乙烯对苯二甲酸酯和聚乙烯萘酸酯)、尼龙、聚(氯乙烯)、聚(偏氯乙烯)、聚(四氟乙烯)及其它本领域的普通技术人员已知的材料。由LDPE或HDPE制造的柔韧性的瓶子为特别优选。商业来源的这类材料包括但不限于由DuPont制造的DuPont 20系列特制品聚乙烯、由Eastman ChemicalCompany制造的Tenite Polyethylene 1830F Natural、由Basell制造的Purell 1840 Polyethylene。特别优选的材料是DUPONT^TM 20-6064(E.I.du Pont de Nemours and Company，Wilmington，DE)，优选的LDPE包装材料，常通过注坯吹塑加工用于制造装眼用组合物的柔韧性滴瓶，被美国食品和药品监督管理局批准用于这种应用。药盒可装有多剂量的含阿卡他定的眼用组合物或单用剂量的阿卡他定。

在填充之前，通常将这类瓶子通过γ照射或用环氧乙烷气体通过本领域技术人员公知的方法进行灭菌。不过，申请人已经令人惊奇地发现，用环氧乙烷气体代替γ射线对LDPE瓶子灭菌是优选的，因为用γ射线灭菌的瓶子可能出现活性成分的稳定性降低。

6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

Figure 2007800202497100002G2007800202497D0003163705QIETU

-3-羧酸(“CAS # 147083-93-0”)具有下面的化学式

式II

式II化合物公开于美国专利US5,468,743。优选的方法和眼用组合物可含所述的式II，但式II可以其可药用盐、N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药、或其混合物的形式存在于方法和眼用组合物中。

特别地本发明包括一种治疗或预防眼睛变态反应临床症状的方法，包括给患者的眼睛施用有效量的式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物。术语式II化合物、临床症状、眼睛变态反应、患者、可药用的以及可药用盐，都具有它们上述的含义和优选的范围。术语“有效量的”式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物为治疗或预防眼睛变态反应的症状所需要的物质的量。如先前关于有效量的阿卡他定，其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的描述，有效量的式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物，在患者与患者之间可能有差异，取决于式II化合物、其可药用盐、N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药和其混合物，单独或与一种或多种组合药物相结合在患者身上产生期望的应答的能力。决定有效量的因素为普通技术人员已知，一些因素在本文中被提及。优选式II化合物的有效量在小于约0.25mg和大于或等于约0.015mg之间，更优选在约0.030mg和约0.14mg之间，更优选在约0.075mg和约0.125mg之间。

进一步地，本发明包括一种治疗或预防眼睛炎症临床症状的方法，包括给患者的眼睛施用有效量的式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物。术语式II化合物、临床症状、眼睛炎症、患者、可药用的、可药用盐、以及有效量都具有它们上述的含义和优选的范围。

此外本发明包括一种治疗或预防与眼睛变态反应或眼睛炎症相关的机理性症状的方法，包括给患者施用有效量的式II化合物、其可药用盐、N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物。术语式II化合物、患者、可药用的、可药用盐、有效量、机理性症状、眼睛变态反应、以及眼睛炎症都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括一种治疗或预防眼睛变态反应的鼻症状的方法，包括给患者的鼻子施用有效量的式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物。术语式II化合物、患者、可药用的、可药用盐、鼻症状、以及有效量都具有它们上述的含义和优选的范围。

进一步地本发明包括一种治疗或预防眼睛变态反应临床症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语式II化合物、临床症状、患者、眼用组合物、可药用的、以及可药用盐，都具有它们上述的含义和优选的范围。

进一步地，本发明还包括一种治疗或预防眼睛变态反应机理性症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语式II化合物、机理性症状、患者、可药用的、以及可药用盐，都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括一种治疗或预防眼睛炎症临床症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语式II化合物、临床症状、患者、可药用的以及可药用盐、眼睛炎症、以及眼用组合物都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括一种治疗或预防眼睛炎症机理性症状的方法，包括给患者的眼睛施用包含式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语式II化合物、机理性症状、患者、可药用的以及可药用盐、眼睛炎症、以及眼用组合物都具有它们上述的含义和优选的范围。

进一步地，本发明包括包含式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物的眼用组合物。术语眼用组合物、式II化合物、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。优选所述眼用组合物还包含在本文中定义的赋形剂。

更进一步地，本发明包括式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物在制备治疗或预防眼睛变态反应临床症状的药物中的用途。术语式II化合物、临床症状、眼睛变态反应、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物在制备治疗或预防眼睛炎症临床症状的药物中的用途。术语式II化合物、临床症状、眼睛炎症、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物在制备治疗或预防眼睛变态反应或眼睛炎症的机理性症状的药物中的用途。术语式II化合物、机理性症状、眼睛变态反应、眼睛炎症、可药用盐都具有它们上述的含义和优选的范围。

更进一步地，本发明包括含眼用组合物的药盒，其中眼用组合物包含式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物、前药或其混合物，装在由可药用包装材料制造的容器内。术语眼用组合物、阿卡他定、可药用盐以及可药用包装材料，都具有它们上述的含义和优选的范围。

实施例

本发明通过下面实施例进一步说明。实施例用于例证说明而不是旨在限制本发明的范围。

实施例1：阿卡他定眼用溶液

按照表I配制含阿卡他定的眼用溶液。为了确保无菌，在装入已预先进行环氧乙烷灭菌的LDPE瓶子之前使溶液通过0.22微米灭菌过滤器。

表1

成分	浓度mg/mL	浓度mg/mL	浓度mg/mL
				阿卡他定	1.0	2.5	5.0
磷酸氢二钠USP	11.1	11.1	11.1
				磷酸二氢钾NF	5.1	5.3	5.6
氯化钠USP	2.4	2.3	2.1
				苯扎氯铵NF	0.2	0.2	0.2
依地酸二钠USP	1.1	1.1	1.1
				净化水USP	适量	适量	适量

实施例2：抗变态反应活性

在豚鼠中将阿卡他定抗变应性结膜炎急性期反应(水肿和红斑)的效果与其它已知的抗过敏原的效果相比较，其中豚鼠被全身敏化至兔皮鳞并在17天后用兔过敏原局部攻击。

给重约230至250g的麻醉的雄性白毛豚鼠(Dunkin-Hartley)在左四头肌肌内注射50μl的纯化兔过敏原。兔过敏原由Al(OH)₃-吸附的兔鳞组成(Halab，布鲁塞尔，比利时)，其已被匀化并用无菌生理盐水洗净防腐剂(0.5％(v/v)苯酚)。

在攻击之前24小时和1小时将阿卡他定以0.005mg/kg至1.0mg/kg的剂量经口服施用至每只眼睛。其它的试验化合物包括奥沙米特，酮替芬，阿司咪唑，西替立嗪，氯雷他定和特非那定，以0.1mg/kg和1.0mg/kg的剂量施用。

在敏化后第17天通过滴入25μl的100％正常家兔血清攻击左眼。在该过敏原攻击的同时，右眼滴入25μl的1.5mg/ml溶于去离子的微孔滤过水中的组胺二盐酸盐(98％，Sigma)。

在攻击后三十分钟，评价两只眼睛睑板和球结膜中的水肿和红斑并由受过训练的技师评分为不存在(0)，弱(1)，中等(2)，严重(3)或非常严重(4)。从0.1mg/kg的剂量开始，阿卡他定显著地减轻急性过敏症状。在该试验中，发现阿卡他定比奥沙米特、酮替芬和特非那定更有效(在同等的mg/kg基础上)，比阿司咪唑、西替立嗪和氯雷他定明显更有效。

实施例3：局部用的阿卡他定对变应性结膜炎的活性

在鼠的活性过敏性反应模型中已经显示阿卡他定能预防变应性结膜炎的体征和症状。

在两周时且在治疗和攻击之前将年龄为5-7周、体重在12.55至17.73克之间的雄性SWR/J小鼠(The Jackson Laboratory，Bar Harbor，Maine)用100μl剂量的50μg短豚草过敏原(Greer Labs，Inc，Lenoir，NC)的混悬液和1mg的氢氧化铝(Fisher Scientific，Pittsburgh，PA)通过腹腔内注射敏化。

在第14天时，首先对小鼠进行基线测试以确保它们在治疗给药和攻击之前不呈现出明显的刺激。然后在用1.5mg在磷酸盐缓冲盐水中的短豚草过敏原攻击之前用阿卡他定0.0625％眼用溶液、阳性对照(含酮替芬0.05％和非尼拉敏0.5％组合的眼用溶液)、或空白对照剂局部给药于眼睛。

在过敏原攻击之后15分钟，通过对结膜的发红、结膜水肿、流泪和睑水肿评分来对小鼠变应性结膜炎的临床征象进行评价。临床征象的严重程度由受过训练的技师采用标准化的0-2的等级进行评分。阿卡他定比阳性对照在预防发痒、发红、结膜水肿和睑水肿上更有效。在预防流泪上阿卡他定与阳性对照等效，且比空白对照剂更有效。

实施例4：阿卡他定眼用溶液对人的作用

在有变应性结膜炎病史的成年志愿者身上进行的结膜过敏原攻击(＂CAC＂)中对实施例1的阿卡他定眼用溶液的三个浓度中每个的单一剂量的抗过敏作用进行评价。在两次访问证实过敏原攻击的反应活性之后受试者被选中。如果受试者皮肤试验为阳性和对几种共同的过敏原如猫毛、猫头皮屑、树木花粉、草花粉等中的至少一种有眼睛反应，则他们适于进行该研究。然后在两侧滴入阿卡他定、PATANOL

盐酸奥洛他定眼用溶液0.1％(Alcon，Inc，Forth Worth，TX)或赋形剂后16小时和15分钟的两次单独的访问时通过滴入重构的市售的过敏原到每只眼睛中用过敏原对受试者进行攻击，并对临床应答进行评价。

眼睛发痒的预防

在攻击之前16小时施用阿卡他定的患者显示出与剂量相关的眼睛发痒的抑制。在攻击后的3、5和7分钟所有浓度的阿卡他定显示出比赋形剂或PATANOL更低的平均发痒评分(即发痒少)，其中评分是基于受试者评价采用5分制进行。治疗15分钟后攻击时，与空白对照剂相比阿卡他定治疗的受试者显示出与剂量相关的眼睛发痒的抑制，0.25％治疗组比赋形剂或PATANOL的发痒评分低。

结膜发红的预防

在攻击之前16小时施用阿卡他定的患者还显示出与剂量相关的结膜发红的抑制。基于研究者对发红的评价在攻击后7、15和20分钟采用5分制进行评价。在大多评价时间所有浓度的阿卡他定显示出平均结膜发红的评分不同程度的降低。在治疗15分钟后攻击时，0.25％治疗组比赋形剂或PATANOL的评分低。

鼻症状的预防

对于CAC诱发的鼻症状的预防观察到相似的结果。采用标准化的等级由受试者对打喷嚏、流鼻涕、瘙痒症(鼻和耳/腭)和鼻充血的鼻症状进行评价。在各个时间点所有浓度的阿卡他定显示出鼻充血和流鼻涕的一定程度的减轻。这些数值与空白对照剂比较常常达到统计显著性，在有些情况下达到活性控制(p≤0.05)。对于鼻、腭和耳的发痒参数表现出相似的结果。在该研究中证实对打喷嚏无效；不过，基线打喷嚏发生率(治疗前)可能太低以致即使有也检测不到治疗效果。总之，在开始和访问期间在多数时间点都发现流鼻涕、鼻充血、和腭/耳的瘙痒症明显减少。

实施例5：γ照射灭菌的效果

阿卡他定易氧化，且初级降解产物已经确定为下面的N-氧化物结构。N-氧化物结构的初级氧化降解峰的存在被与合成制备的N-氧化物结构具有相同HPLC相对保留时间证实，还被质谱证实。

为了研究用于LDPE瓶子灭菌的γ照射处理的效果，使用各种不同的瓶子(γ照射或未灭菌的)研究阿卡他定的化学稳定性。

材料和方法：

该研究中使用了下列材料。

2.5mg/ml阿卡他定溶液

得自Bünder Glas GmbH(德国)的未灭菌的5ml LDPE瓶子(DUPONT 20-6064)

得自Rexam(法国)的未灭菌的5ml LDPE瓶子(DUPONT 20-6064)

得自Bünder Glas GmbH的灭菌(以25 kGy γ照射)LDPE瓶子(DUPONT 20-6064)

闪烁管-20ml带有聚四氟乙烯覆盖帽的透明玻璃

Millex GV针筒式滤器单位

结果：

保存在未灭菌的瓶子(Rexam或Bunder Glas)或γ照射的瓶子(Bunder Glas)中的阿卡他定溶液的化学稳定性结果汇总在表2中。在50℃贮存6和14天之后对所有样品通过HPLC进行分析。在贮存过程中不对光照进行控制。溶液保存在Rexam bottles(未灭菌)、Bunder Glas瓶子(以γ照射灭菌或未灭菌)中，和保存在小玻璃管中。

表2

容器说明	灭菌处理	贮存条件	时间(天)	阿卡他定(mg/mL)	N-氧化物(％)
						初始溶液	N/A	N/A	NA	2.47	0.02
小玻璃管	N/A	5℃	6	2.52	0.008

小玻璃管	N/A	50℃	6	2.57^*	0.024
						Rexam	未灭菌	50℃	614	2.462.48	0.0150.033
Bunder Glas	未灭菌	50℃	614	2.482.48	0.0180.042
						Bunder Glas	γ照射	50℃	614	2.412.39	0.1990.202

^*样品显示明显的蒸发，与所观察的较高的分析值一致

结论：

与小玻璃管和未灭菌的Rexam和Bunder Glas瓶子相比较，保存在γ照射的Bunder Glas瓶子中的阿卡他定显示出N-氧化物形成水平显著增加。该数据表明γ照射灭菌处理可能是在聚乙烯瓶子中通过诱发化学或物理变化而氧化的主要原因。

实施例6：环氧乙烷灭菌的效果

使用环氧乙烷对未灭菌的Rexam和Bunder Glas瓶子都灭菌。开始稳定性研究，环氧乙烷水平由AppTec(Marietta，Georgia)采用水萃取试验方法(ANSI/AAMI/ISO:10993-7)确定为<1ppm(在环境条件下)。

材料和方法：

在该研究中使用2.5mg/ml阿卡他定溶液。按照表3中所述方案使用环氧乙烷对瓶子进行灭菌：

表3

相	参数	设定值
			预处理	温度相对湿度％时间转换时间→灭菌器	40℃60％≥16小时45分钟
ETO处理初真空蒸汽注入蒸汽保压ETO接触脱气2次氮气冲洗1次空气冲洗	温度压力压力时间氮气注入ETO注入气体停留时间ETO浓度(计算值)压力压力压力	45℃70mbarA42mbars45分钟250mbarA744mbarA3小时800±50mg/l75mbarA75→500→75mbarA75→500→75mbarA
			通风	温度时间	40℃10天

结果：

保存在环氧乙烷灭菌的Rexam和Bunder Glas瓶子中的阿卡他定化学稳定性结果汇总在表4中。

表4

结论：在环境光照条件下于50℃贮存14天，在环氧乙烷灭菌的Bunder Glas瓶子中阿卡他定具有比γ照射瓶子中显著低的N-氧化物水平。在该研究中，Rexam瓶子中N-氧化物形成的量与小玻璃管中观察到的量相似(分别为0.025％和0.028％)，在50℃贮存14天之后Bunder Glas瓶子中的量略微高一些。

实施例7：阿卡他定对肥大细胞脱粒的影响

使用RBL-CCR1(大鼠嗜碱性白血病-趋化因子受体-1)细胞系作为研究其影响肥大细胞稳定性能力的方法评价阿卡他定细胞稳定电位。嗜碱细胞系评价抗过敏药物的细胞稳定电位的用途已非常确定。生理学上，嗜碱性粒细胞类似于肥大细胞，含有预形成的炎症介质，其通过类似的脱粒处理(涉及IgE交联)被释放。因为这类细胞系容易获得，在肥大细胞系中进行稳定分析过程中它们呈现出功效。

将培养的RBL-CCR1细胞敏化为抗DNP IgE。敏化后，细胞用各种浓度的阿卡他定或其主要活性代谢产物(0.083％，0.0083％和0.00083％)或眼用赋形剂(空白对照剂)处理，并以DNP和/或MIP-1α(巨噬细胞炎性蛋白-1 α，一种脱粒增强剂)刺激以诱导脱粒。还使用了D-DEM(Dulbecco’s改良的Eagle’s介质)中的10x和100x空白对照溶液(眼用赋形剂溶液)。

用DNP-HSA(与人血清白蛋白缀合的2，4-二硝基苯基半抗原)单独刺激和用MIP-1α单独刺激不会诱导显著性水平的脱粒。然而，共同刺激诱导强的脱粒应答。用三种脱粒刺激，(单独用DNP-HAS，单独用MIP-1α，以及共同刺激)最高浓度的母体药物、代谢产物和空白对照剂引起预料不到的和明显的脱粒。

在共同刺激分析中，与共同刺激对照和阴性对照(分别是空白对照剂10x[在D-MEM中的赋形剂3.3％]和空白对照剂100x[在D-MEM中的赋形剂0.33％]相比，0.0083％和0.00083％的阿卡他定浓度在细胞稳定作用方面较优。这种优势统计上有显著意义(对于两个浓度p<0.0001)。与共同刺激对照和阴性对照(分别是空白对照剂10x和空白对照剂100x)相比，用0.0083％和0.00083％浓度的6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)处理在细胞稳定作用方面也较优。也达到统计显著性(对于两个浓度p<0.0001)。与共同刺激对照相比用空白对照剂10x单独处理也显示出一些稳定作用，该作用是统计显著的(p<0.05)。

以10x剂量水平添加阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

Figure 2007800202497100002G2007800202497D0019164330QIETU

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)增加稳定作用，证明试验试剂在薄膜稳定作用方面的正效应。在100x稀释水平下观察不到稳定作用。总之，该研究结果表明阿卡他定和6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS #147083-93-0)为有效的膜稳定剂。

实施例8：阿卡他定对人H₄受体的作用

对阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)对人组胺H₄受体(H₄R)的药理活性进行了研究。H₄R是已得到鉴定的第四组胺受体，它似乎主要在嗜酸性粒细胞、T细胞、树突状细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞、与过敏反应的发展和延续密切相关的细胞类型上表达。已经显示H₄R介导肥大细胞、嗜酸性粒细胞和树突状细胞趋化性并能影响树突状细胞和T细胞产生细胞因子。该受体的拮抗剂具有明显的体内抗炎作用且在哮喘和结肠炎的动物模型中有效。使用以该受体转染的细胞对阿卡他定和6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS #147083-93-0)与H₄R的结合进行检测以及指示它们是否是该受体的激动剂或拮抗剂。

将阿卡他定以及6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)在100％二甲基亚砜(DMSO)中配制成10mM用于结合试验并在Na/K磷酸盐缓冲液，pH7.0中配制成10mM用于细胞分析。将来自以人H₄受体转染的SK-N-MC细胞中的细胞沉淀在20mM Tris-HCl/0.5 mM乙二胺四乙酸(EDTA)pH 8.0(TE缓冲液)中匀化。将在800g离心之后收集的上清液在30,000g下再次离心30分钟。将沉淀在TE缓冲液中再匀化。对于竞争结合研究，将膜以含或不含试验化合物的10nM[³H]组胺在25℃下温育45分钟。非特异性结合以100μM冷组胺定义。基于实验测定的对于[³H]组胺的5nM Kd值和根据Cheng和Prusoff的10nM配体浓度计算Ki数值。对10^-11至10^-5M跨度的七个化合物浓度进行检测，每个浓度一式三份。将三份的检测值平均并得到IC₅₀(50％抑制浓度)曲线。将该测定进行两次并结果以两次测定的平均值报告。产生表达报道基因构造和人H₄受体全部编码区的SK-N-MC细胞系。该报道基因为受环磷酸腺苷(cAMP)控制的β-半乳糖苷酶。检测前将细胞平铺在96孔平皿中过夜。在添加组胺前10分钟加入拮抗剂，将其直接加入到细胞介质中。在添加组胺10分钟后加入毛喉素(5μM终浓度)。将细胞放回到培养箱中，在37℃下保存6h。然后吸出介质并将细胞以25μL的0.1x分析缓冲液(10mM磷酸钠，pH 8，0.2mM MgSO₄，0.01mM MnCl₂)溶解并在室温下温育10分钟。然后将细胞以100μL的含0.5％Triton和40mMβ-巯基乙醇的1x分析缓冲液温育10分钟。用25μL的1mg/mL底物溶液(氯酚红β-D-半乳糖苷；Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)显色。在微量培养板读数器于570nm吸收光波下测定颜色。对于激动剂测定，在没有组胺的情况下加入10^-11至10^-4M的滴定化合物一式两份将两份检测值平均并计算毛喉素抑制环AMP产生的EC₅₀(有效浓度50)。将该检测重复三次。对于拮抗剂测定，在1.2，3.7，11，33，和100μM化合物的存在下滴定10^-10至10^-3M组胺，一式两份。将两份测定值平均，并将每一不同的化合物浓度下对组胺的EC₅₀用于Schild曲线中得出pA2数值，其为需要2倍移动组胺EC₅₀的化合物浓度的负对数。

对阿卡他定和6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)测试它们置换与膜结合的[³H]-组胺的能力，其中膜来自以组胺H₄受体稳定转染的SK-N-MC细胞。与[³H]-组胺的竞争显示化合物能与该受体结合。结合曲线表明阿卡他定以2.9μM的平均Ki值与受体结合，而6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)在浓度高达10μM下不与受体结合。

为了检测阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)是否是H₄受体激动剂，在以人组胺H₄受体转染的SK-N-MC细胞中进行功能试验。评价化合物抑制毛喉素诱导的cAMP增加的能力。结果表明组胺为该受体的激动剂并产生毛喉素诱导的cAMP水平的剂量依赖性抑制。然而，阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)都不显示任何cAMP水平的抑制，因此在高达10μM的浓度下都不是H₄受体的激动剂。

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)是否是H₄受体拮抗剂，在以人组胺H₄受体转染的SK-N-MC细胞中对化合物移动抑制毛喉素诱导的cAMP增加的组胺的EC₅₀的能力进行评价。结果表明增加阿卡他定的浓度导致组胺(HA)剂量反应曲线平行向右移动，引起组胺调节H₄受体的EC₅₀增加。该作用显示阿卡他定为该受体的竞争性拮抗剂。Schild曲线的x-截距得到5.6的pA2值，其代表需要诱导组胺EC₅₀两倍平移的拮抗剂浓度的负对数。理论上pA2值应等于pKi，其为实际观测值(5.6对5.5)。阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

Figure 2007800202497100002G2007800202497D0022164816QIETU

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)在高达100μM的浓度下不会导致任何平移，这与其不能与该受体结合相一致。

这些结果显示阿卡他定以2.9μM的平均Ki值与H₄受体结合。阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)在高达10μM的浓度下都不是H₄受体的激动剂。然而，阿卡他定，而不是阿卡他定或6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸(CAS # 147083-93-0)，是人组胺H4受体的拮抗剂，Ki值为2.9μM且pA2值为5.6。

实施例9：阿卡他定对结膜上皮完整性的作用

为了研究阿卡他定保持结膜上皮完整性的能力，在特异性结膜过敏原攻击后对紧密结合蛋白ZO-1和E-钙粘蛋白的表达的变化(对E-钙粘蛋白的诱导和对于ZO-1从病灶扩散的定性变化)进行评价。这些变化与结膜及其它上皮组织通透性增加有关该体内实验检验阿卡他定对这类蛋白的调节具有什么作用(攻击前1和2小时局部施用)。

小鼠以氢氧化铝中的短豚草(SRW)经腹腔内施用(第0，7和15天)和眼睛滴入(第8和15天)敏化。在第20天时，将小鼠用仅含SRW的滴眼剂进一步敏化。在第27天时，在攻击前1和2小时用5μL阿卡他定或赋形剂局部治疗小鼠。将SRW局部滴入两只眼睛中。还对这类蛋白在na

ve眼睛中的表达进行了监测。在用SRW结膜过敏原攻击1小时后观察紧密结合蛋白ZO-1和E-钙粘蛋白的表达的变化。用对ZO-1和E-钙粘蛋白具有特异性的FITC缀合的单克隆抗体检测这些蛋白并通过共焦显微术(Ziess)显现。Na

ve眼睛来自没有被敏化或攻击的小鼠。

nave(没有攻击和没有治疗)ZO-1和E-钙粘蛋白蛋白显示出病灶的定性性质。然而，将这与赋形剂治疗的蛋白比较，赋形剂治疗的蛋白显示出扩散的定性变化。从病灶到扩散染色的变化与上皮细胞通透性增加有关。将nave ZO-1和E-钙粘蛋白蛋白与阿卡他定治疗的蛋白比较，结果显示定性性质差别极小。ZO-1和E-钙粘蛋白蛋白的造影显示在nave(阴性对照)和阿卡他定治疗之间没有差别或差别极小，而与赋形剂治疗之间有明显的差别。

这些结果表明阿卡他定保持结膜上皮紧密接合的完整性(以病灶ZO-1表达为特征)和抑制E-钙粘蛋白表达的诱导(通常在特异性结膜过敏原攻击之后观测到)。

实施例10：阿卡他定对血管渗漏和细胞渗入的作用

过敏性炎症可分为两个独立的阶段，早期和晚期。早期炎性反应在肥大细胞脱粒之后迅速发生，特征为血管内皮细胞出现空隙和渗漏(即肿胀)和发痒。晚期炎性反应在肥大细胞脱粒大约24小时后出现高峰，特征为出现细胞渗入(嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞)。已知嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞两者对炎性反应的晚期指数化有极大的影响。当到达炎症部位时，这些细胞释放各种过氧化物酶及其它抗微生物因子，其功能是杀灭侵入病原体，但在严重或慢性炎症的情况下，破坏周围组织并导致前炎症介质进一步释放。

对阿卡他定眼用溶液进行评价以确定在变应性结膜炎的鼠模型中局部治疗是否可减少早期和晚期过敏性炎症。伊文思蓝染料渗漏(EvansBlue Dye Leakage)用于评价在早期炎性反应期间对血管通透性的影响。在24小时时摘取结膜，染色，并对中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸入的存在进行评价以评价晚期的抗炎活性。

所有的小鼠以氢氧化铝中的短豚草(SRW)经腹腔内施用(第0，7和14天)和眼睛滴入(第8和15天)敏化。在第20天时，将小鼠用SRW滴眼剂再次敏化。

在第27天时，将两种局部施用临床剂量的阿卡他定2.5mg/ml或赋形剂在攻击之前1和2小时滴入。将阿卡他定和赋形剂以5μL饱和剂量作为治疗武器基于随机化编码局部施用。治疗武器如下：

1.阴性对照。敏化，不攻击，不治疗(阴性对照)(N＝12)

2.敏化，攻击，不治疗(阳性对照)(N＝12)

3.敏化，攻击，阿卡他定2.5mg/ml治疗(N＝10)

4.敏化，攻击，赋形剂治疗(N＝12)

除阿卡他定治疗武器之外对N＝6只动物在过敏原攻击之后通过伊文思蓝染色渗出测定血管泄漏，其中将N＝4只动物处死并检测(两只动物在操作过程中死亡)。将各治疗组用T-检验进行比较，p<0.05被认为是统计上显著的。在结膜过敏原攻击(CAC)24小时后对剩余的动物(N＝6/治疗武器)进行解剖，以评价forniceal区域内嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的补充。在切片机上切片之前将组织加工成冷冻或可塑块的形式。嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的数目通过Giemsa或H&E染色切片的光学显微镜检查或用细胞特异性单克隆抗体通过免疫组织化学测定。将各治疗组用T-检验进行比较，p<0.05被认为是统计上显著的。

在阴性对照(不攻击组-第1组)和攻击而不治疗组(第2组)之间没有显著性差异。不过，正如所料，存在数字差别，第2组有较高的血管泄漏评分。在赋形剂治疗(第4组)和阿卡他定治疗组(第3组)(p<0.05)之间有显著性差异，与赋形剂相比阿卡他定成功地阻止血管渗漏。正如所料，在阴性对照(不攻击组-第1组)和不治疗但攻击组(第2组)之间有显著性差异。与对照物相比阿卡他定(第3组)不阻止嗜酸性粒细胞或中性粒细胞补充。

关于血管渗漏，在第2组(攻击而不治疗)中没有观测到典型的血管渗漏的诱发。不过，与用赋形剂单独治疗的小鼠相比阿卡他定在CAC之后显著地抑制血管泄漏。根据上述研究的观察结果，第2组中低水平的血管渗漏是异常的，很可能是由于与体内实验相关的实验误差引起的。阿卡他定治疗的动物血管渗漏的降低支持阿卡他定在结膜过敏原攻击模型中的治疗作用。

在嗜酸性粒细胞或中性粒细胞补充的测定中，阴性和阳性对照之间的显著性差异表明该模型的工作如所期望。不过，在变应性结膜炎的鼠模型中在敏化小鼠中过敏原攻击之后，在所用剂量下，阿卡他定没有抑制后期反应中的嗜酸性粒细胞或中性粒细胞补充。

该研究结果显示在结膜过敏原攻击之后阿卡他定显著地抑制血管泄漏。不过，在变应性结膜炎的鼠模型中在敏化小鼠中过敏原攻击之后，它似乎没有抑制后期反应中的嗜酸性粒细胞或中性粒细胞补充。

实施例11：患者体内阿卡他定的全身水平

以0.25％的阿卡他定眼用溶液对患者双向给药七天。在第1天和第7天在给药前和药物滴入0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12和18小时后对那些患者的血浆水平进行评价。阿卡他定的血浆浓度迅速达到Cmax，在给药3小时后左右下降至定量的下限(0.01ng/mL)。平均Cmax值(在任何时间点测量的最高值)相当低，在第1天时平均值为0.051ng/mL，在第7天时为0.060ng/mL；所有患者的最大血浆浓度小于0.12ng/mL。

实例12：患者体内6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂-3-羧酸的全身水平

以0.25％的6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

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-3-羧酸眼用溶液对患者双向给药七天。在第1天和第7天在给药前和药物滴入0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12和18小时后对那些患者的血浆水平进行评价。6，11-二氢-11-(1-甲基-4-哌啶叉)-5H-咪唑并[2，1-b][3]苯并氮杂

-3-羧酸的血浆浓度迅速达到Cmax，且在给药后12小时下降至定量(0.1ng/mL)的下限。在第1天时平均Cmax值为3.228ng/mL，在第7天时为2.715ng/mL；最大血浆浓度为7.23ng/mL。

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本领域技术人员将理解可以对本发明的优选实施方案进行许多变化和改进，而且在不背离本发明精神的情况下进行这样的变化和改进。因此，所附权利要求覆盖所有落入本发明的精神实质和范围内的等同变化。

Claims

1.一种眼用组合物，包含一定量的阿卡他定、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物或其混合物和赋形剂。

2.权利要求1的眼用组合物，其中眼用组合物包含0.005％至10％重量的阿卡他定，0.1％至0.4％重量的阿卡他定，或0.2％至0.35％重量的阿卡他定。

3.权利要求1的组合物，其中阿卡他定的量为小于0.25mg至大于0.015mg。

4.权利要求1的组合物，其中阿卡他定的量为0.075mg至0.125mg。

5.权利要求1的组合物，其中阿卡他定的量为1.0mg/mL至5.0mg/mL。

6.权利要求5的组合物，其中阿卡他定的量为2.5mg/mL。

7.权利要求1的组合物，其中阿卡他定的量为小于每天7.1μg/kg至每天3.5μg/kg。

8.一种眼用组合物，包含一定量的式II化合物、其可药用盐、其N-氧化物、水合物、溶剂合物、多晶型物或其混合物和赋形剂，其中所述式II是

9.权利要求8的组合物，其中眼用组合物包含0.005％至10％重量的式II化合物，0.1％至0.4％重量的式II化合物，或0.2％至0.35％重量的式II化合物。

10.权利要求8的组合物，其中式II化合物的量为小于0.25mg至大于0.015mg。

11.权利要求8的组合物，其中式II化合物的量为0.075mg至0.125mg。

12.权利要求8的组合物，其中式II化合物的量为1.0mg/mL至5.0mg/mL。

13.权利要求12的组合物，其中式II化合物的量为2.5mg/mL。

14.权利要求8的组合物，其中式II化合物的量为小于每天7.1μg/kg至每天3.5μg/kg。

15.权利要求1-14任一项的组合物，其中所述组合物还包含氯化钠、磷酸钠、苯扎氯铵和/或依地酸二钠。

16.权利要求1或权利要求8的眼用组合物在制备用于治疗或预防眼睛变态反应或眼睛炎症的临床症状或者与眼睛变态反应或眼睛炎症相关的机理性症状的药物中的应用，其中所述症状选自眼睛发痒、眼睛发红、眼睑肿胀、结膜水肿、流泪、鼻炎、鼻充血、流鼻涕、鼻瘙痒、耳瘙痒、腭瘙痒、打喷嚏、血管渗漏、结膜上皮紧密接合的完整性降低和肥大细胞降解。

17.权利要求16的应用，其中所述眼睛变态反应是变应性结膜炎。

18.权利要求16的应用，其中所述症状为眼睛发痒。

19.权利要求16的应用，其中所述症状为眼睛发红。

20.权利要求16的应用，其中所述药物是用于治疗或预防至少两种临床症状。

21.权利要求20的应用，其中所述至少两种症状为眼睛发痒和眼睛发红。

22.权利要求16的应用，其中所述药物是用于治疗或预防至少三种症状。

23.权利要求1-14任一项的组合物，其中所述组合物是通过γ照射或环氧乙烷气体灭菌的。