KR101216885B1 - 10-데아세틸-ｎ-데벤조일-파클리탁셀의 반합성 제조 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항종양 활성을 갖는 탁산류(taxanes) 용도, 10-데아세틸-N-데벤조일-파클리탁셀(10-deacetyl-N-debenzoyl-paclitaxel)의 제조 방법 및 그의 제조를 위한 중간체에 관한 것이다. 발명은 또한 구조식 (Ⅰ)의 언급된 화합물에서 출발하는 도세탁셀(Docetaxel)의 제조 방법이 개시되어 있다.

탁산류(taxanes), 도세탁셀(Docetaxel)

Description

10-데아세틸-Ｎ-데벤조일-파클리탁셀의 반합성 제조 방법{SEMISYNTHESIS PROCESS FOR THE PREPARATION OF 10-DEACETYL-N-DEBENZOYL-PACLITAXEL}

본 발명의 목적은 항종양 활성을 갖는 탁산류(taxanes) 용도, 10-데아세틸-N-데벤조일-파클리탁셀(10-deacetyl-N-debenzoyl-paclitaxel)(Ⅰ)의 제조를 위한 새로운 반합성 공정을 제공하는 것이다.

본 발명은 또한 HPLC로 측정하여 0.1 % 보다 낮은 함량으로 대응하는 7- 또는 10- 모노-트리클로로아세틸(10- mono-trichloroacetyl) 유도체들을 함유하는 10-데아세틸-비스-7,10-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ(10-deacetyl-bis-7,10-trichloroacetylbaccatin Ⅲ)의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 언급된 고순도 도세탁셀(Docetaxel)을 함유하는 약제학적 조성물과 함께, 본 발명 공정으로 획득된 중간체(Ⅰ)와 디-터트-부틸 디카보네이트(di-tert-butyl dicarbonate)를 반응시켜 99 % 이상의 고순도를 갖는 도세탁셀(Docetaxel)의 제조 방법에 관한 것이다.

구조식(Ⅳ)의 에스테르(etrers)를 얻기 위해 구조식(Ⅲ)의 7- 과 10- 위치에서 보호된 10-데아세틸바카틴(10-deacetrylbaccatin)을 구조식(Ⅱ)의 옥사졸리딘(oxazolidines)으로 에스테르화 시키는 공정은 화합물(Ⅰ)의 합성을 위한 WO 94/07877에 발표되어있고, 90년대 초기의 문헌에 보고되어있다(에프, 구에리테-보에게레인 등., J. Med. Chem. 34, 992, 1991).

구조식(Ⅳ)의 에스테르류(esters)에서 3'- 위치에 아미노 기능(amino function)과 2'-, 7- 그리고 10- 위치에 하이드록시 그룹(hydroxy groups)을 유리(liberation)시켜 화합물(Ⅰ)을 제공할 수 있다.

특히, 위에 인용된 특허 출원에 따르면, 그룹 R은 수소(hydrogen), 알킬(alkyl), 알콕시(alkoxy) 또는 여러가지로-치환된 페닐(phenyl)일 수 있고, R₁은 하나 또는 그 이상의 염소(chlorine) 원자로 치환된 알킬(alkyl) 이다. 그룹 G는 알킬실릴(alkylsilyl) 또는 R₁-O-CO- 그룹이고, 여기서 R₁은 위에서 언급된 것과 같다.

구조식(Ⅳ)의 중간체로부터 출발하여, 하이드록시(hydroxy)와 아미노 기능(amino functions)은 아연(zinc)과 산(acids)으로 환원시켜 유리되고, 그룹 G가 알킬실릴(alkylsilyl)일 때, 하이드록시 기능(hydroxy functions)은, 예를 들어 불 화 수소산(hydrofluoric acid)으로 산 처리에 의해 유리된다.

본 발명의 첫 번째 태양은 다음 단계들을 포함하는 10-데아세틸-N-데벤조일-파클리탁셀(10-deacetyl-N-debenzoyl-paclitaxel) (Ⅰ)의 제조 방법에 관한 것이다 :

a) 2-(2,4-디메톡시페닐)-3-(2-니트로벤젠설페닐)-4(에스)-페닐-5(알)-옥사졸리딘 카복실산(2-(2,4-dimethoxyphenyl)-3-(2-nitrobenzensulfenyl)-4(S)-phenyl-5(R)-oxazolidine carboxylic acid)(Ｖ)을, 10-데아세틸-비스-7,10-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ(10-deacetyl-bis-7,10-trichloroacetylbaccatin Ⅲ)(Ⅵ)와 반응시켜 2-(2,4-디메톡시페닐)-3-(2-니트로벤젠설페닐)-4(에스)-페닐-5(알)-옥사졸리딘카복실산, 10-데아세틸-7,10-비스-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ 13-일-에스테르(2-(2,4-dimethoxyphenyl)-3-(2-nitrobenzenesulfenyl)-4(S)-phenyl-5(R)-oxazolidinecarboxylic acid, 10-deacetyl-7,10-bis-trichloroacetylbaccatin Ⅲ 13-yl-ester)(Ⅶ)을 얻고,

b) 구조식(Ⅶ)의 화합물의 7-과 10- 위치의 트리클로로아세틸(trichloroacetyl) 그룹을 가수분해시켜 2-(2,4-디메톡시페닐)-3-(2-니트로벤젠 설페닐)-4(에스)-페닐-5(알)-옥사졸리딘 카복실산, 10-데아세틸바카틴 Ⅲ 13-일-에스테르(2-(2,4-dimethoxyphenyl)-3-(2-nitrobenzensulfenyl)-4(S)-phenyl-5(R)-oxazolidine carboxylic acid, 10-deacetylbaccatin Ⅲ 13-yl-ester)(Ⅷ)을 얻으며,

c) 구조식(Ⅷ) 화합물을 산 처리하여 10-데아세틸-N-데벤조일-파클리탁셀(10-deacetyl-N-debenzoyl-paclitaxel)(Ⅰ)을 얻는 방법이다.

본 발명은 또한 신규한 중간체로 2-(2,4-디메톡시페닐)-3-(2-니트로벤젠설페닐)-4(에스)-페닐-5(알)-옥사졸리딘 카복실산(2-(2,4-Dimethoxyphenyl)-3-(2-nitrobenzensulfenyl)-4(S)-phenyl-5(R)-oxazolidine carboxylic acid), 10-데아세틸-7,10-비스-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ 13-일-에스테르(10-deacetyl-7,10-bis-trichloroacetylbaccatin Ⅲ 13-yl-ester)(Ⅶ)와 2-(2,4-디메톡시페닐)-3-(2-니트로벤젠설페닐)-4(에스)-페닐-5(알)-옥사졸리딘 카복실산(2-(2,4-Dimethoxyphenyl)- 3-(2-nitrobenzensulfenyl)-4(S)-phenyl-5(R)-oxazolidine carboxylic acid), 10-데아세틸바카틴 Ⅲ 13-일-에스테르(10-deacetylbaccatin Ⅲ 13-yl-ester)(Ⅷ)를 공급한다.

본 발명은 또한 반응 혼합물을 실리카겔 크로마토그래피(silica gel chromatography)를 포함하는, HPLC로 측정할 때 0.1 % 보다 낮은 상응하는 7- 또는 10- 모노-트리클로로아세틸(10-mono-trichloroacetyl) 유도체를 함유하는 10-데아세틸-비스-7,10-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ (10-deacetyl-bis-7,10-trichloroacetylbaccatin Ⅲ)의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명의 더 나아간 목적은 그를 포함하는 약제학적 조성물과 함께 99 % 이상 순도를 갖는 도세탁셀(Docetaxel)을 제공하고자 하는 것이다.

발명의 설명

본 발명은 고수득률 및/또는 고품질로 화합물(Ⅰ)의 합성하는 제법에 관한 것이다.

이 공정은 또한 더이상 오염처리를 필요로하지 않으며 아연(zinc)과 불화 수 소산(hydrofluoric acid)와 같은 시약을 다루는데 어려움이 없다.

본 공정은 2-(2,4-디메톡시페닐)-3-(2-니트로벤젠설페닐)-4(S)-페닐-5(R)-옥사졸리딘카복실산(2-(2,4-dimethoxyphenyl)-3-(2-nitrobenzenesulfenyl)-4(S)-phenyl-5(R)-oxazolidinecarboxylic acid)(Ｖ)과 10-데아세틸-비스-7,10-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ(10-deacetyl-bis-7,10-trichloroacetylbaccatin Ⅲ)(Ⅵ)을 반응시켜 에스테르 화합물(Ⅶ)을 얻고, 아미노(amino)와 하이드록시(hydroxy) 기능을 유리(liberation)시킨 후 화합물(Ⅰ)을 얻는다.

구조식(Ⅶ)의 화합물은 신규하고, 본 발명의 추가 목적물이다.

옥사졸리딘산(dxazolidine acid)(Ｖ)의 2R, 2S거나 또는 그것의 혼합물은 합성시 동등하게 유용하며, 옥사졸린 고리(oxazoline ring)의 2-위치에서 키랄 중심(chiral center)은 하이드록시(hydroxy)와 아미노(amino) 기능의 유리(liberation)로 중간체(Ⅶ)에서 제거된다. 바꿔 말해, 부분입체이성질체 간에 상대적인 비율은 합성수행을 손상시키지 않는다.

옥사졸리딘산(dxazolidine acid)(Ｖ)는 WO 03/087077 A1에 발표된 방법인, 상응하는 알카리 염(alkali salts)을 산 처리하여 쉽게 제조된다.

다른 옥사졸리딘산들을 비교시, 산(acid)(Ｖ)는 주목할만한 안정성의 특징이 있고 ; 화합물(Ⅵ)을 에스테르화(esterification)시켜 쉽게 수행될 수 있다.

더우기, 에스테르화(esterification) 후에, 산 잔사(acid residue)에 포함된 아미노(amino)와 하이드록시(hydroxy) 기능의 유리(liberation)는 격렬한 조건을 채택할 필요 없이, 산 처리에 의해 쉽게 수행될 수 있다.

탁산(taxane) 화합물(Ⅵ)는 알려진 에스테르화(esterification) 방법에 따라, 트리클로로아세틱산(trichloroacetic acid)의 활성 유도체로 처리하여 7-과 10-위치의 에스테르화(esterification)를 통해 천연 대사산물인 10-데아세틸바카틴 Ⅲ(10-deacetylbaccatin Ⅲ)로부터 쉽게 획득될 수 있다. 바람직하게는, 화합물(Ⅵ)는 용매로 피리딘(pyridine)을 사용하여, 0 ℃ 근처 온도에서, 트리클로로아세틱 에시드 클로라이드(trichloroacetic acid chloride)로 반응시켜 획득된다. 바람직하게는, 10-데아세틸-비스-7,10-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ(10-deacetyl-bis-7,10-trichloroacetylbaccatin Ⅲ)(Ⅵ)을 실리카 겔 크로마토그래피(silica gel chromatography) 또는 당량 방법(equivalent methods)으로 상응하는 7-과 10-모노-.트리클로아세틸 에스테르(10-mono-.trichloacetyl esters)로부터 정제된다. 언급된 불순물의 잔류량은 HPLC % 피크(peaks)로 측정할 때 0.1 %를 넘지 않았다.

본 발명에 따르면, (Ⅵ)화합물을 옥사졸리딘산(oxazolidine acid)(Ｖ)으로 에스테르화시켜 (Ⅶ)화합물을 얻는 공정은 에틸 에테르(ethyl ether), 디이소프로필 에테르(diisopropyl ether), 테트라하이드로푸란(tetrahydrofurane) 또는 디옥산(dioxane)과 같은 에테르(ether) ; 에틸(ethyl), 프로필(propyl) 또는 부틸 아세테이트(butyl acetate)와 같은 에스테르(ester) ; 벤젠(benzene), 톨루엔(toluene) 또는 o-, m-, p-실렌(xylene)과 같은 방향족 하이드로카본(aromatic hydrocarbon) ; 또는 예를 들어 메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 클로로포름(chloroform) 또는 디클로로에탄(dichloroethane)과 같은 할로겐화 지방족 하이드로카본(halogenated aliphatic hydrocarbon) 중에서 선택된 용매 중에서, 예를 들어 디사이클로헥실카보디이미드(dicyclohexylcabodiimide)와 같은 디이미드(diimide)의 축합반응시약(condensing agent)과, 예를 들어 4-디메틸아미노-피리딘(4-dimethylamino-pyridine) 또는 4-피롤리디노-피리딘(4-pyrrolidino-pyridine)와 같은 반응활성화제(activating agent) 존재 하에서 성취될 수 있다. 약 20 ℃ 온도에서 메틸렌 클로라이드(methylene chloride) 중에서 에스테르화(esterification)를 수행하는 것이 특히 유리하다.

에스테르 화합물(Ⅶ)에서 화합물(Ⅰ)의 제조는 7-과 10-위치에서 트리클로로아세틸(trichloroacetyl) 그룹의 제거와 옥사졸리딘 잔사(oxazolidine resiude)에 서 아미노(amino)와 하이드록시(hydroxy) 기능을 유리(liberation)시킬 필요가 있다.

위에 언급된 것처럼, 아미노(amino)와 하이드록시(hydroxy) 기능은 옥사졸리딘 잔사(oxazolidine resiude)에서 산 처리로 쉽게 유리될 수 있다. 반대로, 트리클로로아세틱 에스테르(trichloroacetic esters)의 가수분해는 순한 알칼라인(alkaline) 처리에 의해, 바람직하게는 암모니움 하이드록사이드(ammonium hydroxide)로 반응시켜 편리하게 성취될 수 있다.

옥사졸리딘 잔사(oxazolidine resiude)에서 아미노(amino)와 하이드록시(hydroxy) 기능의 유리(liberation)가 수행되면, 첫 번째로 바카틴(baccatin) 잔사에서 자유 아미노(free amino) 기능으로 트리클로로아세틸(trichloroacetyl) 그룹의 대량 이동이 일어나고, 따라서 트리클로로아세트아미노(trichloroacetamino) 기능의 형성이 이루어지며, 바카틴(baccatin) 골격 구조에 이롭지못할 것이라는 조건 하에서 아미노(amino) 기능만으로 변환될 수 있다는 것이 관찰되었다. 결과적으로, 화합물(Ⅰ)의 제조는 에스테르(Ⅷ)을 얻기 위해 화합물(Ⅶ)의 7-과 10-위치의 트리클로로아세틱 그룹(trichloroacetic groups)의 제거가 첫째로 필요하다.

구조식(Ⅷ)의 화합물 역시, 신규하고, 본 발명의 추가적 목적이다. 바람직하게는, 트리클로로아세틱 그룹(trichloroacetic groups)의 제거는 용매로 테트라하이드로푸란(tetrahydrofuran) 중에서 암모니움 하이드록사이드(ammonium hydroxide)로 처리하여 실온에서 수행된다.

아미노(amino)와 하이드록시(hydroxy) 기능의 유리(liberation)는 산 처리에 의해 수행되며, 바람직하게는 약 20 ℃ 온도에서 알코올성 용액, 예를 들어 메탄올(methanol) 중에서 수성 염산(hydrochloric acid)에 의해 수행된다. 그 후 물로 희석하고 예를 들어, n-헥산(n-hexane)과 메틸렌 클로라이드(methylene chloride)의 지방족 하이드로카본(aliphatic hydrocarbons)과 할로겐화된 지방족 하이드로카본(halogenated aliphatic hydrocarbons)과 같은 유기 용매로 반응 부산물을 제거 후, 화합물 (Ⅰ)을, 예를 들어, 메틸렌 클로라이드(methylene chloride) 또는 에틸 아세테이트(ethyl acetate)와 같은 유기용매 중에서 수성 상(aqueous phase)을 알칼리화, 추출, 그리고 n-헥산(n-hexane)과 같은 지방족 하이드로카본(aliphatic hydrocarbons)에서 농축, 침전시켜 분리시킨다. 본 발명의 공정은 크로마토그래피 세정 없이 98 %보다 높은 순도로 화합물 (Ⅰ)을 제공한다.

도세탁셀(Docetaxel)은 디-터트-부틸 디카보네이트(di-tert-butyl dicarbonate)로 반응시켜 99 % 이상의, 바람직하게는 99.4 %보다 높은 순도를 갖는 언급된 중간체로부터 유리하게 획득될 수 있다.

반응은 염기(bases) 부재 하, 알코올류(alcohols)(메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 이소프로판올(isopropanol), 바람직하게는 에탄올(ethanol) 임), 염소 처리된 하이드로카본류(chlorinated hydrocarbons)(메틸렌 클로라이드(methylene chloride), 클로로포름(chloroform), 바람직하게는 메틸렌 클로라이드(methylene chloride) 임) 또는 그의 혼합물들과 같은 용매에서 바람직하게 수행된다.

본 공정은 적합한 용매들, 바람직하게는 에탄올/물(ethanol/water) 및/또는 아세톤/하이드로카본의 혼합물(acetone/hydrocarbon mixtures)로 결정화시켜 성가신 크로마토그래피 정제(chromatographic purifications) 없이 고순도로 획득될 수 있다. 본 발명의 공정 실험재료를 사용하여 획득된 도세탁셀(Docetaxel)은 99 %(HPLC 면적 %) 보다 높은 순도와 각기 0.1 %(HPLC 면적 %) 보다 낮은 7-에피 도세탁셀(7-epi docetaxel)과 10-데하이드로도세탁셀(10-dehydrodocetaxel)의 함량을 갖는 특징이 있다.

본 발명을 다음 실시예들로 보다 자세하게 설명한다.

실시예 1. 10- 데아세틸 -7,10- 비스트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ(10- Deacetyl -7,10-bistrichloroacetylbaccatin Ⅲ)(Ⅵ)

10-데아세틸바카틴 Ⅲ(10-Deacetylbaccatin Ⅲ)(15 g)을 피리딘(pyridine) 60 ml 중에 용해된 트리클로로아세틸 클로라이드(trichloroacetyl chloride) 6.6 ml로 0 - 5 ℃에서, 교반 하 1시간 동안 처리시켰다. 혼합물을 메틸렌 클로라이드(methylene chloride) 100 ml와 4 N 염산(hydrochloric acid) 100 ml로 희석시켰다. 상들(phases)을 분리시키고, 유기상은 4 N 염산(hydrochloric acid) 100 ml와 소디움 클로라이드(sodium chloride)로 포화된 물 50 ml로 세척했다. 유기상은 진공 하에서 농축시키고, 잔사는 톨루엔(toluene) 100 ml로 용해시켰다. 생성물 화합물(Ⅵ)는 여과하여 모으고, 진공 하 50 ℃에서 건조시켰다. 후자는 35 ℃에서 CH₂Cl₂ (80 ml)에 용해시키고, 키세겔 60 머크(Kiesegel 60 Merck)(용리액 : CH₂Cl₂) 800 g을 사용한 컬럼 크로마토그래피(column chromatography)로 정제시켰다. 분획물들을 모으고(TLC : CH₂Cl₂), HPLC로 점검되었다. 모노(mono) 7과 10.-트리클로로아세틸 바카틴 Ⅲ(trichloroacetyl baccatin Ⅲ)의 전체 함유량은 0.1 % 보다 적었다. 정제된 화합물 (Ⅵ)을 수득하기 위해 톨루엔(toluene) 중에서 침전시켰다(17.8 g, 21.4 mmol, 660/26/B, A% 순도 : 99 %, 수득률 : 78 %).

실시예 2. 2-(2,4- 디메톡시페닐 )-3-(2- 니트로벤젠설페닐 )-4( 에스 )- 페닐 - 5(알)- 옥사졸리딘 카복실산 , 10- 데아세틸 -7,10- 비스 - 트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ 13-일-에스테르(2-(2,4- Dimethoxyphenyl )-3-(2- nitrobenzensulfenyl )-4( S )- phenyl -5( R )-oxazolidine carboxylic acid , 10- deacetyl -7,10- bis -trichloroacetylbaccatin Ⅲ 13- yl - ester )(Ⅶ)

물 100 ml 중에서 소디움 염(sodium salt)의 형태으로 화합물(Ｖ) 10.3 g을 함유한 용액을 0 - 5 ℃로 냉각시키고, 2 M 소디움 비설페이트(sodium bisulfate) 용액으로 pH 2 - 3으로 조정하였다. 반응 혼합물은 0 ℃에서 15 분 동안 교반시키고, 다음 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(70 ml)를 첨기시켰다. 두 상들(phases)은 분리시키고, 수성층은 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(1 × 50 ml)로 한번 추출했다. 모은 유기상들은 NaCl 포화 용액(1 × 25 ml)(360 g/l)으로 세척하고, 무수 MgSO₄(3 g, KF 0.12 %) 상에서 건조시켰다. 여과 후, 용액은 진공 하 실온에서 100 ml까지 농축시켰다. 화합물(Ⅵ) 12 g을 노란색 용액에 첨가한 후, 디메틸아미노피리딘(dimethylaminopyridine)(DMAP) 0.175 g(1.42 mmol)을 가하고 시약의 완전히 용해 후, 디사이클로헥실카보디이미드(dicyclohexylcarnoddiieide)(DCC) 5.88 g을 가하였다. 반응 혼합물은 한 시간 동안 실온에서 교반 시킨다. 출발화합물 (Ⅵ)이 TLC(에틸 아세테이트/헥산(ethyl acetate/hexane) : 1/2, H₂SO₄(31 mL), 암모니움 몰리브데이트(ammonium molybdate)(19 g)와 물(500 mL) 중에 용해된 (NH₄)₄Ce(SO₄)₄?2H₂O(1.9 g)을 함유한 용액을 분무시키고 130 ℃에서 5분 동안의 가열하여 검출 함)에 의해 발견되지 않았다. 디사이클로헥실우레아(dicyclohexylurea)(DCU)로 형성된 침전물을 여과 제거하고 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(1 × 20 mL)로 세척했다. 클로로메틸렌(chloromethylene) 용액을 증발 건조시켜 24 g의 화합물(Ⅶ)을 얻었다.

실시예 3. 2-(2,4- 디메톡시페닐 )-3-(2- 니트로벤젠설페닐 )-4( 에스 )- 페닐 -5(알)- 옥사졸리딘 카복실산 , 10- 데아세틸바카틴 Ⅲ 13-일-에스테르(2-(2,4-Dinethoxyphenyl)-3-(2-nitrobenzensulfenyl)-4( S )-phenyl-5( R )-oxazolidine carboxylic acid , 10- deacetylbaccatin Ⅲ 13- yl - ester )(Ⅷ)

테트라하이드로푸란(tetrahydrofuran) 100 ml에 24 g의 화합물(Ⅶ)을 포함하는 용액을 진공 하에서 농축시키고, 잔사는 테트라하이드로푸란(tetrahydrofuran)(THF) 150 ml에 섞고, 혼합물을 100 ml가 될 때까지 진공 하에서 농축시켰다.

진한 암모니움 하이드록사이드 33 %(Conc ammonium hydroxide)(NH₄OH, 1.8 ml, 30 mmol)를 실온에서 5 분 동안 첨가시키고, 반응 혼합물은 실온에서 2시간 동안 교반 시켰다. 혼합물의 TLC는 화합물 (Ⅶ)를 보이지 않았다(에틸 아세테이트/헥산(ethyl acetate/hexane) : 4/3). 용액은 진공 하에서 농축시키고, 잔사는 메탄올(MeOH)(125 ml)에 섞었다. 현탁액은 2 시간 동안 교반 시켰다. 침전물은 소결 유리 여과기(sintered glass filter)를 통해 여과시키고, MeOH (10 ml)로 세척하여 화합물 (Ⅷ)(13 g, 12 mmol, HPLC A% = 93 %, 수득률 84 %)을 얻었다. 모액은 9.3 g의 버려질 잔사를 함유하고 있다.

실시예 4. 10- 데아세틸 -N- 데벤조일 -파클리탁셀(10- Deacetyl -N- debenzoyl -paclitaxel)(Ⅰ)

메탄올(methanol) 260 ml 중에 녹인 화합물(Ⅷ) 13 g의 현탁액을 메탄올(methanol) 130 ml로 희석된 4.2 ml의 농축된 수성 염산(hydrochloric acid)으로 교반 하 실온에서 30 분 동안 처리시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반 시키고, 현탁액은 맑은 노란색 용액이 되었다. 혼합물의 TLC는 화합물 (Ⅷ)를 보이지 않았다(에틸 아세테이트/헥산(ethyl acetate/hexane) : 4/3). 용액을 물(350 ml)에 천천히 희석시키고(침전물의 형성을 피하기 위해), 균질한 용액을 실온에서 30 분 동안 교반 시킨다. 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(200 ml)를 첨가하고, 두 상(two phases)을 분리시킨 후, 수성 층을 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(2 × 100 ml)로 다시 추출하였다. 유기상은 제거하였다. 하이드로-알코올성 상(The hydro-alcoholic phase)은 0 - 5 ℃로 냉각시키고, 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(1 × 100 ml)로 희석시킨다. 강력한 교반 하 0 - 5 ℃에서 진한 암모니아(conc.ammonia)(3.1 ml, NH₄OH)를 pH가 7 - 8이 되도록 방울방울(온도의 1도 증가가 획득된다) 첨가시킨다. 2개 상의 반응물(biphasic reaction)을 20 분 동안 같은 온도에서 교반시키고, 다음 상(phases)들을 분리시키고, 수성 층은 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(5 × 100 ml)로 추출한다.

모은 유기 층들은 100 ml가 될 때까지 진공 하에서 농축시키고, 교반 하 실온에서 생성물을 결정화시킨다. 침전물은 유리 소결 여과기(glass sintered filter)를 통해 여과시키고, 40 ℃에서 하룻밤 동안 진공 하 건조 후에, 표제 화합물 7.5 g을 얻었다.

실시예 5. 도세탁셀(Docetaxel)의 제조

화합물 (Ⅰ)(16 g, HPLC 순도 분석 : 90.57 %, 20.49 mmol)을 무수알코올(EtOH)와 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(320 ml) 1 : 1 혼합물에 용해시키고, 약간 누르스름한 용액에 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)(24.18 mmol, CH₂Cl₂ 5 ml에 용해된 5.27 g) 중에 녹인 디-터트-부틸 디카보네이트(di-tert-butyl dicarbonate) (BOC)₂O 을 첨가시킨다. 첨가 종료시점에서 반응 혼합물을 실온에서 16 시간 동안 교반 시킨다. TLC로 화합물 (Ⅰ)이 보이지 않는다(CH₂Cl₂/MeOH : 9/1, H₂SO₄(31 ml), 물(500 ml)에 황산(31 ml), 암모니움 몰리브데이트(ammonium molybdate)(19 g) 그리고 (NH₄)₄Ce(SO₄)₄?2 H₂O(1.9 g)를 함유한 용액으로 분사시키고, 5 분 동안 130 ℃로 가열하여 검출함). 메틸렌클로라이드(CH₂Cl₂)는 증류하여 제거하고, 아세트산(acetic acid)을 용액에 첨가한다(0.39 ml). 산성 에탄올(acidic ethanol) 용액 을 50 ℃로 가열하고, 맑은 물(320 ml)를 방울방울 첨가한다. 혼합물은 50 ℃에서 한 시간 동안, 그리고 실온에서 추가로 2 시간 동안 남겨둔다. 침전물은 소결 유리 여과기(glass sintered filter)를 통해 여과시키고, 진공 오븐(vacuum oven) 안으로 옮기고, 진공 하 40 ℃에서 하룻밤 동안 유지시켜, 반-정제 도세탁셀(semi-purified Docetaxel) 16.75 g을 수득하였고 제거될 수 있는 모액 1 g을 얻었다.

조생성물을 두 번 결정화하고 ; 반-정제 도세탁셀(semi-purified Docetaxel)은 50 ℃에서 95 % 에탄올(ethanol)(160 ml)에 용해하고 아세트산(acetic acid)(0.39 ml)를 첨가한다. 맑은 물(320 ml)의 첨가 후, 혼합물은 50 ℃에서 한 시간 동안, 추가로 실온에서 2 시간 동안 방치하였다. 침전물은 소결 유리 여과기(glass sintered filter)를 통해 여과시키고, 진공 오븐(vacuum oven) 안으로 옮긴 다음, 진공 하 40 ℃에서 하룻밤 동안 유지하여 도세탁셀(Docetaxel) 15.25 g을 얻었고, 제거될 수 있는 모액 0.4 g을 얻었다. 두 번째 결정화는 30 ℃에서 아세톤(acetone)(150 ml) 중에 생성물을 재-용해(re-dissolving) 시키고 헵탄(150 ml를 첨가하여 수행하였다. 혼합물을 3 시간 동안 실온에 방치한다. 침전물은 소결 유리 여과기(glass sintered filter)를 통해 여과시키고, 진공 오븐(vacuum oven) 안으로 옮긴 다음, 진공 하 40 ℃에서 하룻밤 동안 유지하여 도세탁셀(Docetaxel) 13.9 g을 얻었다(HPLC 확인 : 99.4 % 보다 높은 순도, <0.1 %의 7-에피 도세탁셀(7-epi docetaxel)과 <0.1 %의 10-데하이드로도세탁셀(10-dehydrodocetaxel)).

실시예 6. 도세탁셀(Docetaxel)의 다른 제조 방법

데-복 도세탁셀(De-BOC Docetaxel)(30.0 g, 42 mmol, 98 % HPLC 순도, 0.2 % 7-에피 아이소머(7-epi isomer))을 1 l 반응기에 옮기고, 다음 디클로로메탄(dichloromethane) 60 ml, 무수 ethanol(ethanol) 150 ml, 빙초산(glacial acetic acid)(3 % mol) 73 μl를 25 ℃에서 가하여 현탁액을 얻었다.

DCM 30.0 ml에 용해된 복 무수물(BOC anhydride)(11.0 g, 51 mmol)을 25 ℃에서 현탁액에 방울방울 첨가시키고 ; 깨끗한 용액을 첨가종료시험에서 얻었다.

3 시간 후 반응은 빙초산(glacial acetic acid)(0.7 ml, 30 % mol)으로 침지시켜 종료시키고, 디클로로메탄(dichloromethane)은 30 ℃, 진공 하에서 증류시켜 제거시킨다. 다음 무수 에탄올(ethanol)(90 ml)을 첨가하고, 같은 조건 하에서 증류 제거시킨다.

맑은 용액은 50 ℃로 가열되고, 물(570 ml)은 약 3 시간 동안 방울방울 첨가시킨다. 현탁액은 1 시간 동안 50 ℃에서 교반하고, 그 후 25 ℃로 1 시간 동안 냉각한 다음, 16 시간 동안 같은 온도에서 교반한다.

흰색 고체를 여과하고, 물(40 ml)과 무수 에탄올(18 ml)의 용액으로 두 번 세척한다.

조원료 재료는 에탄올(ethanol)(250 ml)와 빙초산(glacial acetic acid)(630 μl)와 함께 반응기에 넣는다.

혼합물을 50 ℃로 가열시키고, 완전한 용해가 이루어진다. 물(570 ml)은 약 2 시간 동안 방울방울 첨가시킨다. 혼합물은 25 ℃로 1 시간 동안 냉각시키고, 90 분 후 현탁액은 구치 P3(gooch P3) 상에서 여과시키고, 물(40 ml)와 무수 에탄 올(ethanol)(18 ml)의 용액으로 한 번 세척한다.

백색 고체로 획득된 도세탁셀(Docetaxel)을 16 시간 동안 55 ℃로 진공 하에서 건조시키고, 건조된 고체의 최종 중량은 32.6 g이다.

조원료 도세탁셀(Docetaxel)(5.0 g, 6.2 mmol)은 반응기 500 ml에 옮기고, 아세톤(aceton)(50 ml) 중에서 50 ℃에서 용해시켰다.

다음 n-헵탄(n-Heptane)(50 ml)을 50 ℃에서 약 1 시간 동안 천천히 첨가시킨다. 이렇게 획득된 현탁액은 50 ℃에서 1 시간 동안 교반하고, 그 후 25 ℃로 냉각시킨 다음, 16 시간 동안 같은 온도에서 교반한다.

현탁액은 구치 P3(gooch P3) 상에서 여과하고, n-헵탄(n-Heptane)으로 한번 세척시킨 다음, 16 시간 동안 진공 하 55 ℃에서 건조한다(89 % 수득률, >99.5 % 순도 HPLC, <0.10 %의 7-에피 도세탁셀(7-epi docetaxel)과 <0.10 %의 10-데하이드로도세탁셀(10-dehydrodocetaxel)).

도 1은 실시예 5의 공정에 의해 제조된 시료의 XRD 회절분석도표(diffractogram)이다.

도 2는 실시예 5의 공정에 의해 제조된 시료의 DSC 열도포(DSC thermogram)이다.

Claims (7)

10-데아세틸바카틴 Ⅲ과 트리클로로아세틸클로라이드를 피리딘 중 0~5 ℃에서 반응시켜, 반응 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피(silica gel chromatography)를 포함하는, HPLC로 측정할 때 0.1 % 이하의 상응하는 7- 또는 10- 모노-트리클로로아세틸 유도체를 함유하는 10-데아세틸-비스-7,10-트리클로로아세틸바카틴 Ⅲ(10-deacetyl-bis-7,10-trichloroacetylbaccatin Ⅲ)(VI)의 제조 방법.

하기 구조식을 갖는 중간체 (Ⅰ) 화합물과 디-터트-부틸 디카보네이트(di-tert-butyl dicarbonate)를 염기 부재하 에탄올과 메틸렌클로라이드 혼합물 중에서 반응시키고, 얻어진 반응물을 에탄올/물 및 아세톤/헵탄 혼합물로 재결정시키는 도세탁셀(Docetaxel)의 제조 방법.

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