KR101196736B1 - 고함량의 베타글루칸이 함유된 상황버섯 균사체 생산방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 고함량의 베타글루칸이 함유된 상황버섯 균사체 생산방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상황버섯 균사체에 한약재 추출물과 쌀겨를 가하여 배양기간을 단축하고 배양액을 한외여과하고 에탄올을 이용하여 정제함으로써 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯 균사체를 생산하고 상황버섯 균사체 분말을 제조하는 것을 특징으로 한다.
상황버섯, 균사체, 베타글루칸

Description

고함량의 베타글루칸이 함유된 상황버섯 균사체 생산방법{Methods of producing of Phellinus linteus mycellium having high β-glucan content}
본 발명은 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체 생산방법 및 상황버섯 균사체 분말제조방법에 관한 것이다.
버섯류는 생물의 분류체계상 담자균류에 속하는 미생물로서, 오래전부터 식용으로 사용되어 왔으며, 또한 각종 질병에 대한 민간 전통약재로 전래 되어 왔다. 현재 지구상에는 약 15,000여종의 버섯이 자생하고 있는데, 독성이 있는 것을 제외하면 대부분 식용으로 사용이 가능하다. 이러한 버섯류는 다당류인 글루칸 및 그 유도체를 다량 함유하고 있는 것으로 보고되어 있는데, 글루칸과 같은 다당류는 항암작용이 있는 것으로 알려져 있다.
베타글루칸은 다당류의 일종으로서 인간의 정상적인 세포조직의 면역기능을 활성화시켜 암세포의 증식과 재발을 억제하고 면역세포의 기능을 활발하게 하는 인터루킨(interleukin), 인터페론(interferon)의 생성을 촉진시킨다. 활성 베타글루칸은 암세포가 있는 체내로 들어가 사이토카인(Cytokine)을 생산시킴으로써 면역 세포인 T세포와 B세포의 활동을 지원하여 세포조직의 면역기능을 활성화 시켜준다.
또한 버섯은 대부분 식용으로 사용되고 있어서, 부작용이 적고, 독성 면에서도 안전함과 아울러 인체 면역 기능을 강화시키고 항암효과가 탁월한 것으로 알려져 있다. 특히 상황버섯은 다른 버섯과 비교할 때 면역증강제, 항암제로서의 효과가 탁월한 것으로 알려져 있지만 다년생으로 자연계에서 번식이 잘 되지 않는다. 또한, 자원 고갈과 생태계 파괴라는 문제가 있어서 자실체 입수가 매우 어렵다. 상황버섯은 세계적으로 널리 분포되어 있으나 자연에서 자실체 형성이 잘 되지 않는다.
종래의 상황버섯 인공재배 방법으로는 톱밥과 같은 여러 가지 목재 부산물, 곡물을 혼합한 것, 한약재 부산물을 이용하여 자실체를 재배하는 방법이 있다. 그러나, 상황버섯 자실체를 인공재배하는 종래의 방법은 3~6개월이라는 장기간의 배양기간이 소요되어 대량생산이 어렵고 수요를 충족시키지 못하고 있다. 반면 상황버섯 균사체의 배양은 자실체 형성에 소요되는 시간을 단축시킬 수 있을 뿐만 아니라 단시간에 다량의 다당류를 얻을 수 있다는 장점이 있다. 그러나 종래의 상황버섯 균사체 배양방법은 까다로운 배양조건으로 인해 대량생산이 어려운 실정이다. 이와 같이, 상황버섯은 항암제, 면역증강제로서 효과가 있음에도 불구하고 그 공급이 제한적이고 대량생산 및 속성생산이 용이하지 아니하여 널리 활용되지 못하고 있다.
상황버섯 인공배양에 관련된 선행기술로서 대한민국 특허 등록번호 제51056호(등록일 1992.04.24)는 뽕나무, 뽕나무 톱밥 미강을 혼합한 것을 배지로 하여 상 황버섯 균사체를 배양하는 방법을 개시하고 있으나 이 기술의 배양배지의 주원료가 되는 뽕나무 또는 그 고목을 쉽게 구할 수 없으므로 배양배지의 대량제조가 어려우며 본 배양기간이 50~60일로써 장기간이 소요되는 문제가 있다.
또한 대한민국 특허 등록번호 제204984호(등록일 1999.03.31)에서는 펠리누스 린테우스 균사체의 배양배지 성분으로서 곡류를 이용하는 방법을 개시하고 있으나, 이 방법 역시 60일의 본 배양시간이 필요하여 경제적이지 못한 문제점이 있다.
베타글루칸 함량이 높은 상황버섯 균사체 인공배양과 관련된 선행기술로서 대한민국 특허 공개번호 10-2007-0121073호(공개일 2007.12.27)는 배양중의 베타글루칸 함량을 증가시키는 방법을 개시하고 있으나, 이 방법 역시 본 배양 기간이 10~25일로 배양시간이 길며 배양액 중의 베타글루칸 함량만 높였을 뿐 배양액 중의 베타글루칸만을 선택적으로 정제하는 방법에 대해서는 언급되어 있지 않다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 반응표면분석법을 이용하여 짧은 시간 내에 다당체의 수율이 높은 상황버섯 균사체 배양 배지의 최적화 조건을 확립할 수 있었으며 한외여과를 이용하여 베타글루칸 순도가 높은 상황버섯 추출분말을 획득할 수 있음을 확인하였다.
따라서 본 발명의 주된 목적은 상황버섯 균사체 추출물의 주성분인 다당체들의 함량이 높은 상황버섯 균사체를 생산하는 방법을 제공하는데 있다.
또한 본 발명은 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯 균사체 분말 제조방법을 제공한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 (a) 인삼, 황기, 애엽(약쑥), 당귀, 상백피(뽕나무껍질) 및 오가피로 이루어진 한약재 혼합물을 열수추출하여 제조된 한약재추출물, 쌀겨 및 증류수를 포함하는 상황버섯 배양배지를 준비하는 단계; (b) 상기 배지에 상황버섯 종균을 접종하여 배양하는 단계; 및 (c) 상기 배양시 공기주입량을 0.5-1.1 vvm으로 하여 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체를 생산하는 방법을 제공한다. 또한 (a) 상기 방법으로 생산된 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체 배양액에 이온수를 첨가하고 가열하여 추출하는 단계; (b) 상기 추출액에 상기 균사체 배양액의 2-5 중량%의 퍼라이트를 첨가하여 여과하는 단계; (c) 상기 여과액을 한외여과하여 저분자량의 물질을 제거하고, 진공농축하는 단계; (d) 상기 농축액을 에탄올로 침전시키는 단계; (e) 상기 침전물을 원심탈수하여 회수하는 단계; 및 (f) 상기 회수물을 진공건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체 분말 제조방법을 제공한다.
본 발명의 제 1의 양태는 (a) 인삼, 황기, 애엽(약쑥), 당귀, 상백피(뽕나무껍질) 및 오가피로 이루어진 한약재 혼합물을 열수추출하여 제조된 한약재추출물, 쌀겨 및 증류수를 포함하는 상황버섯 배양배지를 준비하는 단계; (b) 상기 배지에 상황버섯 종균을 접종하여 배양하는 단계; 및 (c) 상기 배양시 공기주입량을 0.5-1.1 vvm으로 하여 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체를 생산하는 방법을 제공한다.
상세하게는 상기 상황버섯 배양배지는 전체 배지 조성물 대비 상기 한약재추출물 5-15 중량%, 쌀겨 0.5-1.5 중량% 및 증류수 71.5 -92 중량%를 포함하고, 추가하여 무수결정포도당 2-10 중량% 및 감자전분 0.5-2 중량%를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 제 2의 양태는 상기 방법으로 생산된 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체 배양액에 이온수를 첨가하고 가열하여 추출하는 단계; (b) 상기 추출액에 상기 균사체 배양액의 2-5 중량%의 퍼라이트를 첨가하여 여과하는 단계; (c) 상기 여과액을 한외여과하여 저분자량의 물질을 제거하고, 진공농축하는 단계; (d) 상기 농축액을 에탄올로 침전시키는 단계; (e) 상기 침전물을 원심탈수하여 회수하는 단계; 및 (f) 상기 회수물을 진공건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체 분말 제조방법을 제공한다. 보 다 상세하게는 상기 이온수의 양은 상기 균사체 배양액의 0.5 내지 2배수이고, 상기 가열온도는 95℃ 이상 100 ℃ 이하이고, 상기 가열시간은 1 내지 5시간이고, 상기 한외여과시 제거되는 저분자량 물질은 분자량 20,000 이하의 저분자량 물질이고, 상기 진공농축은 20 내지 25브릭스까지 농축되는 것을 특징으로 한다.
상기 한외여과는 반투막을 이용하여 고분자물질과 저분자물질을 분리, 농축하는 방법으로, 일반 여과법으로 분리하기 힘든 콜로이드상 물질을 분리, 정제, 농축하는 방법이다. 분자량 500-300,000 까지 분리 가능하며, 이때 이용되는 반투막에는 콜로디온막, 셀로판막, 젤라틴막 등이 있다. 본 발명에 사용된 한외여과는 분자량 20,000 이하의 저분자 물질을 제거하는 것을 특징으로 한다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실
시예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1 > 반응표면분석법을 통한 최적화
배양액 중의 총당함량과 균사체 함량에 대한 실험계획은 중심합성계획(Central composit design; CCD)에 따라 독립변수는 표 1에서와 같이 배지 내 한약재 추출물 함량비, 쌀겨 함량비, 배양중 공기주입량이었다.
한약재 추출물은 인삼 200g, 황기 200g, 애엽(약쑥) 200g, 당귀 200g, 상백 피(뽕나무껍질) 100g 및 오가피 100g을 2L의 정제수에 첨가한 후 110℃에서 2시간동안 중탕하여 제조하였다.
각각 독립변수의 범위는 예비실험을 통해 정하였다.
< 표 1 > 중심합성계획에 따른 독립변수
범위
부호화 -1.68 -1 0 1 1.68
한약재 추출물(%) 1.6 5 10 15 18.4
쌀겨(%) 0.16 0.5 1 1.5 1.84
공기주입량(vvm) 0.3 0.5 0.8 1.1 1.3
중심합성계획법에 의하여 세 개의 독립변수에 의한 17개의 배양조건을 계획하였으며 각 조건에 따라 7일간 배양하여 배양액 중의 총당 함량과 배양액을 여과하여 그 여액에 알코올을 첨가하여 침전을 일으키고 침전물을 회수하여 건조시켜 다당체의 수율을 나타낸 것이다. 각각의 실험값은 표 2에서와 같이 배양액 중 총당 함량은 38.45-74.16%, 다당체 수율은 0.42-0.81%로 나타났다.
< 표 2 > 각각의 독립변수에 의한 배양조건에 따른 실험결과
　 독립변수 종속변수
한약재
추출물(%)		 쌀겨(%) 공기주입량
(vvm)		 총당함량 (mg/mL) 다당체(%)
1 -1 -1 -1 49.54 0.43
2 1 -1 -1 46.27 0.56
3 -1 1 -1 51.25 0.52
4 1 1 -1 48.71 0.53
5 -1 -1 1 55.78 0.66
6 1 -1 1 53.67 0.61
7 -1 1 1 60.42 0.64
8 1 1 1 57.29 0.57
9 -1.68　 0 0 53.11 0.42
10 1.68　 0 0 49.25 0.56
11 0 -1.68　 0 60.82 0.71
12 0 1.68　 0 69.47 0.72
13 0 0 -1.68　 38.45 0.43
14 0 0 1.68　 53.98 0.66
15 0 0 0 74.16 0.79
16 0 0 0 71.54 0.78
17 0 0 0 72.68 0.81
배양액 중의 총당 함량과 다당체 수율에 대한 독립변수(한약재 추출물 및 쌀겨 함량비, 배양중 공기주입량)들의 반응표면 회기식은 표 3에 나타난 것과 같이 반응표면 회기식의 결정계수(R2)는 각각 0.994와 0.970으로 반응모형이 적합하였으며 통계적으로도 고도의 유의성이 인정되었다 (P-value < 0.01).
< 표 3 > 독립변수들의 반응표면 회기식
종속변수 반응표면 회기식 결정계수(R2) P-value
총당 (%) Y1 = 72.8052 - 1.2845X1 + 1.9739X2 + 4.2109X3 - 7.6825X1 2 - 2.7451X2 2 - 9.4379X3 2 - 0.0363X1X2 + 0.0712X1X3 + 0.5138X2X3 0.994 0.001
다당체 (%) Y2 = 0.7937 + 0.0187X1 + 0.0012X2 + 0.0605X3 - 0.1085X1 2 - 0.0289X2 2 - 0.0890X3 2 - 0.0175X1X2 - 0.0325X1X3 - 0.0150X2X3 0.970 0.001
배양액 중의 총당 함량과 다당체 함량에 대한 각각의 독립변수의 반응표면도식은 도 1에 나타낸 것과 같다. 배양액 중의 글루코즈 함량은 공기 주입량이 중심값인 0에 가까울수록 증가하는 경향을 나타냈으며 0을 지난 이후 부터는 다시 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 한약재 추출물의 첨가량이 10%까지는 첨가량이 늘수록 글루코즈 함량이 증가하였으나 10%이상 첨가되었을 경우 다시 감소하는 경향을 나타내었다. 그리고 다당체의 함량변화도 글루코즈의 함량변화와 비슷하게 각각의 독립변수의 중심값에 가까워질수록 다당체의 수율이 높아지다가 중심값을 지나면 다시 감소하는 경향을 나타내었다.
배양액 중의 글루코즈 함량과 다당체의 수율을 개별적으로 최적화하기 위한 조건과 두 가지 종속변수의 다중반응최적화를 위한 조건은 표 4와 같다. 배양액 중의 글루코즈 함량을 높이기 위한 최적화 조건과 다당체 수율을 높이기 위한 최적화 조건은 비슷하였다. 이는 배양액중의 글루코즈 함량이 높아짐에 따라 다당체의 함량이 늘어나는 것을 알 수 있었다.
< 표 4 > 다중반응최적화를 위한 조건
종속 변수 독립 변수 최적 독립 변수 종속변수
부호화 실제값 예상값 목표설정값

총당(%)		 한약재 추출물(%) -0.07 9.65 73.71 최대값
쌀겨(%) 0.36 1.18
공기주입량(vvm) 0.27 0.88

다당체 수율(%)		 한약재 추출물(%) -0.03 9.85 0.80 최대값
쌀겨(%) 0.08 1.04
공기주입량(vvm) 0.39 0.92

다중반응최적화		 한약재 추출물(%) 0.01 10.05
쌀겨(%) 0.36 1.18
공기주입량(vvm) 0.25 0.88
통계프로그램의 하나인 미니탭을 이용하여 배양액 중의 총당 함량과 균사체 함량의 최적화를 동시에 만족시키기 위해 다중반응최적화를 하였다. 다중반응최적화조건은 한약재 추출물과 쌀겨함량비, 그리고 배양중 공기주입량이 각각 10.05%, 1.18%, 0.88vvm으로 확립되었다.
< 실시예 2 > 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯 균사체 배양
베타글루칸 함량이 높은 상황버섯균사체를 배양하기 위한 배지와 배양조건을 표 5와 표 6에 나타내었다.
다중반응 최적화 조건에 의해 확립된 최적 배양조건인 쌀겨 1.18%와 한약재 추출물 10.05%가 첨가된 배지를 이용하여 공기주입량이 0.9vvm인 조건에서 7일간 배양하였다. 배양을 종료 직후 배양액의 글루코즈 함량과 다당체 침전물 수율은 각각 71.84 mg/mL과 0.77%로 예상값 보다 약간 낮은 값을 나타내었다(표 7).
< 표 5 > 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯균사체 배양 배지 조성
배양액 조성
품목 비 율(%)
무수결정포도당 5
감자전분 1
쌀겨 1.18
한약재 추출물 10.05
< 표 6 > 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯균사체 배양 조건
배양 조건
배양액 15 L
배양 온도 28℃
교반 속도 150 rpm
배양시간 7 day
종균배양액량 1.0 L
< 표 7 > 배양 후 배양액의 글루코즈 함량과 다당체 침전물 수율
종속변수 예상값 실제값
총당(%) 73.65 71.84
침전물량(%) 0.80 0.77
< 실시예 3 > 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯 균사체 추출분말 제조
베타글루칸 함량이 높은 상황버섯 균사체 추출분말을 제조하기위한 공정을 도 2에 나타내었다. 배양이 완료된 배양액에 배양액 대비 1배의 이온수를 첨가하여 95℃에서 1시간 추출을 한 후 배양액의 4%에 해당하는 퍼라이트를 넣고 배양액의 온도가 60℃가 되었을 때 필터프레스를 이용하여 여과하였다.
여과가 종료된 배양액은 한외여과를 이용하여 분자량 20,000이하의 저분자 물질들을 제거한 후 진공농축기를 이용하여 25브릭스까지 농축한 후 알코올을 이용하여 알코올 순도가 92%가 될 때까지 반복적으로 고분자물질들을 침전시켜 회수하여 진공건조 하였다.
표 8은 배양액에 퍼라이트를 넣고 필터프래스를 이용하여 여과한 여과액을 알코올을 이용하여 침전시킨 후 진공 건조시킨 후 측정한 상황버섯 균사체 추출물 의 베타글루칸 함량과 여과액을 한외 여과하여 분자량 20,000이하의 저분자물질을 제거한후 알코올을 이용하여 침전시킨 후 진공건조시킨 후 측정한 상황버섯 균사체 추출물의 베타글루칸 함량을 비교한 것이다.
이는 한외여과를 통하여 배양액 중의 베타글루칸 이외의 배지성분들과 저분자 물질들이 제거되어 베타글루칸의 순도가 높아진 것으로 판단된다.
< 표 8 > 상황버섯 균사체 추출물의 글루칸 함량
총글루칸 알파글루칸 베타글루칸
배양액 알코올 침전물 60.53 9.07 51.46
한외여과 후 알코올 침전물 92.38 6.73 85.65
< 실험예 1 > 균사체 추출분말의 측정방법
실시예 3의 유효성분인 베타-글루칸의 측정은 메가자임 β-글루칸 분석 키트(Megazyme β-glucan assay kit; Megazyme International Ireland Ltd., Ireland)를 이용하여 총 글루칸과 글루칸 이외의 당함량을 구한 후, 알파-글루칸과 글루칸 이외의 당함량의 값을 빼서 구하였다.
각각의 0.5mm 크기 이하의 균사체 분말 100mg에 1.5mL 염산(37%, v/v)을 첨가 후, 내용물을 잘 섞어준 다음, 30℃에서 60분 동안 15분 간격으로 잘 섞어 주었다. 전분 및 단백질을 분해, 제거시키기 위하여 증류수10mL씩을 첨가 후 2시간 동안 끓는 물(100℃)에 방치하였다.
그 후, 실온에서 내용물을 식힌 후, 2N KOH를 첨가하여 pH를 맞추고, 200mM 소듐 아세테이트 완충액(sodium acetate buffer; pH 5.0)로 희석하였다. 희석된 내용물은 원심분리를 통해 상층액을 얻어 상층액 100uL에 엑솔, 3-β-글루카네이즈(exo1,3-β-Glucanase; 100U/mL) + β-글루코시다아제(β-Glucosidase; 20 unit/mL) 용액을 100uL씩 첨가하여 1시간 동안 40℃에서 방치하고, 글루코즈 측정 용액(glucose determination reagent) 3mL을 첨가한 후 40℃에서 20분 동안 방치하였다. 그 후, 510 nm에서 흡광도를 측정하여 총 글루칸과 글루칸 이외의 당 함량값을 얻었다. 또한 알파-글루칸과 글루칸 이외의 당함량값은 균사체분말 100mg에 2M KOH 2mL를 넣고 마그네틱바를 이용하여 얼음이 채워진 수욕에서 20분간 교반한 후에 1.2 M 소듐 아세테이트 완충액(Sodium acetate buffer; pH 3.8) 8mL를 첨가하였다.
또한 아밀로글루코시다아제(Amyloglucosidase; 1630 unit/mL) + 인버타아제(Invertase; 500 unit/mL) 용액을 200uL 첨가한 후, 40℃에서 30분 동안 방치하고, 200nM 소듐 아세테이트 완충액(sodium acetate buffer; pH 5.0)을 이용하여 희석하였다. 그 다음 글루코즈 측정 용액(glucose determination reagent) 3mL를 첨가한 후 20분 동안 40℃에서 방치하였다. 그 후 510nm에서 흡광도를 측정하여 알파-글루칸과 글루칸 이외의 당함량값을 얻었다.
베타-글루칸 함량은 아래의 식을 통해 구했다.
베타 글루칸 = (총 글루칸+글루칸 이외의 당) - (알파 글루칸+글루칸 이외의 당)
이상 설명한 바와 같이, 본 발명자들은 최근 식품의 제조공정이나 신제품 개발 등에서 사용되는 반응표면분석법을 이용하여 빠른 시간 내에 베타글루칸 함량이 높은 상황버섯균사체를 배양하는 최적 조건을 확립하였다. 또한, 그 배양액을 이용하여 한외여과를 한 후 알코올침전을 하여 상황버섯 균사체 추출물의 베타글루칸의 함량을 높일 수 있게 하였다.
도 1은 상황버섯 균사체 배양시 독립변수의 변화에 따른 배양액중의 글루코즈함량과 다당체 함량 변화를 나타낸 것이다.
도 2는 상황버섯 균사체를 최적 조건에서 배양한 뒤 베타글루칸 함량을 높힌 상황버섯 균사체 추출분말을 제조방법을 나타낸 것이다.

Claims (4)

  1. (a) 인삼, 황기, 애엽, 당귀, 상백피 및 오가피로 이루어진 한약재 혼합물을 열수추출하여 제조된 한약재추출물, 쌀겨 및 증류수를 포함하는 상황버섯 배양배지를 준비하는 단계;
    (b) 상기 배지에 상황버섯 종균을 접종하여 배양하는 단계; 및
    (c) 상기 배양시 공기주입량을 0.5-1.1 vvm으로 하여 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 상황버섯 균사체를 생산하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 상황버섯 배양배지는 전체 배지 조성물 대비 상기 한약재추출물 5-15 중량%, 쌀겨 0.5-1.5 중량% 및 증류수 71.5-92 중량%를 포함하고, 추가하여 무수결정포도당 2-10 중량% 및 감자전분 0.5-2 중량%를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 상황버섯 균사체를 생산하는 방법.
  3. (a) 제 1 항 내지 제 2 항 중 어느 하나의 방법으로 생산된 상황버섯 균사체 배양액에 이온수를 첨가하고 가열하여 추출하는 단계;
    (b) 상기 추출액에 상기 균사체 배양액의 2-5 중량%의 퍼라이트를 첨가하여 여과하는 단계;
    (c) 상기 여과액을 한외여과하여 분자량 300,000 이하의 저분자량의 물질을 제거하고, 진공농축하는 단계;
    (d) 상기 농축액을 에탄올로 침전시키는 단계;
    (e) 상기 침전물을 원심탈수하여 회수하는 단계; 및
    (f) 상기 회수물을 진공건조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 상기 단계 (a) 내지 (f) 수행 전과 비교하여 베타글루칸의 함량이 증가된 상황버섯 균사체 분말 제조방법.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 이온수의 양은 상기 균사체 배양액의 0.5 내지 2배수이고, 상기 가열은 95℃ 이상 100℃ 이하에서 1 내지 5시간 동안 실시하며, 상기 한외여과시 제거되는 저분자량 물질은 분자량 20,000 이하의 저분자량 물질이고, 상기 진공농축은 20 내지 25브릭스까지 농축되는 것을 특징으로 하는 상황버섯 균사체 분말 제조방법.
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