KR101182420B1

KR101182420B1 - 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법

Info

Publication number: KR101182420B1
Application number: KR1020100012056A
Authority: KR
Inventors: 이주석
Original assignee: 원진수산영어조합법인
Priority date: 2010-02-09
Filing date: 2010-02-09
Publication date: 2012-09-12
Also published as: KR20110092570A

Abstract

본 발명은 해삼을 분해하는 방법으로서, 보다 바람직하게 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라서 해삼을 분해함으로써, 해삼의 기능성 성분의 손실을 발생하지 않으면서도 해삼의 펩타이드의 수득률을 높일 수 있다.

Description

카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법{Decomposing method of sea cucumber containing cathepsin L}

본 발명은 해삼을 분해하는 방법으로서, 보다 바람직하게 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법에 관한 것이다.

우리나라를 포함하여 중국, 일본, 중국 등에 널리 분포하는 식용 해삼은 예로부터 수산 건강 식품으로 즐겨 사용되었으며, 학명은 Stichopus japonicus로 동일하나 생육환경에 따라 육색이 다르기 때문에 색깔에 따라 홍해삼, 청해삼 및 흑해삼 3종류로 구분한다. 해삼의 주요 섭취 부분인 체벽에는 단백질 약 21.45%, 지방 약 0.27%, 당분 약 1.37%가 함유되어 있으며, 상기 단백질은 주로 콜라겐(단백질의 약 70%를 차지함)과 점질성 다당체(푸코스 당 함유 콘드로이틴황산, 강글리오시드(ganglioside), 글라이코스핑고리피드(glycosphingolipid))로 이루어져 있다. 지금까지 연구에 따르면 해삼의 콜라겐은 다량의 수분을 보유할 수 있는 보습효과가 있고, 항산화 활성과 혈압을 감소시키는 작용이 있다고 알려져 있다. 또한 해삼의 푸코스 당 함유 콘드로이틴황산이 혈소판응집을 유도할 뿐만 아니라 강그리오시드는 신경돌기 발생에도 활성을 나타낸다고 알려져 있다. 뿐만 아니라, 동물세포에 대한 생물학적 작용에서 푸코스 당 함유 콘드로이틴황산(chondroitin sulfate)은 정자-난자의 상호작용 억제, 바이러스 감염 억제, P-셀렉틴 또는 L-셀렉틴에 의해 매개된 세포-세포 결합억제, 항응고 작용의 촉진과 섬유 모세포의 증식억제 등을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 최근에는 푸코스 당 함유 콘드로이틴황산염이 파골세포의 뼈 파괴 작용을 강하게 억제하는 작용도 있다고 알려져 있다. 그외에도 콜레스테롤을 강화 식이로 섭취한 쥐에 해삼의 세포 구성물질인 글라이코 아미노 글라이칸을 함께 섭취시키면 콜레스테롤 레벨과 아테롬 지표가 현저히 감소된다는 보고도 있다.

그러나 해삼을 날 것으로 섭취하거나, 단순히 동결하여 건조시킨 기존의 해삼 제품의 경우에는, 해삼의 단백질에 대한 소화흡수율이 떨어지는 문제점이 제기되어 왔다. 이러한 문제점을 감소시키기 위하여 가열 및 건조 처리를 한 해삼 제품의 경우에는, 해삼의 소화흡수율은 증진시킬 수 있었으나 해삼의 가열 처리 과정에서 해삼의 기능성 성분이 손실되는 또다른 문제점이 발생하였다.

따라서 해삼의 단백질 성분의 소화흡수율을 높일 수 있도록 펩타이드 형태로 가공하면서도, 해삼의 다른 기능성 성분들의 손실을 발생시키지 않거나 손실을 감소시킬 수 있는 방법이 고안될 필요가 있다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 해삼의 기능성 성분의 손실을 발생을 최소화하면서 해삼의 단백질 성분의 체내 흡수율을 높일 수 있는, 해삼을 분해하는 방법을 제공하는 것이다.

상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 카텝신 엘(cathepsin L)을 사용하며, pH와 온도를 조절하는 것을 특징으로 하는 해삼을 분해하는 방법을 제공한다.

상기에서 설명한 바와 같이, 해삼의 펩타이드의 체내 흡수율을 높이기 위하여 해삼을 분해하는 종래의 방법은, 단순히 해삼을 동결건조하거나 가열하는 방법을 사용하였다. 이 경우, 해삼의 단백질 성분만 분해되는 것이 아니라, 해삼에 포함된 다른 기능성 성분(당(sugar), 트리테르페노이드 사포닌, 푸코스당 함유 콘드로이틴황산(chondroitin sulfate), 강글리오시드(ganglioside), 글라이코스핑고리피드(glycosphingolipid) 등)이 손실되는 문제점이 발생하였다. 그 결과, 해삼의 단백질 성분 외의 기능성 성분들은 다른 음식이나 영양제 등을 통하여 추가적으로 흡수해야 하는 번거로움이 생겼다.

본 발명자들은 상기와 같은 pH, 온도의 조건 및 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해할 경우, 종래의 방법을 사용하여 해삼을 분해하는 경우보다, 소화흡수율이 뛰어난 해삼의 펩타이드 수득률을 상당히 높일 수 있고, 이와 함께 상기의 해삼의 기능성 성분의 손실도 획기적으로 줄어든다는 놀라운 사실을 발견하여, 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 방법에 의해 해삼을 분해하여 섭취하는 경우, 해삼의 펩타이드 성분뿐만 아니라 기타 기능성 성분의 흡수율도 높일 수 있으므로, 번거롭게 영양제 등을 통한 추가적 섭취를 하지 않아도 될 것으로 생각된다.

본 발명의 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법은 상기 목적을 달성하기 위하여, 다음과 같은 단계를 포함한다.

먼저, (a) 단계에서는 해삼을 절단한 후, pH 6.5 내지 8의 조건에서, 냉동 및 해동 싸이클을 3회 이상 반복하여 1차 분해물을 얻는다.

본 발명에 사용될 수 있는 해삼은, 홍해삼, 청해삼 및 흑해삼 등 모든 식용 해삼을 포함하며, 국내뿐만 아니라, 중국, 일본 등의 외국에서 생산된 해삼도 모두 포함한다.

상기 (a) 단계의 해삼의 절단은 1차 분해물을 얻는 시간을 단축시키기 위한 것으로서, 절단된 해삼의 가로, 세로 및 높이는 5 내지 10 cm의 범위에 있는 것이 바람직하나, 상기의 범위에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 (a) 단계에서 사용하는 해삼은, 단백질 기타 기능성 성분이 거의 포함되어 있지 않은 치설이 있는 두부와 내장을 제거하고, 체벽을 사용하는 것이 바람직하다. 다만, 두부와 내장을 제거하는 것은, 본 발명의 최종 산물인 해삼의 펩타이드, 기타 기능성 성분의 수율을 높이기 위한 것일 뿐, 본 발명의 효능에는 영향을 미치는 것이 아니므로, 반드시 두부와 내장을 제거해야 하는 것은 아니다.

또한, 상기 (a) 단계의 냉동 및 해동 싸이클은, -150 내지 -80 ℃의 온도범위에서 24 시간 이상 냉동한 후, 20 내지 25 ℃의 온도범위에서 완전히 해동하는 과정을 1 회의 싸이클로 포함한다. 상기 1 회의 싸이클을 3 회 이상 반복함으로써, 해삼의 체벽 및 세포가 1차적으로 분해된다.

이때, 상기 (a) 단계는 pH가 6.5 내지 8의 범위에서 실행되는 것이 바람직하며, 이를 위하여 사용한 해삼의 중량에 대해 동일한 양(W/V)의 0.1 M 인산 완충액을 첨가한다. 다만, 본 발명의 해삼에 첨가되었을 때 pH가 6.5 내지 8이 될 수 있고, 유해하지 않다면 상기 인산 완충액 외에 다른 완충액을 사용할 수도 있다.

다음으로, (b) 단계에서는 상기 1차 분해물을 30 내지 65 ℃의 온도와 pH 6.5 내지 8의 조건에서, 자가분해(autolysis)하여 2차 분해물을 얻는다. 상기의 자가분해(autolysis)란, 죽은 해삼의 조직을 구성하고 있는 물질이 사후경직기를 지나 그 조직 속에 함유되어 있는 효소의 작용에 의해 분해되는 것을 말한다.

상기 (b) 단계는 상기 (a) 단계로부터 얻은 1차 분해물의 중성 pH(pH 6.5 내지 8)를 그대로 유지하면서, 30 내지 65 ℃의 온도 범위에서 실행되며, 보다 바람직하게 45 내지 60 ℃의 온도범위에서 실행된다. 이러한 온도 범위를 유지하기 위하여 항온기를 사용할 수 있다.

또한, 상기 (b) 단계는 상기와 같은 중성 pH 및 온도 범위에서 3 시간 이상, 바람직하게 5 시간 이상 진행함으로써 상기 1차 분해물의 자가 분해(autolysis)가 더욱 용이해지며 그로부터 2차 분해물을 얻을 수 있게 된다.

다음으로, (c) 단계에서는 상기 2차 분해물을 45 내지 65 ℃의 온도와 pH 3 내지 5의 조건에서, 자가분해하여 3차 분해물을 얻는다.

상기 (c) 단계는 산성 pH(pH 3 내지 5)의 범위에서 실행되는 것이 바람직하며, 이를 위하여 아세트산을 사용할 수 있다. 다만, 상기 (b) 단계로부터 얻은 2차 분해물에 첨가되었을 때 pH가 3 내지 5가 될 수 있고, 유해하지 않다면, 상기 아세트산 외에 다른 산(acid)을 사용할 수도 있다.

또한 상기 (c)는 30 내지 65 ℃의 온도 범위에서 실행되며, 보다 바람직하게 45 내지 60 ℃의 온도범위에서 실행된다. 이러한 온도 범위를 유지하기 위하여 항온기를 사용할 수 있다.

또한, 상기 (c) 단계는 상기와 같은 산성 pH 및 온도 범위에서 2 시간 내지 7 시간 이하, 바람직하게 약 5 시간 동안 진행함으로써 상기 2차 분해물의 자가 분해(autolysis)가 더욱 용이해지며, 그로부터 3차 분해물을 얻을 수 있게 된다.

다음으로, (d) 단계에서는 상기 3차 분해물을 pH 6.5 내지 8으로 조정한 후 카텝신 엘(cathepsin L)을 첨가하여, 45 내지 65 ℃의 온도의 조건에서 얻은 4차 분해물로부터 해삼의 펩타이드를 얻는 단계를 포함한다.

상기 카텝신 엘은 다음과 같은 과정에 의해 수득된 것을 사용하였다. 먼저, 해삼의 체벽을 50 mM 아세트산 완충액(pH 5.0)에서 3회 파쇄한 후 4 ℃에서 하룻밤 동안 방치하여 침전물은 원심분리하여 제거하고, 상층액은 황산암모늄으로 20 %에서 80 %까지 포화시켰다. 효소가 함유된 침전 단백질은 20 mM 인산 완충액(pH 7.0)에 용해시키고 동일한 완충액으로 투석하여 황산암모늄을 제거하였다. 인산 완충액에 후 용해된 단백질은 DE-52 셀루로스 이온 클로마토그레피, 세프아크릴(Sephacryl) S200과 S400 겔 여과 과정을 통하여 정제하였고, 그 결과 카텝신 엘을 수득하였다.

또한, 상기 3차 분해물에 대한 카텝신 엘의 중량비(3차 분해물 : 카텝신 엘)는 100:1 내지 300:1가 바람직하다. 왜냐하면 3차 분해물에 대한 카텝신 엘의 중량비가 100:1 미만인 경우에는 효소의 소모량이 너무 많으며, 3차 분해물에 대한 카텝신 엘의 중량비가 300:1을 초과하는 경우에는 반응시간이 너무 오래 걸리기 때문에 바람직하지 않다.

또한, 상기 (d) 단계는 45 내지 65 ℃의 온도의 온도 범위에서 실행되며, 보다 바람직하게 50 ℃의 온도범위에서 실행된다. 이러한 온도 범위를 유지하기 위하여 항온기를 사용할 수 있다.

또한, 상기 (d) 단계는 pH 6.5 내지 8, 바람직하게 pH 7에서, 2 시간 내지 7 시간 이하, 바람직하게 5 시간 동안 진행한다. 상기의 pH 범위는 카텝신 엘이 작용하는데 최적의 pH이며, 특히 pH 7의 조건에서 카텝신 엘은 3차 분해물에 포함된 단백질에 대해서만 가수분해 작용을 일으키며, 다른 기능적 성분에 대해 화학적인 변화를 주지 않는다. 그 결과 3차 분해물로부터 고품질의 해삼의 펩타이드를 얻게 된다.

또한, 본 발명은, 상기 (d) 단계의 4차 분해물을 동결건조하여 분말형 해삼의 펩타이드를 얻을 수 있으며, 이 때 동결하는 온도는 -100 내지 -80 ℃의 범위에 있는 것이 바람직하다.

본 발명의 해삼을 분해하는 방법에 따라서 해삼을 분해함으로써, 해삼의 기능성 성분의 손실을 발생하지 않으면서도 해삼의 펩타이드의 수득률을 높일 수 있다.

본 명세서에 첨부된 도면은 본 발명의 바람직한 실시예 또는 실시예의 평가 결과를 예시하는 것이며, 발명의 상세한 설명과 함께 본 발명의 기술상의 이해를 돕기 위한 것이므로 하기 도면에 기재된 사항에만 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
도 1은 실시예 1 내지 4를 거치면서 해삼의 단백질이 분해되는 정도(펩타이드의 분자량의 변화)를 보여주는 실험예 1의 전기영동법을 실시한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2a 내지 도 2e는 실시예 1 내지 4를 거치면서 해삼의 기능성 성분 중 하나인 트리테르페노이드 사포닌(triterpenoid saponin)의 손실이 발생하지 않았음을 보여주는 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.
도 3은 Julibroside III(트리테르페노이드 사포닌의 표준물질)의 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

<실시예 1> 1차 분해물

본 발명의 (a) 단계의 1차 분해물을 얻기 위하여 다음의 과정을 실시하였다. 먼저, 홍해삼, 청해삼, 흑해삼의 3 종류의 해삼을 각각 10개씩 준비하였다. 이들을 증류수로 표면을 깨끗하게 씻은 후, 치설이 있는 두부와 내장을 제거하고 5 ~ 10 cm의 크기로 절단하였다. 상기 절단된 10개의 (처리전) 홍해삼으로부터 측정한 펩타이드 농도는 홍해삼 1 mL당 0.43 내지 0.55 mg이었고, 총 당의 함량은 홍해삼 1 mL당 46 내지 58.6 마이크로그램이었다. 또한, 상기 절단된 10개의 (처리전) 청해삼으로부터 측정한 펩타이드 농도는 청해삼 1 mL당 0.6 내지 0.73 mg였고, 총 당의 함량은 청해삼 1 mL당 43.9 내지 51.9 마이크로그램이었다. 또한, 상기 절단된 10개의 (처리전) 흑해삼으로부터 측정한 펩타이드 농도는 흑해삼 1 mL당 0.35 내지 0.42 mg였고, 총 당의 함량은 흑해삼 1 mL당 45.7 내지 56.2 마이크로그램이었다.

다음으로, 본 발명의 (a) 단계에 따라서, 절단된 해삼 100 g당 0.1M 인산 완충액 100 mL를 가하여 pH 7이 되도록 하였다. 반응이 진행되는 속도를 높이기 위하여, 인산 완충액이 가해진 절단된 해삼을 분쇄기에 넣고 3 내지 5 mm가 되도록 또다시 잘게 분쇄하였다.

그 후, 분쇄된 해삼을 액체질소로 처리하거나 초저온 냉동을 실시하여, -80 ℃ 이하에서 24 시간 이상 방치하여 냉동시켰다. 그 후, 20 내지 25 ℃의 상온에서 상기의 냉동된 해삼을 완전히 해동하여 1회의 냉동 및 해동 사이클을 실시하였다. 이와 같은 냉동 및 해동 싸이클을 2회 이상 더 반복하여, 홍해삼, 청해삼, 흑해삼에 대해, 각각 최종적 1차 분해물을 얻었다.

상기 각각의 1차 분해물에 포함된 해삼의 펩타이드 함량(1차 분해물 1 mL당 해삼의 펩타이드의 mg)을 측정하여 하기의 표 1에 나타냈다. 또한, 상기 1차 분해물에 포함된 기능성 성분 중 당의 함량(1차 분해물 1 mL당 해삼의 총 당의 마이크로그램)도 함께 측정하여 표 2에 나타냈다.

<실시예 2> 2차 분해물

본 발명의 (b) 단계의 홍해삼, 청해삼, 흑해삼의 2차 분해물을 얻기 위하여 다음의 과정을 실시하였다. 상기 1차 분해물을 (a) 단계와 마찬가지로 pH 7이 되도록 유지하면서 50 ℃에서 3 시간 이상 방치하였다. 그 결과, 홍해삼, 청해삼, 흑해삼에 대한 2차 분해물을 얻었다.

상기의 각각의 2차 분해물에 포함된 해삼의 펩타이드 함량(2차 분해물 1 mL당 해삼의 펩타이드의 mg)을 측정하여 하기의 표 1에 나타냈다. 또한, 상기 2차 분해물에 포함된 기능성 성분 중 당의 함량(2차 분해물 1 mL당 해삼의 총 당의 마이크로그램)도 함께 측정하여 표 2에 나타냈다.

<실시예 3> 3차 분해물

본 발명의 (c) 단계의 홍해삼, 청해삼, 흑해삼의 3차 분해물을 얻기 위하여 다음의 과정을 실시하였다. 상기 2차 분해물에 0.1M 아세트산을 가하여 pH 3 내지 5가 되도록 조정하고, 50 ℃에서 3 시간 이상 방치하였다. 그 결과, 홍해삼, 청해삼, 흑해삼에 대한 3차 분해물을 얻었다.

상기의 각각의 3차 분해물에 포함된 해삼의 펩타이드 함량(3차 분해물 1 mL당 해삼의 펩타이드의 mg)을 측정하여 하기의 표 1에 나타냈다. 또한, 상기 3차 분해물에 포함된 기능성 성분 중 당의 함량(3차 분해물 1 mL당 해삼의 총 당의 마이크로그램)도 함께 측정하여 표 2에 나타냈다.

<실시예 4> 4차 분해물

본 발명의 (d) 단계의 홍해삼, 청해삼, 흑해삼의 4차 분해물을 얻기 위하여 다음의 과정을 실시하였다. 상기 3차 분해물에 3M 가성소다(NaOH)을 가하여 pH 6.5 내지 8이 되도록 조정하고, 50 ℃에서 5 시간 이상 방치하였다. 그 결과, 홍해삼, 청해삼, 흑해삼에 대한 4차 분해물을 얻었다.

상기의 각각의 4차 분해물로부터 최종적으로 얻은, 본 발명의 해삼의 펩타이드 함량(4차 분해물 1 mL당 해삼의 펩타이드의 mg)을 측정하여 하기의 표 1에 나타냈다. 또한, 상기 4차 분해물에 포함된 기능성 성분 중 당의 함량(4차 분해물 1 mL당 해삼의 총 당의 마이크로그램)도 함께 측정하여 표 2에 나타냈다.

<실시예 5> : 분말형 해삼의 펩타이드

상기 실시예 4의 홍해삼, 청해삼, 흑해삼의 4차 분해물을 동결건조하여 분말형 해삼의 펩타이드를 수득하여 중량을 측정하였다. 상기 실시예 1에서 준비한 홍해삼, 청해삼, 흑해삼 100 g 당 약 10 g의 분말형 해삼의 펩타이드를 수득할 수 있었다. 즉 본 발명에 의하면 해삼으로부터 약 10%에 달하는 높은 수율의 분말형 해삼의 펩타이드를 수득할 수 있음을 알 수 있다.

<실험예 1> 전기영동법에 의한 해삼의 분해 정도 확인

상기 실시예 1 내지 4를 거치면서 해삼의 단백질이 분해되는 정도(펩타이드의 분자량의 변화)를 살펴보기 위하여 전기영동법을 실시하여 그 결과를 도 1에 나타냈다. 또한, 본 발명의 펩타이드 분자량을 알 수 있도록 도 1의 좌우측의 M에는 펩타이드의 표준 분자량을 나타냈다.

도 1을 통해서, (a) 단계, (b) 단계, (c) 단계 및 (d) 단계를 거치면서 해삼의 분해 정도가 더욱 좋아져서 수득되는 펩타이드의 분자량(kDa)이 점차 줄어들었음을 알 수 있다.

<실험예 2> 펩타이드 함량 및 총 당의 함량

상기의 실시예 1 내지 4로부터 수득한 해삼의 펩타이드 함량을 측정하여 하기의 표 1에 나타내고, 해삼의 기능성 성분 중 하나인 당의 함량을 측정하여 하기의 표 2에 각각 나타냈다.

대상	펩타이드 함량(mg/mL)
대상	홍해삼	청해삼	흑해삼
처리전 해삼	0.43-0.55	0.60-0.73	0.35-0.42
1차 분해물	0.96-1.21	0.96-1.01	0.73-1.26
2차 분해물	1.20-1.47	1.18-1.41	0.98-1.37
3차 분해물	1.45-1.65	1.59-1.61	1.64-1.73
4차 분해물	4.06-4.32	4.16-4.29	4.03-4.27

대상	총 당의 함량(마이크로그램/mL)
대상	홍해삼	청해삼	흑해삼
처리전 해삼	46.0-58.6	43.9-51.9	45.7-56.2
1차 분해물	75.2-92.1	74.4-95.2	76.0-94.8
2차 분해물	94.3-112.8	94.8-115.8	93.8-115.8
3차 분해물	99.4-117.3	97.7-106.8	94.8-106.8
4차 분해물	102.9-115.1	101.2-119.8	101.8-112.4

상기의 표 1의 결과에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 (a) 단계(실시예 1), (b) 단계(실시예 2), (c) 단계(실시예 3), 및 (d) 단계(실시예 4)를 거치면서, 해삼이 펩타이드로 분해되는 양이 상당히 증가하였다. 즉, 본 발명의 해삼을 분해하는 방법에 의하면 체내에서 보다 효율적으로 흡수될 수 있는 해삼의 펩타이드를 많은 양으로 수득할 수 있기 때문에, 같은 양의 해삼을 섭취하더라도 체내에서 흡수되는 펩타이드 함량을 더욱 높일 수 있다.

또한, 상기와 같이 많은 함량의 펩타이드를 얻기 위하여 여러 단계(실시예 1 내지 4)를 거쳤음에도 불구하고 이러한 과정에서 해삼의 기능성 성분 중 하나인 당의 함량에는 영향을 미치지 않았다. 오히려, 상기와 같이 여러 단계를 거치면서 수득할 수 있는 당의 함량도 점점 증가하였다.

즉, 본 발명에 의하면 열 처리 및 산 처리 단계를 거치면서도 해삼에 포함된 기타 기능성 성분 중 하나인 당의 손실 없이, 해삼으로부터 체내에 흡수가 용이한 펩타이드를 상당량 수득할 수 있다는 것을 알 수 있다.

<실험예 3> 자외선 흡수 스펙트럼에 의한 해삼의 기능성 성분의 확인

상기 실시예 1 내지 4를 거치면서 해삼의 단백질이 펩타이드로 분해되는 반면, 해삼에 포함된 기능성 성분 중 하나인 트리테르페노이드 사포닌(triterpenoid saponin)의 손실을 발생하지 않았음을 확인하기 위하여 자외선 흡수 스펙트럼을 조사하여 그 결과를 도 2a 내지 도 2e에 나타냈다. 대조군으로서 Julibroside III(트리테르페노이드 사포닌의 표준물질)에 대해 자외선 흡수 스펙트럼을 조사하여, 트리테르페노이드 사포닌의 특징적 피크는 220 nm 와 400 nm에서 나타난다는 것을 3을 통하여 나타냈다.

보다 상세하게, 도 2a는 실시예 1의 처리 전의 해삼, 도 2b는 실시예 1의 (a) 단계 처리 후의 1차 분해물, 도 2c는 실시예 2의 (b) 단계 처리 후의 2차 분해물, 도 2d는 실시예 3의 (c) 단계 처리 후의 3차 분해물, 도 2e는 실시예 4의 (d) 단계 처리 후의 4차 분해물에 대한 자외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다. 상기 도 2a 내지 도 2e의 스펙트럼을 살펴보면, 상기 스펙트럼들은 모두 트리테르페노이드 사포닌의 특징적 피크인 220 nm 와 400 nm에서 최대 흡광도를 보였다.

즉, 본 발명에 의하면 열 처리 및 산 처리 단계를 거치면서도 해삼에 포함된 기타 기능성 성분 중 하나인 트리테르페노이드 사포닌의 손실이 발생하지 않는다는 것을 알 수 있다.

Claims

(a) 해삼을 절단한 후, pH 6.5 내지 8의 조건에서, 냉동 및 해동 싸이클을 3회 이상 반복하여 1차 분해물을 얻는 단계,
(b) 상기 1차 분해물을 30 내지 65 ℃의 온도와 pH 6.5 내지 8의 조건에서, 자가분해하여 2차 분해물을 얻는 단계,
(c) 상기 2차 분해물을 45 내지 65 ℃의 온도와 pH 3 내지 5의 조건에서, 자가분해하는 3차 분해물을 얻는 단계, 및
(d) 상기 3차 분해물을 pH 6.5 내지 8으로 조정한 후 카텝신 엘(cathepsin L)을 첨가하여, 45 내지 65 ℃의 온도의 조건에서 얻은 4차 분해물로부터 해삼의 펩타이드를 얻는 단계를 포함하며,
상기 (a)단계의 상기 냉동은 초저온 냉동으로 실행되고, 상기 해동은 상온에서 실행되고, 상기 3차 분해물에 대한 카텝신 엘의 중량비(3차 분해물:카텝신 엘)는 100:1 내지 300:1인 것을 특징으로 하는 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법.
제 1항에 있어서, 상기 (d) 단계는 4차 분해물을 동결건조하여 분말형 해삼의 펩타이드를 얻는 단계인 것을 특징으로 하는 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 (a) 단계의 냉동 및 해동 싸이클의 냉동은 -150 내지 -80 ℃에서 실행되고 해동은 20 내지 25 ℃에서 실행되는 것을 특징으로 하는 카텝신 엘을 사용하여 해삼을 분해하는 방법.
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