KR101126080B1 - 베타-아밀로이드 피브릴 형성 저해 효능을 갖는 스티릴벤조퓨란 화합물 및 이의 제조 방법 - Google Patents

베타-아밀로이드 피브릴 형성 저해 효능을 갖는 스티릴벤조퓨란 화합물 및 이의 제조 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 스티릴 벤조퓨란 화합물은 우수한 베타-아밀로이드 피브릴 (beta-amyloid fibril) 형성 저해 효능을 가져, 치매를 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다:
화학식 1
Figure 112009035588091-pat00001
상기 식에서,
R1, R2, R3 및 R4는 명세서 중에 정의한 바와 같다.
베타-아밀로이드 피브릴, 스티릴벤조퓨란, 제조 방법, 저해, 퇴행성 뇌질환

Description

베타-아밀로이드 피브릴 형성 저해 효능을 갖는 스티릴벤조퓨란 화합물 및 이의 제조 방법 {STYRYLBENZOFURAN DERIVATIVES　AS INHIBITORS FOR BETA-AMYLOID FIBRIL FORMATION, AND PREPARATION METHOD THEREOF}
본 발명은 베타-아밀로이드에 의한 노인성 반 (senile plaque)의 형성을 저해하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 이의 제조 방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
전 세계적으로 평균 수명이 늘어나고 노인 인구가 증가하는 고령화 사회가 되면서, 알츠하이머병으로 대표되는 노인성 치매, 뇌졸증 또는 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환의 발병률이 크게 증가하고 있다. 그러나 이와 같은 퇴행성 뇌질환에 대한 근원적인 치료제나 예방약은 개발되어 있지 않고, 단지 단기적으로 증상만 완화시키는 대증요법제만 시장에 출시되어 있는 상황이다.
현재 시판중인 알츠하이머성 치매의 치료제로는 타크린(TACKRIN？, Warner-Lambert사), 아리셉트(ARICEPT？, Eisai사) 및 엑셀론(EXCELLON？, Novartis사) 등이 있다. 그러나 이들 약의 작용기전은 베타-아밀로이드의 집적을 근본적으로 차단하기 보다는, 아세틸콜린 에스테라제를 억제함으로써 시냅스 내의 신경신호 전달물질인 아세틸콜린 농도를 증가시켜 인지 기능을 단기적으로 개선하는 것이다.
알츠하이머성 치매는 특히 위험한 노인성 치매로, 뇌에서의 베타-아밀로이드 집적에 의해 발생되는 신경 독성이 주요 병인인 것으로 알려져 있다. 상세하게는. 베타-아밀로이드 단백질 전구체 (APP)는 β- 및 γ-분해효소 (β- 및 γ-secretase)에 의하여 베타-아밀로이드 42 (Aβ42) 단량체가 된 후 집적하여 올리고머 (oligomer)를 형성하고, 이 올리고머의 집적으로 프로토피브릴 (protofibril), 피브릴 (fibril), 플라그 (plaque)의 단계를 거치게 된다. 따라서, 베타-아밀로이드를 특이적으로 인식하며, 베타-아밀로이드에 직접 작용하여 피브릴 형성을 저해할 수 있는 화합물을 찾는다면 보다 근본적인 알츠하이머성 치매의 치료가 가능할 것이다.
베타-아밀로이드와 직접적으로 관련된 연구동향은 β- 및 γ-분해효소 저해제, 메탈 킬레이터, 베타 아밀로이드 백신, 스타틴 계열의 약물, 비스테로이드 항염증제 등이 있다. 이 중 베타-아밀로이드 백신에 관한 연구에 따르면, AN-1792 (Elan)라는 인공적으로 합성된 펩타이드는 베타-아밀로이드가 과발현되는 유전자 변형 생쥐 중 젊은 생쥐에서는 노인성 반의 형성을 억제하고 늙은 생쥐에서는 이미 생성된 노인성 반의 진행을 상당히 지연시키는 것으로 알려져 있다 (Schenk, D. et al. Nature 1999, 400, 173 참조). 즉, 유전자 조작이 된 쥐에 베타-아밀로이드 백신을 접종했을 때 뇌에 베타-아밀로이드 단백질이 축적되는 것을 막을 수 있는 항체 뿐만 아니라 이미 존재하는 베타-아밀로이드 플라그를 제거할 수 있는 항체가 쥐의 체내에서 생성된다는 사실이 입증되었다. 이 연구는 베타 아밀로이드에 직접 작용하여 올리고머 또는 노인성 반의 형성을 저해하는 물질이 임상적으로 알츠하이머성 치매의 치료 또는 예방에 이용될 수 있다는 중요한 단서를 제공하였다.
베타-아밀로이드와 관련된 약물은 작용점 (target), 작용 기전 (mode of action) 및 약동력학 (pharmacokinetics)의 근본적인 차별성에 의해 뇌 질환 치료제와 분자영상 진단제로 크게 대별될 수 있다.
우선 작용점의 관점에서 살펴보면, 베타-아밀로이드 피브릴은 90%의 베타-아밀로이드 40 (Aβ40)과 10%의 베타-아밀로이드 42 (Aβ42)로 되어 있는데(Bitan, G. et al., Proc . Natl . Sci . U.S.A 2003, 100, 330., 및 Jan, A. et al., J. Biol . Chem. 2008, 283, 28176 참조), 이들 중 베타-아밀로이드 42가 강한 신경독성으로 뇌 세포 사멸을 유도하기 때문에 뇌질환 치료제로서의 작용점은 베타-아밀로이드 42가 되고, 분자영상 진단제로서의 작용점은 베타-아밀로이드 40이 된다. 또한, 작용 기전의 관점에서 살펴보면, 뇌 질환 치료제는 알파-헬릭스 (α-helix)의 구조를 가지는 가용성의 모노머 및 저급의 올리고머에 작용하여, 피브릴에 비해 5배 정도 더 높은 신경 독성을 나타내는 불용성의 올리고머의 생성을 저해하는 효능을 나타낸다. 이에 반해, 분자영상 진단제는 베타-병풍 구조 (β-plated sheet) 의 구조를 가지며 불용성의 피브릴에 대하여 높은 결합 친화도를 나타낸다. 또한 약동력학적인 관점에서도, 뇌 질환 치료제는 분자영상 진단제와는 다른 생체 동력학적인 특징을 지니고 있다. 생체 동력학적으로 분자영상 진단제는 방사성 동위원소의 반감기 시간 내에 환자를 진단할 수 있도록, 빠르게 뇌 혈관 장벽(brain blood barrier, BBB)을 투과할 수 있는 높은 흡수력을 가지고 있어야 하며, 또한 비특이적 결합을 최소화하고 타겟과 결합한 진단제의 정확한 정량화를 위해 결합하지 않고 남은 진단제의 빠른 청소율 (clearance, CL)이 요구된다 (Mathis, C. A. et al., Curr. Pharm. Design 2004, 10, 1469 참조). 이에 반해, 뇌 질환 치료제로서의 생체 동력학적인 요구조건은 분자영상 진단제와 마찬가지로 뇌 혈관 장벽의 투과에 따른 흡수력이 높을수록 좋으나, 치료제로서 생체내에서 오랜 지속성을 나타내기 위해서는 높은 혈중농도 곡선하 면적 (area under the concentration versus time curve, AUC)을 지니고 있어야 하므로, 뇌에서의 청소율은 진단제와는 반대로 적정화되어 오랜 지속성을 나타내는 것 일수록 좋다.
문헌에 보고되어 있는 뇌 질환 치료제로서의 가능성을 가지는 베타-아밀로이드 피브릴 형성 저해 화합물 또는 추출물을 살펴보면 세제 (detergent)의 일종인 헥사데실-N-메틸피페리디늄 (hexadecyl-N-methyl piperidinium: HMPBr), 독소루비신 (doxorubicin) 등의 항암 항생제, SKF-74652 등의 벤조퓨란 (benzofuran) 계열의 화합물 (Howlett, D. R. et al,. Biochem. J. 1999, 343, 419 참조), 휴먼 아세틸콜린 분해효소 (HuAchE) 저해제의 일종인 프로피디움 (propidium) (Bartolini, M. et al., Biochem. Pharmacol. 2003, 65, 407 참조), 징코빌로바 추출물 (Ginko biloba extract)인 LB-152 (Lin, S. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 1173 참조), 카레의 추출물인 컬큐민 (curcumin) (Yang, F. et al., J. Biol. Chem. 2005, 280, 5892 참조), NDGA (nordihydro guaiaretic acid) (Ono, K. et al., Biochem . Biophys . Res . Commun . 2005, 330, 111 참조) 등이 있다.
그러나 현재 연구 개발 중인 물질들 중 유사 펩타이드 화합물은 분자량이 커 생체내의 유용성과 안정성에 제한이 있고, 항암 항생제 관련 화합물들은 장기 복용시 부작용 유발 가능성이 있는 등의 문제점이 있다. 또한, 뇌 질환 치료제의 경우 뇌 혈관 장벽의 투과가 용이해야 하는 특수성 등을 고려할 때, 임상적으로 특별히 유용하다고 판단되는 화합물은 현재까지 별로 많지 않다.
이에, 본 발명자들은 여타의 부작용 유발 가능성이 적은 소분자 화합물로서 베타-아밀로이드 피브릴의 형성을 저해하며, 뇌혈관 장벽의 투과가 용이한 구조를 가진 화합물을 설계하여 신규한 스티릴벤조퓨란 화합물을 합성하였으며, 이들 화합물이 베타-아밀로이드 피브릴, 특히 베타-아밀로이드 42의 형성 억제력을 갖는다는 사실을 발견함으로써 퇴행성 뇌 질환 치료제로서의 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 베타-아밀로이드 피브릴의 형성 저해제로서 작용할 수 있는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 화합물의 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 베타-아밀로이드 피브릴의 형성 저해제를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
Figure 112009035588091-pat00002
상기 식에서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, OH, 할로겐, C1-C3 알콕시, C1-C3 알킬, 하나 이상의 할로겐 또는 히드록시기로 치환된 폴리(C1-C3 알콕시), 및 하나 이상의 C1-C3 알킬기로 치환된 피라닐(C1-C3 알콕시)로 이루어진 군으로부터 선택되고,
R3은 NH2, C1-C3 알킬아미노, C1-C3 디알킬아미노 및 C1-C3 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되며,
R4는 H 또는 C1-C3 알콕시이다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 베타-아밀로이드 피브릴의 형성 저해제를 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 퇴행성 뇌질환 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 스티릴 벤조퓨란계 화합물은 베타-아밀로이드 피브릴의 형성을 억제하는 효능이 우수하므로, 노인성 치매, 뇌졸중 또는 파킨슨병과 같은 퇴행성 뇌질환의 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다.
이하에서는 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
본원에서 사용된 용어 "알킬"이란, 선형 또는 분지형의 포화된 C1 내지 C3의 탄화수소 라디칼 사슬을 의미한다. 구체적인 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필을 들 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알콕시"란 -ORa 기를 의미하는 것으로, 여기서 Ra는 앞서 정의한 바와 같은 알킬이다. 구체적인 예로는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 아이소프로폭시를 들 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "할로겐"이란 플루오로, 브로모, 클로로 또는 아이오도를 의미한다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물에서, 바람직하게는 R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, OH, 할로겐, OCH3 , CH3, (OCH2CH2)2F, (OCH2CH2)3F 및 디메틸피라닐메톡시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R3은 NH2, NHCH3 , N(CH3)2, 및 OCH3로 이루어진 군으로부터 선택되며, R4는 H 또는 OCH3이다.
본 발명에 따른 화학식 1의 스티릴벤조퓨란 화합물의 대표적인 예는 다음과 같다:
(1) 2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(2) 5-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(3) 5-히드록시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(4) 5-메틸-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(5) 5-플루오로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(6) 5-클로로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(7) 5-브로모-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(8) 5-요오도-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(9) 6-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(10) 6-히드록시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(11) 6-메틸-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(12) 6-플루오로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(13) 6-클로로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(14) 6-브로모-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(15) 6-요오도-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(16) 5-메톡시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
(17) 5-메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(18) 5-히드록시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 염산염;
(19) 5-히드록시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 염산염;
(20) 6-메톡시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
(21) 6-메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(22) 5-메톡시-2-(3-메톡시-4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(23) 6-메톡시-2-(3-메톡시-4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(24) 2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
(25) 2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
(26) 2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(27) 2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(28) 2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(29) 5-클로로-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
(30) 5-클로로-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(31) 5-클로로-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(32) 5-클로로-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(33) 5-클로로-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(34) 5-클로로-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(35) 5-메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(36) 5-메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(37) 5-메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(38) 5-메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(39) 5-메틸-2-(아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
(40) 5-메틸-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
(41) 5-메틸-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(42) 5-메틸-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(43) 5-메틸-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(44) 5-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(45) 5-(2-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤 조퓨란;
(46) 5-요오도-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(47) 5-요오도-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(48) 5-요오도-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(49) 5-요오도-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(50) 5-요오도-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(51) 5,6-디메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(52) 5,6-디메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(53) 5,6-디메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(54) 5,6-디메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(55) 5,6-디메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(56) 5-히드록시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(57) 6-메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(58) 6-메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(59) 6-메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(60) 6-메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(61) 6-메틸-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
(62) 6-메틸-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
(63) 6-메틸-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(64) 6-메틸-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
(65) 6-메틸-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
(66) 6-(2-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(67) 6-히드록시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
(68) 6-히드록시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(69) 6-히드록시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(70) 5,6-디메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(71) 5-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
(72) 5-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(73) 5-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
(74) 6-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
(75) 6-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란; 및
(76) 6-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란이다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있으며, 바람직한 염으로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타타르산, 시트르산, 아스코브산, 팔미트산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산 등의 염을 들 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 제조 방법은 하기 화학식 2의 2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란을 유기용매 중에서 하기 화학식 3의 화합물 및 염기와 호노-에몬스 반응 (Honer-Emmons reaction)시켜 화학식 1의 화합물을 얻는 단계를 포함한다.
[화학식 1]
Figure 112009035588091-pat00003
Figure 112009035588091-pat00004
Figure 112009035588091-pat00005
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 앞서 정의한 바와 같다.
하기 반응식 1은 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물의 제조 방법의 일 례를 도식화한 것이다:
Figure 112009035588091-pat00006
상기 식에서, R1, R2, R3 및 R4는 각각 앞서 정의한 바와 같다.
구체적으로 살펴보면, 상기 반응식 1에서 화학식 1의 화합물은 상기 화학식 2의 2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란을 유기용매 중에서 C-3 및 C-4 위치에 치환기가 있는 상기 화학식 3의 알데히드 화합물 및 염기와 0 ℃ 내지 실온에서 호노-에몬스 반응을 수행하여 얻을 수 있다.
상기 반응에 사용되는 염기로는 수소화나트륨 (NaH), 수소화리튬 (LiH), 수소화칼륨 (KH) 등의 알칼리 금속의 수소화물; n-부틸리튬 (n-BuLi) 등의 알킬 알칼리 금속 화합물; 소듐 메톡사이드, 소듐 에톡사이드, 소듐 이소프로폭사이드, 소듐 t-부톡사이드, 포타슘 t-부톡사이드, 포타슘 이소프로폭사이드, 리튬 이소프로폭사 이드 등의 알칼리 금속의 알콕사이드 화합물; 리튬 디이소프로필아미드 (LiN(i-Pr)2), 리튬 헥사메틸디실릴아미드 (LiHMDS), 포타슘 헥사메틸디이실릴아미드 (KHMDS), 소듐 헥사메틸디실릴아미드 (NaHMDS) 등의 알칼리 금속의 아미드 화합물 등이 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 포타슘 t-부톡사이드 또는 소듐 헥사메틸디실릴아미드가 사용될 수 있다.
상기 반응에 사용되는 유기용매로는 에테르계 유기용매가 사용될 수 있으며,바람직하게는 테트라하이드로퓨란, 디에틸에테르, 디이소프로필에테르 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 방법에서 출발물질로서 사용되는 화학식 2의 2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란은 공지의 방법 (예를 들어, Asharm, M. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2002, 2, 1662; Michaelis, A. et. al. Chem. Ber. 1898, 31, 1048; 및 Bhattacharya, A. K. et. al. Chem. Rew. 1981, 81, 415 참조)으로 제조하여 사용할 수 있다. 그 제조공정을 반응식으로서 도식화하면 하기 반응식 2와 같다:
Figure 112009035588091-pat00007
상기 식에서, R1 및 R2는 앞서 정의한 바와 같다.
구체적으로, 화학식 2의 2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란은 상기 화학식 4의 2-히드록시벤즈알데히드 화합물을 염기 존재하에서 에틸 브로모아세테이트와의 분자내 알돌/퍼킨 축합반응 (intramolecular Aldol/Perkin type condensation), 리튬 알루미늄 하이드라이드에 의한 환원반응 및 인산 트리브로마이드에 의한 브롬화 반응을 거쳐 트리에틸포스파이트 (triethylphosphite)와 2.5 내지 3시간 동안 가열 환류하에 반응시켜 얻을 수 있다.
본 발명에서 화합물의 구조를 결정하는 화학식 4의 알데히드 화합물의 바람직한 예로는 하기 화학식 4a 내지 4o의 화합물을 들 수 있다:
Figure 112009035588091-pat00008
또한, 본 발명의 화합물 (3), (10), (18) 및 (19)는 상기 반응식 1에 따라 수득된 생성물을 디클로로메탄 등의 유기 용매 중에서 보론 트리클로라이드, 보론 트리플루오라이드, 보론 트리브로마이드 또는 요오도트리메틸실란, 더욱 바람직하게는 보론 트리브로마이드를 가한 후 -78 ℃ 내지 상온에서, 3 내지 5시간 교반하여 탈메틸화 반응을 추가함으로써 제조할 수 있다. 그 일례를 반응식으로서 도식화하면 하기 반응식 3과 같다:
Figure 112009035588091-pat00009
상기 식에서, R3은 앞서 정의한 바와 같다.
본 발명의 화학식 1의 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 베타-아밀로이드 피브릴의 형성을 억제하고 뇌혈관 장벽을 용이하게 통과함으로써, 생체 내에서 베타-아밀로이드 피브릴의 집적 저해제로서 베타-아밀로이드의 뇌내 집적에 의한 퇴행성 뇌질환의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 베타-아밀로이드 피브릴의 형성 저해제를 제공한다.
본 발명은 또한 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 퇴행성 뇌질환 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염이 치료 효과를 나타낼 수 있는 퇴행성 뇌질환은, 베타-아밀로이드 피브릴의 뇌내 집적과 관련 깊은 질환들로서, 알츠하이머성 치매 등의 노인성 치매를 비롯하여 뇌졸중, 파킨슨 병, 헌팅턴 병 등을 예시할 수 있다.
상기 약학 조성물에는 유효성분인 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염이 조성물 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량％, 바람직하게는 0.5 내지 5 중량％의 양으로 포함될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료학적으로 유용한 물질을 추가로 포함할 수 있으며, 혼합, 과립화 또는 코팅 등의 통상적인 제제화 방법에 따라 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다.
경구 투여용 제형으로는 정제, 환제, 경?연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등을 들 수 있으며, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제 (예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제 (예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌글리콜)를 포함할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로즈, 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 포함할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물, 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제 등을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 제형으로는 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다.
유효성분으로서 상기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염,은 사람을 포함한 포유동물에 대해 하루에 0.1 내지 30 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 0.5 내지 10 ㎎/㎏ 체중의 양으로 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여되는 것이 바람직하다.
이하, 하기 제조예 및 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 제조예 및 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예
제조예 1 : 5-메톡시-2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란의 제조 (화학식 2의 화합물)
단계 1 : 에틸 5-메톡시-2-벤조퓨란 카르복실레이트의 제조
5-메톡시-2-히드록시벤즈알데히드 (화학식 4b의 화합물) 7.61 g (0.05 mol)을 디메틸포름아미드에 용해시킨 후, 여기에 분자체(molecular sieve)와 탄산 칼륨 (K2CO3) 15.2 g (0.11 mol)을 가하여 혼합물을 제조하였다. 제조된 혼합물에 에틸 브로모아세테이트 16.7 g (0.10 mol)을 적가하고, 40분 동안 140 ℃에서 가열 환류한 다음, 탄산 칼륨 15.2 g (0.11 mol)을 가하고 50분 동안 가열 환류하였다. 반응이 종결되면 분자체와 침전물을 여과하여 분리하고, 에틸 아세테이트로 세척하였 다. 여액을 감압 증류시킨 후 물과 에틸 아세테이트를 이용하여 추출하였다. 유기층을 분리하여 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과하고, 감압 증류하였다. 결과로 수득된 잔사를 관 크로마토그래피 법 (n-헥산/에틸 아세테이트 = 9/1)으로 분리 정제하여 표제 화합물 8.48 g (수율 77%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.42 (m, 2H), 7.02 (m, 2H), 4.39 (q, 2H, J=7.1 Hz), 3.79 (s, 3H), 1.38 (t, 3H, J=7.1 Hz).
단계 2 : 5-메톡시-2-히드록시메틸벤조퓨란
리튬 알루미늄 하이드라이드 0.85 g (22.5 mmol)을 0 ℃에서 용해시킨 후 여기에 테트라하이드로퓨란에 용해된 단계 1에서 얻은 에틸 5-메톡시-2-벤조퓨란 카르복실레이트 6.61 g (0.03 mol)을 적가하여 10분 동안 0 ℃에서 교반하였다. 반응이 종결되면 포화 황산 나트륨을 0 ℃에서 가한 후, 결과로 수득된 침전물을 여과하여 제거하였다. 여액을 감압 증류하여 용매를 제거하고, 물과 에틸 아세테이트를 이용하여 추출하였다. 유기층을 분리하여 무수 황산 나트륨으로 건조한 다음 여과하고, 감압 증류하였다. 결과로 얻은 잔사를 관 크로마토그래피 법 (n-헥산/에틸 아세테이트 = 3/1)으로 분리 정제하여 표제 화합물 4.81 g (수율 90%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.31 (d, 1H, J=8.9 Hz), 6.96 (s, 1H), 6.86 (dd, 1H, J=1.7, 8.9 Hz), 6.53 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.89 (s, 1H).
단계 3 : 5-메톡시-2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란
디메틸포름아미드에 인산 트리브로마이드 8.12 g (0.03 mol)을 0 ℃에서 적가한 후 30분 동안 0 ℃에서 교반하였다. 반응 혼합물에 디메틸포름아미드에 용해된 단계 2에서 얻은 5-메톡시-2-히드록시메틸벤조퓨란 3.56 g (0.02 mol) 용액을 적가하고 1시간 동안 0 ℃에서 교반하였다. 반응 종결 후 탄산 나트륨 (Na2CO3)과 에틸 아세테이트를 첨가하여 pH 7-8로 중성화시킨 다음, 여과하여 침전물을 분리하고 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여액을 물과 에틸 아세테이트로 추출한 후 유기층을 분리하고, 무수 황산 나트륨으로 건조하여 여과한 다음, 용매를 감압 증류하여 화합물 5-메톡시-2-브로모메틸벤조퓨란을 얻었다. 여기에 트리에틸포스파이트를 적가한 후 3시간 동안 가열 환류하였다. 반응 종결 후 톨루엔을 적가한 다음 감압 증류하여 얻은 잔사를 관 크로마토그래피 법 (n-헥산/에틸 아세테이트 = 1:1 → 에틸 아세테이트)로 분리 정제하여 표제 화합물 5.07 g (수율 85%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.31 (d, 1H, J=8.9 Hz), 6.97 (d, 1H, J=2.6 Hz), 6.84 (dd, 1H, J=2.6, 8.9 Hz), 6.58 (d, 1H, J=3.9 Hz) 4.10 (qn, 4H, J=7.1 Hz), 3.82 (s, 3H), 3.35 (d, 2H, J=21.3 Hz), 1.30 (t, 6H, J=7.1 Hz).
실시예 1 : 5-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란의 제조 (화합물 2)
제조예 1에서 얻은 5-메톡시-2-(디에톡시포스포릴메틸)벤조퓨란 0.30 g (0.001 mol)을 테트라하이드로퓨란에 용해시킨 후, 0 ℃에서 테트라하이드로퓨란에 용해되어 있는 1M의 소듐 헥사메틸디실릴아미드 (NaHMDS) (1.05 eq)를 적가하여 30분 동안 교반하였다. 4-디메틸벤즈알데히드 0.16 g (1.05 mmol)을 테트라하이드로퓨란에 용해시켜 적가한 후 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 종결되면 0 ℃에서 메탄올을 가한 후 감압 증류하였다. 결과의 잔사를 물과 에틸 아세테이트로 추출한 후 유기층을 분리하여 무수 황산 나트륨으로 건조하고 여과하였다. 용매를 감압 증류하여 제거한 후 잔사를 메탄올로 재결정하여 표제 화합물 0.23 g (수율 80%)을 얻었다.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.33 (d, 1H, J=9.0 Hz), 7.23 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.97 (d, 1H, J=2.5 Hz), 6.84 (dd, 1H, J=2.6, 8.8 Hz), 6.79 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.52 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.0, 155.9, 150.4, 149.7, 130.5, 130.0, 127.9, 124.8, 112.3, 112.1, 111.0, 103.4, 103.1, 55.9, 40.4.
실시예 2 : 5-히드록시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란의 제조 (화합물 3)
실시예 1에서 얻은 5-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화학식 2의 화합물) 146.7 mg (0.5 mmol)을 디클로로메탄에 용해시킨 후 -78 ℃에서 디클로로메탄에 용해되어 있는 1 M 보론 트리브로마이드 (BBr3) (10.0 eq)를 적가하여 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 종결되면 0 ℃에서 탄산 나트륨을 첨가하여 pH 7-8로 중성화한 후, 결과의 용액을 물과 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기층을 분리하여 무수 황산 나트륨으로 건조하고 여과하였다. 용매를 감압 증류하여 제거한 후, 에틸 아세테이트를 적가하고, 추가로 0 ℃에서 2N HCl를 적가하였다. 결과의 용액을 여과하여 침전물을 제거하고, 여액을 에틸 아세테이트로 세척한 다음, 물로 용해하고 0 ℃에서 탄산수소 칼륨으로 중성화시켰다. 얻은 잔사를 에틸 아세테이트로 추출한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 용매를 감압 증류하여 제거하였다. 얻은 잔사를 메탄올로 재결정하여 표제화합물 69.8 mg (수율 50%)을 얻었다.
Mp: 177.0-178.0 ℃
IR (KBr): 3436, 1602, 1520, 1358, 1197, 810 cm-1
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.10 (s, 1H), 7.43 (d, 2H, J=7.8 Hz), 7.27 (d, 1H, J=8.5 Hz), 7.09 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.90 (d, 1H, J=16.1Hz), 6.84 (s, 1H), 6.67 (m, 4H), 2.92 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ 156.6, 153.8, 150.8, 148.7, 130.5, 130.3, 128.4, 127.4, 113.1, 112.6, 112.3, 111.1, 105.5, 103.9, 40.0.
MS m/z 279 (M+).
실시예 3 내지 70
이하 실시예 3 내지 70의 화합물을 상기 실시예 1 및 2와 유사한 방법으로 수행하여 얻었으며 이들 화합물의 구조 확인 결과는 다음과 같다:
실시예 3: 2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 1)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.49-7.43 (m, 4H), 7.28-7.16 (m, 3H), 6.82(d, 1H, J=16.1 Hz), 6.73 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.57 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.1, 154.7, 150.7, 130.7, 129.5, 127.9, 124.8, 123.9, 122.7, 120.4, 112.3, 112.1, 110.7, 103.2, 40.4.
실시예 4: 5-메틸-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 4)
Mp: 188.0-189.0 ℃
IR (KBr): 3437, 1600, 1518, 1359, 1184, 814 cm-1
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.32 (d, 1H, J=8.3 Hz), 7.28 (s, 1H), 7.23 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.04 (d, 1H, J=8.3 Hz), 6.79 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.50 (s, 1H), 3.00 (s, 6H), 2.42 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.2, 153.1, 150.4, 132.4, 130.4, 129.6, 127.9, 125.1, 124.9, 120.3, 112.3, 112.2, 110.1, 103.0, 40.4, 21.3.
MS m/z 277 (M+).
실시예 5: 5-플루오로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 5)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.35 (dd, 1H, J=4.1, 8.9 Hz), 7.26 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.14 (dd, 1H, J=2.6, 8.6 Hz), 6.94 (td, 1H, J=2.6, 9.0 Hz), 6.78 (d, 1H, J=6.78 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.52 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 160.4, 158.1, 157.9, 150.9, 150.6, 131.4, 130.4, 130.3, 128.1, 124.5, 112.3, 111.7, 111.3, 111.1, 111.0, 106.0, 105.7, 103.2, 103.1, 40.4.
실시예 6: 5-클로로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 6)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.45 (d, 1H, J=2.1 Hz), 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.35 (d, 1H, J=8.7 Hz), 7.26 (d, 1H, J=16.2 Hz), 7.16 (dd, 1H, J=2.1, 8.6 Hz), 6.77 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.50 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.6, 153.1, 150.6, 131.7, 130.9, 128.2, 128.1, 124.5, 123.9, 117.9, 112.3, 111.9, 111.5, 102.4, 40.3.
실시예 7: 5-브로모-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 7)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.60 (s, 1H), 7.42 (d, 2H, J=8.4 Hz), 7.30-7.24 (m, 3H), 6.77 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.71 (d, 2H, J=8.3 Hz), 6.49 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.5, 153.4, 150.8, 131.8, 131.6, 128.1, 126.6, 124.4, 122.9, 115.7, 112.3, 112.0, 111.4, 102.3, 40.3.
실시예 8: 5-요오도-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 8)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.81 (d, 1H, J=1.6 Hz), 7.49 (dd, 1H, J=1.7, 8.5 Hz), 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.26 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.21 (d, 1H, J=8.6 Hz), 6.77 (d, 1H, J=16.2 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.48 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.1, 154.1, 150.6, 132.3, 131.8, 129.1, 128.1, 127.9, 124.4, 112.6, 112.2, 111.4, 101.9, 86.2, 40.3.
실시예 9: 6-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 9)
Mp: 194.5-195.5 ℃
IR (KBr): 3437, 1602, 1489, 1356, 1146, 1107, 820 cm-1
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.33 (d, 1H, J=9.0 Hz), 7.23 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.97 (d, 1H, J=2.5 Hz), 6.84 (dd, 1H, J=2.6, 8.8 Hz), 6.79 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.52 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.0, 155.9, 150.4, 149.7, 130.5, 130.0, 127.9, 124.8, 112.3, 112.1, 111.0, 103.4, 103.1, 55.9, 40.4.
MS m/z 293 (M+).
실시예 10: 6-히드록시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 10)
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 9.53 (s, 1H), 7.41 (d, 2H, J=8.3 Hz), 7.30 (d, 1H, J=8.3 Hz), 7.01 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.88 (m, 2H), 6.67 (m, 4H), 2.91 (s, 3H).
13C NMR (DMSO-d6, 100 MHz) δ 156.1, 155.8, 154.7, 150.6, 128.9, 128.1, 124.7, 121.5, 121.1, 112.7, 112.5, 112.1, 104.0, 97.8, 40.0.
실시예 11: 6-메틸-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 11)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.44 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.38 (d, 1H, J=7.8 Hz), 7.24 (m, 2H), 7.03 (d, 1H, J=7.8 Hz), 6.81 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.75 (d, 2H, J=7.7 Hz), 6.53 (s, 1H), 3.01 (s, 6H), 2.48 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 155.6, 155.2, 150.2, 134.3, 129.9, 127.9, 127.0, 125.2, 124.1, 119.9, 112.5, 111.0, 103.3, 40.5, 21.8.
실시예 12: 6-플루오로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 12)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.44-7.36 (m, 3H), 7.22 (d, 1H, J=16.2 Hz), 7.17 (dd, 1H, J=1.6, 9.0 Hz), 6.95 (m, 1H), 6.77 (d, 1H, J=16.2 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.9 Hz), 6.53 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 161.9, 159.5, 157.0 (d, 2C), 154.7, 154.6, 150.5, 130.6, 127.9, 125.7, 124.7, 120.5, 120.4, 112.3, 111.8, 110.9, 110.7, 102.7, 98.8, 98.5, 40.4.
실시예 13: 6-클로로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 13)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.43 (m, 3H), 7.39 (d, 1H, J=8.3 Hz), 7.24 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.16 (dd, 1H, J=1.8, 8.3 Hz), 6.77 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.9 Hz), 6.52 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.0, 154.7, 150.5, 131.3, 129.4, 128.2, 128.0, 124.5, 123.4, 120.8, 112.3, 111.5, 111.2, 102.7, 40.3.
실시예 14: 6-브로모-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 14)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.59 (s, 1H), 7.42 (d, 2H, J=8.7 Hz), 7.34-7.22 (m, 3H), 6.76 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.70 (d, 2H, J=8.6 Hz), 6.50 (s, 1H), 3.00 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.9, 155.0, 150.6, 131.4, 128.6, 128.1, 126.1, 124.5, 121.9, 116.9, 114.1, 112.3, 111.5, 102.7, 40.3.
실시예 15: 6-요오도-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 15)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.80 (s, 1H), 7.48 (dd, 1H, J=1.3, 8.1 Hz), 7.43 (d, 2H, J=8.8 Hz), 7.24 (m, 2H), 6.77 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.72 (d, 2H, J=8.8 Hz), 6.51 (s, 1H), 3.01 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.6, 155.2, 150.6, 131.7, 131.5, 129.2, 128.1, 124.5, 121.7, 119.9, 112.3, 111.4, 102.7, 86.9, 40.3.
실시예 16: 5-메톡시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 16)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.38 (d, 1H, J=8.9 Hz), 7.29 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.07 (m, 2H), 6.86 (d, 1H, J=16.2Hz), 6.80 (dd, 1H, J=2.6, 8.9 Hz), 6.68 (s, 1H), 6.55 (d, 2H, J=8.5 Hz), 5.44 (s, 2H), 3.75 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.6, 155.9, 149.8, 146.7, 130.3, 129.9, 128.1, 127.2, 115.2, 113.0, 112.6, 111.1, 103.8, 103.1, 55.9.
실시예 17: 5-메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 17)
Mp: 174.0-175.0 ℃
IR (KBr): 3409, 1602, 1519, 1201, 1183, 819 cm-1
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.38 (d, 2H, J=8.6 Hz), 7.33 (d, 1H, J=8.9 Hz), 7.2 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.97 (d, 1H, J=2.5 Hz), 6.83 (dd, 1H, J=2.6, 8.8 Hz), 6.77 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.61 (d, 2H, J=8.5 Hz), 6.51 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.88 (s, 3H), 1.55 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.8, 155.8, 149.7, 149.3, 130.5, 130.0, 128.0, 125.8, 112.4, 112.4, 111.0, 103.4, 103.0, 55.9, 30.5.
MS m/z 279 (M+).
실시예 18: 5-히드록시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 염산염 (화합물 18)
1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.74 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.39 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.28 (m, 2H), 7.19 (d, 1H, J=16.2 Hz), 6.91 (d, 1H, J=2.4 Hz), 6.78 (dd, 1H, J=2.5, 8.8 Hz), 6.73 (s, 1H).
13C NMR (MeOD-d4, 100 MHz) δ 155.1, 153.2, 149.6, 137.8, 129.9, 129.7, 127.8, 127.3, 123.0, 118.3, 113.5, 110.5, 106.0, 105.1.
실시예 19: 5-히드록시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 염산염 (화합물 19)
1H NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 7.77 (d, 2H, J=8.6 Hz), 7.48 (d, 2H, J=8.6 Hz), 7.29 (m, 2H), 7.21 (d, 1H, J=16.2 Hz), 6.91 (d, 1H, J=2.4 Hz), 6.79 (dd, 1H, J=2.5, 8.8 Hz), 6.74 (s, 1H), 3.09 (s, 1H).
13C NMR (MeOD-d4, 100 MHz) δ 155.1, 153.2, 149.6, 138.3, 136.3, 129.7, 128.0, 127.1, 121.9, 118.5, 113.6, 110.5, 106.2, 105.1, 36.2.
실시예 20: 6-메톡시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 20)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.35 (m, 3H), 7.15 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.02 (d, 1H, J=1.7 Hz), 6.83 (dd, 1H, J=2.2, 8.5 Hz), 6.78 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.68 (d, 2H, J=8.4 Hz), 6.51 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (br s, 2H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 158.0, 155.8, 155.1, 146.5, 129.1, 127.9, 127.4, 122.8, 120.6, 115.2, 113.0, 111.5, 103.6, 95.7, 55.7.
실시예 21: 6-메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 21)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.37 (m, 3H), 7.17 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.02 (d, 1H, J=2.0 Hz), 6.83 (dd, 1H, J=2.2, 8.5 Hz), 6.77 (d, 1H, J=16.1 Hz), 6.61 (d, 2H, J=8.6 Hz), 6.46 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.88 (s, 3H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 157.9, 155.8, 155.4, 149.3, 129.4, 127.9, 126.1, 122.8, 120.5, 112.4, 112.3, 111.4, 103.2, 95.7, 55.7, 30.6.
실시예 22: 5- 메톡시 -2-(3- 메톡시 -4- 디메틸아미노스티릴 ) 벤조퓨란 (화합물 22)
Mp: 226.5-227.5 ℃
IR (KBr): 3436, 1595, 1507, 1470, 1204, 1167, 834 cm-1
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.36-7.33 (m, 1H), 7.10-7.07 (m, 1H), 7.03 (d, J=1.69 Hz, 1H), 6.99 (d, J=2.55 Hz, 1H) 6.93-6.91 (m, 1H), 6.58 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 2.83 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δ 156.29, 155.98, 152.29, 149.83, 142.84, 130.76, 130.23, 129.83, 129.65, 120.21, 118.01, 117.44, 114.47, 113.81, 104.46, 103.27, 103.17, 55.90, 55.39, 43.20.
MS m/z 323 (M+).
실시예 23: 6-메톡시-2-(3-메톡시-4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 23)
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.38 (d, J=8.46 Hz, 1H), 7.19 (d, J=16.09 Hz), 7.02 (s, 2H), 6.87-6.83 (m, 2H), 6.56 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 2.83 (s, 6H).
13C NMR (CDCl3, 100 MHz) 158.18, 155.88, 154.80, 152.31, 142.62, 131.03, 128.98, 122.65, 120.74, 120.01, 118.03, 114.55, 111.62, 108.54, 104.25, 95.74, 55.74, 55.38, 43.23.
실시예 24: 2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염 (화합물 24)
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.70 (d, 2H, J=8.49 Hz), 7.57 (d, 1H, J=7.76 Hz), 7.48 (d, 1H, J=8.16 Hz), 7.35-7.29 (m, 4H), 7.22 (t, 1H, J=7.49 Hz), 7.20 (d, 1H, J=16.23 Hz), 6.84 (s, 1H)
실시예 25: 2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염 (화합물 25)
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.60 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.52 (d, 1H, J=7.6 Hz), 7.44 (d, 1H, J=8.2 Hz), 7.26 (d, 1H, J=16.13 Hz), 7.26 (t, 1H, J=8.02 Hz), 7.18 (t, 1H, J=7.65 Hz), 7.09 (d, 2H, J=7.79 Hz), 7.07(d, 1H, J=16.52 Hz), 6.75 (s, 1H), 2.96 (s, 3H)
실시예 26: 2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 26)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49 (d, 2H, J=7.18 Hz), 7.46-7.40 (m, 3H), 7.27 - 7.16 (m, 2H). 6.78 (d, 1H, J=16.06 Hz), 6.67 (d, 1H, J=7.86 Hz), 6.56 (s, 1H), 3.40 (d, 4H, J=6.68 Hz), 1.20 - 1.18 (m, 6H)
실시예 27: 2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 27)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,53-7.45 (m, 4H), 7.37.24 (m, 2H), 7.19 (t, 1H, J=8.44 Hz), 6.92 (d, 2H, J=8.78 Hz), 6.88 (d, 1H, J=16.15 Hz), 6.63 ( s, 1H). 3.83 (s, 3H)
실시예 28: 2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 28)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (d, 1H, J=7.48 Hz), 7.46 (d, 1H, J=8.02 Hz), 7.29-7.24 (m, 3H), 7.19 (t, 1H, J=8.73 Hz), 7.10-7.08 (m, 2H), 6.88 (d, 2H, J=8.12 Hz, J=4.6 Hz), 6.64 (s, 1H), 3.94 (d, 6H, J=9.32 Hz )
실시예 29: 5-클로로-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 29)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.63 (d, J = 1.93 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.64 Hz, 1H), 7.43 (m, J = 8.35 Hz, 2H), 7.25 (dd, J = 8.69 Hz, J = 2.03 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 16.22 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 16.27 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.75 (d, J = 8.15 Hz, 2H), 3.93 (s, 2H)
실시예 30: 5-클로로-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 30)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.91 (d, J = 1.93 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 6.72 Hz, J = 1.79 Hz, 1H), 7.36 (m, 3H), 7.15 (d, J = 16.19 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 16.20 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.53 (d, J = 8.64 Hz, 2H), 6.08 (q, J = 5.01 Hz, 1H), 2.70 (d, J = 5.01 Hz, 3H)
실시예 31: 5-클로로-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 31)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.65 (d, J = 2.12 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.82 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.6 Hz 1H), 7.18 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.72 (d, J = 2.97 Hz 1H), 6.67 (d, J = 8.87 Hz 2H), 6.48 (s, 1H), 3.40 (q, J = 7.08 Hz, 4H), 1.19 (t, J = 7.02 Hz, 6H)
실시예 32: 5-클로로-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 32)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.63 (dd, J = 13.45 Hz, J = 1.79 Hz, 1H), 7.52 (t, J =9 Hz, 1H), 7.13 (m, 3H), 6.82 (m, 1H), 6.58 (d, J = 13.09 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 8.16 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 5.46 (q, J = 5.76 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H) 2.73 (d, J = 5.01 Hz, 3H)
실시예 33: 5-클로로-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 33)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (d, J = 2.34 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.12 Hz, 1H), 7.37 (m, J = 8.64 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 15.86 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 8.65 Hz, J = 2.10 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.74 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 16.15 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 3.85 (s, 3H)
실시예 34: 5-클로로-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 34)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47 (d, J = 2.01 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 8.61 Hz, 1H), 7.27 (m, J = 16.11 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 8.64 Hz, J = 1.91 Hz, 1H), 7.08 (m, 2H), 6.85 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.93 (s, 3H)
실시예 35: 5-메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 35)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.32 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.16 (d, J=16 Hz, 1H), 6.96 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.83 (dd, J= 2.4, 8.8 Hz, 1H), 6.75 (d, J=16 Hz, 1H), 6.66 (d, J=9.2 Hz, 2H), 6.50 (s, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.39 (q, J=7.2 Hz, 4H), 1.19 (t, J=6.8 Hz, 6H).
실시예 36: 5-메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 36)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.26 (d, J=16 Hz, 1H), 7.10 (m, 2H), 7.04 (s, 1H), 6.70 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J=16 Hz, 1H), 6.88 (dd, J=2.8, 8.8 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.15 (s, 3H).
실시예 37: 5-메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 37)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.34 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J=16.4 Hz, 1H), 6.98 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.85 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.84 (s, 3H).
실시예 38: 5-메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 38)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.34 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J=16 Hz, 1H), 7.09 (m, 2H), 6.99 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.88 (d, J=2.8 Hz, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.85 (d, J=16 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.85 (s, 3H).
실시예 39: 5-메틸-2-(아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염 (화합물 39)
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.64 (d, 2H, J=8.47 Hz), 7.32 (d, 2H, J=8.37 Hz), 7.26 (d, 1H, J=16.32 Hz), 7.23 (d, 1H, J=8.54 Hz), 7.14 (s, 1H), 7.09 (d, 1H, J=7.94, Hz), 6.72 (s, 1H), 2.40( s, 3H)
실시예 40: 5-메틸-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염 (화합물 40)
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.60 (d, 2H, J=8.5 Hz), 7.31 (d, 2H, J=7.09 Hz), 7.24 (d, 1H, J=16.16 Hz), 7.13 (d, 2H, J=8.33 Hz), 7.09 (s, 1H), 7.06 (d, 1H, J=10.49 Hz), 6.68 (s, 1H), 3.00 (s, 3H), 2.38 (s, 3H)
실시예 41: 5-메틸-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 41)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.33 (d, 1H, J=8.27 Hz), 7.29-7.26 (m, 1H), 7.23 (d, 1H, J=16.11 Hz), 7.04 (d, 1H, J=8.08 Hz), 6.77 (d, 1H, J=16.08 Hz), 6.67 (d, 1H, J=8.38 Hz), 6.49 (s, 1H), 3.40 (d, 4H, J=6.93 Hz), 2.43 ( s, 3H), 1.27-1.18 (m, 6H)
실시예 42: 5-메틸-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 42)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.48 (d, 2H, J=8.64 Hz), 7.34 (d, 1H, J=8.52 Hz), 7.37.23 (m, 2H), 7.07 (d, 1H, J=8.1 Hz), 6.92 (d, 2H, J=8.7 Hz), 6.87 (d, 1H, J=16.17 Hz ), 6.57 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.43 (s, 3H)
실시예 43: 5-메틸-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 43)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.4 (d, 1H, J=7.85 Hz), 7.27-7.21 (m, 3H), 7.17.08 (m, 2H), 7.04 (d, 1H, J=7.98 Hz), 6.90 (s, 1H), 6.86 (d, 1H, J=10.808 Hz), 6.60 (s, 1H), 3.95 (d, 6H, J=7.97 Hz ), 2.49 (s, 3H)
실시예 44: 5-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 44)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.37 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.20 (d, J=16 Hz, 1H), 6.98 (d, J=1.6 Hz, 1H), 6.84 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 6.76 (d, J=16 Hz, 1H), 6.60 (d, J=8.4 Hz, 2H), 6.50 (s, 1H), 4.61 (dt, J=47.6, 4.0 Hz, 2H), 4.17 (t, J=4.8, 2H), 3.90 (m, 3H), 3.80 (t, J=4.0 Hz, 1H), 2.88 (s, 3H).
실시예 45: 5-(2-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 45)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J=16 Hz, 1H), 6.98 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.85 (dd, J=2.8, 8.8 Hz, 1H), 6.76 (d, J=16 Hz, 1H), 6.60 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.50 (s, 1H), 4.57 (dt, J=47.6, 4.0 Hz, 2H), 4.16 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.88 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.76 (m, 4H), 3.62 (m, 2H), 2.10 (s, 3H).
13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 157.09, 156.56, 155.04, 146.61, 114.66, 113.87, 113.30, 111.02, 104.27, 103.88, 83.99, 82.31, 70.84, 70.53, 70.33, 69.93, 69.20, 68.23, 30.92.
실시예 46: 5-요오도-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 46)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (s, 1H), 7.46 (dd, J = 10.92 Hz, J = 1.39 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.53 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 10.61 Hz, 2H), 7.07 (s, 1H), 6.76 (d, J = 16.10 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.47 Hz, 2H), 6.49 (s, 1H), 3.95 (s, 1H), 2.95 (s, 3H)
실시예 47: 5-요오도-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 47)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.49 (d, J = 6.91 Hz, 1H), 7.44 (d, J =8.04 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.82 Hz, 2H), 7.23 (s, 1H), 7.19 (m, 1H), 6.78 (d, J = 16.19 Hz, 1H), 6.67 (d, J = 8.85 Hz, 2H), 6.56 (s, 1H), 3.40 (q, J = 7.07 Hz, 4H) 1.20 (t, J = 7.04 Hz, 6H)
실시예 48: 5-요오도-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 48)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.52 (m, 2H), 7.21 (m, 2H), 7.01 (q, J = 13.80 Hz, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.57 (d, J = 12.87 Hz, 1H), 6.45 (q, J = 4.32 Hz, 1H), 6.25 (d, J = 12.78 Hz, 1H), 5.41 (t, J = 3.88 Hz, 1H), 3.85 (s, 1H) 3.73 (s, 2H), 2.73 (s, 3H)
실시예 49: 5-요오도-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 49)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.59 (d, J = 7.55 Hz 1H), 7.53 (d, J = 7.96 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.25 (t, J = 8.24 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 4.93 Hz, 2H), 7.15 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.29 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 3.78 (s, 3H)
실시예 50: 5-요오도-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 50)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.53 (d, J = 7.66 Hz, 1H), 7.26 (q, J = 7.96 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 9.30 Hz, 1H), 7.13 (m, J = 16.28 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.62 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 15.88 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.77 (s, 3H)
실시예 51: 5,6-디메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 51)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.36 (d, J = 18 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 9.8 Hz, 3H), 7.12 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.43 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H)
실시예 52: 5,6-디메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 51)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.36 (d, J = 18.12 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 9.8 Hz, 3H), 7.12 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 6.43 (s, 1H), 3.85 (s, 5H), 3.82 (s, 5H), 3.80 (s, 3H), 3.78 (s, 3H)
실시예 53: 5,6-디메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 53)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.12 (s, 1H), 6.98 (d, J = 6.24 Hz, 1H), 7.00 (m, 2H), 6.65 (s, 1H), 6.42 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.35 (q, J = 4.96 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.72 (d, J = 4.88 Hz, 3H)
실시예 54: 5,6-디메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 54)
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.52 (d, J = 8.62 Hz, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.06 (s, 1H), 7.05 (s, 2H), 6.92 (d, J = 8.58 Hz, 2H), 6.73 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.92 (s, 6H)
실시예 55: 5,6-디메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 55)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (s, 1H), 7.06 (m, 3H), 7.00 (s, 1H), 6.86 (m, 2H), 6.58 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.92 (s, 3H).
실시예 56: 5-히드록시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 56)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.28 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.21 (d, J=16 Hz, 1H), 6.90 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J=16 Hz, 1H), 6.72 (dd, J= 2.4, 8 Hz, 1H), 6.66 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.46 (s, 1H), 4.59 (s, OH), 3.39 (q, J=7.2 Hz, 4H), 1.19 (t, J=6.8 Hz, 6H).
실시예 57: 6-메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 57)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.15 (d, J=16 Hz, 1H), 7.01 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.82 (dd, J= 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J=16 Hz, 1H), 6.66 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.48 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.39 (q, J=6.8 Hz, 4H), 1.19 (t, J=7.2 Hz, 6H).
실시예 58: 6-메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 58)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.37 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.18 (d, J=16 Hz, 1H), 7.02 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.86 (d, J=16 Hz, 1H), 6.84 (dd, J= 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.55 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.84 (s, 3H).
실시예 59: 6-메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 59)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.18 (d, J=16 Hz, 1H), 7.07 (m, 2H), 7.01 (m, 1H), 6.86 (m, 2H), 6.84 (d, J=16 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.87 (s, 3H).
실시예 60: 6-메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 60)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.39 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J=16 Hz, 1H), 7.05 (m, 4H), 6.92 (d, J=16 Hz, 1H), 6.85 (dd, J=2.8, 8.8 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.14 (s, 3H).
실시예 61: 6-메틸-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염 (화합물 61)
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.65 (d, 2H, J=8.51 Hz), 7.40 (d, 1H, J=7.92 Hz), 7.27 (s, 2H), 7.23 (d, 2H, J=8.02 Hz), 7.13 (d, 1H, J=16.19 Hz), 7.04 (d, 1H, J=7.98 Hz), 6.74 (s, 1H), 2.42 ( s, 3H)
실시예 62: 6-메틸-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염 (화합물 62)
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 7.63 (d, 2H, J=8.59 Hz), 7.39 (d, 1H, J=7.92 Hz), 6.62(d, 1H, J=6.62 Hz ), 7.22 (d, 3H, J=8.89 Hz) , 7.09 (d, 1H, J=16.2 Hz), 7.09 (d, 1H, J=7.96 Hz), 6.72 (s, 1H), 3.02 (s, 3H), 2.97 (s, 3H)
실시예 63: 6-메틸-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 63)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 (d, 2H, J=8.30 Hz), 7.36 (d, 1H, J=8.10 Hz), 7.25 (s, 1H), 7.20 (d, 1H, J=16.1 Hz), 7.01 (d, 1H, J=7.32 Hz), 6.76 (d, 1H, J=7.32 Hz), 6.76 (d, 1H, J =16.05 Hz) 6.67 (d, 1H, J=8.20 Hz), 6.50 (s, 1H), 3.39 (d, 4H, J 6.81 Hz), 2.47 (s, 3H), 1.29-1.26 (m, 6H)
실시예 64: 6-메틸-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 64)
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.48 (d, 2H, J=8.73 Hz), 7.40 (d, 1H, J=7.88 Hz), 7.27-7.21 (m, 2H), 7.03 (d, 1H, J=7.96 Hz), 6.92 (d, 2H, J=8.6 Hz), 6.86 (d, 1H, J=16.15 Hz), 6.59 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.48 (s, 3H)
실시예 65: 6-메틸-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란 (화합물 65)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.35 (d, 1H, J=7.84 Hz), 7.30-7.22 (m, 3H), 7.09-7.07 (m, 3H), 6.86 - 6.84 (m, 2H) 6.57 (s, 1H), 3.93 (d, 6H, J=14.2 Hz ), 2.44 (s, 3H)
실시예 66: 6-(2-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 66)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.34 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.15 (d, J=16 Hz, 1H), 7.02 (d, J=1.6 Hz, 1H), 6.84 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.75 (d, J=16 Hz, 1H), 6.60 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.48 (s, 1H), 4.57 (dt, J=47.6, 4.0 Hz, 2H), 4.19 (t, J=4.8, 2H), 3.90 (t, J=4.8 Hz, 2H), 3.80 (m, 6H), 2.87 (s, 3H).
실시예 67: 6-히드록시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 67)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.14 (d, J=16 Hz, 1H), 6.91 (d, J=32 Hz, 1H), 6.76 (d, J=16 Hz, 1H), 6.72 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.67 (dd, J=5.2, 8.4 Hz, 2H), 6.54 (d, J=36 Hz, 1H), 6.38 (dd, J=13, 92 Hz, 1H), 4.84 (br s, OH), 3.79 (br s, NH2).
실시예 68: 6-히드록시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 68)
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.52 (s, NHMe), 7.35 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.00 (d, J=16 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.84 (d, J=16 Hz, 1H), 6.69 (dd, J=2.0, 8.0 Hz, 1H), 6.62 (s, 1H), 6.53 (d, J=8.8 Hz, 2H), 5.98 (d, J=4.8 Hz, 1H), 2.70 (d, J=4.8 Hz, 3H).
실시예 69: 6-히드록시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 69)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.15 (d, J=16 Hz, 1H), 7.01 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.82 (dd, J= 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J=16 Hz, 1H), 6.66 (d, J=8.8 Hz, 2H), 6.47 (s, 1H), 4.75 (s, OH), 3.39 (q, J=6.8 Hz, 4H), 1.19 (t, J=7.2 Hz, 6H).
실시예 70: 5,6-디메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 (화합물 70)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.71 (d, J=7.71 Hz, 1H), 7.19 (m, 4H), 6.85 (d, J=1.84 Hz, 2H), 6.61 (d, J=7.8 Hz, 2H), 6.30 (d, J=10.44 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H), 3.93 (s, 3H)
시험예 1: 시험관내 ThT (티오플라빈 (thioflavin) T)의 형광세기를 이용한 베타-아밀로이드 피브릴 형성 저해효능 시험
본 발명에 따른 화합물의 베타-아밀로이드 피브릴 형성 저해효능을 평가하기 위하여, 하기와 같은 방법으로 실험하였다.
특히 본 발명에서는 베타-아밀로이드 단백질의 베타-아밀로이드 40 및 베타-아밀로이드 42의 2개의 형태 중에서 올리고머에 작용하여 강한 신경독성을 나타내어 뇌 세포를 사멸시킴으로써 치료제 개발을 위한 작용점이 되는 베타-아밀로이드 42를 사용하였다 (Hammarstrom, P. et al., Science 2003, 299, 713; 및 Cai, X. D. et al., Science 1993, 259, 514. 참조).
베타-아밀로이드 42 (Aβ42)를 디메틸술폭사이드(DMSO)에 용해시켜 250 mM이 되도록 저장 용액 (stock solution)을 만들었다. 또한, ThT를 증류수에 녹여 1 mM의 저장 용액을 만들고, 이를 50 mM의 글리신 완충용액 (pH 8.5)에 미리 희석시켜 최종 농도가 5 μM가 되도록 하였다. 96웰 형광 마이크로플레이트 (fluorescence microplate, 백색, F-bottom)의 각 웰 (well)에 45 μL의 PBS (인산염 완충 식염수 (phosphate buffer saline), pH 7.4)를 분주하였다. 여기에 각각 250 μM의 Aβ42 용액 5 μL를 넣었다. 상기 디메틸술폭사이드에 용해시켜 제조한 본 발명의 실시예 화합물 용액을 각 웰에 2μL씩 넣어 화합물들의 각각의 최종 농도가 10 내지 0.001 μM이 되도록 하였다. 이때 각 웰에서의 Aβ42의 최종 농도는 25 μM이 되었다. 실온에서 1시간 동안 반응시켜 배양 (incubation)한 후 각 웰에 5 μM의 ThT 용액 150 μL를 넣었다. 다중 표시 형광 계수기 (multi-label fluorescence counter, LS-55 Luminescence spectrometer: Perkin Elmer)로 각 웰의 형광세기를 측정하였다. 이때, 여기 (excitation) 및 발광 (emission) 파장은 각각 450 nm (슬릿 10 nm) 및 482 nm (슬릿 10 nm)로 하였고, 계수 시간 (counting time)은 1 초로 하였다. 대조군의 경우, 상기 실시예 화합물을 첨가하지 않고 PBS, Aβ42 및 DMSO만을 처리한 것을 제외하고는, 동일하게 실시하였다. Aβ42 형성에 대한 % 저해율 (% inhibition)을 하기 수학식 1에 따라 계산한 후, 그래프패드 프라이즘 버전 4.03 (GraphPad Prism version 4.03) 프로그램을 이용하여 IC50을 산출하였다:
[수학식 1]
% 저해율 = [1 - (C - D)/(A - B)] × 100
A (대조군): PBS + Aβ42 + DMSO 처리군에서의 형광세기
B (바탕치): PBS + DMSO 처리군에서의 형광세기
C (실험군): PBS + Aβ42 + 본 발명의 실시예 화합물 + DMSO 처리군에서의 형광세기
D (실험군 보정치): PBS + 본 발명의 실시예 화합물 + DMSO 처리군에서의 형광세기
본 발명의 실시예 화합물의 Aβ42 형성 저해에 대한 10 μM에서의 % 저해율값 및 IC50 값을 비교물질과 비교한 결과를 하기 표 1 내지 7에 시험군별로 나누어 나타내었다. 이때 비교물질로는 식용 커리의 추출물로서 탁월한 Aβ42 형성 저해효능을 지닌 물질로 알려진 컬큐민 (시그마 (Sigma)사), 유럽특허 EP 1655287에 개시된 2-[2-(2-(디메틸아미노티아졸-5-일)에틴일]벤조티아졸(비교예 1) 및 국제공개 특허 WO02/16333에 개시된 2-4-(디메틸아미노페닐아텐일)벤조티아졸(비교예 2)를 사용하였다.
표 1 내지 7은 각각 별도로 실시한 실험의 결과를 나타낸 것으로서, 표 1 내지 7의 컬큐민의 IC50 값은 각 실험에서의 베타-아밀로이드의 집적 정도나 ThT의 상태에 따라 차이를 보일 수 있다. 따라서, 실시예 화합물과 비교물질의 Aβ42 형성 저해효능의 우열은 각 표에 나타난 그들의 IC50 값을 상대적으로 비교함으로써 평가할 수 있다.
화합물 R1 R2 R3 R4 IC50 a (μM)
1 H H N(CH3)2 H 2.300
2 OCH3 H N(CH3)2 H 0.810
3 OH H N(CH3)2 H 0.163
4 CH3 H N(CH3)2 H 0.128
5 F H N(CH3)2 H 1.980
6 Cl H N(CH3)2 H 0.199
7 Br H N(CH3)2 H 0.470
8 I H N(CH3)2 H 0.168
9 H OCH3 N(CH3)2 H 0.070
10 H OH N(CH3)2 H 3.619
11 H CH3 N(CH3)2 H 3.440
12 H F N(CH3)2 H 2.191
13 H Cl N(CH3)2 H 3.206
14 H Br N(CH3)2 H 1.341
15 H I N(CH3)2 H 2.798
16 OCH3 H NH2 H 0.820
17 OCH3 H NHCH3 H 0.078
18 OH H NH2 H 2.950
19 OH H NHCH3 H 2.160
20 H OCH3 NH2 H 5.440
21 H OCH3 NHCH3 H 0.800
22 OCH3 H N(CH3)2 OCH3 0.156
23 H OCH3 N(CH3)2 OCH3 0.528
컬큐민 0.800
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
화합물 R1 R2 R3 R4 %저해율
(10 μM)		 IC50 a (μM)
33 Cl H OCH3 H 51.81 > 100
34 Cl H OCH3 OCH3 72.49 0.181
35 OCH3 H N(CH2CH3)2 H 55.06 1.181
37 OCH3 H OCH3 H 67.89 0.707
38 OCH3 H OCH3 OCH3 81.10 1.562
42 CH3 H OCH3 H 69.73 15.90
43 CH3 H OCH3 OCH3 69.43 10.52
56 OH H N(CH2CH3)2 H 81.64 1.301
63 H CH3 OCH3 H 76.96 3.537
컬큐민 92.14 1.313
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
화합물 R1 R2 R3 R4 %저해율
(10 μM)		 IC50 a (μM)
24 H H NH2 H 70.70 -
25 H H NHCH3 H 59.02 -
26 H H N(CH2CH3)2 H 4.54 -
27 H H OCH3 H 58.30 -
39 CH3 H NH2CF3COOH H 60.23 -
40 CH3 H NHCH3CF3COOH H 70.17 -
41 CH3 H N(CH2CH3)2 H < 1.00 -
57 H OCH3 N(CH2CH3)2 H 62.79 -
58 H OCH3 OCH3 H 57.16 -
60 H OCH3 NHCH3 OCH3 N.D. -
61 H CH3 NH2CF3COOH H 57.54 -
62 H CH3 NHCH3CF3COOH H 46.55 -
64 H CH3 N(CH2CH3)2 H 33.31 -
컬큐민 78.31 2.964
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
화합물 R1 R2 R3 R4 %저해율
(10 μM)		 IC50 a (μM)
29 Cl H NH2 H 82.83 1.985
31 Cl H N(CH2CH3)2 H 37.86 0.963
49 I H OCH3 H 38.01 16.80
50 I H OCH3 OCH3 62.43 5.793
컬큐민 79.65 0.525
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
화합물 R1 R2 R3 R4 %저해율
(10 μM)		 IC50 a (μM)
28 H H OCH3 OCH3 67.38 3.291
32 Cl H NHCH3 OCH3 47.61
36 OCH3 NHCH3 OCH3 24.49
45 (OCH2CH2)3F H NHCH3 H 53.46
47 I H N(CH2CH3)2 H 63.32 1.053
51 OCH3 OCH3 N(CH3)2 H 29.16
52 OCH3 OCH3 N(CH2CH3)2 H 42.28
53 OCH3 OCH3 NHCH3 OCH3 56.19
55 OCH3 OCH3 OCH3 OCH3 51.37
65 H CH3 OCH3 OCH3 67.50 0.884
66 H (OCH2CH2)3F NHCH3 H 61.69
67 H OH NH2 H 60.24
68 H OH NHCH3 H 61.93
69 H OH N(CH2CH3)2 H 42.23
70 OCH3 OCH3 NHCH3 H 25.76
컬큐민 67.84 1.599
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
화합물 R1 R2 R3 R4 %저해율
(10 μM)		 IC50 a (μM)
9의 염산염 H OCH3 N(CH3)2HCl H 62.88 1.884
17의 염산염 OCH3 H NHCH3HCl H 74.14 0.661
30 Cl H NHCH3 H 68.44 2.169
40 CH3 NHCH3CF3COOH H 73.47 5.047
44 (OCH2CH2)2F H NHCH3 H 84.71 1.494
46 I H NHCH3 H 60.99 1.768
48 I H NHCH3 OCH3 74.19 1.047
54 OCH3 OCH3 OCH3 H 77.75 0.903
59 H OCH3 OCH3 OCH3 79.90 1.023
컬큐민 98.11 2.357
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
화합물 R1 R2 R3 R4 %저해율
(10 μM)		 IC50 a (μM)
9 H OCH3 N(CH3)2 H 78.73 0.972
17 OCH3 H NHCH3 H 74.61 0.725
비교예 1b
Figure 112009035588091-pat00010
 63.43 3.401
비교예 2c
Figure 112009035588091-pat00011
 25.69 31.80
컬큐민 76.40 1.615
a시험관내 ThT 분석 (Aβ42: 25 μM)
b유럽특허 EP 1655287에 개시된 2-[2-(2-(디메틸아미노티아졸-5-일)에틴일]벤조티아졸(2-[2-(2-(dimethylaminothiazol-5-yl)ethenyl]benzothiazole)
c 국제공개특허 WO02/16333에 개시된 2-4-(디메틸아미노페닐아텐일)벤조티아졸(2-(4-dimethylaminophenylethenyl)benzothiazole)
상기 표 1 내지 6에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 화합물 3, 4, 6, 7, 8, 9 및 염산염, 17 및 염산염, 22, 23, 30, 34, 37, 44, 46, 47, 48, 54, 56, 59 및 65는 비교물질인 컬큐민보다 우수한 Aβ42 형성 저해효능을 나타내었다.
또한 표 7에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 화합물 9 및 17은 Aβ42 형성 저해에 대해, 종래 문헌에서 언급된 비교예 1 및 2의 화합물보다 탁월한 % 저해율 및 IC50 값을 나타내었다.
시험예 2: 마우스 및 랫트에서의 약동력학 시험 및 뇌 혈관 장벽 투과율 시험
1. 약동력학 시험
1) 실험동물 및 시험 화합물의 투여
7 주령의 ICR 계통 마우스 (체중 약 30 g) 및 8 주령의 SD 계통 랫트 (체중 약 250 g)를 각 실험군당 3 마리씩 사용하였다. 각 실험동물에게 실시예 9 및 17의 화합물을 부형제 (DMSO/트윈 20(Tween 20)/식염수:0.1/0.6/2.3, v/v/v)에 각각 용해시킨 용액을 투여하였다. 이때 정맥 투여의 경우 5 mL/kg의 양으로 미정맥을 이용하여 투여하였으며, 경구 투여의 경우 10 mL/kg의 양으로 강제 투여하였다.
2) 혈중 농도 시험
경구투여 후 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 10시간, 및 24시간째에 마우스는 안와정맥으로부터, 랫트는 경정맥으로부터 헤파린 (Heparin, 1000 IU/mL, 3 ㎕)이 들어있는 튜브에 채혈하였다. 혈액 시료를 원심분리 (12,000 rpm, 2분, Eppendorf사)하여 얻은 혈장을 분석 전까지 -80 ℃ 냉동고에 보관하였다.
3) 시료의 분석
시료는 LC/MSMS 시스템을 이용하여 분석하였으며 조건은 다음과 같다.
LC 시스템 Agilent？ 1200시리즈 (애질런트(agilent)사)
이동상 아세토나트릴/0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 10 mM 암모니움 포메이트 = 95/5 (부피/부피 퍼센트)
칼럼 Luna？ phenyl hexyl
(2.0×50 mm, 5 μm, 페노메넥스(phenomenex)사)
유량 0.2 mL/min
MS 시스템 API？ 5000 (Applied Biosystems/MDS SCIEX사)
이온화 모드 Turbo Ion spray Ionization mode (positive)
커튼 가스(curtain gas; CUR) 20 psi 콜리전 가스(collision gas; CAD) 6 psi
이온 전압(ion voltage) 5400 V GS 1 // GS 2 50/50 psi
터보 가스 온도(turbo gas temperature) 480 ℃ CUR, CAD, GS(1, 2) 질소
MRM(multi reaction monitoring) 파라미터
화합물 Q1/Q3 DP CE CXP
시험 화합물 294.317/264.2 71 23 30
* Q1: 전구이온(precursor ion, m/z)
Q3: 생성이온(product ion, m/z)
시료의 전처리 방법은 다음과 같다.
채혈된 혈장 시료를 50 μL씩 취하여 뚜껑이 달린 2.0 mL 튜브 (Eppendorf사)에 옮긴 후 0.1% 폼산 (formic acid)을 20 μL 가하여 산성화시켰다. 이후 내부 표준용액을 가하고 추출용매로서 에틸아세테이트를 1 mL 첨가하여 5분간 1,400 rpm에서 혼합기 (thermomixer, Eppendorf사)로 혼합한 후 원심분리 (Eppendorf사)하였다. 상등액을 취하여 35 ℃에서 진공건조기(cyclone)를 이용하여 농축시켰다. 잔상을 이동상 50 μL로 재용해시킨 후 결과의 용액 5 μL를 LC/MS에 주입하여 분석하였다.
2. 뇌 혈관 장벽 투과율 시험
1) 실험동물 및 시험 화합물의 투여
7 주령의 ICR 계통 마우스 (체중 약 30 g) 및 8 주령의 SD 계통 랫트 (체중 약 250 g)를 각 실험군당 3 마리씩 사용하였다. 각 실험동물에게 실시예 9 및 17의 화합물을 부형제 (DMSO/Tween 20/식염수:0.1/0.6/2.3, v/v/v)에 용해시킨 용액을 투여하였다. 이때 정맥 투여의 경우 5 mL/kg의 양으로 미정맥을 이용하여 투여하였으며, 경구 투여의 경우 10 mL/kg의 양으로 강제 투여하였다.
2) 혈중 및 조직 중 농도 시험 (동시시험)
(1) 혈액시료의 채취
경구투여 후 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 10시간, 및 24시간째에 이소플로란 (isoflorane)을 이용하여 실험동물을 호흡마취한 후, 마우스 및 랫트를 개복하고 복대정맥으로부터 약 1 mL의 혈액을 헤파린 (1000 IU/mL, 3 ㎕)이 들어있는 튜브에 반복적으로 취하였다. 혈액시료를 원심분리 (12000 rpm, 2분, Eppendorf사)하여 얻어진 혈장을 분석시까지 -80 ℃ 냉동고에 보관하였다.
(2) 장기조직시료의 채취
혈액채취한 마우스 및 랫트를 충분히 방혈한 후, 신속히 뇌조직을 채취하였다. 채취한 뇌조직을 생리식염수로 1회 또는 2회 세정하여 혈액을 제거하고, 장기조직 이외의 지방이나 주변조직을 제거한 후 무게를 측정하였다. 이후 4% 소 혈청알부민(bovine serum albumine; BSA) 용액을 10배 희석배율로 첨가한 후 조직파쇄기 (homogenizer)로 균질화하였다. 희석된 균질액을 2 mL 튜브에 옮긴 후, 분석 시까지 -80 ℃ 냉동고에 보관하였다. 모든 시료의 처리는 얼음에서 냉장 상태로 실시하였다.
3) 시료의 분석
시료는 LC/MSMS 시스템을 이용하여 분석하였으며 조건은 다음과 같다.
LC 시스템 Agilent？ 1200시리즈 (애질런트사)
이동상 아세토나트릴/0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 10 mM 암모니움 포메이트 = 95/5 (부피/부피 퍼센트)
칼럼 Luna？ phenyl hexyl (2.0×50mm, 5 μm, 페노메넥스사)
유량 0.2 mL/min
MS 시스템 API？ 5000 (Applied Biosystems/MDS SCIEX사)
이온화 모드 Turbo Ion spray Ionization mode (positive)
커튼 가스 (CUR) 20 psi 콜리전 가스(CAD) 6 psi
이온 전압 5400 V GS 1 // GS 2 50/50 psi
터보 가스 온도 480 ℃ CUR, CAD, GS(1, 2) 질소
MRM 파라미터
화합물 Q1/Q3 DP CE CXP
시험 화합물 294.317/264.2 71 23 30
시료의 전처리는 방법은 다음과 같다.
채혈된 뇌 조직 시료를 50 μL씩 취하여 뚜껑이 달린 2.0 mL 튜브 (Eppendorf사)에 옮긴 후, 내부 표준용액을 가하고 추출용매로서 에틸아세테이트를 1 mL 첨가하여 5분간 1400 rpm에서 혼합기 (Thermomixer, Eppendorf사)로 혼합하고 원심분리 (Eppendorf사)하였다. 상등액을 취하여 35 ℃에서 진공건조기 (cyclone)를 이용하여 농축시켰다. 잔상을 이동상 50 μL로 재용해시킨 후 결과의 용액 5 μL를 LC/MS에 주입하여 분석하였다.
3. 결과
본 발명의 실시예 9 및 17의 화합물의 마우스에서의 약동력학 시험 및 뇌 혈관 장벽 투과율 시험 결과를 하기의 표 8에 나타내었으며, 렛트에서의 약동력학 시험 및 뇌 혈관 장벽 투과율 시험 결과를 하기의 표 9에 나타내었다.
하기 표 8 및 9에서 "iv"는 정맥주사를, "po"는 구강투여를, "AUC plasma"는 혈장농도 곡선하 면적(area under the plasma level-time curve)을, "Cmax"는 혈장 최고 농도(maximum plasma concentration)를, "Tmax"는 Cmax에 도달하는 시간(time to reach Cmax)을, "BA"는 하기 수학식 2에 따른 생체이용율(%)을, "AUC Brain"은 시간에 따른 뇌 조직 농도 곡선하 면적을, "AUCBrain/AUCPlasma"는 시험 화합물의 뇌로의 이행정도를 의미한다.
[수학식 2]
생체이용율(%)=[(AUCpo/AUCiv) × (Doseiv/Dosepo) × 100]
상기 식에서 AUCpo는 경구투여후의 혈중 농도 시간 곡선하 면적(area under the blood concentration time curve, AUC)을, AUCiv는 정맥 투여후의 AUC를, Doseiv는 정맥 투여량을, Dosepo는 경구 투여량을 의미한다.
파라미터
실시예 9의 화합물 (n=3) 실시예 17의 화합물 (n=3)
1.25 mg/kg, iv 2.5 mg/kg, po 1.25 mg/kg, iv 2.5 mg/kg, po
AUC Plasma (ng.h/ml) 503.35 645.95 237.04 325.95
Cmax(ng/ml) 172.0 96.53
Tmax (hr) 0.83 0.83
BA (%) 64.2 68.8
AUC Brain (ng.h/ml) 6101.86 8137.42 2525.45 2354.58
Cmax (ng/ml) 899.33 462.67
Tmax (hr) 4.0 2.0
AUCBrain/AUCPlasma (%) 1210 1260 1060 720
파라미터 실시예 9의 화합물 (n=3) 실시예 17의 화합물 (n=3)
1.25 mg/kg, iv 2.5 mg/kg, po 1.25 mg/kg, iv 2.5 mg/kg, po
AUC Plasma (ng.h/ml) 1637.46 908.50 1144.47 516.05
Cmax(ng/ml) 215.0 122.00
Tmax (hr) 1.67 1.33
BA (%) 27.8 22.4
AUC Brain (ng.h/ml) 17939.63 15241.92 8740.33 11237.67
Cmax (ng/ml) 1309.00 1406.67
Tmax (hr) 2.0 1.67
AUCBrain/AUCPlasma (%) 1100 1680 760 2180
상기 표 8 및 9에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 9 및 17의 화합물은 마우스 및 랫트에서 뇌 질환 치료제로서 적합한 높은 혈중농도 곡선하 면적을 나타내었으며 특히 우수한 생체이용율을 나타내었다.
또한 뇌 혈관 장벽 투과율 시험 결과, 본 발명의 실시예 9 및 17의 화합물은 뇌 질환 치료제로서 충분히 사용 가능한 혈장 대비 100% 이상의 매우 우수한 투과율을 나타내었다.
시험예 3: hERG 칼륨 이온 채널 (hERG potassium ion channel) 저해효능 시험
1) 모델 세포주 및 배양
hERG가 안정적으로 발현된 HEK-hERG 세포주 (IonGate Biosciences, Frankfurt, Germany사)를 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Sigma사, St. Louis, MO, USA)에 10% 소 태아혈청 (fetal bovine serum; FBS, Cambrex, Walkersville, MD, USA), 0.5 mg/mL 제오신 (zeocin, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)을 첨가하여 배양하였다. 사용된 모든 세포주는 배양 5일 후 80% 정도 배양 플라스크를 덮었을 때 계대 배양하였다.
2) 시험용액 및 약물의 제조
(1) 시험용액
칼륨 이온 전류의 측정을 위해 사용된 전극 내 용액의 조성은 115 mM K-아스파르테이트(aspartate), 20 mM KCl, 10 mM EGTA, 10 mM HEPES, 2.5 mM 트리스-포스포크레아틴(tris-phosphocreatine), 0.1 mM Na2GTP 및 5 mM MgCl2 (pH 7.2, 290 mOsm/Kg H2O)로 하였고, 세포 외 관류액의 조성은 135 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM 글루코스(glucose), 및 10 mM HEPES (pH 7.2, 300 mOsm/Kg H2O)로 하였다.
(2) 약물
시험 화합물은 세포외 관류액으로 원하는 농도로 희석하여 사용하였다. 약물은 7-어레이 폴리에틸렌 튜브(7-array polyethylene tube)와 연결된 가스크로마토그래피용 모세관 끝을 HEK-hERG 세포주의 100 ㎛ 이내에 위치하도록 하여 중력에 의해 가해지도록 하였다.
3) 이온전류 측정
칼륨 이온 전류의 측정은 EPC10 (Instrutech Co., NY, USA) 패치 클램프 증폭기(patch clamp amplifier)를 사용한 전형적인 전세포 파열 패치 클램프(whole-cell patch clamp) 방법을 이용하였다. 또한 전극으로는 보로실리케이트 유리 모세관(borosilicate glass capillary, 외경: 1.65 mm, 내경: 1.2mm, Corning 7052, Garner Glass Co.,사 Claremont, CA, USA)을 P-97 플레이밍-브라운 마이크로피펫 풀러(P-97 Flaming-Brown micropipette puller, Sutter Instrument Co.사)로 제작하여 사용하였다. 상기 전극은 실가드 184 (Sylgard 184, Dow Corning사, Midland, MI, USA)로 코팅하여 마이크로퍼지 (microforge, Narishige사, Tokyo, Japan)로 다듬은 후, 전극 내부에 용액을 채웠을 때 저항이 2 내지 3 ㏁이 되는 것을 사용하였다. 세포가 들어있는 배양 접시 (culture dish)를 도립현미경 (inverted microscope, Nikon사) 위에 올려놓고, 시험 화합물이 포함된 세포외 관류액을 1-2 mL/min 속도로 관류하였다. 세포막의 전기용량 (membrane capacitance)과 직렬저항 (series resistance)을 80% 이상 보정하였으며, 실험시 샘플링율 (sampling rate)은 2 kHz로, 패스 필터(low-pass filter)는 2 kHz (-3 dB; 8-pole Bassel filter)로 하여 칼륨 이온 전류를 측정하였다. 모든 실험은 실온(21-24 ℃)에서 시행하였다.
4) 데이터 분석 및 통계처리
실험 결과는 Pulse/Pulsefit (v9.0, HEKA Elcktronik, Lambrecht, Germany)과 Igor 매크로를 이용하여 분석하였다. 모든 결과는 평균 ± 표준오차로 표시하였다. 농도반응 곡선을 구한 경우 Hill 공식 [Block = (1+IC50/[drug]n)-1]으로 계산하여 이온전류를 50% 만큼 억제하는 농도 (IC50)를 산출하였다. 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다.
화합물 저해효능(IC50)
화합물 9 52.14 ± 3.68 μM
화합물 17 47.90 ± 5.26 μM
상기 표 10에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 9 및 17의 화합물은 hERG 칼륨 이온 채널에 대한 저해효능이 미미하여 심장 독성에 대하여 안전한 것으로 판단된다.
시험예 4: 생체내 공포 조건화 시험 (Fear conditioning test)
1) 유전자변형 마우스 (transgenic mice)
수컷 B6C3-Tg (APPswe, PSEN1dE9, Jackson Laboratory사, Maine, USA)과 암컷 B6C3F1(중앙실험동물사, 한국) 사이에서 태어난 3 주령의 신생자 마우스의 꼬리를 약 0.5 ㎝ (tail biopsy) 잘라서 게놈 DNA (genomic DNA)를 추출하고 유전자형 검사를 실시하여 유전자변형 마우스(double tg mouse)를 선별하였다.
본 실험에서 사용한 유전자변형 마우스는 통상 치매 효능 평가 시험에 많이 사용되는 것으로, 5 개월령 이상에서 뇌에 베타-아밀로이드가 특이적으로 침착하여 사람에서의 치매환자와 같은 확장표현형(phenotype)을 나타낸다.
2) 약물 투여
베타-아밀로이드가 뇌에 침착하기 시작하는 5 개월령부터 12 개월령까지 7 개월간 실시예 9의 화합물을 30 mg/kg 또는 100 mg/kg의 양으로 매일 경구 투여하였다. 비교물질로는 베타-아밀로이드 단백질과 결합하여 아밀로이드 침착 및 독성 작용을 저해하는 트라미프로세이트를 사용하였다(Aisen, P. S. et . al ., Curr. Alzheimer Res. 2007, 4, 473 참조).
3) 생체내 공포 조건화 시험 (Fear conditioning test)
훈련 첫째 날 조건화 상자에 동물을 넣고 2분간 적응시켰다. 공포 조건화는 20초 동안 75 dB의 소리자극 (conditional stimulus: CS)을 주고 소리자극의 마지막 2초 동안에 0.5 mA의 전기쇼크 (unconditional stimulus; US)를 짝지어 제시하였다. 1분 후 동물을 조건화 상자에서 사육상자로 옮기고, 24시간 후 기억력 검사를 실시하였다. 훈련 첫째 날에 사용된 동일한 조건화 상자에 동물을 넣고 5분간 관찰하였다. 이때 소리자극과 전기쇼크는 제시하지 않고 동결반응을 측정하였다. 이때 동결반응 (freezing)이란 동물이 숨쉬기 위한 행동 이외에는 움직임이 없는 상태로 정의한다.
4) 베타-아밀로이드 양 측정
공포 조건화 시험을 마친 후, 마우스의 뇌를 적출하여 조직염색 및 ELISA 법을 사용하여 뇌조직 중에 침착된 베타-아밀로이드 양을 측정하였다. 그 결과를 하기의 표 11에 나타내었다.
시험 화합물 투여량 (mg/kg) 증가율 (배)a
화합물 9 30 3.2
100 3.8
트라미프로세이트 30 2.3
100 1.8
a물을 투여하지 않고, 부형제(vehicle)만을 투여한 대조군(Tg 그룹)의 동결반응(freezing, %)을 기준으로 했을 경우의 증가율
상기 표 11에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 9의 화합물은 비교물질인 트라미프로세이트에 비하여 투여량 의존적으로 유전자변형 마우스에서의 높은 기억력 향상을 나타내었다.
시험예 5: 조직 염색 (immunohistochemistry) 시험
시험예 4의 1) 및 2)에서와 같이 선별 및 약물투여가 완료된 유전자변형 마우스 (transgenic mouse)로부터 뇌를 분리하고, 분리된 뇌를 10% 중성 포르말린 용액에 넣어 고정한 후 해마(hippocampus)와 피질 (cortex)을 포함한 부위를 삭정하고, 수세, 탈수, 파라핀 침투의 과정을 거쳐 파라핀 블록을 제작하였다. 파라핀 블록으로 제작된 뇌 조직을 회전형 박절기를 이용하여 8 μm 두께로 해마의 전체 영역에 대한 표본을 제작하였다. 전체영역에 대해 제작된 표본 중에서 일정간격을 두고 10장을 뽑아 탈 파라핀한 후 함수시키고, 메이어 헤마톡실린 (Mayer's hematoxylin)에 1분간 담근 후 수돗물로 수세하였다. 수세된 조직을 염기성 염화나트륨 용액 (alkaline sodium chloride solution) 중에서 20분간 반응시킨 후 염기성 콩고레드 염색액 (alkaline congo red solution) 중에서 20분간 반응시키고, 100% 에틸알코올에 3 단계로 헹궈준 후 자일렌으로 투명화시키고 합성봉입제를 이용하여 봉입하였다. 콩고레드 염색이 완료된 모든 조직표본의 해마와 피질부위에서 각각 콩고레드 염색 양성인 베타-아밀로이드 플라그를 광학현미경을 이용하여 모두 계수하였다. 그 결과를 하기 표 12에 나타내었다.
시험 화합물 투여량 (mg/kg) 총 감소율 (%)a
(해마, 피질)
화합물 9 30 41 (29, 43)
100 61 (64, 61)
트라미프로세이트 30 29 (7, 32)
100 11 (7, 12)
aTg 그룹의 베타-아밀로이드 플라그 개수를 기준으로 했을 때의 감소율
상기 표 12에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 9의 화합물은 비교물질인 트라미프로세이트에 비하여 우수한 베타-아밀로이드 플라그 침착량 감소율을 투여량 의존적으로 나타내었다.
도 1 및 2는 실시예 9의 화합물 및 비교물질인 트라미프로세이트의 유전자변형 마우스의 해마 및 피질에서의 생체내 조직 염색 결과를 각각 나타낸 것이다.
도 1 및 2에 나타난 바와 같이, 실시예 9의 화합물의 경우 트라미프로세이트에 비하여 베타-아밀로이드 플라그의 침착량이 현저하게 감소되었음을 알 수 있다.
시험예 6: 생화학 시험
시험예 4의 1) 및 2)에서와 같이 동일한 방법으로 선별되어 약물투여가 완료된 유전자변형 마우스의 뇌 조직으로부터 적출된 해마 (hippocampus) 조직에 조직 무게의 8배에 해당되는 양의 5M 구아니딘 (guanidine) HCl/ 50 mM Tris HCl을 넣고 조직파쇄기 (homogenizor)로 균질화시킨 후 3시간 동안 실온에 두었다. 이 균질액을 단백질분해 억제제 (Protease inhibitor, Pierceㄾ, Cat No.78415)가 첨가된 BSAT-DPBS (Dulbecco's phosphate buffered saline with 5% BSA and 0.03% Tween-20)로 50배 희석한 후, 색측정기(Human beta-amyliod HS 1-42 colorimetric kit, Invitrogen？, Cat No. #KHB3544)를 이용해 베타-아밀로이드 42의 양을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 13에 나타내었다.
시험 화합물 투여량 (mg/kg) 감소율 (%)a
화합물 9
 30 41
100 48
트라미프로세이트
 30 8
100 16
aTg 그룹의 베타-아밀로이드 42의 양을 기준으로 했을 때의 감소율
상기 표 13에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 실시예 9의 화합물은 비교물질인 트라미프로세이트에 비하여 탁월한 베타-아밀로이드 플라그의 침착량 감소율을 투여량 의존적으로 나타내었다.
이상, 본 발명을 상기 실시예를 중심으로 하여 설명하였으나 이는 예시에 지나지 아니하며, 본 발명은 본 발명의 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한 다양한 변형 및 균등한 기타의 실시예를 이하에 첨부한 청구범위 내에서 수행할 수 있다는 사실을 이해하여야 한다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 9의 화합물 및 비교물질인 트라미프로세이트의 유전자변형 마우스의 해마에서의 생체내 조직 염색 시험 결과를 나타낸 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 9의 화합물 및 비교물질인 트라미프로세이트의 유전자변형 마우스의 피질에서의 생체내 조직 염색 시험 결과를 나타낸 사진이다.

Claims (10)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    화학식 1
    Figure 112009035588091-pat00012
    상기 식에서,
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, OH, 할로겐, C1-C3 알콕시, C1-C3 알킬, 하나 이상의 할로겐 또는 히드록시기로 치환된 폴리(C1-C3 알콕시), 및 하나 이상의 C1-C3 알킬기로 치환된 피라닐(C1-C3 알콕시)로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R3은 NH2, C1-C3 알킬아미노, C1-C3 디알킬아미노 및 C1-C3 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되며,
    R4는 H 또는 C1-C3 알콕시이다.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 R1 및 R2가 각각 독립적으로 H, OH, 할로겐, OCH3, CH3, (OCH2CH2)2F, (OCH2CH2)3F 및 디메틸피라닐메톡시로 이루어진 군으로부터 선택되고, R3이 NH2, NHCH3, N(CH3)2, 및 OCH3로 이루어진 군으로부터 선택되며, R4가 H 또는 OCH3인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    하기 화합물들로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-히드록시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메틸-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-플루오로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-브로모-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-요오도-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-히드록시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메틸-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-플루오로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-클로로-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-브로모-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-요오도-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-히드록시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 염산염;
    5-히드록시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 염산염;
    6-메톡시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(3-메톡시-4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(3-메톡시-4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
    2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
    2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-클로로-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-메틸-2-(아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
    5-메틸-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리 플루오르 아세트산염;
    5-메틸-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-메틸-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-메틸-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-(2-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-요오도-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-요오도-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-요오도-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-요오도-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-요오도-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5,6-디메톡시-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5,6-디메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5,6-디메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5,6-디메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5,6-디메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    5-히드록시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    6-메톡시-2-(3-메톡시-4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메틸-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
    6-메틸-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란 트리플루오로아세트산염;
    6-메틸-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-메틸-2-(4-메톡시스티릴)벤조퓨란;
    6-메틸-2-(3,4-디메톡시스티릴)벤조퓨란;
    6-(2-(2-(2-플루오로에톡시)에톡시)에톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-히드록시-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-히드록시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-히드록시-2-(4-디에틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5,6-디메톡시-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    5-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-아미노스티릴)벤조퓨란;
    6-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-메틸아미노스티릴)벤조퓨란; 및
    6-(2,2-디메틸테트라하이드로피란-4-일메톡시)-2-(4-디메틸아미노스티릴)벤조퓨란.
  4. 하기 화학식 2의 화합물을 테트라하이드로퓨란 중에서 하기 화학식 3의 화합물 및 소듐 헥사메틸디실릴아미드와 호노-에몬스 반응 (Honer-Emmons reaction) 시키는 단계를 포함하는 화학식 1의 화합물의 제조 방법:
    화학식 1
    Figure 112011042129330-pat00013
    화학식 2
    Figure 112011042129330-pat00014
    화학식 3
    Figure 112011042129330-pat00015
    상기 식에서,
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, OH, 할로겐, C1-C3 알콕시, C1-C3 알킬, 하나 이상의 할로겐 또는 히드록시기로 치환된 폴리(C1-C3 알콕시), 및 하나 이상의 C1-C3 알킬기로 치환된 피라닐(C1-C3 알콕시)로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    R3은 NH2, C1-C3 알킬아미노, C1-C3 디알킬아미노 및 C1-C3 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택되며,
    R4는 H 또는 C1-C3 알콕시이다.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 제4항에 있어서,
    호노-에몬스 반응 단계의 생성물을 디클로로메탄 중에서 보론 트리클로라이드, 보론 트리플루오라이드, 보론 트리브로마이드 또는 요오도트리메틸실란을 이용하여 탈메틸화 반응시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화학식 1의 화합물의 제조 방법.
  8. 삭제
  9. 제1항의 화학식 1의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 알츠하이머성 치매, 뇌졸중, 파킨슨병 및 헌팅턴 병으로 이루어진 군으로부터 선택된 퇴행성 뇌질환 치료용 약학 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    약학적으로 허용가능한 염이 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트 산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타타르산, 시트르산, 아스코브산, 팔미트산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산 및 톨루엔설폰산으로 구성된 군으로부터 선택된 산의 염인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
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