KR100990301B1

KR100990301B1 - 팽윤성 가교 히알루론산 분말과 그 제조 방법

Info

Publication number: KR100990301B1
Application number: KR1020107006667A
Authority: KR
Inventors: 데츠노리 마츠모토
Original assignee: 가부시키가이샤 시세이도
Priority date: 2007-09-28
Filing date: 2008-09-26
Publication date: 2010-10-26
Also published as: ES2381417T3; EP2199308B1; US8691957B2; JPWO2009041627A1; US20100210587A1; EP2199308A1; CN101821294A; CN101821294B; WO2009041627A1; EP2199308A4; KR20100058607A; ATE544786T1; JP4460617B2

Abstract

본 발명은 팽윤성 가교 히알루론산 분말과 그 제조 방법에 관한 것으로서,
히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 액상 매체중에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하는 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법, 또한 이 방법에 의해 수득된 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 수중에서의 팽윤율이 500% 이상이다. 수중에서의 팽윤성이 우수한 가교 히알루론산 분말과, 그 간편한 제조 방법을 제공한다.

Description

팽윤성 가교 히알루론산 분말과 그 제조 방법{SWELLABLE CROSSLINKED HYALURONIC ACID POWDER AND METHOD FOR PRODUCING THE SAME}

본 발명은 팽윤성 가교 히알루론산 분말과 그 제조 방법, 특히 팽윤성이 우수한 가교 히알루론산 분말과 그 간편한 제조 방법에 관한 것이다.

히알루론산을 가교시킨 가교 히알루론산 겔은 생체 적합성이 우수하고, 또한 생체 내에서 경시적으로 분해가 진행되며, 최종적으로는 소멸되는 생분해성(生分解性)도 겸비하고 있다. 종래, 가교 히알루론산 겔의 이와 같은 성질을 이용하여 유착 방지제, 골수복제, 약물 서방성 조성물 및 조직 증대 물질 등으로의 응용에 관한 연구·개발이 활발히 실시되고 있으며, 예를 들면 조직 증대 물질로의 대표적인 응용예로서 미용 형성 분야의 주름 펴짐 주입제가 알려져 있다.

가교 히알루론산 겔을 예를 들면 주름 펴짐 주입제로서 이용하는 경우에는 주입 부위에서 일정한 체적을 확보하기 때문에 보다 농밀한 고점탄성 가교 겔이 요구된다. 또한, 약물 서방 제제로서 가교 히알루론산 겔을 이용한 경우에도 약제의 적정한 효과를 일정 기간 유지하기 위해서는 생체 내에 장기간 체류시킬 필요가 있고, 농밀한 높은 점탄성을 가진 가교 히알루론산 겔이 바람직하다.

종래 가교 히알루론산 겔은 고체의 히알루론산을 수중에 용해하여 가교제 및 알칼리를 첨가하여 가교 반응하고, 또 수득된 히알루론산 겔로부터 불순물(잉여의 가교제 및 알칼리)을 제거하는 등의 공정을 거쳐 조제되어 있다(특허문헌 1).

그러나 히알루론산은 분자량이 크고, 물에 용해된 경우에는 저농도라도 수용액의 점탄성이 매우 커지므로 공업적 규모로 물에 용해하는 데에는 매우 시간과 수고가 든다. 특히 고밀도의 가교 히알루론산 겔을 수득하고자 하여 히알루론산 농도를 높게 한 경우, 액상이 현저히 증점되어 수용액중에서 가교제나 알칼리와 균일하게 교반 혼합할 때나 투석 등에 의해 이들을 제거할 때 매우 번잡한 공정이 되어 많은 시간이나 수고를 요하는 문제가 있었다.

또한, 가교 히알루론산은 기본적으로 높은 수팽윤성 및 점탄성을 갖기 때문에 보존 시, 겔 조제 시 내지는 생체로의 주입시 등에 취급하기 어려운 문제점이 있었다. 따라서 사용 시에 물을 첨가함으로써 원하는 겔로서 사용할 수 있는 분말 형태의 가교 히알루론산이 요구되었다. 또는 생체로의 주입 부담을 저감하고, 또한 생체 내에 보다 장기간 체류시키는 관점에서 가교 히알루론산을 분말 상태로 제조하고, 그대로 생체 내에 주입하는 시도도 기대되고 있다.

상기 특허문헌 1과 같은 가교 히알루론산 겔은 물에 용해된 히알루론산을 가교하여 제조하는 것이다. 따라서 이와 같은 종래 제법으로 가교 히알루론산 분말을 수득하는 데에는 가교 히알루론산 겔을 제조한 후, 상기 겔을 건조시켜 분말로 하게 된다. 그러나 가교 히알루론산 겔을 건조시킨 분말에 물을 첨가해도 팽윤하지 않고 이수(離水)되어 건조 전의 겔을 재현할 수 없었다.

또한, 특허문헌 2에는 히알루론산을 물-아세톤 혼액에서 가교 후, 가열 건조시킨 분말이 기재되어 있지만, 이 방법에서 수득된 가교 히알루론산 분말도 또한 수중에서의 팽윤율이 매우 낮고, 거의 점조액의 상태가 되므로 겔로서의 실용성은 부족했다.

특허문헌 1: 특허 제3094074호

특허문헌 2: 일본 공개특허공보 소60-130601호

본 발명은 상기 종래 기술을 감안하여 이루어진 것으로서, 그 해결해야 할 과제는 수중에서의 팽윤성이 우수한 가교 히알루론산 분말과 그 간편한 제조 방법을 제공하는 데에 있다.

상기 종래 기술의 과제를 감안하여 본 발명자들이 예의 검토를 실시한 결과, 히알루론산 분말을, 1가의 저급 알콜을 함유하고 상기 히알루론산 분말을 용해하지 않은 액상 매체중에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시함으로써 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 용이하게 제조할 수 있는 것을 발견했다. 또한, 이 방법에 의해 수득된 팽윤성 가교 히알루론산 분말이 수중에서 현저하게 팽윤되어 점탄성이 우수한 가교 히알루론산 겔이 되는 것을 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 수중에서의 팽윤율이 500% 이상인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 물을 이용하여 한계까지 팽윤시켰을 때의 히알루론산 농도가 0.1~20 중량%인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법은 히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 액상 매체중에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하는 것을 특징으로 한다.

상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법에서 상기 액상 매체는 상기 1가 알콜과 물의 혼합 용매인 것이 바람직하다.

상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법에서 상기 1가 알콜은 에탄올 또는 2-프로판올인 것이 바람직하다.

상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법에서 상기 1가 알콜과 물의 혼합비가 질량비로 99.9:0.1~65:35인 것이 바람직하다.

상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법에서 상기 물은 알칼리성 완충액 또는 산성 완충액인 것이 바람직하다.

상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법에서 상기 가교제는 디비닐설폰, 1,4-부탄디올·디글리시딜에테르 및/또는 에틸렌글리콜·디글리시딜에테르인 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법은 하기 공정 (1) 및 (2)를 포함하는 것을 특징으로 한다.

(1) 히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜과 알칼리성 완충액을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 용매에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시한다.

(2) 상기 (1) 공정의 생성물을, 탄소수 1~4의 1가 알콜과 산성 완충액을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 용매에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시한다.

상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법에서 상기 1가 알콜과 알칼리성 완충액 또는 산성 완충액의 혼합비가 질량비로 99.9:0.1~65:35인 것이 바람직하다.

본 발명에 의하면 히알루론산 분말을 분산된 상태로 가교 반응을 실시함으로써 종래의 방법으로 실시된 번잡한 공정을 거치지 않고, 용이하게 팽윤성 가교 히알루론산 분말이 수득되므로 시간이나 비용면에서 매우 유용하다. 또한 본 발명에 의해 수득되는 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 수팽윤시킨 경우의 팽윤율이 높고, 우수한 점탄성을 갖는다.

도 1은 본 발명의 실시예 1 및 실시예 5에 의해 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 상태의 사진((a):실시예 1, (b):실시예 5),
도 2는 본 발명의 실시예 1 및 실시예 5에 의해 수득된 가교 히알루론산 분말의 건조 상태의 사진((a):실시예 1, (b):실시예 5),
도 3은 본 발명의 실시예 13에 의해 수득된 가교 히알루론산 겔 및 종래의 제조 방법에 의한 시판되는 가교 히알루론산 겔에 의해 수득된 히알루론산 겔의 동적 점탄성을 비교한 그래프((a):실시예 13, (b):비교예 7, (c):비교예 8),
도 4는 본 발명의 실시예 13 및 실시예 14에 의해 수득된 가교 히알루론산 겔의 동적 점탄성을 비교한 그래프((a):실시예 13, (b):실시예 14)) 및
도 5는 본 발명의 실시예 14~17에 의해 수득된 히알루론산 겔의 동적 점탄성을 비교한 그래프((a):실시예 13, (b):실시예 14, (c):실시예 15, (d):실시예 16)이다

(발명을 실시하기 위한 가장 좋은 형태)

본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 수중에서의 팽윤율이 500% 이상인 것을 특징으로 한다.

여기서 팽윤율이 500% 이상인 것은 소정량의 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 대과잉의 순수중에서 팽윤시키고, 가교 히알루론산 겔로 한 경우에 가교 히알루론산 분말의 중량 100%에 대해 팽윤한 가교 히알루론산 겔의 중량이 500% 이상, 즉 상기 분말이 5배 이상으로 팽윤되는 것을 의미한다.

또한, 상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 물을 이용하여 한계까지 팽윤시켰을 때의 히알루론산 농도가 0.1~20 중량%이다. 따라서 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 바람직하게는 팽윤율 500%~100000%이다.

본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 그대로, 또는 적당한 처방중에 배합함으로써 의약품, 화장료 등에 이용하는 것이 가능하다. 또한, 특히 본 발명에 따른 가교 히알루론산 분말은 분말 상태로 재팽윤시키는 것이 가능하므로 생체 중에 적용하는 물질로의 응용, 예를 들면 주름 펴짐 주입제 등의 조직 증대 물질, 약물 서방성 조성물, 유착 방지제, 골수복제 등에 바람직하게 응용하는 것이 가능하다.

또한, 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수중에서 팽윤시켜 가교 히알루론산 겔로 한 후, 이를 상기와 같은 용도에 적용할 수도 있다.

또한, 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법은 히알루론산 분말을 탄소수 1~4의 1가 알콜을 함유하고, 또한 상기 히알루론산 분말을 용해하지 않은 액상 매체중에 분산된 상태로 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 제조 방법에 이용하는 히알루론산 분말은 하기 화학식 1에 나타내는 바와 같이, N-아세틸-D-글루코사민 잔기와, D-글루쿠론산 잔기가 교대로 결합된 직쇄형 고분자이고, 이를 분말형으로 가공한 것이면 특별히 한정되지 않고 이용할 수 있다.

히알루론산은 예를 들면 계관(鷄冠)이나 다른 동물 조직으로부터의 단리 추출 또는 스트렙토·코쿠스속 등의 미생물을 이용한 발효법에 의해 수득할 수 있다. 또한, 본 발명에서는 예를 들면 히알루론산의 유도체로서 히알루론산 나트륨염, 히알루론산칼륨염 등의 히알루론산 금속염이나 히알루론산의 히드록실기, 카르복실기 등을 에테르화, 에스테르화, 아미드화, 아세탈화, 케탈화시켜 수득되는 히알루론산 유도체 등의 분말을 이용해도 관계없다.

또한, 히알루론산 분말로서는 시판품을 이용할 수도 있다. 시판되는 히알루론산으로서는 예를 들면 바이오히아로 12(시세이도사제), 히알루론산(기몬사제) 등을 들 수 있다.

본 발명의 제조 방법에 이용하는 히알루론산 분말의 분자량은 특별히 한정되지 않지만, 분자량 10만 이상, 또는 분자량이 50만~300만 정도인 것이 바람직하다. 통상, 일반적으로 이용되는 히알루론산은 그 대부분이 분자량 10만 이상인 것, 특별히 저분자화된 분자량 1만 정도의 히알루론산도 존재한다. 본 발명에서 이와 같은 분자량 1만 정도의 저분자화 히알루론산을 이용하면 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수팽윤시켰을 때 원하는 점탄성을 가진 가교 히알루론산 겔을 수득할 수 없는 경우가 있으므로 그다지 바람직하지 않다.

또한, 히알루론산 분말이 액상 매체중에 용해될 경우에는 외관이 투명한 점조액상이 된다. 한편, 히알루론산 분말이 액상 매체중에 용해되지 않고 분산되어 있는 경우에는 액상 매체중에 히알루론산 분말 분산 입자의 존재가 확인된다. 그리고, 본 발명의 제조 방법에서는 히알루론산 분말을 용해시키지 않고 분말 상태 그대로 액상 매체중에 분산시켜 가교 반응을 실시하므로 액상의 증점이 발생하지 않고, 고농도의 히알루론산 분산액이라도 용이하게 처리할 수 있다. 본 발명의 제조 방법에서 가교 반응에 제공하는 히알루론산 분말의 농도는 특히 가교 반응의 지장이 없는한 한정되지 않고, 50W/V% 정도의 고농도에서도 처리 가능하지만, 바람직하게는 가교 반응에 제공하는 혼합물 중 0.1~30W/V%, 더 바람직하게는 1~20W/V%이다.

본 발명의 제조 방법에 이용하는 액상 매체는 탄소수 1~4의 1가 알콜을 함유하고, 또한 상기 히알루론산 분말을 용해하지 않은 액상 매체이다.

탄소수 1~4의 1 가 알콜로서는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 1-부탄올, 2-메틸-1-프로판올, 2-부탄올, 2-메틸-2-프로판올 등을 들 수 있다. 이들 중 메탄올, 에탄올, 1-프로판올 또는 2-프로판올을 특히 바람직하게 이용할 수 있다. 본 발명에서는 특히 에탄올 또는 2-프로판올의 사용이 바람직하다.

또한, 본 발명의 제조 방법에서 예를 들면 에틸렌글리콜 등의 다가 알콜류를 이용한 경우에는 히알루론산 분말이 용해되고, 또한 아세톤 등의 케톤류를 이용한 경우에는 수득된 가교 히알루론산 분말의 수중의 팽윤율이 500%를 만족하지 않고, 원하는 가교 히알루론산 겔이 수득되지 않는 경우가 있다.

또한, 본 발명에서 히알루론산 분말을 용해하지 않는다는 것은 구체적으로는 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L(25℃) 미만인 것을 의미한다.

본 발명의 제조 방법을 이용하는 액상 매체로서는 구체적으로는 상기 1가 알콜과 물의 혼합 용매를 예로 들 수 있다. 여기서 혼합 용매중의 물의 배합 비율이 너무 많아지면 액상 매체중에 히알루론산 분말이 용해되고, 액상이 증점되므로 핸들링하기 어려워지고, 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조가 곤란해진다. 이 때문에 상기 혼합 용매중의 1가 알콜과 물의 질량비(1가 알콜:물)는 99.9:0.1~65:35인 것이 바람직하다. 또한, 상기 질량비(1가 알콜:물)는 99.9:0.1~85:15인 것이 더 바람직하다.

본 발명의 제조 방법에 이용하는 가교제는 상기 히알루론산의 고분자 사슬 사이를 화학 결합에 의해 가교할 수 있으면 어느 것을 이용해도 관계없다. 히알루론산의 가교제로서는 히알루론산 분자가 가진 카르복실기, 수산기, 아세토아미드기라는 반응성 관능기와 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있는 관능기를 2 이상 가진 다관능성 화합물을 이용할 수 있다. 본 발명에 이용하는 가교제로서는 구체적으로는 1,3-부탄디엔디에폭시드, 1,2,7,8-디에폭시옥탄, 1,5-헥사디엔디에폭시드 등의 알킬디에폭시체(體), 에틸렌글리콜디글리시딜에테르, 1,4-부탄디올디글리시딜에테르, 비스페놀A 디글리시딜에테르 등의 디글리시딜에테르체(體), 디비닐설폰, 에피클로로히드린 등을 예로 들 수 있다. 이들 중에서도 특히 디비닐설폰, 1,4-부탄디올·디글리시딜에테르 및 에틸렌글리콜·디글리시딜에테르를 바람직하게 이용할 수 있다. 또한 본 발명에서는 2종 이상의 가교제를 적절히 조합하여 이용해도 관계없다.

또한, 본 발명의 제조 방법에서 가교제의 배합량은 특별히 한정되지 않지만, 구체적으로는 가교 반응에 제공하는 혼합물 중, 0.1~10W/V%인 것이 바람직하고, 또 더 바람직하게는 0.5~5W/V%이다.

또한, 본 발명의 제조 방법에서는 가교 반응 시의 히알루론산의 반응성을 높일 목적으로 가교 반응에 제공하는 혼합물 중에 염산, 황산 등의 산, 수산화나트륨, 수산화칼륨 등의 염기 또는 인산염, 4급 암모늄염 등의 적당한 완충액을 첨가하여 혼합물의 pH를 적절히 조정하거나 알칼리 또는 산 조건하에서 가교 반응을 실시해도 좋다.

예를 들면 상기 액상 매체중의 물을 대신해서 0.001~0.1N의 알칼리성 완충액을 이용하여 알칼리 조건하에서 가교 반응을 실시하면 히알루론산 분자의 히드록시메틸기가 가교제와 에테르 결합을 형성하여 가교가 달성된다.

또한, 상기 액상 매체중의 물을 대신하여 0.001~0.1N의 산성 완충액을 이용하여 산 조건하에서 가교 반응을 실시하면 히알루론산 분자의 카르복실기가 가교제와 에스테르 결합을 형성하여 가교가 달성된다.

가교 반응을 알칼리 또는 산 조건하에서 실시하여 수득한 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수팽윤시키면, 액상 매체로서 물을 이용하여 수득한 분말의 경우 보다도 더 팽윤율이 높고, 점탄성이 우수한 가교 히알루론산 겔이 된다. 또한, 상기 가교 히알루론산 겔의 점탄성은 각 완충액의 농도에 따라서도 변화하고, 통상 알칼리 농도가 높을수록 손실 탄성률이 저하하고, 보형성이 높은 겔이 되는 경향이 있다. 따라서 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조에서 가교 반응시의 알칼리 또는 산 조건을 조정함으로써 용도나 목적에 따른 팽윤성 및 점탄성의 가교 히알루론산 겔을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 제조 방법에서 가교 반응에 제공하는 혼합물 중, 상기 필수 성분외에도 미리 통상 의약품, 화장료 등에 이용되는 성분을 본 발명의 목적 및 효과에 영향이 생기지 않는 범위로 배합해도 관계없다. 배합 가능한 성분으로서는 예를 들면 아스코르빈산 및 그 유도체, 글리세린 등의 보습제, 레티놀 및 그 유도체, 살리실산 등의 항염증제 등을 들 수 있다.

본 발명의 제조 방법에서는 가교 반응에 제공하는 반응 시간은 원료 히알루론산 분말이나 가교제 배합량, 또는 목적으로 하는 가교 히알루론산 분말의 물성 등에 따라서도 다르지만, 통상의 경우, 30분~100시간, 더 바람직하게는 1시간~72시간이다.

또한, 본 발명의 제조 방법에서는 가교 반응을 빨리 진행시켜 반응 시간을 단축하기 위해 가열해도 좋다. 반응 온도로서는 20~120℃로 할 수 있지만, 더 바람직하게는 25~90℃이다. 또한, 가교 반응 후는 원심 분리나 여과 등 공지된 방법에 의해 고액(固液) 분리하고, 수득된 분말을 상법에 의해 세정, 건조함으로써 분말상의 가교 히알루론산 겔을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 제조 방법에서는 반응 온도, 반응 시간, 사용하는 히알루론산 분말, 가교제 등의 종류·농도 등을 변화시킴으로써 수중에 팽윤시킬 때의 팽윤율이나 점탄성 등의 물성이 다른 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득할 수 있다. 따라서 목적으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 물성에 따라서 이를 적절히 결정하면 좋다.

또한, 본 발명에 따른 제조 방법은 다른 실시형태로서 2중 가교를 실시한 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법을 포함한다.

여기서 2중 가교라는 것은 히알루론산 분자의 히드록시기와 카르복실기의 양쪽을 가교제와 가교 반응시키는 것을 의미한다.

본 발명에서 2중 가교를 실시한 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 하기 공정 (1) 및 (2)를 거쳐 제조할 수 있다.

상기 (1) 공정은 상술된 가교 반응을 알칼리 조건하에서 실시하고, 히알루론산 분자중에 에테르 가교를 형성시키는 것을 나타낸다. 또한, 상기 (2) 공정은 상기 가교 반응을 산 조건하에서 실시하고, 상기 히알루론산 분자중에 추가로 에스테르 가교를 형성하는 것을 나타낸다.

따라서 (1) 및 (2) 공정에서 히알루론산 분말, 용매 및 가교 반응에 관한 구성 등은 상기 설명에 준할 수 있다.

가교제는 (1) 및 (2)의 양 공정을 통해 디비닐설폰, 1,4-부탄디올·디글리시딜에테르 및 에틸렌글리콜·디글리시딜에테르 등의 디글리시딜에테르를 사용하는 것이 바람직하다.

이하에 2중 가교를 실시한 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법을 예시하지만, 이들은 단순한 일례로서 본 발명을 제한하지 않는다.

(팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조예)

탄소수 1~4의 1가 알콜과 0.01~0.1N 수산화나트륨 수용액을 99.9:0.1~65:35의 질량비로 혼합하여 수득한 액 용매에 가교제를 혼합하고, 히알루론산 분말을 첨가·분산하여 적당한 조건하에서 가교 반응을 실시한다. 가교 반응 후, 원심 분리나 여과 등에 의해 히알루론산 분말을 회수하고, 상법에 의해 세정, 건조하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득한다.

그 후, 상기 팽윤성 가교 히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜과 0.01~0.1N 염산 수용액을 99.9:0.1~65:35의 질량비로 혼합하여 수득한 액 용매와 가교제의 혼합액에 첨가·분산하고, 적당한 조건하에서 다시 가교 반응을 실시한다. 가교 반응 후, 동일하게 여과에 의한 히알루론산 분말의 회수, 상기 분말의 세정 및 건조를 실시하여 2중 가교된 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득한다.

2중 가교를 실시함으로써 알칼리 또는 산성 중 어느 한쪽의 조건으로 가교시킨 경우에 비해 수팽윤 시의 가교 히알루론산 겔의 보형성이 높아지는 경향이 있다. 또한, 상기 겔의 점탄성은 알칼리 및 산성 완충액의 농도에 의해 조정하는 것이 가능하고, 통상 알칼리 농도가 높을수록 탄성적인 겔이 수득된다.

이와 같은 2중 가교의 팽윤성 가교 히알루론산 분말 및 상기 분말에 유래하는 겔은 이른바 피부의 탄력에 가까운 물성을 나타내므로 주름 펴짐 주입제 등의 조직 증대 물질의 사용에 특히 바람직하다.

또한, 산 조건하에서 가교 반응을 실시한 후에 알칼리 조건하에서 가교 반응을 실시하면 알칼리 조건으로의 폭로에 의해 먼저 형성한 에스테르 가교가 가수분해를 받고, 동시에 히드록시기의 에테르 가교의 형성이 억제되는 경향이 있다. 이와 같이 수득한 가교 히알루론산 분말 및 상기 분말에 유래하는 겔은 팽윤성 및 증점성이 낮아지므로 조직 증대 물질로서의 이용에는 부적합하지만, 한편 화장품의 보습제 등으로의 이용을 기대할 수 있다.

종래의 가교 히알루론산 겔의 제조 방법에서는 액상 매체로서 물을 이용하므로 히알루론산 수용액이 저농도라도 매우 높은 점도가 된다.

이에 대해 본 발명의 방법에서는 히알루론산 분말을 용해시키지 않고 분말 그대로 액상 매체중에 분산시키므로 액상의 증점이 발생하지 않는다. 이 때문에 분산액은 마그네틱 스터러나 교반 막대, 진동기 등에 의해 매우 용이하게 교반 혼합할 수 있다. 또한 반응중에서도 액상의 증점이 발생하지 않으므로 고농도의 히알루론산 분산액을 처리하는 것이 가능하다.

또한, 본 발명의 제조 방법에 의하면 종래 매우 시간이 걸렸던 히알루론산의 수중으로의 용해 공정이 불필요하다. 또한, 원심 분리나 여과 등에 의해 생성한 가교 히알루론산을 용이하게 분리할 수 있으므로 종래의 방법에 비해 가교제나 산·알칼리 등의 제거 공정도 대폭 간소화된다. 따라서 본 발명의 제조법 방법에 의하면 종래의 히알루론산 수용액을 이용한 방법과 비교하여 매우 용이하게 가교 히알루론산을 제조하는 것이 가능해지고, 제조 시간이나 비용을 대폭 저감할 수 있다.

또한, 상기 종래 제법의 경우, 가교 히알루론산은 물을 포함하는 겔의 상태로 수득되지만, 이를 공지된 방법에 의해 건조시켜 수득한 가교 히알루론산 분말은 이를 다시 수중에 첨가해도 팽윤하지 않고 이수(離水) 내지는 용해된다.

이에 대해 본 발명의 방법에 의해 수득한 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 수중에서 500% 이상의 매우 높은 팽윤율을 나타낸다. 즉, 본 발명에 의해 종래 실현 불가능했던 「팽윤성」가교 히알루론산 분말을 수득하는 것이 가능해진다.

실시예

이하, 구체적인 실시예를 예로 들어 본 발명에 대해 더 자세히 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 의해 한정되지 않는다.

본 발명자들은 최초로 히알루론산 분말을 1가 저급 알콜/물의 혼합 용매중에 분산된 상태로 가교제와 함께 혼합하고, 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다.

실시예 1, 2

0.1N 수산화나트륨 수용액 10부, 에탄올 87부, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르; 데나콜EX810P, 나가세 산교제) 3부를 혼합한 반응액중에 히알루론산 분말(바이오히아로 12, 분자량 120만, 시세이도사제)을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하여 실온(실시예 1) 또는 45℃(실시예 2)에서 16시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 히알루론산 분말을 여과 회수한 후, 에탄올을 이용하여 세정하여 건조시켰다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 실온 조건(실시예 1), 45℃ 가온 조건(실시예 2) 중 어느 하나에서도 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔이 되었다. 이 때의 가교 히알루론산 분말의 팽윤율(중량)은 모두 500% 이상이었다.

실온 조건하에서 조제한 실시예 1의 가교 히알루론산 분말에 대해 과잉의 정제수로 팽윤시킨 상태의 사진을 도 1의 (a)에, 건조 상태의 사진을 도 2의 (a)에 도시한다. 팽윤시킨 상태의 가교 히알루론산 겔의 크기는 약 2~7mm이었다.

실시예 3

가교제로서 에틸렌글리콜디글리시딜에테르 3부 대신에 디비닐설폰 3부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 1, 2와 동일하게 하여 실온 조건으로 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔이 되었다. 이 가교 히알루론산 겔의 크기는 약 1~5mm이었다. 또한 가교 히알루론산 분말의 팽윤율(중량)은 500% 이상이었다.

실시예 4

가교제로서 에틸렌글리콜디글리시딜에테르 3부 대신에 1,4-부탄디올·디글리시딜에테르 3부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 1, 2와 동일하게 하여 실온 조건으로 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔이 되었다. 이 가교 히알루론산 겔의 크기는 약 2~8mm이었다. 또한, 가교 히알루론산 분말의 팽윤율(중량)은 500% 이상이었다.

실시예 5, 6

0.1N 수산화나트륨 수용액 10부 대신에 정제수 10부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 1, 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 실온 조건(실시예 5), 45℃ 가온 조건(실시예 6) 중 어느 하나에서도 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔이 되었다. 이 때의 가교 히알루론산 분말의 팽윤율(중량)은 모두 500% 이상이었다.

실온 조건하에서 조제한 실시예 5의 가교 히알루론산 분말에 대해 과잉의 정제수로 팽윤시킨 상태의 사진을 도 1의 (b)에, 건조 상태의 사진을 도 2의 (b)에 도시한다. 팽윤시킨 상태의 가교 히알루론산 겔의 크기는 약 0.1~0.5mm이었다.

상기 실시예 1~6에서 이용한 원료, 반응 조건 및 그 결과를 정리한 것을 하기 표 1에 나타낸다.

상기 실시예 1~6에서 에탄올/물의 혼합 용매(에탄올:물=10.3:89.7)를 이용하여 이 혼합 용매중에 히알루론산 분말을 분산시킨 상태로 가교 반응을 실시함으로써 실온 조건, 45℃ 가온 조건, 각 가교제 중 어느 하나에서도 수중의 팽윤율이 500%인 팽윤성 가교 히알루론산 분말이 수득되는 것이 명확해졌다.

또한, 상기 실시예 1~6에서는 가교 반응 시에 히알루론산 분말이 액상 매체중에 용해되어 있지 않으므로 액상의 증점이 발생하지 않고, 교반 등의 조작이 매우 용이하며, 또한 여과에 의해 용이하게 생성물을 분리하는 것이 가능했다.

또한, 도 1, 2로부터 알칼리를 첨가한 실시예 1의 분말로부터는 보다 가교 반응이 진행하여 큰 입자의 겔이 수득되는 것을 알 수 있었다(도 1의 (a) 및 도 2의 (a)). 한편 알칼리를 첨가하지 않은 실시예 5의 분말에서도 세밀한 입자의 가교 히알루론산 겔이 수득되고, 이 한개 한개의 입자는 순수 팽윤되므로 입자 내부에서의 가교가 진행되는 것이 인정되었다(도 1의 (b) 및 도 2의 (b)). 또한, 이 가교 히알루론산 분말을 수중에서 한계 팽윤시킬 때의 히알루론산 농도는 0.1~20 중량%의 범위에 있고, 팽윤성 및 점탄성이 우수한 가교 히알루론산 겔이 수득되는 것이 명확해졌다.

실시예 7, 8

에탄올 87부 대신에 이소프로판올 87부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 1, 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 겔의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 실온 조건(실시예 7), 45℃ 가온 조건(실시예 8) 중 어느 하나에서도 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔을 수득했다. 이 때의 가교 히알루론산 분말의 팽윤율(중량)은 500% 이상이었다.

실시예 9, 10

에탄올 87부 대신에 이소프로판올 87부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 5, 6과 동일하게 하여 가교 히알루론산 겔의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 실온 조건(실시예 9), 45℃ 가온 조건(실시예 10) 중 어느 하나에서도 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔을 수득했다. 이 때의 가교 히알루론산 분말의 팽윤율(중량)은 500% 이상이었다.

비교예 1

에탄올 87부 대신에 에틸렌글리콜 87부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 겔의 조제를 시도했다. 그 결과 히알루론산 분말이 혼합 용매중에 용해되어 교반 혼합이 불가능해졌기 때문에 조작을 중지했다.

비교예 2

에탄올 87부 대신에 아세톤 87부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 겔의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 분산매가 노랗게 착색되고, 히알루론산이 변질되는 것이 시사되었기 때문에 조작을 중지했다. 또한, 가교 히알루론산 분말은 수중에서 이수(離水)하여 팽윤율(중량)은 500%를 만족하지 못했다.

상기 실시예 7~10 및 비교예 1, 2에서 이용한 원료, 반응 조건 및 그 결과를 정리한 것을 하기 표 2에 나타낸다.

상기 실시예 7~10으로부터 이소프로판올/물의 혼합 용매(이소프로판올:물=10.3:89.7)를 이용함으로써 에탄올/물 혼합 용매를 이용한 실시예 1~4와 마찬가지로 실온 조건, 45℃ 가온 조건 중 어느 하나에서도 수중의 팽윤율이 500%의 팽윤성 가교 히알루론산 분말이 수득되는 것이 명확해졌다.

한편, 상기 비교예 1로부터 다가 알콜인 에틸렌글리콜/물의 혼합 용매를 이용한 경우에는 히알루론산 분말이 용해되어 교반 혼합이 곤란해지므로 가교 히알루론산 겔의 제조를 용이하게 실시할 수 없었다. 또한, 상기 비교예 2로부터 아세톤/물의 혼합 용매를 이용한 경우에는 제조 시에 히알루론산 분말은 용해하지 않지만 분산매가 노랗게 착색되어 품질이 좋은 가교 히알루론산 분말을 수득할 수 없었다. 또한, 비교예 2의 분말은 수중에서 대부분 팽윤되지 않고, 팽윤율도 실시예 7~10에 미치지 못했다.

계속해서 본 발명자들은 1가 저급 알콜과 물의 혼합 비율에 대해 검토하기 위해 에탄올과 물의 질량비를 적절히 변화시켜 상기 실시예 2와 동일하게 하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다.

실시예 11

정제수 20부, 에탄올 77부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 분말에 대한 팽윤율이 500% 이상의 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔을 수득했다.

실시예 12

정제수 30부 및 에탄올 67부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다. 수득된 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수로 팽윤시킨 바, 분말에 대한 팽윤율이 500% 이상의 무색 투명색~백색의 가교 히알루론산 겔을 수득했다.

비교예 3

정제수 40부 및 에탄올 57부를 이용한 것 외에는 상기 실시예 2와 동일하게 하여 가교 히알루론산 분말의 조제를 시도했다. 그 결과, 히알루론산 분말이 혼합 용매중에 용해되고, 교반 혼합이 불가능해졌기 때문에 조작을 중지했다.

상기 실시예 11, 12 및 비교예 3에서 이용한 원료, 반응 조건 및 그 결과를 정리한 것을 하기 표 3에 나타낸다.

상기 표 3으로부터 에탄올/물의 질량비가 약 90:10~70:30의 혼합 용매를 이용한 경우, 용매의 히알루론산의 용해도가 0.1g/L이 되고, 팽윤성 가교 히알루론산을 분말 상태로 수득할 수 있는 것이 명확해졌다. 또한, 상기 각 분말을 수팽윤시킨 가교 히알루론산 겔의 입자의 크기는 물의 비율이 높아질수록 커지는 것을 알 수 있었다(실시예 2〈 실시예 11〈 실시예 12).

한편, 비교예 3에 나타내는 바와 같이 물의 비율이 40%를 초과하면 액상이 증점되고, 교반 혼합이 곤란해지므로 가교 히알루론산 분말을 제조할 수 없었다.

본 발명자들은 검토를 더 실시한 결과, 혼합 용매중의 1가 알콜과 물의 질량비(1가 알콜:물)가 65:35 정도까지 히알루론산 분말이 용해되지 않고, 용이하게 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조를 실시할 수 있는 것을 알 수 있었다.

본 발명자들은 다른 방법으로 수득한 분말상의 가교 히알루론산에 대해 팽윤성의 유무를 검토하기 위해 하기 비교예 4~6의 분말에 의한 가교 히알루론산 겔 생성을 상기 실시예 2와 비교했다. 결과를 하기 표 4에 나타낸다.

비교예 4

시판되는 가교 히알루론산 겔(레스티렌, 스웨덴 Q-Med사제)을 동결 건조시켜 분말 상태로 했다. 수득된 분말을 과잉의 정제수로 다시 팽윤시킨 바, 이수를 발생시켜 원래의 가교 히알루론산 겔이 되지 않았다.

비교예 5

시판되는 가교 히알루론산 겔(하이라폼, 미국 Genzyme사제)을 동결 건조시켜 분말 상태로 했다. 수득된 분말을 과잉의 정제수로 다시 팽윤시킨 바, 이수를 발생시켜 원래의 가교 히알루론산 겔이 되지 않았다.

비교예 6

실시예 2에 의해 수득한 가교 히알루론산 분말을 과잉의 정제수중에서 팽윤시켜 가교 히알루론산 겔로 했다. 상기 겔을 동결 건조시켜 분말 상태로 했다. 이 분말을 과잉의 정제수로 다시 팽윤시킨 바, 이수를 발생시켜 원래의 가교 히알루론산 겔이 되지 않았다.

상기 표 4에 나타내는 바와 같이 가교 히알루론산 겔을 건조시켜 분말로 해도 다시 팽윤시켜도 가교 히알루론산 겔을 수득할 수 없는 것이 명확하다. 따라서 팽윤율이 500% 이상인 「팽윤성」가교 히알루론산 「분말」을 수득하기 위해서는 본 발명에 따른 제조 방법이 바람직하다.

하기 실시예 및 비교예에 나타내는 가교 히알루론산 겔에 대해 동적 점탄성의 평가를 실시했다. 결과를 도 3에 도시한다(도 3의 (a):실시예 13, (b):비교예 7, (c):비교예 8).

(동적 점탄성의 측정)

TA Instruments사제의 스트레스 제어식 레오메타(AR1000-N)를 이용하여 angular frequency 0.1~100(1/sec)의 범위로 저장 탄성률 G’「Pa」 및 손실 탄성률 G”「Pa」를 측정했다.

실시예 13

0.1N 수산화나트륨 수용액 10부, 에탄올 87부에 히알루론산 분말(바이오히아로 12, 분자량 120만, 시세이도사제)을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하여 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하고, 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 히알루론산 분말을 여과 회수한 후, 에탄올에 의한 세정 및 건조를 실시하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득했다. 상기 분말을 농도 2 중량%로 하여 생리 식염수에 첨가하여 팽윤시키고, 수득된 가교 히알루론산 겔을 점탄성 측정에 사용했다.

비교예 7

시판되는 가교 히알루론산 겔(레스티렌, 스웨덴 Q-Med사제)을 점탄성 측정에 사용했다.

비교예 8

시판되는 히알루론산 제제(하이라폼, 미국 Genzyme사제)를 점탄성 측정에 사용했다.

도 3에 도시한 바와 같이, 본 발명에 따른 제조 방법에 의한 가교 히알루론산 겔(실시예 13)은 주름 펴짐 주입제로서 이용되는 시판되는 가교 히알루론산 겔(비교예 7, 8)의 거의 중간에 위치하는 우수한 점탄성을 나타냈다.

비교예 7, 8의 가교 히알루론산 겔은 히알루론산 수용액에서 가교 반응을 실시하여 수득된 것이며, 분말 상태를 거치지 않고 직접 겔이 생성되었다고 추측된다.

이상의 결과로부터 본 발명에 따른 제조 방법에 의해 수득되는 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 팽윤에 의해 조직 증대 물질로서 사용 가능한 우수한 점탄성을 가진 겔이 되는 것이 명확해졌다. 상기 분말은 각 주파수에 의존하지 않은 우수한 탄성을 나타내므로 특히 주름 펴짐 주입제로서 바람직하다고 생각된다.

계속해서 상기 실시예 13 및 하기 실시예 14에 나타내는 가교 히알루론산 겔에 대해 동적 점탄성을 측정하고, 그 특성을 비교했다. 결과를 도 4에 도시한다(도 4의 (a):실시예 13, (b):실시예 14). 또한, 동적 점탄성의 측정 방법은 상기에 준해 실시했다.

실시예 14

0.001N 수산화나트륨 수용액 10부, 에탄올 87부에 히알루론산 분말(바이오히아로 12, 분자량 120만, 시세이도사제)을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하고, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하여 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 히알루론산 분말을 여과 회수한 후, 에탄올에 의한 세정 및 건조를 실시하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득했다. 상기 분말을 농도 2중량%로 하여 생리 식염수에 첨가하여 팽윤시켜 수득된 가교 히알루론산 겔을 점탄성 측정에 사용했다.

도 4에 도시한 바와 같이 본 발명에 따른 팽윤성 가교 히알루론산 분말로부터 수득한 실시예 13 및 14의 가교 히알루론산 겔은 모두 우수한 점탄성을 나타냈다. 특히 제조계의 알칼리 농도를 높게 한 실시예 13에서는 실시예 14에 비해 겔의 저장 탄성률(G’)에 주파수 의존성이 적고, 또한 손실 탄성률(G”)이 낮았다.

이상과 같기 때문에 본 발명에 따른 제조 방법에서 액상 매체에 0.001~0.1N 알칼리 완충액을 함유시켜 수득한 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 점탄성이 우수한 가교 히알루론산 겔이 되는 것이 명확해졌다. 특히 가교 반응시의 알칼리 농도를 높일수록 변형에 대해 보다 탄성적인 성질을 가진 겔을 제조할 수 있다.

또한, 상기 실시예 14 및 하기 실시예 15~17에 나타내는 가교 히알루론산 겔에 대해 동적 점탄성을 측정하고, 그 특성을 비교했다. 결과를 도 5에 도시한다(도 5의 (a) 실시예 14, (b) 실시예 15, (c) 실시예 16, (d) 실시예 17). 또한, 동적 점탄성의 측정 방법은 상기에 준해 실시했다.

실시예 15

0.001N 염산 수용액 10부, 에탄올 87부에 히알루론산 분말(바이오히아로 12, 분자량 120만, 시세이도사제)을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하고, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하여 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 히알루론산 분말을 여과 회수한 후, 에탄올에 의한 세정 및 건조를 실시하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득했다. 상기 분말을 농도 2중량%로 하여 생리 식염수에 첨가하여 팽윤시키고, 수득된 가교 히알루론산 겔을 점탄성 측정에 사용했다.

실시예 16

0.001N 수산화나트륨 수용액 10부, 에탄올 87부에 히알루론산 분말(바이오히아로 12, 분자량 120만, 시세이도사제)을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하고, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하여 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 혼합액을 여과하여 여과물을 회수한 후, 에탄올에 의한 세정 및 건조를 실시하여 가교 히알루론산 분말을 수득했다.

그 후, 0.001N 염산 수용액 10부, 에탄올 87부에 상기 가교 히알루론산 분말을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하고, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하여 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 히알루론산 분말을 여과 회수한 후, 에탄올에 의해 세정 및 건조를 실시하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득했다. 상기 분말을 농도 2중량%로 하여 생리 식염수에 첨가하여 팽윤시키고, 수득된 가교 히알루론산 겔을 점탄성 측정에 사용했다.

실시예 17

0.001N 염산 수용액 10부, 에탄올 87부에 히알루론산 분말(바이오히아로 12, 분자량 120만, 시세이도사제)을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하고, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하여 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 혼합액을 여과하여 여과물을 회수한 후, 에탄올에 의한 세정 및 건조를 실시하여 가교 히알루론산 분말을 수득했다.

그 후, 0.001N 수산화나트륨 수용액 10부, 에탄올 87부에 상기 히알루론산 분말을 3.3W/V%가 되도록 첨가·분산하고, 가교제(에틸렌글리콜디글리시딜에테르;데나콜EX810P, 나가세 산교사제) 3부를 첨가 혼합하여 90℃에서 1시간 가교 반응을 실시했다. 반응 종료 후, 히알루론산 분말을 여과 회수한 후, 에탄올에 의한 세정 및 건조를 실시하여 팽윤성 가교 히알루론산 분말을 수득했다. 상기 분말을 농도 2중량%로 하여 생리 식염수에 첨가하여 팽윤시키고, 수득된 가교 히알루론산 겔을 점탄성 측정에 사용했다.

도 5에 도시한 바와 같이 알칼리 조건하에서 에테르 가교를 실시한 실시예 14 및 산 조건하에서 에스테르 가교를 실시한 실시예 15의 가교 히알루론산 분말을 수팽윤시킨 겔은 모두 각주파수에 의존하지 않는 우수한 점탄성을 나타냈다. 또한, 에테르 가교를 실시한 후에 에스테르 가교를 실시하여 수득한 실시예 16의 2중 가교 히알루론산 분말을 수팽윤시킨 겔도 마찬가지로 높은 점탄성을 나타냈지만, 실시예 14 및 15에 비해 손실 탄성률(G”)의 저하가 인정되었다.

한편, 에스테르 가교를 실시한 후에 에테르 가교를 실시한 실시예 17은 각 주파수에 의존하여 점탄성이 현저히 저하했다.

이상과 같기 때문에 본 발명에 따른 제조 방법에서 알칼리 조건하 또는 산 조건하에서 가교 반응을 실시하여 수득한 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 점탄성이 우수한 가교 히알루론산 겔이 되는 것이 명확하다. 또한, 알칼리 조건하에서 가교 반응을 실시한 후에 산 조건하에서 다시 가교 반응을 실시하여 수득한 팽윤성 가교 히알루론산 분말은 변형에 대해 보다 탄성적인 성질을 가진 겔로 할 수 있다.

또한, 예를 들면 가교 히알루론산 겔을 주름 펴짐제로서 사용하는 경우, 상기 점탄성 뿐만 아니라 생체 내의 효소 분해에 대한 내성의 점에서도 2중으로 가교한 쪽이 유리하다고 생각된다.

Claims

수중에서의 팽윤율이 500% 이상이며,
히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 액상 매체중에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하고 건조를 실시하여 수득하는 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말.
제 1 항에 있어서,
물을 이용하여 한계까지 팽윤시켰을 때의 히알루론산 농도가 0.1~20 중량%인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말.
히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 액상 매체중에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하고 건조를 실시하는 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
제 3 항에 있어서,
상기 액상 매체가 상기 1가 알콜과 물의 혼합 용매인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
상기 1가 알콜이 에탄올 또는 2-프로판올인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
제 4 항에 있어서,
상기 1가 알콜과 물의 혼합비가 질량비로 99.9:0.1~65:35인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
제 4 항에 있어서,
상기 물은 알칼리성 완충액 또는 산성 완충액인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
상기 가교제가 디비닐설폰, 1,4-부탄디올·디글리시딜에테르 및 에틸렌글리콜·디글리시딜에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
하기 공정 (1) 및 (2)를 포함하는 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법:
(1) 히알루론산 분말을, 탄소수 1~4의 1가 알콜과 알칼리성 완충액을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 액상 매체에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하고 건조를 실시하는 공정;
(2) 상기 (1) 공정의 생성물을, 탄소수 1~4의 1가 알콜과 산성 완충액을 함유하고 또한 상기 히알루론산 분말의 용해도가 0.1g/L 미만인 액상 매체에 분산된 상태로, 가교제와 함께 혼합하여 가교 반응을 실시하고 건조를 실시하는 공정.
제 9 항에 있어서,
상기 1가 알콜과 알칼리성 완충액 또는 산성 완충액의 혼합비가 질량비로 99.9:0.1~65:35인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
상기 가교제가 디비닐설폰, 1,4-부탄디올·디글리시딜에테르 및 에틸렌글리콜·디글리시딜에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상인 것을 특징으로 하는 팽윤성 가교 히알루론산 분말의 제조 방법.