KR100671501B1 - 식중독 검출용 프라이머 및 이를 이용한 세균성 식중독 검출방법 - Google Patents
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Abstract
Description
식중독 유 형 | 병원성 미생물 | 발병 균 수 | 발병 독소량 |
감염형 | 살모넬라 | - 105-107 cell/g : 사람발병 - 수십 cell/g : 신생아 감염 | |
비브리오 파라헤몰리티커스 | - 104-107 cell/g : 사람발병 | ||
캄필로박터 제주니 (Campylobacter jejuni) | - 102cell/g : 사람 (지원자) - 106cell/g : 사람 (실험실 감염) | ||
리스테리아 모노사이토게네스 | - 수개 cell | ||
대장균 O157:H7 | - 10~100cell | ||
독소형 | 스타필로코커스 아우레우스 | - 106-107cell/g : 식품중 | 원인식품중 1.0㎍/1인 |
기 타 | 클로스트리움 페르프린겐스 (Clostrium perfringens) | - 108-109 cell/g : 사람발병 | |
바실러스 세레우스(Bacillus cereus) | - 설사형 : 107 -108cell/g : 사람발병 - 구토형 : 106-107 cell/g : 식품중 |
검출 미생물 | 프라이머 | 염기서열 | 서열번호 |
Salmonella spp . | 1차 | 5'-GAATCCTCAGTTTTTCAACGTTTC-3' | 1 |
5'-TAGCCGTAACAACCAATACAAATG-3' | 2 | ||
2차 | 5'-TCGTCATTCCATTACCTACC-3' | 3 | |
5'-ATCGGCTTCAATCAAGATAA-3' | 4 | ||
Staphylococcus aureus | 1차 | 5'-AATTTAACAGCTAAAGAGTTTGGT-3' | 5 |
5'-TTCATTAAAGAAAAAGTGTACGAG-3' | 6 | ||
2차 | 5'-AATGCTTTCCGTCATTTTGC-3' | 7 | |
5'-AGCTTTTGCTGATCGTGATG-3' | 8 | ||
E. coli O157 : H7 | 1차 | 5'-GACAGCAGTTATACCACTCTGCAA-3' | 9 |
5'-GACGAAATTCTCTCTGTATCTGCC-3' | 10 | ||
2차 | 5'-GGTGTTCCTTTTGGCTGAAG-3' | 11 | |
5'-TGACGACTGATTTGCATTCC-3' | 12 | ||
2차 | 5'-TTCTGAGCAATCGGTCACTG-3' | 13 | |
5'-TATATCAGTGCCCGGTGTGA-3' | 14 | ||
Listeria monocytogenes | 1차 | 5'-CTGGCACAAAATTACTTACAACGA-3' | 15 |
5'-AACTACTGGAGCTGCTTGTTTTTC-3' | 16 | ||
2차 | 5'-TTGGTGCAACTGGAGTGCTT-3' | 17 | |
5'-AGCAGGTGCAGCTTGTTGAG-3' | 18 | ||
Vibrio parahaemolyticus | 1차 | 5'-CTCATTTGTACTGTTGAACGCCTA-3' | 19 |
5'-AATAGAAGGCAACCAGTTGTTGAT-3' | 20 | ||
2차 | 5'-CTTCTGACGCAATCGTTGAA-3' | 21 | |
5'-GACCTGCGAAAATACGCAAT-3' | 22 | ||
2차 | 5'-TGATTTGCGGGTGATTTACA-3' | 23 |
검출 대상 | 프라이머 | |
2종의 프라이머 쌍을 이용한 키트 | 살모넬라 속 균주 | SEQ ID NO:1, 2, 3 및 4 |
스타필로코커스 아우레우스 | SEQ ID NO:5, 6, 7 및 8 | |
대장균O157 | SEQ ID NO:9, 10, 11, 및 12 또는 SEQ ID NO:9, 10, 13 및 14 | |
리스테리아 모노사이토게네스 | SEQ ID NO:15, 16, 17 및 18 | |
비브리오 파라헤몰리티쿠스 | SEQ ID NO:19, 20, 21 및 22 또는 SEQ ID NO:19, 20, 23 및 24 | |
이상 5종의 병원성 미생물 | SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 및 22 또는 SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 및 22 또는 SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 23 및 24 또는 SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 23 및 24 | |
1종의 프라이머 쌍을 이용한 키트 | 살모넬라 속 균주 | SEQ ID NO:3 및 4 |
스타필로코커스 아우레우스 | SEQ ID NO:7 및 8 | |
대장균O157 | SEQ ID NO:11 및 12 또는 SEQ ID NO:13 및 14 | |
리스테리아 모노사이토게네스 | SEQ ID NO:17 및 18 | |
비브리오 파라헤몰리티쿠스 | SEQ ID NO:21 및 22 또는 SEQ ID NO:23 및 24 | |
이상 5종의 병원성 미생물 | SEQ ID NO:3, 4, 7, 8, 11, 12, 17, 18, 21 및 22 또는 SEQ ID NO:3, 4, 7, 8, 13, 14, 17, 18, 21 및 22 또는 SEQ ID NO:3, 4, 7, 8, 11, 12, 17, 18, 23 및 24 또는 SEQ ID NO:3, 4, 7, 8, 13, 14, 17, 18, 23 및 24 |
Claims (8)
- SEQ ID NO:3에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:4에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 살모넬라 속 균주(Salmonella spp) 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:7에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:8에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:11에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:12에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 대장균 O157(E. coli O157:H7) 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:13에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:14에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 대장균 O157 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:17에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:18에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes) 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:21에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:22에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 비브리오 파라헤몰리티커스 검출용 프라이머 쌍; 및SEQ ID NO:23에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:24에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 비브리오 파라헤몰리티커스(Vibrio parahaemolyticus) 검출용 프라이머 쌍;으로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택된 프라이머 쌍을 포함하는병원성 미생물 검출용 프라이머.
- 제 1항에 있어서, 상기 병원성 미생물 검출용 프라이머는제 1항의 프라이머를 이용하여 중합효소연쇄반응을 실시하기 전에 사용되거나 제 1항의 프라이머와 동시에 사용하여 중합효소연쇄반응을 실시하기 위한,SEQ ID NO:1에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:2에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 살모넬라 속 균주 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:5에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:6에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 스타필로코커스 아우레우스 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:9에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:10에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 대장균 O157 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:15에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:16에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 리스테리아 모노사이토게네스 검출용 프라이머 쌍;SEQ ID NO:19에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머 및 SEQ ID NO:20에 기재된 염기서열로 이루어지는 프라이머로 이루어진 비브리오 파라헤몰리티커스 검출용 프라이머 쌍;으로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택되는 프라이머 쌍을 더욱 포함하는 것인 병원성 미생물 검출용 프라이머.
- 제1항 또는 제2항에 따른 병원성 미생물 검출용 프라이머를 이용한 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)으로 병원성 미생물을 탐지하는 것을 포함하는 병원성 미생물 검출방법.
- 제3항에 있어서, 상기 중합효소연쇄반응은 열 블록 중합효소연쇄반응(Thermal Block PCR) 기기 또는 마이크로 중합효소연쇄반응(Micro PCR) 기기로 실시하는 것인 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 중합효소연쇄반응은 제2항의 프라이머로 실시한 후 제1항의 프라이머로 2차 실시되는 것인 방법.
- 제 3항에 있어서, 상기 중합효소연쇄반응은 제1항의 프라이머 및 제2항의 프라이머를 동시에 사용하여 실시되는 것인 방법.
- 제 3항에 있어서, 상기 검출방법은 2종 이상의 다른 병원성 미생물 검출용 프라이머 쌍을 이용한 다중 중합효소연쇄반응(Multiplex polymerase Chain Reaction)로 실시되며, 식중독의 원인이 되는 2종 이상의 병원성 미생물을 동시에 탐지하는 것을 포함하는 검출방법.
- 중합효소연쇄반응(PCR)을 이용하여 병원성 미생물을 검출하는 PCR 프라이머, 반응완충액 및 Taq DNA 중합효소을 포함하는 병원성 미생물의 검출키트에 있어서,상기 PCR 프라이머는 제 1항 또는 2항에 따른 프라이머 세트인 병원성 미생물 검출키트.
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