KR100455617B1 - 단자엽 식물의 초신속 형질전환 방법 - Google Patents

단자엽 식물의 초신속 형질전환 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR100455617B1
KR100455617B1 KR10-2001-7011805A KR20017011805A KR100455617B1 KR 100455617 B1 KR100455617 B1 KR 100455617B1 KR 20017011805 A KR20017011805 A KR 20017011805A KR 100455617 B1 KR100455617 B1 KR 100455617B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
plant
agrobacterium
transformation
plants
days
Prior art date
Application number
KR10-2001-7011805A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20010109314A (ko
Inventor
타나카히로시
카야노토시아키
우가키마사시
시오바라후미오
시부야나오토
오노데라하루코
오노카즈코
타기리아케미
니시자와야에코
Original Assignee
독립행정법인농업생물자원연구소
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 독립행정법인농업생물자원연구소 filed Critical 독립행정법인농업생물자원연구소
Publication of KR20010109314A publication Critical patent/KR20010109314A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100455617B1 publication Critical patent/KR100455617B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/06—Processes for producing mutations, e.g. treatment with chemicals or with radiation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A01H5/10—Seeds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
    • A01H6/4636—Oryza sp. [rice]

Abstract

단자엽 식물의 아그로박테리움 형질전환방법에 있어서, 원하는 재조합 유전자를 포함하는 아그로박테리움으로 본래의 종자를 감염하는 공정을 포함하는 방법을 제공하는 것이다.

Description

단자엽 식물의 초신속 형질전환 방법{Ultra-fast transformation technique for monocotyledons}
식물을 개량하기 위한 수단의 하나로서 '형질전환방법'이 개시되어 있고, 형질을 개선하기 위한 원하는 재조합된 유전자가 식물에 도입된다. 효율적인 신속한 형질전환방법은 유용한 식물 특히 주식으로서 중요한 식량인 곡물을 분자 육종(molecular breeding)하는데 있어서 매우 중요한 것이다.
곡물의 대부분(예를 들면, 쌀, 밀, 보리 및 옥수수)은 단자엽 식물에 속한다. 단자엽 식물을 형질전환 하기 위해서는 각종의 형질전환방법이 개발되어 있다. 형질전환방법은 직접적인 형질전환방법과 간접적인 형질전환방법으로 크게분류할 수 있다.
직접적인 형질전환방법의 예로서는 예를 들면 엘렉트로포레이션(electroporation)법 (Shimamoto K. 등, Nature, 338 :274-276, 1989 ; 및 Rhodes C.A. 등, Science, 240 :204-207, 1989 참조), 파티클건(particle gun)법 (Christou P. 등, Bio/Technology, 9 :957-962, 1991 참조) 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)법(Datta, S. K. 등, Bio/Technology, 8 :736-740, 1990 참조) 등을 들 수 있다. 엘렉트로포레이션법 및 파티클건법은 유전자를 비교적 양호하게 효율적으로 도입할 수 있는 방법으로, 단자엽 식물을 형질전환하기 위해 일반적으로 사용되고 있다.
간접적인 형질전환방법으로서는 아그로박테리움 매개성 형질전환방법(이하 아그로박테리움 형질전환방법이라 칭함)을 들 수 있다. 아그로박테리움은 식물병원세균의 일종이다. 아그로박테리움은 식물에 감염하고, 스스로 지니는 플라스미드(예를 들면, Ti 플라스미드 또는 Ri 플라스미드)상에 존재하는 T-DNA 영역을 식물에 도입하는 성질을 지닌다. 아그로박테리움 형질전환방법에는 식물에 유전자를 도입하는 수단으로서 이 T-DNA 영역의 식물에 도입을 이용한다. 간단하게는 식물은 원하는 재조합 유전자를 포함하는 아그로박테리움에 감염시킨다. 감염 후 원하는 재조합 유전자는 아그로박테리움으로부터 식물세포내에 도입되고 여기서 식물게놈에 도입된다.
아그로박테리움 형질전환방법은 쌍자엽 식물에 있어서는 충분히 확립되어 있고, 현재로서는 원하는 재조합 유전자를 발현하는 안정한 형질전환 식물이 다수 재배되고 있다.
대조적으로, 아그로박테리움 형질전환방법을 단자엽 식물에 적용하는 것은 종래에는 일반적으로 어려움을 지니고 있었다. 예를 들면, Portrykus 등(BIO/TECHNOLOGY, 535-542, 1990)은 아그로박테리움은 단자엽 식물에 감염되지 않는다고 보고하고 있다. 그러나, 한편으로는 아그로박테리움을 사용하여 단자엽 식물을 형질전환하는 시도가 여러번 행하여졌으며, 그 결과 아그로박테리움 형질전환법을 단자엽 식물에 적용할 수 있는 가능성이 보이게 되었다.
예를 들면, Raineri는 벼의 배반부분(blastodisk)을 취출하여 손상시킨 후 재분화(regeneration)를 유도하는 배지에 넣고, 수일 후에 배반부분을 아그로박테리움으로 감염시킨다. 그 결과 정상인 재분화 개체를 얻지는 못했지만, 외래 유전자가 도입된 캘루스를 유도하는 것에 성공하였다(Raineri D.M. 등 Bio/Technology, 8 :33-38, 1990 참조).
국제공개 WO94/00977호 팜플렛은 벼와 옥수수에 있어서의 아그로박테리움 형질전환방법을 개시하고 있다. 이 방법은 아그로박테리움으로 형질전환하려는 식물시료로서 재분화과정에 있거나 재분화시킨 배양조직(예를 들면, 캘루스)을 사용하는 것을 필요로 한다. 그러므로 아그로박테리움의 감염전에 형질전환시키려는 식물시료(예를 들면, 엽절편)로부터 재분화시킨 배양조직을 제조하기 위해서 통상 3 ~ 4주간의 재분화 유도기간을 필요로 한다.
국제공개 WO95/06722호 팜플렛은 벼 및 옥수수의 미숙배(immature germ)를 아그로박테리움으로 감염하는 방법을 개시하고 있다. 그러나 미숙배를 추출하기 위한 작업은 대단한 노력을 요한다.
따라서, 보다 신속하게 효율적으로 단자엽 식물의 아그로박테리움 형질전환방법이 개발되면 벼 등의 곡물을 포함하는 유용한 단자엽 식물의 분자육종에 큰 공헌을 할 수 있다.
발명의 개시
본 발명은 상기 과제의 해결을 의도하기 위한 것이다. 본 발명의 목적은 단자엽식물의 아그로박테리움 형질전환방법의 개량을 제공하는 것이다. 본 발명의 방법에 의하면 종래의 아그로박테리움 형질전환방법보다도 효율이 양호하고 보다 신속하게 형질전환식물을 생성하는 것이 가능하다.
본 발명은 단자엽 식물의 형질전환방법에 관해 원하는 재조합 유전자를 포함하는 아그로박테리움으로 본래의(intact) 종자를 감염하는 단계를 포함한다. 본 방법에 있어서 종자는 본래의 상태로 감염시켜야 형질전환하려는 식물시료를 재분화시키는 것과 같은 처리가 필요하지 않다.
아그로박테리움으로 감염에 제공되는 종자는 씨를 뿌린 후, 4~5일 정도 지난 종자이다. 또한, 감염 시점에는 종자가 발화된 상태인 것이다.
형질전환시킨 단자엽식물은 바람직하게는 벼과(Gramineae family)식물이고, 더욱 바람직하게는 쌀(Oryza sativa L.)이다.
본 발명은 단자엽 식물의 아그로박테리움(Agrobacterium) 매개 형질전환방법에 관한 것이다.
도 1은 아그로박테리움을 감염하기 직전의 벼종자의 상태를 나타낸 것으로 생물의 형태를 나타낸 사진이다.
도 2는 파종으로부터 약 50일 후에 본 발명의 방법에 따라 얻어진 벼의 재분화 개체를 나타낸 것으로 생물의 형태를 나타낸 사진이다.
도 3(a)은 파종 후 약 90일 후의 종래 방법에 의한 형질전환체와 파종 후 약 50일 후의 본 발명의 방법에 의한 형질전환체와를 비교한 것으로 생물의 상태를 나타낸 사진이다.
도 3(b)는 파종 후 약 50일 후의 종래의 방법에 의한 형질전환체와 파종 후 약 50일 후의 본 발명의 방법에 의한 형질전환체와를 비교한 것으로 생물의 상태를 나타낸 사진이다.
이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명의 방법이 적용되는 '식물'은 단자엽식물이다. 바람직한 단자엽식물로서는 벼과식물(예를 들면, 쌀 및 옥수수)이 열거된다. 본 발명의 방법이 적용되는 가장 바람직한 식물은 벼이고, 특히 자포니카 벼(Japonica rice)이다. 한편 '식물'은 특별히 다른 것을 나타내지 않는다면 식물체 및 식물체로부터 얻어진 종자를 의미한다.
(식물발현용 벡터의 제작)
단자엽식물에 원하는 재조합 유전자를 도입하기 위해서는, 원하는 재조합 유전자를 포함하는 적절한 식물발현용 벡터가 구축되어야 한다. 이와같은 식물발현용 벡터는 통상의 지식을 가진 자가 주지의 유전자 조합기술을 이용하여 제조하여얻는다. 아그로박테리움 형질전환방법에 있어서 사용하기 위한 식물형질발현용 벡터의 구축은 예를 들면, pBI계 벡터와 바람직하게 사용되지만 이것으로 한정하는 것은 아니다.
'원하는 재조합 유전자'는 식물에 도입되기를 원하는 임의의 폴리뉴클레오타이드를 뜻한다. 본 발명에 있어서 원하는 재조합 유전자는 천연 또는 분리된 것으로 한정하지 않고, 합성 폴리뉴클레오타이드도 포함하는 것이다. 합성 폴리뉴클레오타이드는 예를 들면, 공지 서열의 유전자를 통상의 지식을 가진 자가 주지의 방법에 의해 합성 또는 변형한 것을 포함할 수 있다. 본 발명에 있어서 원하는 재조합 유전자로서는 예를 들면, 형질전환된 식물에 있어서 발현이 요망되는 것으로, 이 식물에 대해 내인성 또는 외인성인 임의의 폴리뉴클레오타이드 및 식물에 있어서 내인성 유전자의 발현 제어가 요망되는 경우에는 그 표적 유전자의 안티센스 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 들 수 있다.
식물에 있어서 발현을 의도하는 경우, 원하는 재조합 유전자는 자기 프로모터(즉, 천연에 있어서 해당 유전자가 작동가능하게 연결되어 있는 프로모터)가 작동가능케 한 형태를 포함한다. 또한, 자기 프로모터를 포함하지 않는 경우에 있어서 자기 프로모터 이외의 프로모터를 더욱 포함하는 것이 요청되는 경우, 임의의 적절한 프로모터와 작동 가능케 연결시킨다. 사용할 수 있는 프로모터로서는 구조적 프로모터 및 식물체 일부에 있어서 선택적으로 발현하는 프로모터와 유도성프로모터를 들 수 있다.
식물발현용 벡터에 있어서, 더욱이 각종의 조절 엘레멘트가 숙주식물에 세포중에서 작동할 수 있는 상태로 연결시킨다. 조절 엘레멘트는 바람직하게는 선별마아커 유전자, 식물 프로모터, 터미네이터 및 인핸서를 포함한다. 사용하는 식물발현용 벡터의 형태 및 조절 엘레멘트의 종류는 형질전환 목적에 부응하여 변환시켜 얻을 수 있으며 이는 통상의 지식을 가진자 간에 주지의 사실이다.
'선별 마아커 유전자'는 형질전환 식물의 선별을 용이하게 하기 위해서 사용할 수 있다. 하이그로마이신 내성을 부여하기 위해서 하이그로마이신 포스포트랜스퍼라제 (HPT) 유전자, 및 가나마이신 내성을 부여하기 위해서 네오마이신 포스포트랜스퍼라제Ⅱ (NPTⅡ) 유전자와 같은 약제 내성 유전자를 적절하게 사용할 수 있으나, 이것들로 한정하는 것은 아니다.
'식물 프로모터'는 선별 마아커 유전자에 작동가능하게 연결되며, 식물에서 발현하는 프로모터를 의미한다. 이와 같은 프로모터의 예로서는 칼리플라워 모자익 바이러스(CaMV) 35S 프로모터 및 노팔라인 신세테이즈 프로모터를 들 수 있으나 이들로 한정하는 것은 아니다.
'터미네이터'는 유전자의 단백질을 코드화시키는 영역의 다운스트림에 위치하고 DNA가 mRNA 전사되는 경우의 전사의 종결 및 폴리 A 서열의 부가에 관여하여 배열한다. 터미네이터의 예로서는 CaMV35S 터미네이터와 노팔라인 신세테이즈 터미네이터(Tnos)를 들 수 있으나 이들로 한정하는 것은 아니다.
'인핸서'는 목적유전자의 발현 효율을 높이기 위해 사용하는 것이다. 인핸서로서는 CaMV35S 프로모터 내의 업스트림 영역에 인핸서를 포함하는 것이 바람직하다. 인핸서는 한 개의 식물발현용 벡터에 있어서 다수의 인핸서를 사용할 수 있다.
(식물의 형질전환)
단자엽식물의 형질전환에 사용되는 아그로박테리움은 임의의 아그로박테리움 속 균주에서 얻어질 수 있으며, 바람직하기로는 아그로박테리움 튜미파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)이다. 아그로박테리움은 원하는 재조합 유전자를 포함하는 식물발현용 벡터(예를 들면, 일렉트로포레이션에 의한)로 형질전환된다. 형질전환된 아그로박테리움 종자를 감염하는 것에 의해, 원하는 재조합 유전자를 식물에 도입하여 얻는다. 도입된 재조합 유전자는 식물중의 게놈에 인티그레이션(integration)되어 존재한다. 또한, 식물중의 게놈은 핵 염색체 뿐만 아니라 식물세포 중의 각종 오르가넬르(organelle)(예를 들면, 미토콘드리아, 엽록체 등)을 포함하는 게놈을 의미한다.
형질전환을 시키려고 하는 식물의 종자는 껍질을 제거시킨 후, 본래의 상태에서 전배양시킨다. 종자에 대해서 '본래의'라는 것은 종자에서 배주를 제거시킨 것 및 배반을 손상시키는 것과 같은 어떠한 인위적인 조작도 하지 않은 상태를 의미한다.
전배양에 있어서, 종자는 적절한 농도의 옥신(예를 들면, 2,4-D)을 함유한 배지(예를 들면, N6D 배지)에 파종시킨다. 대체적으로는 4 ~ 5일간 바람직하게는 5일간 인큐베이션시킨다. 전배양은 종자의 조직이 재분화 과정에 들어가기 전에 완료시킨다. 이 때의 온도는 대체적으로 25 ~ 35℃ 바람직하게는 27 ~ 32℃이다. 전배양의 완료후 종자를 살균하고 이어서 물에 충분히 세척한다. 그리고 종자는 무균조작하에서 형질전환시킨 아그로박테리움에 감염시켜진다.
아그로박테리움 감염(공존배양)의 기간중에 종자는 암 조건 하에서 대체적으로 2 ~ 5일간, 바람직하게는 3일간 인큐베이션시킨다. 이 때 온도는 대체적으로 26 ~ 28℃이고 바람직하기로는 28℃이다. 그리고 종자는 배지중의 아그로박테리움을 제거하기 위해 적절한 살균제(예를 들면, 카르베니실린)에 의해 처리된다. 형질전환시킨 종자가 선별마아커(예를 들면, 하이그로마이신 내성 등의 약제내성)를 기준으로서 선별한다.
적절한 살균조건 및 선별조건 하에서 배양 후 선별된 형질전환 종자는 적절한 식물조절물질을 포함하는 재분화 배지(예를 들면, MS 배지)에 이전시키고, 적절한 기간 인큐베이션 행한다. 식물체를 재생하기 위해서는 재분화시킨 형질전환체는 발근배지(rooting medium)(예를 들면, 식물조절물질을 포함하지 않는 MS 배지)에 이전시킨다. 뿌리의 발육을 확인한 후, 형질전환체는 포트(pot)된다.
식물에 도입시킨 원하는 재조합 유전자는 식물에 있어서 원하는 목적(예를 들면, 목적하는 신규한 형질의 발현, 또는, 이 내인성 유전자의 발현억제)으로 작용시킨다.
원하는 재조합 유전자가 식물에 도입되었는지 여부는 통상의 지식을 가진 자의 주지의 수법을 이용하여 확인할 수 있다. 이 확인은 예를 들면, 노던 블랏 어낼리시스를 사용하여 행한다. 구체적으로는 재생된 식물의 잎으로부터 전체 RNA를 추출하고 변성 아가로즈로 전기영동 후, 적절한 멤브레인에 블랏시킨다. 이 블랏에 도입 유전자의 일부분과 상보적인 표식인 RNA 프로브를 하이브리다이제이션 하는 것에 의해 목적 유전자 mRNA를 검출한다. 한편, 원하는 재조합 유전자의 도입에 따라 식물에 있어서 내인성 유전자의 발현억제가 소망되는 경우, 표적이 되는 내인성 유전자의 발현을 예를 들면, 상기 노던 블랏 어낼리시스를 사용하여 시험한다. 표적이 되는 내인성 유전자의 발현이 비형질전환 콘트롤 식물의 그 발현에 비해 의미를 지닌 억제가 되는 경우, 원하는 재조합 유전자는 식물에 도입되어 그 발현억제 작용을 한 것이 확인되는 것이다.
종래의 방법은 아그로박테리움의 감염전에 통상 3 ~ 4 주간의 재분화 유도기간을 필요로 한다. 대조적으로 본 발명의 방법은 재분화를 유도하는 공정을 필요로 하지 않고, 형질전환 단자엽식물을 작출하기 위해 필요한 날짜를 단축하는 것이 가능하다. 더욱이 본 발명의 방법에 의하면 종래 방법에 비해 선별을 요하는 기간을 단축하는 것이 가능하고, 배양변이의 영향을 감소하는 것도 가능하다.
본 발명의 방법의 바람직한 하나의 실시태양에 있어서, 형질전환 단자엽식물체를 작출하기에 필요로 하는 날짜는 약 50일이며, 종래의 아그로박테리움 형질전환방법(예를 들면, 하기 실시예 2 참조)에 의하여 필요로 하는 날짜(약 90일)의 약 3분의 2 이하이다. 한편, 본 발명의 방법에 의하면 니폰베어 종자의 경우에는 10 ~ 15%의 형질전환효율이 얻어진다. 돈도코이 또는 키다아케 등의 다른 벼 품종에도 비슷한 정도의 높은 형질전환 효율이 달성 가능하다. 따라서, 본 발명의 방법을 사용하는 것은 종래의 형질전환법보다도 효율이 양호하고, 또한 신속하며 형질전환식물을 작출하는 것이 가능하다.
이하 실시예를 통해 본 발명을 구체적으로 설명한다. 이 실시예는 본 발명을 한정하는 것은 아니다. 실시예로 사용된 재료, 시약 등은 특히 특정하지 아니한 한 상업적인 공급원으로부터 입수 가능한 것이다.
(실시예 1) : 본 발명의 방법에 따른 벼 식물의 형질전환
벼의 대표적인 품종으로서 니폰베어 종자를 껍질을 제거시킨 후 본래의 상태에서 2.5% 소디움 하이포클로라이트(NaClO) 용액 중에서 살균시킨다. 물로 충분히 세척시킨 후 벼를 이하 무균조작시킨다.
1.1 전배양
종자를 2,4-D를 포함한 N6D 배지(30g/L의 슈크로즈, 0.3g/L의 카사미노산, 2.8g/L의 프롤린, 2mg/L의 2,4-D, 4g/L의 겔라이트, pH 5.8)에 파종시키고 5일간 27 ~ 32℃로 인큐베이션시킨다. 이 기간에 종자는 발아된다(도 1).
1.2 식물발현용 벡터
아그로박테리움을 형질전환시키기 위한 식물발현용 벡터로서는 리시너스(Ricinus) 카탈라제 유전자의 첫 번째 인트론을 포함하는 GUS 유전자와 하이그로마이신 내성 유전자를 연결시킨 플라스미드인 pIG121Hm을 사용한다(나카무라등 Plant Biotechnology Ⅱ, 특별본 겐다이가가쿠, pp 123 ~ 132(1991)). 아그로박테리움 EHA101을 형질전환시킨다(Hood등, J, Bacteriol., 168:1291~1301(1986)). EHA101은 헬퍼 플라스미드의 vir 영역이 강병원성 아그로박테리움 A281 유래의 균주이다.
1.3 아그로박테리움 감염
형질전환시킨 아그로박테리움 현탁액에 전배양시킨 상기 종자를 침적시킨 후, 2N6-AS 배지 (30g/L의 슈크로즈, 10g/L의 글루코즈, 0.3g/L의 카사미노산, 2mg/L의 2,4-D, 10mg/L의 아세토시린곤, 4g/L의 겔라이트, pH 5.2)에 이식시킨다. 암 조건하에서 3일간 28℃로 인큐베이션하여 공존배양시킨다.
1.4 살균 및 선별
공존배양 완료 후, 500mg/L 카르베니실린을 함유하는 N6D 배지를 사용하여 종자로부터 아그로박테리움을 세척시킨다. 그리고, 형질전환된 종자의 선별을 다음 조건하에서 행한다.
제1회 선별: 카르베니실린(500mg/L) 및 하이그로마이신(25mg/L)을 보충시킨 2mg/L의 2,4-D를 포함하는 N6D 배지상에 종자를 놓고 7일간 27 ~ 32℃에서 인큐베이션시킨다.
제2회 선별: 카르베니실린(500mg/L) 및 하이그로마이신(25mg/L)을 보충시킨 2~4mg/L의 2,4-D를 포함하는 N6D 배지상에 종자를 놓고 7일간 27 ~ 32℃에서 인큐베이션시킨다.
1.5 재분화
선별된 형질전환 종자를 이하 조건하에서 재분화시킨다.
제1회 재분화: 재분화 배지(카르베니실린 500mg/L) 및 하이그로마이신(25mg/L)을 보충한 MS 배지(30g/L 슈크로즈, 30g/L 솔비톨, 2mg/L 카사미노산, 0.002mg/L NAA, 4g/L 겔라이트, pH 5.8)상에 선별된 종자를 배치시키고, 2주간 27 ~ 32℃에서 인큐베이션시킨다.
제2회 재분화: 제1회 재분화에 있어서 사용된 것과 동일한 재분화 배지를 사용하고 더욱 2주간 27 ~ 32℃에서 인큐베이션시킨다.
1.6 포팅(potting)
재분화된 형질전환체를 발근배지(하이그로마이신 25mg/L을 보충시킨 호르몬을 함유하지 않은 MS 배지)에 이식시키고 뿌리의 발육을 확인한 후 형질전환체를 포트한다(도 2).
(실시예 2) 종래의 방법에 의한 벼식물의 형질전환
실시예 1에 기재된 방법과 비교하기 위하여 니폰베어를 형질전환재료로서 사용하고 종래의 방법에 의해 벼식물 형질전환을 다음과 같이 행한다.
2.1 캘루스 유도
니폰베어 종자를 껍질을 제거한 후, 살균시키고 여기에 캘루스 유도배지(2mg/L 2,4-D를 포함하는 N6D 배지)에 파종하고 그것을 밝은 곳에서 30℃로 인큐베이션시킨다. 캘루스 유도개시로부터 약 4주한 후에 배반유래의 증식된 캘루스를 형질전환에 사용한다.
2.2 형질전환
실시예 1에 기재된 것처럼 식물발현용 벡터 pIG21Hm에 형질전환시킨 아그로박테리움 EHA 101로 취득된 캘루스를 감염시키고 2N6-AS배지상에서 암흑조건하에 3일간 28℃로 인큐베이션 공존배양시킨다.
2.3 살균 및 선별
500mg/L 카르베니실린을 함유한 N6D배지를 사용하여 캘루스로부터 아그로박테리움을 세척시킨다. 그 후, 형질전환 아그로박테리움 선별을 다음 조건하에서 행한다.
제1회 선별: 카르베니실린(500mg/L) 및 하이그로마이신(50mg/L)을 보충시킨 2mg/L의 2,4-D를 포함하는 N6D 배지상에 캘루스를 위치시키고 2주간 27 ~ 32℃에서 인큐베이션시킨다.
제2회 선별: 카르베니실린(500mg/L) 및 하이그로마이신(50mg/L)을 보충시킨 2~4mg/L의 2,4-D를 포함하는 N6D 배지상에 캘루스를 위치시키고 더욱이 2주간 27 ~ 32℃에서 인큐베이션시킨다.
2.4 재분화 발근 및 포팅
선별된 형질전환 종자를 실시예1과 동일한 조건하에서 재분화시키고 포트될 때까지 행한다.
2.5 결과
종래의 방법에 의한 형질전환 예와 본 발명의 방법에 의한 형질전환 예와의 비교를 도 3에 나타낸다. 파종 후 형질전환체의 포트까지 필요한 일수는 종래에 있어서는 약 90일 정도인데 반해, 본 발명의 방법에 있어서는 약 50일 정도이다(도 3a). 파종 후 50일간 시점에서 비교하고 본 발명의 방법에 있어서 형질전환체의 포트가 가능한 상태인데 대해 종래의 방법에 있어서는 형질전환체는 재분화과정 정도이다(도3b). 따라서, 본 발명의 방법의 실시예에 의해 형질전환에 필요되는 기간이 종래방법의 약 3분의 2 이하로 단축된 것이다.
본 발명에 의하면, 개량된 아그로박테리움 매개성의 단자엽 식물의 형질전환방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 방법에 있어서는 형질전환을 유도하는 식물의 본래의 종자가 원하는 재조합 유전자를 포함하는 아그로박테리움에 감염된다. 본 발명의 사용에 의해 높은 효율과 신속한 속도로 형질전환식물을 작출하는 것이 가능하다.

Claims (5)

  1. 원하는 재조합 유전자를 포함하는 아그로박테리움으로 본래의 종자를 감염시키는 공정을 포함하는 단자엽 식물의 형질전환 방법에 있어서, 상기 종자는 파종 후 4 내지 5일간 2,4-D (2,4-dichlorophenoxy acetic acid)를 포함하는 배지에서 전배양시켜 발아시킨 발아종자임을 특징으로 하는 단자엽 식물의 형질전환 방법
  2. 제 1항에 있어서, 상기 종자는 파종 후 5일간 전배양시켜 발아시킨 발아종자임을 특징으로 하는 방법
  3. 삭제
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 단자엽 식물이 벼과식물(family Gramineae)인 방법
  5. 제 4항에 있어서, 상기 벼과식물이 벼(rice)임을 특징으로 하는 방법
KR10-2001-7011805A 1999-07-22 1999-07-22 단자엽 식물의 초신속 형질전환 방법 KR100455617B1 (ko)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/JP1999/003920 WO2001006844A1 (fr) 1999-07-22 1999-07-22 Procede de transformation ultrarapide de monocotyledon

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20010109314A KR20010109314A (ko) 2001-12-08
KR100455617B1 true KR100455617B1 (ko) 2004-11-06

Family

ID=14236281

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR10-2001-7011805A KR100455617B1 (ko) 1999-07-22 1999-07-22 단자엽 식물의 초신속 형질전환 방법

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP1198985B1 (ko)
KR (1) KR100455617B1 (ko)
CN (1) CN1279172C (ko)
AT (1) ATE480140T1 (ko)
AU (1) AU775233B2 (ko)
CA (1) CA2366104C (ko)
DE (1) DE69942750D1 (ko)
HK (1) HK1045237B (ko)
WO (1) WO2001006844A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013066007A1 (ko) * 2011-11-04 2013-05-10 충북대학교 산학협력단 발아초기 종자 이용 단기 형질전환 벼 식물체의 제조 방법 및 그에 따른 식물체

Families Citing this family (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100402513B1 (ko) * 2001-02-16 2003-10-22 주식회사 싸이젠하베스트 유전자 조작을 통한 식물체의 효과적인 형질전환 방법
US7598430B2 (en) 2002-03-20 2009-10-06 J.R. Simplot Company Refined plant transformation
KR20040042619A (ko) * 2002-11-15 2004-05-20 최용의 아그로박테리움 튜머파시언스를 이용한 오갈피 형질전환 방법
EP2199397A3 (en) 2002-12-24 2010-07-07 CropDesign N.V. Plants having modified growth characteristics and a method for making the same
EP1613146B1 (en) 2003-04-14 2013-06-19 CropDesign N.V. Plants having modified growth characteristics and method for making the same
CA2536650C (en) 2003-09-05 2016-08-16 Cropdesign N.V. Transformed plants with improved growth characteristics due to increased expression of b-type cdk and methods for making same
EP2316953A3 (en) 2003-10-20 2011-10-05 CropDesign N.V. Identification of novel E2F target genes and use thereof
RU2006125376A (ru) 2003-12-17 2008-01-27 КРОПДИЗАЙН Н.Фи. (BE) Растения с модифицированными характеристиками роста и способ их получения
EP1723242B1 (en) 2004-03-01 2014-05-07 CropDesign N.V. Plants having increased yield and method for making the same
EP1580275B1 (en) 2004-03-22 2009-09-02 CropDesign N.V. Plants having increased seed yield and method for making the same
EP1728418A4 (en) * 2004-03-25 2008-06-25 Nat Inst Of Agrobio Sciences PROCESS FOR THE TRANSFORMATION OF MONOCOTYLEDONE SEEDS
CA2561450A1 (en) 2004-04-02 2005-10-13 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and method for making the same
US7825293B2 (en) 2004-05-28 2010-11-02 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
BRPI0513329A (pt) 2004-07-12 2008-05-13 Cropdesign Nv método para melhorar as caracterìsticas de crescimento de plantas, plantas, construção, método para a produção de uma planta transgênica, planta transgênica, partes coletáveis de uma planta, produtos, e, uso de um gene/ácido nucléico semelhante a yippee ou variante do mesmo ou uso de um polipeptìdeo semelhante a yippee ou homólogo do mesmo
US8455719B2 (en) 2004-08-16 2013-06-04 Cropdesign N.V. Method for increasing seed yield or biomass by expressing RNA binding proteins in transgenic plants
CA2579804C (en) 2004-09-16 2013-12-10 Cropdesign N.V. Root evaluation
US20080108502A1 (en) 2004-10-29 2008-05-08 Cropdesign N.V. Plants Having Improved Growth Characteristics And Method For Making The Same
AR051866A1 (es) 2004-12-24 2007-02-14 Cropdesign Nv Plantas con aumento del rendimiento y metodo de prepracion
CA2595672A1 (en) 2005-01-27 2006-08-03 Cropdesign N.V. Plants having increased yield and a method for making the same
US8029482B2 (en) 2005-03-04 2011-10-04 C. R. Bard, Inc. Systems and methods for radiographically identifying an access port
AU2006264937B2 (en) 2005-07-06 2011-01-27 Cropdesign N.V. Plant yield improvement by Ste20-like gene expression
EP1931788A2 (en) 2005-09-15 2008-06-18 CropDesign N.V. Plants having increased yield and method for making the same
US8853492B2 (en) 2005-11-07 2014-10-07 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
RU2008122542A (ru) 2005-11-07 2009-12-20 КРОПДИЗАЙН Н.Фи. (BE) Растения, характеризующиеся улучшенными ростовыми характеристиками, и способ их получения
AU2006311005B2 (en) 2005-11-08 2013-06-06 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
WO2007064724A2 (en) 2005-12-01 2007-06-07 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and methods for making the same
EP2436771B1 (en) 2006-03-31 2015-08-19 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN103103198A (zh) 2006-05-30 2013-05-15 克罗普迪塞恩股份有限公司 具有增强的产量相关性状的伸展蛋白受体样激酶受调节表达的植物和用于产生该植物的方法
BRPI0712304A2 (pt) 2006-06-08 2012-01-17 Basf Plant Science Gmbh método e processo para melhorar caracterìsticas de crescimento de planta em relação ás plantas de controle correspondentes, planta, parte de planta ou célula de planta, molécula de ácido nucleico isolada, construto de gene, vetor, planta transgênica, e, uso de uma molécula de ácido nucleico ou do construto de gene ou do vetor
CN105087634A (zh) 2006-06-15 2015-11-25 克罗普迪塞恩股份有限公司 具有增强的产量相关性状的nac转录因子受调节表达的植物和用于产生该植物的方法
MX2008016047A (es) 2006-06-15 2009-05-22 Cropdesign Nv Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el crecimiento y un metodo para obtener las mismas.
MX2009001177A (es) 2006-08-02 2009-02-13 Cropdesign Nv Plantas con caracteristicas mejoradas y un metodo para producirlas.
CN104099368A (zh) 2006-08-02 2014-10-15 克罗普迪塞恩股份有限公司 具有改良特征的植物及其制备方法
WO2008059048A1 (en) 2006-11-16 2008-05-22 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same using consensus sequences from the yabby protein family
EP2599871A3 (en) 2006-11-24 2013-09-04 CropDesign N.V. Transgenic plants comprising as transgene A class I TCP or clavata 1 (CLV1) or CAH3 polypeptide having increased seed yield and a method for making the same
EP2468873A1 (en) 2006-12-15 2012-06-27 CropDesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2405011A3 (en) 2006-12-21 2012-07-25 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2548963A1 (en) 2007-01-30 2013-01-23 CropDesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
ES2485384T3 (es) 2007-01-31 2014-08-13 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos potenciados relacionados con el rendimiento y/o mayor resistencia al estrés abiótico y un procedimiento para fabricar las mismas
DE112008000521T5 (de) 2007-02-28 2010-03-04 Cropdesign N.V. Pflanzen mit verbesserten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu ihrer Herstellung
ES2542311T3 (es) 2007-05-03 2015-08-04 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos potenciados relacionados con el rendimiento y un procedimiento de producción de las mismas
BRPI0811185A2 (pt) 2007-05-23 2014-10-07 Cropdesign Nv Método para intensificação de características relacionadas a rendimento em plantas com relação às plantas de controle, planta, parte de planta ou célula de planta, construto, uso de um construto, método para a produção de uma planta transgênica tendo características relacionadas a rendimento intensificadas com relação às plantas de controle, planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos derivados de uma planta, e, uso de uma seqüência de ácido nucleico
CN102027120A (zh) 2007-06-29 2011-04-20 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
EP2987861A1 (en) 2007-07-20 2016-02-24 BASF Plant Science GmbH Plants having increased yield-related traits and a method for making the same
BRPI0813884A2 (pt) 2007-07-31 2014-10-07 Basf Plant Science Gmbh Método para intensificar características relacionadas com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, construção, uso de uma construção, planta, parte de planta ou célula de planta, método para a produção de uma planta transgênica, planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos, e, uso de um ácido nucleico.
AR067748A1 (es) 2007-07-31 2009-10-21 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el rendimiento y un metodo para obtenerlas
DE112008002458T5 (de) 2007-09-14 2011-06-01 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhten ertragsbezogenen Eigenschaften und Verfahren zur Herstellung derselben
MX2010002463A (es) 2007-09-21 2010-03-29 Basf Plant Science Gmbh Plantas con rasgos relacionados con un rendimiento aumentado y un metodo para producirlas.
MX2010004305A (es) 2007-10-29 2010-04-30 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos relacionados con el rendimiento aumentado y un metodo para producirlas.
US8704043B2 (en) 2007-11-22 2014-04-22 Cropdesign N.V. Plants having increased yield-related traits and a method for making the same
DE112008003225T5 (de) 2007-11-26 2012-06-06 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit gesteigerten ertragsbezogenen Eigenschaften und Verfahren zur Herstellung derselben
CN101969759A (zh) 2007-12-20 2011-02-09 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
EP2599874A3 (en) 2008-01-25 2013-11-13 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2713065A1 (en) 2008-01-31 2009-08-06 National Institute For Biological Sciences Plants having altered growth and/or development and a method for making the same
AU2009237642A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2274431A1 (en) 2008-05-05 2011-01-19 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2297327A1 (en) 2008-06-20 2011-03-23 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2727310A1 (en) 2008-06-26 2009-12-30 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2297192A1 (en) 2008-07-04 2011-03-23 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same by overexpressing a polynucleotide encoding a tfl1-like protein
EP2313508B1 (en) 2008-07-17 2016-04-06 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
AU2009275889A1 (en) 2008-07-31 2010-02-04 Basf Plant Science Gmbh Plants having modified growth characteristics and a method for making the same
EP2441773A1 (en) 2008-08-20 2012-04-18 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2337441B1 (en) 2008-09-16 2016-08-10 BASF Plant Science GmbH Method for improved plant breeding
US9062322B2 (en) 2008-09-24 2015-06-23 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
MX2011004785A (es) 2008-11-12 2011-06-16 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen mejor tolerancia al estres abiotico y/o mejores rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
JP5458348B2 (ja) * 2008-12-02 2014-04-02 国立大学法人九州大学 コエンザイムｑ１０強化糖質突然変異植物体およびその製造方法
WO2010063637A1 (en) 2008-12-03 2010-06-10 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced abiotic stress tolerance and/or enhanced yield-related traits and a method for making the same
DE112009003749T5 (de) 2008-12-17 2012-11-15 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit gesteigerten ertragsbezogenen Eigenschaften und/oder gesteigerter abiotischerStresstoleranz und Verfahren zur Herstellung derselben
WO2010086221A1 (en) 2009-01-28 2010-08-05 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2401291A1 (en) 2009-02-25 2012-01-04 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
BRPI1014386A2 (pt) 2009-04-29 2015-08-25 Basf Plant Science Co Gmbh Métodos para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas com relação às plantas de controle, construção, uso de uma construção, planta, parte de planta ou célula de planta, método para a produção de uma planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos, uso de um ácido nucleico, molécula de ácido nucleico isolada, e, polipeptídeo.
ES2552461T3 (es) 2009-04-29 2015-11-30 Basf Plant Science Company Gmbh Plantas que tienen rasgos potenciados relacionados con el rendimiento y un procedimiento de producción de las mismas
MX2011011646A (es) 2009-05-06 2011-11-29 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas que tienen mejores rasgos relacionados con el rendimiento y/o mejor tolerancia al estres abiotico y un metodo para producirlas.
WO2011006717A2 (en) 2009-06-19 2011-01-20 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2949661A1 (en) 2009-08-19 2015-12-02 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
DE112010003793T5 (de) 2009-09-25 2012-11-22 Basf Plant Science Company Gmbh Pflanzen mit gesteigerten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu deren Herstellung
EA201270440A1 (ru) 2009-09-25 2012-10-30 Басф Плант Сайенс Компани Гмбх Растения с улучшенными характеристиками урожайности и способ их получения
BR112012009566A2 (pt) 2009-10-22 2017-05-09 Basf Plant Science Co Gmbh plantas que possuem caracteristicas relativas a rendimento aprimoradas e método de sua elaboração
US20120227133A1 (en) 2009-11-13 2012-09-06 Basf Plant Science Company Gmbh Plants Having Enhanced Yield-Related Traits and a Method for Making the Same
AU2011219990A1 (en) 2010-02-24 2012-08-16 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN102939385A (zh) 2010-02-24 2013-02-20 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
EP2361985A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2361927A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US20130036516A1 (en) 2010-03-18 2013-02-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
AU2011228707A1 (en) 2010-03-18 2012-09-27 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
EP2547774A4 (en) 2010-03-19 2014-01-15 Basf Plant Science Co Gmbh PLANTS WITH IMPROVED PERFORMANCE CHARACTERISTICS AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
WO2011114313A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
EP2371845A1 (en) 2010-03-22 2011-10-05 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
DE112011101566T5 (de) 2010-05-04 2013-05-08 Basf Se Pflanzen mit erhöhter herbizidtoleranz
BR112012032996A2 (pt) 2010-06-24 2019-09-24 Basf Plant Science Co Gmbh método para acentuar os traços relacionados a rendimento em plantas em relação a plantas de controle, planta, construto, uso de contruto, método para a produção de uma planta transgênica, planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos derivados de uma planta, uso de um ácido nucleíco, ácido nucleíco isolado, polipeptídeo isolado e molécula nucleíca isolada
DE112011102151T5 (de) 2010-06-25 2013-07-11 Basf Plant Science Company Gmbh Pflanzen mit gesteigerten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu deren Herstellung
US9428763B2 (en) 2010-07-16 2016-08-30 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
AU2011294767A1 (en) 2010-08-24 2013-03-21 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
WO2012028673A1 (en) 2010-09-02 2012-03-08 Ludwig-Maximilians-Universitaet Muenchen Spontaneous organogenesis in plants
EP2426204A1 (en) 2010-09-02 2012-03-07 Ludwig-Maximilians-Universität München Spontaneous nodule organogenesis in plants
DE112011103723T5 (de) 2010-11-10 2013-08-08 Basf Plant Science Company Gmbh Pflanzen mit gesteigerten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu deren Herstellung
MY169304A (en) 2010-12-16 2019-03-21 Basf Agro Bv Plants having increased tolerance to herbicides
US20130298289A1 (en) 2011-01-20 2013-11-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants Having Enhanced Yield-Related Traits and a Method for Making the Same
CN103502456A (zh) 2011-02-28 2014-01-08 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于制备该植物的方法
WO2012117324A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
WO2012117368A1 (en) 2011-03-01 2012-09-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
LT2683419T (lt) 2011-03-11 2018-07-25 Vib Vzw Molekulės ir būdai baltymo slopinimui ir aptikimui
GB201106845D0 (en) 2011-04-26 2011-06-01 Vib Vzw Methods and means to produce abiotic stress tolerant plants
AU2012252442B2 (en) 2011-05-11 2016-12-15 Katholieke Universiteit Leuven, K.U.Leuven R&D Methods and means for generating microbial disease resistant plants
WO2013012643A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Polynucleotides encoding trehalose-6-phosphate phosphatase and methods of use thereof
CA2841782A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Methods of increasing yield and stress tolerance in a plant
GB201116129D0 (en) 2011-09-19 2011-11-02 Vib Vzw Methods and means to produce abiotic stress tolerant plants
WO2013092275A2 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Basf Plant Science Company Gmbh Genes to enhance the defense against pathogens in plants
AR091489A1 (es) 2012-06-19 2015-02-11 Basf Se Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas inhibidores de la protoporfirinogeno oxidasa (ppo)
EP2677035A1 (en) 2012-06-22 2013-12-25 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2885411B1 (en) 2012-08-16 2018-12-05 VIB vzw Means and methods for altering the lignin pathway in plants
AU2014234265B2 (en) 2013-03-21 2020-01-30 Universiteit Gent Means and methods for the reduction of photorespiration in crops
EP2992101B1 (en) 2013-04-29 2018-10-10 Agrosavfe N.V. Agrochemical compositions comprising antibodies binding to sphingolipids
CA2910604A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Basf Se Plants having increased tolerance to n-heterocyclyl-arylcarboxamide herbicides
GB201309866D0 (en) 2013-06-03 2013-07-17 Vib Vzw Means and methods for yield performance in plants
WO2014198885A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 Bayer Cropscience Nv Plant fibers with improved dyeing properties
EP2816115A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 BASF Plant Science Company GmbH Plants having one or more enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2896698A1 (en) 2014-01-17 2015-07-22 BASF Plant Science Company GmbH Plants having one or more enhanced yield-related traits and a method for making the same
WO2015150465A2 (en) 2014-04-03 2015-10-08 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
EP3166964A1 (en) 2014-07-08 2017-05-17 Vib Vzw Means and methods to increase plant yield
US20170298379A1 (en) 2014-10-03 2017-10-19 Vib Vzw Functional mutant alleles of ein5 for yield increase
EP3215624B1 (en) 2014-11-05 2023-11-29 Biotalys NV Transgenic plant comprising a polynucleotide encoding a variable domain of heavy-chain antibody
CN107426979B (zh) 2015-01-21 2022-07-01 巴斯夫欧洲公司 具有增加的除草剂耐受性的植物
CA3024770A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 BASF Agro B.V. Dual transit peptides for targeting polypeptides
BR112018072479B1 (pt) 2016-05-24 2023-01-31 Basf Se Método para controlar o crescimento de ervas daninhas, uso do composto de fórmula (i) e uso da composição
WO2018011750A1 (en) 2016-07-15 2018-01-18 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
BR112019001483A2 (pt) 2016-07-27 2019-09-10 Basf Agro Bv método para controlar a vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas
CA3030354A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
WO2018019845A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
WO2018024695A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
EP3278667A1 (en) 2016-08-05 2018-02-07 Basf Se Method for controlling ppo-inhibitor resistant weeds
US20210368793A1 (en) 2016-08-05 2021-12-02 Basf Se Method for Controlling PPO Resistant Weeds
EP3281523A1 (en) 2016-08-09 2018-02-14 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
US11723365B2 (en) 2016-08-09 2023-08-15 Basf Se Method for controlling PPO resistant weeds
EP3281524A1 (en) 2016-08-09 2018-02-14 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
US20190166841A1 (en) 2016-08-09 2019-06-06 Basf Se Method for Controlling PPO Resistant Weeds
EP3281525A1 (en) 2016-08-09 2018-02-14 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
CA3032223A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 Basf Se Method for controlling ppo resistant weeds
WO2018046526A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Vib Vzw Means and methods to increase coumarin production
WO2018114759A1 (en) 2016-12-20 2018-06-28 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
EA202091289A1 (ru) 2017-11-29 2020-10-12 Басф Се Растения, обладающие повышенной устойчивостью к гербицидам
JP2021511034A (ja) 2018-01-17 2021-05-06 ビーエイエスエフ・ソシエタス・エウロパエアＢａｓｆ Ｓｅ 除草剤耐性の増大した植物
GB201809273D0 (en) 2018-06-06 2018-07-25 Vib Vzw Novel mutant plant cinnamoyl-coa reductase proteins
GB201813011D0 (en) 2018-08-10 2018-09-26 Vib Vzw Means and methods for drought tolerance in crops
CN112969792A (zh) 2018-09-07 2021-06-15 巴斯夫植物科学有限公司 用于在植物中产生高水平pufa的改进方法
US20210317467A1 (en) 2018-09-07 2021-10-14 Basf Plant Science Copmany Gmbh Improved method for the production of high levels of pufa in plants
WO2020049157A1 (en) 2018-09-07 2020-03-12 Basf Plant Science Company Gmbh Improved method for the production of high levels of pufa in plants
GB201817464D0 (en) 2018-10-26 2018-12-12 Vib Vzw Means and methods to increase organ size in plants
GB201820109D0 (en) 2018-12-11 2019-01-23 Vib Vzw Plants with a lignin trait and udp-glycosyltransferase mutation
CA3124395A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Basf Plant Science Company Gmbh Native delivery of biomolecules into plant cells using ionic complexes with cell-penetrating peptides
WO2021198396A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Biotalys NV Anti-fungal polypeptides
WO2022152660A1 (en) 2021-01-12 2022-07-21 Vib Vzw Means and methods for producing drought tolerant cereals
WO2023031161A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plants having increased tolerance to herbicides
WO2023057601A1 (en) 2021-10-06 2023-04-13 Biotalys NV Anti-fungal polypeptides
WO2023131616A1 (en) 2022-01-05 2023-07-13 Vib Vzw Means and methods to increase abiotic stress tolerance in plants
WO2023131637A1 (en) 2022-01-06 2023-07-13 Vib Vzw Improved silage grasses
WO2023144199A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Vib Vzw Plants having reduced levels of bitter taste metabolites
WO2024047057A1 (en) 2022-09-01 2024-03-07 Vib Vzw Means and methods to produce triterpene saponins in eukaryotic cells

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE398679T1 (de) * 1992-07-07 2008-07-15 Japan Tobacco Inc Verfahren zur transformation einer monokotyledon pflanze

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Indian Journal of Experimental Biology,vol 35:416-426 (1997.5) *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013066007A1 (ko) * 2011-11-04 2013-05-10 충북대학교 산학협력단 발아초기 종자 이용 단기 형질전환 벼 식물체의 제조 방법 및 그에 따른 식물체

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001006844A1 (fr) 2001-02-01
EP1198985A4 (en) 2004-09-29
AU775233B2 (en) 2004-07-22
ATE480140T1 (de) 2010-09-15
CN1352522A (zh) 2002-06-05
KR20010109314A (ko) 2001-12-08
EP1198985A1 (en) 2002-04-24
HK1045237A1 (en) 2002-11-22
CA2366104C (en) 2010-07-06
CA2366104A1 (en) 2001-02-01
EP1198985B1 (en) 2010-09-08
HK1045237B (zh) 2011-03-11
AU4799099A (en) 2001-02-13
CN1279172C (zh) 2006-10-11
DE69942750D1 (de) 2010-10-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100455617B1 (ko) 단자엽 식물의 초신속 형질전환 방법
Lian et al. Application of developmental regulators to improve in planta or in vitro transformation in plants
Otani et al. Transgenic plant production from embryogenic callus of sweet potato (Ipomoea batatas (L.) Lam.) using Agrobacterium tumefaciens
KR101348905B1 (ko) 난초류의 종자 형질전환 방법
Torregrosa et al. Influence of Agrobacterium strain, culture medium, and cultivar on the transformation efficiency of Vitis vinifera L
JP2002541853A (ja) 植物の形質転換方法
AU2729597A (en) Transgenic plants with enhanced sulfur amino acid content
Hashizume et al. Efficient Agrobacterium-mediated transformation and the usefulness of a synthetic GFP reporter gene in leading varieties of Japonica rice
JP3141084B2 (ja) 単子葉植物の超迅速形質転換法
WO2015154689A1 (zh) 植物花药特异表达启动子pTaASG027的鉴定和应用
WO2005113771A1 (en) An embryo preferred promoter and method of using same
CN112813068A (zh) 大豆根组织特异性启动子Glyma12g02240及其应用
JP3571639B2 (ja) さつまいも由来の新規ぺルオキシダーゼ遺伝子及びそのプロモーター
KR101557043B1 (ko) 국화 유래의 항시 발현용 프로모터
US20060026717A1 (en) Globulin 2 regulatory region and method of using same
US8519227B2 (en) Ultra-fast transformation technique for monocotyledons
Martinelli et al. AGROBACTERIUM-MEDIATED TRANSFORMATION OF STRAWBERRY CULTIVAR MARMOLADA® ONEBAR
Kudo et al. TRANSFORMATION OF CHRYSANTHEMUM (DENDRANTHEMA GRANDI-FLORUM (RAMAT.) KITAMURA) VIA AGROBACTERIUM TUMEFACIENS
Hadfi et al. Agrobacterium-mediated transformation of white mustard (Sinapis alba L.) and regeneration of transgenic plants
KR102583332B1 (ko) 셀룰로오스 합성 유전자 Solyc07g043390이 과발현된 토마토 황화잎말림 바이러스병에 대한 내성이 증진된 형질전환 식물체
US8642749B2 (en) Regulatory region preferentially expressing to seed embryo and method of using same
CN106754932A (zh) 一种DNA分子STTM‑miR482a及其应用
WO2023081731A1 (en) Improved genetic transformation by improving de-novo shoot regeneration in adult plants and during in-vitro tissue culture
JP2005143338A (ja) カルス及び種子胚特異的発現活性を有するプロモーター
US7544858B2 (en) Method of transforming monocotyledonous seed

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20121023

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130718

Year of fee payment: 10

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140730

Year of fee payment: 11

LAPS Lapse due to unpaid annual fee