KR0136869B1

KR0136869B1 - 2'-메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드 화합물, 그의 용도 및 제조방법

Info

Publication number: KR0136869B1
Application number: KR1019890012101A
Authority: KR
Inventors: 도오루 우에다; 다쿠마 사사키; 아키라 마쓰다; 게이지 야마가미; 아키히로 후지이
Original assignee: 하기와라 후미오; 요시토미 세이야쿠 가부시키가이샤; 하마구치 미치오; 야마사 쇼유 가부시키가이샤
Priority date: 1988-08-25
Filing date: 1989-08-25
Publication date: 1998-04-25
Also published as: DE68917060T2; ATE109154T1; KR900003195A; DE68928127D1; EP0566162A1; ES2057031T3; US5705630A; DE68928127T2; DE68917060D1; ATE154359T1; EP0360018A1; EP0360018B1; EP0566162B1; CA1319685C

Abstract

본 발명은 하기 일반식의 2'-메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드 화합물 또는 그것의 염, 상기 화합물 한 개 또는 그 이상을 함유하는 항암 조성물 및 상기 화합물의 제조방법에 관한 것이다 ;

상기식에서, R¹은 아미노 또는 히드록시기이고 ; R²는 할로겐 또는 저급 알킬이거나(R¹이 아미노인 경우), 또는 C_2-4알킬, C_2-4알키닐 또는 할로알킬(R¹이 히드록시기인 경우)이고, R³는 수소 또는 인산 잔기이다.

상기 화합물 및 그것의 염들은 탁월한 항종양 활성을 보여주며 항암재로 유용하다.

Description

2＇-메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드 화합물, 그의 용도 및 제조방법

본 발명은 우수한 항종양 활성을 갖는 신규의 2'-메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드, 그것의 약학적 용도 및 제조 방법에 관한 것이다. 암으로 인한 사망자의 수가 증가하고 있는 상황하에서 외과적 치료 요법과 더불어 화학요법 및 면역요법이 광범위하게 실시되고 있다. 이와 관련지어 화학요법에서는 급성 백혈병 치료에 효과적인 것으로 간주되는 시토신 아라비노시드, 5-플루오로우라실 등이 대사질항질로서 임상학적으로 사용되어 왔다. 그러나, 지금까지 알려진 항암제는 치료효능면에 있어서 아직도 많은 요구 사항들을 내포하고 있으며, 아울러 부작용과 같은 각종 문제점들을 수반하고 있다. 따라서, 다양한 분야에서 탁월한 항암제의 개발이 요구되고 있다. 위와같은 같은 상황하에서 본 발명자들은 2'-데옥시-2'-메틸리덴피리미딘 및 그것의 약학적 허용염들을 개발하였으나, 2'-데옥시-2'-메틸리덴피리미딘은 용해도 측면에서 불량하고, 그것의 산부가염은 불안정하여 약제 생산면에 있어서 만족스럽지가 못하다. 본 발명의 목적은 우수한 항종양 활성을 갖는 신규 화합물 및 그것의 약학적 용도를 제공하는 것이다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 항암제로서 유용하며 약제 생산측면에서 문제점을 수반하지 않는 신규 화합물을 개발하기 위한 목적에서 집중적으로 연구를 수행하였으며, 그결과 2'-메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드 화합물이 탁월한 항종양 활성을 발휘하는 동시에 약제 생산면에서 문제점들을 갖지 않는다는 것을 알아냄으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 하기 일반식(I)로 표시되는 2'-데옥시-2'메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드 화합물 또는 그것의 염에 관한 것이다 ;

상기식에서, R¹은 아미노 또는 히드록시기이고 ; R²는 할로겐 또는 저급 알킬이거나(R¹이 아미노인 경우), 또는 C_2-4알킬, C_2-4알키닐 또는 할로알킬(R¹이 히드록시기인 경우)이고, R³는 수소 또는 인산 잔기이다. 또한 본발명은 활성 성분으로서 일반식(I)의 화합물 또는 그것의 염을 함유하는 것을 특징으로 하는 항암 조성물에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 화합물(I)의 제조방법에 관한 것이다.

상술한 일반식(I)내에서, R²에 대하여 정의한 할로겐은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 의미하며 ; 저급 알킬은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3차-부틸 등을 의미하고 ; C_2-4알킬은 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 3차-부틸 등을 의미하며 ; C_2-4알킬닐은 에틸닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐 등을 의미하고 ; 할로알킬의 할로겐은 상술한 할로겐의 기재내용과 동일한 의미를 가지며, 할로알킬의 알킬 또는 상술한 저급 알킬의 기재 내용과 동일한 의미를 가지며, 그와 같은할로 알킬의 예로서는 트리플루오로메틸 및 크로로에틸을 들수 있다. 일반(I)로 표시되는 화합물의 염으로서는 식중의 R³가 수소인 경우, 염산염, 황산염, 프롬화수소염, 인산염, 말레인산염, 푸마르산염, 타르트르산염, 숙산염, 시트르산염 및 p-톨루엔술폰산염과 같은 산부가염을 예시할 수 있고, 식중의 R³가 인산 잔기인 경우에는, 나트륨염, 칼륨염, 리튬염 및 칼슘염과 같은 금속염 또는 암모늄염으로서 예시되는 약학적 허용 염들을 들수 있다. 본 발명은 일반식(I)의 화합물 또는 그것의 염들의 수화물(1 수화물, 1/2 수화물, 1/4 수화물, 3/2 수화물) 또는 기타 다른 용매 화합물들도 포함한다.

R¹이 히드록시기인 일반식(I)의 화합물에 있어서, 본 발명은 R¹이 히드록시기인 일반식(I)의 화합물의 토오토머들인, 하기 일반식(I')의 우리딘 화합물도 포함한다 ;

상기 식중, R² 및 R³는 상기 정의한 바와 같다. 일반식(I)의 화합물의 예로서는 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오르시티딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-클로로시티딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-브로모시티딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-요오도시티딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-메틸시티딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에틸시티딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에틸우라딘, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐우라딘 또는 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘-5'-인산을 들수 있다.

R¹이 히드록시기인 본 발명의 일반식(I)의 화합물들(이하에서는 우리딘 화합물로서 기재함)은, 예컨대 다음과 같은 방법으로 제조할 수 있다. ; 하기 일반식(II)로 표시되는 화합물의 당부분의 3'- 및 5'-위치에 존재하는 히드록시기를 보호시키고, 당부분의 2'-우치에 존재하는 히드록시기를 산화시킨 후, 위티그(Witting) 시약과 반응시켜 당부분의 2'-위치에 메틸리덴을 갖는 화합물을 수득하고, 이어서 수득한 화합물의 3'- 및 5'-위치에 존재하는 히드록시기의 보호기를 제거한다음, 필요에 따라 당부분 5'-위치에 대하여 인산화반응을 실시한다.

(식중, R은 할로겐, 알킬, C_2-4의 알키닐 또는 할로알킬이다)

상술한 반응들에서 3'- 및 5'-위치에 존재하는 히드록시기들에 대한 보호기로서는 히드록시기에 대한 보호기로서 종래 사용되어 온 임의의 보호기를 사용할 수 있으며, 그와 같은 보호기의 예로서는 아세틸, 프로피오닐, 브티릴, 벤조일 및 나프토일과 같은 아실기 ; 에틸리덴, 프로필리덴,이소프로필리덴, 벤질리덴, 시크로헥실리덴, 시클로펜틸리덴, 메톡시메틸리덴, 에톡시메틸리덴 및 디메톡시에틸리덴과 같은 아세탈- 또는 케탈-형 보호기 ; 벤질, p-메톡시벤질, 3,4-디메톡시벤질, 디페닐메틸, 트리페닐메틸, α- 또는 β-나프틸메틸, 및 α-나트틸디페닐메틸과 같은 아르알킬기 ; 및 트리메틸실린, t-부틸디메틸실릴, 메틸디이소프로필실릴, 트리이소프로필실린 및 테트라이소프로필디실록실(TIPDS)와 같은 실릴기를 들수 있다. 2'-위치에 존재하는 히드록시기의 산화 방법으로서는 크롬산-피리딘-아세트산 무수물 등의 착염을 사용하는 크롬산 산화반응(방법 A)또는 옥살릴 클로라이드-디메틸술폭시드로부터 제조된 활성 디메틸술폭시드를 사용하는 활성디메틸술폭시드 산화반응(방법 B)을 이용할 수 있다. 위의 산화반응은 방법 A인 경우 -10℃ 내지 실온의 온도에서, 또는 방법 B인 경우에 있어서는 -10℃ 내지 -80℃의 온도에서, 산화시키고자 하는 화합물 1몰에 대하여 1 내지 10배의 몰수의 산화제 존재하에 1 내지 10시간 동안 수행할 수 있다. 메틸리덴화 반응에서 사용되는 위티그 시약으로서는 구체적으로 트리페닐 포스핀메틸렌을 예시할 수 있으며, 상기 화합물은 종래 방법들에 따라 트리페닐 포스포늄화합물(메틸트리페닐 포스포늄 브로마이드, 메틸트리페닐포스포늄 요오다이드 등)과 강알칼리(수소화칼륨, 수소화나트륨, n-부틸리튬, 아미드화나트륨 등)로부터 사용 직전에 제조하여 사용하는 것이 바람직하다. 상기 위티그 시약은 화합물 1몰에 대하여 1-3배의 몰의 양으로 사용하는 것이 적당하다. 위티그 시약을 사용하는 메틸리덴화 반응은 용매 테트라히드로푸란,디옥산, 에테르, 베젠, 디메틸술폭시드 등을 단독으로 또는 혼합하여 사용)중에서 -30 내지 30℃ 온도에서 0.5 내지 20시간 동안 수행한다.

당부분에 존재하는 히드록시기의 탈보호 반응은 사용된 보호기에 따라서 산가수분해, 알칼리 가수분해, 불소화 암모늄 처리 또는 촉매 환원 반응과 같은 종래의 처리방법으로부터 적당한 것을 선택하여 수행할 수 있다.

예를들면, 히드록시기의 보호기로서 실릴기가 사용된 경우에는 불소화 암모늄 처리 또는 산 또는 알칼리 가수분해를 이용하여 실릴기를 제거할 수 있다.

R³가 인산잔기인 화합물은 뉴클레오시드의 5'-위치에 대한 선택적인 인산화 반응에서 통상적으로 사용되는 옥시염화인 및 사염화 피로인산과 같은 인산화제와 반응시킴으로써 수득할 수 있다. 또한, R¹이 아미노인 일반식(I)의 본 발명 화합물은 상술한 방법으로 수득할 수 있는, 당부분의 3'- 및 5'-위치가 보호되어 있으며 당부분의 2'-위치에 메틸리덴을 갖는 화합물을 옥시염화인 및 트리에틸아민 존재하에 1,2,4-트리아졸과 반응시켜 4-(1,2,4-트리아졸-1-일) 화합물을 수득한 후, 수득된 화합물에 암모니아 가스를 통과시켜 4-아미노 화합물로 전환시키고, 이어서 히드록시기들의 보호기를 제거하는 반응을 수행한 다음, 필요에 따라 인산화 반응을 수행함으로써 제조할 수 있다. 1,2,4-트리아졸의 반응은 아세토니트릴과 같은 용매중에서 아르곤 기체와 같은 비활성 기체의 흐름하에 약 0℃ 내지 시온의 온도에서 약 30분 내지 약 5시간 동안 진행된다. 수산화나트륨에 암모니아기체를 비리 통과시키는 것이 바람직하다. 암모니아 기체를 이용한 아미노화 반응은 통상적으로 1 내지 5시간 동안 수행하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 출발물질로 사용하고자 하는 일반식(II)의 화합물들 중에서, R이 C_2-4알키닐 일반식(II)의 화합물은, 예컨대 다음과 같은 방법으로 제조할 수 있다 ;

(상기 식에서, R″′는 실릴기로 보호된 C_2-4의 알키닐이고, R″″는 C_2-4의 알키닐이다.)

상술한 반응에서, 일반식(III)의 화합물을 실릴-보호된 알키닐의 금속화합물과 반응시켜 화합물(IV)을 수득하고, 이어서 실릴기 제거 반응을 수행하여 목적 화합물(II')을 수득한다. 일반식(II)의 화합물들중에서 R이 C_2-4의 알킬인 화합물은 전술한 방법에 따라 일반식(II')의 당부분의 3'- 및 5'-위치들에 존재하는 히드록시기를 보호하고, 보호된 화합물에 대해서 환원 반응을 수행한 후, 당부분의 3'- 및 5'-위치들에 존재하는 히드록시기의 보호기를 제거함으로써 제조할 수 있다. R²가 C_2-4알킬인 일반식(I)의 본 발명은 화합물을 전술한 환원성 화합물의 당부분의 3'- 및 5'-위치들에 존재하는 히드록시기를 제거하지 않고 제조하는 경우, 당부분의 2'-위치에 메틸리덴을 갖는 화합물은 전술한 메틸리딘화 반응을 수행하고, 보호기들을 제거한 후, 이어서 필요에 따라 당부분 5'-위치에 대하여 인산화 반응을 수행함으써 수득한다. 본 발명에 따른 목적 화합물 및 합성 중간체 화합물들은 통상적인 종래의 정제 및 분리 방법들(예, 각종 크로마토크래피 방법, 이온 교환 및 흡착 크로마토크래피, 재결정, 등)을 적당히 조합하여 실시함으로써 분리 및 정제할수 있다. 구체적으로 예를 들면 뉴클레오시드 화합물인 경우, 용매를 증류 제거한후, 필요에 따라 칼럼 크로마토크래피 및 적당한 유기 용매를 이용한 결정화를 실시한다. 뉴클레오시드 화합물(R³가 인산 잔기임)인 경우에 있어서는, 이온 교환수지 등을 사용한 이온 교환 크로마토크래피, 활성 챠콜 등을 사용한 흡착 칼럼 크로마토크래피를 이용하여 정제하거나, 또는 그와 함께 동결 건조 또는 결정화를 이용하여 목적 또는 중간제 화합물을 유리산 형태 또는 필요에 따라 염의 형태로 수득할 수 있다. 이렇게 해서 수득된 일반식(I)의 화합물들을 상술한 산부가염, 금속염 또는 암모늄염으로 전환시킬 수 있다. 본 발명 화합물들은 종양 세포들에 대하여 탁월한 증식-억제 작용을 발휘하며 아울러 낮은 독성을 가지므로, 이들을 활성 성분으로 함유하는 본 발명 약제들은 항암제로서 유용하다. 본 발명에 따른 항암 조성물은 화합물(I)의 유효량이 약학적 허용 담체, 부형제, 희석제 등과 혼합되어 분말, 과립, 정제, 당의정, 캡술, 시럽, 좌제, 외용약제, 주사제 및 점적식 약제 형태를 취할 수 있다. 2'-데옥시-2'-메틸리덴시티딘이 실온에서 식염수중에 25mg/ml 농도에서 더 이상 용해되지 않는 반면, 실시예 1의 혼합물은 동일한 조건하에서 쉽게 용해된다. 본 발명에 따른 항암 조성물은 사람을 비롯한 포유 동물들에게 경구 또는 비경구 투여할 수 있다. 상기 화합물의 일정 투여량으로 목적하는 암증상을 효과적으로 억제시킬수 있는 한, 임의의 모든 투여량이 바람직하다. 치료하고자 하는 대상(동물), 암질환의 종류, 투여경로, 조성물의 형태 등에 따라 투여량이 좌우되나, 일반적으로 1일 투여량은 경구 투여용 약제의 경우 체중 1kg 당 10-40mg,바람직하기로는 50-200mg이고, 주사제인 경우에 있어서는 체중 1kg 당 1-20mg바람직하기로는 1-5mg이다. 1일 투여 횟수는 1 내지 4회 범위내에서 적당한 것을 선택할 수 있다.

본 발명에 따른 항암 조성물은 다른 항암제, 면역 촉진제 또는 기타 다른 허용되는 의약제제들과 조합하여 사용될 수 있다. 이하에는 실시예들을 기술하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 하며, 단 본 발명이 이들 실시예들의 범위내로만 제한되는 것으로 해석하여서는 아니된다는 것을 밝혀두는 바이다.

실시예 1

(1) 5-플루오로우리딘 2.62g을 피리딘 30ml에 용해시키고 3,3ml의 1,3-디클로로-1,1,3,3-테트라이소프로필디실록산을 0℃에서 가한후, 화합물을 0℃에서 2시간 동안 및 이어서 실온에서 1.5시간 동안 교반했다. 물 5ml를 가하고, 용매를 감압하에 증류 제거한다. 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml를 가하여 용액을 분배한 후, 유기층을 물로 2회 세정하고, 이어서 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x23cm)에 채우고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-플루오로우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 4.24g, 83.9% ; 질량(m/z) : 504(M+), 461(M+-이소프로필)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 5g을 염화메틸렌 10ml에 용해시키고, 4 당량의 크롬산 착물(100ml 염화메틸렌증의 산화크롬 4g, 피리딘 6.67ml 및 아세트산 무수물 4ml)과 혼합하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 에틸아세테이트 500ml에 적가하고, 용액을 실리카겔 필터(직경 6.0x1.5cm)에 여과하였다. 여과액을 감압하에 증류제거하고, 잔류물을 에틸아세테이트 200ml와 물 200ml로 분해하였다. 유기층을 물로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x28cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시킨 다음, 헥산으로 결정화시킴으로써 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-옥소-5-플루오로우리딘이 수득되었다. 수율 : 4.3g, 86% ; 융점 183-186℃ ; 질량(m/z) : 502(M+) 원소 분석 : C₂₁H₃₅N₂O₇FSi₂:

계산치 : C, 50.17 ; H, 7.02 ; N, 5.57

실측치 : C, 50.29 ; H, 7.33 ; N, 5.58

(3) 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 8.57g을 아르곤 기체 기류하에서 테트라히드로푸란 80ml에 현탁시키고, n-부틸리튬 15.1㎖(1.58 몰/㎕ 헥산용액)을 0℃에서 적가한 수, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 상술한 (2)에서수득된 화합물 3.02g을 테트라히드로푸란 25ml에 용해시킨 용액을 0℃에서 아르곤 기체 기류하에 적가하였다. 20분후 온도를 실온으로 환원시키고, 상기 온도에서 3시간 동안 교반을 계속했다. 1N브롬화 암모늄을 사용하여 중화 반응을 수행한후, 용액을 농축시켰다. 용액을 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml로 분배하고, 유기층을 물로 세정한 후, 황산나트륨으로 건조시키고 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x18cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 2.43g, 81% ; 질량(m/z) : 500(M+)

(4) 트리에틸아민 1.4ml와 1,2,4-트리아졸 684mg을 아세토니트릴 10ml에 용해시키고, 생성된 용액을 아르곤 기체 기류에서 0℃로 냉각시켰다. 옥시염화인 280㎕를 적가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 여과액에 상술한 (3)에 수득된 화합물 500mg을 아세토니트릴 5ml에 용해시킨 용약에 적가하였다. 실온에서 3시간 동안 방치한 후, 용액을 50℃에서 1시간 동안 교반하고, 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 4시간 동안 통과시켰다. 용액을 클로로포름 100ml와 물 100ml로 분해하고, 수성층을 클로로포름으로 2회 세정하였다. 수거된 클로로포름층을 황산 나트륨으로 건조시키고, 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x14cm)에 넣고, 5% 에틸아세테이트/클로로포름으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 435mg, 87% ; 질량(m/z) : 499(M+)

(5) 상술한 (4)에서 수득된 화합물 400mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄 플루오라이드 1.8ml를 가한후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 아세트산을 사용하여 중화시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x18cm)에 채우고, 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 후, 에탄올/에틸아세테이트로 결정화시킨 결과 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘이 수득되었다. 수율 : 177mg, 86.2% ; 융점 185-187℃ ; 질량(m/z) : 257(M+)

원료분석 : C₁₀H₁₂N₃O₄F :

계산치 : C, 46.70 ; H, 4.70 ; N, 16.34

실측치 : C, 46.06 ; H, 4.67 ; N, 16.00

실시예 2

(1) 트리에틸아민 1.4ml와 1,2,4-트리아졸 684mg을 아세토니트릴 10ml에 용해시키고, 생성된 용액을 아르곤니트릴 10ml에 용해시키고, 생성된 용액을 아르곤 기체 기류에서 0℃로 냉각시켰다. 옥시염화인 280㎕를 적가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과 제거하고, 여과액에 실시예 1의 (1)-(3)에서와 유사한 방법으로 티미딘으로부터 수득된 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-메틸리덴티미딘 용액 498mg을 적가하였다. 3시간 후, 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 통과시켰다. 3시간 후, 클로로포름 100ml와 물 100ml를 가하여 분배하고, 생성된 수성층을 클로로포름으로 2회 세정하였다. 수거된 클로로포름층을 황산나트륨으로 건조시킨후, 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x12cm)에 넣고, 5% 에탄올/클로로포름으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-메틸시티딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 315mg, 63.3% ; 질량(m/z) : 495(M+)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 300mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄 플루오라이드 1.4ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 아세트산을 사용하여 중화시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x17cm)에 채우고, 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 후, 에탄올/에틸아세테이트로 결정화시킨 결과 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-메틸시티딘이 수득되었다. 수율 : 137mg, 89.0% ; 융점 198-204℃ (분해) ; 질량(m/z) : 253(M+)

원료분석 : C₁₁H₁₅N₃O₄:

계산치 : C, 52.17 ; H, 5.97 ; N, 16.59

실측치 : C, 52.02 ; H, 5.99 ; N, 16.37

실시예 3

(1) 5-클로로우리딘 10g을 피리딘 100ml에 용해시키고, 1,3-디클로로-1,1,3,3-테트라이소프로필디실록산 12.44ml를 0℃에서 가한 후, 화합물을 3시간 동안 교반하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 에탄올 5ml를 가하고, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 에틸아세테이트 200ml와 물 200ml로 분배하고, 생성된 유기층을 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3,0x25cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-클로로우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 14.63g, 78.2% ; 질량(m/z) : 478(M+-이소프로필)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 5.21g을 염화메틸렌 15ml에 용해시키고, 4 당량의 크롬산 착물(염화메틸렌 100ml 증의 산화크롬 4g, 피리딘 6.6ml 및 아세트산 무수물 4ml)과 혼합한 후, 혼합물을 2시간 동안 교반했다. 반응 용액을 에틸아세테이트 400ml에 적가하고, 실리카겔 필터(직경 6.0x1.0cm)에 여과했다. 용매을 감압하에 증류 제거하고, 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x30cm)에 넣은 다음, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시키고, 이어서 에틸아세테이트/헥산으로 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-옥소-5-클로로우리딘이 수득되었다. 수율 : 3.75g, 72% ; 융점 199-201℃ ; 질량(m/z) : 476(M+-이소프로필)

원료 분석 : C₂₁H₃₅N₂O₇FSi₂:

계산치 : C, 48.49 ; H, 6.78 ; N, 5.39

실측치 : C, 48.24 ; H, 7.02 ; N, 5.18

(3) 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 5.72g을 아르곤 기체 기류하에서 테트라히드로푸란 50ml에 현탁시키고, n-부틸리튬 10.1ml를 빙냉하에 적가하였다. 실온에서 생성된 용약을 1시간동안 0℃로 냉각시키면서 상술한(2)에서수득한 화합물 2.08g을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시킨 용액을 적가하고, 30분 후에 온도를 실온으로 환원시켰다. 5시간후, 1N 암모늄 브로마이드를 사용하여 중화 반응을 수행하고, 용액을 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml로 분배했다. 유기층을 물로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨 후, 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 5.0x14cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-클로로우리딘이 포름형 물질로 수득되었다. 수율 : 1.7mg, 81.7% ; 질량(m/z) : 517(M+)

(4) 트리에틸아민 3ml와 1,2,4-트리아졸 1.52mg을 아르곤 기류하에서 아세토니트릴 20ml에 용해시키고, 얼음으로 냉각시켰다. 이것에 이어서 옥시염화인 620㎕를 적가하고, 30분후 그용액을 실온에서 30분간 교반했다. 침전물을 여과 제거한 후, 상술한 (3)에 수득된 화합물 1.04g을 여과액에 가하고, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 상기 혼합물에 2시간 동안 통과시키고, 클로로포름 100ml와 물 100ml로 분배시켰다. 수성층을 클로로포름으로 세정하고, 클로로포름 층을 수거하여 황산 나트륨으로 건조시킨 후, 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x17cm)에 넣고, 75% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시킨후, 에틸아세테이트로 결정화시킴으로써 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-클로로시티딘이 수득되었다. (수율 : 944mg, 90.7% ; 융점 108-111℃ ; 질량(m/z) : 517(M+)

(5) 상술한 (4)에서 수득된 화합물 900mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄 플루오라이드 4ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 매탄올 5ml를 가한 후, 용매를 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x12cm)에 넣고, 20% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 다음, 에탄올/에틸아세테이트로 결정화시켜 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-클로로시티딘이 수득되었다. 수율 : 441mg, 93.4% ; 융점 168-170℃ ; 질량(m/z) : 273(M+)

실시예 4

(1) 5-브로모우리딘 3.32g을 피리딘 30ml에 용해시키고, 1,3-디클로로-1,1,3,3-테트라이소프로필디실록산 3.3ml를 0℃에서 가한 후, 화합물을 2시간 동안 교반했다. 실온으로 환원시킨 후, 1시간 40분 동안 추가로 교반한 후, 물 5ml를 가한 다음 용매를 감압하에 증류 제거했다. 에탄올을 사용하여 공비 증류시킨 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x25cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-브로모우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 5.05g, 89.2% ; 질량(m/z) : 522(M+-이소프로필)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 3.57g을 4 당량의 크롬산 착물(염화메틸렌 70ml 증의 산화크롬 2.4g, 피리딘 4ml 및 아세트산 무수물 2.4ml)과 혼합한 후, 실온에서 40분 동안 교반했다. 반응 용액을 에틸아세테이트 400ml에 적가하고, 실리카겔 필터(직경 6.0x1.0cm)에 통해 여과했다. 여과액을 농축시키고, 에틸 아세테이트 150ml와 물 150ml를 가하여 분배시켰다. 유기층을 물로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 5.0x14cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시킨 후, 에틸아세테이트/헥산으로 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-옥소-5-브로모우리딘이 수득되었다. 수율 : 3.01g, 84.8% ; 융점 204-205℃ ; 질량(m/z) : 520(M+-이소프로필)

원료 분석 : C₂₁H₃₅N₂O₇Br :

계산치 : C, 44.75 ; H, 6.26 ; N, 4.97

실측치 : C, 44.57 ; H, 6.32 ; N, 4.92

(3) 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 5.72g을 아르곤 기류하에서 테트라히드로푸란 50ml에 현탁시키고, n-부틸리튬 10.1ml를 0에서 적가했다. 온도를 실온에서 환원시키고 1시간 경과후에 상술한(2)에서 수득한 화합물 2.25g을 테트라히드로푸란 15ml에 용해시킨 용액을 0에서 적가했다. 3시간 후, 온도를 실온으로 환원시키고, 용액을 밤새 교반한 다음, 1N 암모늄 브로마이드를 중화시켰다. 용액을 에틸아세테이트 150ml와 물 150ml로 분배하고 에틸아세테이트 층을 물로 세정한 후, 황산나트륨으로 건조시킨 후, 이어서 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 5,0x14cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-브로모우리딘이 포름형 물질로 수득되었다. 수율 : 1.72g, 76.4% ; 질량(m/z) : 518(M+-이소프로필)

(4) 아세토니트릴 20ml에 트리에틸아민 3ml와 1,2,4-트리아졸 1.52g을 아르곤 기류하에서 용해시키고, 생성된 용액을 얼음으로 냉각시켰다. 이것에 이어서 옥시염화인 620㎕를 적가하고, 30분 경과후에 온도를 실온으로 환원시켰다. 30분후, 침전물을 여과 제거하고, 여과액에 상술한 (3)에서 수득된 화합물 1.12g을 가한 다음, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 상기 혼합물에 3시간 동안 상기 혼합물에 통과시키고, 클로로포름 100ml와 물 100ml를 가하여 용액을 분배하였다. 물층을 클로로포름으로 세정하고, 결합된 클로로포름 층은 황산 나트륨으로 건조시킨 다음, 용매를 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x17cm)에 넣고, 75% 에틸아세테이트-헥산으로 용출시킨후, 에틸아세테이트-헥산으로 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-브로모시티딘이 수득되었다. (수율 : 926mg, 82.7% ; 융점 169-171℃ ; 질량(m/z) : 560(M+)

(5) 상술한 (4)에서 수득된 화합물 900mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄 플루오라이드 4ml를 가한 후, 생성된 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 매탄올 5ml를 가하고, 용매를 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x11cm)에 넣고, 20% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 다음, 에탄올/에틸아세테이트로 결정화시켜 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-브로모시티딘이 수득되었다. 수율 : 518mg, 102% ; 융점 172-180℃ (분해) ; 질량(m/z) : 318(M+)

실시예 5

(1) 5-요오도우리딘 10g을 피리딘 100ml에 용해시키고, 1,3-디클로로-1,1,3,3-테트라이소프로필디실록산 8.9ml를 0℃에서 가한 후, 화합물을 1.5시간 동안 교반했다. 온도를 실온으로 환원시키고, 3시간 후, 물 5ml를 가하여 용매를 감압하에 증류 제거했다. 에탄올을 사용하여 공비 증류한 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.0x30cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-요오도우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 14.7g, 89% ; 질량(m/z) : 612(M+)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 5.62g을 4 당량의 크롬산 착물(염화메틸렌 100ml 증의 산화크롬 3.55g, 피리딘 5.9ml 및 아세트산 무수물 3.55ml)과 혼합하고 혼합물을 실온에서 40분간 교반했다. 반응 용액을 에틸아세테이트 500ml에 적가하고, 실리카겔 필터(직경 6.0x15cm)에 여과한 후, 여과액을 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 5.0x21cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-옥소-5-요오도우리딘이 수득되었다. 수율 : 1.72g, 76.4% ; 질량(m/z) : 610(M+)

(3) 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 7.94g을 아르곤 기류하에서 테트라히드로푸란 80ml에 현탁시키고, n-부틸리튬 14ml를 0℃에서 적가했다. 온도를 실온에서 환원시키고 1시간 후에 혼합물을 0℃로 냉각시키면선 상술한(2)에서 수득한 화합물 3.39g을 테트라히드로푸란 15ml에 용해시킨 용액을 적가했다. 1시간 후, 온도를 실온으로 환원시키고, 밤새 교반했다. 1N 암모늄 브로마이드로 중화시키고, 이어서 농축시킨 후 용액을 에틸아세테이트 200ml와 물 200ml로 분배했다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에 증류 제거했다. 수득한 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 5.0x22cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-요오도우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 1.6g, 47.2% ; 질량(m/z) : 608(M+)

(4) 트리에틸아민 1.5ml와 1,2,4-트리아졸 760mg을 아르곤 기류하에서 아세토니트릴 10ml 용해시키고, 얼음으로 냉각시켰다. 옥시염화인 310㎕를 적가하고, 30분후 온도를 실온으로 환원시켰다. 30분후, 침전물을 여과 제거하고, 상술한 (3)에서 수득된 화합물 321mg을 여과액에 가한 다음, 실온에서 교반했다. 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 3시간 동안 용액내에 도입하고, 클로로포름 50ml와 물 50ml를 가하여 용액을 분배시켰다. 수성층을 클로로포름으로 세정하고, 수득된 유기층을 황산나트륨으로 건조시킨 후, 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x20cm)에 넣고, 10% 에틸아세테이트/클로로포름으로 용출시킨 다음, 에틸아세테이트로 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-요오도시티딘이 수득되었다. (수율 : 169mg, 52.7% ; 융점 185-187℃ ; 질량(m/z) : 607(M+)

(5) 상술한 (4)에서 수득된 화합물 160mg을 테트라히드로푸란 5ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄플루오라이드 1ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 매탄올 2ml를 가하고, 용매를 감압하에 증류 제거한 후, 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x7.0cm)에 넣고, 20% 에탄올/클로로포름으로 용출시켜 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-요오도시티딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 92mg, 97.0% ; 융점 159-161℃ ; 질량(m/z) : 365(M+)

실시예 6

(1) 5-에티닐우리딘 2.1g을 피리딘 50ml에 용해시키고, 1,3-디클로로-1,1,3,3-테트라이소프로필디실록산 2.6ml를 빙냉하에 가한 후, 화합물을 3시간 동안 교반했다. 실온에서 밤새 교반한 후, 메탄올 5ml를 가하고 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물에 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml를 가하여 분배했다. 유기층을 물로 2회 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 5.0x17cm)에 넣고, 25% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-에티닐우리딘이 포음형 물질로 수득되었다. 수율 : 3.26g, 82% ; 질량(m/z) : 510(M+)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 2.04g을 4 당량의 크롬산 착물(염화메틸렌 40ml 증의 산화크롬 1.55g, 피리딘 2.57ml 및 아세트산 무수물 1.55ml)과 혼합하고, 혼합물을 실온에서 40분간 교반했다. 반응 용액을 에틸아세테이트 200ml에 적가하고, 실리카겔 필터(직경 6.0x1.0cm)에 여과했다. 여과액을 감압하에 증류 제거하고, 잔류물을 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml로 분배했다. 유기층을 2회 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x15cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-옥소-5-에티닐우리딘이 시럽형 물질로 수득되었다. 수율 : 1.62g, 81% ; 질량(m/z) : 508(M+)

(3) 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 4.29g을 아르곤 기류하에서 테트라히드로푸란 40ml에 현탁시키고, n-부틸리튬 7.58ml를 적가했다. 실온에서 상기 용액을 1시간 동안 교반하고, 빙냉하에 상술한 (2)에서 수득한 화합물 1.52g을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시킨 용액을 적가했다. 30분 후 온도를 실온으로 환원시키고, 6시간 후 1N 암모늄 브로마이드로 중화시킨 다음, 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml를 가하여 용액을 분배했다. 유기층을 물로 2회 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x20cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 1.12g, 74% ; 질량(m/z) : 506(M+)

(4) 상술한 (3)에서 수득된 화합물 500mg을 트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄플루오라이드 2.2ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 20분간 교반했다. 아세트산으로 중화시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.4x18cm)에 넣고, 10% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 후, 에탄올/헥산으로 결정화시켜 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐우리딘이 수득되었다. 수율 : 230mg, 87% ; 융점 172-174℃ ; 질량(m/z) : 264(M+)

실시예 7

(1) 트리에틸아민 1.5ml와 1,2,4-트리아졸 760mg을 아르곤 기류하에서 아세토니트릴 10ml 용해시키고, 용액을 얼음으로 냉각시켰다. 옥시염화인 310㎕를 적가하고, 30분후, 용액을 실온에서 30분간 교반했다. 침전물을 여과 제거하고, 그 여과액에 실시예8 (3)에서 수득된 500mg의 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐우리딘을 가한 다음, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반했다. 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 2시간 동안 통과시키고, 클로로포름 80ml와 물 80ml를 가하여 용액을 분배했다. 물층을 클로로포름으로 세정하고, 회수된 클로로포름층을 황산나트륨으로 건조시킨 후, 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x14cm)에 넣고, 75% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐시티딘이 수득되었다. (수율 : 310mg, 62% ; 질량(m/z) : 505(M+)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 300mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄플루오라이드 1.2ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 매탄올 2ml를 가한 후, 용매를 감압후에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 2.0x12cm)에 넣고, 20% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 결과 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐시티딘이 포옴형 물질로 수득되었다. 수율 : 9.7mg, 62%

실시예 8

(1) 실시예6 (1)에서 수득된 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-에티닐우리딘 3.8g을 메탄올 50ml에 용해시키고, 10% 팔라듐탄소 100mg을 현탁시켜 20 p.s.i의 적당한 압력하에서 4시간 동안 촉매 환원 반응을 수행했다. 반응용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.0x20cm)에 넣고, 33% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-5-에티닐우리딘이 시럽성 물질로 수득되었다. 수율 : 3.22mg, 84% ; 질량(m/z) : 513(M+)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 3.15g을 4 당량의 크롬산 착물(염화메틸렌 60ml 증의 산화크롬 2.37g, 피리딘 3.93ml 및 아세트산 무수물 2.37ml)과 혼합하고, 혼합물을 실온에서 50분간 교반했다. 반응 용액을 에틸아세테이트 300ml에 적가하고, 실리카겔 필터(직경 6.0x10cm)에 여과했다. 여과액을 농축시킨 후, 에틸아세테이트 100ml와 물 100ml를 가하여 용액을 분배했다. 유기층을 물로 2회 세정하고, 황산나트륨으로 건조시킨 후, 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x15cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시킨 다음, 에틸아세테이트/헥산으로켜 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-옥소-5-에티닐우리딘이 수득되었다.

수율 : 2.54g, 80.8% ; 융점 176-177℃ ;질량(m/z) : 512(M+)

원료 분석 : C₂₃H₄₀N₂O₇Si₂:

계산치 : C, 53.88 ; H, 7.86 ; N, 5.46

실측치 : C, 53.59 ; H, 8.01 ; N, 5.56

(3) 메틸트리페닐포스포늄 브로마이드 5.72g을 아르곤 기체 기류하에서 테트라히드로푸란 50ml에 현탁시키고, 빙냉하에 n-부틸리튬 10.1ml를 적가했다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반했다. 상술한(2)에서 수득된 화합물 2.05g을 테트라히드로푸란 15ml에 용해시킨 용액을 빙냉하에 상기 혼합물에 적가하고, 3시간후 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반했다. 용액을 1N 암모늄 브로마이드로 중화시키고, 에틸아세테이트 150ml와 물 150ml를 가하여 분배했다. 물로 2회 세정한 후, 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x13cm)에 넣고, 20% 에틸아세테이트/헥산으로 용출시킨 후, 에틸아세테이트/헥산으로 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에틸우리딘이 수득되었다. 수율 : 1.70g, 821.7% ; 융점 153-155℃ ; 질량(m/z) : 510(M+)

원료 분석 : C₂₄H₄₂N₂O₆Si₂:

계산치 : C, 56.44 ; H, 8.29 ; N, 5.48

실측치 : C, 56.67 ; H, 8.41 ; N, 5.36

(4) 상술한(3)에서 수득된 화합물 510mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄플루오라이드 2.2ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 아세트산으로 중화시킨 후, 용매를 감압하에 증류 제거했다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.0x12cm)에 넣고, 6.25% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 다음, 에탄올/헥산으로 결정화시켜 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에티닐시티딘이 수득되었다. 수율 : 234mg, 87.2% ; 융 점 137-139℃ ; 질량(m/z) : 268(M+)

원료분석 : C₁₂H₁₆N₂O₅:

계산치 : C, 53.73 ; H, 6.01 ; N, 10.44

실측치 : C, 53.79 ; H, 5.89 ; N, 10.67

실시예 9

(1) 트리에틸아민 3ml와 1,2,4-트리아졸 1.52mg을 아르곤 기류하에서 아세토니트릴 20ml에 용해시키고, 얼음으로 냉각시켰다. 이것에 이어서 옥시염화인 620㎕를 적가하고, 30분후 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 침전물을 여과 제거한 후, 실시예8 (3)에 수득된 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에틸우리딘 1.2g을 여과액에 가하고, 실온에서 4시간 동안 교반했다. 수산화나트륨을 거쳐 통과시킨 암모니아 기체를 상기 용액에 도입하고, 이어서 클로로포름 100ml와 물 100ml를 가하여 용액을 분배했다. 수성층을 클로로포름으로 세정하고, 결합된 클로로포름을 황산나트륨으로 건조시킨 후, 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x20cm)에 넣고, 9% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 다음, 에틸아세테이트/헥산으로 결정화시켜 3'5'-0-테트라이소프로필디실록사닐-2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에틸시티딘이 수득되었다. (수율 : 1.0g, 83.3% ; 융점 197-200℃ ; 질량(m/z) : 509(M+)

(2) 상술한 (1)에서 수득된 화합물 900mg을 테트라히드로푸란 10ml에 용해시키고, 테트라-n-부틸 암모늄플루오라이드 4ml를 가한 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반했다. 매탄올 5ml를 가한 후, 용매를 감압하에 증류 제거하였다. 잔류물을 실리카겔 칼럼(직경 3.5x10cm)에 넣고, 20% 에탄올/클로로포름으로 용출시킨 다음, 에탄올/에틸아세테이트로 결정화시켜 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-에틸시티딘이 수득되었다. 수율 : 402mg, 85.4% ; 융점 194-196℃ ; 질량(m/z) : 267(M+)

실시예 10

2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘과 옥시염화인을 반응시키고, 통상적인 방법으로 처리하여 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘-5'-인산이 수득되었다.

약학적 조성물 제조예 1

정제

실시예 1의 화합물 50.0 mg

미분된 셀룰로오스 25.0 mg

락토오스 49.5 mg

전분 40.0 mg

탈크 5.0 mg

마그네슘스테아레이트 0.5 mg

필요에 따라 정제된 당코팅 또는 필름코팅 처리하여 당의정 또는 필름-코팅된 정제를 수득하였다.

약학적 조성물 제조예 2

켑슐 : 하기성분들을 충전하였다.

실시예 1의 화합물 50.0 mg

락토오스 50.0 mg

전분 15.0 mg

탈크 5.0 mg

약학적 조성물 제조예 3

미세분말

실시예 1의 화합물 10 %

락토오스 80 %

전분 10 %

약학적 조성물 제조예 4

과립

실시예 1의 화합물 10 %

락토오스 55 %

미세된 셀룰로오스 20 %

전분 15 %

약학적 조성물 제조예 5

실시예 1의 화합물 50.0 mg

글루코오스 100.0 mg

상기 성분들을 정제수에 용해시켜 2ml 단위의 주사 용액으로 제조하였다.

약학적 조성물 제조예 6

좌제

실시예 1의 화합물 100 mg

비텝솔(Witepsole)'H15 950 mg

비텝솔 'E75 950 mg

'비텝솔 : 서독 비텐(Witten) 아-게의 상표명

약학적 조성물의 제조예 7

실시예 1의 화합물 2 g

에틸 파라-히드록시벤조에이트 0.025 g

프로필 파라-히드록시벤조에이트 0.015 g

소듐 라우릴술포네이트 1.5 g

프로필렌글리콜 12.0 g

스테아릴 알코올 22.0 g

화이트바셀린 25.0 g

상기 성분들을 정제수에 용해시켜 100.0 g 단위의 친수성 연고로 제조하였다.

약리학적 실험 :

본 발명 화합물이 시험관 내에서의 각종 종양 세포주들의 세포 성장에 미치는 영향 :

세포특성의 성분은 생존 세포들의 미토콘드리아 탈수소효소에 의한 MTT〔3'-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테으라졸륨브로마이드〕의 청색 포르마잔(formazan) 생성물로의 세포내 환원을 이용한 것으로서, 상기 포르마잔 생성물은 분광 측정법으로 측정할 수 있다. 시험 샘플의 존재 또는 부재하에 10⁴개의 종양 세포를 함유하는 세포 현탁액 100㎕를 37℃, 5% CO₂-95% 공기중에서 96-웰 미세배양 플레이트(팔콜(Falcol) 3072)내에서 72시간 동안 배양했다. 식염수중의 MTT(5mg/ml) 10㎕를 각각의 배양 웰에 가하고, 37℃에서 4시간 동안 배양했다. 각각의 웰에 10% SDS/0.01 N HCI 100 1㎕를 가하여 포르마잔 결정체들을 용해시키고, 37℃에서 24시간 동안 배양했다. 이어서, 플레이트 리더(reader) 상에서 570nm에서 플레이트를 읽었다. 히기 식으로부터 세포 독성 백분율(%)을 계산했다 :

2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘을 증류수에 용해시키고, RPM1 1640 배지중에서 희석했다. 종양 세포주들은 RPM1 1640 배지(닛쓰이 세이야쿠가부시키가이샤제, 일본국 도오쿄 소재)중에 유지시켰다.

하기 표 1은 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘이 각종 종양세포주들의 성장에 미치는 영향을 보여준다. 표에서 IC50 값은 50% 세포독성을 나타내는 농도이다

[표 1]

2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘이 각종 종양 세포주들의 성장에 미치는 영향

Claims

하기 일반식(I)의 2'-메틸리덴피리미딘 뉴클레오시드 화합물 또는 그것의 염 ;

상기식에서, R¹은 아미노 또는 히드록시기이고 ;

R²는 할로겐 또는 저급 알킬(R¹이 아미노인 경우)이거나, 또는 R²는 C_2-4알킬, C_2-4알키닐 또는 할로알킬(R¹이 히드록시기인 경우)이고 ;

R³는 수소 또는 인산 잔기이다.
제1항에 있어서, R¹이 히드록시기인 일반식(I)의 화합물의 토오토머인, 하기 일반식(I')의 화합물 또는 그것의 염 ;

상기식에서, R은 할로겐 C_2-4알킬, C_2-4알키닐 또는 할로알킬 ; R³는 수소 또는 인산 잔기이다.
제1항에 있어서, 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘인 화합물 또는 그것의 염.
활성성분으로서 제1항에서 정의한 화합물을 함유하는 것을 특징으로하는 항암 조성물.
제4항에 있어서, 활성 성분 2'-데옥시-2'-메틸리덴-5-플루오로시티딘 또는 그것이 염인 것을 특징으로 하는 항암조성물.