JPWO2020063676A5

JPWO2020063676A5 -

Info

Publication number: JPWO2020063676A5
Application number: JP2021516798A
Authority: JP
Publication date: 2022-10-03

Description

本開示は、新規構造を有するエキサテカン類似体のリガンド－薬物コンジュゲートに関する。具体的には、本開示は、構造ユニットＹを有するエキサテカン類似体のリガンド－薬物コンジュゲート、それを調製するための方法、前記コンジュゲートを含む医薬組成物、および前記コンジュゲートまたは前記医薬組成物の使用に関する。

化学療法は、外科手術、放射線療法および標的療法と並んで、依然として最も重要な抗癌療法の１つである。多くの種類の非常に効率的な細胞毒素が存在するが、腫瘍細胞と正常細胞の違いは非常に小さく、毒性副作用のためにこれらの抗癌化合物の広範な臨床応用は制限されている。腫瘍細胞表面抗原に対する抗腫瘍モノクローナル抗体の特異性のために、抗体薬物は抗腫瘍療法の第一選択薬物となっている。しかしながら、抗体を抗腫瘍薬物として単独で使用する場合、有効性はしばしば不十分である。

抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、化学的に安定なリンカーを介して、モノクローナル抗体または抗体フラグメントと生物学的に活性な細胞毒素との組み合わせを可能にし、抗体の低い有効性と細胞毒素の毒性副作用を回避しながら、正常細胞または腫瘍細胞の表面抗原への抗体結合の特異性と細胞毒素の高効率を最大限に利用する。つまり、従来の化学療法薬物と比較して、抗体薬物コンジュゲートは腫瘍細胞に正確に結合し、正常細胞への影響を低減することができる（ＭｕｌｌａｒｄＡ，（２０１３年）ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，１２：３２９－３３２頁；ＤｉＪｏｓｅｐｈＪＦ，ＡｒｍｅｌｌｉｎｏＤＣ，（２００４年）Ｂｌｏｏｄ，１０３：１８０７－１８１４頁）。

２０００年に、最初の抗体薬物コンジュゲートであるマイロターグ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）（ゲムツズマブオゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ＷｙｅｔｈＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が、急性骨髄性白血病の処置のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された（ＤｒｕｇｓｏｆｔｈｅＦｕｔｕｒｅ（２０００年）２５（７）：６８６；ＵＳ４９７０１９８；ＵＳ５０７９２３３；ＵＳ５５８５０８９；ＵＳ５６０６０４０；ＵＳ５６９３７６２；ＵＳ５７３９１１６；ＵＳ５７６７２８５；ＵＳ５７７３００１）。

２０１１年８月に、アドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）（ブレンツキシマブベドチン（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂｖｅｄｏｔｉｎ）、ＳｅａｔｔｌｅＧｅｎｅｔｉｃｓＩｎｃ．）が、ホジキンリンパ腫および再発した未分化大細胞リンパ腫の処置のために米国ＦＤＡのファストトラックを通して承認された（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（２００３年）２１（７）：７７８－７８４頁；ＷＯ２００４０１０９５７；ＷＯ２００５００１０３８；ＵＳ７０９０８４３Ａ；ＵＳ７６５９２４１；ＷＯ２００８０２５０２０）。アドセトリス（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標））は新規な標的ＡＤＣ薬物であり、薬物がリンパ腫細胞の標的ＣＤ３０に直接作用し、エンドサイトーシスを引き起こし、その結果、腫瘍細胞のアポトーシスを誘発することを可能にする。

マイロターグとアドセトリスはどちらも血液腫瘍の標的療法であり、血液腫瘍の組織構造は固形腫瘍のそれに比べて比較的単純である。２０１３年２月に、カドサイラ（Ｋａｄｃｙｌａ）（アド－トラスツズマブエムタンシン（ａｄｏ－ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、Ｔ－ＤＭ１）が、トラスツズマブ（商品名：ハーセプチン）耐性かつパクリタキセル耐性のＨＥＲ２陽性の進行性または転移性乳癌患者の処置のためにＦＤＡによって承認された（ＷＯ２００５０３７９９２；ＵＳ８０８８３８７）。カドサイラは、固形腫瘍の処置のためにＦＤＡによって承認された最初のＡＤＣ薬物である。

抗体薬物コンジュゲートで使用される細胞毒性小分子にはいくつかの種類があり、そのうちの１つがカンプトテシン誘導体であり、トポイソメラーゼＩを阻害することによって抗腫瘍効果を示す。抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）におけるカンプトテシン誘導体であるエキサテカン（化学名：（１Ｓ，９Ｓ）－１－アミノ－９－エチル－５－フルオロ－２，３－ジヒドロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］イミダゾ［１，２－ｂ］キノリン－１０，１３（９Ｈ，１５Ｈ）－ジオン）の使用を報告する文献は、ＷＯ２０１４０５７６８７、ＣｌｉｎｉｃａｌＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ（２０１６年）２２（２０）：５０９７－５１０８頁、およびＣａｎｃｅｒＳｃｉ（２０１６年）１０７：１０３９－１０４６頁を含む。しかし、より優れた有効性を備えたＡＤＣ薬物のさらなる開発が依然として必要である。

リガンド、特に抗体と薬物との間のカップリング効果を改善するために、本開示は、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、前記リガンド－薬物コンジュゲートは、式（－Ｄ）：

（式中、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－、－ＮＨ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－および－Ｓ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
または、Ｒ^ａとＲ^ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^１は、ハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
または、Ｒ^ａとＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
式－Ｄ中の波線は、水素原子、またはリンカーユニットもしくは抗体への共有結合を表し、当該抗体は標的細胞によって発現される抗原に結合する；
ｍは０～４の整数である）
の構造を含む、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。

本開示のいくつかの実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、式（－Ｄ_１）を有する化合物またはそのリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
式－Ｄ_１中の波線は、水素原子、またはリンカーユニットもしくは抗体への共有結合を表し、当該抗体は標的細胞によって発現される抗原に結合する；
ｍは０または１である）
である。

本開示のいくつかの実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－、－ＮＨ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－および－Ｓ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
または、Ｒ^ａとＲ^ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^１は、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
または、Ｒ^ａとＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
ｍは０～４の整数である；
ｎは１～１０であり、整数または小数であり得る；
Ｐｃはリガンドである；
Ｌはリンカーユニットである）
である。

本開示のいくつかの実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、
－Ｙ－は、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲンおよびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である。

本開示のいくつかの実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、
前記構造ユニット－Ｙ－は、－Ｏ－（ＣＨ_２）ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である。

本開示のいくつかの実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、
前記構造ユニット－Ｙ－は、－Ｏ－（ＣＨ_２）ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である。

本開示のいくつかの実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、
前記構造ユニット－Ｙ－は、－Ｏ－（ＣＨ_２）ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記構造ユニット－Ｙ－は、以下からなる群から選択される：

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記－Ｙ－のＯ末端は、前記リンカーユニットＬに接続される。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、式（Ｐｃ－Ｌ－Ｄ１）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である；
ｎは１～１０であり、整数または小数であり得る；
Ｐｃはリガンドである；
Ｌはリンカーユニットである）
である。

本開示の別の好ましい実施形態では、本発明によるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、ｎが２～８であり、整数または小数であり得、好ましくはｎは３～８であり、整数または小数であり得る。

本開示の別の好ましい実施形態では、本発明によるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩または溶媒和物において、
前記リンカーユニット－Ｌ－は、－Ｌ^１－Ｌ^２－Ｌ^３－Ｌ^４－であって、
Ｌ^１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ_２－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^３－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－および－Ｃ（Ｏ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択され、ここでＷは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_１－８アルキル－シクロアルキルおよび１～８個の原子を含む直鎖ヘテロアルキルからなる群から選択され、当該ヘテロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含み、当該Ｃ_１－８アルキル、シクロアルキルおよび直鎖ヘテロアルキルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ_２）ｐ^１Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ここでｐ^１は１～２０の整数である；Ｌ^２は好ましくは化学結合である；
Ｌ^３は、２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、当該アミノ酸は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^４は、－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）_ｔ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５（ＣＨ_２）_ｔ－および化学結合からなる群から選択され、ここでｔは１～６の整数である；Ｌ^４は好ましくは－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）ｔ－である；
Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５は同一または異なり、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される。

本開示のいくつかの他の実施形態では、前記リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記リンカーユニットＬ^１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－（ＣＨ_２）ｓ^１－Ｃ（Ｏ）－、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ_２－シクロヘキシル－Ｃ（Ｏ）－、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｓ^２－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ_２－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^３－（ＣＨ_２）ｓ^３－Ｃ（Ｏ）－、および－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）ｓ^４Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択され、ここで、ｓ^１は２～８の整数であり、ｓ^２は１～３の整数であり、ｓ^３は１～８の整数であり、ｓ^４は１～８の整数である；ｓ^１は好ましくは５である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、前記リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記リンカーユニットＬ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ｐ^１は６～１２の整数である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、Ｌ^４は－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）_ｔ－から選択され、Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、ｔは１または２であり、好ましくは２である；Ｌ^４は好ましくは－ＮＲ^５ＣＲ^６Ｒ^７－である；Ｌ^４はより好ましくは－ＮＨＣＨ_２－である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記リンカーユニット－Ｌ－は、－Ｌ^１－Ｌ^２－Ｌ^３－Ｌ^４－であって、
Ｌ^１は、

であり、ｓ^１は２～８の整数である；
Ｌ^２は化学結合である；
Ｌ^３はテトラペプチド残基である；
Ｌ^４は－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）_ｔ－であり、Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、ｔは１または２である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記リンカーユニット－Ｌ－は、－Ｌ^１－Ｌ^２－Ｌ^３－Ｌ^４－であって、
Ｌ^１は－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ_２－シクロヘキシル－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｌ^２は－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_９ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－である；
Ｌ^３はテトラペプチド残基である；
Ｌ^４は－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）ｔ－であり、Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、ｔは１または２である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、Ｌ^３のペプチド残基は、フェニルアラニン（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、バリン（Ｖ）、リジン（Ｋ）、シトルリン、セリン（Ｓ）、グルタミン酸（Ｅ）およびアスパラギン酸（Ｎ）からなる群から選択される１個、２個またはそれ以上のアミノ酸から構成されるアミノ酸残基であり、好ましくはフェニルアラニンおよびグリシンからなる群から選択される１個、２個またはそれ以上のアミノ酸から構成されるアミノ酸残基であり、より好ましくはテトラペプチド残基であり、最も好ましくはＧＧＦＧ（グリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシン）のテトラペプチド残基である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記リンカーユニット－Ｌ－の前記Ｌ^１末端は前記リガンドに接続され、前記リンカーユニット－Ｌ－の前記Ｌ^４末端はＹに接続される。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、－Ｌ－Ｙ－は、

（式中、
Ｌ^１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－（ＣＨ_２）ｓ^１－Ｃ（Ｏ）－および－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ_２－シクロヘキシル－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－または化学結合であり、ｐ^１は６～１２の整数である；
Ｌ^３は、ＧＧＦＧのテトラペプチド残基である；
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒にＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
Ｒ^５は、水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択される；
ｓ^１は２～８の整数であり、好ましくは５である；
ｍは０～４の整数である）
である。

本開示のいくつかの他の実施形態において、提供されるリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、－Ｌ－Ｙ－は、

であり、好ましくは

（式中、
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_９ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－である；
Ｌ^３は、ＧＧＦＧのテトラペプチド残基である；
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｍは０～４の整数である）
である。

本開示のいくつかの他の実施形態において、提供される式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、－Ｌ－Ｙ－は、

（式中、
Ｌ^２は化学結合である；
Ｌ^３は、ＧＧＦＧのテトラペプチド残基である；
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｓ^１は２～８の整数であり、好ましくは５である；
ｍは０～４の整数である）
である。

本開示の別の態様は、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、前記リガンド－薬物コンジュゲートは、式（－Ｌ－Ｙ－）：

（式中、
これは、リンカーフラグメントを介して薬物とリガンドとを連結することによってリガンド－薬物コンジュゲートを形成するために使用することができる；
（式中、
Ｌ^１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－（ＣＨ_２）ｓ^１－Ｃ（Ｏ）－および－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ_２－シクロヘキシル－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－または化学結合であり、ｐ^１は１～２０の整数である；
Ｌ^３は、ＧＧＦＧのテトラペプチド残基である；
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｓ^１は２～８の整数である；
ｍは０～４の整数である）
の構造を含み、
当該式（－Ｌ－Ｙ－）の構造は、リンカーフラグメントを介して前記薬物を前記リガンドに接続することによって、リガンド－薬物コンジュゲートを形成するために使用され得る、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。

（式中、
Ｌ^２は化学結合である；
Ｌ^３は、ＧＧＦＧのテトラペプチド残基である；
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｓ^１は２～８の整数である；
ｍは０～４の整数である）
の構造を含む、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供される式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｗは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_１－８アルキル－シクロアルキルおよび１～８個の原子を含む直鎖ヘテロアルキルからなる群から選択され、当該ヘテロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含み、当該Ｃ_１－８アルキル、シクロアルキルおよび直鎖ヘテロアルキルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ_２）ｐ^１Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ここでｐ^１は１～２０の整数である；
Ｌ^３は、２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、当該アミノ酸は置換されていても無置換であってもよく、置換される場合、当該置換基は任意の利用可能な接続点で置換され得、当該置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から独立して選択される１個以上の基である；
Ｒ^１は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、好ましくはシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、より好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^４およびＲ^５は同一または異なり、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｍは０～４の整数である；
ｎは、０～１０の０以外の整数または小数であり、好ましくは１～１０の整数または小数である；
Ｐｃはリガンドである）
である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、提供される式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は、式（Ｐｃ－Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
ｓ^１は２～８の整数であって、好ましくは５であり、
Ｐｃ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｍおよびｎは、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである）
である。

本開示のリガンド－薬物コンジュゲートのリンカーユニット－Ｌ－Ｙ－は、限定されるものではないが、以下を含む：

本開示の式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートは、限定されるものではないが、以下を含む：

式中、Ｐｃおよびｎは、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである。

本開示のいくつかの他の実施形態では、前記リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、Ｐｃは抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体からなる群から選択され、好ましくはモノクローナル抗体である。

本開示のいくつかの他の実施形態では、前記リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ｃ－Ｍｅｔ抗体、抗ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）抗体、抗ＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ４４抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗Ａ３３抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗ＭＵＣｌ抗体、抗ルイスＹ抗体（ａｎｔｉ－ＬｅｗｉｓＹａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＶＥＧＦＲ抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗インテグリン抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗テネイシン－Ｃ抗体（ａｎｔｉ－Ｔｅｎａｓｃｉｎ－Ｃａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体および抗メソテリン抗体（ａｎｔｉ－Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ）、ならびにそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される。

本開示のいくつかの他の実施形態では、前記リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ニモツズマブ（Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、エノブリツズマブ（Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、エミベツズマブ（Ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、イノツズマブ（Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ）、ピナツズマブ（Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ）、ブレンツキシマブ（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ビバツズマブ（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、ロルボツズマブ（Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）、ｃＢＲ９６およびグレマツムマブ（Ｇｌｅｍａｔｕｍａｍａｂ）、ならびにそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される。

本開示の式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートは、限定されるものではないが、以下の式を含む：

式中、ｎは０～１０の０でない整数または小数であり、好ましくはｎは１～１０の整数または小数である；より好ましくは、ｎは２～８であり、整数または小数であり得る；最も好ましくは、ｎは３～８であり、整数または小数であり得る。

本開示の別の態様は、式（Ｄ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩：

（式中、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－、－ＮＨ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－および－Ｓ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
または、Ｒ^ａとＲ^ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^１は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
または、Ｒ^ａとＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
ｍは０～４の整数である）
を提供する。

本開示の別の態様の好ましい態様では、提供される式（Ｄ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩は、式（Ｄ_１）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩：

（式中、
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である）
である。

本開示の式（Ｄ）の化合物は、限定されるものではないが、次の表のものまたはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。

本開示の別の態様の好ましい実施形態は、式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩：

（式中、
Ｗは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_１－８アルキル－シクロアルキルおよび１～８個の原子を含む直鎖ヘテロアルキルからなる群から選択され、当該ヘテロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含み、当該Ｃ_１－８アルキル、シクロアルキルおよび直鎖ヘテロアルキルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ_２）ｐ^１Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ここでｐ^１は１～２０の整数である；
Ｌ^３は、２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、当該アミノ酸は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換され、置換される場合、当該置換基は任意の利用可能な接続点で置換され得、当該置換基は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から独立して選択される１個以上の基である；
Ｒ^１は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^４およびＲ^５は同一または異なり、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｍは０～４の整数である）
を提供する。

本発明の別の態様の好ましい実施形態では、提供される式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩は、式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩：

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｓ^１およびｍは、式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである）
である。

本開示の式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物は、限定されるものではないが、次の表のものまたはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。

本開示の別の態様は、式（Ｄ_１）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下のステップ：

前記式（Ｙ_１）の化合物と前記式（Ｄｒ）の化合物を縮合させて、前記式（Ｄ_１）の化合物を得るステップ
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびｍは、式（Ｄ_１）で定義されるとおりである）
を含む、方法を提供する。

本開示の別の態様は、式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下のステップ：

前記式（ＩＡ）の化合物と前記式（ＩＢ）の化合物を縮合させて、前記式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物を得るステップ
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｓ^１およびｍは、式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである）
を含む、方法を提供する。

本開示の別の態様は、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製する方法であって、以下のステップ：

Ｐｃを還元後に前記式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物と結合させて、前記式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物を得るステップ；還元剤は好ましくはＴＣＥＰである；
（式中、
Ｐｃはリガンドである；
Ｗ、Ｌ^２、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｍおよびｎは、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである）
を含む、方法を提供する。

さらに、本開示の別の態様は、本開示による治療有効量のリガンド－薬物コンジュゲートもしくは化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物に関する。

さらに、本開示の別の態様は、本開示による式（Ｄ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物に関する。

さらに、本開示の別の態様は、リガンドおよび前記リガンドに連結された薬物を含むリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、前記薬物は、本開示による式（Ｄ）の化合物、式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩からなる群から選択され、前記薬物は好ましくはリンカーを介して前記リガンドに連結され、前記リガンドは好ましくはモノクローナル抗体である、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。

さらに、本開示の別の態様は、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための方法であって、本開示による式（Ｄ）の化合物、式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を前記リガンドに、好ましくはリンカーを介して、連結するステップを含み、前記リガンドは好ましくはモノクローナル抗体である、方法に関する。

さらに、本開示の別の態様は、薬物として使用するための、本開示によるリガンド－薬物コンジュゲートもしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。

さらに、本開示の別の態様は、腫瘍を処置または予防するための薬剤の調製における、本開示によるリガンド－薬物コンジュゲートもしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはそれらを含む医薬組成物の使用であって、好ましくは、前記腫瘍は、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＥＧＦＲの発現に関連する癌である、使用に関する。

さらに、本開示の別の態様は、癌を処置または予防するための薬剤の調製における、本開示によるリガンド－薬物コンジュゲートもしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはそれらを含む医薬組成物の使用であって、前記癌は好ましくは、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、尿道癌、膀胱癌、肝臓癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、食道癌、黒色腫、神経膠腫、神経芽細胞腫、肉腫、肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病）、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌およびリンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または再発性未分化大細胞リンパ腫）からなる群から選択される、使用に関する。

さらに本開示の別の態様は、腫瘍を処置および／または予防するための方法であって、それを必要とする患者に、本開示による治療有効量のリガンド－薬物コンジュゲートもしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはそれらを含む医薬組成物を投与することを含み、好ましくは、前記腫瘍は、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＥＧＦＲの発現に関連する癌である、方法に関する。

さらに、本開示の別の態様は、癌を処置または予防するための方法であって、それを必要とする患者に、本開示による治療有効量のリガンド－薬物コンジュゲートもしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、またはそれらを含む医薬組成物を投与することを含み、前記癌は好ましくは、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、尿道癌、膀胱癌、肝臓癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、食道癌、黒色腫、神経膠腫、神経芽細胞腫、肉腫、肺癌（例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌）、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病）、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、膵臓癌およびリンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または再発性未分化大細胞リンパ腫）からなる群から選択される、方法に関する。

活性化合物は、任意の適切な経路による投与に適した形態に処方され得、活性化合物は、好ましくは、単位用量の形態、または患者が単回用量で自己投与できる形態である。本発明の化合物または組成物の単位用量の形態は、錠剤、カプセル、カシェ、瓶詰めポーション、粉末、顆粒、ロゼンジ、坐剤、再生粉末または液体製剤であり得る。

本発明の処置方法で使用される化合物または組成物の投与量は、一般に、疾患の重症度、患者の体重、および化合物の相対的な有効性に応じて変化する。しかしながら、一般的な指針として、適切な単位用量は０．１～１０００ｍｇであり得る。

活性化合物に加えて、本発明の医薬組成物はまた、充填剤（希釈剤）、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、賦形剤などを含む１つ以上の助剤を含むことができる。投与様式に応じて、組成物は、０．１～９９重量％の活性化合物を含むことができる。

活性成分を含む医薬組成物は、経口投与に適した形態、例えば、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性懸濁液、分散性粉末もしくは顆粒、エマルジョン、硬質もしくは軟質カプセル、シロップまたはエリキシルであり得る。経口組成物は、医薬組成物を調製するための当技術分野における任意の既知の方法に従って調製することができる。そのような組成物は、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤または薬学的に許容される湿潤剤などを含むことができる。そのような組成物はまた、心地よくて口当たりの良い医薬製剤を提供するために、甘味料、香味料、着色剤および防腐剤からなる群から選択される１つ以上の成分を含むことができる。

水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された活性成分を含む。水性懸濁液はまた、１つ以上の防腐剤、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味料、および１つ以上の甘味料を含むことができる。

油懸濁液は、活性成分を植物油中に懸濁させることによって処方することができる。油懸濁液は増粘剤を含むことができる。上述の甘味料および香味料を添加して、口当たりの良い製剤を提供することができる。

医薬組成物はまた、水性懸濁液を調製するための分散性粉末および顆粒であり得、これらは、水を添加して１つ以上の分散剤、湿潤剤、懸濁剤または防腐剤と混合することによって活性成分を提供する。甘味料、香味料および着色剤などの他の賦形剤を添加することもできる。これらの組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を添加することによって保存することができる。

本開示の医薬組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であり得る。

医薬組成物は、無菌の注射可能な水溶液の形態であり得る。使用され得る許容可能なビヒクルまたは溶媒は、水、リンゲル液または等張塩化ナトリウム溶液である。無菌の注射可能な製剤は、活性成分が油相に溶解している無菌の注射可能な水中油型マイクロエマルジョンであり得る。例えば、活性成分は大豆油とレシチンの混合物に溶解される。次に、油溶液を水とグリセリンの混合物に加え、処理してマイクロエマルジョンを形成する。注射可能な溶液またはマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射によって患者の血流に導入され得る。あるいは、溶液およびマイクロエマルジョンは、好ましくは、本開示の化合物の一定の循環濃度を維持する方法で投与される。この一定の濃度を維持するために、連続的静脈内送達デバイスが使用され得る。そのようなデバイスの例は、ＤｅｌｔｅｃＣＡＤＤ－ＰＬＵＳ．ＴＭ．５４００静脈内注入ポンプである。

医薬組成物は、筋肉内および皮下投与用の無菌の注射可能な水性または油性懸濁液の形態であり得る。そのような懸濁液は、既知の技術に従って、上記のような適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を配合され得る。無菌の注射可能な製剤はまた、非毒性で非経口的に許容される希釈剤または溶媒で調製された無菌の注射可能な溶液または懸濁液であり得る。さらに、滅菌固定油を溶媒または懸濁媒体として容易に使用することができる。

本開示の化合物は、直腸投与用の坐剤の形態で投与することができる。これらの医薬組成物は、常温では固体であるが直腸内では液体であり、それにより直腸内で溶融して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と薬物を混合することによって調製することができる。このような材料には、カカオバター、グリセリンゼラチン、硬化植物油、さまざまな分子量のポリエチレングリコールの混合物およびそれらの脂肪酸エステルが含まれる。

薬物の投与量が、限定されるものではないが、以下の因子：特定の化合物の活性、患者の年齢、患者の体重、患者の一般的な健康状態、患者の行動、患者の食事、投与時間、投与経路、排泄率、薬物の組み合わせなど、を含むさまざまな因子に依存することは当業者に周知である。さらに、最適な処置、例えば、処置モード、式（Ｉ）の化合物の１日用量またはその薬学的に許容される塩のタイプは、従来の治療レジメンに従って検証することができる。

：本開示のＡＤＣ－１９の血漿安定性試験の結果（図１Ａ）。本開示のＡＤＣ－１８の血漿安定性試験の結果（図１Ｂ）。本開示のＡＤＣ－２０の血漿安定性試験の結果（図１Ｃ）。ＪＩＭＴ－１腫瘍ベアリングマウス（ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇｍｉｃｅ）に対する本開示のＡＤＣ－２１およびＡＤＣ－２４の有効性の評価。ヌードマウスにおけるヒト乳癌細胞ＳＫ－ＢＲ－３異種移植腫瘍に対する本開示のＡＤＣの有効性の評価。本開示のＡＤＣ－２５の血漿安定性試験の結果。ヌードマウスにおけるヒト脳アストロブラストーマＵ８７ＭＧ異種移植腫瘍に対する本開示のＡＤＣの有効性。ヌードマウスにおけるヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト５６２異種移植腫瘍に対する本開示のＡＤＣの有効性。ヌードマウスにおけるヒト神経膠腫Ｕ８７ＭＧ異種移植腫瘍に対する本開示のＡＤＣの有効性。

発明の詳細な説明

定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者の一般的な理解と一致する。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法および材料を、本開示の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料が本明細書に記載されている。本開示を説明および保護する場合、以下の用語は、以下の定義に従って使用される。

本開示において商品名が使用される場合、出願人は、その製品の製剤、ジェネリック薬物および活性成分を当該商品名の下に含めることを意図している。

特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲において使用される用語は、以下に記載される意味を有する。

「リガンド」とは、標的細胞に関連する抗原または受容体を認識して結合することができる高分子化合物を指す。リガンドの役割は、リガンドに結合する標的細胞集団に薬物を送達することである。そのようなリガンドには、限定されるものではないが、タンパク質ホルモン、レクチン、成長因子、抗体、または細胞に結合できる他の分子が含まれる。本開示の一実施形態では、リガンドはＰｃによって表される。リガンドは、リガンド上のヘテロ原子を介して連結ユニットと結合を形成することができる。リガンドは、好ましくは、抗体またはその抗原結合フラグメントである。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト化抗体およびマウス抗体からなる群から選択され、好ましくはモノクローナル抗体である。

「薬物」という用語は、腫瘍細胞の正常な成長を強力に妨害することができる化学分子であり、Ｄｒによって表される細胞毒性薬物を指す。原則として、すべての細胞毒性薬物は、十分に高い濃度で腫瘍細胞を殺すことができる。しかし、特異性の欠如のために、腫瘍細胞を殺しながら、正常細胞のアポトーシスと深刻な副作用を引き起こす可能性がある。この用語は、細菌、真菌、植物または動物由来の小分子毒素または酵素的に活性な毒素などの毒素、放射性同位体（例えば、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２およびＬｕの放射性同位体）、毒性薬物、化学療法薬物、抗生物質および核酸分解酵素、好ましくは毒性薬物を含む。

「リンカーユニット（ｌｉｎｋｅｒｕｎｉｔ）」、「連結フラグメント（ｌｉｎｋｉｎｇｆｒａｇｍｅｎｔ）」または「連結ユニット（ｌｉｎｋｉｎｇｕｎｉｔ）」という用語は、一方の末端でリガンドに連結され、別の末端で薬物に連結されるか、または他のリンカーに連結されてから薬物に連結される、化学構造フラグメントまたは結合を指す。本開示の好ましい実施形態は、ＬおよびＬ^１～Ｌ^４によって表され、ここで、Ｌ^１末端はリガンドに連結され、Ｌ^４末端は構造ユニットＹを介して薬物（Ｄｒ）に連結される。

延長ユニット、スペーサーユニット、およびアミノ酸ユニットを含むリンカーは、ＵＳ２００５－０２３８６４９Ａ１に記載されているものなど、当技術分野で既知の方法によって合成することができる。リンカーは、細胞内での薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾン）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカーを使用することができる（Ｃｈａｒｉｅｔａｌ，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７－１３１頁（１９９２年）；米国特許番号第５，２０８，０２０号）。

「リガンド－薬物コンジュゲート」という用語は、リガンドが安定な連結ユニットを介して生物学的に活性な薬物に連結されることを意味する。本開示において、「リガンド－薬物コンジュゲート」は、好ましくは抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、これは、モノクローナル抗体または抗体フラグメントが安定な連結ユニットを介して生物学的活性を有する毒性薬物に連結されることを意味する。

本開示で使用されるアミノ酸の３文字コードおよび１文字コードは、Ｊ．ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ，２４３，３５５８頁（１９６８年）に記載されているとおりである。

「抗体」という用語は、免疫グロブリン、すなわち２つの同一の重鎖と２つの同一の軽鎖の間の鎖間ジスルフィド結合によって一緒に接続された４ペプチド鎖構造を指す。異なる免疫グロブリン重鎖定常領域は、異なるアミノ酸組成および配列を示し、したがって、異なる抗原性を示す。したがって、免疫グロブリンは、免疫グログリンアイソタイプと呼ばれる５つのタイプ、すなわちＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥに分類することができ、それぞれ対応する重鎖μ、δ、γ、αおよびεを有する。ヒンジ領域のアミノ酸組成と重鎖ジスルフィド結合の数および位置に応じて、同じタイプのＩｇをさらに異なるサブタイプに分類することができ、例えば、ＩｇＧはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に分類することができる。軽鎖は、異なる定常領域に基づいてκ鎖またはλ鎖に分類することができる。５つのタイプのＩｇはそれぞれκ鎖またはλ鎖を有することができる。本開示に記載される抗体は、好ましくは標的細胞上の細胞表面抗原に対する特異的抗体であり、非限定的な例は、以下の抗体のうちの１つ以上である：抗ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ｃ－Ｍｅｔ抗体、抗ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）抗体、抗ＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ４４抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗Ａ３３抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗ＭＵＣｌ抗体、抗ルイスＹ抗体（ａｎｔｉ－ＬｅｗｉｓＹａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＶＥＧＦＲ抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗インテグリン抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗テネイシン－Ｃ抗体、抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体または抗メソテリン抗体、好ましくはトラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（商品名：ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ））、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（２Ｃ４としても知られる、商品名：パージェタ（Ｐｅｒｊｅｔａ））、ニモツズマブ（Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）（商品名：Ｔａｉｘｉｎｓｈｅｎｇ）、エノブリツズマブ（Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、エミベツズマブ（Ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、イノツズマブ（Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ）、ピナツズマブ（Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ）、ブレンツキシマブ（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ビバツズマブ（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、ロルボツズマブ（Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）、ｃＢＲ９６およびグレマツムマブ（Ｇｌｅｍａｔｕｍａｍａｂ）。

抗体の重鎖または軽鎖のＮ末端に隣接する約１１０アミノ酸の配列は、非常に可変であり、可変領域（Ｆｖ領域）として知られる；Ｃ末端に隣接する残りのアミノ酸配列は、比較的安定であり、定常領域として知られる。可変領域は、３つの超可変領域（ＨＶＲ）と４つの比較的保存的なフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。抗体の特異性を決定する３つの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても知られている。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）または各重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲ領域および４つのＦＲ領域からなり、アミノ末端からカルボキシル末端への順序は、以下のとおりである：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。軽鎖の３つのＣＤＲ領域はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指す。

本開示の抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体、好ましくはヒト化抗体および完全ヒト化抗体を含む。

本開示における「マウス抗体」という用語は、当技術分野の知識および技術に従ってマウスから調製される抗体を指す。調製中に、試験対象に特定の抗原を注射し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離する。

「キメラ抗体」という用語は、マウス抗体の可変領域をヒト抗体の定常領域と融合させることによって得られる抗体であり、キメラ抗体は、マウス抗体によって誘導される免疫応答を軽減することができる。キメラ抗体を確立するために、マウス特異的モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを確立し、可変領域遺伝子をマウスハイブリドーマ細胞からクローニングする；次いで、ヒト抗体の定常領域遺伝子を必要に応じてクローニングする；そして、ヒトの定常領域遺伝子をマウスの可変領域遺伝子と接続してキメラ遺伝子を形成し、これを続いて発現ベクターに挿入する；最後に、キメラ抗体分子を真核または原核システムで発現させる。

「ヒト化抗体」という用語は、ＣＤＲ移植抗体としても知られており、マウスＣＤＲ配列をヒト抗体可変領域フレームワークに移植することによって生成される抗体、すなわち、異なるタイプのヒト生殖細胞系列抗体フレームワーク配列において産生される抗体を指す。ヒト化抗体は、キメラ抗体によって運ばれる多数のマウスタンパク質成分によって誘発される異種応答を克服することができる。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系列抗体遺伝子配列をカバーする公開ＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から取得することができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系列配列データベース（ｗｗｗ．ｍｒｃｃｐｅ．ｃｏｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅで利用可能）、ならびにＫａｂａｔ，ＥＡ，ｅｔａｌ．１９９１年ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，第５版に見出すことができる。免疫原性の低下によって引き起こされる活性の低下を回避するために、ヒト抗体の可変領域のフレームワーク配列を最小限の逆変異または復帰変異に供して、活性を維持することができる。本開示のヒト化抗体はまた、ファージディスプレイによってＣＤＲ親和性成熟が行われるヒト化抗体を含む。ヒト化に関与するマウス抗体を使用する方法をさらに記載した文献としては、例えば、Ｑｕｅｅｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，２８６９頁，１９９１年、およびＷｉｎｔｅｒらの方法［Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１，５２２頁（１９８６年）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２，３２３－３２７頁（１９８８年）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９，１５３４頁（１９８８年）］が挙げられる。

「完全ヒト化抗体」という用語は、「完全ヒト化モノクローナル抗体」としても知られており、ここで、抗体の可変領域および定常領域は両方ともヒト由来であり、免疫原性および副作用を排除している。モノクローナル抗体の開発は、４つの段階、すなわち、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体および完全ヒト化モノクローナル抗体を経てきた。本開示の抗体は、完全ヒト化モノクローナル抗体である。完全ヒト化抗体調製の関連技術には、主に、ヒトハイブリドーマ技術、ＥＢＶ形質転換Ｂリンパ球技術、ファージディスプレイ技術、トランスジェニックマウス抗体調製技術、単一Ｂ細胞抗体調製技術などが含まれる。

「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原への特異的結合能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。全長抗体のフラグメントを使用して、抗原との結合機能を達成できることが示されている。用語「抗原結合フラグメント」における結合フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから構成される一価フラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合によって接続された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントである、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）片腕抗体（ｏｎｅ－ａｒｍａｎｔｉｂｏｄｙ）のＶＨおよびＶＬドメインからなるＦｖフラグメント；（ｖ）ＶＨドメインから構成される単一ドメインまたはｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄｅｔａｌ．（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４－５４６頁）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）または（ｖｉｉ）任意に合成リンカーによって接続された２つ以上の単離されたＣＤＲの組合せが含まれる。さらに、ＦｖフラグメントのＶＬドメインおよびＶＨドメインは２つの別個の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を使用することによりそれらを合成リンカーによって接続して、一本のタンパク質鎖を生成することができ、該一本のタンパク質鎖では、ＶＬドメインとＶＨドメインをペアにすることによって一価分子が形成されている（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）と呼ばれる；例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ：２４２：４２３－４２６頁、およびＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９８８年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ８５：５８７９－５８８３頁を参照）。この一本鎖抗体は、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に含まれることも意図されている。そのような抗体フラグメントは、当業者に既知の従来の技術を使用して得られ、インタクト抗体の場合と同じ方法を使用することによって機能的フラグメントについてスクリーニングされる。抗原結合部位は、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクト免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的破壊によって産生され得る。抗体は、異なるアイソタイプの抗体、例えば、ＩｇＧ（例：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体であり得る。

Ｆａｂは、ＩｇＧ抗体分子をパパイン（Ｈ鎖の２２４位のアミノ酸残基を切断する）で処理することによって得られる抗体フラグメントである。Ｆａｂフラグメントは、約５０，０００の分子量を有し、抗原結合活性を有し、Ｈ鎖のＮ末端側の約半分とＬ鎖全体がジスルフィド結合を介して結合している。

Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域にある２つのジスルフィド結合の下流部分をペプシンで消化することによって得られる抗体フラグメントであり、約１００，０００の分子量を有し、抗原結合活性を有し、ヒンジ位置で結合した２つのＦａｂ領域を含む。

Ｆａｂ’は、上記のＦ（ａｂ’）２のヒンジ領域でジスルフィド結合を切断することによって得られる抗体フラグメントであり、約５０，０００の分子量を有し、抗原結合活性を有する。

さらに、Ｆａｂ’は、抗体のＦａｂ’フラグメントをコードするＤＮＡを原核生物発現ベクターまたは真核生物発現ベクターに挿入し、次いでこれを原核生物または真核生物に導入してＦａｂ’を発現させることによって産生され得る。

「一本鎖抗体」、「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、リンカーによって接続された抗体重鎖可変ドメイン（または領域；ＶＨ）および抗体軽鎖可変ドメイン（または領域；ＶＬ）を含む分子を指す。このようなｓｃＦｖ分子は、ＮＨ_２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨまたはＮＨ_２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨの一般的な構造を有し得る。先行技術における適切なリンカーは、繰り返しＧＧＧＧＳアミノ酸配列またはそのバリアントからなり、例えば１～４回の繰り返しを有するバリアントを使用する（Ｈｏｌｌｉｇｅｒｅｔａｌ．（１９９３年），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－６４４８頁）。本開示のために使用することができる他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎｅｔａｌ．（１９９５年），ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．８：７２５－７３１頁、Ｃｈｏｉｅｔａｌ．（２００１年），Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：９４－１０６頁、Ｈｕｅｔａｌ．（１９９６年），ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５６：３０５５－３０６１頁、Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖｅｔａｌ．（１９９９年），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：４１－５６頁、およびＲｏｏｖｅｒｓｅｔａｌ．（２００１年），ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌによって記載されている。

「ＣＤＲ」という用語は、主に抗原結合に寄与する抗体の可変ドメイン内の６つの超可変領域の１つを指す。６つのＣＤＲについて最も一般的に使用される定義の１つは、ＫａｂａｔＥ．Ａ．ｅｔａｌ．（１９９１年）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｔｅｒｅｓｔ．ＮＩＨＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ９１－３２４２頁によって与えられる。本明細書で使用される場合、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義は、軽鎖可変ドメインのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３またはＬ１、Ｌ２、Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインのＣＤＲ２およびＣＤＲ３（ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３またはＨ２、Ｈ３）にのみ適用される。

「抗体フレームワーク」という用語は、可変ドメインの抗原結合ループ（ＣＤＲ）のスキャフォールド（ｓｃａｆｆｏｌｄ）として機能する可変ドメインＶＬまたはＶＨの一部を指す。本質的に、それはＣＤＲのない可変ドメインである。

「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原の部位を指す。エピトープは、典型的には、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個の連続または非連続アミノ酸を固有の空間コンフォメーション中に含む。例えば、ＥｐｉｔｏｐｅＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、第６６巻、Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６年）を参照されたい。

「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」および「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原上のエピトープへの抗体の結合を指す。典型的には、抗体は、約１０^－７Ｍ未満（例えば、約１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍもしくは１０^－１０Ｍ未満またはそれ以下）の親和性（ＫＤ）で結合する。

「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を指す。核酸分子は一本鎖でも二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。核酸は、別の核酸配列と機能的な関係に置かれると、「効果的に連結」される。例えば、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列の転写に影響を与える場合、当該プロモーターまたはエンハンサーはそのコード配列に効果的に連結されている。

「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。一実施形態では、ベクターは「プラスミド」であり、プラスミドとは、追加のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の実施形態では、ベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションすることができる。本明細書に開示されるベクターは、それらが導入された宿主細胞において自己複製することができる（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）か、または宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それによって宿主ゲノムと共に複製される（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）。

抗体および抗原結合フラグメントを産生および精製するための方法は、当技術分野において周知であり、例えば、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＡｎｔｉｂｏｄｙＴｅｃｈｎｉｃａｌＧｕｉｄｅ、第５～８章および第１５章が挙げられる。抗原結合フラグメントはまた、従来の方法によって調製することができる。本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、非ヒトＣＤＲ領域に１つ以上のヒトＦＲ領域を付加するように遺伝子操作される。ヒトＦＲ生殖細胞系列配列は、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）Ｗｅｂサイト（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）またはＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ２００１１ＳＢＮ０１２４４１３５１からのＩＭＧＴヒト抗体可変生殖細胞系列遺伝子データベースおよびＭＯＥソフトウェアをアラインメントすることによって取得することができる。

「宿主細胞」という用語は、発現ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞には、細菌、微生物、植物または動物細胞が含まれ得る。形質転換されやすい細菌には、大腸菌やサルモネラ菌株などの腸内細菌科；枯草菌などのバチルス科；肺炎球菌；連鎖球菌およびインフルエンザ菌のメンバーが含まれる。適切な微生物には、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）およびピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）が含まれる。適切な動物宿主細胞株には、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣細胞株）およびＮＳ０細胞が含まれる。

本開示の操作された抗体または抗原結合フラグメントは、従来の方法によって調製および精製され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ発現ベクターに組込むことができる。組換え免疫グロブリン発現ベクターは、ＣＨＯ細胞に安定的にトランスフェクトすることができる。より推奨される既存の技術として、哺乳動物発現系は、特にＦｃ領域の高度に保存されたＮ末端部位において、抗体のグリコシル化をもたらすことができる。陽性クローンを、バイオリアクタ内の無血清培地で増殖させて、抗体を産生する。分泌された抗体を含む培養培地は、従来の技術によって精製することができる。例えば、精製は、調整された緩衝液を含むＡまたはＧセファロースＦＦカラムを使用して行われる。非特異的に結合した成分は、溶出によって除去される。結合した抗体をｐＨグラジエント法により溶出し、抗体フラグメントをＳＤＳ－ＰＡＧＥにより検出して回収する。抗体は、従来の方法によってろ過および濃縮することができる。可溶性の凝集体および多量体も、サイズ排除またはイオン交換などの従来の方法によって除去することができる。得られた生成物は、－７０℃などで直ちに凍結するか、または凍結乾燥する必要がある。

「ペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して互いに接続された２つ以上のアミノ酸分子からなる、アミノ酸とタンパク質の間の化合物フラグメントを指す。ペプチドは、タンパク質の構造的および機能的フラグメントである。ホルモン、酵素などは本質的にペプチドである。

「糖類」という用語は、Ｃ、Ｈ、およびＯの３つの元素から構成される生体高分子を指し、単糖類、二糖類および多糖類に分類され得る。

「蛍光プローブ」という用語は、紫外－可視－近赤外領域に特徴的な蛍光を有する一種の蛍光分子を指す。蛍光プローブの蛍光特性（励起および発光波長、強度、寿命および偏光など）は、極性、屈折率、粘度などの環境の特性に応じて敏感に変化し得る。蛍光プローブと核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）、タンパク質または他の高分子構造との間の非共有結合的相互作用は、１つ以上の蛍光特性の変化を可能にし、このことは、高分子物質の特性および挙動を研究するために使用され得る。

「毒性薬物」という用語は、細胞の機能を阻害または停止し、かつ／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。毒性薬物には、腫瘍の処置に使用され得る毒素および他の化合物が含まれる。

「毒素」という用語は、細胞の成長または増殖に有害な影響を与え得る任意の物質を指す。毒素は、細菌、真菌、植物または動物由来の小分子毒素およびそれらの誘導体であり得、エキサテカンなどのカンプトテシン誘導体、メイタンシノイドおよびＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４などのその誘導体（ＣＮ１０１５７３３８４）、アウリスタチンＦ（ＡＦ）およびＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、３０２４（ＷＯ２０１６／１２７７９０Ａ１、化合物７）などのその誘導体、ジフテリア毒素、外毒素（ｅｘｏｔｏｘｉｎ）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）、α－サルシン（α－ｓａｒｃｉｎ）、シナアブラギリ毒性タンパク質（Ａｌｅｕｔｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎ）、ジアンチン毒性タンパク質（ｄｉａｎｔｈｉｎｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎ）、ヨウシュヤマゴボウ毒性タンパク質（Ｐｈｙｔｏｌａｃａａｍｅｒｉｃａｎａｔｏｘｉｃｐｒｏｔｅｉｎ）（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ－Ｓ）、ツルレイシ阻害剤（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｃｈａｒａｎｔｉａｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サボンソウ阻害剤（ｓａｐａｏｎａｒｉａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテシン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む。

「化学療法薬物」という用語は、腫瘍を処置するために使用され得る化合物を指す。この定義には、癌の成長を促進するホルモンの効果を調節、低減、ブロック、または阻害するように作用する抗ホルモン剤も含まれ、これらはしばしば全身療法または全体療法の形態である。それらはホルモンであり得る。化学療法薬物の例には、チオテパなどのアルキル化剤；シクロスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））；ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、インプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）およびピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）などのアルキルスルホネート；ｂｅｎａｏｄｏｐａ、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａおよびｕｒｅｄｏｐａなどのアジリジン（ａｚｉｒｉｄｉｎｅ）；アルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｍｅｌａｍｉｎｅ）、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチルオロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むアジリジン（ａｚｉｒｉｄｉｎｅ）およびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、ニトロビン塩酸塩（ｎｉｔｒｏｂｉｎｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）などのナイトロジェンマスタード；メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラムスチン（ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ）；カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソウレア；アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、アクチノマイシンＣ（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎＣ）、カリケアミシン、カルビシン、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキシ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリンなどの抗生物質；ストレプトゾシン、ツベルクロシジン（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；メトトレキサート、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６－メルカプトプテリン（６－ｍｅｒｃａｐｔｏｐｔｅｒｉｎ）、チオメトプテリン（ｔｈｉｏｍｅｔｈｏｐｔｅｒｉｎ）、チオグアノプテリン（ｔｈｉｏｇｕａｎｏｐｔｅｒｉｎ）などのプテリンアナログ；アンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン、６－アジリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｇｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストトラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）などのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナリン；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃａｃｉｄ）などの葉酸サプリメント；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；バイアスントレン（ｂｉａｓｎｔｒｅｎｅ）；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラクリン；ピントスタチン（ｐｉｎｔｏｓｔａｔｉｎ）；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃａｃｉｄ）；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ジブロモジュルシトール（ｄｉｂｒｏｍｏｄｕｌｃｉｔｏｌ）；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（“Ａｒａ－Ｃ”）；シクロホスファミド；チオテパ；パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－ＭｙｅｒｓＳｑｕｉｂｂＯｎｃｏｌｏｇｙ、プリンストン、ニュージャージー州）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－ＰｏｕｌｅｎｃＲｏｒｅｒ、アントニー、フランス）などのタキサン；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどのプラチナアナログ；ビンブラスチン；プラチナ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノルビシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸エスペラミシン；カペシタビン；および上記の物質のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれる。この定義には、腫瘍に対するホルモンの効果を調節または阻害できる抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害剤４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびフェアストン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲン；ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；ならびに上記の物質のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体も含まれる。

「アルキル」という用語は、１～２０個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖基である飽和脂肪族炭化水素基、好ましくは１～１２個の炭素原子を有するアルキル、より好ましくは１～１０個の炭素原子を有するアルキル、最も好ましくは１～６個の炭素原子を有するアルキルを指す。非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチル、ｎ－ヘプチル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、４－メチルヘキシル、５－メチルヘキシル、２，３－ジメチルペンチル、２，４－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２－エチルペンチル、３－エチルペンチル、ｎ－オクチル、２，３－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルヘキシル、２，５－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルヘキシル、４，４－ジメチルヘキシル、２－エチルヘキシル、３－エチルヘキシル、４－エチルヘキシル、２－メチル－２－エチルペンチル、２－メチル－３－エチルペンチル、ｎ－ノニル、２－メチル－２－エチルヘキシル、２－メチル－３－エチルヘキシル、２，２－ジエチルペンチル、ｎ－デシル、３，３－ジエチルヘキシル、２，２－ジエチルヘキシル、およびそれらのさまざまな分岐異性体が含まれる。より好ましくは、アルキル基は１～６個の炭素原子を有する低級アルキルであり、非限定的な例には、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチルなどが含まれる。アルキルは、置換されていても無置換であってもよい。置換される場合、置換基は、任意の利用可能な接続点で置換され得る。置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオおよびオキソからなる群から独立して選択される１つ以上の基である。

「ヘテロアルキル」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１つ以上のヘテロ原子を含有するアルキルを指し、ここでアルキルは上記で定義されたとおりである。

「アルキレン」という用語は、親アルカンの同じ炭素原子または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することから誘導される２個の残基を有する、飽和直鎖または分岐脂肪族炭化水素基を指す。アルキレンは、１～２０個の炭素原子、好ましくは１～１２個の炭素原子、より好ましくは１～６個の炭素原子を有する直鎖または分岐基である。アルキレンの非限定的な例には、限定されるものではないが、メチレン（－ＣＨ_２－）、１，１－エチレン（－ＣＨ（ＣＨ_３）－）、１，２－エチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２）－、１，１－プロピレン（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）－）、１，２－プロピレン（－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－）、１，３－プロピレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）、１，４－ブチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）、１，５－ペンチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）などが含まれる。アルキレンは、置換されていても無置換であってもよい。置換される場合、置換基は、任意の利用可能な接続点で置換され得る。置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオおよびオキソからなる群から独立して任意に選択される１つ以上の基である。

「アルコキシ」という用語は、－Ｏ－（アルキル）または－Ｏ－（無置換シクロアルキル）基を指し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは上記で定義したとおりである。アルコキシの非限定的な例には、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシが含まれる。アルコキシは、任意に置換されていても無置換であってもよい。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオおよびヘテロシクリルチオからなる群から独立して選択される１つ以上の基である。

「シクロアルキル」という用語は、３～２０個の炭素原子、好ましくは３～１２個の炭素原子、より好ましくは３～１０個の炭素原子、最も好ましくは３～８個の炭素原子を有する飽和または部分的に非飽和の単環式または多環式炭化水素置換基を指す。単環式シクロアルキルの非限定的な例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチルなどが含まれる。多環式シクロアルキルには、スピロ環、縮合環または架橋環を有するシクロアルキルが含まれる。

「ヘテロシクリル」という用語は、３～２０員の飽和または部分的に非飽和の単環式または多環式炭化水素基であって、１つ以上の環原子はＮ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｍ（式中、ｍは０～２の整数である）からなる群から選択されるヘテロ原子であるが、環内の－Ｏ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ－または－Ｓ－Ｓ－を除外し、残りの環原子は炭素原子であるものを指す。好ましくは、ヘテロシクリルは、３～１２個の環原子を有し、ここで１～４個の原子がヘテロ原子であり、より好ましくは３～１０個の環原子を有する。単環式ヘテロシクリルの非限定的な例には、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニルなどが含まれる。多環式ヘテロシクリルには、スピロ環、縮合環または架橋環を有するヘテロシクリルが含まれる。

「スピロヘテロシクリル」という用語は、１つの共有原子（スピロ原子と呼ばれる）を介して接続された個々の環を有する５～２０員の多環式ヘテロシクリル基であって、１つ以上の環原子はＮ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｍ（式中、ｍは０～２の整数である）からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素原子であり、環は１つ以上の二重結合を含むことができるが、完全に共役したπ電子系を有する環はないものを指す。スピロヘテロシクリルは、好ましくは６～１４員のスピロヘテロシクリルであり、より好ましくは７～１０員のスピロヘテロシクリルである。環間で共有されるスピロ原子の数に応じて、スピロヘテロシクリルは、モノスピロヘテロシクリル、ジスピロヘテロシクリル、またはポリスピロヘテロシクリルに分けることができ、スピロヘテロシクリルは、好ましくはモノスピロヘテロシクリルまたはジスピロヘテロシクリルであり、より好ましくは４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員、または５員／６員のモノスピロヘテロシクリルである。スピロヘテロシクリルの非限定的な例には、以下が含まれる：

「縮合ヘテロシクリル」という用語は、５～２０員の多環式ヘテロシクリル基であって、系内の各環は隣り合う原子対を別の環と共有しており、１つ以上の環は１つ以上の二重結合を含み得るが、完全に共役したπ電子系を有する環はなく、１つ以上の環原子はＮ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｍ（ここで、ｍは０～２の整数である）からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素原子であるものを指す。縮合ヘテロシクリルは、好ましくは６～１４員の縮合ヘテロシクリルであり、より好ましくは７～１０員の縮合ヘテロシクリルである。員環の数に応じて、縮合ヘテロシクリルは、二環式、三環式、四環式または多環式の縮合ヘテロシクリルに分けることができ、縮合ヘテロシクリルは、好ましくは二環式または三環式縮合ヘテロシクリルであり、より好ましくは５員／５員または５員／６員の二環式縮合ヘテロシクリルである。縮合ヘテロシクリルの非限定的な例には、以下が含まれる：

「架橋ヘテロシクリル」という用語は、５～１４員の多環式ヘテロシクリル基であって、系内の２つの環ごとに２つの連結していない原子を共有しており、環は１つ以上の二重結合を有し得るが、完全に共役したπ電子系は有する環はなく、１つ以上の環原子はＮ、ＯおよびＳ（Ｏ）_ｍ（式中、ｍは、０～２の整数である）からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素原子であるものを指す。架橋ヘテロシクリルは、好ましくは６～１４員の架橋ヘテロシクリルであり、より好ましくは７～１０員の架橋ヘテロシクリルである。員環の数に応じて、架橋ヘテロシクリルは、二環式、三環式、四環式または多環式の架橋ヘテロシクリルに分けることができ、架橋ヘテロシクリルは、好ましくは二環式、三環式または四環式の架橋ヘテロシクリルであり、より好ましくは二環式または三環式の架橋ヘテロシクリルである。架橋ヘテロシクリルの非限定的な例には、以下が含まれる：

ヘテロシクリル環は、アリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合した環はヘテロシクリルである。その非限定的な例には、以下が含まれる：

ヘテロシクリルは、任意に置換されていても無置換であってもよい。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオおよびオキソからなる群から独立して選択される１つ以上の基である。

「アリール」という用語は、共役π電子系を有する６～１４員の全炭素単環式環または多環式縮合環（すなわち、系内の各環が隣り合った炭素原子対を系内の別の環と共有する）、好ましくは６～１０員のアリール（例えば、フェニルおよびナフチル）、好ましくはフェニルを指す。アリール環は、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合した環はアリール環である。その非限定的な例には、以下が含まれる：

アリールは、置換されていても無置換であってもよい。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオおよびヘテロシクリルチオからなる群から独立して選択される１つ以上の基である。

「ヘテロアリール」という用語は、Ｏ、ＳおよびＮからなる群から選択される１～４個のヘテロ原子を有する５～１４員のヘテロ芳香族系を指す。ヘテロアリールは、好ましくは５～１０員のヘテロアリールであり、より好ましくは５員または６員のヘテロアリール、例えば、フリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ－アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、テトラゾリルなどである。ヘテロアリール環は、アリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合した環はヘテロアリール環である。その非限定的な例には、以下が含まれる：

ヘテロアリールは、任意に置換されていても無置換であってもよい。置換される場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオおよびヘテロシクリルチオからなる群から独立して選択される１つ以上の基である。

「アミノ保護基」という用語は、分子の他の部分が反応を受けたときにアミノ基が反応するのを防ぎ、容易に除去することができる基を指す。非限定的な例には、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル、アセチル、ベンジル、アリル、ｐ－メトキシベンジルなどが含まれる。これらの基は、ハロゲン、アルコキシおよびニトロからなる群から選択される１～３個の置換基で任意に置換され得る。アミノ保護基は、好ましくは９－フルオレニルメチルオキシカルボニルである。

「シクロアルキルアルキル」という用語は、１つ以上、好ましくは１つのシクロアルキルで置換されたアルキル基を指し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは上記で定義したとおりである。

「ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基を指し、ここで、アルキルは上記で定義したとおりである。

「重水素化アルキル」という用語は、１つ以上の重水素原子で置換されたアルキル基を指し、ここで、アルキルは上記で定義したとおりである。

「ヒドロキシ」という用語は、－ＯＨ基を指す。

「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。

「アミノ」という用語は、－ＮＨ_２基を指す。

「ニトロ」という用語は、－ＮＯ_２基を指す。

「アミド」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（アルキル）または－Ｃ（Ｏ）Ｎ（シクロアルキル）基を指し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは上記で定義したとおりである。

「アルコキシカルボニル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｏ（アルキル）または－Ｃ（Ｏ）Ｏ（シクロアルキル）基を指し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは上記で定義したとおりである。

本開示はまた、さまざまな重水素化形態の式（Ｉ）の化合物を含む。炭素原子に結合した利用可能な水素原子の各々は、重水素原子によって独立して置換され得る。当業者は、関連文献を参照して、重水素化形態の式（Ｉ）の化合物を合成することができる。重水素化形態の式（Ｉ）の化合物は、市販の重水素化原料を使用することによって調製され得るか、または限定されるものではないが重水素化ボラン、テトラヒドロフラン中の三重水素化ボラン（ｔｒｉｄｅｕｔｅｒａｔｅｄｂｏｒａｎｅｉｎｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ）、重水素化された水素化アルミニウムリチウム（ｄｅｕｔｅｒａｔｅｄｌｉｔｈｉｕｍａｌｕｍｉｎｕｍｈｙｄｒｉｄｅ）、重水素化ヨードエタン、重水素化ヨードメタンなどを含む重水素化試薬を用いた従来の技術によって合成され得る。

「任意の」または「任意に」とは、それに続いて記載される出来事または状況が発生し得るが、発生する必要はないことを意味し、そのような記載は、出来事または状況が発生する状態と、出来事または状況が発生しない状態とを含む。例えば、「任意にアルキルで置換されたヘテロシクリル」とは、アルキル基が存在し得るが、存在する必要はないことを意味し、そのような記載は、ヘテロシクリルがアルキルで置換される状態と、ヘテロシクリルがアルキルで置換されない状態とを含む。

「置換された」とは、対応する数の置換基によって独立して置換された、基中の１個以上の水素原子、好ましくは最大５個、より好ましくは１～３個の水素原子を指す。置換基は可能な化学的位置にのみ存在することは言うまでもない。当業者は、過度の努力なしに、実験または理論によって、置換が可能であるか不可能であるかを決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノまたはヒドロキシと、不飽和結合を有する炭素原子（例えば、オレフィン）との組み合わせは、不安定である可能性がある。

「医薬組成物」という用語は、本明細書に記載の１つ以上の化合物またはその生理学的／薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグと、生理学的／薬学的に許容される担体および賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることであり、これは、生物学的活性を示すように活性成分の吸収を助長する。

「薬学的に許容される塩」または「医薬塩」という用語は、哺乳動物において安全かつ有効であり、所望の生物学的活性を有する、本開示のリガンド－薬物コンジュゲートの塩または本開示の化合物の塩を指す。本開示のリガンド－薬物コンジュゲートは少なくとも１つのアミノを含有するので、酸と塩を形成することができる。薬学的に許容される塩の非限定的な例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、シュウ酸塩、硝酸塩、ソルビン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、サリチル酸塩、クエン酸水素塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩が含まれる。

「溶媒和物」という用語は、本開示のリガンド－薬物コンジュゲートと１つ以上の溶媒分子とによって形成される薬学的に許容される溶媒和物を指す。溶媒分子の非限定的な例には、水、エタノール、アセトニトリル、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチルが含まれる。

「薬物負荷」という用語は、式（Ｉ）の化合物中の各リガンドに負荷された細胞毒性薬物の平均数を指し、抗体の数に対する薬物の数の比として表すこともできる。薬物負荷は、リガンド（Ｐｃ）あたり、０～１２、好ましくは１～１０の細胞毒性薬物（Ｄ）の範囲であり得る。本発明の一実施形態では、薬物負荷はｎとして表され、例示的な値は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の平均であり得る。カップリング反応後のＡＤＣ分子あたりの薬物の平均数は、ＵＶ／可視分光法、質量分析、ＥＬＩＳＡ試験およびＨＰＬＣ特性評価などの従来の方法によって決定することができる。

本発明の一実施形態では、細胞毒性薬物は、連結ユニットを介してリガンドのＮ末端アミノおよび／またはリジン残基のε－アミノにコンジュゲートされる。典型的には、カップリング反応で抗体にコンジュゲートされる薬物分子の数は、理論上の最大値よりも少なくなる。

以下の非限定的な方法を使用して、リガンド－細胞毒性薬物コンジュゲートの負荷を制御することができる：
（１）モノクローナル抗体に対する連結試薬（ｌｉｎｋｉｎｇｒｅａｇｅｎｔ）のモル比の制御、
（２）反応時間および温度の制御、
（３）異なる反応試薬の選択。

従来の医薬組成物の調製は、中国の薬局方（ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）に見出すことができる。

本開示の組成物において使用される「担体」という用語は、薬物が人体に入る方法および分布を変更し、薬物放出速度を制御し、薬物を標的臓器に送達することができるシステムを指す。薬物担体の放出および標的化システムは、薬物の分解および損失を減少させ、副作用を低減し、バイオアベイラビリティを改善することができる。例えば、担体として使用され得るポリマー界面活性剤は、それらのユニークな両親媒性構造のために、自己集合してさまざまな形態の凝集体を形成することができる。好ましい例としては、ミセル、マイクロエマルジョン、ゲル、液晶、ベシクル（ｖｅｓｉｃｌｅｓ）などが挙げられる。これらの凝集体は、膜に対する良好な透過性を有する一方で、薬物分子をカプセル化する能力を有し、優れた薬物担体として使用され得る。

「賦形剤」という用語は、主薬以外の医薬製剤中の補助剤であり、アジュバントとも呼ばれることがあり、例えば、錠剤における接着剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤；半固形製剤軟膏およびクリームにおけるマトリックス部分；液体製剤における防腐剤、酸化防止剤、香味料、芳香剤、共溶媒、乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節剤、着色剤などである。

「希釈剤」という用語は、充填剤としても知られており、主に錠剤の重量および体積を増やすことを目的としている。希釈剤を加えることにより、一定の体積が確保され、主成分の用量のばらつきが減少し、薬物の圧縮プロファイルが改善される。錠剤が油性成分を含む場合、吸収剤を添加して油性物質を吸収し、それによって「乾燥」状態を維持して錠剤の形成を促進する。例えば、希釈剤としては、澱粉、ラクトース、カルシウムの無機塩、微結晶性セルロースなどが挙げられる。

医薬組成物は、筋肉内および皮下投与用の無菌の注射可能な水性または油性懸濁液の形態であり得る。そのような懸濁液は、既知の技術に従って、上記のような適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を配合され得る。無菌の注射可能な製剤はまた、非毒性で非経口的に許容される希釈剤または溶媒で調製された無菌の注射可能な溶液または懸濁液、例えば、１，３－ブタンジオールで調製された溶液であり得る。さらに、滅菌固定油を溶媒または懸濁媒体として容易に使用することができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の混合固定油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射剤の調製に使用することができる。

本開示は、特定の構造を有する切断可能なリンカーアームおよび特定の構造を有する活性物質、ならびにリンカーアーム、活性物質および抗体から構成される抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）に関する。このＡＤＣは、スペーサーを介して毒性物質を抗体に連結することによって形成される複合体である。抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、体内で分解されて活性分子を放出し、それによって抗腫瘍効果を示す。

本開示の合成方法
本開示の目的を達成するために、本開示は、以下の技術的解決策を適用する：

スキームＩ：
本開示の式（Ｄ１）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための方法は、以下のステップを含む：

縮合剤の存在下、任意にアルカリ性条件下で、式（Ｙ１）の化合物と式（Ｄｒ）の化合物を反応させて、式（Ｄ１）の化合物を得るステップ
（式中：Ｒ^１、Ｒ^２およびｍは、式（Ｄ１）で定義されるとおりである）。

アルカリ性条件をもたらす試薬には、有機塩基および無機塩基が含まれる。有機塩基には、限定されるものではないが、トリエチルアミン、ジエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、ピリジン、ヘキサヒドロピリジン、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、ｎ－ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、酢酸カリウム、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシドおよびカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドが含まれる。無機塩基には、限定されるものではないが、水素化ナトリウム、リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化リチウムが含まれる。

縮合剤は、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素テトラフルオロボレート、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アゾベンゾトリアゾール、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートおよびベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジニルリンヘキサフルオロホスフェート（ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ－１－ｙｌ－ｏｘｙｔｒｉｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）からなる群から選択され得、好ましくは４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド、１－ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩からなる群から選択され得る。

スキームＩＩ：
本開示の式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための方法は、以下のステップを含む：

ステップ１：縮合剤の存在下、任意にアルカリ条件下で、式（ＩＢ－１）の化合物とエキサテカンメタンスルホネート（１ｂ）を反応させて、式（ＩＢ－２）の化合物を得る；
ステップ２：式（ＩＢ－２）の化合物を脱保護して、式（ＩＢ）の化合物を得る；
ステップ３：縮合剤の存在下、任意にアルカリ性条件下で、式（ＩＡ）の化合物と式（ＩＢ）の化合物を反応させて、式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物を得る
（式中：
Ｒ^ｃはアミノ保護基であり、好ましくは９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）である；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｓ^１およびｍは、式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである）。

縮合剤は、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’－ジイソプロピルカルボジイミド、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素テトラフルオロボレート、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アゾベンゾトリアゾール、Ｏ－ベンゾトリアゾール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、２－（７－アゾベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートおよびベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジニルリンヘキサフルオロホスフェート（ｂｅｎｚｏｔｒｉａｚｏｌ－１－ｙｌ－ｏｘｙｔｒｉｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）からなる群から選択され、好ましくは４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド、１－ヒドロキシベンゾトリアゾールおよび１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩からなる群から選択される。

スキームＩＩＩ：
本開示の式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物を調製するための方法は、以下のステップを含む：

Ｐｃは、還元後に式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物と反応して、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物を得る；還元剤は好ましくはＴＣＥＰであり、特に、抗体のジスルフィド結合を還元することが好ましい；
（式中：
Ｐｃはリガンドである；
Ｗ、Ｌ^２、Ｌ^３、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｍおよびｎは、式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）で定義されるとおりである）。

本開示は以下の実施例を参照してさらに説明されるが、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものとみなされるべきではない。

特定の条件が示されていない本開示の実施例における実験方法は、従来の条件、または材料もしくは製品の製造業者によって推奨される条件に従って実施された。特定の供給元が示されていない試薬は、市販の従来の試薬である。

化合物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）または質量分析（ＭＳ）によって同定される。ＮＭＲは、ＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥ－４００装置によって測定される。測定用の溶媒は、重水素化ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ－ｄ_６）、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ_３）および重水素化メタノール（ＣＤ_３ＯＤ）であり、内部標準はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）である。化学シフトは１０^－６（ｐｐｍ）で示される。

ＭＳは、ＦＩＮＮＩＧＡＮＬＣＱＡｄ（ＥＳＩ）質量分析計（製造元：Ｔｈｅｒｍｏ、タイプ：ＦｉｎｎｉｇａｎＬＣＱａｄｖａｎｔＭＡＸ）によって測定される。

ＵＰＬＣは、ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＳＱＤ液体クロマトグラフ／質量分析計によって測定される。

高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００ＤＡＤ高圧液体クロマトグラフ（ＳｕｎｆｉｒｅＣ１８１５０×４．６ｍｍクロマトグラフィーカラム）およびＷａｔｅｒｓ２６９５－２９９６高圧液体クロマトグラフ（ＧｉｍｉｎｉＣ１８１５０×４．６ｍｍクロマトグラフィーカラム）で測定される。

ＵＶ－ＨＰＬＣは、Ｔｈｅｒｍｏｎａｎｏｄｒｏｐ２０００ＵＶ分光光度計で測定される。

増殖抑制率（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｓ）およびＩＣ_５０値は、ＰＨＥＲＡｓｔａｒＦＳマイクロプレートリーダー（ＢＭＧ社、ドイツ）によって決定される。

薄層シリカゲルクロマトグラフィー（ＴＬＣ）プレートとして、ＹａｎｔａｉＨｕａｎｇｈａｉＨＳＧＦ２５４またはＱｉｎｇｄａｏＧＦ２５４シリカゲルプレートが使用される。ＴＬＣで使用するシリカゲルプレートの寸法は０．１５ｍｍ～０．２ｍｍであり、生成物の精製に使用するシリカゲルプレートの寸法は０．４ｍｍ～０．５ｍｍである。

ＹａｎｔａｉＨｕａｎｇｈａｉの２００～３００メッシュのシリカゲルが、一般的に、カラムクロマトグラフィーの担体として使用される。

本開示の既知の出発物質は、当技術分野で既知の方法によって調製され得るか、またはＡＢＣＲＧｍｂＨ＆Ｃｏ．ＫＧ、ＡｃｒｏｓＯｒｇａｎｎｉｃｓ、ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙ、ＡｃｃｅｌａＣｈｅｍＢｉｏＩｎｃ．、ＤａｒｉｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐａｎｙなどから購入され得る。

特に明記しない限り、反応はアルゴン雰囲気または窒素雰囲気下で行われる。

「アルゴン雰囲気」または「窒素雰囲気」とは、反応フラスコがアルゴンまたは窒素バルーン（約１Ｌ）を備えていることを意味する。

「水素雰囲気」とは、反応フラスコが水素バルーン（約１Ｌ）を備えていることを意味する。

加圧水素化反応は、Ｐａｒｒ３９１６ＥＫＸ水素化装置およびＱｉｎｇｌａｎＱＬ－５００水素発生器またはＨＣ２－ＳＳ水素化装置で行われる。

水素化反応では、反応系は一般的に真空にされて水素で満たされ、上記の操作が３回繰り返される。

ＣＥＭＤｉｓｃｏｖｅｒ－Ｓ９０８８６０タイプのマイクロ波リアクタが、マイクロ波反応に使用される。

特に明記しない限り、反応の溶液は水溶液を指す。

特に明記しない限り、反応の反応温度は室温である。

２０℃～３０℃の室温が最も好適な反応温度である。

実施例におけるＰＢＳ緩衝液（ｐＨ＝６．５）の調製：フラスコ内で８．５ｇのＫＨ_２ＰＯ_４、８．５６ｇのＫ_２ＨＰＯ_４．３Ｈ_２Ｏ、５．８５ｇのＮａＣｌおよび１．５ｇのＥＤＴＡを２Ｌにセットし、混合物を超音波処理して完全に溶解させ、よく振って該緩衝液を得る。

化合物の精製のためのカラムクロマトグラフィーにおける溶離液系および薄層クロマトグラフィーにおける展開溶媒系には、Ａ：ジクロロメタンおよびイソプロパノール系、Ｂ：ジクロロメタンおよびメタノール系、Ｃ：石油エーテルおよび酢酸エチル系が含まれる。溶媒の体積比は化合物の極性に応じて調整され、少量の酸性試薬またはトリエチルアミンなどのアルカリ性試薬を調整のために添加することもできる。

本開示の化合物のいくつかは、Ｑ－ＴＯＦＬＣ／ＭＳによって特徴付けられる。Ｑ－ＴＯＦＬＣ／ＭＳに関しては、Ａｇｉｌｅｎｔ６５３０Ａｃｃｕｒａｔｅ－ＭａｓｓＱｕａｄｒｕｐｏｌｅ－ＴｉｍｅｏｆＦｌｉｇｈｔＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒおよびＡｇｉｌｅｎｔ１２９０－ＩｎｆｉｎｉｔｙＵＨＰＬＣ（ＡｇｉｌｅｎｔＰｏｒｏｓｈｅｌｌ３００ＳＢ－Ｃ８５μｍ、２．１×７５ｍｍカラム）が使用される。

・実施例１
Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－１－ヒドロキシシクロプロパン－１－カルボキサミド１

１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを、エキサテカンメタンスルホネート１ｂ（２．０ｍｇ、３．７６μｍｏｌ、特許出願「ＥＰ０７３７６８６Ａ１」に開示された方法に従って調製）に添加し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミンを１滴滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。１－ヒドロキシシクロプロピルカルボン酸１ａ（１．４ｍｇ、３．７μｍｏｌ、「ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ，２５（１２），１２６９－７２頁；１９８４年」に開示された既知の方法に従って調製）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（３．８ｍｇ、１３．７μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応溶液を０～５℃で２時間撹拌した。反応溶液に５ｍＬの水を加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル（８ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（５ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１（１．６ｍｇ、収率８２．１％）を得た。

MS m/z (ESI): 520.2 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.90-7.84 (m, 1H), 7.80-7.68(m, 1H), 5.80-5.70 (m, 1H), 5.62-5.54(m, 2H), 5.44-5.32 (m, 2H), 5.28-5.10(m, 2H), 3.40-3.15 (m, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.23(t, 1H), 2.06-1.75 (m, 2H), 1.68-1.56 (m, 1H), 1.22-1.18 (m, 2H), 1.04-0.98 (m, 2H), 0.89 (t, 3H)。

・実施例２
（Ｓ）－２－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシアセトアミド２－Ａ
（Ｒ）－２－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシアセトアミド２－Ｂ

２ｍＬのエタノールと０．４ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（４ｍｇ、７．５３μｍｏｌ）に添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ－メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。２－シクロプロピル－２－ヒドロキシ酢酸２ａ（２．３ｍｇ、１９．８μｍｏｌ、特許出願「ＷＯ２０１３１０６７１７」に開示された方法に従って調製）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３ｍｇ、２２．４μｍｏｌ）および１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（４．３ｍｇ、２２．４μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応液を０～５℃で１時間撹拌した。氷水浴を取り除き、反応溶液を３０℃に加熱し、２時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られた粗化合物２を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物（２－Ａ：１．５ｍｇ、２－
Ｂ：１．５ｍｇ）を得た。

MS m/z (ESI): 534.0 [M+1]。

単一の立体配置を有する（より短い保持時間を有する）化合物２－Ｂ
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．０６分、純度：８８％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.37 (d, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.58-5.56 (m, 1H), 5.48 (d, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.32-5.29 (m, 2H), 3.60 (t, 1H), 3.19-3.13 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.20-2.14 (m, 1H), 1.98 (q, 2H), 1.87-1.83 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 1H), 1.34-1.28 (m, 1H), 0.86 (t, 3H), 0.50-0.39 (m, 4H)。

単一の立体配置を有する（より長い保持時間を有する）化合物２－Ａ
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１０分、純度：８６％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.35 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.58-5.53 (m, 1H), 5.42 (s, 2H), 5.37 (d, 1H), 5.32 (t, 1H), 3.62 (t, 1H), 3.20-3.15 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.25-2.16 (m, 1H), 1.98 (q, 2H), 1.87-1.82 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 1H), 1.21-1.14 (m, 1H), 0.87 (t, 3H), 0.47-0.35 (m, 4H)。

・実施例３
（Ｓ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－３，３，３－トリフルオロ－２－ヒドロキシプロパンアミド３－Ａ
（Ｒ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－３，３，３－トリフルオロ－２－ヒドロキシプロパンアミド３－Ｂ

２ｍＬのエタノールと０．４ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（５．０ｍｇ、９．４１μｍｏｌ）に添加し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ－メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。３，３，３－トリフルオロ－２－ヒドロキシプロピオン酸３ａ（４．１ｍｇ、２８．４μｍｏｌ、供給元：Ａｌｆａ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３．８ｍｇ、２８．１μｍｏｌ）および１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（５．４ｍｇ、２８．２μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応液を０～５℃で１０分間撹拌した。氷水浴を取り除き、反応溶液を３０℃に加熱し、８時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた粗化合物３を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物（１．５ｍｇ、１．５ｍｇ）を得た。

MS m/z (ESI): 561.9 [M+1]。

単一の立体配置を有する（より短い保持時間を有する）化合物
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１１分、純度：８８％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.94 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.20 (d, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.61-5.55 (m, 1H), 5.45-5.23 (m, 3H), 5.15-5.06 (m, 1H), 4.66-4.57 (m, 1H), 3.18-3.12 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.26-2.20 (m, 1H), 2.16-2.08 (m, 1H), 2.02-1.94 (m, 1H), 1.89-1.82 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 1H), 0.87 (t, 3H)。

単一の立体配置を有する（より長い保持時間を有する）化合物
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１９分、純度：９０％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.97 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.16 (d, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.63-5.55 (m, 1H), 5.45-5.20 (m, 3H), 5.16-5.07 (m, 1H), 4.66-4.57 (m, 1H), 3.18-3.12 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.22-2.14 (m, 1H), 2.04-1.95 (m, 2H), 1.89-1.82 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 1H), 0.87 (t, 3H)。

・実施例４
Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－１－ヒドロキシシクロペンタン－１－カルボキサミド４

１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（３．０ｍｇ、５．６４μｍｏｌ）に添加し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミンを１滴滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。１－ヒドロキシ－シクロペンタンカルボン酸４ａ（２．２ｍｇ、１６．９μｍｏｌ、特許出願「ＷＯ２０１３１０６７１７」に開示された方法に従って調製）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（４．７ｍｇ、１６．９μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応溶液を０～５℃で１時間撹拌した。反応溶液に５ｍＬの水を加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（５ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物４（２．５ｍｇ、収率８０．９％）を得た。

MS m/z (ESI): 548.0 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.73-7.62 (m, 2H), 5.75-5.62 (m, 1H), 5.46-5.32 (m, 2H), 5.26-5.10 (m, 1H), 3.30-3.10 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.28-2.20 (m, 2H), 2.08-1.84 (m, 8H), 1.69-1.58 (m, 2H), 1.04-1.00 (m, 2H), 0.89 (t, 3H)。

・実施例５
Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－１－（ヒドロキシメチル）シクロプロパン－１－カルボキサミド５

１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（２．０ｍｇ、３．７６μｍｏｌ）に添加し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミンを１滴滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。１－（ヒドロキシメチル）－シクロペンタンカルボン酸５ａ（０．８７ｍｇ、７．５μｍｏｌ、特許出願「ＷＯ２０１３９６７７１」に開示された方法に従って調製）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２ｍｇ、７．２４μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応溶液を０～５℃で２時間撹拌した。反応溶液に５ｍＬの水を加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル（８ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（５ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物５（１．０ｍｇ、収率５０％）を得た。

MS m/z (ESI): 533.9 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.07 (s, 1H), 7.23-7.18 (m, 2H), 6.71-6.64 (m, 1H), 6.55-6.51 (m, 1H), 5.36-5.27 (m, 2H), 4.67-4.61 (m, 2H), 3.53-3.48 (m, 1H), 3.30-3.22 (m, 2H), 3.18-3.13 (m, 1H), 2.71-2.61 (m, 2H), 2.35-2.28 (m, 1H), 2.04-1.91 (m, 4H), 1.53-1.40 (m, 3H), 0.91-0.75 (m, 4H)。

・実施例６
Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－１－（ヒドロキシメチル）シクロブタン－１－カルボキサミド６

１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（３．０ｍｇ、５．６４μｍｏｌ）に添加し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミンを１滴滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。１－（ヒドロキシメチル）シクロブタン－１－カルボン酸６ａ（２．２ｍｇ、１６．９μｍｏｌ、「ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ、２０１４年、第１３６巻、＃２２、８１３８－８１４２頁」に開示されている既知の方法に従って調製）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（４．７ｍｇ、１６．９μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応溶液を０～５℃で１時間撹拌した。反応溶液に５ｍＬの水を加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（５ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物６（２．１ｍｇ、収率６７．９％）を得た。

MS m/z (ESI): 548.0 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 7.85-7.62 (m, 1H), 6.88 (br，1H), 5.87-5.48 (m，2H), 5.47-5.33 (m，1H), 5.31-5.06 (m，1H), 4.25-3.91 (m, 2H), 3.25 (br, 1H), 2.60-2.32 (m, 3H), 2.23 (t, 1H), 2.15-1.95 (m, 3H), 1.70-1.56 (m, 2H), 1.41-1.17 (m, 9H), 1.03 (s, 1H), 0.95-0.80 (m, 2H)。

・実施例７
Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－１－ヒドロキシシクロブタン－１－カルボキサミド７

２ｍＬのエタノールと０．４ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（３．０ｍｇ、５．６４μｍｏｌ）に添加し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ－メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。１－ヒドロキシシクロブタンカルボン酸７ａ（２．０ｍｇ、１７．２２μｍｏｌ、供給元：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋＳｃｉｅｎｃｅｓ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．３ｍｇ、１７．０μｍｏｌ）および１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（３．２ｍｇ、１６．７μｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応溶液を０～５℃で１０分間撹拌した。氷水浴を取り除き、反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物７（２．５ｍｇ、収率８３．１％）を得た。

MS m/z (ESI): 534.0 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.28 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 6.12 (s, 1H), 5.59-5.51 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.20-5.01 (m, 2H), 3.27-3.17 (m, 1H), 3.15-3.05 (m, 1H), 2.71-2.63 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.12-2.05 (m, 1H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.92-1.78 (m, 4H), 1.50-1.42 (m, 1H), 0.90-0.83 (m, 4H)。

・実施例８
１－（（（Ｓ）－７－ベンジル－２０－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，５，８，１１，１４－ペンタアザイコシル）オキシ）－Ｎ－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロプロパン－１－カルボキサミド８

ステップ１
ベンジル１－（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）メトキシ）シクロプロパン－１－カルボキシレート８ｃ

ベンジル１－ヒドロキシシクロプロパン－１－カルボキシレート８ａ（１０４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、特許出願「ＵＳ２００５／２０６４５」に開示された方法に従って調製）および（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）酢酸メチル８ｂ（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、特許出願「ＣＮ１０５８２９３４６Ａ」に開示された方法に従って調製）を反応フラスコに加え、続いて５ｍＬのテトラヒドロフランを加えた。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いてカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（６１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加した。氷水浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１０分間撹拌した。反応溶液に氷水２０ｍＬを加え、酢酸エチル（５ｍＬ×２）とクロロホルム（５ｍＬ×５）で抽出した。有機相を合わせて濃縮した。得られた残留物を３ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解した。０．６ｍＬの水、重炭酸ナトリウム（２７ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）および９－フルオレンメチルクロロホルメート（７０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で１時間撹拌した。水２０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（８ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物８ｃ（１００ｍｇ、収率７３．６％）を得た。
MS m/z (ESI): 501.0 [M+1]。

ステップ２
１－（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）メトキシ）シクロプロパン－１－カルボン酸８ｄ

８ｃ（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒（Ｖ：Ｖ＝２：１）３ｍＬに溶解した後、パラジウム炭素（２５ｍｇ、含有量：１０％）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で１時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークをテトラヒドロフランですすいだ。ろ液を濃縮して、表題生成物８ｄ（４１ｍｇ、収率：１００％）を得た。
MS m/z (ESI): 411.0 [M+1]。

ステップ３
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロプロポキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート８ｅ

１ｂ（７ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を反応フラスコに加え、続いて１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを加えた。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴、０．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の８ｄ（７ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（７ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を添加し、反応溶液を氷浴中で３５分間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物８ｅ（８．５ｍｇ、収率７８．０％）を得た。
MS m/z (ESI): 828.0 [M+1]。

ステップ４
１－（（２－アミノアセトアミド）－メトキシ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロプロパン－１－カルボキサミド８ｆ

８ｅ（４ｍｇ、４．８４μｍｏｌ）を０．２ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．１ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを加え、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに加え、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して、粗表題生成物８ｆ（２．９ｍｇ）を得て、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 606.0 [M+1]。

ステップ５
１－（（（Ｓ）－７－ベンジル－２０－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，５，８，１１，１４－ペンタアザイコシル）－オキシ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロプロパン－１－カルボキサミド８

粗化合物８ｆ（２．９ｍｇ、４．８４μｍｏｌ）を０．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の（Ｓ）－２（－２－（－２－（６－（２，５－ジオキソ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド）アセトアミド）アセトアミド）－３－フェニルプロピオン酸８ｇ（２．７ｍｇ、５．８０μｍｏｌ、特許出願「ＥＰ２９０７８２４」に開示されている方法に従って調製）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２．７ｍｇ、９．６７μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で３０分間撹拌した。氷浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１５分間撹拌した。反応溶液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物８（２ｍｇ、収率３９．０％）を得た。

MS m/z (ESI): 1060.0 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 9.01 (d, 1H), 8.77 (t, 1H), 8.21 (t, 1H), 8.08-7.92 (m, 2H), 7.73 (d, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.24-7.07 (m, 4H), 6.98 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.61 (q, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.32 (t, 1H), 5.12 (q, 2H), 4.62 (t, 1H), 4.52 (t, 1H), 4.40-4.32 (m, 1H), 3.73-3.47 (m, 8H), 3.16-3.04 (m, 2H), 2.89 (dd, 1H), 2.69-2.55 (m, 2H), 2.37-2.23 (m, 4H), 2.12-1.93 (m, 4H), 1.90-1.74 (m, 2H), 1.52-1.38 (m, 4H), 1.33-1.11 (m, 5H), 0.91-0.81 (m, 4H)。

・実施例９
Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド９－Ａ
Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド９－Ｂ

ステップ１
ベンジル２－シクロプロピル－２－ヒドロキシアセテート９ａ

２ａ（１．３ｇ、１１．２ｍｍｏｌ、特許出願「ＷＯ２０１３／１０６７１７」に開示される方法に従って調製）を５０ｍＬのアセトニトリルに溶解し、次いで、炭酸カリウム（６．１８ｇ、４４．８ｍｍｏｌ）、臭化ベンジル（１．３３ｍＬ、１１．２ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（４１３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を連続して添加した。反応溶液を室温で４８時間撹拌し、セライトを通してろ過した。ろ過ケークを酢酸エチル（１０ｍＬ）ですすぎ、ろ液を合わせて、減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物９ａ（２ｇ、収率８６．９％）を得た。

ステップ２
ベンジル１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート９ｂ

９ａ（１２０．９ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ）および８ｂ（１８０ｍｇ、０．４８９ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて４ｍＬのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１０９ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）を添加し、氷水浴を取り除いた。反応溶液を室温まで温め、４０分間撹拌した。反応溶液に氷水１０ｍＬを加えた後、これを酢酸エチル（２０ｍＬ×２）およびクロロホルム（１０ｍＬ×５）で抽出した。有機相を合わせて濃縮した。得られた残留物をジオキサン４ｍＬに溶解した。水２ｍＬ、重炭酸ナトリウム（４９．２ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ）および９－フルオレンメチルクロロホルメート（１２６ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で２時間撹拌した。水２０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物９ｂ（４８ｍｇ、収率１９％）を得た。
MS m/z (ESI):515.0[M+1]。

ステップ３
１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－酸９ｃ

９ｂ（２０ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒（Ｖ：Ｖ＝２：１）４．５ｍＬに溶解し、続いてパラジウム炭素（１２ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で１時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークを酢酸エチルですすいだ。ろ液を濃縮して、粗表題生成物９ｃ（１３ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI):424.9[M+1]。

ステップ４
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（１－シクロプロピル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－２－オキソエトキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート９ｄ

１ｂ（１０ｍｇ、１８．８μｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴、粗化合物９ｃ（１３ｍｇ、３０．６μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１６．９ｍｇ、６１．２μｍｏｌ）を添加し、反応溶液を氷浴中で４０分間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物９ｄ（１９ｍｇ、収率７３．６％）を得た。
MS m/z (ESI):842.1[M+1]。

ステップ５
２－（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）－２－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アセトアミド９ｅ

９ｄ（１９ｍｇ、２２．６μｍｏｌ）を２ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて１ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。１ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。残留物に３ｍＬのｎ－ヘキサンを加えてパルプにし、静置した後、固形物を保持するために上清を注ぎ出した。固体残留物をオイルポンプにより乾固するまで減圧濃縮して、粗表題生成物９ｅ（１７ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI):638.0[M+18]。

ステップ６
Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド９－Ａ
Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド９－Ｂ

粗化合物９ｅ（１３．９ｍｇ、２２．４μｍｏｌ）を０．６ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の８ｇ（２１．２ｍｇ，４４．８μｍｏｌ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１８．５ｍｇ，６７．３μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で１０分間撹拌した。氷浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１時間撹拌して化合物９を得た。反応溶液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物（９－Ａ：２．４ｍｇ、９－Ｂ：１．７ｍｇ）を得た。

MS m/z (ESI): 1074.4 [M+1]。

単一の立体配置を有する（より短い保持時間を有する）化合物９－Ａ：
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１４分、純度：８５％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.60 (t, 1H), 8.51-8.49 (d, 1H), 8.32-8.24 (m, 1H), 8.13-8.02 (m, 2H), 8.02-7.96 (m, 1H), 7.82-7.75 (m, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.26-7.15 (m, 4H), 6.99 (s, 1H), 6.55-6.48 (m, 1H), 5.65-5.54 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.35-5.15 (m, 3H), 4.74-4.62 (m, 1H), 4.54-4.40 (m, 2H), 3.76-3.64 (m，4H), 3.62-3.48 (m, 2H), 3.20-3.07 (m, 2H), 3.04-2.94 (m, 1H), 2.80-2.62 (m, 1H), 2.45-2.30 (m, 3H), 2.25-2.15 (m, 2H), 2.15-2.04 (m, 2H), 1.93-1.78 (m, 2H), 1.52-1.39 (m, 3H), 1.34-1.12 (m, 5H), 0.87 (t, 3H), 0.64-0.38 (m, 4H)。

単一の立体配置を有する（より長い保持時間を有する）化合物９－Ｂ：
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１６分、純度：８９％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.68-8.60 (m, 1H), 8.58-8.50 (m, 1H), 8.32-8.24 (m, 1H), 8.13-8.02 (m, 2H), 8.02-7.94 (m, 1H), 7.82-7.75 (m, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.26-7.13 (m, 3H), 6.99 (s, 1H), 6.55-6.48 (m, 1H), 5.60-5.50 (m, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.35-5.15 (m, 2H), 4.78-4.68 (m, 1H), 4.60-4.40 (m, 2H), 3.76-3.58 (m, 4H), 3.58-3.48 (m, 1H), 3.20-3.10 (m, 2H), 3.08-2.97 (m, 2H), 2.80-2.72 (m, 2H), 2.45-2.30 (m, 3H), 2.25-2.13 (m, 2H), 2.13-2.04 (m, 2H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.91-1.78 (m, 2H), 1.52-1.39 (m, 3H), 1.34-1.12 (m, 4H), 0.91-0.79 (m, 3H), 0.53-0.34 (m, 4H)。

・実施例１０
Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）－１，１，１－トリフルオロ－６，９，１２，１５－テトラオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１０－Ａ
Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）－１，１，１－トリフルオロ－６，９，１２，１５－テトラオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１０－Ｂ

ステップ１
ベンジル３，３，３－トリフルオロ－２－ヒドロキシプロパノエート１０ａ

３ａ（１．８０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのアセトニトリルに溶解し、次いで炭酸カリウム（５．１７ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）、臭化ベンジル（４．４８ｍＬ、３７．５ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（２３１ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を連続して添加した。反応溶液を６０℃に加熱し、５時間撹拌した。反応溶液を室温に冷却し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１０ａ（９８０ｍｇ、収率３３．５％）を得た。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 7.43-7.36 (m, 5H), 5.34 (s, 2H), 4.53 (s, 1H), 3.44 (s, 1H)。

ステップ２
ベンジル１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－１０－（トリフルオロメチル）－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート１０ｂ

８ｂ（６３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）および１０ａ（８０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて３ｍＬのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（３８ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加し、氷水浴を取り除いた。反応溶液を室温まで温め、２０分間撹拌した。反応溶液に氷水１０ｍＬを加え、これを酢酸エチル（２０ｍＬ×２）およびクロロホルム（１０ｍＬ×５）で抽出した。有機相を合わせ、濃縮して、得られた残留物を２ｍＬのジオキサンに溶解した。水０．４ｍＬ、重炭酸ナトリウム（１９ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）および９－フルオレンメチルクロロホルメート（４９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で１時間撹拌した。水２０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１０ｂ（５１ｍｇ、収率５５．３％）を得た。
MS m/z (ESI): 559.9 [M+18]。

ステップ３
１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－１０－（トリフルオロメチル）－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－酸１０ｃ

１０ｂ（１５ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒（Ｖ：Ｖ＝２：１）３ｍＬに溶解した後、パラジウム炭素（１５ｍｇ、含有量：１０％）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で１時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークをテトラヒドロフランですすいだ。ろ液を濃縮して、粗表題生成物１０ｃ（１３ｍｇ）を得た。
MS m/z (ESI): 452.9 [M+1]。

ステップ４
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（３－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，１，１－トリフルオロ－３－オキソプロパン－２－イル）オキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート１０ｄ

１ｂ（１０ｍｇ、１８．８μｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴、０．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の１０ｃ（１３ｍｇ、２８．７μｍｏｌ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１１ｍｇ、３９．７μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で３０分間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１０ｄ（１６ｍｇ、収率９７．８％）を得た。
MS m/z (ESI): 870.0[M+1]。

ステップ５
２－（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－３，３，３－トリフルオロプロパンアミド１０ｅ

１０ｄ（１６ｍｇ、１８．４μｍｏｌ）を０．６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．３ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。残留物に３ｍＬのｎ－ヘキサンを加えてパルプにし、しばらく放置した後、固形物を保持するために上清を注ぎ出し、これを３回繰り返した。固体残留物をオイルポンプにより乾固するまで減圧濃縮して、粗表題生成物１０ｅ（１２ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 647.9 [M+1]。

ステップ６
Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）－１，１，１－トリフルオロ－６，９，１２，１５－テトラオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１０－Ａ
Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）－１，１，１－トリフルオロ－６，９，１２，１５－テトラオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１０－Ｂ

粗化合物１０ｅ（１２ｍｇ、１８．５μｍｏｌ）を１．０ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の８ｇ（１４ｍｇ、２９．６μｍｏｌ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１５ｍｇ，５４．２μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で３０分間撹拌した。氷浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１時間撹拌して化合物１０を得た。反応溶液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物（２．７ｍｇ、２．６ｍｇ）を得た。

MS m/z (ESI): 1102.0 [M+1]。

単一の立体配置を有する（より短い保持時間を有する）化合物：
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１８分、純度：９１％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.97 (d, 1H), 8.85-8.76 (m, 1H), 8.37-8.27 (m, 1H), 8.12-8.02 (m, 1H), 8.02-7.95 (m, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.26-7.10 (m, 4H), 6.99 (s, 1H), 6.66 (br, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.65-5.54 (m, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.37-5.25 (m, 3H), 5.23-5.13 (m, 1H), 4.81-4.68 (m, 2H), 4.51-4.41 (m, 1H), 3.78-3.45 (m, 6H), 3.21-3.13 (m, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.77-2.63 (m, 2H), 2.45-2.29 (m, 3H), 2.24-2.05 (m, 3H), 2.04-1.93 (m, 5H), 1.90-1.75 (m, 2H), 1.52-1.38 (m, 4H), 0.90-0.78 (m, 5H)。

単一の立体配置を有する（より長い保持時間を有する）化合物：
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．２３分、純度：９０％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 9.05 (d, 1H), 8.97-8.88 (m, 1H), 8.35-8.27 (m, 1H), 8.11-8.03 (m, 1H), 8.02-7.95 (m, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.29-7.13 (m, 4H), 6.99 (s, 1H), 6.66 (br, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.64-5.55 (m, 1H), 5.43 (s, 1H), 5.36-5.20 (m, 3H), 4.92-4.85 (m, 1H), 4.82-4.72 (m, 2H), 4.52-4.42 (m, 1H), 3.77-3.48 (m, 6H), 3.21-3.14 (m, 1H), 3.03-2.95 (m, 1H), 2.79-2.65 (m, 2H), 2.47-2.28 (m, 3H), 2.25-2.05 (m, 3H), 2.05-1.94 (m, 5H), 1.91-1.76 (m, 2H), 1.52-1.37 (m, 4H), 0.92-0.77 (m, 5H)。

・実施例１１
１－（（（Ｓ）－７－ベンジル－２０－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，５，８，１１，１４－ペンタアザイコシル）オキシ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロブタン－１－カルボキサミド１１

ステップ１
１－（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）メトキシ）シクロブタン－１－カルボキシレート１１ｂ

ベンジル１－ヒドロキシシクロブタン－カルボキシレート１１ａ（１６７ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ、「ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０１３年、第５６巻、＃１３、５５４１－５５５２頁」に開示されている既知の方法に従って調製）および８ｂ（１５０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて５ｍＬのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いてカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９２ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を添加した。氷水浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１０分間撹拌した。反応溶液に氷水２０ｍＬを加え、これを酢酸エチル（５ｍＬ×２）およびクロロホルム（５ｍＬ×５）で抽出した。有機相を合わせ、濃縮して、得られた残留物を３ｍＬのジオキサンに溶解した。水０．６ｍＬ、重炭酸ナトリウム（４１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）および９－フルオレンメチルクロロホルメート（１０５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で１時間撹拌した。水２０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（８ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１１ｂ（３７ｍｇ、収率１７．６％）を得た。
MS m/z (ESI): 514.6 [M+1]。

ステップ２
１－（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）メトキシ）シクロブタン－１－カルボン酸１１ｃ

１１ｂ（３７ｍｇ、７１．９μｍｏｌ）をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒（Ｖ：Ｖ＝２：１）３ｍＬに溶解し、続いてパラジウム炭素（１５ｍｇ、含有量：１０％）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で２時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークをテトラヒドロフランですすいだ。ろ液を濃縮して、表題生成物１１ｃ（３５ｍｇ、収率：８２％）を得、これを次のステップで直接使用した。

ステップ３
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロブトキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート１１ｄ

１ｂ（１０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴、０．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の１１ｃ（１３ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２５ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を添加し、反応溶液を氷浴中で４０分間撹拌した。水８ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（８ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ａを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１１ｄ（１９ｍｇ、収率７３．９％）を得た。
MS m/z (ESI): 842.3 [M+1]。

ステップ４
１－（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロブタン－１－カルボキサミド１１ｅ

１１ｄ（１９ｍｇ、２２．６μｍｏｌ）を２ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて１ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。１ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。パルプに４ｍＬのｎ－ヘキサンを加え、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して、粗表題生成物１１ｅ（１５ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。

ステップ５
１－（（（Ｓ）－７－ベンジル－２０－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，５，８，１１，１４－ペンタアザイコシル）オキシ）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロブタン－１－カルボキサミド１１

粗化合物１１ｅ（２ｍｇ、３．２２μｍｏｌ）を０．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。０．３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の８ｇ（１．５ｍｇ、３．１７μｍｏｌ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２．７ｍｇ、９．６７μｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で３０分間撹拌した。反応溶液をオイルポンプによるロータリーエバポレーションにより濃縮乾固し、ＤＭＦを除去した。残留物をＤＣＭに溶解し、薄層クロマトグラフィー（展開溶媒極性：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）によって２回精製し、表題生成物１１（１ｍｇ、収率２８．８％）を得た。

MS m/z (ESI): 1073.6 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 8.70-8.60 (m, 1H), 8.28-8.19 (m, 1H), 8.13-7.91 (m, 3H), 7.79-7.71 (d, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.25-7.09 (m, 4H), 6.98 (s, 1H), 6.71-6.62 (m, 1H), 6.55-6.47 (m, 1H), 5.64-5.54 (m, 2H), 5.40 (s, 1H), 5.35-5.27 (t, 2H), 5.17-5.10 (m, 2H), 4.60-4.51 (m, 1H), 4.51-4.35 (m, 2H), 3.93-3.78 (m, 3H), 3.71-3.59 (m, 3H), 3.01-2.88 (m, 3H), 2.70-2.64 (m, 2H), 2.44-2.30 (m, 3H), 2.28-2.14 (m, 3H), 2.11-1.92 (m, 6H), 1.90-1.76 (m, 3H), 1.51-1.39 (m, 4H), 0.92-0.75 (m, 6H)。

・実施例１２
（Ｓ）－３－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシプロパンアミド１２－Ａ
（Ｒ）－３－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシプロパンアミド１２－Ｂ

ステップ１
３－シクロプロピル－２－ヒドロキシプロパン酸１２ｂ

１２ａ（０．５ｇ、３．８７ｍｍｏｌ、供給元：Ａｄａｍａｓ）を水と酢酸の混合溶媒（Ｖ：Ｖ＝４：１）３５ｍＬに溶解し、該溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。亜硝酸ナトリウムの２Ｍ水溶液（０．５３ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応溶液を室温まで温め、３時間撹拌した。固体の塩化ナトリウムを反応溶液に加えて水相を飽和させた。溶液を酢酸エチル（８ｍＬ×８）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮して、表題生成物１２ｂ（０．４５ｇ、収率８９．３％）を得た。

ステップ２
（Ｓ）－３－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシプロパンアミド１２－Ａ
（Ｒ）－３－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシプロパンアミド１２－Ｂ

１．５ｍＬのエタノールと１．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを１ｂ（４５ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）に添加した。溶液をアルゴンで３回パージした。０．１ｍＬのＮ－メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。１２ｂ（９０ｍｇ、０．６９１ｍｍｏｌ）、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（３４ｍｇ、０．２５１ｍｍｏｌ）および１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（４９ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）を反応溶液に連続して添加した。添加終了後、反応溶液を室温で３時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた粗化合物１２を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：Ｓｈａｒｐｓｉｌ－ＴＣ１８５μｍ２１．２×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製して、表題生成物（７ｍｇ、１５ｍｇ）を得た。

MS m/z (ESI): 547.9 [M+1]。

単一の立体配置を有する（より短い保持時間を有する）化合物
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．３４５分、純度：７２％（カラム：ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｈａｓｅＰｌｕｓＣ１８１．８μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.42 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.60-5.50 (m, 2H), 5.42 (s, 1H), 5.19 (q, 2H), 4.02-4.00 (m, 1H), 3.21-3.11 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.21-2.07 (m, 2H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.92-1.68 (m, 4H), 1.53-1.41 (m, 1H),0.87 (t, 3H), 0.48-0.34 (m, 2H) , 0.14-0.01 (m, 2H)。

単一の立体配置を有する（より長い保持時間を有する）化合物
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．３９９分、純度：８８％（カラム：ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｈａｓｅＰｌｕｓＣ１８１．８μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.36 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.58-5.51 (m, 1H), 5.48 (d, 1H), 5.42 (s, 1H),5.20 (q, 2H), 4.09-4.02 (m, 1H), 3.22-3.11 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.27-2.06 (m, 2H), 2.05-1.95 (m, 1H), 1.93-1.81 (m, 2H), 1.65-1.43 (m, 2H), 1.32-1.21 (m, 1H), 0.87 (t, 3H), 0.48-0.33 (m, 2H) , 0.14-0.01 (m, 2H)。

・実施例１３（参照例）
Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）－２－ヒドロキシアセトアミド

表題化合物１３は、特許出願ＥＰ２９０７８２４Ａ１の記載の１４７頁の実施例７６に開示された方法に従って調製された。

・実施例１４
Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（シクロプロピルメチル）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１４－Ａ
Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（シクロプロピルメチル）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１４－Ｂ

ステップ１
ベンジル３－シクロプロピル－２－ヒドロキシプロパノエート１４ａ

１２ｂ（２００ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのアセトニトリルに溶解し、次いで、炭酸カリウム（１．０６ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）、臭化ベンジル（０．１６ｍＬ、１．３４ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（２８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応溶液を室温で４８時間撹拌し、セライトを通してろ過した。ろ過ケークを酢酸エチル（１０ｍＬ）ですすぎ、ろ液を合わせ、減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１４ａ（１４０ｍｇ、収率４１．３％）を得た。

ステップ２
ベンジル１０－（シクロプロピルメチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート１４ｂ

１４ａ（９４ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ）および８ｂ（１３０ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて１０ｍＬのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いてカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（７９ｍｇ、０．７０４ｍｍｏｌ）を添加した。氷水浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１０分間撹拌した。反応溶液に氷水２０ｍＬを加えた後、これを酢酸エチル（１０ｍＬ×４）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１４ｂ（５０ｍｇ、収率２６．８％）を得た。
MS m/z (ESI): 529.2 [M+1]。

ステップ３
１０－（シクロプロピルメチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－酸１４ｃ

１４ｂ（２７ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を３ｍＬの酢酸エチルに溶解し、続いてパラジウム炭素（７ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で１時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークを酢酸エチルですすいだ。ろ液を濃縮して、粗表題生成物１４ｃ（２３ｍｇ）を得て、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 439.1 [M+1]。

ステップ４
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（３－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）オキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート１４ｄ

１ｂ（２２ｍｇ、４２．３８μｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン（４．３ｍｇ、４２．４９μｍｏｌ）を滴下し、次いで粗化合物１４ｃ（２３ｍｇ、５１．１μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１７．６ｍｇ、６３．６μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を氷浴中で４０分間撹拌した。水１５ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（８ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１４ｄ（２９ｍｇ、収率７９．９％）を得た。
MS m/z (ESI): 856.1[M+1]。

ステップ５
２－（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）－３－シクロプロピル－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）プロパンアミド１４ｅ

１４ｄ（２９ｍｇ、３３．９μｍｏｌ）を０．８ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．４ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。１ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。残留物に３ｍＬのｎ－ヘキサンを加えてパルプにし、しばらく放置した後、上清を注ぎ出し、これを３回繰り返した。残留物をオイルポンプにより乾固するまで減圧濃縮して、粗表題生成物１４ｅ（２２ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 634.1[M+1]。

ステップ６
Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（シクロプロピルメチル）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１４－Ａ
Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－（シクロプロピルメチル）－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）－６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサンアミド１４－Ｂ

粗化合物１４ｅ（２２ｍｇ、３３．９μｍｏｌ）を２．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。８ｇ（２４ｍｇ、５０．８μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１４ｍｇ、５０．６μｍｏｌ）を連続して添加した。氷水浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、１時間撹拌して化合物１４を得た。反応溶液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製して、表題生成物（２ｍｇ、２ｍｇ）を得た。

MS m/z (ESI): 1088.4 [M+1]。

単一の立体配置を有する（より短い保持時間を有する）化合物：
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．１８分、純度：８８％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。

単一の立体配置を有する（より長い保持時間を有する）化合物：
ＵＰＬＣ分析：保持時間：１．２３分、純度：９６％（カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＢＥＨＣ１８１．７μｍ２．１×５０ｍｍ、移動相：Ａ－水（５ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル）。

・実施例１５
１－（（Ｓ）－９－ベンジル－２２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，８，１１，１４，１７－ペンタオキソ－２－オキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザドコシル）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロプロパン－１－カルボキサミド１５

ステップ１
ベンジル１－（１０－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５，８－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザデシル）シクロプロパン－１－カルボキシレート１５ｂ

８ｂ（５００ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて６ｍＬのテトラヒドロフランを添加した。ベンジル１－ヒドロキシメチルシクロプロパン－１－カルボキシルレート１５ａ（２３３ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ；特許出願「ＥＰ２８６２８５６Ａ１」の記載の２６２頁の実施例２２－２に開示された方法に従って調製）を反応フラスコに添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いて水素化ナトリウム（５４ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）を添加した。氷水浴を取り除き、反応溶液を室温まで温め、４０分間撹拌した。反応溶液を０℃に冷却し、これに２０ｍＬの氷水を加えた。溶液を酢酸エチル（５ｍＬ×２）およびクロロホルム（５ｍＬ×５）で抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１５ｂ（１５ｍｇ、収率２．５％）を得た。
MS m/z (ESI): 515.2 [M+1]。

ステップ２
１－（１０－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５，８－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザデシル）シクロプロパン－１－カルボン酸１５ｃ

１５ｂ（１５ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を２ｍＬの酢酸エチルに溶解し、続いてパラジウム炭素（３ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で４．５時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークを酢酸エチルですすいだ。ろ液を濃縮して、表題生成物１５ｃ（１１ｍｇ、収率８９％）を得た。
MS m/z (ESI): 425.2 [M+1]。

ステップ３
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロプロピル）メトキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート１５ｄ

１ｂ（１０ｍｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴、１５ｃ（１１ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１０．７ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）を添加した。添加終了後、反応溶液を室温で６０分間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（５ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１５ｄ（１９ｍｇ、収率８７．０％）を得た。
MS m/z (ESI): 842.2 [M+1]。

ステップ４
１－（（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）メチル）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロプロパン－１－カルボキサミド１５ｅ

１５ｄ（１９ｍｇ、２２．５６μｍｏｌ）を２ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて１ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応溶液を０℃で減圧濃縮した。トルエン１ｍＬを加え、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して、粗表題生成物１５ｅ（１３．９ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 620.1 [M+1]。

ステップ５
１－（（Ｓ）－９－ベンジル－２２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，８，１１，１４，１７－ペンタオキソ－２－オキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザドコシル）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロプロパン－１－カルボキサミド１５

粗化合物１５ｅ（１３．９ｍｇ、２２．４μｍｏｌ）を１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。８ｇ（１５．８ｍｇ、３３．４μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（９．３ｍｇ、３３．６μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温まで温め、６０分間撹拌した。反応溶液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物１５（２．５ｍｇ、収率１０．３％）を得た。

MS m/z (ESI): 1074.2 [M+1]。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.51-8.37 (m, 1H), 8.22 (t, 1H), 8.14-8.02 (m, 2H), 8.011-7.94 (m, 1H), 7.82-7.73 (m, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.26-7.10 (m, 3H), 6.98 (s, 1H), 6.53-6.47 (m, 1H), 5.62-5.50 (m, 1H), 5.45-5.36 (m, 1H), 5.35-5.23 (m, 2H), 5.13-5.02 (m, 2H), 4.61-4.50 (m, 2H), 4.42-4.28 (m, 2H), 3.76-3.61 (m, 3H), 3.60-3.45 (m, 3H), 3.27-3.23 (m, 1H), 3.20-2.81 (m,7H), 2.75-2.61 (m, 3H), 241-2.28 (m, 3H), 2.23-2.13 (m, 2H), 2.11-2.01 (m, 1H), 2.03-1.94 (m, 1H), 1.90 (s, 1H), 1.87-1.74 (m, 2H), 1.53-1.36 (m, 3H), 1.29-1.08 (m, 4H), 0.90-0.68 (m, 4H)。

・実施例１６
１－（（Ｓ）－９－ベンジル－２２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，８，１１，１４，１７－ペンタオキソ－２－オキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザドコシル）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロブタン－１－カルボキサミド１６

ステップ１
１－（ヒドロキシメチル）シクロブタン－１－カルボン酸１６ｂ

エチル１－（ヒドロキシメチル）シクロブタンカルボキシレート１６ａ（２５０ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ、供給元：Ａｌｆａ）をメタノール（２ｍＬ）および水（１ｍＬ）に溶解し、続いて水酸化ナトリウム（１２６ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を４０℃まで温め、３時間撹拌した。反応溶液を室温まで冷却し、減圧濃縮して有機溶媒を除去した。溶液をエーテル（１０ｍＬ）で抽出し、水相を集めた。水相を６Ｎ塩酸水溶液でｐＨ３～４に調整し、減圧濃縮して固体を得た。トルエン３ｍＬを加え、溶液を減圧下で濃縮乾固し、これを３回繰り返した。残留物をオイルポンプで乾燥させて、粗表題生成物１６ｂ（２０６ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI，NEG):129.2 [M-1]。

ステップ２
ベンジル１－（ヒドロキシメチル）シクロブタン－１－カルボキシレート１６ｃ

粗化合物１６ｂ（２０６ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）に溶解し、続いて無水炭酸カリウム（１．０９ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、ヨウ化テトラブチルアンモニウム（２９ｍｇ、７８．５１μｍｏｌ）および臭化ベンジル（２１６ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で一晩撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１６ｃ（１１２ｍｇ、収率３２．１％）を得た。
MS m/z (ESI): 221.1 [M+1]。

ステップ３
ベンジル１－（１０－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５，８－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザデシル）シクロブタン－１－カルボキシレート１６ｄ

１６ｃ（７７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）および８ｂ（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて３ｍＬのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いてカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（６１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を氷水浴中で１０分間撹拌した。反応溶液に氷水２０ｍＬを加えた後、これを酢酸エチル（５ｍＬ）およびクロロホルム（５ｍＬ×５）で抽出した。有機相を合わせ、濃縮した。得られた残留物を３ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解した。水０．５ｍＬ、重炭酸ナトリウム（２７ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）および９－フルオレンメチルクロロホルメート（７０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で１時間撹拌した。水２０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１６ｄ（２４ｍｇ、収率１６．７％）を得た。
MS m/z (ESI): 551.3 [M+23]。

ステップ４
１－（１０－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５，８－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザデシル）シクロブタン－１－カルボン酸１６ｅ

１６ｄ（１２ｍｇ、２２．７μｍｏｌ）をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒（Ｖ：Ｖ＝２：１）１．５ｍＬに溶解した後、パラジウム炭素（５ｍｇ、含有量：１０％）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で２時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークを酢酸エチルですすいだ。ろ液を減圧濃縮して、粗表題生成物１６ｅ（１０ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。

ステップ５
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロブチル）メトキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）カルバメート１６ｆ

１ｂ（７．５ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴、０．５ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド中の粗化合物１６ｅ（１０ｍｇ）、および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（６ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を添加し、反応溶液を氷浴中で３０分間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィによって精製して、表題生成物１６ｆ（１０．６ｍｇ、収率８７．８％）を得た。
MS m/z (ESI): 856.2 [M+1]。

ステップ６
１－（（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）メチル）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロブタン－１－カルボキサミド１６ｇ

１６ｆ（１０．６ｍｇ、１２．４μｍｏｌ）を０．６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．３ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して粗表題生成物１６ｇ（８ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 634.1 [M+1]。

ステップ７
１－（（Ｓ）－９－ベンジル－２２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－５，８，１１，１４，１７－ペンタオキソ－２－オキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザドコシル）－Ｎ－（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）シクロブタン－１－カルボキサミド１６

粗化合物１６ｇ（８ｍｇ）を１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。８ｇ（８．８ｍｇ、１８．６μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（５．２ｍｇ、１８．８μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で３０分間撹拌した。反応液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製して、表題生成物１６（１．０ｍｇ、収率７．２％）を得た。
MS m/z (ESI): 1088.0 [M+1]。

・実施例１７
（１ｒ，４ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－７－ベンジル－１－（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロプロポキシ）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１－ノナオキサ－２，５，８，１１，１４－ペンタアザトリテトラコンタン－４３－イル）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド１７

ステップ１
Ｔｅｒｔ－ブチル１－フェニル－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９－デカオキサヘントリアコンタン－３１－オエート１７ｂ

１－フェニル－２，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６－ノナオキサオクタコサン－２８－オール１７ａ（０．３４ｇ、０．６７ｍｍｏｌ、供給元：ＢｉｄｅＰｈａｒｍａｔｅｃｈＬｔｄ．）を１０ｍＬのジクロロメタンに溶解した後、酸化銀（０．２４ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルブロモアセテート（０．１６ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（０．０７ｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応溶液を室温で３時間撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１７ｂ（０．４２ｇ、収率１００％）を得た。
MS m/z (ESI): 636.3 [M+18]。

ステップ２
Ｔｅｒｔ－ブチル２９－ヒドロキシ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－ノナオキサノナコサン－１－オエート１７ｃ

１７ｂ（４１７ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を１５ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、続いてパラジウム炭素（１１０ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、６０℃まで温め、３時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークをテトラヒドロフランですすいだ。ろ液を濃縮して粗表題生成物１７ｃ（３５７ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 546.2 [M+18]。

ステップ３
Ｔｅｒｔ－ブチル２９－アジド－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－ノナオキサノナコサン－１－オエート１７ｄ

１７ｃ（３５７ｍｇ、０．６７５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのトルエンに溶解し、続いてジフェニルアジドホスフェート（２７９ｍｇ、１．０１４ｍｍｏｌ）および１，８－ジアザビシクロウンデカ－７－エン（２０６ｍｇ、１．３５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、室温で２時間撹拌した後、１０５℃で１９時間撹拌した。反応溶液を室温に冷却し、濃縮した。水２０ｍＬを加え、溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×４）で抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、粗表題生成物１７ｄ（４１２ｍｇ）を得た。
MS m/z (ESI): 571.3 [M+18]。

ステップ４
Ｔｅｒｔ－ブチル２９－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７－ノナオキサノナコサン－１－オエート１７ｅ

１７ｄ（２３０ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）を８ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、続いてパラジウム炭素（５８ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で２時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークをテトラヒドロフランですすいだ。ろ液を濃縮して粗表題生成物１７ｅ（２２０ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 528.2 [M+1]。

ステップ５
Ｔｅｒｔ－ブチル１－（（１ｒ，４ｒ）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキシル）－１－オキソ－５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９－ノナオキサ－２－アザヘントリアコンタン－３１－オエート１７ｆ

（１ｒ，４ｒ）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸（９８．５ｍｇ、０．４１５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍＬに溶解し、続いて２－（７－オキサベンゾトリアゾール）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート（１９０ｍｇ、０．５００ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１６２ｍｇ、１．２５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージした後、粗化合物１７ｅ（２２０ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で１時間撹拌した。水１５ｍＬを加え、反応溶液をジクロロメタン（８ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１７ｆ（１２２ｍｇ、収率３９．２％）を得た。
MS m/z (ESI): 747.2[M+1]。

ステップ６
１－（（１ｒ，４ｒ）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキシル）－１－オキソ－５，８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９－ノナオキサ－２－アザヘントリアコンタン－３１－酸１７ｇ

１７ｆ（１２２ｍｇ、０．１６３ｍｍｏｌ）を０．８ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．４ｍＬのトリフルオロ酢酸を添加した。反応溶液を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタン１５ｍＬを加えて反応溶液を希釈した後、減圧濃縮した。１０ｍＬのｎ－ヘキサンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。１０ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮した。ｎ－ヘキサン：エーテル＝５：１の混合溶媒１０ｍＬをパルプに添加し、これをｐＨが７に近づくまで３回繰り返した。溶液をオイルポンプにより乾固するまで濃縮して、表題生成物１７ｇ（９８ｍｇ、収率８６．８％）を得た。
MS m/z (ESI): 691.2[M+1]。

ステップ７
２，４－ジメトキシベンジル１－（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）アセトアミド）メトキシ）シクロプロパン－１－カルボキシレート１７ｈ

８ｄ（１６４ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、次いで、２，４－ジメトキシベンジルアルコール（８１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、１－エチル－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１１５ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）を添加した。添加終了後、反応溶液を室温で１時間撹拌した。水２０ｍＬを加え、振とうした後、溶液を分配した。水相をジクロロメタン（８ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１７ｈ（１２４ｍｇ、収率５５．４％）を得た。
MS m/z (ESI): 583.1[M+23]。

ステップ８
２，４－ジメトキシベンジル（Ｓ）－１－（（１１－ベンジル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２－オキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザヘプタデカン－１７－イル）オキシ）シクロプロパン－１－カルボキシレート１７ｊ

１７ｈ（３９ｍｇ、６９．６μｍｏｌ）を０．６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．３ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物を２ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解し、続いて（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）グリシルグリシル－Ｌ－フェニルアラニン１７ｉ（３５ｍｇ、６９．８μｍｏｌ、特許出願「ＣＮ１０８８５３５１４Ａ」の記載の１３頁の実施例７－１２に開示された方法に従って調製）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２３ｍｇ、８３．１μｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で１時間撹拌した。水１０ｍＬを加え、溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１７ｊ（４８ｍｇ、収率８３．９％）を得た。
MS m/z (ESI): 822.0[M+1]。

ステップ９
（Ｓ）－１－（（１１－ベンジル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２－オキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザヘプタデカン－１７－イル）オキシ）シクロプロパン－１－カルボン酸１７ｋ

１７ｊ（４８ｍｇ、５８．４μｍｏｌ）をジクロロメタン中の３％（ｖ／ｖ）ジクロロ酢酸１．４ｍＬに溶解し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルシラン（２１ｍｇ、１８０．６μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で３時間撹拌した。反応溶液を氷浴中で減圧濃縮し、有機溶媒の半分を除去した。５ｍＬのエーテルを加え、溶液を自然に室温まで温め、パルプ化した。白色の固体を沈殿させ、ろ過した。ろ過ケークを集め、オイルポンプで乾燥させて、表題生成物１７ｋ（３３ｍｇ、収率８４．１％）を得た。

ステップ１０
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（Ｓ）－７－ベンジル－１－（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロプロポキシ）－３，６，９，１２－テトラオキソ－２，５，８，１１－テトラアザトリデカン－１３－イル）カルバメート１７ｌ

１ｂ（２０ｍｇ、４２．４μｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いてジクロロメタン中の１０％（ｖ／ｖ）メタノール１ｍＬを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴を加え、反応溶液を１ｂが溶解するまで撹拌した。１７ｋ（３３ｍｇ、４９．１μｍｏｌ）をジクロロメタン中の１０％（ｖ／ｖ）メタノール１ｍＬに溶解した。得られた溶液を上記の反応溶液に滴下し、続いて４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１７．６ｍｇ、６３．６μｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温まで温め、１時間撹拌した。１０ｍＬのジクロロメタンと５ｍＬの水を加え、溶液を５分間撹拌し、分配するために放置した。有機相を集めた。水相をジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１７ｌ（３７ｍｇ、収率８０．２％）を得た。
MS m/z (ESI): 1090.1[M+1]。

ステップ１１
（１ｒ，４ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－７－ベンジル－１－（１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）シクロプロポキシ）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１－ノナオキサ－２，５，８，１１，１４－ペンタアザトリテトラコンタン－４３－イル）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド１７

１７ｌ（１５．５ｍｇ、１４．２３μｍｏｌ）を０．６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．３ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮し、オイルポンプにより乾燥させた。得られた粗生成物を１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。１７ｇ（１１ｍｇ、１５．９２μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（６．０ｍｇ、２１．６８μｍｏｌ）を加えた。反応溶液をアルゴンで３回パージし、室温で３０分間撹拌した。反応溶液を高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物１７（１６ｍｇ、収率２７．４％）を得た。

MS m/z (ESI): 1556.4 [M+18]。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.98 (d, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.20 (br, 1H), 8.12-7.95 (m, 3H), 7.93-7.76 (m, 2H), 7.75-7.66 (m, 2H), 7.24 (s, 1H), 7.20-7.05 (m, 6H), 6.97 (s, 1H), 6.64 (br, 1H), 6.55 (d, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.61-5.52 (m, 2H), 5.37 (s, 1H), 5.33-5.23 (m, 2H), 5.18 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.65-4.55 (m, 2H), 4.53-4.45 (m, 1H), 4.38-4.28 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.67 (d, 3H), 3.60-3.40 (m, 33H), 3.18 (d, 1H), 3.15-3.08 (m, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.00-1.92 (m, 3H), 1.85 (s, 2H), 1.82-1.73 (m, 2H), 1.68-1.52 (m, 4H), 1.29-1.15 (m, 3H), 0.86-0.76 (m, 5H)。

・実施例１８
（１ｒ，４ｒ）－Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキソ－３，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－デカオキサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタアザヘキサテトラコンタン－４６－イル）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド１８

ステップ１
ベンジル（Ｒ）－２－シクロプロピル－２－ヒドロキシアセテート１８ａ
ベンジル（Ｓ）－２－シクロプロピル－２－ヒドロキシアセテート１８ｂ

２ａ（７．４ｇ、６３．７ｍｍｏｌ）を２００ｍＬのアセトニトリルに溶解し、次いで炭酸カリウム（３５ｇ、２５３．６ｍｍｏｌ）、臭化ベンジル（９．３ｇ、５４．４ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（５００ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を連続して添加した。反応溶液を室温で１６時間撹拌し、セライトを通してろ過した。ろ過ケークを酢酸エチル（１０ｍＬ）ですすぎ、ろ液を合わせ、減圧濃縮した。得られた残留物４．１ｇを、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。キラル分離をさらに行い、表題生成物１８ａ（１．１ｇ）および１８ｂ（１．２ｇ）を得た。

ステップ２
ベンジル（Ｒ）－１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート１８ｃ

８ｂ（３．１ｇ、８．４１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５５ｍＬ）に溶解し、続いて１８ａ（２．０ｇ、９．７０ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いてカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（１．８９ｇ、１６．８４ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を氷水浴中で１０分間撹拌した。酢酸エチル（３０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）を加え、溶液を分配するために放置した。水相をクロロホルム（３０ｍＬ×５）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を減圧濃縮し、得られた残留物を１，４－ジオキサン（３２ｍＬ）および水（８ｍＬ）に溶解した。炭酸ナトリウム（１．７８ｇ、１６．７９ｍｍｏｌ）および９－フルオレンメチルクロロホルメート（２．１８ｇ、８．４２ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で２時間撹拌した。反応溶液に水（３０ｍＬ）を加え、これを酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（３０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１８ｃ（１．３ｇ、収率３０．０％）を得た。
MS m/z (ESI): 515.2[M+1]。

ステップ３
（Ｒ）－１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－酸１８ｄ

１８ｃ（１．２９ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（１５ｍＬ）に溶解し、続いてパラジウム炭素（２６０ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で５時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークを酢酸エチル（２０ｍＬ）およびメタノール（２０ｍＬ）ですすいだ。ろ液を濃縮して粗表題生成物１８ｄ（９８０ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 425.1 [M+1]。

ステップ４
２，４－ジメトキシベンジル（Ｒ）－１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート１８ｅ

粗化合物１８ｄ（９８０ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、次いで２，４－ジメトキシベンジルアルコール（７７７ｍｇ、４．６２ｍｍｏｌ）、１－エチル－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（６６４ｍｇ、３．４６ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（２８ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮し、有機溶媒を除去した。水２０ｍＬを加え、溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（３０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１８ｅ（８１０ｍｇ、収率６１．１％）を得た。
MS m/z (ESI): 575.0[M+1]。

ステップ５
２，４－ジメトキシベンジル（Ｒ）－２－（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）－２－シクロプロピルアセテート１８ｆ

１８ｅ（３３ｍｇ、５７．４μｍｏｌ）を０．６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．３ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して粗表題生成物１８ｆ（２１ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。

ステップ６
２，４－ジメトキシベンジル（１１Ｓ，１９Ｒ）－１１－ベンジル－１９－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，１８－ジオキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザイコサン－２０－オエート１８ｇ

粗化合物１８ｆ（２１ｍｇ、５７．４μｍｏｌ）を３ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。１７ｉ（２９ｍｇ、５７．８μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１９ｍｇ、６８．７μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で１時間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１８ｇ（３７ｍｇ、収率７７．１％）を得た。
MS m/z (ESI): 853.0[M+18]。

ステップ７
（１１Ｓ，１９Ｒ）－１１－ベンジル－１９－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，１８－ジオキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザイコサン－２０－酸１８ｈ

１８ｇ（３７ｍｇ、４４．３μｍｏｌ）をジクロロメタン中の３％（ｖ／ｖ）ジクロロ酢酸１．４ｍＬに溶解し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルシラン（１５．４ｍｇ、１３２．４μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で３時間撹拌した。反応溶液を氷浴中で減圧濃縮し、有機溶媒の半分を除去した。５ｍＬのエーテルを加え、溶液を自然に室温まで温め、パルプ化した。白色の固体を沈殿させ、ろ過した。ろ過ケークを集め、オイルポンプで乾燥させて、表題生成物１８ｈ（２４ｍｇ、収率７９．１％）を得た。
MS m/z (ESI): 708.2[M+23]。

ステップ８
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）カルバメート１８ｉ

１ｂ（３０ｍｇ、６３．６μｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いてジクロロメタン中の１０％（ｖ／ｖ）メタノール１ｍＬを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴を加え、反応溶液を１ｂが溶解するまで撹拌した。１８ｈ（６５ｍｇ、９４．８μｍｏｌ）をジクロロメタン中の１０％（ｖ／ｖ）メタノール１ｍＬに溶解し、得られた溶液を上記の反応溶液に滴下した後、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２７ｍｇ、９７．６μｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温まで温め、１時間撹拌した。１０ｍＬのジクロロメタンと５ｍＬの水を加え、溶液を５分間撹拌し、分配するために放置した。有機相を集めた。水相をジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１８ｉ（２５ｍｇ、収率３５．６％）を得た。
MS m/z (ESI): 1104.4[M+1]。

ステップ９
（Ｓ）－２－（２－（２－アミノアセトアミド）アセトアミド）－Ｎ－（２－（（（（Ｒ）－１－シクロプロピル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－２－オキソエトキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）－３－フェニルプロパンアミド１８ｊ

１８ｉ（１２ｍｇ、１０．９μｍｏｌ）を０．６ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．３ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１．５時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して、粗表題生成物１８ｊ（１０ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。
MS m/z (ESI): 881.0 [M+1]。

ステップ１０
（１ｒ，４ｒ）－Ｎ－（（２Ｒ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキソ－３，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－デカオキサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタアザヘキサテトラコンタン－４６－イル）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド１８

粗化合物１８ｊ（１０ｍｇ）を１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。１７ｇ（８．５ｍｇ、１２．３μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（４．６ｍｇ、１６．６μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で３０分間撹拌した。反応溶液をろ過し、高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物１８（９．５ｍｇ、収率５６．２％）を得た。

MS m/z (ESI): 1570.2 [M+18]。
¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.77 (d, 1H), 8.59-8.55 (m, 1H), 8.42 (d, 1H), 8.37-8.28 (m, 1H), 8.25-8.06 (m, 2H), 7.96-7.86 (m, 1H), 7.86-7.70 (m, 2H), 7.32-7.28 (m, 1H), 7.25-7.14 (m, 3H), 6.67 (m, 1H), 5.96 (s, 1H), 5.80-5.72 (m, 1H), 5.62-5.52 (m, 2H), 5.43-5.30 (m, 3H), 5.28-5.17 (m, 2H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.72-4.35 (m, 8H), 3.95-3.70 (m, 13H), 3.35-3.22 (m, 14H), 2.42-2.32 (m, 3H), 2.05-1.98 (m, 4H), 1.88-1.82 (m, 12H), 1.47-1.39 (m, 3H), 1.32-1.18 (m, 11H), 0.90-0.80 (m, 4H), 0.52-0.37 (m, 3H), 0.32-0.18 (m, 2H)。

・実施例１９
（１ｒ，４ｒ）－Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキソ－３，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－デカオキサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタアザヘキサテトラコンタン－４６－イル）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド１９

ステップ１
ベンジル（Ｓ）－１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート１９ａ

１８ｂ（２５２ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いて４ｍＬのジクロロメタンを添加した。反応溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却し、続いてリチウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を氷水浴中で１５分間撹拌したところ透明になった。８ｂ（３００ｍｇ、８１４．３μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷水浴中で２．５時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を加え、溶液を分配させた。水相をジクロロメタン（８ｍＬ×２）で抽出した。有機相を合わせ、水（１０ｍＬ×１）および飽和ブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮して、粗生成物を得た。得られた残留物を、展開溶媒系Ｃを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１９ａ（２８２ｍｇ、収率６７．２％）を得た。

ステップ２
（Ｓ）－１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－酸１９ｂ

１９ａ（２８０ｍｇ、０．５５４ｍｍｏｌ）を８ｍＬの酢酸エチルに溶解し、続いてパラジウム炭素（８４ｍｇ、含有量：１０％、乾燥）を添加した。反応溶液を水素で３回パージし、室温で３時間撹拌した。反応溶液をセライトでろ過し、ろ過ケークを酢酸エチルですすいだ。ろ液を濃縮して粗表題生成物１９ｂ（２３０ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。

ステップ３
２，４－ジメトキシベンジル（Ｓ）－１０－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，９－ジオキサ－４，７－ジアザウンデカン－１１－オエート１９ｃ

粗化合物１９ｂ（２３０ｍｇ、５４１．８μｍｏｌ）を７ｍＬのジクロロメタンに溶解し、次いで、２，４－ジメトキシベンジルアルコール（１３６．７ｍｇ、８１２．７μｍｏｌ）、１－エチル－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１５５ｍｇ、８０８．５μｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（６．６ｍｇ、５３．５μｍｏｌ）を連続して添加した。反応溶液を室温で１６時間撹拌した。反応溶液を１０ｍＬのジクロロメタンで希釈し、水（１０ｍＬ×１）および飽和ブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮して、粗生成物を得た。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィによって精製して、表題生成物１９ｃ（１５９ｍｇ、収率５１．０％）を得た。

ステップ４
２，４－ジメトキシベンジル（Ｓ）－２－（（２－アミノアセトアミド）メトキシ）－２－シクロプロピルアセテート１９ｄ

１９ｃ（６０ｍｇ、１０４．４μｍｏｌ）を１ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．５ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して粗表題生成物１９ｄ（２１ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。

ステップ５
２，４－ジメトキシベンジル（１１Ｓ，１９Ｓ）－１１－ベンジル－１９－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，１８－ジオキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザイコサン－２０－オエート１９ｅ

粗化合物１９ｄ（３６ｍｇ、１０２．２μｍｏｌ）を４ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。１７ｉ（５２ｍｇ、１０３．６μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（３４．６ｍｇ、１２５．０μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で１時間撹拌した。水１０ｍＬを加え、反応溶液を酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１９ｅ（７０ｍｇ、収率８０．２％）を得た。

ステップ６
（１１Ｓ，１９Ｓ）－１１－ベンジル－１９－シクロプロピル－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－２，１８－ジオキサ－４，７，１０，１３，１６－ペンタアザイコサン－２０－酸１９ｆ

１９ｅ（７０ｍｇ、８３．７μｍｏｌ）をジクロロメタン中の３％（ｖ／ｖ）ジクロロ酢酸２．５ｍＬに溶解し、溶液を氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルシラン（２９ｍｇ、２４９．４μｍｏｌ）を加え、反応溶液を氷浴中で３時間撹拌した。反応溶液を氷浴中で減圧濃縮し、有機溶媒の半分を除去した。エーテル５ｍＬを加え、溶液を自然に室温まで温め、パルプ化した。白色の固体を沈殿させ、ろ過した。ろ過ケークを集め、オイルポンプで乾燥させて、表題生成物１９ｆ（５７ｍｇ、収率９９．２％）を得た。

ステップ７
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５－ペンタオキソ－３－オキサ－５，８，１１，１４－テトラアザヘキサデカン－１６－イル）カルバメート１９ｇ

１ｂ（３０ｍｇ、６３．６μｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いてジクロロメタン中の１０％（ｖ／ｖ）メタノール１ｍＬを添加した。溶液をアルゴンで３回パージし、氷水浴中で０～５℃に冷却した。トリエチルアミン１滴を加え、反応溶液を１ｂが溶解するまで撹拌した。１９ｆ（５７ｍｇ、８３．１μｍｏｌ）をジクロロメタン中の１０％（ｖ／ｖ）メタノール１ｍＬに溶解し、得られた溶液を上記の反応溶液に滴下した後、４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（２６ｍｇ、９３．９μｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温まで温め、１時間撹拌した。１０ｍＬのジクロロメタンと５ｍＬの水を加え、溶液を５分間撹拌し、分配するために放置した。有機相を集めた。水相をジクロロメタン（１０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した。得られた残留物を、展開溶媒系Ｂを用いた薄層クロマトグラフィーによって精製して、表題生成物１９ｇ（５６ｍｇ、収率７９．８％）を得た。
MS m/z (ESI): 1103.1[M+1]。

ステップ８
（Ｓ）－２－（２－（２－アミノアセトアミド）アセトアミド）－Ｎ－（２－（（（（Ｓ）－１－シクロプロピル－２－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－２－オキソエトキシ）メチル）アミノ）－２－オキソエチル）－３－フェニルプロパンアミド１９ｈ

１９ｇ（４．６ｍｇ、４．１６μｍｏｌ）を１．５ｍＬのジクロロメタンに溶解し、続いて０．７５ｍＬのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で１．６時間撹拌した。反応溶液を減圧濃縮した。２ｍＬのトルエンを添加し、溶液を減圧濃縮し、これを２回繰り返した。３ｍＬのｎ－ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを３回繰り返した。溶液を減圧濃縮して、粗表題生成物１９ｈ（４．０ｍｇ）を得、これを精製せずに次のステップで直接使用した。

ステップ９
（１ｒ，４ｒ）－Ｎ－（（２Ｓ，１０Ｓ）－１０－ベンジル－２－シクロプロピル－１－（（（１Ｓ，９Ｓ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ、１２Ｈ－ベンゾ［デ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－１，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキソ－３，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１，４４－デカオキサ－５，８，１１，１４，１７－ペンタアザヘキサテトラコンタン－４６－イル）－４－（（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキサミド１９

粗化合物１９ｈ（４．０ｍｇ）を１ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドに溶解した。１７ｇ（２．９ｍｇ、４．２μｍｏｌ）および４－（４，６－ジメトキシ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド（１．５ｍｇ、５．４μｍｏｌ）を加えた。反応溶液を室温で４０分間撹拌した。反応溶液をろ過し、高速液体クロマトグラフィー（分離条件：カラム：ＸＢｒｉｄｇｅＰｒｅｐＣ１８ＯＢＤ５μｍ１９×２５０ｍｍ；移動層：Ａ－水（１０ｍｍｏｌＮＨ_４ＯＡｃ）、Ｂ－アセトニトリル、グラジエント溶出、流速：１８ｍＬ／分）によって精製した。対応する画分を集め、減圧濃縮して、表題生成物１９（２．１ｍｇ、収率３２．４％）を得た。

¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.71-8.62 (m, 1H), 8.59-8.51 (m, 1H), 8.34-8.26 (m, 1H), 8.14-8.02 (m, 2H), 7.95-7.86 (m, 1H), 7.83-7.69 (m, 2H), 7.35-7.31 (m, 1H), 7.29-7.11 (m, 3H), 7.01 (s, 1H), 6.72-6.50 (m, 3H), 5.59-5.50 (m, 2H), 5.42 (s, 2H), 5.38-5.18 (m, 3H), 4.79-4.69 (m, 2H), 4.61-4.42 (m, 3H), 3.91 (s, 2H), 3.79-3.65 (m, 4H), 3.63-3.44 (m, 13H), 3.41-3.30 (m, 2H), 3.26-3.09 (m, 5H), 3.08-2.84 (m, 4H), 2.81-2.64 (m, 3H), 2.42-2.28 (m, 3H), 2.24-2.12 (m, 2H), 2.05-1.93 (m, 4H), 1.89-1.77 (m, 2H), 1.72-1.56 (m, 3H), 1.53-1.38 (m, 3H), 1.34-1.10 (m, 11H), 0.94-0.78 (m, 5H), 0.52-0.35 (m, 3H)。

・実施例２０（参照例）

表題化合物２０は、特許出願ＣＮ１０４７５５４９４Ａの記載の１６３頁の実施例５８に開示された方法に基づいて調製された。

以下の抗体は、従来の方法（例えば、ベクター構築、ＨＥＫ２９３細胞（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１１６２５０１９）トランスフェクションなどの真核細胞トランスフェクション、精製および発現）に従って調製された。

以下が、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）の配列である：

以下が、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）の配列である：

以下が、Ｂ７Ｈ３抗体１Ｆ９ＤＳの配列である：

・実施例２１ＡＤＣ－１

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．０８２ｍＬ、０．８２μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；２．５ｍｌ、９．９６ｍｇ／ｍｌ、０．１６８μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、５．０ｍｇ／ｍｌに希釈した。次の反応のために２．０ｍｌの溶液を採取した。

化合物１０（より短い保持時間を有する化合物）（２．１ｍｇ，２．０２μｍｏｌ）を０．１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで、２．０ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１の例示的生成物ＡＤＣ－１のＰＢＳ緩衝溶液（５．０ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝５．０９。

・実施例２２ＡＤＣ－２

化合物１０（より長い保持時間を有する化合物）（２．１ｍｇ，２．０２μｍｏｌ）を０．１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで、２．０ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１の例示的生成物ＡＤＣ－２のＰＢＳ緩衝溶液（４．９５ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝７．３９。

・実施例２３ＡＤＣ－３

化合物８（２．１ｍｇ、２．０２μｍｏｌ）を０．１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで、２．０ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－３の例示的生成物ＡＤＣ－３のＰＢＳ緩衝溶液（５．２４ｍｇ／ｍＬ、１．１ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝７．３６。

・実施例２４ＡＤＣ－４

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．１７３ｍＬ、１．７３μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；３．７４ｍＬ、１３．３８ｍｇ／ｍＬ、０．３３８μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、６．７ｍｇ／ｍｌに希釈した。次の反応のために１．３ｍｌの溶液を採取した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（１．０ｍｇ、０．９３μｍｏｌ）を０．１０ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで、１．３ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－４Ａの例示的生成物ＡＤＣ－４のＰＢＳ緩衝溶液（１．７２ｍｇ／ｍＬ、２．３６ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝７．３９。

・実施例２５ＡＤＣ－５

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．０６７ｍＬ、０．６７μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；３．０ｍｌ、６．７０ｍｇ／ｍｌ、０．１３６μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、次の反応のために０．６１４ｍｌの溶液を採取した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（０．５ｍｇ、０．４２μｍｏｌ）を０．０３１ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、０．６１４ｍｌの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－４Ａの例示的生成物ＡＤＣ－５のＰＢＳ緩衝溶液（３．０８ｍｇ／ｍＬ、０．８２ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝３．１６。

・実施例２６ＡＤＣ－６

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．１７３ｍＬ、１．７３μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；３．７４ｍＬ、１３．３８ｍｇ／ｍＬ、０．３３８μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、６．７ｍｇ／ｍｌに希釈した。次の反応のために０．７５ｍｌの溶液を採取した。

化合物９－Ｂ（より長い保持時間を有する化合物９）（０．６８ｍｇ、０．６３μｍｏｌ）を０．１０ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、０．７５ｍｌの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－４Ｂの例示的生成物ＡＤＣ－６のＰＢＳ緩衝溶液（１．７８ｍｇ／ｍＬ、１．７８ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝３．９４。

・実施例２７ＡＤＣ－７

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．１７３ｍＬ、１．７３μｍｏｌ）を、抗体ペルツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；５．０ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、０．３３８μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、５．０ｍｇ／ｍｌに希釈した。次の反応のために１．０ｍｌの溶液を採取した。

化合物８（０．６５ｍｇ、０．６μｍｏｌ）を０．１ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで１．０ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－７の例示的生成物ＡＤＣ－７のＰＢＳ緩衝溶液（１．４２ｍｇ／ｍＬ、２．１５ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝６．９１。

・実施例２８ＡＤＣ－８

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．１７３ｍＬ、１．７３μｍｏｌ）を、抗体ペルツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；５．０ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、０．３３８μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、５．０ｍｇ／ｍｌに希釈した。次の反応のために１．６ｍｌの溶液を採取した。

化合物１０（より短い保持時間を有する化合物）（１．０４ｍｇ、１．０μｍｏｌ）を０．１ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで、１．６ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－８の例示的生成物ＡＤＣ－８のＰＢＳ緩衝溶液（２．１４ｍｇ／ｍＬ、２．３１ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝６．５８。

・実施例２９ＡＤＣ－９

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンの配合水溶液（１０ｍＭ、０．１７３ｍＬ、１．７３μｍｏｌ）を、抗体ペルツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；５．０ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、０．３３８μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却し、５．０ｍｇ／ｍｌに希釈した。次の反応のために０．８ｍｌの溶液を採取した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（０．５５ｍｇ、０．５μｍｏｌ）を０．１ｍＬのＤＭＳＯに溶解し、次いで、０．８ｍＬの上記溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－９Ａの例示的生成物ＡＤＣ－９のＰＢＳ緩衝溶液（２．２７ｍｇ／ｍＬ、１．１１ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－ＨＰＬＣにより計算した平均値：ｎ＝３．１６。

・実施例３０ＡＤＣ－１０

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、１９．７６μＬ、１９７．６μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．５７４ｍＬ、３８．７８ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１４（より短い保持時間を有する化合物）（０．６４ｍｇ、５８８ｎｍｏｌ）を４０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１０の例示的生成物ＡＤＣ－１０のＰＢＳ緩衝溶液（５．４８ｍｇ／ｍＬ、１．０３ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．２５。

（実施例３１）ＡＤＣ－１１

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、２２．２４μＬ、２２２．４ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．６４６ｍＬ、４３．６４ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうとうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１４（より長い保持時間を有する化合物）（０．７２ｍｇ、６６２ｎｍｏｌ）を４０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１０の例示的生成物ＡＤＣ－１１のＰＢＳ緩衝溶液（２．１３ｍｇ／ｍＬ、１．８７ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．０３。

・実施例３２ＡＤＣ－１２

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、２５．０μＬ、２５０．０ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．７２６ｍＬ、４９．０５ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１５（０．８１ｍｇ、７５４ｎｍｏｌ）を４０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１２の例示的生成物ＡＤＣ－１２のＰＢＳ緩衝溶液（３．３４ｍｇ／ｍＬ、１．４５ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．９３。

・実施例３３ＡＤＣ－１３

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、９．８８μＬ、９８．８ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．２８７ｍＬ、１９．３９ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１６（０．３２ｍｇ、２９４ｎｍｏｌ）を２０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１３の例示的生成物ＡＤＣ－１３のＰＢＳ緩衝溶液（２．３７ｍｇ／ｍＬ、０．８８ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．５３。

・実施例３４ＡＤＣ－１４

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、２０．３８μＬ、２０３．８ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．５９２ｍＬ、４０．０ｎｍｏｌ）に３７℃加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１７（０．９２ｍｇ、５９８ｎｍｏｌ）を４０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１４の例示的生成物ＡＤＣ－１４のＰＢＳ緩衝溶液（０．３０ｍｇ／ｍＬ、１２．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．６１。

・実施例３５ＡＤＣ－１５

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、２０．３８μＬ、２０３．８ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．５９２ｍＬ、４０．０ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１８（０．９３ｍｇ、５９９ｎｍｏｌ）を４０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１５の例示的生成物ＡＤＣ－１５のＰＢＳ緩衝溶液（０．３２ｍｇ／ｍＬ、１１．８ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．８９。

・実施例３６ＡＤＣ－１６

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、１８．２５μＬ、１８２．５ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．５３ｍＬ、３５．８ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物１９（０．８３ｍｇ、５３４ｎｍｏｌ）を３５μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１６の例示的生成物ＡＤＣ－１６のＰＢＳ緩衝溶液（０．３２ｍｇ／ｍＬ、１２．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．４３。

・実施例３７ＡＤＣ－１７

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、４３．２μＬ、４３２ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍＬ、１３５．１２ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（２．２２ｍｇ，２０６７ｎｍｏｌ）を１７５μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－４Ａの例示的生成物ＡＤＣ－１７のＰＢＳ緩衝溶液（１．３２ｍｇ／ｍＬ、１２．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝５．４２。

・実施例３８ＡＤＣ－１８（参照例）

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、５１．７μＬ、５１７ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍＬ、１０１．３ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物２０（２．０ｍｇ、１９３４ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１８の例示的生成物ＡＤＣ－１８のＰＢＳ緩衝溶液（０．７９ｍｇ／ｍＬ、１３．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．２３。

・実施例３９ＡＤＣ－１９

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、４６．９μＬ、４６９ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、１．３６ｍＬ、９１．９ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（２．０ｍｇ、１８６２ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－４Ａの例示的生成物ＡＤＣ－１９のＰＢＳ緩衝溶液（０．７３ｍｇ／ｍＬ、１３．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓによって計算された平均値：ｎ＝６．２６。

・実施例４０ＡＤＣ－２０

化合物１０（より長い保持時間を有する化合物）（２．０ｍｇ、１８１５ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１の例示的生成物ＡＤＣ－２０のＰＢＳ緩衝溶液（０．７３ｍｇ／ｍＬ、１３．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．４３。

（実施例４１）ＡＤＣ－２１（参照例）

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、６３．９μＬ、６３９ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、１．８６ｍＬ、１２５．４ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物２０（２．０７ｍｇ、２００１ｎｍｏｌ）を１５０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－１８の例示的生成物ＡＤＣ－２１のＰＢＳ緩衝溶液（２．９１ｍｇ／ｍＬ、４．４４ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．２３。

・実施例４２ＡＤＣ－２２

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、６４．９μＬ、６４９ｎｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、１．８８ｍＬ、１２７．２ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（２．１ｍｇ、１９５５ｎｍｏｌ）を１５０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－４Ａの例示的生成物ＡＤＣ－２２のＰＢＳ緩衝溶液（３．５６ｍｇ／ｍＬ、３．９８ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．７９。

・実施例４３ＡＤＣ－２３（参照例）

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、１１．８９ｍＬ、１１８．９μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、３４５ｍＬ、２３．３１μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３．５時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物２０（３６２ｍｇ、３５０μｍｏｌ）を、ＭｅＣＮ７．１２ｍｌおよびＤＭＳＯ３．５６ｍｌに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を、２％（ｖ／ｖ）ＭｅＣＮおよび１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）とコハク酸緩衝水溶液（ｐＨ＝５．３の０．０１Ｍコハク酸緩衝水溶液）を含む限外ろ過パックによって脱塩および精製した。スクロースを６０ｍｇ／ｍＬに加え、Ｔｗｅｅｎ２０を０．２ｍｇ／ｍＬに加えた。溶液を瓶詰めし、凍結乾燥して、式ＦＡＤＣ－１８の例示的な生成物ＡＤＣ－２３の凍結乾燥粉末サンプルを得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．０５。

・実施例４４ＡＤＣ－２４

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、１１．４４ｍＬ、１１４．４μｍｏｌ）を、抗体トラスツズマブのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、３３２ｍＬ、２２．４３μｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３．５時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（２４１ｍｇ，２２４μｍｏｌ）をＭｅＣＮ１３．７６ｍｌおよびＤＭＳＯ６．８８ｍｌに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を、４％（ｖ／ｖ）ＭｅＣＮおよび２％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）とコハク酸緩衝水溶液（ｐＨ＝５．３の０．０１Ｍコハク酸緩衝水溶液）を含む限外ろ過パックによって脱塩および精製した。スクロースを６０ｍｇ／ｍＬに加え、Ｔｗｅｅｎ２０を０．２ｍｇ／ｍＬに加えた。溶液を瓶詰めし、凍結乾燥して、式ＦＡＤＣ－４Ａの例示的生成物ＡＤＣ－２４の凍結乾燥粉末サンプルを得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．０７。

・実施例４５ＡＤＣ－２５

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、７３．７μＬ、７４０ｎｍｏｌ）を、抗体Ｂ７Ｈ３抗体１Ｆ９ＤＳのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、２．１４ｍＬ、１４４．６０ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（３．０ｍｇ、２７９３ｎｍｏｌ）を１５０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－２５の例示的生成物ＡＤＣ－２５のＰＢＳ緩衝溶液（１．２８ｍｇ／ｍＬ、１３．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．８７。

・実施例４６ＡＤＣ－２６（参照例）

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、３０．１μＬ、３００ｎｍｏｌ）を、抗体Ｂ７Ｈ３抗体１Ｆ９ＤＳのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．８９ｍＬ、６０．１４ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物２０（１．０ｍｇ、９６７ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－２６の例示的生成物ＡＤＣ－２６のＰＢＳ緩衝溶液（１．６１ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．１５。

・実施例４７ＡＤＣ－２７

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（１．０２ｍｇ、９５０ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－２５の例示的生成物ＡＤＣ－２７のＰＢＳ緩衝溶液（１．９４ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．１１。

・実施例４８ＡＤＣ－２８（参照例）

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、８１．３μＬ、８１０ｎｍｏｌ）を、抗体Ｂ７Ｈ３抗体１Ｆ９ＤＳのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、２．３６ｍＬ、１５９．４７ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物２０（３．０ｍｇ、２９０１ｎｍｏｌ）を１５０μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－２６の例示的生成物ＡＤＣ－２８のＰＢＳ緩衝溶液（１．２９ｍｇ／ｍＬ、１３．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓによって計算された平均値：ｎ＝７．４６。

・実施例４９ＡＤＣ－２９

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、２８．６μＬ、２９０ｎｍｏｌ）を、抗体Ｂ７Ｈ３抗体１Ｆ９ＤＳのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．８０ｍＬ、５０．０６ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物９－Ａ（より短い保持時間を有する化合物９）（１．２９ｍｇ、１２０１ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－２５の例示的生成物ＡＤＣ－２９のＰＢＳ緩衝溶液（２．６３ｍｇ／ｍＬ、２．４ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝７．２４。

・実施例５０ＡＤＣ－３０（参照例）

トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の配合水溶液（１０ｍＭ、２９．１μＬ、２９０ｎｍｏｌ）を、抗体Ｂ７Ｈ３抗体１Ｆ９ＤＳのＰＢＳ緩衝水溶液（ｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液；１０．０ｍｇ／ｍＬ、０．８６ｍＬ、５８．４ｎｍｏｌ）に３７℃で加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、３７℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液を水浴中で２５℃に冷却した。

化合物２０（１．０ｍｇ、９６７ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－２６の例示的生成物ＡＤＣ－３０のＰＢＳ緩衝溶液（１．６１ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．１５。

・実施例５１ＡＤＣ－３１

化合物８（１．０ｍｇ、９４３ｎｍｏｌ）を１００μｌのＤＭＳＯに溶解し、次いで、上記の反応溶液に加えた。反応溶液を水浴振とう機に入れ、２５℃で３時間振とうした後、反応を停止させた。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５ゲルカラム（溶出相：０．００１ＭＥＤＴＡを含有するｐＨ＝６．５の０．０５ＭＰＢＳ緩衝水溶液）で脱塩および精製して、式ＦＡＤＣ－３１の例示的生成物ＡＤＣ－３１のＰＢＳ緩衝溶液（１．４７ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍＬ）を得、これを４℃で保存した。

ＵＶ－Ｖｉｓにより計算された平均値：ｎ＝６．３３。

ＡＤＣストック溶液の薬物負荷の分析

実験の目的および原理

ＡＤＣストック溶液は、抗体コンジュゲート薬物の一種である。疾患を処置するためのその機構メカニズムは、抗体ターゲティングによって毒素分子を細胞内に送達し、それによって細胞を死滅させることである。薬物負荷は、薬物の有効性において決定的な役割を果たす。ＡＤＣストック溶液の薬物負荷は紫外線法によって決定された。

実験方法

コハク酸ナトリウム緩衝液を含むキュベットを、レファレンス吸収セルおよびサンプル測定吸収セルにそれぞれ配置した。溶媒ブランクを差し引いた後、試験溶液を含有するキュベットをサンプル測定吸収セルに入れ、２８０ｎｍおよび３７０ｎｍにおける吸光度を測定した。

結果の算出：ＡＤＣストック溶液の薬物負荷は、紫外分光光度法（装置：Ｔｈｅｒｍｏｎａｎｏｄｒｏｐ２０００紫外分光光度計）によって決定された。その原理は、特定の波長におけるＡＤＣストック溶液の総吸光度が、その波長における細胞毒性薬物の吸光度とモノクローナル抗体の吸光度の合計に等しいということである：
（１）Ａ_{２８０ｎｍ}＝ε_{ｍａｂ－２８０}ｂＣ_ｍａｂ＋ε_{Ｄｒｕｇ－２８０}ｂＣ_Ｄｒｕｇ
ε_{Ｄｒｕｇ－２８０}：２８０ｎｍにおける薬物のモル吸光係数の平均値は５１００である；
Ｃ_Ｄｒｕｇ：薬物の濃度；
ε_{ｍａｂ－２８０}：トラスツズマブストック溶液またはペルツズマブストック溶液の２８０ｎｍにおけるモル吸光係数の平均値は２１４６００である；
Ｃ_ｍａｂ：トラスツズマブストック溶液またはペルツズマブストック溶液の濃度；
ｂ：光路長は１ｃｍである。

同様にして、３７０ｎｍにおけるサンプルの総吸光度の式を得ることができる：
（２）Ａ_{３７０ｎｍ}＝ε_{ｍａｂ－３７０}ｂＣ_ｍａｂ＋ε_{Ｄｒｕｇ－３７０}ｂＣ_Ｄｒｕｇ
ε_{Ｄｒｕｇ－３７０}：３７０ｎｍにおける薬物のモル吸光係数の平均値は１９０００である；
Ｃ_Ｄｒｕｇ：薬物の濃度；
ε_{ｍａｂ－３７０}：トラスツズマブストック溶液またはペルツズマブストック溶液の３７０ｎｍにおけるモル吸光係数の平均値は０である；
Ｃ_ｍａｂ：トラスツズマブストック溶液の濃度；
ｂ：光路長は１ｃｍである。

薬物負荷は、２つの検出波長におけるモノクローナル抗体および薬物の吸光係数および濃度データと組み合わせて、２つの式（１）および（２）によって計算することができる。
薬物負荷＝Ｃ_Ｄｒｕｇ／Ｃ_ｍａｂ。

生物学的アッセイ

試験例１：腫瘍細胞増殖に対する式（Ｄ）の化合物の阻害のｉｎｖｉｔｒｏ試験

Ｉ．試験目的

この試験の目的は、Ｕ８７ＭＧ細胞（中国科学院細胞バンク、カタログ番号ＴＣＨｕ１３８）およびＳＫ－ＢＲ－３腫瘍細胞（ヒト乳癌細胞、ＡＴＣＣ、物品番号ＨＴＢ－３０）の増殖に対する、本発明の式（Ｄ）の薬物化合物のｉｎｖｉｔｒｏ阻害効果を試験することである。細胞を異なる濃度の化合物でｉｎｖｉｔｒｏで処理した。６日間培養した後、細胞増殖をＣＴＧ試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）ＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＣｅｌｌＶｉａｂｉｌｉｔｙＡｓｓａｙ、Ｐｒｏｍｅｇａ、商品番号：Ｇ７５７３）により測定し、化合物のｉｎｖｉｔｒｏ活性をＩＣ_５０値に従って評価した。

ＩＩ．試験方法

本発明の化合物の腫瘍細胞に対するｉｎｖｉｔｒｏ増殖阻害試験の試験方法を、Ｕ８７ＭＧ細胞に対するｉｎｖｉｔｒｏ増殖阻害試験方法を例として以下に説明する。この方法は、限定されるものではないが、他の腫瘍細胞に対するｉｎｖｉｔｒｏ増殖阻害試験にも適用可能である。

１．細胞培養：Ｕ８７ＭＧ細胞およびＳＫ－ＢＲ－３細胞を、それぞれ、１０％ＦＢＳを含有するＥＭＥＭ培地（ＧＥ、品番ＳＨ３００２４．０１）および１０％ＦＢＳを含有するマッコイ５Ａ培地（ＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａｍｅｄｉｕｍ）（Ｇｉｂｃｏ、品番１６６００－１０８）で培養した。

２．細胞調製：対数増殖期のＵ８７ＭＧ細胞およびＳＫ－ＢＲ－３細胞をＰＢＳ（リン酸緩衝液、ＳｈａｎｇｈａｉＢａｓａｌＭｅｄｉａＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＣｏ．，Ｌｔｄ．）で１回洗浄した後、２～３ｍｌのトリプシン（０．２５％トリプシン－ＥＤＴＡ（１×）、Ｇｉｂｉｃｏ，ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を加えて２～３分間消化した。細胞が完全に消化された後、１０～１５ｍｌの細胞培養培地を加えた。消化された細胞を溶出し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を捨て、１０～２０ｍｌの細胞培養培地を加えて細胞を再懸濁し、単細胞懸濁液を得た。

３．細胞プレーティング：Ｕ８７ＭＧおよびＳＫ－ＢＲ－３単細胞懸濁液を十分に混合し、細胞密度を細胞培養培地でそれぞれ２．７５×１０^３細胞／ｍｌおよび８．２５×１０^３細胞／ｍｌに調整した。密度調整した細胞懸濁液を十分に混合し、９６ウェル細胞培養プレートに１８０μｌ／ウェルで添加した。２００μｌの培養培地を９６ウェルプレートの周辺ウェル（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｗｅｌｌｓ）に添加した。プレートをインキュベーター内で２４時間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ_２）。

４．化合物の配合：化合物をＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド、ＳｈａｎｇｈａｉＴｉｔａｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．）で溶解して、初期濃度１０ｍＭのストック溶液を得た。

小分子化合物の初期濃度は５００ｎＭであり、配合方法は以下のとおりである。

３０μｌの異なる試験サンプルをそれぞれ、１００μＭのサンプル濃度で９６ウェルＵ字型底部配合プレートの１列目に加えた。２０μｌのＤＭＳＯを２列目から１１列目までの各ウェルに加えた。１列目からのサンプル１０μｌを２列目のＤＭＳＯ２０μｌに加えて十分に混合し、そこから１０μｌを取り出して３列目に加えた。以下、１０列目まで同様の操作を行った。配合プレートの各ウェルからの薬物５μｌを９５μｌのＥＭＥＭ培養培地に加え、後で使用するために十分に混合した。

ＡＤＣの初期濃度は１０ｎＭまたは５００ｎＭであり、配合方法は以下のとおりである。

１００μｌの異なる試験サンプルをそれぞれ、１００ｎＭまたは５μＭのサンプル濃度で９６ウェルプレートの１列目に加えた。１００μｌのＰＢＳを２列目から１１列目までの各ウェルに加えた。１列目からのサンプル５０μｌを２列目のＰＢＳ１００μｌに加えて十分に混合し、そこから５０μｌを取り出して３列目に加えた。以下、１０列目まで３倍希釈で同様の操作を行った。

５．サンプルローディング：異なる濃度の配合された試験サンプル２０μｌを培養プレートに加えた。各サンプルを２回ずつ試験した。プレートをインキュベーター内で６日間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ_２）。

６．着色操作：９６ウェル細胞培養プレートを取り出し、９０μｌのＣＴＧ溶液を各ウェルに加え、室温で１０分間インキュベートした。

７．プレートの読み取り：９６ウェル細胞培養プレートを取り出し、マイクロプレートリーダー（ＢＭＧｌａｂｔｅｃｈ，ＰＨＥＲＡｓｔａｒＦＳ）に入れて、化学発光を測定した。

ＩＩＩ．データ分析

データはＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌおよびＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ５で分析された。結果を次の表に示す。

表１ＳＫ－ＢＲ－３細胞およびＵ８７細胞の増殖に対する本開示の小分子フラグメントのｉｎｖｉｔｒｏ阻害のＩＣ_５０値

結論：本開示の小分子フラグメントはＳＫ－ＢＲ－３細胞およびＵ８７細胞の増殖に対して明らかな阻害活性を有し、キラル中心は化合物の阻害活性に対して一定の影響を有する。

試験例２：腫瘍細胞増殖に対する本発明のＨＥＲ２標的化抗体－薬物コンジュゲートの阻害のｉｎｖｉｔｒｏ試験

この試験の目的は、ＳＫ－ＢＲ－３細胞（ヒト乳癌細胞、ＡＴＣＣ、物品番号ＨＴＢ－３０）およびＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞（ヒト乳癌細胞、ＡＴＣＣ、物品番号ＨＴＢ－１３２）の増殖に対する、本発明のＨＥＲ２標的化抗体－薬物コンジュゲートのｉｎｖｉｔｒｏ阻害効果を試験することである。細胞を異なる濃度の化合物でｉｎｖｉｔｒｏで処理した。６日間培養した後、細胞増殖をＣＴＧ試薬により測定し、化合物のｉｎｖｉｔｒｏ活性をＩＣ_５０値に従って評価した。

試験例１の試験方法によれば、試験細胞はＳＫ－ＢＲ－３細胞およびＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞であり、細胞培養培地は、１０％ＦＢＳを含有するマッコイ５Ａ培地（ＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａｍｅｄｉｕｍ）（Ｇｉｂｃｏ、品番１６６００－１０８）、１０％ＦＢＳを含有するＥＭＥＭ培地（ＧＥ、品番ＳＨ３００２４．０１）、および１０％ＦＢＳを含有するＬ－１５培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、品番１１４１５－１１４）であった。３つの細胞株の生細胞密度は、細胞培養培地でそれぞれ８．３３×１０^３細胞／ｍｌ、８．３３×１０^３細胞／ｍｌおよび１．３９×１０^４細胞／ｍｌに調整された。密度調整した細胞懸濁液を十分に混合し、９６ウェル細胞培養プレートに１８０μｌ／ウェルで添加した。関連する化合物を試験し、その結果を以下の表に示す。

表２腫瘍細胞増殖に対する本発明のＨＥＲ２標的化抗体－薬物コンジュゲートのｉｎｖｉｔｒｏ阻害のＩＣ_５０値

結論：本開示のＨＥＲ２標的化抗体－薬物コンジュゲートは、ＨＥＲ２陽性細胞ＳＫ－ＢＲ－３の増殖に対して明らかな阻害活性を有する。一方、ＨＥＲ２陰性細胞ＭＤＡ－ＭＢ－４６８の増殖に対する阻害活性は低い。したがって、本開示のＨＥＲ２標的化抗体－薬物コンジュゲートは良好な選択性を有する。

試験例３：Ｈｅｒ２－ＡＤＣの血漿安定性試験

ＡＤＣ－１９サンプル、ＡＤＣ－１８サンプル、ＡＤＣ－２０サンプル、ヒト血漿、サル血漿（ＳｈａｎｇｈａｉＭｅｄｉｃｉｌｏｎＩｎｃ．）および１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）ＰＢＳ溶液（ＳａｎｇｏｎＢｉｏｔｅｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を、それぞれ滅菌のために０．２２μｍフィルターでろ過した。ＡＤＣ－１９、ＡＤＣ－１８およびＡＤＣ－２０を、それぞれ最終濃度２００μｇ／ｍｌで上記の滅菌血漿または１％ＢＳＡＰＢＳ溶液に添加し、次いでこれらを３７℃の細胞インキュベーター内でインキュベートし、インキュベーションの開始日を０日目として記録した。遊離毒素検出のために、７日目、１４日目および２１日目にサンプルを収集した。

２５μｌのサンプルを９６ウェルプレートに加えた。５０μＬの内部標準作業溶液（アセトニトリル中の１００ｎｇ／ｍＬカンプトテシン）と１５０μＬのアセトニトリルを加えた。溶液を５分間ボルテックスし、１０分間遠心分離した（４０００ｒｐｍ）。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）分析のために５μｌの溶液を取り出した。

結果は、ＡＤＣ－１９がヒト血漿、サル血漿および１％ＢＳＡＰＢＳ溶液中で非常に安定であることを示している。遊離毒素の放出率は２．１％を超えず、１４日目に安定になった。結果を図１Ａに示す。

ＡＤＣ－１８は、ヒト血漿およびサル血漿中での安定性が低く、遊離毒素の最高放出率はそれぞれ１４．５％および８．１０％であった。ＡＤＣ－１８は、１％ＢＳＡＰＢＳ溶液中で安定である。結果を図１Ｂに示す。

ＡＤＣ－２０は、ヒト血漿、サル血漿および１％ＢＳＡＰＢＳ溶液中での安定性が低く、遊離毒素の最高放出率はそれぞれ２１．７％、２９．７％および２１．７％であった。ＡＤＣ－２０は、１％ＢＳＡＰＢＳ溶液中では常に劣化状態にあった。結果を図１Ｃに示す。

試験例４：ＪＩＭＴ－１腫瘍ベアリングマウス（ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇｍｉｃｅ）における有効性評価

Ｉ．試験目的
Ｎｕｎｕヌードマウスを試験動物として使用して、トラスツズマブ（ハーセプチン）耐性ヒト乳癌細胞株ＪＩＭＴ－１移植腫瘍ヌードマウスに対するＨｅｒ２－ＡＤＣ抗体Ｔ－ＤＭ１、ＡＤＣ－２１およびＡＤＣ－２４の腹腔内注射後の有効性を評価した。

ＩＩ．試験薬物および材料

１．試験薬物
Ｔ－ＤＭ１（特許出願ＵＳ２００５０１６９９３３を参照して調製）
ＡＤＣ－２１：３ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－２１：１０ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－２４：３ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－２４：１０ｍｇ／ｋｇ
ブランク：ＰＢＳ
２．配合方法：薬物はすべてＰＢＳで希釈および配合された。
３．試験動物
Ｎｕｎｕヌードマウス（ＢｅｉｊｉｎｇＶｉｔａｌＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．より購入）。

ＩＩＩ．試験方法
ＪＩＭＴ－１細胞（ＮａｎｊｉｎｇＣｏｂｉｏｅｒＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓＣｏ．，Ｌｔｄ．）（５×１０^６細胞／マウス、５０％マトリゲルを有する）をマウスの右肋骨に皮下接種した。腫瘍が８日間成長し、２０３．０９±１１．９４ｍｍ^３に達した後、動物を、１群あたり８匹の動物を有する６群にランダムに群分けした（ｄ１）。

薬物を腹腔内注射により合計２回投与した。腫瘍体積および体重を週に２回測定し、データを記録した。

データ統計にはＥｘｃｅｌ２００３統計ソフトウェアを使用した：平均値はａｖｇとして計算された；ＳＤ値はＳＴＤＥＶとして計算された；ＳＥＭ値はＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴとして計算された；異なる群間のＰ値はＴＴＥＳＴとして計算された。
腫瘍体積（Ｖ）は、次のように計算された：Ｖ＝１／２×Ｌ_{ｌｅｎｇｔｈ}×Ｌ_{ｓｈｏｒｔ} ^２
相対体積（ＲＴＶ）＝Ｖ_Ｔ／Ｖ_０
腫瘍抑制率（％）＝（Ｃ_ＲＴＶ－Ｔ_ＲＴＶ）／Ｃ_ＲＴＶ（％）
式中、Ｖ_０およびＶ_Ｔは、それぞれ試験開始時および試験終了時の腫瘍体積を表す。Ｃ_ＲＴＶおよびＴ_ＲＴＶは、それぞれ、試験終了時のブランクコントロール群（ビヒクル、ＰＢＳ）および試験群の相対腫瘍体積を表す。

ＩＶ．試験結果
試験結果を図２に示す。薬物を腹腔内注射により２回投与し、観察３４日目に試験を終了した。Ｔ－ＤＭ１（１０ｍｇ／ｋｇ）は、腫瘍に対する抑制効果を示さない；ＡＤＣ－２１（３ｍｇ／ｋｇ）は、４６．２２％の腫瘍抑制率を示す（Ｐ＜０．０１）；ＡＤＣ－２１（１０ｍｇ／ｋｇ）は、５６．７７％の腫瘍抑制率を示す（Ｐ＜０．００１）；ＡＤＣ－２４（３ｍｇ／ｋｇ）は、６２．７７％の腫瘍抑制率を示す（Ｐ＜０．００１）；ＡＤＣ－２４（１０ｍｇ／ｋｇ）は、７６．３２％の腫瘍抑制率を示す（Ｐ＜０．００１）。同一用量で、ＡＤＣ－２４の腫瘍抑制効果はＡＤＣ－２１のそれよりも有意に優れている。

試験例５：ＳＫ－ＢＲ－３腫瘍ベアリングマウスにおける有効性評価

Ｉ．試験目的
Ｎｕｎｕヌードマウスを試験動物として使用して、ヒト乳癌細胞株ＳＫ－ＢＲ－３移植腫瘍ヌードマウスに対するＨｅｒ２－ＡＤＣ抗体ＡＤＣ－２１およびＡＤＣ－２２の腹腔内注射後の有効性を評価した。

ＩＩ．試験薬物および材料

１．試験薬物
ＡＤＣ－２１：１ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－２１：６ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－２２：１ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－２２：６ｍｇ／ｋｇ
ブランク：ＰＢＳ
２．配合方法：薬物はすべてＰＢＳで希釈および配合された。
３．試験動物
Ｎｕｎｕヌードマウス（ＢｅｉｊｉｎｇＶｉｔａｌＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．より購入）。

ＩＩＩ．試験方法
ＳＫ－ＢＲ－３細胞（ＡＴＣＣ）（５×１０^６細胞／マウス、５０％マトリゲルを有する）をマウスの右肋骨に皮下接種した。腫瘍が２０日間成長し、１５３．３４±１１．７３ｍｍ^３に達した後、動物を、１群あたり８匹の動物を有する５群にランダムに群分けした（ｄ０）。

薬物を腹腔内注射により１回投与した。腫瘍体積および体重を週に２回測定し、データを記録した。

データ統計にはＥｘｃｅｌ２００３統計ソフトウェアを使用した：平均値はａｖｇとして計算された；ＳＤ値はＳＴＤＥＶとして計算された；ＳＥＭ値はＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴとして計算された；異なる群間のＰ値はＴＴＥＳＴとして計算された。
腫瘍体積（Ｖ）は、次のように計算された：Ｖ＝１／２×Ｌ_{ｌｅｎｇｔｈ}×Ｌ_{ｓｈｏｒｔ} ^２
相対体積（ＲＴＶ）＝Ｖ_Ｔ／Ｖ_０
腫瘍抑制率（％）＝（Ｃ_ＲＴＶ－Ｔ_ＲＴＶ）／Ｃ_ＲＴＶ（％）
式中、Ｖ_０およびＶ_Ｔは、それぞれ試験開始時および試験終了時の腫瘍体積を表す。Ｃ_ＲＴＶおよびＴ_ＲＴＶは、それぞれ、実験終了時のブランクコントロール群および試験群の相対腫瘍体積を表す。

ＩＶ．試験結果
試験結果を図３に示す。薬物を腹腔内注射により１回投与し、観察２８日目に試験を終了した。ＡＤＣ－２１（１ｍｇ／ｋｇ）は１５．０１％の腫瘍抑制率を示し、ＡＤＣ－２１（６ｍｇ／ｋｇ）は７７．４％の腫瘍抑制率を示し、これはブランクコントロールの腫瘍抑制率とは有意に異なる（Ｐ＜０．００１）。ＡＤＣ－２２（１ｍｇ／ｋｇ）は１９．８２％の腫瘍抑制率を示し、ＡＤＣ－２２（６ｍｇ／ｋｇ）は９８．３８％の腫瘍抑制率を示す（Ｐ＜０．００１）。６ｍｇ／ｋｇの同一用量で、ＡＤＣ－２２の腫瘍抑制効果はＡＤＣ－２１のそれよりも有意に優れている。

試験例６：血漿安定性試験

ＡＤＣ－２５サンプルを、ヒト血漿、サル血漿および１％ＢＳＡＰＢＳ溶液とそれぞれ最終濃度１００μｇ／ｍｌで十分に混合し、滅菌のためにろ過した。混合物を３７℃の水浴中でインキュベートし、インキュベーションの開始日を０日目として記録した。遊離毒素検出のために、７日目、１４日目および２１日目にサンプルを収集した。

さまざまな時点で収集したサンプルを室温に冷却し、ボルテックスで十分に混合した。２５μｌのサンプルを９６ウェルプレートに加えた。５０μＬの内部標準作業溶液（アセトニトリル中の１００ｎｇ／ｍＬカンプトテシン）と１５０μＬのアセトニトリルを加えた。溶液を５分間ボルテックスし、１０分間遠心分離した（４０００ｒｐｍ）。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のために５μｌの溶液を取り出した。

結果を図４に示す。ＡＤＣ－２５は、ヒト血漿、サル血漿および１％ＢＳＡＰＢＳ溶液中で非常に安定である。遊離毒素の放出率は２％を超えず、１４日目に安定になった。

試験例７：ヌードマウスにおけるヒト脳アストロブラストーマＵ８７ＭＧ異種移植腫瘍に対するＡＤＣの有効性評価

Ｉ．試験目的
ＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウスを試験動物として使用して、ヌードマウスにおけるヒト脳アストロブラストーマＵ８７ＭＧ異種移植腫瘍に対する本開示のＡＤＣ化合物の有効性を評価した。

ＩＩ．試験薬物および材料

１．試験薬物
ＡＤＣ－２７（３ｍｇ／ｋｇ）
ＡＤＣ－２６（３ｍｇ／ｋｇ）
ブランク：ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）
２．配合方法：ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）。
３．試験動物
ＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウス（ＳｈａｎｇｈａｉＪｉｅＳｉＪｉｅＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣｏ．，Ｌｔｄ．より購入）。

ＩＩＩ．試験方法
試験にはＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウス（雌、６～７週齢）を使用した。ヒト脳アストロブラストーマＵ８７ＭＧ細胞（ヒト脳アストロブラストーマ、中国科学院細胞バンク、カタログ番号ＴＣＨｕ１３８）を皮下接種した。接種後１０日目に、動物をランダムに１群あたり８匹の動物に群分けし（Ｄ０）、薬物を腹腔内注射により３回（週に１回）投与した。腫瘍体積および体重を週に２～３回測定し、データを記録した。腫瘍体積（Ｖ）の計算式は、以下のとおりである：
Ｖ＝１／２×ａ×ｂ^２
式中、ａおよびｂは、それぞれ長さおよび幅を表す。
相対体積（ＲＴＶ）＝Ｖ_Ｔ／Ｖ_０
腫瘍抑制率（％）＝（Ｃ_ＲＴＶ－Ｔ_ＲＴＶ）／Ｃ_ＲＴＶ（％）
式中、Ｖ_０およびＶ_Ｔは、それぞれ試験開始時および試験終了時の腫瘍体積を表す。Ｃ_ＲＴＶおよびＴ_ＲＴＶは、それぞれ、試験終了時のコントロール群（ブランク）および試験群の相対腫瘍体積を表す。

ＩＶ．試験結果
腹腔内注射（ｉ．ｐ．）投与は３回（週に１回）行った。観察２２日目に、ＡＤＣ－２７（３ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は６３．３％に達し（Ｐ＜０．０００１）、ＡＤＣ－２６（３ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は４９．１％に達した。ＡＤＣ－２７はＡＤＣ－２６よりも強い抗腫瘍効果を示す。

投与中、各群の動物は正常な体重を示し、ＡＤＣには明らかな副作用がないことが示唆された。試験結果を表３および図５に示す。試験した抗体は、腫瘍ベアリングヌードマウスにおけるＵ８７ＭＧ異種移植腫瘍の成長を効果的に抑制することができ、用量依存的な様式を示す。

表３ヌードマウスにおけるヒト脳アストロブラストーマＵ８７ＭＧ異種移植腫瘍に対する投与された抗体の有効性（Ｄ２２）

試験例８：ヌードマウスにおけるヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト５６２異種移植腫瘍に対するＡＤＣの有効性評価

Ｉ．試験目的
ＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウスを試験動物として使用して、ヌードマウスにおけるヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト５６２異種移植腫瘍に対する本開示のＡＤＣ化合物の有効性を評価した。

ＩＩ．試験薬物および材料

１．試験薬物
ＡＤＣ－２９（３ｍｇ／ｋｇ）
ＡＤＣ－２８（３ｍｇ／ｋｇ）
ネガティブコントロールＡＤＣ（３ｍｇ／ｋｇ）：非Ｂ７Ｈ３標的と化合物２０とのカップリングによって形成されたリガンド－毒素コンジュゲート。
２．配合方法：薬物はすべてＰＢＳで希釈および配合された。
３．試験動物
ＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウス（ＣｈａｎｇｚｈｏｕＣａｖｅｎｓＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣｏ．，Ｌｔｄ．より購入）。

ＩＩＩ．試験方法
試験にはＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウス（雌、６～７週齢）を使用した。ヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト５６２細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－１３８（商標））を皮下接種した。接種後１０日目に、動物をランダムに１群あたり８匹の動物に群分けし（Ｄ０）、薬物を腹腔内注射により３回（週に１）投与した。腫瘍体積および体重を週に２～３回測定し、データを記録した。腫瘍体積（Ｖ）の計算式は、以下のとおりである：
Ｖ＝１／２×ａ×ｂ^２
式中、ａおよびｂは、それぞれ長さおよび幅を表す。
相対体積（ＲＴＶ）＝Ｖ_Ｔ／Ｖ_０
腫瘍抑制率（％）＝（Ｃ_ＲＴＶ－Ｔ_ＲＴＶ）／Ｃ_ＲＴＶ（％）
式中、Ｖ_０およびＶ_Ｔは、それぞれ試験開始時および試験終了時の腫瘍体積を表す。Ｃ_ＲＴＶおよびＴ_ＲＴＶは、それぞれ、試験終了時のコントロール群（ネガティブコントロール）および試験群の相対腫瘍体積を表す。

ＩＶ．試験結果
腹腔内注射投与は３回（週に１回）行った。観察２８日目に、ＡＤＣ－２９（３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｐｋ）の腫瘍抑制率は７２．２７％に達し（Ｐ＜０．００１）、ＡＤＣ－２８（３ｍｇ／ｋｇ、３ｍｐｋ）の腫瘍抑制率は５６．２％に達した（Ｐ＜０．００１）。ＡＤＣ－２９はＡＤＣ－２８よりも強い抗腫瘍効果を示す。

投与中、各群の動物は正常な体重を示し、ＡＤＣには明らかな副作用がないことが示唆された。試験結果を表４および図６に示す。試験した抗体は、腫瘍ベアリングヌードマウスにおけるデトロイト５６２異種移植腫瘍の成長を効果的に抑制することができ、用量依存的な様式を示す。

表４腫瘍ベアリングヌードマウスにおけるデトロイト５６２異種移植腫瘍に対する投与された抗体の有効性（Ｄ２８）

試験例９：Ｕ８７－ＭＧ腫瘍ベアリングマウスにおける有効性評価

Ｉ．試験目的
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを試験動物として使用して、ヒト神経膠腫細胞Ｕ８７ＭＧ異種移植腫瘍モデルにおいて腹腔内注射によって投与されたＢ７Ｈ３抗体－薬物コンジュゲートの有効性を評価した。

ＩＩ．試験薬物および材料

１．試験薬物
ＡＤＣ－３０１ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－３０３ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－３１１ｍｇ／ｋｇ
ＡＤＣ－３１３ｍｇ／ｋｇ
ブランク：ＰＢＳ
２．配合方法：薬物はすべてＰＢＳで希釈および配合された。
３．試験動物
ＢＡＬＢ／ｃＡ－ヌードヌードマウス（ＳｈａｎｇｈａｉＳｌａｃＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＣｏ．Ｌｔｄ．より購入）。

ＩＩＩ．試験方法
Ｕ８７ＭＧ細胞（ヒト脳アストロブラストーマ、中国科学院細胞バンク、カタログ番号ＴＣＨｕ１３８）（２．５×１０^６細胞／マウス）をマウスの右肋骨に皮下接種した。腫瘍が１４日間成長し、１６７．４９ｍｍ^３に達した後、動物を、１群あたり８匹の動物を有する５群にランダムに群分けした（ｄ１）。

薬物を腹腔内注射により週に１回、合計３回投与した。腫瘍体積および体重を週に２回測定し、データを記録した。

データ統計にはＥｘｃｅｌ２００３統計ソフトウェアを使用した：平均値はａｖｇとして計算された；ＳＤ値はＳＴＤＥＶとして計算された；ＳＥＭ値はＳＴＤＥＶ／ＳＱＲＴとして計算された；異なる群間のＰ値はＴＴＥＳＴとして計算された。
腫瘍体積（Ｖ）は、次のように計算された：Ｖ＝１／２×Ｌ_{ｌｅｎｇｔｈ}×Ｌ_{ｓｈｏｒｔ} ^２
相対体積（ＲＴＶ）＝Ｖ_Ｔ／Ｖ_０
腫瘍抑制率（％）＝（Ｃ_ＲＴＶ－Ｔ_ＲＴＶ）／Ｃ_ＲＴＶ（％）
式中、Ｖ_０およびＶ_Ｔは、それぞれ試験開始時および試験終了時の腫瘍体積を表す。Ｃ_ＲＴＶおよびＴ_ＲＴＶは、それぞれ、試験終了時のブランクコントロール群（ビヒクル）および試験群の相対腫瘍体積を表す。

ＩＶ．試験結果
試験結果を図７に示す。腹腔内注射投与は、週に１回、合計３回行った。観察１８日目に、ＡＤＣ－３０（１ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は０．３１％に達し、ＡＤＣ－３０（３ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は４５．２３％に達し（Ｐ＜０．０００１）、ＡＤＣ－３１（１ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は３９．２２％に達し（Ｐ＜０．０１）、ＡＤＣ－３１（３ｍｇ／ｋｇ）の腫瘍抑制率は８０．２４％に達した（Ｐ＜０．０００１）。同一用量で、ＡＤＣ－３１の腫瘍抑制効果はＡＤＣ－３０のそれよりも有意に優れている。

Claims

リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、前記リガンド－薬物コンジュゲートは、式（－Ｄ）：

（式中、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－、－ＮＨ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－および－Ｓ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
または、Ｒ^ａとＲ^ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^１は、ハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
または、Ｒ^ａとＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
式－Ｄ中の波線は、水素原子、またはリンカーユニットもしくは抗体への共有結合を表し、当該抗体は標的細胞によって発現される抗原に結合する；
ｍは０～４の整数である）
の構造を含む、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
前記リガンド－薬物コンジュゲートは、式（－Ｄ_１）：

（式中、
Ｒ^１はシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキルであり、好ましくはＣ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
波線は、水素原子、またはリンカーユニットもしくは抗体への共有結合を表し、当該抗体は標的細胞によって発現される抗原に結合する；
ｍは０または１である）
の構造を含む、請求項１に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
式（Ｐｃ－Ｌ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－、－Ｏ－ＣＲ^１Ｒ^２－、－ＮＨ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－および－Ｓ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）_ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択される；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
または、Ｒ^ａとＲ^ｂは、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^１は、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
または、Ｒ^ａとＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
ｍは０～４の整数である；
ｎは１～１０であり、整数または小数であり得る；
Ｐｃはリガンドである；
Ｌはリンカーユニットである）
である、請求項１に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
Ｙは、－Ｏ－（ＣＲ^ａＲ^ｂ）ｍ－ＣＲ^１Ｒ^２－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｒ^ａおよびＲ^ｂは同一または異なり、水素原子、重水素原子、ハロゲンおよびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である；
好ましくは、Ｙは、以下：

からなる群から選択される；
前記ＹのＯ末端は、前記リンカーユニットＬに接続される、
請求項３に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
式（Ｐｃ－Ｌ－Ｄ１）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である；
ｎは１～１０であり、整数または小数であり得る；
Ｐｃはリガンドである；Ｌはリンカーユニットである）
である、請求項１に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
ｎが２～８であり、整数または小数であり得、好ましくはｎは３～８であり、整数または小数であり得る、請求項３～５のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
前記リンカーユニット－Ｌ－は、－Ｌ^１－Ｌ^２－Ｌ^３－Ｌ^４－であって、
Ｌ^１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ_２－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^３－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－および－Ｃ（Ｏ）－Ｗ－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択され、ここでＷは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_１－８アルキル－シクロアルキルおよび１～８個の原子を含む直鎖ヘテロアルキルからなる群から選択され、当該ヘテロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含み、当該Ｃ_１－８アルキル、シクロアルキルおよび直鎖ヘテロアルキルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ_２）ｐ^１Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ここでｐ^１は１～２０の整数である；Ｌ^２は好ましくは化学結合である；
Ｌ^３は、２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、当該アミノ酸は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^４は、－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）_ｔ－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^５（ＣＨ_２）_ｔ－および化学結合からなる群から選択され、ここでｔは１～６の整数である；Ｌ^４は好ましくは－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）ｔ－である；
Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５は同一または異なり、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
前記リンカーユニット－Ｌ－の前記Ｌ ^１末端は前記リガンドに接続され、前記リンカーユニット－Ｌ－の前記Ｌ ^４末端はＹに接続される、
請求項３～６のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
Ｌ^１は、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－（ＣＨ_２）ｓ^１－Ｃ（Ｏ）－、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ_２－シクロヘキシル－Ｃ（Ｏ）－、－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｓ^２－ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｃ（Ｏ）－、－ＣＨ_２－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ^３－（ＣＨ_２）ｓ^３－Ｃ（Ｏ）－、および－Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ_２）ｓ^４Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択され、ここで、ｓ^１は２～８の整数であり、ｓ^２は１～３の整数であり、ｓ^３は１～８の整数であり、ｓ^４は１～８の整数である、請求項７に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ｐ^１は６～１２の整数である、請求項７または８に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
Ｌ^４は－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）_ｔ－から選択され、Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、ｔは１または２であり、好ましくは２である、請求項７～９のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
Ｌ^３は、フェニルアラニン、グリシン、バリン、リジン、シトルリン、セリン、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群から選択される２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、好ましくはテトラペプチド残基であり、より好ましくはグリシン－グリシン－フェニルアラニン－グリシンのテトラペプチド残基である、請求項７～１０のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
前記リンカーユニット－Ｌ－は、－Ｌ^１－Ｌ^２－Ｌ^３－Ｌ^４－であって、
Ｌ^１は、

であり、ｓ^１は２～８の整数である；
Ｌ^２は化学結合である；
Ｌ^３はテトラペプチド残基である；
Ｌ^４は－ＮＲ^５（ＣＲ^６Ｒ^７）_ｔ－であり、Ｒ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、ｔは１または２である；または
前記リンカーユニット－Ｌ－は、－Ｌ ^１－Ｌ ^２－Ｌ ^３－Ｌ ^４－であって、
Ｌ ^１は－（スクシンイミド－３－イル－Ｎ）－ＣＨ _２－シクロヘキシル－Ｃ（Ｏ）－である；
Ｌ ^２は－ＮＲ ^４（ＣＨ _２ＣＨ _２Ｏ） _９ＣＨ _２Ｃ（Ｏ）－である；
Ｌ ^３はテトラペプチド残基である；
Ｌ ^４は－ＮＲ ^５（ＣＲ ^６Ｒ ^７）ｔ－であり、Ｒ ^５は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、Ｒ ^６およびＲ ^７は同一または異なり、水素原子およびアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され、ｔは１または２である、
請求項３～１１のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
式（Ｐｃ－Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
Ｗは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_１－８アルキル－シクロアルキルおよび１～８個の原子を含む直鎖ヘテロアルキルからなる群から選択され、当該ヘテロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含み、当該Ｃ_１－８アルキル、シクロアルキルおよび直鎖ヘテロアルキルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ_２）ｐ^１Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ここでｐ^１は１～２０の整数である；
Ｌ^３は、２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、当該アミノ酸は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｒ^１は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^４およびＲ^５は同一または異なり、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｍは０～４の整数である；
ｎは１～１０であって、整数または小数であり得る；
Ｐｃはリガンドである）
である、請求項１～４のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
式（Ｐｃ－Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物：

（式中、
ｓ^１は２～８の整数であって、好ましくは５である；
Ｐｃ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｍおよびｎは、請求項１３で定義されるとおりである）
である、請求項１３に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
以下：

（式中、
ｎは１～１０であって、整数または小数であり得る；
Ｐｃはリガンドである）
からなる群から選択される、請求項１～１４のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
Ｐｃは抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体からなる群から選択される；
好ましくは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２）抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗ｃ－Ｍｅｔ抗体、抗ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）抗体、抗ＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４）抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗ＣＤ４４抗体、抗ＣＤ５６抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＣＤ１０５抗体、抗ＣＥＡ抗体、抗Ａ３３抗体、抗Ｃｒｉｐｔｏ抗体、抗ＥｐｈＡ２抗体、抗Ｇ２５０抗体、抗ＭＵＣｌ抗体、抗ルイスＹ抗体（ａｎｔｉ－ＬｅｗｉｓＹａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＶＥＧＦＲ抗体、抗ＧＰＮＭＢ抗体、抗インテグリン抗体、抗ＰＳＭＡ抗体、抗テネイシン－Ｃ抗体（ａｎｔｉ－Ｔｅｎａｓｃｉｎ－Ｃａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＳＬＣ４４Ａ４抗体、抗メソテリン抗体（ａｎｔｉ－Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ）およびそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される；
より好ましくは、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、ペルツズマブ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、ニモツズマブ（Ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、エノブリツズマブ（Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、エミベツズマブ（Ｅｍｉｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、イノツズマブ（Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ）、ピナツズマブ（Ｐｉｎａｔｕｚｕｍａｂ）、ブレンツキシマブ（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、ビバツズマブ（Ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、ロルボツズマブ（Ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）、ｃＢＲ９６およびグレマツムマブ（Ｇｌｅｍａｔｕｍａｍａｂ）、またはそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択される、
請求項３～１５のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
以下：

（式中、ｎは請求項３で定義されるとおりである）
からなる群から選択される、請求項３～１６のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
式（Ｄ_１）の化合物：

またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩
（式中、
Ｒ^１は、Ｃ_３－６シクロアルキルアルキルまたはＣ_３－６シクロアルキルである；
Ｒ^２は、水素原子、ハロアルキルおよびＣ_３－６シクロアルキルからなる群から選択される；
または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ_３－６シクロアルキルを形成する；
ｍは０または１である）。
以下：

からなる群から選択される、請求項１８に記載の式（Ｄ _１）の化合物。
式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物：

またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩
（式中、
Ｗは、Ｃ_１－８アルキル、Ｃ_１－８アルキル－シクロアルキルおよび１～８個の原子を含む直鎖ヘテロアルキルからなる群から選択され、当該ヘテロアルキルは、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１～３個のヘテロ原子を含み、当該Ｃ_１－８アルキル、シクロアルキルおよび直鎖ヘテロアルキルは、それぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｌ^２は、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ^４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）ｐ^１ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）－、－Ｓ（ＣＨ_２）ｐ^１Ｃ（Ｏ）－および化学結合からなる群から選択され、ここでｐ^１は１～２０の整数である；
Ｌ^３は、２～７個のアミノ酸から構成されるペプチド残基であり、当該アミノ酸は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される１個以上の置換基によって任意にさらに置換される；
Ｒ^１は、ハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；
Ｒ^２は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される；または、Ｒ^１とＲ^２は、それらが結合している炭素原子と一緒になってシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する；
Ｒ^４およびＲ^５は同一または異なり、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
Ｒ^６およびＲ^７は同一または異なり、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群からそれぞれ独立して選択される；
ｍは０～４の整数である）。
式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物：

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｓ^１およびｍは、請求項２０で定義されるとおりである）
またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項２０に記載の式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物。
以下：

からなる群から選択される、請求項２０または２１に記載の式（Ｌ_ａ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物。
式（Ｄ_１）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下のステップ：

前記式（Ｙ_１）の化合物と前記式（Ｄｒ）の化合物を縮合させて、前記式（Ｄ_１）の化合物を得るステップ
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびｍは、請求項１８で定義されるとおりである）
を含む、方法。
式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下のステップ：

前記式（ＩＡ）の化合物と前記式（ＩＢ）の化合物を縮合させて、前記式（Ｌ_ｂ－Ｙ－Ｄｒ）の化合物を得るステップ
（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５～Ｒ^７、ｓ^１およびｍは、請求項２１で定義されるとおりである）
を含む、方法。
リガンドおよび前記リガンドに連結された薬物を含むリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、前記薬物は請求項１８～１９のいずれか１項に記載の化合物から選択され、前記薬物は好ましくはリンカーを介して前記リガンドに連結されている；および、前記リガンドは好ましくはモノクローナル抗体である、リガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
治療有効量の請求項１～１７のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物あるいは請求項１８～１９のいずれか１項に記載の式（Ｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物。
薬剤として使用するため、好ましくは腫瘍の処置または予防のための薬剤として使用するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、請求項１８～１９のいずれか１項に記載の式（Ｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または請求項２６に記載の医薬組成物；
より好ましくは、前記腫瘍は、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、Ｂ７Ｈ３またはＥＧＦＲの発現に関連する癌である。
癌の処置および／または予防のための薬剤として使用するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載のリガンド－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、請求項１８～１９のいずれか１項に記載の式（Ｄ）の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または請求項２６に記載の医薬組成物；前記癌は好ましくは、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、尿道癌、膀胱癌、肝臓癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、食道癌、黒色腫、神経膠腫、神経芽細胞腫、肉腫、肺癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、白血病、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、膵臓癌およびリンパ腫からなる群から選択される。