JP2022511351A - 実験動物のリガンド－薬剤共役、その調製方法およびその適用 - Google Patents

実験動物のリガンド－薬剤共役、その調製方法およびその適用 Download PDF

Info

Publication number
JP2022511351A
JP2022511351A JP2021516798A JP2021516798A JP2022511351A JP 2022511351 A JP2022511351 A JP 2022511351A JP 2021516798 A JP2021516798 A JP 2021516798A JP 2021516798 A JP2021516798 A JP 2021516798A JP 2022511351 A JP2022511351 A JP 2022511351A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
group
ligand
alkyl
cycloalkyl
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2021516798A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2020063676A5 (ja
JP7558156B2 (ja
Inventor
ジェンイェン シイ
イン チャン
シャオファン ツァイ
ボーレイ チュー
ジンドン リャン
リアンシャン チャン
フェン ヘ
ウェイカン タオ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd, Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd
Publication of JP2022511351A publication Critical patent/JP2022511351A/ja
Publication of JPWO2020063676A5 publication Critical patent/JPWO2020063676A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7558156B2 publication Critical patent/JP7558156B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本発明は、エキサテカン類似体のリガンド－薬物複合体、その調製方法、およびその適用に関する。具体的には、式（－Ｄ）で示される構造を有するリガンド－薬物複合体、その調製方法、それを含む医薬組成物、および受容体調節による癌治療用薬物の調製におけるその使用を提供する。式（－Ｄ）中の各置換基の定義は、本明細書中のものと同じである。【化１】JPEG2022511351000135.jpg4264

Description

本開示は、新規構造を有するエクサテカン類似体のリガンド-薬物結合体に関する。具体的には、本開示が構造単位Yを有するエクサテカン類似体のリガンド-薬物結合体、その調製方法、その結合体を含む医薬組成物、およびその結合体または医薬組成物の使用に関する。
化学療法は依然として、手術、放射線療法および標的療法とともに最も重要な抗癌療法の1つ。高効率の細胞毒素には多くの種類があるが、腫瘍細胞と正常細胞の違いは非常に小さく、毒性副作用のためにこれらの抗癌化合物の広範な臨床応用は制限される。抗腫瘍モノクローナル抗体の腫瘍細胞表面抗原に対する特異性から、抗体医薬は抗腫瘍療法の第一選択薬となっている。しかしながら、抗体を抗腫瘍薬として単独で使用する場合、有効性はしばしば不十分である。
抗体薬物結合体(ADC)は正常細胞または腫瘍細胞の表面抗原への抗体結合の特異性および細胞毒素の高い効率を十分に利用しながら、抗体の低い効力および細胞毒素の毒性副作用を回避しながら、化学的に安定なリンカーを介して、モノクローナル抗体または抗体フラグメントと生物学的に活性な細胞毒素との組み合わせを可能にする。つまり、従来の化学療法薬と比較して、抗体薬物結合体は腫瘍細胞に正確に結合し、正常細胞への影響を軽減することができる(Mullard A, (2013)Nature Reviews Drug Discovery, 12:329-332; DiJoseph JF, Armellino DC, (2004)Blood, 103:1807-1814)。
2000年に、第1の抗体薬物結合体Mylotarg(gemtuzumab ozogamicin, Wyeth Pharmaceuticals)が、急性骨髄性白血病の治療のために米国食品医薬品局(FDA)によって承認された(Drugs of Future(2000)25(7):686; US4970198; US5079233; US5585089; US5606040; US5693762; US5739116; US5767285; US5773001)。
2011年8月に、Adcetris(brentuximab vedotin, Seattle Genetics Inc.)が、ホジキンリンパ腫および再発未分化大細胞型リンパ腫の治療のためにUS FDA Fast Trackを通して承認された(Nat. Biotechnol(2003)21(7):778-784; WO2004010957; WO2005001038; US7090843A; US7659241; WO2008025020)。Adcetris(R)は新規な標的ADC薬物であり、薬物が直接的にリンゴマ細胞の標的CD30に作用し、エンドサイトーシスを誘発し、その結果、細胞アポトーシスを誘発することを可能にする。
マイロターグとアドセトリスはともに血液腫瘍の標的治療薬であり、その組織構造は固形腫瘍に比べて比較的単純である。2013年2月、Kadcyla(ado-trastuzumab emtansine, T-DM1)がトラスツズマブ(商品名:ハーセプチン)抵抗性かつパクリタキセル抵抗性のHER2陽性の進行・転移性乳癌患者の治療薬として米国食品医薬品局に承認された(WO2005037992; US8088387)。カドサイラは、固形腫瘍の治療薬として米国食品医薬品局に承認された最初のADC治療薬である。
抗体薬物共役に使用される細胞傷害性低分子にはいくつかの種類があり、その1つはカンプトテシン誘導体であり、トポイソメラーゼIを阻害することによって抗腫瘍効果を示す。抗体薬物共役(ADC)におけるカンプトテシン誘導体、エクサテカン(化学名:(1S,9S)-1-アミノ-9-エチル-5-フルオロ-2,3-ジヒドロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-1H,12H-ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]イミダゾ[1,2-b]キノリン-10,13(9H,15H)-ジオン)の使用を報告する文献は、WO2014057687、Clinical Cancer Research(2016)22(20):5097-5108、およびCancer Sci(2016)107: 1039-1046を含む。しかし、より効果の高いADC薬のさらなる現像が依然として必要である。
配位子、特に抗体と薬物との間のカップリング効果を改善するために、本開示は配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、ここで、配位子-薬物共役は、式(-D)の構造を含む:
Figure 2022511351000002
記
Yは、-O-(CRa Rb)mOOCmOODmOOE -C(O)-と-S-(CRa Rb)m-CR1R2 -C(O)-からなる群から選択される;
RaおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ基、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群より選択される;
RaおよびRbは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
R1は、ハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される;
R2は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される;
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
RaおよびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
ここで、-Dにおける波線は、水素原子、またはターゲット細胞によって発現される抗原に結合するリンカーユニットまたは抗体への共有結合を表す;
m 0 ～4 の整数である。
本発明のいくつかの実施形態では提供される配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は式(-D1)を有する化合物、またはその配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である:
Figure 2022511351000003
 記
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する;
式-D1中の波線は、水素原子、またはターゲット細胞によって発現される抗原に結合するリンカーユニットまたは抗体への共有結合を表す;
mは0または1である。
本開示のいくつかの実施形態では提供される配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は式(Pc-L-Y-Dr)の配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である:
Figure 2022511351000004
記
Yは、-O-(CRa Rb)m -CR1 R2-C(O)-, -O-CR1 R2 -(CRa Rb)m-, -O-CR1 R2 -, -NH-(CRa Rb)m-CR1 R2 -C(O)-と-S-(CRa Rb)m -CR1 R2-C(O)-からなる群から選択される;
RaおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ基、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群より選択される;
RaおよびRbは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
R1は、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択される;
R2は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される;
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
RaおよびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
m 0 ～4 の整数である;
nは1 ～10 で、整数または10 進数である;
Pcは配位子であり、Lはリンカーユニットである。
本発明のいくつかの実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、-Yis-O-(CRaRb)m-CR1 R2-C(O)-;
RaおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲンおよびアルキルからなる群から選択される;
R1は、C3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する;
mは0または1である。
本発明のいくつかの実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、構造単位-Yis-O-(CH2)m-CR1 R2-C(O)-である;
R1は、C3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルである;
R2は、ハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択される;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する;
mは0または1である。
本発明のいくつかの実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、構造単位-Yis-O-(CH2)m-CR1R2-C(O)-である;
R1は、C3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルである;
R2は水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; mは0または1である。
本発明のいくつかの実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、構造単位-Yis-O-(CH2)m-CR1R2-C(O)-である; R1は、C3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルである;
R2は水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; mは0である。
本開示のいくつかの他の実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、構造単位-Yはからなる群より選択される:
Figure 2022511351000005
本発明のいくつかの他の実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、-YのO端子はリンカーユニットLに連結される。
本開示のいくつかの他の実施形態では提供される配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は式(Pc-L-D1)の配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である:
Figure 2022511351000006
記
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; mは0または1である;
nは1 ～10 で、整数または10 進数である;
Pcは配位子であり、Lはリンカーユニットである。
本発明の別の好ましい実施形態において、本発明によるリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、nは2～8であり、これは整数または10進数であり得;そして好ましくはnは3～8であり、これは整数または10進数であり得る。
本発明の別の好ましい実施形態では本発明によるリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物において、リンカー単位Lは-L1 -L2 -L3-L4 -, L1、-(スクシンイミド-3-イル-N)-WOOBW-C(O)-および-C(O)-W-C(O)-からなる群より選択され、ここで、WはC1-8アルキル、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび線状ヘテロアルキルはN、OおよびSからなる群より選択される1～3個のヘテロ原子を含み、ここで、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび線状ヘテロアルキルはそれぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1つ以上の置換基によってさらに置換されていてもよい;
L2は-NR4(CH2 CH2 O)1 CH2CH2 C(O)-, -NR4(CH2 CH2 O)p 1CH2 C(O)-, -S(CH2)p C(O)-および化学結合から成る群から選択され、L2は好ましくは化学結合であり、p1は1から20の整数である;
L3は2～7アミノ酸から構成されるペプチド残基であり、ここで、アミノ酸は、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1つ以上の置換基によって任意にさらに置換される;
L4は-NR5(CR6 R7)t -, -C(O)NR5, -C(O)NR5(CH2)t -とケミカルボンドからなる群から選択され、ここでtは1～6の整数であり、L4は好ましくは-NR5(CR6 R7)t-である;
R3, R4およびR5は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される;
R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される。
本発明のいくつかの他の実施形態では、リガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物において、リンカーユニットL1は-(スクシンイミド-3-イル-N)-(CH2)s1-C(O)-, -(スクシンイミド-3-イル-N)-CH2-シクロヘキシル-C(O)-、-(スクシンイミド-3-イル-N)-(CH2 CH2O)sOOGsOOH-C(O)-および-C(O)-(CH2)s4C(O)-からなる群より選択され、ここで、s1は2～8の整数であり、s2は1～3の整数であり、s3は1～8の整数であり、そしてs4は1～8の整数であり;そしてs1は好ましくは5である。
本発明のいくつかの他の実施形態では配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、リンカーユニットL2は-NR4(CH2 CH2O)p1 CH2 C(O)-および化学結合からなる群より選択され、ここで、p1は6～12の整数である。
本発明のいくつかの他の実施形態では、提供されるリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物において、L4は-NR5(CR6 R7)t-から選択され、R5は水素原子およびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して水素原子およびアルキルからなる群から選択され、tは1または2であり、好ましくは2であり、L4は好ましくは-NR5 CR6 R7-であり、L4はより好ましくは-NHCH2-である。
本開示のいくつかの他の実施形態において、提供されるリガンド薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、リンカー単位-Lis-L1 -L2 -L3 -L4 -,
L1は
Figure 2022511351000007
 nであり、s1は2～8の整数である;
L2は化学結合である;
L3はテトラペプチド残渣である;
L4は-NR5(CR6 R7)t-であり、R5はHアトムとAlkからなる群から選択され、R6とR7は同一か異なっており、それぞれ独立して、HアトムとAlkからなる群から選択され、tは1か2である。
本発明のいくつかの他の実施形態では提供されるリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、リンカーユニット-Lis -L1 -L2 -L3 -L4 -, L1は-(スクシンイミド-3-イル-N)-CH2-シクロヘキシル-C(O)-である;
L2が-NR4(CH2 CH2 O)9 CH2C(O)-;
L3はテトラペプチド残渣である;
L4は-NR5(CR6 R7)t-であり、R5はHアトムとAlkからなる群から選択され、R6とR7は同一か異なっており、それぞれ独立して、HアトムとAlkからなる群から選択され、tは1か2である。
本発明のいくつかの他の実施形態では提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物において、L3のペプチド残基はフェニルアラニン(E)、グリシン(G)、バリン(V)、リジン(K)、シトルリン、セリン(S)、グルタミン酸(E)およびアスパラギン酸(N)からなる群から選択される1つ、2つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸残基であり、好ましくはフェニルアラニンおよびグリシンからなる群から選択される1つ、2つ以上のアミノ酸からなるアミノ酸残基であり、より好ましくはテトラペプチド残基であり、最も好ましくはGGFG(グリシン-グリシン-フェニルアラニン-グリシン)のテトラペプチド残基である。
本発明のいくつかの他の実施形態では、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、配位子に連結されたリンカー単位-LisのL 1端子、およびYに連結されたリンカー単位-LisのL 4端子。
本開示のいくつかの他の実施形態において、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、-L-Yisはである:
Figure 2022511351000008
L1は、-(スクシンイミド-3-yl-N)-(CH2)s 1 -C(O)-および-(スクシンイミド-3-yl-N)-CH2-cyclohexyl-C(O)-で構成される群から選択される;
L2は-NR4(CH2 CH2 O)p 1 CH2C(O)- またはケミカルボンドで、p 1は6 ～12 の整数である;
L3はGGFGのテトラペプチド残渣である;
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; R5は、水素原子およびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択される;
s1は2～8の整数であり、好ましくは5である;
m 0 ～4 の整数である。
本開示のいくつかの他の実施形態において、提供される配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、-L-Yisはである:
Figure 2022511351000009
であることが好ましい:
Figure 2022511351000010
L2が-NR4(CH2 CH2 O)9 CH2C(O)-;
L3はGGFGのテトラペプチド残渣である;
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する;
R5は、水素原子およびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択される;
m0 ～4 の整数である。
本開示のいくつかの他の実施形態において、提供される式(Pc-L-Y-Dr)の配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、-L-Yisはである
Figure 2022511351000011
L2は化学結合である;
L3はGGFGのテトラペプチド残渣である;
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; R5は、水素原子およびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択される;
s1は2～8の整数であり、好ましくは5である;
m0 ～4 の整数である。
本開示の別の態様は、式(-L-Y-)の構造を含む、配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する:
Figure 2022511351000012
これは、リンカー断片を介して薬物と配位子とを連結することによって配位子-薬物結合体を形成するために使用することができる;
記
L1は、-(スクシンイミド-3-yl-N)-(CH2)s 1 -C(O)-および-(スクシンイミド-3-yl-N)-CH2-cyclohexyl-C(O)-で構成される群から選択される;
L2は-NR4(CH2 CH2 O)p 1 CH2C(O)- またはケミカルボンドで、p 1は1 ～20 の整数である;
L3はGGFGのテトラペプチド残渣である;
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; R5, R6およびR7は同一であるか異なっており、それぞれ独立に、アルファ原子およびアルキルからなる群から選択されている;
s1 は2 ～8 の整数である;
m 0 ～4 の整数である。
本開示の別の態様は、式(-L-Y-)の構造を含む、配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する:
Figure 2022511351000013
記
L2は化学結合である;
L3はGGFGのテトラペプチド残渣である;
R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくは、C3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルである;
R2は、水素原子、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択され、好ましくは水素原子である;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する; R5は、水素原子およびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択される;
s1 は2 ～8 の整数である;
m0 ～4 の整数である。
本発明のいくつかの他の実施形態では提供される式(Pc-L-Y-Dr)の配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は式(Pc-La-Y-Dr)の配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である:
Figure 2022511351000014
記
WはC1-8アルキル、C1-8アルキル-シクロアルキルおよび1～8個の原子を含む線状ヘテロアルキルからなる群より選択され、ヘテロアルキルはN、OおよびSからなる群より選択される1～3個のヘテロ原子を含み、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび線状ヘテロアルキルはそれぞれ独立して、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1個以上の置換基によりさらに置換されていてもよい;
L2は、-NR4(CH2 CH2 O)pOOFpOOG C(O)-および化学結合からなる群から選択され、ここでp1は1～20の整数である;
L3は2～7アミノ酸からなるペプチド残基であり、アミノ酸は置換されていても置換されていなくてもよく、置換基は任意の利用可能な接続点で置換されていてもよく、置換基はハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である;
R1は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリール、好ましくはシクロアルキルアルキルまたはシクロアルキル、より好ましくはC 3-6シクロアルキルアルキルまたはC 3-6シクロアルキルからなる群から選択される;
R2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、好ましくは水素原子;
またはR1およびR2はそれらが結合してシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する炭素原子と一緒になっている;
R4およびR5は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される;
R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される;
m0 ～4 の整数である;
n0 ～10 のゼロ以外の整数または10 進数で、1 ～10 の整数または10 進数が望ましい; Pcは配位子である。
本発明のいくつかの他の実施形態では提供される式(Pc-La-Y-Dr)の配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物は式(Pc-Lb-Y-Dr)の配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である:
Figure 2022511351000015
記
s1は2～8の整数であり、好ましくは5である;
Pc, R1, R2, R5～R7, m, nは公式(Pc-La-Y-Dr)で定義されている。
本開示のリガンド-薬物結合体のリンカーユニット-L-Yofには限定されるものではないが、が含まれる:
[表１]
本開示の式(Pc-L-Y-Dr)の配位子-薬物結合体には限定されないが、が含まれる:
[表２]
式中、Pcおよびnは式(Pc-La-Y-Dr)で定義される通りである。
本開示のいくつかの他の実施形態では配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物において、Pcは抗体またはその抗原結合フラグメントであり、抗体はキメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体、および好ましくはモノクローナル抗体からなる群から選択される。
本開示のいくつかの他の実施形態では、配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物において、抗体またはその抗ER2抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗PSMA抗体からなる群から選択される。抗テナシンC抗体、抗SLC44A4抗体、抗メソテリン抗体 およびその抗原結合断片。
本開示のいくつかの他の実施形態において、配位子薬物結合体またはその医薬的に許容可能な塩または溶媒和物において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ニモツズマブ、エノブリツズマブ、エミベツズマブ、イノツズマブ、ピナツズマブ、ブレンツキシマブ、ゲムツズマブ、ビバツズマブ、ロルボツズマブ、cBR96およびグリマブ、ならびにそれらの抗原結合フラグメントからなる群より選択される。
本開示の式(Pc-L-Y-Dr)の配位子-薬物結合体は以下の式を含むが、発明に限定されない:
[表３]
式中、nは0から10までの非ゼロ整数または10進数であり、好ましくはnは1から10までの整数または10進数であり、より好ましくはnは2から8であり、整数または10進数であり得、最も好ましくはnは3から8であり、整数または10進数であり得る。
本開示の別の態様は、式(D)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、もしくはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する
Figure 2022511351000016
 記
Yは、-O-(CRa Rb)mOODm OODmOOE -C(O)-及び-S-(CRa Rb)m-CR1R2 -C(O)-からなる群から選択される;
RaおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ基、ヒドロキシアルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群より選択される;
RaおよびRbは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
R1は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択される;
R2は、水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される;
R1およびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
RaおよびR2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する;
m 0 ～4 の整数である。
本発明の別の態様の好ましい態様において、提供される式(D)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、それらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、式(D1)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、それらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である
Figure 2022511351000017
ここで、R1は、C3-6シクロアルキルまたはC3-6シクロアルキルである;
R2は、ハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択される;
または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する;
mは0または1である。
本開示の式(D)の化合物には発明に限定されないが、が含まれる:
[表４]
または、互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩。
本発明の別の態様の好ましい実施形態は、式(LA-Y-Dr)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する:
Figure 2022511351000018
(式中、
WはC1-8アルキル、C1-8アルキル-シクロアルキルおよび1～8個の原子を含む線状ヘテロアルキルからなる群より選択され、ヘテロアルキルはN、OおよびSからなる群より選択される1～3個のヘテロ原子を含み、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび線状ヘテロアルキルはそれぞれ独立して、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1個以上の置換基によりさらに置換されていてもよい;
L2は、-NR4(CH2 CH2 O)pOOFpOOG C(O)-および化学結合からなる群から選択され、 ここでp1は1～20の整数である;
L3は2～7アミノ酸から構成されるペプチド残基であり、アミノ酸は任意選択で、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から選択される1つ以上の置換基によってさらに置換され、置換される場合、置換基は任意の利用可能な接続点で置換されてもよく、置換基はハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群から独立して選択される1つ以上の基である;
R1は、ハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択される;
R2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される;またはR 1およびR 2はそれらが結合してシクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する炭素原子と一緒になっている;
R4およびR5は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される;
R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される;
m 0 ～4 の整数である。
本発明の別の態様の好ましい実施形態では式(La-Y-Dr)の提供される化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、それらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は式(Lb-Y-Dr)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、それらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である:
Figure 2022511351000019
ここで、R1, R2, R5～R7、s 1 およびmは公式(La-Y-Dr)で定義されているとおりである。
本発明の式(La-Y-Dr)の化合物にはこれらに限定されないが、が含まれる:
[表５]
または、互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩。
本発明の別の態様は、以下の工程を含む、式(D1)の化合物または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を調製するための方法を提供する:
Figure 2022511351000020

数式(Y1)の複合と数式(Dr)の複合を圧縮して数式(D1)の複合を求める。
ここで、R1, R2とmは数式(D1)で定義されているとおりである。
本発明の別の態様は、以下の工程を含む、式(Lb-Y-Dr)の化合物または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を調製するための方法を提供する:
Figure 2022511351000021

数式(IA)の複合と数式(IB)の複合を圧縮して数式(Lb-Y-Dr)の複合を求める。
ここで、R1, R2, R5～R7、s 1、mは数式(Lb-Y-Dr)で定義されているとおりである。
本発明の別の態様は、以下の工程を含む、式(Lb-Y-Dr)の化合物または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を調製するための方法を提供する:
Figure 2022511351000022

数式(IA)の複合と数式(IB)の複合を圧縮して数式(Lb-Y-Dr)の複合を求める。
ここで、R1, R2, R5～R7、s 1、mは数式(Lb-Y-Dr)で定義されているとおりである。
本発明の別の態様は、以下の工程を含む、式(Pc-La-Y-Dr)の配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の調製法を提供する:
Figure 2022511351000023
Pcは数式(La -Y-Dr)の複合と縮小後に結合され、数式(Pc -La -Y-Dr)の複合を与える。縮小剤は好ましくはTCEPである;
記
Pcは配位子である;
W, L2, L3, R1, R2, R5 ～R7, m, nは公式(Pc -La -Y-Dr)で定義されている。
本開示の別の態様はさらに、本開示による治療有効量のリガンド-薬物結合体もしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および1つ以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物に関する。
本開示の別の態様はさらに、本開示による式(D)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、それらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、および1つ以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物に関する。
本開示の別の態様はさらに、配位子および配位子に連結された薬物を含む配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関し、ここで、薬物は式(D)の化合物、式(La-Y-Dr)の化合物、または本開示による互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩からなる群より選択され、薬物は好ましくはリンカーを介して配位子に連結され、配位子は好ましくはモノクローナル抗体である。
本開示の別の態様はさらに、式(D)の化合物、式(La-Y-Dr)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、それらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を、好ましくはリンカーを介して配位子に連結する工程を含み、配位子が好ましくはモノクローナル抗体で配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物を調製するための方法に関する。
本開示の別の態様はさらに、薬物として使用するための、本開示によるリガンド-薬物結合体もしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
本開示の別の態様はさらに、腫瘍を治療発明予防するための医薬の調製における、本開示によるリガンド-薬物結合体もしくは化合物、発明その薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、発明それを含む医薬組成物の使用に関し、好ましくは、腫瘍がHER2、HER3、発明EGFRの発現に関連する癌である。
本開示の別の局面は癌を処置または予防するための医薬の調製における、リガンド-薬物結合体もしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用にさらに関し、癌は好ましくは乳癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、膀胱癌、肝臓癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、メラノーマ、神経芽細胞腫、肉腫、肺癌(例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌)、結腸直腸癌、白血病(例えば、急性リンパ球性白血病、急性前骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病)、骨癌からなる群より選択される。皮膚がん、甲状腺がん、前立腺がん、リンパ腫(例、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、再発)未分化大細胞型リンパ腫)。
本開示の別の局面はさらに、腫瘍を処置および/または予防するための方法に関し、これはそれを必要とする被験者に、治療有効量のリガンド-薬物結合体もしくは化合物、またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物、または本開示によるそれを含む医薬組成物を投与することを包含し、そして好ましくは腫瘍がHER2、HER3、またはEGFRの発現に関連する癌である。
本開示の別の局面は治療的に有効な量のリガンド-薬物結合体もしくは化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、それを必要とする患者に投与することを含む、癌を処置または予防するための方法であって、癌は好ましくは乳癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、膀胱癌、肝臓癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、メラノーマ、神経芽細胞腫、肉腫、肺癌(例えば、小細胞肺癌および非小細胞肺癌)、結腸直腸癌、白血病(例えば、急性リンパ球性白血病、急性前骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病)からなる群より選択される。慢性リンパ性白血病、骨がん、甲状腺がん、膵がん、リンパ腫(ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫など)リンパ腫、または再発性未分化大細胞型リンパ腫)。
活性化合物は任意の適切な経路による投与に適切な形態に処方され得、そして活性化合物は好ましくは単位用量の形態であるか、または患者が単回用量で自己投与し得る形態である。本発明の化合物または組成物の単位用量の形態は、タブレット端末、カプセル、カシェ剤、瓶詰めポチオン、粉末、顆粒、ロゼンジ、坐剤、再生粉末または液体調製物であり得る。
本発明の処理方法において使用される化合物または組成物の投薬量は一般に、疾患の重症度、患者の体重、および化合物の相対的効力に従って変化する。しかしながら、一般的な指針として、適切な単位用量は、0.1～1000mgであり得る。
活性化合物に加えて、本発明の医薬組成物はまた、充填剤(希釈剤)、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、賦形剤などを含む1つ以上の補助剤を含むことができる。投与様式に応じて、組成物は、0.1～99重量%の活性化合物を含むことができる。
活性成分を含む医薬組成物は経口投与に適した形態、例えば、タブレット端末、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、ハードまたは軟カプセル、シロップまたはエリキシルであり得る。経口組成物は、医薬組成物の調製のための当技術分野で公知の任意の方法に従って調製することができる。このような組成物は、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤または薬学的に許容される湿潤剤などを含むことができる。このような組成物はまた、快適で美味しい医薬製剤を提供するために、甘味料、香味料、着色剤および防腐剤からなる群から選択される1つ以上の成分を上記。
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合した活性成分を含む。水性懸濁液はまた、1つ以上の防腐剤、1つ以上の着色剤、1つ以上の香味剤、および1つ以上の甘味料を含むことができる。
油懸濁液は、活性成分を植物油中に懸濁させることによって製剤化することができる。油懸濁液は増粘剤を含むことができる。上記甘味料および香味料を添加して、美味しい配合を提供することができる。
医薬組成物はまた、水性懸濁液を調製するための分散性粉末および顆粒であってもよく、これは、1つ以上の分散剤、湿潤剤、懸濁剤または保存剤と混合するために水を添加することによって活性成分を提供する。甘味剤、香味剤および着色剤のような他の賦形剤を添加することもできる。上記組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を添加することによって保存することができる。
本開示の医薬組成物は、水中油型乳化の形成であってもよい。
医薬組成物は、無菌の注射可能な水溶液の形成であり得る。使用できる許容できる車両または溶媒は、水、リンゲル液または生理食塩水である。無菌注射用製剤は、有効成分が油相に溶解されている無菌注射用水中油型マイクロエマルジョンであり得る。例えば、活性成分は、大豆油およびレシチンの混合物に溶解される。次に、油溶液を水とグリセリンの混合物に添加し、処理してマイクロエマルジョンを形成する。注射用溶液またはマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射によって患者の血流に導入することができる。あるいは、溶液およびマイクロエマルジョンが好ましくは本開示の化合物の一定の循環濃度を維持する様式で投与される。この一定濃度を維持するために、連続静脈内送達デバイスを使用することができる。そのような装置の実施例は、Deltec CADD-PLUSである。TM.5400静脈内注射ポンプ。
医薬組成物は、筋肉内および皮下投与のための無菌の注射可能な水性または油性懸濁液の形成であり得る。このような懸濁液は、周知技術に従って、上記のような適切な分散剤または濡れ剤および懸濁剤と共に製剤化することができる。無菌注射用製剤は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中に調製された無菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として容易に使用され得る。
本開示の化合物は、直腸投与のための坐剤の形成で投与することができる。これらの医薬組成物は薬物を、通常の温度では固体であるが直腸内では液体である適切な非刺激性賦形剤と混合し、それによって直腸内で溶融して薬物を放出することによって調製することができる。このような物質には、カカオ脂、グリセリンゼラチン、水素化植物油、種々の分子量のポリエチレングリコールとその脂肪酸エステルとの混合物が含まれる。
薬物の用量は、以下の因子:特定の化合物の活性、患者の年齢、患者の体重、患者の一人般的な健康、患者の行動、患者の食事、投与時間、投与経路、排泄速度、薬物の組み合わせなどを含むがこれらに限定されない種々の因子に依存することが当業者に周知である。さらに、治療モード、式(I)の化合物の1日用量、またはその薬学的に許容される塩の型などの最適な治療は、従来の治療レジメンに従って検証することができる。
図1A:本開示のADC-19のプラズマ安定性試験結果。 図1B:本開示のADC-18のプラズマ安定性試験結果。 図1C:本開示のADC-20のプラズマ安定性試験結果。 図2:JIMT-1腫瘍ベアリングマウスに対する本開示のADC-21及びADC-24の有効性の評価。 図3:ヌードマウスにおけるヒト乳癌細胞SK-BR-3異種移植片腫瘍に対する本開示のADCの効力の評価。 図4:本開示のADC-25のプラズマ安定性試験結果。 図5:ヌードマウスにおけるヒト脳星発明芽細胞腫U87MG異種移植腫瘍に対する本開示のADCの有効性。 図6:ヌードマウスにおけるヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト 562異種移植腫瘍に対する本開示のADCの有効性。 図7:ヌードマウスにおけるヒト神経膠腫U87MG異種移植片腫瘍に対する本開示のADCの有効性。
定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者の共通の理解と一致する。本明細書で発明されるものと類似または同等の任意の方法および材料を、本開示の実施または試験で使用することができるが、好ましい方法および材料を本明細書で発明する。本開示を説明し、事前に説明するとき、以下の用語は、以下の定義に従って使用される。
本開示において商標名が使用される場合、出願人は、製品の調製物、ジェネリック薬物、および活性成分を商標名で含むことを意図する。
特に断らない限り、本明細書および特許請求の範囲において使用される用語は、以下に記載される意味を有する。
「リガンド」はターゲット細胞に関連する抗原または受容体を認識し、それに結合することができる高分子化合物を指す。リガンドの役割は、リガンドに結合する標的細胞集団に薬物を送達することである。このような配位子としてはタンパク質ホルモン、レクチン、成長因子、抗体、または細胞に結合上記他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の一実施形態では、リガンドはPcによって表される。リガンドは、リガンド上のヘテロ原子を介して連結単位と結合を形成することができる。リガンドは、好ましくは抗体またはその抗原結合フラグメントである。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト化抗体またはマウス抗体、および好ましくはモノクローナル抗体からなる群より選択される。
用語「薬物」は、腫瘍細胞の正常な増殖を強力に破壊することができる化学分子でDrによって表される細胞傷害性薬物を指す。原則として、全ての細胞傷害性薬物は、十分に高い濃度で腫瘍細胞を殺すことができる。しかし、特異性の欠如により腫瘍細胞を殺傷しながら、正常細胞のアポトーシスや重篤な副作用を引き起こす可能性がある。この語には、細菌、真菌、植物または動物起源の低分子毒素または酵素活性毒素などの毒素、放射性同位体(例えば、At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32およびLuの放射性同位体)、毒性薬物、化学療法薬物、抗生物質および核分解酵素、および好ましくは毒性薬物が含まれる。
用語「リンカーユニット」、「リンキングフラグメント」または「リンキングユニット」は化学構造フラグメントまたは結合を指し、これは、一端部でリガンドに連結され、別の端部で薬物に連結されるか、または他のリンカーに連結され、次いで薬物に連結される。本発明の好ましい実施形態は、L1端部が配位子に連結され、L4端部が構造単位Yを介して薬物(Dr)に連結される、LおよびL1～L4によって表される。
延単位、スペーサー単位、およびアミノ酸単位を含むリンカーは、米国特許出願公開第2005-0238649A1号に記載されているような当技術分野で公知の方法によって合成することができる。リンカーは、細胞内での薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー(例えば、ヒドラゾン化合物)、プロテアーゼ感受性(例えば、ペプチダーゼ感受性)リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカーを使用することができる(Chariら、Cancer Research 52: 127-131(1992);米国特許)。No.5,208,020)。
「配位子-薬物結合体」という用語は配位子が安定な連結単位を介して生物学的に活性な薬物に連結されることを意味し、本開示において、「配位子-薬物結合体」は好ましくは抗体-薬物結合体(ADC)であり、これは、モノクローナル抗体または抗体フラグメントが安定な連結単位を介して生物学的活性を有する毒性薬物に連結されることを意味する。
本開示において使用されるアミノ酸についての3文字コードおよび1文字コードは、J. biolに記載されるとおりである。chem,243,p3558(1968)。
「抗体」という用語は、免疫グロブリン、2つの同一の重鎖と2つの同一のL鎖との間の鎖間ジスルフィド結合によって一緒に連結された4ペプチド鎖構造を指す。異なる免疫グロブリン重鎖定常領域は異なるアミノ酸組成物および配列を示し、したがって、異なる抗原性を示す。したがって、免疫グロブリンは5つの型、すなわち、IgM、IgD、IgG、IgAおよびIgEと呼ばれ、それぞれ対応する重鎖μ、δ、γ、αおよびεを有する。ヒンジ領域のアミノ酸組成および重鎖ジスルフィド結合の数および位置に応じて、同じタイプのIgをさらに異なるサブタイプに分けることができ、例えば、IgGをIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4に分けることができる。L鎖は、異なる定常領域に基づいてκ鎖またはλ鎖に分けることができる。5種類のIgはそれぞれκ鎖またはλ鎖を有することができる。本開示に記載される抗体は、好ましくは標的細胞上の細胞表面抗原に対する特異的抗体である:抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗インテグリン抗体、抗テナシン抗体抗SLC44A4抗体または抗メソテリン抗体、好ましくはトラスツズマブ(商標)Herceptin、Pertuzumab(2C4、商品名パージェタとしても知られる)、Nimotuzumab(商標名Taixinsheng)、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96およびGlematumamab。
抗体重鎖またはL鎖のN末端に隣接する約110アミノ酸配列は、可変領域(Fv領域)として知られる高度に可変であり;C末端に隣接する残りのアミノ酸配列が定常領域として知られる比較的安定である。可変領域は、3つの超可変領域(HVR)および4つの比較的保存的なフレームワーク領域(FR)を含む。抗体の特異性を決定する3つの超可変領域は、相補性決定領域(CDR)としても知られている。各軽鎖可変領域(LCVR)または各重鎖可変領域(HCVR)は3つのCDR領域および4つのFR領域からなり、アミノ末端からカルボキシル末端への順序は、以下の順序である: FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。L鎖の3つのCDR領域はLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を指し、重鎖の3つのCDR領域はHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を指す。
本開示の抗体には、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体、ならびに好ましくはヒト化抗体および完全ヒト化抗体が含まれる。
本開示における「ネズミ抗体」という用語は、当該分野の知識および技術に従ってネズミから調製される抗体を指す。調製の間、試験被検者に特異的抗原を注射し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離する。
「キメラ抗体」という用語はマウス抗体の可変領域をヒト抗体の定常領域と融合させることによって得られる抗体であり、キメラ抗体は、マウス抗体誘導免疫反応を軽減することができる。キメラ抗体を確立するために、ネズミ特異的モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを確立し、可変領域遺伝子をネズミハイブリドーマ細胞からクローニングし;次いで、ヒト抗体の定常領域遺伝子を必要に応じてクローニングし;ヒトの定常領域遺伝子をネズミの可変領域遺伝子と連結させてキメラ遺伝子を形成し、これを続いて発現ベクターに挿入し;最後に、キメラ抗体分子を真核または原核システムで発現させる。
「ヒト化抗体」という用語はCDR移植抗体としても知られており、マウスCDR配列をヒト抗体可変領域フレームワークに移植することによって生成される抗体、すなわち、異なるタイプのヒト生殖系列抗体フレームワーク配列において産生される抗体を指す。ヒト化抗体は、キメラ抗体によって運ばれる多数のマウスタンパク質成分によって誘導される異種応答を克服することができる。このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列上記公衆された参考文献をカバーする公衆DNAデータベースから得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列DNA配列は、「VBase」ヒト生殖系列配列データベース(world wide web, www.mrccpe.com.ac.uk/vbaseで入手可能)、ならびにKabat, E A, et al. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Edに見出すことができる。免疫原性の低下に起因する活性の低下を避けるために、ヒト抗体の可変領域のフレームワーク配列を最小限の復帰突然変異または復帰突然変異にかけて活性を維持することができる。本発明のヒト化抗体はまた、ファージディスプレイによってCDR親和性成熟が行われるヒト化抗体を含む。ヒト化に関与するマウス抗体を使用する方法をさらに記載する文献には、例えば、Queenら、Proc., Natlが含まれる。Acad. Sci. USA, 88, 2869, 1991および冬らの方法[Jonesら、Nature, 321, 522(1986), Riechmannら、Nature, 332, 323-327(1988), Verhoeyenら、Science, 239, 1534(1988)]。
用語「完全ヒト化抗体」はまた、「完全ヒト化モノクローナル抗体」としても知られ、ここで、抗体の可変領域および定常領域は両方ともヒト起源であり、免疫原性および副作用を排除する。モノクローナル抗体の開発は4つの段階、すなわち、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体および完全ヒト化モノクローナル抗体を経た。本開示の抗体は、完全ヒト化モノクローナル抗体である。完全ヒト化抗体調製の関連技術には、主に、ヒトハイブリドーマ技術、EBV形質転換Bリンパ球技術、ファージディスプレイ技術、トランスジェニックマウス抗体調製技術、単細胞B細胞抗体調製技術などが含まれる。
「抗原結合断片」という用語は抗原との特異的結合能を保持する抗体の1つ以上の断片を指す。完全長抗体の断片を使用して、抗原との結合機能を達成することができることが示されている。用語「抗原結合断片」における結合断片の実施例としては(i)Fab断片、VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価断片;(ii)F(ab')2 断片、ヒンジ領域においてジスルフィド結合によって連結された2つのFab断片を含む二価断片;(iii)VHおよびCH1ドメインからなるFd断片;(iv)1アーム抗体のVHおよびVLドメインからなるFv断片;(v)単一ドメインまたはdAb断片(区ら(1989)Nature 341:544-546)VHドメインからなる;ならびに(vi)単離された相補的決定領域(CDR)または(vii)合成リンカーによって任意に連結された2つ以上の単離されたCDRの組合せが挙げられる。さらに、FvフラグメントのVLドメインおよびVHドメインは2つの別個の遺伝子によってコードされるが、これらは組換え方法を使用することによって合成リンカーによって連結され得、それによって、VLドメインおよびVHドメインを対合することによって形成される一価分子の単一タンパク質鎖を生成する(単鎖Fv(scFv)と呼ばれる;例えば、鳥ら(1988)Science: 242:423-426、およびHustonら(1988)Procを参照のこと)。Natl. Acad. Sci USA 85:5879-5883)。この単鎖抗体はまた、抗体の用語「抗原結合フラグメント」に含まれることが意図される。このような抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ、無傷の抗体についてのものと同じ方法を使用することによって、機能的断片についてスクリーニングされる。抗原結合部位は、組換えDNA技術によって、または完全な免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的破壊によって産生され得る。抗体は異なるアイソタイプの抗体、例えば、IgG(例えば、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4サブタイプ)、IgA1、IgA2、IgD、IgEまたはIgM抗体であり得る。
Fabは、IgG抗体分子をパパイン(H鎖の224位のアミノ酸残基を切断する)で処理することによって得られる抗体フラグメントである。Fabフラグメントは約5万の分子量を有し、抗原結合活性を有し、ここで、H鎖のN-端子側の約半分およびL鎖全体が、ジスルフィド結合を介して一緒に結合される。
F(ab')2はIgGのヒンジ領域の2つのジスルフィド結合の下流部分を、約10万の分子量を有し、抗原結合活性を有し、ヒンジ位置に結合した2つのFab領域を含むペプシンで消化することによって得られる抗体フラグメントである。
Fab'は上記F(ab')2のヒンジ領域でジスルフィド結合を切断した抗体フラグメントであり、分子量約5万であり、抗原結合活性を有する。
さらに、Fab'は抗体のFab'フラグメントをコードするDNAを原核生物発現ベクターまたは真核生物発現ベクターに挿入し、次いでこれを原核生物または真核生物に導入してFab'を発現させることによって産生することができる。
用語「単鎖抗体」、「単鎖Fv」または「scFv」は、リンカーによって連結された抗体重鎖可変ドメイン(または領域; VH)および抗体軽鎖可変ドメイン(または領域; VL)を含む分子を指す。このようなscFv分子は、NH2 -VL-上記-VH-COOHまたはNH2 -VH-上記-VL-COOHの全般的な構成を有することができる。先行技術における適切なリンカーは例えば、1～4繰り返しを有する変異体を使用して、繰り返しGGGGSアミノ酸配列またはその変異体からなる(Holligerら(1993), Proc)。Natl. Acad. Sci. 米国90:6444-6448). 本開示のために使用することができる他のリンカーは、Alfthanら(1995)、Protein Engによって記載されている。8:725-731, Choi et al.(2001), Eur. J. イミュノール。31:94-106, Huら(1996), Cancer Res. 56:3055-3061, Kipriyanovら(1999), J. Mol. Biol. 293:41-56 およびRoovers et al.(2001), Cancer Immunol.
「CDR」という用語は、主に抗原結合に寄与する抗体の可変ドメイン内の6つの超可変領域のうちの1つを指す。6つのCDRについて最も一般的に使用される定義の1つは、Kabat E. A. et al.(1991)Sequences of proteins of immunological interestによって提供される。NIH Publication 91-3242. 本明細書で使用される場合、CDRのKabat定義は、軽鎖可変ドメイン(CDR L1、CDR L2、CDR L3またはL1、L2、L3)のCDR1、CDR2およびCDR3、ならびに重鎖可変ドメイン(CDR H2、CDR H3またはH2、H3)のCDR2およびCDR3にのみ適用される。
「抗体フレームワーク」という用語は、可変ドメインの抗原結合ループ(CDR)のための足場として働く可変ドメインVLまたはVHの一部を指す。本質的に、それはCDRのない可変ドメインである。
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原の部位を指す。エピトープは、典型的には少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14または15個の連続または非連続アミノ酸を独特の空間的立体配座で含む。例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed.(1996)を参照されたい。
用語「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的結合」および「特異的結合」は、所定の抗原上のエピトープへの抗体の結合を指す。典型的には、約10-8 M未満、10-9 Mまたは10-10 M以下など、約10-7 M未満の親和性(KD)で結合する。
「核酸分子」とはDNA分子とRNA分子をいい、一本鎖でも二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖DNAであり、核酸が別の核酸配列と機能的な関係に置かれると、「効果的に連結」される。例えば、プロモーターまたはエンハンサーがコード配列の転写に影響を及ぼす場合、プロモーターまたはエンハンサーは、コード配列に効果的に連結される。
「ベクトル」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。一実施形態ではベクトルが追加のDNAセグメントを連結することができる環状二本鎖DNAループを指す「プラスミド」である。別の実施形態では、ベクトルはウイルスベクトルであり、追加のDNAセグメントをウイルスゲノムに連結することができる。本明細書に開示されるベクトルはそれらが導入された宿主細胞中で自己複製することができる(例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクトルおよびエピソーム哺乳動物ベクトル)か、または宿主細胞中への導入時に宿主細胞のゲノム中に組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される(例えば、非エピソーム哺乳動物ベクトル)。
抗体および抗原結合フラグメントを産生および精製するための方法は当技術分野において周知であり、例えば、Cold Spring Harbor Antibody Technical Guide、第5～8章および第15章が挙げられる。抗原結合フラグメントはまた、従来の方法によって調製され得る。本発明の抗体または抗原結合フラグメントは、非ヒトCDR領域に1つ以上のヒトFR領域を付加するように遺伝子操作される。ヒトFR生殖系列細胞系配列は、http://IMGT.cines.frのImMunoGeneTics(IMGT)ウェブサイトまたはJournal of Immunoglobulins 20011SBN012441351からIMGTヒト抗体可変生殖系列細胞系遺伝子データベースおよびMOEソフトウェアをアラインメントすることにより得ることができる。
「宿主細胞」という用語は、発現ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞には、細菌、微生物、植物または動物細胞が含まれ得る。形質転換されやすい細菌には、腸内細菌科の部材、例えば、大腸菌またはサルモネラの歪み;枯草菌のようなバチルス科の歪み;肺炎球菌;レンサ球菌およびインフルエンザ菌が含まれる。適切な微生物としては、Saccharomyces cerevisiaeおよびPichia pastorisが挙げられる。適当な動物宿主細胞系は、CHO(チャイニーズハムスター卵巣細胞系)およびNS0細胞を含む。
本開示の操作された抗体または抗原結合フラグメントは、従来の方法によって調製発明精製され得る。例えば、重鎖および軽鎖をコードするcDNA配列をクローニングし、GS発現ベクターに組換えることができる。組換え免疫グロブリン発現ベクターは、CHO細胞において安定にトランスフェクトされ得る。より推奨される現存のテクノロジーとして、哺乳動物発現系は、特にFc領域の高度に保存されたN-端子部位において、抗体のグリコシル化を生じ得る。陽性クローンを、バイオリアクター中の無血清培地中で増殖させて、抗体を産生する。分泌された抗体を含む培養培地は、従来の技術によって精製され得る。例えば、精製は、調整された緩衝液を含むAまたはGセファロースFFカラムを使用して行われる。非特異的に結合した成分は、溶出によって除去される。結合した抗体をpH勾配法により溶出し、抗体フラグメントをSDS-PAGEにより検出し、回収する。抗体は従来の方法によって濾過し、濃縮することができる。可溶性凝集体および多量体はまた、サイズ排除またはイオン交換のような従来の方法によって除去され得る。得られた生成物は、-70℃などで直ちに凍結するか、または凍結乾燥する必要がある。
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合を介して互いに連結された2つ以上のアミノ酸分子からなる、アミノ酸とタンパク質との間の化合物フラグメントを指す。ペプチドは、タンパク質の構造的および機能的フラグメントである。ホルモン、酵素等は本質的にペプチドである。
「糖類」という用語は、単糖類、二糖類および多糖類に分けることができる、C、H、およびOの3つの要素から構成される生体高分子を指す。
「蛍光プローブ」という用語は、紫外-可視-近赤外領域に特徴的な蛍光を有する一種の蛍光分子を指す。蛍光プローブの蛍光特性(励起および発光波長、強度、寿命および偏光など)は、極性、屈折率、粘度などの環境の特性に応じて敏感に変化上記。蛍光プローブと核酸(DNAまたはRNA)、タンパク質または他の高分子構造との間の非共有結合的相互作用は1つ以上の蛍光特性の変化を可能にし、これは、高分子物質の特性および挙動を検討するために使用され得る。
用語「毒性薬物」は細胞の機能を阻害または停止し、および/または細胞死または破壊を引き起こす物質を指す。毒性薬物には、腫瘍治療に使用することができる毒素および他の化合物が含まれる。
用語「毒素」は、細胞の増殖または増殖に有害な効果を有し得る任意の物質をいう。毒素は、カンプトセカン、メイタンシノイドおよびその誘導体(CN101573384)、例えばDM1、DM3、DM4、アウリスタチンF(AF)およびその誘導体、例えばMMAF、3024(WO 2016/127790 A1、化合物7)、ジフテリア毒素、リシンA鎖、アブリンA鎖、モデシン、α-サルシン、Aleutites fordii毒性タンパク質、Phytolaca americana毒性タンパク質(PAPI、PAPIおよびPAP-S)、モモルディカ・キャランティア阻害剤、カルシン、サパオナリア・オフィシナリン阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、フェノマイシン、エノマイシンおよびトリコテネスからの低分子毒素およびそれらの誘導体であり得る。
「安価な化学薬品」という用語は、腫瘍の治療に使用できる化学化合物を指す。この定義には癌の成長を促進するホルモンの効果を調節、減少、ブロック、または阻害するように効果する抗ホルモン剤も含まれ、これらは全身性または全体的な療法の形成であることが多い。それらはホルモンであり得る。化学療法薬の例には、チオテパのようなアルキル化剤;ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンのようなアルキルスルホネート;ベンドパ、カルボコン、メトウレアおよびドピラのようなアジリジン;アルトレタミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロメラミンを含むアジリジンおよびメチルアミン;クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、塩酸メクロレタミン;メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラムスチンのようなニトロソ;カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンのような抗生物質;ラシノマイシンのような抗生物質が含まれる。アクチノマイシン、アザセリン、アザマイシン、ブレオマイシン、カルジノマイシン、カルジノマイシン、クロモマイシン、アクチノマイシンD、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、ノオリボマイシン、ペプロマイシン、ピュロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルコシジン、ゾルビシン、メトトレキサート、5-フルオロウラシル(5-FU)などの代謝拮抗薬 デノプテリン、メトトレキサート、プテリン、6-メルカプトプテリン、チオグアノプテリンなどのプテリン類似体;アンシタビン、アザシチジン、6-アズウリジン、カルモフィン、シタラビン、ジデオキシウリジン、エノシタビン、フロックスウリジン、5-FUなどのピリミジン類似体;カルステロン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピチオスタン、テストラクトン;アミノグルテチミドなどの抗アドレナリン トリロスタン;葉酸;アルドホスファリン酸;アミドサクリン;ベストレン;エダトラキシン;デフォミン;デフォミン;ジアミン;エルフォミチン;エトグルシン;硝酸ガリウム;レンチナン;ミトグアゾン;ミトキサントロン;モピダモール;ニトラクトスタチン;ピラルビシン;ポドフィリン酸;プロカルバジン; PSK(登録商標);ラゾキサン;シゾフィラン;スピログルアゾン酸;トリアジコン;2,2',2"-トリクロロトリエチルアミン;ウレタン;ビンデシン;ダカルバジン;マンノムスチン;ミトブロモジュリトール;ジブロモジュシトール;ポブロマン、ガシトシン、アラビノシド(「Ara-C」)、シクロホスファミド、チオテパ、パクリタキセルなどのタキサンTAXOL(R)、Bristol-Myers Oncology, Princeton, NJ)およびドセタキセル(TAXOTERE(R)、Rhone-Rorer, Antony, France);クロラムブシル;ゲムシタビン; 6-チオグアニン;メトトレキサート;ビンブラスチン;プラチナ;エトポシド(VP-16);マイトマイシンC;ビンクリスチン;ビンベロルビン;ノバントロン;テニポシド;ダウノルビシン;アミノプテリン;イバンドロナート; CPT-11;トポイソメラーゼ阻害剤RFS2000;ジフルオロメチルオルニチン(DMFO);レチノイン酸エスペラミシン;カペシタビン;薬学的に許容される塩上記物質の酸または誘導体。この定義には、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害剤4(5)-イミダゾール、4-ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、LY117018、オナプリストンおよびファレストンなどの抗エストロゲン;ならびにフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリドおよびゴセレリンなどの抗アンドロゲン;ならびに上記物質のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体などの、ホルモンの効果を調節または阻害しうる抗ホルモン剤も含まれる。
「アルキル」という用語は飽和脂肪族炭化水素基を指し、これは、炭素原子1～20、好ましくは炭素原子1～12のアルキル、より好ましくは炭素原子1～10のアルキル、最も好ましくは炭素原子1～6のアルキルを含む直鎖または分岐鎖基である。非限定的な例としては、メチル、エチル、n-プロピル、イソブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、1,1-ジメチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、n-ヘキシル、1,2-トリメチルプロピル、1,1,2-ジメチルブチル、2,3-ジメチルブチル、2-エチルペンチル、3-メチルペンチル、2,3-ジメチルブチル、n-ヘキシル、3-メチルヘキシル、4-メチルヘキシル、5-メチルヘキシル、2,3-ジメチルペンチルが挙げられる。2,4-ジメチルペンチル、2,3-エチルペンチル、2,3-オクチル、2,4-ジメチルヘキシル、2,5-ジメチルヘキシル、3,3-ジメチルヘキシル、4,4-ジメチルヘキシル、3-エチルヘキシル、2-メチル-2-エチルペンチル, 2-メチル-3-エチルペンチル、n-ノニル、2-メチル-2-エチルヘキシル、2-メチル-3-エチルヘキシル、2,2-ジエチルペンチル、n-デシル、3,3-ジエチルヘキシル、2,2-ジエチルヘキシル及びこれらの種々の分岐異性体。より好ましくはアルキル基が1～6個の炭素原子を有する低級アルキルであり、非限定的な例としてはメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、sec-ブチル、n-ペンチル、1,1-ジメチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、1-エチルプロピル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、n-ヘキシル、1-エチル-2-メチルプロピル、1,1,2-トリメチルプロピル、1,1,2-ジメチルブチル、1,2-ジメチルブチル、2,2-ジメチルブチル、1,3-ジメチルブチル、2-エチルペンチル、3-メチルペンチル、4-メチルペンチル、2,3-ジメチルペンチル。アルキルは置換されていても置換されていなくてもよい。置換される場合、置換基は、任意の利用可能な接続点で置換され得る。置換基群は、好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、水酸基、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオおよびオキソからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
用語「ヘテロアルキル」はN、OおよびSからなる群から選択される1つ以上のヘテロ原子を含有するアルキルをいい、ここでアルキルは上で定義された通りである。
用語「アルキレン」は、同じ炭素原子または親アルカンの2つの異なる炭素原子からの2つの水素原子の除去から誘導される2つの残渣を有する飽和直鎖または分岐脂肪族炭化水素基を指す。アルキレンは、1～20個の炭素原子、好ましくは1～12個の炭素原子、より好ましくは1～6個の炭素原子を有する直鎖または分岐基である。アルキレンの非限定的な例としてはメチレン(-CH2-)、1,1-エチレン(-CH(CH3)-)、1,2-エチレン(-CH2 CH2)-、1,1-プロピレン(-CH(CH2CH3)-)、1,2-プロピレン(-CH2 CH(CH3)-), 1,3-プロピレン(-CH2 CH2CH2-)、1,4-ブチレン(-CH2 CH2 CH2CH2-)、1,5-ペンタイレン(-CH2 CH2 CH2CH2 CH2-)などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキレンは置換されていても置換されていなくてもよい。置換される場合、置換基は、任意の利用可能な接続点で置換され得る。置換基群は、好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、水酸基、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクリルチオおよびオキソからなる群から任意に選択される1つ以上の基である。
用語「アルコキシ」は-O-(アルキル)または-O-(非置換シクロアルキル)基を指し、ここでアルキルおよびシクロアルキルは上で定義したとおりである。アルコキシ基の非限定的な例としては、メトキシ基、エトキシ、プロポキシ基、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシが挙げられる。アルコキシ基は、置換されていても置換されていなくてもよい。置換される場合、置換基は、好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、水酸基、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルチオおよびヘテロシクロチオからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
用語「シクロアルキル」は、3～20個の炭素原子、好ましくは3～12個の炭素原子、より好ましくは3～10個の炭素原子、最も好ましくは3～8個の炭素原子を有する飽和または部分不飽和の単環式または多環式炭化水素置換基を指す。単環式シクロアルキルの非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチルなどが挙げられる。多環式シクロアルキルは、スピロ環、縮合環または架橋環を有するシクロアルキルを含む。
「ヘテロシクリル」という語は3～20員の飽和または部分不飽和単環式または多環式炭化水素基を指し、ここで、1つ以上の環原子はN、OおよびS(O)m(式中、mは0～2の整数)からなる群より選択されるヘテロ原子であるが、環は-O-O-, -O-S-または-S-Sinを除き、残りの環原子は炭素原子である。好ましくは、ヘテロシクリルが1～4個の原子がヘテロ原子である3～12個の環原子を有し;より好ましくは3～10個の環原子を有する。単環式ヘテロシクリルの非限定的な例としては、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニルなどが挙げられる。多環式ヘテロシクリルは、スピロ環、縮合環または架橋環を有するヘテロシクリルを含む。
「スピロヘテロシクリル」という語は1つの共有原子(スピロ原子と呼ばれる)を介して連結された個々の環を有する5～20員の多環式ヘテロシクリル基を指し、ここで、1つ以上の環原子はN、OおよびS(O)m(式中、mは0～2の整数)からなる群より選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素原子であり、環は1つ以上の二重結合を含有することができるが、環のいずれも完全に共役したπ電子系を有さない。スピロヘテロシクリルは好ましくは6～14員のスピロヘテロシクリルであり、より好ましくは7～10員のスピロヘテロシクリルである。環間で共有されるスピロ原子の数に応じて、スピロヘテロシクリルはモノスピロヘテロシクリル、ジスピロヘテロシクリル、またはポリスピロヘテロシクリルに分けることができ、スピロヘテロシクリルは好ましくはモノスピロヘテロシクリルまたはジスピロヘテロシクリルであり、より好ましくは4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員、または5員/6員モノスピロヘテロシクリルである。スピロヘテロシクリルの非限定的な例には、が含まれる:
Figure 2022511351000024
「縮合ヘテロシクリル」という語は5～20員の多環式ヘテロシクリル基を指し、ここで、系中の各環は原子の隣り合う一対を別の環と共有し、ここで、1つ以上の環は1つ以上の二重結合を含み得るが、環のいずれも完全に共役したπ電子系を有さず、そしてここで、1つ以上の環原子はN、OおよびS(O)m(ここで、mは0～2の整数)からなる群より選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素原子である。縮合ヘテロシクリルは、6～14員の縮合ヘテロシクリルであることが好ましく、7～10員の縮合ヘテロシクリルであることがより好ましい。員環の数に応じて、縮合ヘテロシクリルは二環式、三環式、四環式または多環式縮合ヘテロシクリルに分割することができ、縮合ヘテロシクリルは好ましくは二環式または三環式縮合ヘテロシクリルであり、より好ましくは、5員/5員または5員/6員の二環式縮合ヘテロシクリルである。縮合ヘテロシクリルの非限定的な例としては、以下が挙げられる:
Figure 2022511351000025
「架橋ヘテロシクリル」という語は5～14員の多環式ヘテロシクリル基を指し、ここで、系中の2つの環はそれぞれ2つの切断原子を共有し、環は1つ以上の二重結合を有することができるが、環のいずれも完全に共役したπ電子系を有さず、1つ以上の環原子はN、OおよびS(O)m(式中、mは0～2の整数)からなる群から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素原子である。架橋ヘテロシクリルは、6～14員の架橋ヘテロシクリルであることが好ましく、7～10員の架橋ヘテロシクリルであることがより好ましい。員環の数に応じて、架橋ヘテロシクリルは二環式、三環式、四環式または多環式の架橋ヘテロシクリルに分割することができ、架橋ヘテロシクリルは好ましくは二環式、三環式または四環式の架橋ヘテロシクリルであり、より好ましくは二環式または三環式の架橋ヘテロシクリルである。架橋ヘテロシクリルの非限定的な例には、が含まれる:
Figure 2022511351000026
ヘテロシクリル環はアリール、ヘテロアリールまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合した環はヘテロシクリルである。その非限定的な例には、以下が含まれる:
Figure 2022511351000027
 等。
ヘテロシクリルは、置換されていても置換されていなくてもよい。置換される場合、置換基は、好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、水酸基、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロチオおよびオキソからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
「アリール」という語は共役π電子系、好ましくは6～10員アリール、例えばフェニル基およびナフチル、好ましくはフェニル基を有する6～14員全炭素単環または多環縮合環(すなわち、系中のそれぞれの環は、系中の別の環と隣り合う炭素原子対を共有する)を指す。アリール環はヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合した環はアリール環である。その非限定的な例には、以下が含まれる:
Figure 2022511351000028
アリールは、置換されていても置換されていなくてもよい。置換される場合、置換基は、好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、水酸基、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルチオおよびヘテロシクロチオからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
用語「ヘテロアリール」はO、SおよびNからなる群から選択される1～4個のヘテロ原子を有する5～14員のヘテロ芳香族系を指し、ヘテロアリールは好ましくは5～10員のヘテロアリールであり、より好ましくは5または6員のヘテロアリール、例えば、フリル、チエニル基、ピリジル、ピロリル、N-アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、テトラゾリルなどである。ヘテロアリール環はアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合することができ、ここで、親構造に結合した環はヘテロアリール環である。その非限定的な例には、以下が含まれる:
Figure 2022511351000029
ヘテロアリールは、置換されていても置換されていなくてもよい。置換される場合、置換基は、好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、水酸基、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルコキシ、シクロアルキルチオおよびヘテロシクロチオからなる群から独立して選択される1つ以上の基である。
「アミノ保護基」とは、分子の他の部分が反応に被検者である場合に、アミノ基が反応するのを妨げ、容易に除去され得る基をいう。非限定的な例としては、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、アセチル、ベンジル、アリル、p-メトキシベンジルなどが挙げられる。これらの基は場合により、ハロゲン、アルコキシおよびニトロからなる群から選択される1～3個の置換基で置換されていてもよい。アミノ保護基は、好ましくは9-フルオレニルメチルオキシカルボニルである。
用語「シクロアルキルアルキル」は1つ以上、好ましくは1つのシクロアルキル(単数または複数)によって置換されたアルキル基を指し、ここでアルキルおよびシクロアルキルは、上で定義したとおりである。
用語「ハロアルキル」は1つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基を指し、ここでアルキルは上で定義した通りである。
「重水素化アルキル」という用語は1個以上の重水素原子で置換されたアルキル基を指し、ここでアルキルは上記で定義した通りである。
「水酸基」という用語は-OH基を指す。
用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
「アミノ」という語は、-NH2 基を指す。
「ニトロ」という語は-NO2 群を意味する。
「アミド」という用語は-C(O)N(アルキル)または-C(O)N(シクロアルキル)基を指し、ここで、アルキルおよびシクロアルキルは、上記で定義したとおりである。
「アルコキシカルボニル」という用語は-C(O)O(アルキル)または-C(O)O(シクロアルキル)基を指し、ここでアルキルおよびシクロアルキルは、上で定義したとおりである。
本開示はまた、種々の重水素化形態の式(I)の化合物を含む。炭素原子に結合した利用可能な水素原子の各々は、重水素原子によって独立して置換され得る。当業者は、関連文献を参照して、重水素化形態の式(I)の化合物を合成することができる。重水素化された形態の式(I)の化合物は市販の重水素化された原料を使用することによって調製することができ、または重水素化されたボラン、テトラヒドロフラン中の重水素化されたボラン、重水素化された水素化リチウムアルミニウムヒドリド、重水素化されたヨードエタン、重水素化されたヨードメタンなどを含むが、これらに限定されない、重水素化された試薬を用いる従来の技術によって合成することができる。
「任意」または「任意」は後述する事象または状況が起こり得るが、必ずしも起こらないことを意味し、そのような説明は事象または状況が起こるかまたは起こらない状況を含み、例えば、「アルキルによって任意に置換されたヘテロシクリル」はアルキル基が存在し得るが、存在する必要はないことを意味し、そのような説明はヘテロシクリルがアルキルによって置換され、ヘテロシクリルがアルキルによって置換されない状況を含む。
「置換された」とは、対応する数の置換基によって独立して置換された、基中の1個以上の水素原子、好ましくは5個まで、より好ましくは1～3個の水素原子をいう。置換基は可能な化学位置にのみ存在することは言うまでもない。当業者は過度の努力なしに、実験または理論によって、置換が可能であるか、または不可能であるかを決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノまたは水酸基と、不飽和結合を有する炭素原子(例えば、オレフィン)との組み合わせは、不安定であり得る。
用語「医薬組成物」は、本明細書に記載の化合物またはその生理学的/薬学的に許容可能な担体される塩もしくはプロドラッグの1つ以上と、他の化学成分、ならびに生理学的/薬学的に許容可能な担体される担体および賦形剤などの他の成分との混合物を指す。医薬組成物の目的は、生物学的活性を示すように活性成分の吸収を助ける化合物の生物への投与を容易にすることである。
「薬学的に許容可能な塩」または「医薬塩」という用語は哺乳動物において安全かつ有効であり、所望の生物学的活性を有する、本開示のリガンド-薬物結合体の塩または本開示の化合物の塩を指す。本開示のリガンド-薬物結合体は、少なくとも1つのアミノを含有するので、酸と塩を形成することができる。薬学的に許容される塩の非限定的な例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、アスコルビン酸塩、シュウ酸塩、硝酸塩、ソルビン酸塩、リン酸水素塩、リン酸二水素塩、サリチル酸塩、クエン酸水素塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩が含まれる。
用語「溶媒和物」は、本開示のリガンド-薬物結合体と1つ以上の溶媒分子とによって形成される薬学的に許容される溶媒和物をいう。溶媒分子の非限定的な例としては、水、エタノール、アセトニトリル、イソプロパノール、DMSO、酢酸エチルが挙げられる。
用語「薬物負荷」は式(I)の化合物中の各リガンドに負荷された細胞傷害性薬物の平均数を指し、抗体の数に対する薬物の数の比として表すこともできる。薬物負荷は、リガンド(Pc)当たり0～12、好ましくは1～10の細胞傷害性薬物(D)の範囲であり得る。本発明の一実施形態では薬物負荷はnとして表され、例示的な値は1、2、3、4、5、6、7、8、9、10の平均であり得る。カップリング反応後のADC分子当たりの薬物の平均数は、UV/可視分光法、質量分析、ELISA試験およびHPLC特徴付けなどの従来の方法によって決定することができる。
一実施形態では、細胞傷害性薬物が連結ユニットを介して、配位子のリシン残基のN-端子アミノおよび/またはε-アミノに結合される。典型的には、カップリング反応において抗体にコンジュゲートされる薬物分子の数が理論上の最大値未満である。
以下の非限定的な方法を用いて、配位子-細胞傷害性薬物共役の負荷を制御することができる:
(1)モノクローナル抗体に対する連結試薬のモル比の制御、
(2)反応時間および温度の制御、
(3)異なる反応試薬の選択。
従来の医薬組成物の調製は、中国薬局方に見出すことができる。
本発明の構成において使用される「担体」とは、薬物が人体に入り、分配される方法を変更し、薬物放出速度を制御し、薬物を標的臓器に送達することができるシステムを指す。薬物キャリア放出および標的化システムは、薬物分解および損失を減少させ、副作用を減少させ、バイオアベイラビリティを改善することができる。例えば、担体として使用することができるポリマー界面活性剤はそれらの独特の両親媒性構造のために、自己集合して種々の形態の凝集体を形成することができる。好ましい例としては、ミセル、マイクロエマルジョン、ゲル、液晶、小胞などが挙げられる。これらの集合体は膜に対する良好な透過性を有する一方で、薬物分子をカプセル化する能力を有し、そして優れた薬物キャリアとして使用され得る。
「賦形剤」とは、主剤以外の医薬製剤における補助剤であり、接着剤、充填剤、崩壊剤、タブレット端末中の滑沢剤、半固形製剤の軟膏及びクリーム中のマトリックス部分、防腐剤、酸化防止剤、香料、芳香剤、共溶媒、乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整剤、液剤中の着色剤等のような補助剤と呼ぶこともできる。
「希釈剤」とは充填剤としても知られており、主にタブレット端末の質量と体積を増やすことを目的としており、希釈剤を加えることにより、一定の体積を確保し、主成分の投与量のばらつきを減らし、薬剤の圧迫プロファイルを改善し、タブレット端末に油性成分が含まれている場合には吸収剤を加えて油性物質を吸収し、タブレット端末生成を促進する「乾燥」状態を保つことをいう。例えば、希釈剤としては、澱粉、ラクトース、カルシウムの無機塩、微結晶セルロースなどが挙げられる。
医薬組成物は、無菌の注射可能な水溶液の形成であり得る。使用できる許容できる車両または溶媒は、水、リンゲル液または生理食塩水である。無菌注射用製剤は、有効成分が油相に溶解されている無菌注射用水中油型マイクロエマルジョンであってもよい。例えば、活性成分は、大豆油およびレシチンの混合物に溶解される。次に、油溶液を水とグリセリンの混合物に添加し、処理してマイクロエマルジョンを形成する。注射用溶液またはマイクロエマルジョンは、局所ボーラス注射によって患者の血流に導入することができる。あるいは、溶液およびマイクロエマルジョンが好ましくは本開示の化合物の一定の循環濃度を維持する様式で投与される。この一定濃度を維持するために、連続静脈内送達デバイスを使用することができる。そのような装置の実施例は、Deltec CADD-PLUSである。TM.5400静脈内注射ポンプ。
医薬組成物は、筋肉内および皮下投与のための無菌の注射可能な水性または油性懸濁液の形成であり得る。このような懸濁液は、周知技術に従って、上記のような適切な分散剤または濡れ剤および懸濁剤と共に製剤化することができる。無菌注射用製剤は、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒、例えば1,3-ブタンジオール中に調製された溶液中に調製された無菌注射用溶液または懸濁液であってもよい。さらに、無菌の不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として容易に使用され得る。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の配合不揮発性油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も、注射剤の調製に使用することができる。
本開示は、特定の構造を有する切断可能なリンカーアームおよび特定の構造を有する活性物質、ならびにリンカーアーム、活性物質および抗体から構成される抗体-薬物結合体(ADC)に関する。このADCは、スペーサーを介して抗体に毒性物質を結合させることにより形成される複合体である。抗体-薬物結合体(ADC)は体内で分解されて活性分子を放出し、それによって抗腫瘍効果を示す。
本開示の合成方法
本開示の目的を達成するために、本開示は、以下の技術的解決策を適用する:
スキームI:
本開示の式(D1)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための方法は、以下の工程を含む:
Figure 2022511351000030
式(Y1)の化合物と式(Dr)の化合物とを縮合剤の存在下で、場合によりアルカリ性条件下で反応させて、式(D1)の化合物を得、式中、R1, R2およびmは式(D1)で定義されるとおりである。
アルカリ性条件を提供する試薬は、有機塩基および無機塩基を含む。有機塩基としてはトリエチルアミン、ジエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、ヘキサヒドロピリジン、N, N-ジイソプロピルエチルアミン、n-ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、酢酸カリウム、ナトリウムtert-ブチルおよびカリウムtert-ブチルが挙げられるが、これらに限定されない。無機塩基としては水素化ナトリウム、リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化リチウムが挙げられるが、これらに限定されない。
縮合剤は、4-(4,6-ジメトキシ-1,3-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、O-ベンゾトリアゾール-N,N',N'-テトラメチル尿素テトラフルオロホウ酸ホスフェート、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール-7-アゾベンゾトリアゾール、O-ベンゾトリアゾール-N,N'-テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N'-テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェートからなる群から選択することができる。ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートおよびベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリピロリジニルリン酸、好ましくは4-(4,6-ジメトキシ-1,3-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩。
スキームII:
本発明の式(Lb-Y-Dr)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の調製法は、以下の工程を含む:
Figure 2022511351000031
Figure 2022511351000032
工程1:式(IB-1)の化合物およびエキサテカンスルホネート(1b)を、縮合剤の存在下、任意にアルカリ条件下で反応させて、式(IB-2)の化合物を得る;
工程2:式(IB-2)の化合物を脱保護して、式(IB)の化合物を得る;
工程3:式(IA)の化合物および式(IB)の化合物を、縮合剤の存在下で、場合によりアルカリ性条件下で反応させて、式(Lb-Y-Dr)の化合物を得る
記
Rcはアミノ保護基であり、好ましくは9-フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fmoc)である;
R1, R2, R5 ～R7、s 1、mは公式(Lb-Y-Dr)で定義されているとおりである。
アルカリ性条件を提供する試薬は、有機塩基および無機塩基を含む。有機塩基としてはトリエチルアミン、ジエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、ヘキサヒドロピリジン、N, N-ジイソプロピルエチルアミン、n-ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、酢酸カリウム、ナトリウムtert-ブチルおよびカリウムtert-ブチルが挙げられるが、これらに限定されない。無機塩基としては水素化ナトリウム、リン酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化リチウムが挙げられるが、これらに限定されない。
縮合剤は、4-(4,6-ジメトキシ-1,3-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、O-ベンゾトリアゾール-N,N',N'-テトラメチル尿素テトラフルオロホウ酸ホスフェート、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール-7-アゾベンゾトリアゾール、O-ベンゾトリアゾール-N,N'-テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート、2-(7-アゾベンゾトリアゾール)-N,N'-テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェートからなる群から選択される。ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートおよびベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリピロリジニルリン酸、好ましくは4-(4,6-ジメトキシ-1,3-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩。
スキームIII:
本発明の式(Pc-La-Y-Dr)の化合物の製造方法は、以下の工程を含む:
Figure 2022511351000033
 Pcは還元後に式(La -Y-Dr)の化合物と反応して式(Pc-La -Y-Dr)の化合物を得るが、還元剤はTCEPであることが好ましく、特に、抗体上のジスルフィド結合を還元することが好ましい;
記
Pcは配位子である;
W, L2, L3, R1, R2, R5 ～R7, m, nは公式(Pc -La -Y-Dr)で定義されている。
本開示は以下の実施例を参照してさらに記載されるが、実施例は本開示の範囲を限定するものとみなされるべきではない。
特定の条件が示されていない本開示の実施例における実験方法は、従来の条件、または材料もしくは製品製造業者によって推奨される条件に従って実施した。特定の供給源が示されていない試薬は、市場から購入される従来の試薬である。
化合物の構造は、核磁気共鳴(NMR)または質量分析(MS)によって同定される。NMRは、Bruker AVANCE-400装置によって測定する。判定用溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド(DMSO‐d6)、重水素化クロロホルム(CDCl3)及び重水素化メタノール(CD3 OD)であり、内標準物質はテトラメチルシランである。化学シフトを10-6 (ppm)で示す。
MSは、FINNIGAN LCQAd(ESI)質量分析計(製造者: 熱、タイプ: Finnigan LCQ advant MAX)によって測定される。
UPLCは、Waters Acquity UPLC SQD液体クロマトグラフ/質量分析計によって測定される。
高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を、アジレント 1200DAD高圧液体クロマトグラフィー(Sunfire C18 150×4.6mmクロマトグラフィーカラム)およびWaters 2695～2996年高圧液体クロマトグラフィー(Gimini C18 150×4.6mmクロマトグラフィーカラム)で測定する。
UV-HPLCは、Thermo nanodrop2000 UV分光光度計で測定する。
拡散抑制率とIC50 数値は、PHERAスターFSマイクロプレートリーダー(BMG社、ドイツ)によって決定される。
さらさら層シリカゲルクロマトグラフィー(TLC)プレートとして、Yantai Huanghai HSGF254またはQingdao GF254シリカゲルプレートを使用する。TLCに用いられるシリカゲルプレートの寸法は0.15mm～0.2mmであり、生成物精製に用いられるシリカゲルプレートの寸法は0.4mm～0.5mmである。
Yantai Huanghai 200～300メッシュシリカゲルは一般に、シリカゲルカラムクロマトグラフィーのための担体として使用される。
本開示の公知の出発物質は、当該分野で公知の方法によって調製され得るか、またはABCR GmbH & Co. KG, Acros Organnics, Aldrich Chemical Company, Accela ChemBio Inc., Dari chemical Companyなどから購入され得る。
特に明記しない限り、反応はアルゴン雰囲気または窒素雰囲気下で行われる。
「アルゴン雰囲気」または「窒素雰囲気」は、反応フラスコがアルゴンまたは窒素バルーン(約1L)を備えていることを意味する。
「水素雰囲気」は、反応フラスコが水素バルーン(約1L)を備えていることを意味する。
加圧水素化反応は、Parr 3916EKX水素化装置およびQinglan QL-500水素生成部またはHC2-SS水素化装置で行う。
水素化反応では、一般に反応系を真空にして水素を充填し、上記操作を3回繰り返す。
CEM Discover-S 908860型マイクロ波反応器は、マイクロ波反応に使用される。
特に明記しない限り、反応溶液は水溶液を指す。
特に明記しない限り、反応の反応温度は室温である。
20℃～30℃の室温が最も好適な反応温度である。
実施例におけるPBSバッファー(pH=6.5)の作成:KH2PO48.5g、K2HPO4.3H28.56 g O, 5.85gのNaClおよび1.5gのEDTAをフラスコ中で2Lに設定し、混合物を超音波処理に供して完全に溶解させ、十分に振盪して緩衝液を得る。
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおける溶離システムおよび化合物の精製のためのさらさら層クロマトグラフィーにおける展開溶剤システムには、A:ジクロロメタンおよびイソプロパノールシステム、B:ジクロロメタンおよびメタノールシステム、C:石油エーテルおよび酢酸エチルシステムが含まれる。溶媒の体積比は、化合物の極性に応じて調整され、少量の酸性試薬またはトリエチルアミンなどのアルカリ性試薬を添加して調整することもできる。
本開示の化合物のいくつかは、Q-TOF LC/MSによって特徴付けられる。Q-TOF LC/MSに関しては、アジレント 6530 Accurate-Mass Quadrupole-Time of Flight Mass Spectrometerおよびアジレント 1290-Infinity UHPLC(アジレントPoroshell 300SB-C8 5μm、2.1×75mmカラム)を使用する。
（実施例１）
N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-1-ヒドロキシシクロプロパン-1-カルボキサミド1
Figure 2022511351000034
Figure 2022511351000035
1mLのN, N-ジメチルホルムアミドをエキサテカンスルホン塩化1b(2.0mg、3.76μmol、特許出願「EP0737686A1」に開示された方法に従って調製)に添加し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却し、1滴のトリエチルアミンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。1-ヒドロキシシクロプロピルカルボン酸1a(1.4mg、3.7μmol、「Tetrahedron Letters, 25(12), 1269-72; 1984」に開示された公知方法に従って調製)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(3.8mg、13.7μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で2時間攪拌した。反応溶液に水5mLを加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル(8mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(5mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物1(1.6mg、収率82.1%)を得た。
MS m/z (ESI):520.2[M+1]
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.90-7.84(m, 1H), 7.80-7.68(m, 1H), 5.80-5.70(m, 1H), 5.62-5.54(m, 2H), 5.44-5.32(m, 2H), 5.28-5.10(m, 2H), 3.40-3.15(m, 3H), 2.44(s, 3H), 2.23(t, 1H), 2.06-1.75(m, 2H), 1.68-1.56(m, 1H), 1.22-1.18(m, 2H), 1.04-0.98(m, 2H), 0.89(t, 3H).
（実施例２）
(S)-2-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシアセトアミド2-A
(R)-2-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシアセトアミド2-B
Figure 2022511351000036
Figure 2022511351000037
2mLのエタノールおよび0.4mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1bに添加した(4mg、7.53μmol)。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.3mLのN-メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。2-シクロプロピル-2-ヒドロキシ酢酸2a(2.3mg、19.8μmol、特許出願「WO2013106717」に開示された方法に従って調製)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(3mg、22.4μmol)および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(4.3mg、22.4μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で1時間攪拌した。氷水浴を除去し、反応溶液を30℃に加熱し、2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた粗化合物2を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物(2-A: 1.5mg、2-B: 1.5mg)を得た。
MS m/z (ESI):534.0[M+1]。
単一構成を有する化合物2-B(より短い保持時間を有する)UPLC分析:保持時間:1.06分、純度:88%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.37(d, 1H), 7.76(d, 1H), 7.30(s, 1H), 6.51(s, 1H), 5.58-5.56(m, 1H), 5.48(d, 1H), 5.41(s, 2H), 5.32-5.29(m, 2H), 3.60(t, 1H), 3.19-3.13(m, 1H), 2.38(s, 3H), 2.20-2.14(m, 1H), 1.98(q, 2H), 1.87-1.83(m, 1H), 1.50-1.40(m, 1H), 1.34-1.28(m, 1H), 0.86(t, 3H), 0.50-0.39(m, 4H).
単一構成を有する化合物2-A(より長い保持時間を有する)UPLC分析:保持時間:1.10分、純度:86%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.35(d, 1H), 7.78(d, 1H), 7.31(s, 1H), 6.52(s, 1H), 5.58-5.53(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.37(d, 1H), 5.32(t, 1H), 3.62(t, 1H), 3.20-3.15(m, 2H), 2.40(s, 3H), 2.25-2.16(m, 1H), 1.98(q, 2H), 1.87-1.82(m, 1H), 1.50-1.40(m, 1H), 1.21-1.14(m, 1H), 0.87(t, 3H), 0.47-0.35(m, 4H).
（実施例３）
(S)-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-3,3,3-トリフルオロ-2-ヒドロキシプロパンアミド3-A
(R)-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-3,3,3-トリフルオロ-2-ヒドロキシプロパンアミド3-B
Figure 2022511351000038
Figure 2022511351000039
2mLのエタノールおよび0.4mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1b(5.0mg、9.41μmol)に添加し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.3mLのN-メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。3,3,3-トリフルオロ-2-ヒドロキシプロピオン酸3a(4.1mg、28.4μmol、供給元: Alfa)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(3.8mg、28.1μmol)および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(5.4mg、28.2μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で10分間攪拌した。氷水浴を除去し、反応溶液を30℃に加熱し、8時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた粗化合物3を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物(1.5mg、1.5mg)を得た。
MS m/z (ESI):561.9[M+1]。
単一構成を有する化合物(より短い保持時間を有する)UPLC分析:保持時間:1.11分、純度:88%(カラム: ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.94(d, 1H), 7.80(d, 1H), 7.32(s, 1H), 7.20(d, 1H), 6.53(s, 1H), 5.61-5.55(m, 1H), 5.45-5.23(m, 3H), 5.15-5.06(m, 1H), 4.66-4.57(m, 1H), 3.18-3.12(m, 1H), 2.40(s, 3H), 2.26-2.20(m, 1H), 2.16-2.08(m, 1H), 2.02-1.94(m, 1H), 1.89-1.82(m, 1H), 1.50-1.40(m, 1H), 0.87(t, 3H).
単一構成を有する化合物(より長い保持時間を有する)UPLC分析:保持時間:1.19分、純度:90%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.97(d, 1H), 7.80(d, 1H), 7.31(s, 1H), 7.16(d, 1H), 6.53(s, 1H), 5.63-5.55(m, 1H), 5.45-5.20(m, 3H), 5.16-5.07(m, 1H), 4.66-4.57(m, 1H), 3.18-3.12(m, 1H), 2.40(s, 3H), 2.22-2.14(m, 1H), 2.04-1.95(m, 2H), 1.89-1.82(m, 1H), 1.50-1.40(m, 1H), 0.87(t, 3H).
（実施例４）
N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-1-ヒドロキシシクロペンタン-1-カルボキサミド4
Figure 2022511351000040
Figure 2022511351000041
1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1b(3.0mg、5.64μmol)に添加し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン1滴を滴下し、反応溶液を透明になるまで攪拌した。1-水酸基-シクロペンタンカルボン酸4a(2.2mg、16.9μmol、特許出願「WO2013106717」に開示された方法に従って調製)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(4.7mg、16.9μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で1時間攪拌した。反応溶液に水5mLを加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(5mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物4(2.5mg、収率80.9%)を得た。
MS m/z (ESI):548.0[M+1]。
1核磁気共鳴(400MHz、CDCl3):δ 7.73～7.62(m、2H)、5.75～5.62(m、1H)、5.46～5.32(m、2H)、5.26～5.10(m、1H)、3.30～3.10(m、1H)、2.43(s、3H)、2.28～2.20(m、2H)、2.08～1.84(m、8H)、1.69～1.58(m、2H)、1.04～1.00(m、2H)、0.89(t、3H)。
（実施例５）
N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-1-(ヒドロキシメチル)シクロプロパン-1-カルボキサミド5
Figure 2022511351000042
Figure 2022511351000043
1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1b(2.0mg、3.76μmol)に添加し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン1滴を滴下し、反応溶液を透明になるまで攪拌した。1-(ヒドロキシメチル)-シクロペンタンカルボン酸5a(0.87mg、7.5μmol、特許出願「WO201396771」に開示された方法に従って調製)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(2mg、7.24μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で2時間攪拌した。反応溶液に水5mLを加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル(8mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(5mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物5(1.0mg、収率50%)を得た。
MS m/z (ESI):533.9[M+1]。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.07(s, 1H), 7.23-7.18(m, 2H), 6.71-6.64(m, 1H), 6.55-6.51(m, 1H), 5.36-5.27(m, 2H), 4.67-4.61(m, 2H), 3.53-3.48(m, 1H), 3.30-3.22(m, 2H), 3.18-3.13(m, 1H), 2.71-2.61(m, 2H), 2.35-2.28(m, 1H), 2.04-1.91(m, 4H), 1.53-1.40(m, 3H), 0.91-0.75(m, 4H).
（実施例６）
N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-1-(ヒドロキシメチル)シクロブタン-1-カルボキサミド6
Figure 2022511351000044
Figure 2022511351000045
1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1b(3.0mg、5.64μmol)に添加し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン1滴を滴下し、反応溶液を透明になるまで攪拌した。「Journal of American Chemical Society, 2014, vol.136, #22, p.8138-8142」に開示されている公知方法に従って調製した1-(ヒドロキシメチル)シクロブタン-1-カルボン酸6a(2.2mg, 16.9μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(4.7mg, 16.9μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で1時間攪拌した。反応溶液に水5mLを加えて反応を停止させ、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(5mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物6(2.1mg、収率67.9%)を得た。
MS m/z (ESI):548.0[M+1]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.85-7.62(m, 1H), 6.88(br,1H), 5.87-5.48(m,2H), 5.47-5.33(m,1H), 5.31-5.06(m,1H), 4.25-3.91(m, 2H), 3.25(br, 1H), 2.60-2.32(m, 3H), 2.23(t, 1H), 2.15-1.95(m, 3H), 1.70-1.56(m, 2H), 1.41-1.17(m, 9H), 1.03(s, 1H), 0.95-0.80(m, 2H).
（実施例７）
N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-1-ヒドロキシシクロブタン-1-カルボキサミド7
Figure 2022511351000046
Figure 2022511351000047
2mLのエタノールおよび0.4mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1b(3.0mg、5.64μmol)に添加し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.3mLのN-メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。1-ヒドロキシシクロブタンカルボン酸7a(2.0mg、17.22μmol、供給元: PharmaBlock Sciences)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(2.3mg、17.0μmol)および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(3.2mg、16.7μmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応液を0～5℃で10分間攪拌した。氷水浴を除去し、反応溶液を室温で2時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物7(2.5mg、収率83.1%)を得た。
MS m/z (ESI):534.0[M+1]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.28(d, 1H), 7.75(d, 1H), 7.29(s, 1H), 6.51(s, 1H), 6.12(s, 1H), 5.59-5.51(m, 1H), 5.41(s, 2H), 5.20-5.01(m, 2H), 3.27-3.17(m, 1H), 3.15-3.05(m, 1H), 2.71-2.63(m, 1H), 2.37(s, 3H), 2.12-2.05(m, 1H), 2.03-1.94(m, 2H), 1.92-1.78(m, 4H), 1.50-1.42(m, 1H), 0.90-0.83(m、4H)。
（実施例８）
(((S)-7-ベンジル-20-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,5,8,11,14-ペンタアザイコシル)-オキシ)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)
Figure 2022511351000048
Figure 2022511351000049
ステップ1
ベンジル1-(((2-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)アミノ)アセトアミド)メトキシ)シクロプロパン-1-カルボン酸8c
特許出願「US2005/20645」に開示された方法に従って調製されたベンジル1-ヒドロキシシクロプロパン-1-カルボキシル化8a(104mg、0.54mmol)および(2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)アミノ)アセトアミド)酢酸メチル8b(100mg、0.27mmol、特許出願「CN105829346A」に開示された方法に従って調製された)を反応フラスコに添加し、続いて5mLのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いてカリウムtert-ブトキシド(61mg、0.54mmol)を添加した。氷水浴を除去し、反応溶液を室温まで温め、10分間撹拌した。反応溶液に氷水20mLを加え、酢酸エチル(5mL×2)およびクロロホルム(5mL×5)で抽出した。有機相を合わせ、濃縮した。得られた残渣を3mLの1,4-ジオキサンに溶解した。水0.6mL、重炭酸ナトリウム(27mg、0.32mmol)および9-フルオレンメチルクロロホルメート(70mg、0.27mmol)を加え、反応溶液を室温で1時間撹拌した。水20mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(8mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物8c(100mg、収率73.6%)を得た。
MS m/z (ESI):501.0[M+1]
ステップ2
1-(2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)アミノ)アセトアミド)メトキシ)シクロプロパン-1-カルボン酸8d
8c(50mg、0.10mmol)をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒(V:V=2:1)3mLに溶解した後、パラジウム炭素(25mg、含有量:10%)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で1時間撹拌した。セライトでろ過し、フィルタケークをテトラヒドロフランで洗浄した。ろ液を濃縮して、表題生成物8d(41mg、収率:100%)を得た。
MS m/z (ESI):411.0[M+1]。
ステップ3
カルバミン酸(1‐((9H‐フルオレン‐9‐イル)メチル(2‐((1S,9S)‐9‐エチル‐5‐フルオロ‐9‐ヒドロキシ‐4‐メチル‐10,13‐ジオキソ‐2,3,9,10,13,15‐ヘキサヒドロ‐1H,12H‐ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2‐b]キノリン‐1‐イル)カルバモイル)メチル))アミノ)‐2‐オキソエチル)8e
1b(7mg、0.013mmol)を反応フラスコに添加し、続いて1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.5mLのN, N-塩化中の1滴のトリエチルアミン8d(7mg、0.017mmol)、および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(7mg、0.026mmol)を添加し、反応溶液を氷浴中で35分間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(5mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、標記生成物8e(8.5mg、収率78.0%)を得た。
MS m/z (ESI):828.0[M+1]。
ステップ4
1-((2-アミノアセトアミド)-メトキシ基)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)シクロプロパン-1-カルボキサミド8f
8e(4mg、4.84μmol)を0.2mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.1mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で2時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物8f(2.9mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):606.0[M+1]。
ステップ5
(((S)-7-ベンジル-20-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,5,8,11,14-ペンタアザイコシル)-オキシ)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)
粗化合物8f(2.9mg、4.84μmol)を0.5mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。(S)-2-(-2-(-2-(-2,5-ジオキソ-1H-ピロル-1-イル)ヘキサンアミド)アセトアミド)-3-フェニルプロピオン酸8g(2.7mg、5.80μmol、特許出願「EP2907824」に開示されている方法に従って調製)をN,N-ジメチルホルムアミド0.3mL中に加え、4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(2.7mg、9.67μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で30分間撹拌した。氷浴を除去し、反応溶液を室温まで温め、15分間撹拌した。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4 OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物8(2mg、収率39.0%)を得た。
MS m/z (ESI):1060.0[M+1]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.01(d, 1H), 8.77(t, 1H), 8.21(t, 1H), 8.08-7.92(m, 2H), 7.73(d, 1H), 7.28(s, 1H), 7.24-7.07(m, 4H), 6.98(s, 1H), 6.50(s, 1H), 5.61(q, 1H), 5.40(s, 2H), 5.32(t, 1H), 5.12(q, 2H), 4.62(t, 1H), 4.52(t, 1H), 4.40-4.32(m, 1H), 3.73-3.47(m, 8H), 3.16-3.04(m, 2H), 2.89(dd, 2.69～2.55(m,2H),2.37～2.23(m,4H),2.12～1.93(m,4H),1.90～1.74(m,2H),1.52～1.38(m,4H),1.33～1.11(m,5H),0.91～0.81(m,4H)。
（実施例９）
N-(((2R,10S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1
N-(((2S,10S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサアミド9-B
Figure 2022511351000050
Figure 2022511351000051
ステップ1
2-シクロプロピル-2-ヒドロキシ酢酸ベンジル9a
2a(1.3g、11.2mmol、特許出願「WO2013/106717」に開示される方法に従って調製)を50mLのアセトニトリルに溶解し、次いで、炭酸カリウム(6.18g、44.8mmol)、臭化ベンジル(1.33mL、11.2mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム(413mg、1.1mmol)を連続的に添加した。反応溶液を室温で48時間撹拌し、セライトを通して濾過した。フィルタケークを酢酸エチル(10mL)ですすぎ、ろ液を合わせ、減圧濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物9a(2g、収率86.9%)を得た。
ステップ2
ベンジル10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート9b
9a(120.9mg、0.586mmol)および8b(180mg、0.489mmol)を反応フラスコに添加し、続いて4mLのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。カリウムtert-ブトキシド(109mg、0.98mmol)を添加し、氷水浴を除去した。反応溶液を室温まで温め、40分間撹拌した。反応溶液に氷水10mLを加え、酢酸エチル(20mL×2)およびクロロホルム(10mL×5)で抽出した。有機相を合わせ、濃縮した。得られた残渣をジオキサン4mLに溶解し、水2mL、重炭酸ナトリウム(49.2mg、0.586mmol)および9-フルオレンメチルクロロホルメート(126mg、0.49mmol)を加え、反応溶液を室温で2時間撹拌した。水20mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物9b(48mg、収率19%)を得た。
MS m/z (ESI):515.0[M+1]。
ステップ3
10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-酸9c
9b(20mg、0.038mmol)をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒(V:V=2:1)4.5mLに溶解し、続いてパラジウム炭素(12mg、含有量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で1時間撹拌した。セライトろ過後、フィルタケークを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を濃縮して粗表題生成物9c(13mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):424.9[M+1]。
ステップ4
カルバミン酸(9H‐フルオレン‐9‐イル)メチル(2‐((1‐シクロプロピル‐2‐((1S,9S)‐9‐エチル‐5‐フルオロ‐9‐ヒドロキシ‐4‐メチル‐10,13‐ジオキソ‐2,3,9,10,13,15‐ヘキサヒドロ‐1H,12H‐ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2‐b]キノリン‐1‐イル)アミノ)‐2‐オキソエトキシ)メチル))‐2‐オキソエチル)9d
1b(10mg、18.8μmol)を反応フラスコに添加し、続いて1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。1滴のトリエチルアミン、粗化合物9c(13mg、30.6μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(16.9mg、61.2μmol)を添加し、反応溶液を氷浴中で40分間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物9d(19mg、収率73.6%)を得た。
MS m/z (ESI):842.1[M+1]。
ステップ5
2-((2-アミノジメチルアセトアミド)メトキシ)-2-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)ジメチルアセトアミド9e
9d(19mg、22.6μmol)を2mLのジクロロメタンに溶解し、続いて1mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で2時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。1mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンを残渣に加えてパルプにし、固体を保持するために、上清を目立たせた後に注いだ。固体残渣を、乾固するまでオイルポンプにより減圧下で濃縮し、粗表題生成物9e(17mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):638.0[M+18]。
ステップ6
N-(((2R,10S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1
N-(((2S,10S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサアミド9-B
粗化合物9e(13.9mg、22.4μmol)を0.6mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.3mLのN, N‐塩化中の8g(21.2mg,44.8μmol)、および4‐(4,6‐ジメトキシ‐1,3,5‐トリアジン‐2‐イル)‐4‐メチルモルホリニウムクロリド(18.5mg,67.3μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で10分間撹拌した。氷浴を除去し、反応溶液を室温まで昇温し、1時間撹拌して化合物9を得た。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物(9-A: 2.4mg、9-B: 1.7mg)を得た。
MS m/z (ESI):1074.4[M+1]。
単一構成(より短い保持時間を有する)を有する化合物9-A:
UPLC分析:保持時間:1.14分、純度:85%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.60(t, 1H), 8.51-8.49(d, 1H), 8.32-8.24(m, 1H), 8.13-8.02(m, 2H), 8.02-7.96(m, 1H), 7.82-7.75(m, 1H), 7.31(s, 1H), 7.26-7.15(m, 4H), 6.99(s, 1H), 6.55-6.48(m, 1H), 5.65-5.54(m, 1H), 5.41(s, 2H), 5.35-5.15(m, 3H), 4.74-4.62(m, 1H), 4.54-4.40(m, 2H), 3.76-3.64(3.62-3.48(m, 2H), 3.20-3.48(m, 2H), 3.04-2.94(m, 2H), 3.04-2.62(m, 1H), 2.45-2.30(m, 3H), 2.25-2.15(m, 2H), 2.15-2.04(m, 2H), 1.93-1.78(m, 2H), 1.52-1.39(m, 3H), 1.34-1.12(m, 5H), 0。
単一構成(より長い保持時間を有する)を有する化合物9-B:
UPLC分析:保持時間:1.16分、純度:89%(カラム: ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルのNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.68-8.60(m, 1H), 8.58-8.50(m, 1H), 8.32-8.24(m, 1H), 8.13-8.02(m, 2H), 8.02-7.94(m, 1H), 7.82-7.75(m, 1H), 7.31(s, 1H), 7.26-7.13(m, 3H), 6.99(s, 1H), 6.55-6.48(m, 1H), 5.60-5.50(m, 1H), 5.41(s, 2H), 5.35-5.15(m, 2H), 4.78-4.68(m, 1H), 4.60-4.40(m, 2H), 3.76- 3.58(m, 4H), 3.58-3.48(m, 1H), 3.20-3.48(m, 2H), 3.08-2.97(m, 2H), 2.80-2.72(m, 2H), 2.45-2.30(m, 3H), 2.25-2.13(m, 2H), 2.03-1.94(m, 2H), 1.91-1.78(m, 2H), 1.52-1.39(m, 3H), 1.34-1.12(m, 4H), 0.91-0.79(。
（実施例１０）
N-(((2S,10S)-10-ベンジル-2-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)-1,1,1-トリフルオロ-6,9,12,15-テトラオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-
N-(((2R,10S)-10-ベンジル-2)-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)-1,1,1-トリフルオロ-6,9,12,15-テトラオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサアミド10-B
Figure 2022511351000052
Figure 2022511351000053
ステップ1
ベンジル3,3,3-トリフルオロ-2-ヒドロキシプロパン酸10a
3a(1.80g、12.5mmol)を100mLのアセトニトリルに溶解し、次いで炭酸カリウム(5.17g、37.5mmol)、臭化ベンジル(4.48mL、37.5mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム(231mg、0.63mmol)を連続的に添加した。反応溶液を60℃に加熱し、5時間撹拌した。反応溶液を室温に冷却し、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物10a(980mg、収率33.5%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.43-7.36(m, 5H), 5.34(s, 2H), 4.53(s, 1H), 3.44(s, 1H).
ステップ2
ベンジル1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-10-(トリフルオロメチル)-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート10b
8b(63mg、0.17mmol)および10a(80mg、0.34mmol)を反応フラスコに添加し、続いて3mLのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。カリウムtert-ブトキシド(38mg、0.34mmol)を添加し、氷水浴を除去した。反応溶液を室温まで温め、20分間撹拌した。反応溶液に氷水10mLを加え、酢酸エチル(20mL×2)およびクロロホルム(10mL×5)で抽出した。有機相を合わせ、濃縮し、得られた残渣を2mLのジオキサンに溶解した。水0.4mL、重炭酸ナトリウム(19mg、0.23mmol)および9-フルオレンメチルクロロホルメート(49mg、0.19mmol)を加え、反応溶液を室温で1時間撹拌した。水20mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物10b(51mg、収率55.3%)を得た。
MS m/z (ESI):559.9[M+18]。
ステップ3
1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-10-(トリフルオロメチル)-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-酸10c
10b(15mg、0.28mmol)をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒(V:V=2:1)3mLに溶解した後、パラジウム炭素(15mg、含有量:10%)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で1時間撹拌した。セライトでろ過し、フィルタケークをテトラヒドロフランで洗浄した。ろ液を濃縮して、粗表題生成物10c(13mg)を得た。
MS m/z (ESI):452.9[M+1]。
ステップ4
((((3-(9H-フルオレン-9)イル-9-エチル-9-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,1-トリフルオロ-3-オキソプロパン-2-イル)オキシ)メチル)-2-オキソエチルカルバメート10d)-2-オキソエチルカルバメート10d
1b(10mg、18.8μmol)を反応フラスコに添加し、続いて1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。N, N-塩化0.5mL中のトリエチルアミン10c(13mg、28.7μmol)1滴、および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(11mg、39.7μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で30分間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物10d(16mg、収率97.8%)を得た。
MS m/z (ESI):870.0[M+1]。
ステップ5
2-((2-アミノアセトアミド)メトキシ)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-3,3,3-トリフルオロプロパンアミド10e
10d(16mg、18.4μmol)を0.6mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.3mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で2時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。残渣にn-ヘキサン3mLを加えてパルプ化し、しばらく放置した後、上清を注ぎ出して固体を保持し、3回繰り返した。固体残渣を、乾固するまでオイルポンプにより減圧下で濃縮し、粗表題生成物10e(12mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):647.9[M+1]。
ステップ6
N-(((2S,10S)-10-ベンジル-2-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)-1,1,1-トリフルオロ-6,9,12,15-テトラオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-
N-(((2R,10S)-10-ベンジル-2)-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)-1,1,1-トリフルオロ-6,9,12,15-テトラオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサアミド10-B
粗化合物10e(12mg、18.5μmol)を1.0mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.3mLのN, N-塩化中の8g(14mg,29.6μmol)、および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(15mg,54.2μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で30分間撹拌した。氷浴を除去し、反応溶液を室温まで昇温し、1時間撹拌して化合物10を得た。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物(2.7mg、2.6mg)を得た。
MS m/z (ESI):1102.0[M+1]。
単一構成を有する化合物(より短い保持時間を有する):
UPLC分析:保持時間:1.18分、純度:91%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.97(d, 1H), 8.85-8.76(m, 1H), 8.37-8.27(m, 1H), 8.12-8.02(m, 1H), 8.02-7.95(m, 1H), 7.80(d, 1H), 7.31(s, 1H), 7.26-7.10(m, 4H), 6.99(s, 1H), 6.66(br, 1H), 6.52(s, 1H), 5.65-5.54(m, 1H), 5.41(s, 1H), 5.37-5.25(m, 3H), 5.23-5.13(m, 1H), 4.81-4.68(m, 2H), 4.51-4.41(m、1H)、3.78-3.45(m、6H)、3.21-3.13(m、1H)、3.02-2.93(m、1H)、2.77-2.63(m、2H)、2.45-2.29(m、3H)、2.24-2.05(m、3H)、2.04-1.93(m、5H)、1.90-1.75(m、2H)、1.52-1.38(m、4H)、0.90-0.78(m、5H)。
単一構成(より長い保持時間を有する)を有する化合物:
UPLC分析:保持時間:1.23分、純度:90%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.05(d, 1H), 8.97-8.88(m, 1H), 8.35-8.27(m, 1H), 8.11-8.03(m, 1H), 8.02-7.95(m, 1H), 7.80(d, 1H), 7.34(s, 1H), 7.29-7.13(m, 4H), 6.99(s, 1H), 6.66(br, 1H), 6.54(s, 1H), 5.64-5.55(m, 1H), 5.43(s, 1H), 5.36-5.20(m, 3H), 4.92-4.85(m, 1H), 4.82-4.72(m, 2H), 4.52-4.42(m、1H)、3.77-3.48(m、6H)、3.21-3.14(m、1H)、3.03-2.95(m、1H)、2.79-2.65(m、2H)、2.47-2.28(m、3H)、2.25-2.05(m、3H)、2.05-1.94(m、5H)、1.91-1.76(m、2H)、1.52-1.37(m、4H)、0.92-0.77(m、5H)。
（実施例１１）
(((S)-7-ベンジル-20-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,5,11,14-ペンタアザイコシル)-オキシ)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)シクロブタン-1-
Figure 2022511351000054
Figure 2022511351000055
ステップ1
ベンジル1-(((2-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)アミノ)アセトアミド)メトキシ)シクロブタン-1-カルボン酸11b
ベンジル1-ヒドロキシシクロブタン-カルボキシル化11a(167mg、0.81mmol、「Journal of Medicinal Chemistry, 2013, vol. 56, # 13, p. 5541-5552」に開示されている公知の方法に従って調製した)および8b(150mg、0.41mmol)を反応フラスコに添加し、続いて5mLのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いてカリウムtert-ブトキシド(92mg、0.82mmol)を添加した。氷水浴を除去し、反応溶液を室温まで温め、10分間撹拌した。反応溶液に氷水20mLを加え、酢酸エチル(5mL×2)およびクロロホルム(5mL×5)で抽出した。有機相を合わせ、濃縮し、得られた残渣を3mLのジオキサンに溶解した。水0.6mL、重炭酸ナトリウム(41mg、0.48mmol)および9-フルオレンメチルクロロホルメート(105mg、0.41mmol)を加え、反応溶液を室温で1時間撹拌した。水20mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(8mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物11b(37mg、収率17.6%)を得た。
MS m/z (ESI):514.6[M+1]。
ステップ2
1-(2-((((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)アミノ)アセトアミド)メトキシ)シクロブタン-1-カルボン酸11c
11b(37mg、71.9μmol)をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒(V:V=2:1)3mLに溶解し、炭素上パラジウム(15mg、含有量:10%)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で2時間撹拌した。セライトでろ過し、フィルタケークをテトラヒドロフランで洗浄した。ろ液を濃縮して、表題生成物11c(35mg、収率:82%)を得、これを次の工程で直接使用した。
ステップ3
カルバミン酸(1‐((9H‐フルオレン‐9‐イル)メチル(2‐((1S,9S)‐9‐エチル‐5‐フルオロ‐9‐ヒドロキシ‐4‐メチル‐10,13‐ジオキソ‐2,3,9,10,13,15‐ヘキサヒドロ‐1H,12H‐ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2‐b]キノリン‐1‐イル)カルバモイル)メチル))メチル)-2‐オキソエチル)11d
1b(10mg、0.018mmol)を反応フラスコに添加し、続いて1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.5mLのN, N-塩化中の1滴のトリエチルアミン、11c(13mg、0.031mmol)、および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(25mg、0.091mmol)を添加し、反応溶液を氷浴中で40分間撹拌した。水8mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(5mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(8mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Aを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物11d(19mg、収率73.9%)を得た。
MS m/z (ESI):842.3[M+1]。
ステップ4
1-((2-アミノアセトアミド)-メトキシ基)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)シクロブタン-1-カルボキサミド11e
11d(19mg、22.6μmol)を2mLのジクロロメタンに溶解し、続いて1mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1.5時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。1mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。4mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物11e(15mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
ステップ5
(((S)-7-ベンジル-20-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロル-1-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,5,11,14-ペンタアザイコシル)-オキシ)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)シクロブタン-1-
粗化合物11e(2mg、3.22μmol)を0.5mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.3mLのN, N‐塩化中の8g(1.5mg,3.17μmol)、および4‐(4,6‐ジメトキシ‐1,3,5‐トリアジン‐2‐イル)‐4‐メチルモルホリニウムクロリド(2.7mg,9.67μmol)を加え、反応溶液を室温で30分間撹拌した。反応溶液をオイルポンプによるロータリーエバポレーションにより濃縮乾固し、DMFを除去した。残渣をDCMに溶解し、さらさらレイヤークロマトグラフィ(展開溶媒極性: DCM/MeOH=10/1)により2回精製し、標題生成物11(1mg、収率: 28.8%)を得た。
MS m/z (ESI):1073.6[M+1]。
1核磁気共鳴(400MHz、CDCl3):δ 8.70～8.19(m、1H)、8.13～7.91(m、3H)、7.79～7.71(d、1H)、7.29(s、1H)、6.25～7.09(m、1H)、6.55～6.47(m、1H)、5.64～5.54(m、2H)、5.35～5.27(t、2H)、5.17～5.10(m)2H)、4.60-4.51(m、1H)、4.51-4.35(m、2H)、3.93-3。78(m、3H)、3.71-3.59(m、3H)、3.01-2.88(m、3H)、2.70-2.64(m、2H)、2.44-2.30(m、3H)、2.28-2.14(m、3H)、2.11-1.92(m、6H)、1.90-1.76(m、3H)、1.51-1.39(m、4H)、0.92-0.75(m、6H)。
（実施例１２）
(S)-3-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシプロパンアミド12-A
(R)-3-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシプロパンアミド12-B
Figure 2022511351000056
Figure 2022511351000057
ステップ1
3-シクロプロピル-2-ヒドロキシプロパン酸12b
12a(0.5g、3.87mmol、供給元: Adamas)を水と酢酸の混合溶媒(V:V=4:1)35mLに溶解し、氷水浴中で0～5℃に冷却した。亜硝酸ナトリウムの2M水溶液(0.53g、7.74mmol)を滴下し、反応溶液を室温まで温め、3時間撹拌した。固体塩化ナトリウムを反応溶液に加えて水相を飽和させた。溶液を酢酸エチル(8mL×8)で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を濃縮して、表題生成物12b(0.45g、収率: 89.3%)を得た。
ステップ2
(S)-3-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシプロパンアミド12-A
(R)-3-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシプロパンアミド12-B
1.5mLのエタノールおよび1.5mLのN, N-ジメチルホルムアミドを1b(45mg、0.085mmol)に添加した。溶液をアルゴンで3回パージした。0.1mLのN-メチルモルホリンを滴下し、反応溶液を透明になるまで撹拌した。12b(90mg、0.691mmol)、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(34mg、0.251mmol)および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(49mg、0.256mmol)を反応溶液に連続的に添加した。添加終了後、反応溶液を室温で3時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、得られた粗化合物12を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: Sharpsil-T C18 5μm 21.2×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/min)により精製し、表題生成物(7mg、15mg)を得た。
MS m/z (ESI):547.9[M+1]。
単一構成を有する化合物(より短い保持時間を有する)UPLC分析:保持時間:1.345分、純度:72%(カラム: ZORBAX Ecliphase Plus C18 1.8μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.42(d, 1H), 7.78(d, 1H), 7.30(s, 1H), 6.51(s, 1H), 5.60-5.50(m, 2H), 5.42(s, 1H), 5.19(q, 2H), 4.02-4.00(m, 1H), 3.21-3.11(m, 2H), 2.39(s, 3H), 2.21-2.07(m, 2H), 2.05-1.95(m, 1H), 1.92-1.68(m, 4H), 1.53-1.41(m, 1H),0.87(t, 3H), 0.48-0.34(m, 2H), 0.14-0.01(m, 2H).
単一構成を有する化合物(より長い保持時間を有する)UPLC分析:保持時間:1.399分、純度:88%(カラム: ZORBAX Ecliphase Plus C18 1.8μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.36(d, 1H), 7.77(d, 1H), 7.31(s, 1H), 6.51(s, 1H), 5.58-5.51(m, 1H), 5.48(d, 1H), 5.42(s, 1H),5.20(q, 2H), 4.09-4.02(m, 1H), 3.22-3.11(m, 2H), 2.39(s, 3H), 2.27-2.06(m, 2H), 2.05-1.95(m, 1H), 1.93-1.81(m, 2H), 1.65-1.43(m, 2H), 1.32-1.21(m, 1H), 0.87(t, 3H), 0. 48-0.33(m、2H)、0.14～0.01(m、2H)。
（実施例１３）
（参考例）
N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)-2-ヒドロキシアセトアミド
Figure 2022511351000058
標題化合物13を、特許出願EP2907824A1の記載の147頁の実施例76に開示された方法に従って調製した。
（実施例１４）
N-(((2R,10S)-10-ベンジル-2-(シクロプロピルメチル)-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-
N-(((2S,10S)-10-ベンジル-2-(シクロプロピルメチル)-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサアミド14-B
Figure 2022511351000059
Figure 2022511351000060
ステップ1
3-シクロプロピル-2-ヒドロキシプロパン酸ベンジル14a
12b(200mg、1.54mmol)を20mLのアセトニトリルに溶解し、次いで、炭酸カリウム(1.06g、7.68mmol)、臭化ベンジル(0.16mL、1.34mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム(28mg、0.07mmol)を連続的に添加した。反応溶液を室温で48時間撹拌し、セライトを通して濾過した。フィルタケークを酢酸エチル(10mL)ですすぎ、ろ液を合わせ、減圧濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物14a(140mg、収率41.3%)を得た。
ステップ2
ベンジル10-(シクロプロピルメチル)-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート14b
14a(94mg、0.427mmol)および8b(130mg、0.353mmol)を反応フラスコに添加し、続いて10mLのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いてカリウムtert-ブトキシド(79mg、0.704mmol)を添加した。氷水浴を除去し、反応溶液を室温まで温め、10分間撹拌した。反応溶液に氷水20mLを加え、酢酸エチル(10mL×4)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物14b(50mg、収率26.8%)を得た。
MS m/z (ESI):529.2[M+1]。
ステップ3
10-(シクロプロピルメチル)-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-酸14c
14b(27mg、0.051mmol)を酢酸エチル3mLに溶解し、続いて炭素上パラジウム(7mg、含有量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で1時間撹拌した。セライトろ過後、フィルタケークを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を濃縮して粗表題生成物14c(23mg)を得、これを精製することなく次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):439.1[M+1]。
ステップ4
(((3-9H-フルオレニル)-9-メチル)-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1-オキソプロパン-2-イル)オキシ)メチル)-2-オキソエチル)カルバメート14d
1b(22mg、42.38μmol)を反応フラスコに添加し、続いて3mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン(4.3mg、42.49μmol)を滴下し、次いで粗化合物14c(23mg、51.1μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(17.6mg、63.6μmol)を加えた。反応溶液を氷浴中で40分間撹拌した。水15mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(8mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物14d(29mg、収率79.9%)を得た。
MS m/z (ESI):856.1[M+1]。
ステップ5
2-((2-アミノアセトアミド)メトキシ)-3-シクロプロピル-N-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)プロパンアミド14e
14d(29mg、33.9μmol)を0.8mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.4mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1.5時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。1mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。残渣にn-ヘキサン3mLを加えてパルプ化し、しばらく放置した後、上清を注ぎ出し、3回繰り返した。残渣を、乾固するまでオイルポンプにより減圧下で濃縮し、粗表題生成物14e(22mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):634.1[M+1]。
ステップ6
N-(((2R,10S)-10-ベンジル-2-(シクロプロピルメチル)-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-
N-(((2S,10S)-10-ベンジル-2-(シクロプロピルメチル)-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8,11,14-テトラアザヘキサデカン-16-イル)-6-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)ヘキサアミド14-B
粗化合物14e(22mg、33.9μmol)を2.5mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。8g(24mg、50.8μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(14mg、50.6μmol)を連続的に添加した。氷水浴を除去し、反応溶液を室温まで昇温し、1時間撹拌して化合物14を得た。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4 OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製し、標題生成物(2mg、2mg)を得た。
MS m/z (ESI):1088.4[M+1]。
単一構成を有する化合物(より短い保持時間を有する):
UPLC分析:保持時間:1.18分、純度:88%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5ミリモルNH4 OAc)、B-アセトニトリル)。
単一構成(より長い保持時間を有する)を有する化合物:
UPLC分析:保持時間:1.23分、純度:96%(カラム:ACQUITY UPLC BEHC18 1.7μm 2.1×50mm、移動相:A-水(5mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル)。
（実施例１５）
1-((S)-9-ベンジル-22-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-5,8,11,14,17-ペンタオキソ-2-オキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザドコシル)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3,4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル
Figure 2022511351000061
Figure 2022511351000062
ステップ1
ベンジル1-(10-(9H-フルオレン-9-イル)-5,8-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザデシル)シクロプロパン-1-カルボン酸15b
8b(500mg、1.35mmol)を反応フラスコに添加し、続いて6mLのテトラヒドロフランを添加した。ベンジル1-ヒドロキシメチルシクロプロパン-1-カルボキシル化15a(233mg、1.13mmol;特許出願「EP2862856A1」の記載の262頁の実施例22-2に開示された方法に従って調製)を反応フラスコに添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いて水素化ナトリウム(54mg、1.35mmol)を添加した。氷水浴を除去し、反応溶液を室温まで温め、40分間撹拌した。反応溶液を0℃に冷却し、これに20mLの氷水を加えた。溶液を酢酸エチル(5mL×2)およびクロロホルム(5mL×5)で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物15b(15mg、収率2.5%)を得た。
MS m/z (ESI):515.2[M+1]。
ステップ2
1-(10-(9H-フルオレン-9-イル)-5,8-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザデシル)シクロプロパン-1-カルボン酸15c
15b(15mg、0.029mmol)を2mLの酢酸エチルに溶解し、続いてパラジウム炭素(3mg、含有量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で4.5時間撹拌した。セライトろ過後、フィルタケークを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を濃縮して、表題生成物15c(11mg、収率:89%)を得た。
MS m/z (ESI):425.2[M+1]。
ステップ3
カルバミン酸(1‐((9H‐フルオレン‐9‐イル)メチル(2‐((1S,9S)‐9‐エチル‐5‐フルオロ‐9‐ヒドロキシ‐4‐メチル‐10,13‐ジオキソ‐2,3,9,10,13,15‐ヘキサヒドロ‐1H,12H‐ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2‐b]キノリン‐1‐イル)カルバモイル)メトキシ)メチル))-2‐オキソエチル)15d
1b(10mg、0.021mmol)を反応フラスコに添加し、続いて1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。1滴のトリエチルアミン、15c(11mg、0.026mmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(10.7mg、0.039mmol)を添加した。添加終了後、反応溶液を室温で60分間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(5mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物15d(19mg、収率87.0%)を得た。
MS m/z (ESI):842.2[M+1]。
ステップ4
1-(((2-アミノアセトアミド)メチル)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)シクロプロパン-1-カルボキサミド15e
15d(19mg、22.56μmol)を2mLのジクロロメタンに溶解し、続いて1mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1.5時間撹拌した。反応液を0℃で減圧濃縮し、トルエン1mLを加え、減圧濃縮し、2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物15e(13.9mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):620.1[M+1]。
ステップ5
1-((S)-9-ベンジル-22-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-5,8,11,14,17-ペンタオキソ-2-オキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザドコシル)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3,4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル
粗化合物15e(13.9mg、22.4μmol)を1mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。8g(15.8mg、33.4μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(9.3mg、33.6μmol)を加えた。反応溶液を室温まで温め、60分間撹拌した。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物15(2.5mg、収率: 10.3%)を得た。
MS m/z (ESI):1074.2[M+1]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.51-8.37(m, 1H), 8.22(t, 1H), 8.14-8.02(m, 2H), 8.011-7.94(m, 1H), 7.82-7.73(m, 1H), 7.29(s, 1H), 7.26-7.10(m, 3H), 6.98(s, 1H), 6.53-6.47(m, 1H), 5.62-5.50(m, 1H), 5.45-5.36(m, 1H), 5.35-5.23(m, 2H), 5.13-5.02(m, 2H), 4.61-4.50(m, 2H), 4.42-4.28(m, 2H), 3.76- 3.61(m、3H)、3.60-3.45(m、3H)、3.27-3.23(m、1H)、3.20-2.81(m、7H)、2.75-2.61(m、3H)、241-2.28(m、3H)、2.23-2.13(m、2H)、2.11-2.01(m、1H)、2.03-1.94(m、1H)、1.90(s、1H)、1.87-1.74(m、2H)、1.53-1.36(m、3H)、1.29-1.08(m、4H)、0.90-0.68(m、。
（実施例１６）
1-((S)-9-ベンジル-22-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-5,8,11,14,17-ペンタオキソ-2-オキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザドコシル)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル
Figure 2022511351000063
Figure 2022511351000064
ステップ1
1-(ヒドロキシメチル)シクロブタン-1-カルボン酸16b
エチル1-(ヒドロキシメチル)シクロブタンカルボキシレート16a(250mg、1.58mmol、供給元: Alfa)をメタノール(2mL)および水(1mL)に溶解し、続いて水酸化ナトリウム(126mg、3.15mmol)を添加した。反応溶液を40℃に温め、3時間撹拌した。反応液を室温まで冷却し、減圧濃縮して有機溶媒を除去した。溶液をエーテル(10mL)で抽出し、水相を回収した。水相を6N塩酸水溶液でpH3～4に調整し、減圧濃縮して固体を得た。トルエン3mLを加え、溶液を減圧下で濃縮乾固し、時間を3回繰り返した。残渣をオイルポンプで乾燥させて、粗表題生成物16b(206mg)を得、これを精製せずに次の工程で直接使用した。
MS M/z(ESI, NEG):129.2[M-1]。
ステップ2
ベンジル1-(ヒドロキシメチル)シクロブタン-1-カルボン酸16c
粗化合物16b(206mg、1.58mmol)をアセトニトリル(15mL)に溶解し、続いて無水炭酸カリウム(1.09g、7.90mmol)、ヨウ化テトラブチルアンモニウム(29mg、78.51μmol)および臭化ベンジル(216mg、1.26mmol)を添加した。反応溶液を室温で一晩撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物16c(112mg、収率32.1%)を得た。
MS m/z (ESI):221.1[M+1]。
ステップ3
ベンジル1-(10-(9H-フルオレン-9-イル)-5,8-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザデシル)シクロブタン-1-カルボン酸16d
16c(77mg、0.35mmol)および8b(100mg、0.27mmol)を反応フラスコに添加し、続いて3mLのテトラヒドロフランを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いてカリウムtert-ブトキシド(61mg、0.54mmol)を添加した。反応溶液を氷水浴中で10分間撹拌した。反応溶液に氷水20mLを加え、酢酸エチル(5mL)およびクロロホルム(5mL×5)で抽出した。有機相を合わせ、濃縮した。得られた残渣を3mLの1,4-ジオキサンに溶解した。水0.5mL、重炭酸ナトリウム(27mg、0.32mmol)および9-フルオレンメチルクロロホルメート(70mg、0.27mmol)を加え、反応溶液を室温で1時間撹拌した。水20mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物16d(24mg、収率16.7%)を得た。
MS m/z (ESI):551.3[M+23]。
ステップ4
1-(10-(9H-フルオレン-9-イル)-5,8-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザデシル)シクロブタン-1-カルボン酸16e
16d(12mg、22.7μmol)をテトラヒドロフランと酢酸エチルの混合溶媒(V:V=2:1)1.5mLに溶解した後、パラジウム炭素(5mg、含有量:10%)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で2時間撹拌した。セライトろ過後、フィルタケークを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物16e(10mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
ステップ5
(1‐((9H‐フルオレン‐9‐イル)メチル(2‐((1S,9S)‐9‐エチル‐5‐フルオロ‐9‐ヒドロキシ‐4‐メチル‐10,13‐ジオキソ‐2,3,9,10,13,15‐ヘキサヒドロ‐1H,12H‐ベンゾ[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2‐b]キノリン‐1‐イル)カルバモイル)メトキシ)メチル)))-2‐オキソエチル)カルバメート16f
1b(7.5mg、0.014mmol)を反応フラスコに添加し、続いて1mLのN, N-ジメチルホルムアミドを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。0.5mLのN, N-塩化中の1滴のトリエチルアミン、粗化合物16e(10mg)、および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(6mg、0.026mmol)を添加し、反応溶液を氷浴中で30分間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を飽和食塩水(10mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物16f(10.6mg、収率87.8%)を得た。
MS m/z (ESI):856.2[M+1]。
ステップ6
1-(((2-アミノアセトアミド)メチル)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)シクロブタン-1-カルボキサミド16g
16f(10.6mg、12.4μmol)を0.6mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.3mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で2時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して粗表題生成物16g(8mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):634.1[M+1]。
ステップ7
1-((S)-9-ベンジル-22-(2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)-5,8,11,14,17-ペンタオキソ-2-オキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザドコシル)-N-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル
粗化合物16g(8mg)を1mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。8g(8.8mg、18.6μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(5.2mg、18.8μmol)を加えた。反応溶液を室温で30分間撹拌した。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4 OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)により精製し、標題生成物16(1.0mg、収率:7.2%)を得た。
MS m/z (ESI):1088.0[M+1]。
（実施例１７）
(((1r,4r)-N-(1-(1-(9S)-7-ベンジル-N)-N-(1-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)シクロヘキサンプロポキシ)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-17,20,23,26,29,32,35,38,41-ノナオキサ-2,41-5,8,11,14-ペンタアザトリトラセトロンタン-43-イル)-4-(((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-
Figure 2022511351000065
Figure 2022511351000066
ステップ1
Tert-ブチル1-フェニル基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-デカオキサフェントリアコンタン-31-オエート17b
1-フェニル基-2,5,8,11,14,17,20,23,26-ノナオキサオクタコサン-28-オール17a(0.34g、0.67mmol、供給元: Bide Pharmatech Ltd.)を10mLのジクロロメタンに溶解し、次に酸化銀(0.24g、1.01mmol)、tert-ブチルブロモアセテート(0.16g、0.81mmol)およびヨウ化カリウム(0.07g、0.40mmol)を連続的に加えた。反応溶液を室温で3時間撹拌した。反応溶液をろ過し、ろ液を減圧濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物17b(0.42g、収率100%)を得た。
MS m/z (ESI):636.3[M+18]。
ステップ2
Tert-水酸基29-ヒドロキシ-3,6,9,12,15,18,21,24,27-ノナオキサノナコサン-1-オエート17c
17b(417mg、0.67mmol)を15mLのテトラヒドロフランに溶解し、続いてパラジウム炭素(110mg、含量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、60℃まで昇温し、3時間撹拌した。セライトでろ過し、フィルタケークをテトラヒドロフランで洗浄した。ろ液を濃縮して粗表題生成物17c(357mg)を得、これを精製することなく次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):546.2[M+18]。
ステップ3
Tert-ブチル29-アジド-3,6,9,12,15,18,21,24,27-ノナオキサノナコサン-1-オエート17d
17c(357mg、0.675mmol)を10mLのトルエンに溶解し、続いてジフェニルアジドホスフェート(279mg、1.014mmol)および1,8-ジアザビシクロウンデック-7-エン(206mg、1.353mmol)を添加した。反応液をアルゴンで3回パージし、室温で2時間攪拌した後、105℃で19時間攪拌した。反応溶液を室温に冷却し、濃縮した。水20mLを加え、溶液を酢酸エチル(10mL×4)で抽出した。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、粗表題生成物17d(412mg)を得た。
MS m/z (ESI):571.3[M+18]。
ステップ4
Tert-ブチル29-アミノ-3,6,9,12,15,18,21,24,27-ノナオキサノナコサン-1-オエート17e
17d(230mg、0.415mmol)を8mLのテトラヒドロフランに溶解し、続いてパラジウム炭素(58mg、含有量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で2時間撹拌した。セライトでろ過し、フィルタケークをテトラヒドロフランで洗浄した。ろ液を濃縮して粗表題生成物17e(220mg)を得、これを精製することなく次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):528.2[M+1]。
ステップ5
Tert-ブチル1-((1r,4r)-4-((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)メチル)シクロヘキシル)-1-オキソ-5,8,11,14,17,20,23,26,29-ノナオキサ-2-アザフェントリアコンタン-31-オエート17f
(1r,4r)-4-((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)メチル)シクロヘキサン-1-カルボン酸(98.5mg、0.415mmol)をジクロロメタン10mLに溶解し、続いて2-(7-オキサベンゾトリアゾール)-N,N,N',N'-テトラメチル尿素ヘキサフルオロホスフェート(190mg、0.500mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(162mg、1.253mmol)を添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、次いで粗化合物17e(220mg、0.417mmol)を加えた。反応溶液を室温で1時間撹拌した。水15mLを加え、反応溶液をジクロロメタン(8mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(15mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物17f(122mg、収率39.2%)を得た。
MS m/z (ESI):747.2[M+1]。
ステップ6
1-((1r,4r)-4-((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)メチル)シクロヘキシル)-1-オキソ-5,8,11,14,17,20,23,26,29-ノナオキサ-2-アザフェントリアコンタン-31-酸17g
17f(122mg、0.163mmol)を0.8mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.4mLのトリフルオロ酢酸を添加した。反応溶液を室温で1時間撹拌した。ジクロロメタン15mLを加えて反応液を希釈した後、減圧濃縮した。10mLのn-ヘキサンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。10mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮した。n-ヘキサン:エーテル=5:1の混合溶媒10mLをパルプに添加し、時間をpHが7に近づくまで3回繰り返した。溶液を油ポンプで乾固するまで濃縮し、標題生成物17g(98mg、収率86.8%)を得た。
MS m/z (ESI):691.2[M+1]。
ステップ7
2,4-ジメトキシベンジル1-(((2-(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)アミノ)アセトアミド)メトキシ)シクロプロパン-1-カルボン酸17h
8d(164mg、0.40mmol)をジクロロメタン(5mL)に溶解し、次いで2,4-ジメトキシベンジルアルコール(81mg、0.48mmol)、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(115mg、0.60mmol)および4-ジメチルアミノピリジン(5mg、0.041mmol)を加えた。添加終了後、反応溶液を室温で1時間撹拌した。水20mLを加え、振盪後、溶液を分配した。水相をジクロロメタン(8mL×3)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(20mL)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物17h(124mg、収率55.4%)を得た。
MS m/z (ESI):583.1[M+23]。
ステップ8
2,4-ジメトキシベンジル(S)-1-((11-ベンジル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2-オキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザヘプタデカン-17-イル)オキシ)シクロプロパン-1-カルボキシル化17j
17時間(39mg、69.6μmol)を0.6mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.3mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮した。得られた粗生成物を2mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解し、(((9H-フルオレン-9-イル)メトキシ)カルボニル基)グリシルグリシル-L-フェニルアラニン17i(35mg、69.8μmol、特許出願「CN108853514A」の記載の13頁の実施例7-12に開示された方法に従って調製)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(23mg、83.1μmol)を添加した。反応溶液を室温で1時間撹拌した。水10mLを加え、溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bによるさらさらレイヤークロマトグラフィで精製し、標記生成物17j(48mg、収率83.9%)を得た。
MS m/z (ESI):822.0[M+1]。
ステップ9
(S)-1-((11-ベンジル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2-オキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザヘプタデカン-17-イル)オキシ)シクロプロパン-1-カルボン酸17k
17j(48mg、58.4μmol)をジクロロメタン中の3%(v/v)ジクロロ酢酸1.4mLに溶解し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルシラン(21mg、180.6μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で3時間撹拌した。反応溶液を氷浴中で減圧下で濃縮し、有機溶媒の半分を除去した。エーテル5mLを加え、溶液を室温まで自然に温め、パルプ化した。白色固体を沈殿させ、濾過した。フィルタケークを回収し、オイルポンプで乾燥させて、表題生成物17k(33mg、収率84.1%)を得た。
ステップ10
(9H-フルオレン-9-イル)メチル(((1S,9S)-7-ベンジル-1-(9S)-エチル-9-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)-3,6,9,12-テトラオキソ-2,5,8,11-テトラアザトリデカン-13-イル)カルバメート17l
1b(20mg、42.4μmol)を反応フラスコに添加し、続いてジクロロメタン中10%(v/v)メタノール1mLを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン1滴を加え、反応溶液を1bが溶解するまで攪拌した。17k(33mg、49.1μmol)をジクロロメタン中10%(v/v)メタノール1mLに溶解した。得られた溶液を上記反応溶液に滴下した後、4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(17.6mg、63.6μmol)を添加した。反応溶液を室温まで温め、1時間撹拌した。10mLのジクロロメタンおよび5mLの水を添加し、溶液を5分間撹拌し、分配させた。有機相を集めた。水相をジクロロメタン(10mL×3)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bによるさらさらレイヤークロマトグラフィで精製し、標題生成物17l(37mg、収率80.2%)を得た。
MS m/z (ESI):1090.1[M+1]。
ステップ11
(((1r,4r)-N-(1-(1-(9S)-7-ベンジル-N)-N-(1-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,13,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)カルバモイル)シクロヘキサンプロポキシ)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-17,20,23,26,29,32,35,38,41-ノナオキサ-2,41-5,8,11,14-ペンタアザトリトラセトロンタン-43-イル)-4-(((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-
17l(15.5mg、14.23μmol)を0.6mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.3mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1.5時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮し、オイルポンプで乾燥させた。得られた粗生成物を1mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。17g(11mg、15.92μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(6.0mg、21.68μmol)を加えた。反応溶液をアルゴンで3回パージし、室温で30分間撹拌した。反応液を高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物17(16mg、収率: 27.4%)を得た。
MS m/z (ESI):1556.4[M+18]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.98(d, 1H), 8.76(s, 1H), 8.20(br, 1H), 8.12-7.95(m, 3H), 7.93-7.76(m, 2H), 7.75-7.66(m, 2H), 7.24(s, 1H), 7.20-7.05(m, 6H), 6.97(s, 1H), 6.64(br, 1H), 6.55(d, 1H), 6.47(s, 1H), 5.61-5.52(m, 2H), 5.37(s, 1H), 5.33-5.23(m, 2H), 5.18(s, 1H), 5.13(s, 1H), 5.05(s, 1H), 5 .00(s, 1H), 4.65-4.55(m, 2H), 4.53-4.55(m, 2H), 4.28(m, 2H), 3.84(s, 2H), 3.67(d, 3H), 3.60-3.40(m, 33H), 3.18(d, 1H), 3.15-3.08(m, 3H), 2.28(s, 3H), 2.00-1.92(m, 3H), 1.85(s, 2H), 1.82-1.73(m, 2H), 1.68-1.52。
（実施例１８）
((1r,4r)-N-((2R,4r)-N-((1S,9S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15,18-ヘキサオキソ-3,20,23,26,29,32,35,38,41,44-デカオキサ-5,8,11,14,17-ペンタアザヘキサテトラコンタン-46-イル)-4-(((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)
Figure 2022511351000067
Figure 2022511351000068
ステップ1
ベンジル(R)-2-シクロプロピル-2-ヒドロキシ酢酸18a
ベンジル(S)-2-シクロプロピル-2-ヒドロキシ酢酸18b
2a(7.4g、63.7mmol)を200mLのアセトニトリルに溶解し、次いで炭酸カリウム(35g、253.6mmol)、臭化ベンジル(9.3g、54.4mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム(500mg、1.36mmol)を連続的に添加した。反応溶液を室温で16時間撹拌し、セライトを通して濾過した。フィルタケークを酢酸エチル(10mL)ですすぎ、ろ液を合わせ、減圧濃縮した。得られた残渣4.1gを展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、キラル分離をさらに行い、標題生成物18a(1.1g)および18b(1.2g)を得た。
ステップ2
ベンジル(R)-10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート18c
8b(3.1g、8.41mmol)をテトラヒドロフラン(55mL)に溶解し、続いて18a(2.0g、9.70mmol)を添加した。反応溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いてカリウムtert-ブトキシド(1.89g、16.84mmol)を添加した。反応溶液を氷水浴中で10分間撹拌した。酢酸エチル(30mL)および水(20mL)を加え、溶液を分配させた。水相をクロロホルム(30mL×5)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を減圧下で濃縮し、得られた残渣を1,4-ジオキサン(32mL)および水(8mL)に溶解した。炭酸ナトリウム(1.78g、16.79mmol)および9-フルオレンメチルクロロホルメート(2.18g、8.42mmol)を加え、反応溶液を室温で2時間撹拌した。反応溶液に水(30mL)を加え、酢酸エチル(50mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(30mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cによるカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物18c(1.3g、収率30.0%)を得た。
MS m/z (ESI):515.2[M+1]。
ステップ3
(R)-10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-酸18d
18c(1.29g、2.51mmol)を酢酸エチル(15mL)に溶解し、続いてパラジウム炭素(260mg、含有量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で5時間撹拌した。反応液をセライトで濾過し、フィルタケークを酢酸エチル(20mL)およびメタノール(20mL)ですすいだ。ろ液を濃縮して粗表題生成物18d(980mg)を得、これを精製することなく次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):425.1[M+1]。
ステップ4
2,4-ジメトキシベンジル(R)-10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート18e
粗化合物18d(980mg、2.31mmol)をジクロロメタン(15mL)に溶解し、次いで2,4-ジメトキシベンジルアルコール(777mg、4.62mmol)、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(664mg、3.46mmol)および4-ジメチルアミノピリジン(28mg、0.23mmol)を加えた。反応溶液を室温で1時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮し、有機溶媒を除去した。水20mLを加え、溶液を酢酸エチル(50mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(30mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Cによるカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物18e(810mg、収率61.1%)を得た。
MS m/z (ESI):575.0[M+1]。
ステップ5
2,4-ジメトキシベンジル(R)-2-((2-アミノアセトアミド)メトキシ)-2-シクロプロピルアセテート18f
18e(33mg、57.4μmol)を0.6mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.3mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、これを3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して粗表題生成物18f(21mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
ステップ6
2,4-ジメトキシベンジル(11S,19R)-11-ベンジル-19-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,18-ジオキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザイコサン-20-オエート18g
粗化合物18f(21mg、57.4μmol)を3mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。17i(29mg、57.8μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(19mg、68.7μmol)を加えた。反応溶液を室温で1時間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bによるさらさらレイヤークロマトグラフィで精製し、標記生成物18g(37mg、収率77.1%)を得た。
MS m/z (ESI):853.0[M+18]。
ステップ7
(11S,19R)-11-ベンジル-19-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,18-ジオキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザイコサン-20-酸18h
18g(37mg、44.3μmol)をジクロロメタン中の3%(v/v)ジクロロ酢酸1.4mLに溶解し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルシラン(15.4mg、132.4μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で3時間撹拌した。反応溶液を氷浴中で減圧下で濃縮し、有機溶媒の半分を除去した。エーテル5mLを加え、溶液を室温まで自然に温め、パルプ化した。白色固体を沈殿させ、濾過した。フィルタケークを集め、オイルポンプで乾燥して、表題生成物18h(24mg、収率79.1%)を得た。
MS m/z (ESI):708.2[M+23]。
ステップ8
(9H-フルオレン-9-イル)メチル(((2R,10S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8
1b(30mg、63.6μmol)を反応フラスコに添加し、続いてジクロロメタン中10%(v/v)メタノール1mLを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン1滴を加え、反応溶液を1bが溶解するまで攪拌した。18時間(65mg、94.8μmol)をジクロロメタン中10%(v/v)メタノール1mLに溶解し、得られた溶液を上記反応溶液に滴下した後、4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(27mg、97.6μmol)を添加した。反応溶液を室温まで温め、1時間撹拌した。10mLのジクロロメタンおよび5mLの水を添加し、溶液を5分間撹拌し、分配させた。有機相を集めた。水相をジクロロメタン(10mL×3)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bによるさらさらレイヤークロマトグラフィで精製し、標題生成物18i(25mg、収率35.6%)を得た。
MS m/z (ESI):1104.4[M+1]。
ステップ9
(((2-(2-(2-)-アミノアセトアミド)-N-(R)-1-シクロプロピル-2-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-2-オキソエチル)-2-オキソエチル)-3-フェニルプロパンアミド18j
18i(12mg、10.9μmol)を0.6mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.3mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1.5時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物18j(10mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):881.0[M+1]。
ステップ10
((1r,4r)-N-((2R,4r)-N-((1S,9S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15,18-ヘキサオキソ-3,20,23,26,29,32,35,38,41,44-デカオキサ-5,8,11,14,17-ペンタアザヘキサテトラコンタン-46-イル)-4-(((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)
粗化合物18j(10mg)を1mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。17g(8.5mg、12.3μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(4.6mg、16.6μmol)を加えた。反応溶液を室温で30分間撹拌した。反応液をろ過し、高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4 OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物18(9.5mg、収率: 56.2%)を得た。
MS m/z (ESI):1570.2[M+18]。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.77(d, 1H), 8.59-8.55(m, 1H), 8.42(d, 1H), 8.37-8.28(m, 1H), 8.25-8.06(m, 2H), 7.96-7.86(m, 1H), 7.86-7.70(m, 2H), 7.32-7.28(m, 1H), 7.25-7.14(m, 3H), 6.67(m, 1H), 5.96(s, 1H), 5.80-5.72(m, 1H), 5.62-5.52(m, 2H), 5.43-5.30(m, 3H), 5.28-5.17(m, 2H), 5.12-5.08(m, 1H), 4.72-4.35(m、8H)、3.95-3.70(m、13H)、3.35-3.22(m、14H)、2.42-2.32(m、3H)、2.05-1.98(m、4H)、1.88-1.82(m、12H)、1.47-1.39(m、3H)、1.32-1.18(m、11H)、0.90-0.80(m、4H)、0.52-0.37(m、3H)、0.32-0.18(m、2H)。
（実施例１９）
((1r,4r)-N-((2S,10r)-N-((1S,9S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15,18-ヘキサオキソ-3,20,23,26,29,32,35,38,41,44-デカオキサ-5,8,11,14,17-ペンタアザヘキサテトラコンタン-46-イル)-4-(((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)
Figure 2022511351000069
Figure 2022511351000070
ステップ1
ベンジル(S)-10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート19a
18b(252mg、1.22mmol)を反応フラスコに添加し、続いて4mLのジクロロメタンを添加した。反応溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却し、続いてリチウムtert-ブトキシド(98mg、1.22mmol)を添加した。反応溶液を氷水浴中で15分間撹拌し、透明になった。8b(300mg、814.3μmol)を加え、反応溶液を氷水浴中で2.5時間撹拌した。水(10mL)を加え、溶液を分配した。水相をジクロロメタン(8mL×2)で抽出した。有機相を合わせ、水(10mL×1)および飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。ろ液を濃縮して、粗生成物を得た。得られた残渣を展開溶媒系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、表題生成物19a(282mg、収率67.2%)を得た。
ステップ2
(S)-10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-酸19b
19a(280mg、0.554mmol)を8mLの酢酸エチルに溶解し、続いてパラジウム炭素(84mg、含有量:10%、乾燥)を添加した。反応溶液を水素で3回パージし、室温で3時間撹拌した。セライトろ過後、フィルタケークを酢酸エチルで洗浄した。ろ液を濃縮して粗表題生成物19b(230mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
ステップ3
2,4-ジメトキシベンジル(S)-10-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6-ジオキソ-2,9-ジオキサ-4,7-ジアザウンデカン-11-オエート19c
粗化合物19b(230mg、541.8μmol)を7mLのジクロロメタンに溶解し、次いで、2,4-ジメトキシベンジルアルコール(136.7mg、812.7μmol)、1-エチル-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(155mg、808.5μmol)および4-ジメチルアミノピリジン(6.6mg、53.5μmol)を連続的に添加した。反応溶液を室温で16時間撹拌した。反応溶液を10mLのジクロロメタンで希釈し、水(10mL×1)および飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。ろ液を濃縮して、粗生成物を得た。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物19c(159mg、収率51.0%)を得た。
ステップ4
2,4-ジメトキシベンジル(S)-2-((2-アミノアセトアミド)メトキシ)-2-シクロプロピルアセテート19d
19c(60mg、104.4μmol)を1mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.5mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して粗表題生成物19d(21mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
ステップ5
2,4-ジメトキシベンジル(11S,19S)-11-ベンジル-19-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,18-ジオキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザイコサン-20-オエート19e
粗化合物19d(36mg、102.2μmol)を4mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。17i(52mg、103.6μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(34.6mg、125.0μmol)を加えた。反応溶液を室温で1時間撹拌した。水10mLを加え、反応溶液を酢酸エチル(10mL×3)で抽出した。有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物19e(70mg、収率80.2%)を得た。
ステップ6
(11S,19S)-11-ベンジル-19-シクロプロピル-1-(9H-フルオレン-9-イル)-3,6,9,12,15-ペンタオキソ-2,18-ジオキサ-4,7,10,13,16-ペンタアザイコサン-20-酸19f
19e(70mg、83.7μmol)をジクロロメタン中の3%(v/v)ジクロロ酢酸2.5mLに溶解し、溶液を氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルシラン(29mg、249.4μmol)を加え、反応溶液を氷浴中で3時間撹拌した。反応溶液を氷浴中で減圧下で濃縮し、有機溶媒の半分を除去した。エーテル5mLを加え、溶液を室温まで自然に温め、パルプ化した。白色固体を沈殿させ、濾過した。フィルタケークを回収し、オイルポンプで乾燥して、表題生成物19f(57mg、収率99.2%)を得た。
ステップ7
(9H-フルオレン-9-イル)メチル(((2S,10S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1-((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15-ペンタオキソ-3-オキサ-5,8
1b(30mg、63.6μmol)を反応フラスコに添加し、続いてジクロロメタン中10%(v/v)メタノール1mLを添加した。溶液をアルゴンで3回パージし、氷水浴中で0～5℃に冷却した。トリエチルアミン1滴を加え、反応溶液を1bが溶解するまで攪拌した。19f(57mg、83.1μmol)をジクロロメタン中10%(v/v)メタノール1mLに溶解し、得られた溶液を上記反応溶液に滴下した後、4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(26mg、93.9μmol)を添加した。反応溶液を室温まで温め、1時間撹拌した。10mLのジクロロメタンおよび5mLの水を添加し、溶液を5分間撹拌し、分配させた。有機相を集めた。水相をジクロロメタン(10mL×3)で抽出し、有機相を合わせた。有機相を飽和食塩水(10mL×2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。ろ液を減圧下で濃縮した。得られた残渣を展開溶媒系Bを用いたさらさらレイヤークロマトグラフィにより精製し、表題生成物19g(56mg、収率79.8%)を得た。
MS m/z (ESI):1103.1[M+1]
ステップ8
(((2-(2-(2-)-アミノアセトアミド)-N-(S)-1-シクロプロピル-2-(((1S,9S)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13-ジオキソ-2,3,9,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-2-オキソエチル)-2-オキソエチル)-3-フェニルプロパンアミド19h)-2-オキソエチル
19g(4.6mg、4.16μmol)を1.5mLのジクロロメタンに溶解し、続いて0.75mLのジエチルアミンを添加した。反応溶液を室温で1.6時間撹拌した。反応溶液を減圧下で濃縮した。2mLのトルエンを添加し、溶液を減圧下で濃縮し、これを2回繰り返した。3mLのn-ヘキサンをパルプに添加し、ヘキサンの上層を注ぎ、時間を3回繰り返した。溶液を減圧下で濃縮して、粗表題生成物19h(4.0mg)を得、これを精製せずに次の工程に直接使用した。
ステップ9
((1r,4r)-N-((2S,10r)-N-((1S,9S)-10-ベンジル-2-シクロプロピル-1)-9-エチル-5-フルオロ-9-ヒドロキシ-4-メチル-10,13,3,10,13,15-ヘキサヒドロ-1H,12H-水酸基[de]ピラノ[3',4':6,7]インドリジノ[1,2-b]キノリン-1-イル)アミノ)-1,6,9,12,15,18-ヘキサオキソ-3,20,23,26,29,32,35,38,41,44-デカオキサ-5,8,11,14,17-ペンタアザヘキサテトラコンタン-46-イル)-4-(((2,5-ジオキソ-2,5-ジヒドロ-1H-ピロール-1-イル)
粗化合物19h(4.0mg)を1mLのN, N-ジメチルホルムアミドに溶解した。17g(2.9mg、4.2μmol)および4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリド(1.5mg、5.4μmol)を加えた。反応溶液を室温で40分間撹拌した。反応液をろ過し、高速液体クロマトグラフィー(分液条件:カラム: XBridge Prep C18 OBD 5μm 19×250mm;移動層:A-水(10mmol NH4 OAc)、B-アセトニトリル、勾配溶離、流速: 18mL/分)で精製した。対応する画分を集め、減圧下で濃縮して、表題生成物19(2.1mg、収率: 32.4%)を得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.71-8.62(m, 1H), 8.59-8.51(m, 1H), 8.34-8.26(m, 1H), 8.14-8.02(m, 2H), 7.95-7.86(m, 1H), 7.83-7.69(m, 2H), 7.35-7.31(m, 1H), 7.29-7.11(m, 3H), 7.01(s, 1H), 6.72-6.50(m, 3H), 5.59-5.50(m, 2H), 5.42(s, 2H), 5.38-5.18(m, 3H), 4.79-4.69(m, 2H), 4.61-4.42(m, 3H), 3.91(s, 2H), 3.79-3.65(m, 4H), 3.30(m, 4H), 3.26-3.09(m, 2H), 3.26-3.09(m, 5H), 2.81-2.64(m, 3H), 2.42-2.28(m, 3H), 2.24-2.12(m, 2H), 2.05-1.93(m, 4H), 1.89-1.77(m, 2H), 1.72-1.56(m, 3H), 1.53-1.38(m, 3H), 1.34-1.10(, 3H).
（実施例２０）（参考例）
Figure 2022511351000071
標題化合物20は、特許出願CN104755494Aの記載の163頁の実施例58に開示された方法に基づいて調製した。
以下の抗体を、従来の方法、例えば、ベクター構築、真核細胞上記フェクション(例えば、HEK293細胞(Life Technologies Cat. No.11625019)上記フェクション、精製および発現)に従って調製した。
以下は、トラスツズマブの配列である:
L鎖
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号1
重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号2
以下は、ペルツズマブの配列である:
L鎖
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号3
重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号4
以下はB7H3抗体1F9DSの配列である:
L鎖
DTVVTQEPSFSVSPGGTVTLTCGLSSGSVSTSHYPSWYQQTPGQAPRMLIYNTNTRSSGVPDRFSGSILGNKAALTITGAQADDESDYYCAIHVDRDIWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC
配列番号5
重鎖
QVQLVQSGGGVVQPGTSLRLSCAASGFIFSSSAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSARLYASFDYWGQGALVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号6
（実施例２１）
ADC-1
Figure 2022511351000072
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.082mL、0.82μmol)の製剤化水溶液を、37℃で抗体トラスツズマブ(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;2.5ml、9.96mg/ml、0.168μmol)のPBS緩衝水溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、5.0mg/mlに希釈した。2.0mlの溶液を次の反応のために採取した。
化合物10、より短い保持時間(2.1mg,2.02μmol)を有する化合物を、0.10mLのDMSOに溶解し、次いで、2.0mLの上記溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-1の例示的生成物ADC-1のPBS緩衝溶液(5.0mg/mL、1.1mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=5.09。
（実施例２２）
ADC-2
Figure 2022511351000073
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.082mL、0.82μmol)の製剤化水溶液を、37℃で抗体トラスツズマブ(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;2.5ml、9.96mg/ml、0.168μmol)のPBS緩衝水溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、5.0mg/mlに希釈した。2.0mlの溶液を次の反応のために採取した。
化合物10、より長い保持時間を有する化合物(2.1mg,2.02μmol)を0.10mLのDMSOに溶解し、次いで2.0mLの上記溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-1の例示的生成物ADC-2のPBS緩衝溶液(4.95mg/mL、1.1mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=7.39。
（実施例２３）
ADC-3
Figure 2022511351000074
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.082mL、0.82μmol)の製剤化水溶液を、37℃で抗体トラスツズマブ(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;2.5ml、9.96mg/ml、0.168μmol)のPBS緩衝水溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、5.0mg/mlに希釈した。2.0mlの溶液を次の反応のために採取した。
化合物8(2.1mg、2.02μmol)を0.10mLのDMSOに溶解し、次いで2.0mLの上記溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-3の例示的生成物ADC-3のPBS緩衝溶液(5.24mg/mL、1.1mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=7.36。
（実施例２４）
ADC-4
Figure 2022511351000075
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.173mL、1.73μmol)の処方水溶液を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;3.74mL、13.38mg/mL、0.338μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、6.7mg/mlに希釈した。1.3mlの溶液を次の反応のために採取した。
より短い保持時間を有する化合物9-A(1.0mg、0.93μmol)を0.10mLのDMSOに溶解し、次いで1.3mLの上記溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-4Aの例示的生成物ADC-4のPBS緩衝溶液(1.72mg/mL、2.36mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=7.39。
（実施例２５）
ADC-5
Figure 2022511351000076
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.067mL、0.67μmol)の処方水溶液を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;3.0ml、6.70mg/ml、0.136μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、0.614mlの溶液を次の反応のために採取した。
保持時間が短い配合物9は、化合物9-A(0.5mg、0.42μmol)をDMSO0.031mlに溶解した後、上記液0.614mlに添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-4Aの例示的生成物ADC-5のPBS緩衝溶液(3.08mg/mL、0.82mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=3.16。
（実施例２６）
ADC-6
Figure 2022511351000077
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.173mL、1.73μmol)の処方水溶液を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;3.74mL、13.38mg/mL、0.338μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、6.7mg/mlに希釈した。0.75mlの溶液を次の反応のために採取した。
より長い保持時間を有する化合物9は化合物9-B(0.68mg、0.63μmol)をDMSO0.10mlに溶解し、次に上記液0.75mlに添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-4Bの例示的生成物ADC-6のPBS緩衝溶液(1.78mg/mL、1.78mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=3.94。
（実施例２７）
ADC-7
Figure 2022511351000078
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.173mL、1.73μmol)の処方水溶液を、37℃で、抗体ペルツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;5.0ml、10mg/ml、0.338μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、5.0mg/mlに希釈した。1.0mlの溶液を次の反応のために採取した。
化合物8(0.65mg、0.6μmol)を0.1mLのDMSOに溶解し、次いで1.0mLの上記溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-7の例示的生成物ADC-7のPBS緩衝溶液(1.42mg/mL、2.15mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=6.91。
（実施例２８）
ADC-8
Figure 2022511351000079
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.173mL、1.73μmol)の処方水溶液を、37℃で、抗体ペルツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;5.0ml、10mg/ml、0.338μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、5.0mg/mlに希釈した。1.6mlの溶液を次の反応のために採取した。
化合物10、より短い保持時間(1.04mg、1.0μmol)を有する化合物を、0.1mLのDMSOに溶解し、次いで、1.6mLの上記溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-8の例示的生成物ADC-8のPBS緩衝溶液(2.14mg/mL、2.31mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=6.58。
（実施例２９）
ADC-9
Figure 2022511351000080
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(10mM、0.173mL、1.73μmol)の処方水溶液を、37℃で、抗体ペルツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液;5.0ml、10mg/ml、0.338μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却し、5.0mg/mlに希釈した。0.8mlの溶液を次の反応のために採取した。
より短い保持時間を有する化合物9-A(0.55mg、0.5μmol)を0.1mLのDMSOに溶解し、次いで上記の0.8mLの溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-9Aの例示的生成物ADC-9のPBS緩衝溶液(2.27mg/mL、1.11mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-HPLCにより計算した平均値: n=3.16。
（実施例３０）
ADC-10
Figure 2022511351000081
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、19.76μL、197.6μmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.574mL、38.78 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
保持時間の短い化合物(0.64mg、588 nmol)である化合物14をDMSO40μlに溶解した後、上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-10の例示的生成物ADC-10のPBS緩衝溶液(5.48mg/mL、1.03mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.25。
（実施例３１）
ADC-11
Figure 2022511351000082
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、22.24μL、222.4 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.646mL、43.64 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物14、より長い保持時間(0.72mg、662 nmol)を有する化合物を、40μlのDMSOに溶解し、次いで、上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-10の例示的製品ADC-11のPBS緩衝溶液(2.13mg/mL、1.87mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.03。
（実施例３２）
ADC-12
Figure 2022511351000083
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、25.0μL、250.0 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.726mL、49.05 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物15(0.81mg、754 nmol)を40μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-12の例示的生成物ADC-12のPBS緩衝溶液(3.34mg/mL、1.45mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.93。
（実施例３３）
ADC-13
Figure 2022511351000084
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、9.88μL、98.8 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.287mL、19.39 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物16(0.32mg、294 nmol)を20μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-13の例示的生成物ADC-13のPBS緩衝溶液(2.37mg/mL、0.88mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.53。
（実施例３４）
ADC-14
Figure 2022511351000085
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、20.38μL、203.8 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.592mL、40.0 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物17(0.92mg、598 nmol)を40μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-14の例示的生成物ADC-14のPBS緩衝溶液(0.30mg/mL、12.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.61。
（実施例３５）
ADC-15
Figure 2022511351000086
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、20.38μL、203.8 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.592mL、40.0 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物18(0.93mg、599 nmol)を40μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-15の例示的生成物ADC-15のPBS緩衝溶液(0.32mg/mL、11.8mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.89。
（実施例３６）
ADC-16
Figure 2022511351000087
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、18.25μL、182.5 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.53mL、35.8 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物19(0.83mg、534 nmol)を35μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-16の例示的生成物ADC-16のPBS緩衝溶液(0.32mg/mL、12.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.43。
（実施例３７）
ADC-17
Figure 2022511351000088
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、43.2μL、432 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、2.0mL、135.12 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物9-保有時間が短いため、化合物9-A(2.22mg,2067 nmol)はDMSOの175μlで溶解され、その後、上記の反応液に加算された。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-4Aの例示的生成物ADC-17のPBS緩衝溶液(1.32mg/mL、12.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=5.42。
（実施例３８）
ADC-18(参考例)
Figure 2022511351000089
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、51.7μL、517 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、1.5mL、101.3 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物20(2.0mg、1934 nmol)を100μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-18の例示的生成物ADC-18のPBS緩衝溶液(0.79mg/mL、13.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.23。
（実施例３９）
ADC-19
Figure 2022511351000090
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、46.9μL、469 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、1.36mL、91.9 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物9-保有時間が短い、化合物9-A(2.0mg、1862 nmol)をDMSOの100μlで溶解し、その後、上記の反応液に加えた。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-4Aの例示的生成物ADC-19のPBS緩衝溶液(0.73mg/mL、13.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visによって計算された平均値: n=6.26。
（実施例４０）
ADC-20
Figure 2022511351000091
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、51.7μL、517 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、1.5mL、101.3 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物10:保持時間の長い化合物(2.0mg、1815 nmol)を100μlのDMSOに溶解した後、上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-1の例示的生成物ADC-20のPBS緩衝溶液(0.73mg/mL、13.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.43。
（実施例４１）
ADC-21(参考例)
Figure 2022511351000092
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、63.9μL、639 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、1.86mL、125.4 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物20(2.07mg、2001 nmol)を150μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-18の例示的生成物ADC-21のPBS緩衝溶液(2.91mg/mL、4.44mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.23。
（実施例４２）
ADC-22
Figure 2022511351000093
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、64.9μL、649 nmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、1.88mL、127.2 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
コンパウンド9-保持時間が短いので、化合物9-A(2.1mg、1955 nmol)をDMSOの150μlで溶解し、その後、上記の反応解に加えた。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-4Aの例示的生成物ADC-22のPBS緩衝溶液(3.56mg/mL、3.98mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.79。
（実施例４３）
ADC-23(参考例)
Figure 2022511351000094
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、11.89mL、118.9μmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、345mL、23.31μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3.5時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物20(362mg、350μmol)を、7.12mlのMeCNおよび3.56mlのDMSOに溶解し、次いで、上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、2%(v/v)MeCNおよび1%(v/v)DMSO(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液)およびコハク酸緩衝水溶液(pH=5.3の0.01 Mコハク酸緩衝水溶液)を含有するPBS緩衝水溶液で限外濾過パックにより精製した。スクロースを60mg/mLに添加し、Tween 20を0.2mg/mLに添加した。溶液を瓶詰めし、凍結乾燥して、式FADC-18の例示的な生成物ADC-23の凍結乾燥粉末試料を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.05。
（実施例４４）
ADC-24
Figure 2022511351000095
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、11.44mL、114.4μmol)を、37℃で、抗体トラスツズマブのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、332mL、22.43μmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3.5時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物9‐保持時間が短い、化合物9‐A(241mg,224μmol)はMeCN13.76mlとDMSO6.88mlで溶解し、その後上記反応液に加算した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、4%(v/v)MeCNおよび2%(v/v)DMSO(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液)およびコハク酸緩衝水溶液(pH=5.3の0.01 Mコハク酸緩衝水溶液)を含有するPBS緩衝水溶液で限外濾過パックにより精製した。スクロースを60mg/mLに添加し、Tween 20を0.2mg/mLに添加した。溶液を瓶詰めし、凍結乾燥して、式FADC-4Aの例示的な生成物ADC-24の凍結乾燥粉末試料を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.07。
（実施例４５）
ADC-25
Figure 2022511351000096
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、73.7μL、740 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、2.14mL、144.60 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物9-保有時間が短い、化合物9-A(3.0mg、2793 nmol)をDMSOの150μlで溶解し、その後、上記の反応液に加えた。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-25の例示的生成物ADC-25のPBS緩衝溶液(1.28mg/mL、13.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.87。
（実施例４６）
ADC-26(参考例)
Figure 2022511351000097
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、30.1μL、300 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.89mL、60.14 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物20(1.0mg、967 nmol)を100μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-26の例示的製品ADC-26のPBS緩衝溶液(1.61mg/mL、4.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.15。
（実施例４７）
ADC-27
Figure 2022511351000098
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、30.1μL、300 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.89mL、60.14 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物9-保有時間が短い、化合物9-A(1.02mg、950 nmol)をDMSOの100μlで溶解し、その後、上記反応液に加算した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-25の例示的生成物ADC-27のPBS緩衝溶液(1.94mg/mL、3.5mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.11。
（実施例４８）
ADC-28(参考例)
Figure 2022511351000099
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、81.3μL、810 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、2.36mL、159.47 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物20(3.0mg、2901 nmol)を150μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-26の例示的生成物ADC-28のPBS緩衝溶液(1.29mg/mL、13.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visによって計算された平均値: n=7.46。
（実施例４９）
ADC-29
Figure 2022511351000100
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、28.6μL、290 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.80mL、50.06 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物9-保有時間が短い、化合物9-A(1.29mg、1201 nmol)をDMSOの100μlで溶解し、その後、上記反応液に加算した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-25の例示的生成物ADC-29のPBS緩衝溶液(2.63mg/mL、2.4mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=7.24。
（実施例５０）
ADC-30(参考例)
Figure 2022511351000101
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、29.1μL、290 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.86mL、58.4 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物20(1.0mg、967 nmol)を100μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-26の例示的生成物ADC-30のPBS緩衝溶液(1.61mg/mL、4.0mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.15。
（実施例５１）
ADC-31
Figure 2022511351000102
トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン(TCEP)の処方水溶液(10mM、30.1μL、300 nmol)を、37℃で、抗体B7H3抗体1F9DSのPBS緩衝水溶液(pH=6.5の0.05 M PBS緩衝水溶液; 10.0mg/mL、0.89mL、60.14 nmol)に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、37℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を水浴中で25℃に冷却した。
化合物8(1.0mg、943 nmol)を100μlのDMSOに溶解し、次いで上記反応溶液に添加した。反応溶液を水浴振盪機に入れ、25℃で3時間振盪した後、反応を停止した。反応溶液を脱塩し、Sephadex G25ゲルカラム(溶出相:pH=6.5、0.001 M EDTAを含有する0.05 M PBS緩衝水溶液)で精製して、式FADC-31の例示的生成物ADC-31のPBS緩衝溶液(1.47mg/mL、4.5mL)を得、これを4℃で保存した。
UV-Visにより計算された平均値: n=6.33。
ADC原液の薬物負荷の分析
実験目的と原理
ADC原液は、抗体結合体薬物の一種である。疾患を治療するためのその機構は抗体ターゲッティングによって毒素分子を細胞内に送達し、それによって細胞を死滅させることである。薬物負荷は、薬物の有効性において決定的な役割を果たす。ADCストック溶液の薬物負荷を、紫外線法によって測定した。
実験方法
コハク酸ナトリウム緩衝液を含むキュベットを、参照吸収セルおよび試料計測吸収セルにそれぞれ配置した。溶媒ブランクを差し引いた後、試料測定用吸収セルに試験液を入れたキュベットを入れ、280nm及び370nmにおける吸光度を測定した。
結果の算出:ADCストック溶液の薬物負荷を、UV計(装置: Thermo nanodrop2000UV計)によって決定した。その原理は、特定の波長でのADC原液の全吸光度が細胞傷害性薬物の吸光度とその波長でのモノクローナル抗体の吸光度との合計に等しいことである:
(1)A280nm =εmab-280 bCmab+εDrug-280 bCDrug
εDrug-280:280nmにおける薬物のモル吸気係数の平均値は5100である;
CDrug:薬剤の濃度;
εmab-280:トラスツズマブ原液又はペルツズマブ原液の280nmにおけるモル吸着係数の平均値は214600である;
Cmab:トラスツズマブ原液又はペルツズマブ原液の濃度;
b: 光路長は1cmである。
同様にして、370nmにおける試料の全吸光度方程式を得ることができる:
(2)A370nm =εmab-370 bCmab+εDrug-370 bCDrug
εDrug-370:370nmにおける薬物のモル吸着率の平均値は19000である;
CDrug:薬剤の濃度;
εmab-370:トラスツズマブ原液又はペルツズマブ原液の370nmにおけるモル吸着係数の平均値が0;
Cmab:トラスツズマブ原液;
b: 光路長は1cmである。
薬物負荷は、2つの検出波長におけるモノクローナル抗体および薬物の吸光係数および濃度データと組み合わせて、2つの式(1)および(2)によって計算することができる。
薬物負荷= CDrug /Cmab。
生物学的検定
試験例1:腫瘍細胞増殖に対する式(D)の化合物の抑制のインビトロ試験
I. 試験目的
この試験の目的は、U87MG細胞(Chinese Academy of Sciences cell bank、カタログ番号TCHu138)およびSK-BR-3腫瘍細胞(ヒト乳癌細胞、ATCC、物品番号HTB-30)の増殖に対する、本発明の式(D)の薬物化合物のインビトロ阻害効果を試験することである。電池を異なる濃度の化合物でin vitroで処理した。培養6日後、細胞増殖をCTG試薬(CellTiter-Glo(登録商標)Luminescent Cell Viability Assay, Promega, article number: G7573)により測定し、化合物のインビトロ活性をIC50 に従って評価した。
II. 試験方法
本化合物の腫瘍細胞に対するin vitro増殖阻害試験のための試験方法は、U87MG細胞に対するin vitro増殖阻害試験方法を例として、以下に記載される。この方法は限定されるわけではないが、他の腫瘍細胞に関するin vitro増殖阻害試験にも適用可能である。
1. 細胞培養: U87MG細胞およびSK-BR-3細胞を、それぞれ、10% FBS(GE、品番SH30024.01)および10% FBS(Gibco、品番16600-108)を含有するMcCoy's 5A培地を含有するEMEM培地中で培養した。
2. 細胞調製:対数成長相のU87MG細胞およびSK-BR-3細胞をPBS(リン酸緩衝剤、上海Basal Media Technologies Co., Ltd.)で一度洗浄し、その後、細胞を完全に消化した後、2-3mlの細胞培養液を消化した後、2-3 min.10-15mlで消化するためにトリプシン(0.25%トリプシン-EDTA(1×)、Gibico, Life Technologies)を加えて消化した。消化した電池を溶出し、1000rpmで5分間遠心分離した。上清を捨て、細胞培養液10～20mlを加えて細胞を再懸濁し、単細胞懸濁液を得た。
3. 細胞プレーティング:U87MGおよびSK-BR-3単細胞懸濁液を十分に混合し、細胞密度を細胞培養培地でそれぞれ2.75×103 細胞/mlおよび8.25×103 細胞/mlに調整した。密度調整した細胞懸濁液をよく混合し、96ウェル細胞培養プレートに180μl/ウェルで添加した。200 μlの培養培地を96ウェルプレートの周辺ウェルに添加した。この平板をインキュベーター中で24時間インキュベートした(37℃、5% CO2)。
4. 化合物製剤:化合物をDMSO(ジメチルスルホキシド、Shanghai Titan Technology Co., Ltd.)に溶解して、初期濃度10mMの原液を得た。
低分子化合物の初期濃度は500 nMであり、配合方法は以下の通りである。
30 試料濃度100μMの96ウェルU字底部配合板の第1のカラムに、それぞれ異なった試験試料μlを添加した。第2のカラムから11thカラムまでの各ウェルに、20μlのDMSOを添加した。10 第1のカラムからの試料のμlを第2のカラム中のDMSOの20μlに添加し、十分に混合し、そこから10μlを採取し、第3のカラムに添加し、以下同様に第10のカラムに添加した。5 製剤化板の各ウェルからのμlの薬物を95μlのEMEM培養培地に添加し、後の使用のために十分に混合した。
ADCの初期濃度は10 nMまたは500 nMであり、配合方法は以下の通りである。
100 試料濃度100 nMまたは5μMの異なる試験試料をそれぞれ96ウェルプレートの第1カラムに添加し、第2カラムから第11thカラムまでの各ウェルに100μlのPBSを添加した。50 第1のカラムからの試料のμlを第2のカラムのPBS100μlに添加し、十分に混合し、そこから50μlを採取し、第3のカラムに添加し、以下同様に3倍希釈で第10のカラムに添加した。
5. 試料負荷:異なる濃度の20μlの調合された試験試料を培養プレートに添加し、各試料を二重に試験した。この平板をインキュベーター中で6日間インキュベートした(37℃、5% CO2)。
6. 着色操作:96ウェル細胞培養プレートを取り出し、各ウェルにCTG溶液90μlを加え、室温で10分間インキュベートした。
7. プレート読み取り:96ウェル細胞培養プレートを取り出し、マイクロプレートリーダー(BMG labtech, PHERAstar FS)に入れて、化学発光を測定した。
III. データ解析
データをMicrosoft ExcelおよびGraphpad Prism 5で分析した。結果を下表に示す。
表1 SK-BR-3細胞およびU87細胞の増殖に対する本発明の低分子フラグメントのインビトロ抑制のIC50価値
[表６]
結論:本開示の低分子フラグメントはSK-BR-3細胞およびU87細胞の増殖に対して明らかな阻害活性を有し、キラル中心は、化合物の阻害活性に対して特定の影響を有する。
試験例2:発明HER2標的化抗体薬物結合体の腫瘍細胞増殖に対する抑制のインビトロ試験
この試験の目的は、SK-BR-3細胞(ヒト乳癌細胞、ATCC、製品番号HTB-30)およびMDA-MB-468細胞(ヒト乳癌細胞、ATCC、製品番号HTB-132)の増殖に対する本HER2標的化抗体薬物結合体のin vitro阻害効果を試験することである。電池を異なる濃度の化合物でin vitroで処理した。6日間培養した後、細胞増殖を測定し、化合物のインビトロ活性をIC50 により評価した。
試験例1の試験方法によれば、試験細胞はSK-BR-3細胞およびMDA-MB-468細胞であり、細胞培養培地は、10% FBSを含有するMcCoy's 5A培地(Gibco、品番16600-108)、10% FBSを含有するEMEM培地(GE、品番SH30024.01)および10% FBSを含有するL-15培地(ThermoFisher、品番11415-114)であった。細胞培養液を用いて、3種の細胞株の生存細胞密度をそれぞれ8.33×103細胞/ml,8.33×103 細胞/ml,1.39×104細胞/mlに調整した。密度調整した細胞懸濁液をよく混合し、96ウェル細胞培養プレートに180μl/ウェルで添加した。関連化合物を試験し、その結果を以下の表に示す。
[表７]
結論:本開示のHER2標的抗体薬物結合体は、HER2陽性細胞SK-BR-3の増殖に対して明らかな阻害活性を有する。一方、HER2陰性細胞MDA-MB-468の増殖に対する阻害活性は低い。したがって、良好な選択性を有する。
試験例3: Her2-ADCプラズマ安定性試験
ADC-19 試料、ADC-18試料、ADC-20試料、ヒト血漿、サル血漿(Shanghai Medicilon Inc.)および1% BSA(Sigma)PBS溶液(Sangon Biotech(Shanghai)Co., Ltd.)を、滅菌のために0.22μmのフィルタを通してそれぞれ濾過した。ADC-19、ADC-18およびADC-20を、それぞれ200μg/mlの最終濃度で上記の無菌プラズマまたは1% BSA PBS溶液に添加し、次いでこれを37℃の細胞インキュベーター中でインキュベートし、インキュベーションの開始日を0日目として記録した。遊離毒素検出のために、7日目、14日目および21日目に試料を収集した。
25 試料μlを96ウェルプレートに添加した。50 内部標準作業溶液(100ng/mLカンプトテシンアセトニトリル溶液)μLおよびアセトニトリル150μLを加えた。溶液を5分間ボルテックスし、10分間遠心分離した(4000rpm)。5 μlの溶液を、LC/MS/MS(Applied Biosystems, Inc., USA)分析のために取り出した。
結果は、ADC-19がヒト血漿、サル血漿および1% BSA PBS溶液中で非常に安定であることを示す。遊離毒素の放出速度は2.1%を超えず、14日目に安定になった。結果を図1Aに示す。
ADC‐18はヒト血漿およびサル血漿中で不安定であり、遊離毒素の最高解放率はそれぞれ14.5%および8.10%であった。それは1% BSA PBS溶液中で安定である。結果を図1Bに示す。
ADC-20はヒト血漿、サル血漿および1% BSA PBS溶液中で不十分な安定性を有し、遊離毒素の最高解放率は、それぞれ21.7%、29.7%および21.7%であった。それは常に1% BSA PBS溶液中で劣化状態にあった。結果を図1Cに示す。
試験例4:JIMT-1腫瘍ベアリングマウスにおける有効性評価
I. 試験目的
ヌードマウスを被験動物とし、トラスツズマブ(ハーセプチン)耐性ヒト乳癌細胞株JIMT-1移植腫瘍ヌードマウスに対するHer2-ADC抗体T-DM1、ADC-21及びADC-24の腹腔内注射後の有効性を評価した。
II. 被験薬・材料
1. 被験薬
T-DM1(米国特許出願第20050169933号を参照して作成)
ADC-21: 3mg/kg
ADC-21: 10mg/kg
ADC-24: 3mg/kg
ADC-24: 10mg/kg
ブランク: PBS
2. 製剤化方法:薬物を全て希釈し、PBSで製剤化した。
3. 試験動物
Nunuヌードマウス(北京バイタルリバー・研究所・動物・テクノロジー(株)より購入)。
III. 試験方法
JIMT-1 細胞(Nanjing Cobioer Biosciences Co., Ltd.)(5×106細胞/マウス、50%マトリゲルを有する)をマウスの右肋骨に皮下接種した。腫瘍が8日間増殖し、203.09±11.94 mm3に達した後、動物を、1群あたり8匹の動物を有する6群に無作為にグループ分けした(d1)。
薬剤は計2回腹腔内注射で投与した。腫瘍体積および体重を週間測定し、データを記録した。
Excel 2003統計ソフトウェアをデータ統計に使用した:平均値をavgとして計算し; SD値をSTDEVとして計算し; SEM値をSTDEV/SQRTとして計算し;異なる群間のP値をTTESTとして計算した。
チューブ体積(V)は次のように計算した: V=1/2×Llength ×Lshort 2
相対容積(RTV)=VT /V0
tumor inhibition rate(%)=(CRTV -TRTV)/CRTV (%)
ここで、V0 とVT は、それぞれテスト開始時とテスト終了時のtumor volumeを表す。C RTV およびT RTV は、それぞれ、試験の端部におけるブランクの対照群(車両、PBS)および試験群の相対的な腫瘍体積を表す。
IV. 試験結果
検査結果は図2のとおりであり、腹腔内に2回投与し、観察34日目に検査終了とした。T-DM1(10mg/kg)は腫瘍抑制効果を示さず、ADC-21(3mg/kg)は腫瘍抑制率46.22%(P<0.01)、ADC-21(10mg/kg)は腫瘍抑制率56.77%(P<0.001)、ADC-24(3mg/kg)は腫瘍抑制率62.77%(P<0.001)、ADC-24(10mg/kg)は腫瘍抑制率76.32%(P<0.001)であった。同一用量下では、ADC-24の腫瘍抑制効果はADC-21よりも有意に良好である。
試験例5:SK-BR-3 腫瘍ベアリングマウスにおける有効性評価
I. 試験目的
ヌードマウスを被験動物として用い、腹腔内注射後のヒト乳癌細胞株SK-BR-3移植腫瘍ヌードマウスに対するHer2-ADC抗体ADC-21およびADC-22の有効性を評価した。
II. 被験薬・材料
1. 被験薬
ADC-21: 1mg/kg
ADC-21: 6mg/kg
ADC-22: 1mg/kg
ADC-22: 6mg/kg
ブランク: PBS
2. 製剤化方法:薬物を全て希釈し、PBSで製剤化した。
3. 試験動物
Nunuヌードマウス(北京バイタルリバー・研究所・動物・テクノロジー(株)より購入)。
III. 試験方法
SK-BR-3 細胞(ATCC)(5×106細胞/マウス、50%マトリゲルを有する)をマウスの右肋骨に皮下接種した。腫瘍が20日間増殖し、153.34±11.73 mm3に達した後、動物を1群あたり8匹の動物(d0)で5群に無作為にグループ分けした。
薬剤は1回腹腔内注射で投与した。腫瘍体積および体重を週間測定し、データを記録した。
Excel 2003統計ソフトウェアをデータ統計に使用した:平均値をavgとして計算し; SD値をSTDEVとして計算し; SEM値をSTDEV/SQRTとして計算し;異なる群間のP値をTTESTとして計算した。
チューブ体積(V)は次のように計算した: V=1/2×Llength ×Lshort 2
相対容積(RTV)=VT /V0
tumor inhibition rate(%)=(CRTV -TRTV)/CRTV (%)
ここで、V0 とVT は、それぞれテスト開始時とテスト終了時のtumor volumeを表す。CRTV とTRTV は、それぞれ空白のコントロールグループと実験終了時のテストグループの相対的な質量を表している。
IV. 試験結果
検査結果は図3 のとおりであり、1 回腹腔内投与し、観察28 日目で検査終了とした。ADC-21(1mg/kg)は腫瘍抑制率15.01%、ADC-21(6mg/kg)は腫瘍抑制率77.4%であり、ブランクコントロールと有意差が認められた(P<0.001)。ADC-22(1mg/kg)は19.82%の腫瘍抑制率を示し;ADC-22(6mg/kg)は98.38%の腫瘍抑制率を示す(P<0.001)。同用量の6mg/kgの下では、ADC-22の腫瘍抑制効果はADC-21よりも有意に良好である。
試験例6:プラズマ安定性試験
ADC-25 試料を、ヒト血漿、サル血漿および1% BSA PBS溶液と、それぞれ100μg/mlの最終濃度で十分に混合し、滅菌のために濾過した。混合物を37℃の水浴中でインキュベートし、インキュベーションの開始日を0日目として記録した。遊離毒素検出のために、7日目、14日目および21日目に試料を収集した。
異なる時点で収集した試料を室温に冷却し、渦により十分に混合した。25 試料μlを96ウェルプレートに添加した。50 内部標準作業溶液(100ng/mLカンプトテシンアセトニトリル溶液)μLおよびアセトニトリル150μLを加えた。溶液を5分間ボルテックスし、10分間遠心分離した(4000rpm)。5 μlの溶液をLC/MS/MS分析のために取り出した。
結果を図4に示す。ADC-25はヒト血漿、サル血漿および1% BSA PBS溶液中で非常に安定である。遊離毒素の放出速度は2%を超えず、14日目に安定になった。
試験例7:ヌードマウスにおけるヒト脳星細胞腫U87MG異種移植腫瘍に対するADCの有効性評価
I. 試験目的
BALB/cA-ヌードマウスを試験動物として使用し、ヌードマウスにおけるヒト脳星発明芽細胞腫U87MG異種移植腫瘍に対する本開示のADC化合物の有効性を評価した。
II. 被験薬・材料
1. 被験薬
ADC-27(3mg/kg)ADC-26(3mg/kg)ブランク: PBS緩衝液(pH 7.4)
2. 製剤方法: PBS緩衝液(pH 7.4)。
3. 試験動物
BALB/cA-ヌードヌードマウス、Shanghai JieSiJie Laboratory Animal Co., Ltd.から購入。
III. 試験方法
試験にはBALB/cAヌードマウス(雌、6～7週齢)を用いた。ヒト脳星芽電池腫U87MG電池(ヒト脳星芽電池腫、Chinese Academy of Sciences cell bank、カタログ# TCHu138)を皮下接種した。接種後10日目に各群8匹(D0)に無作為に群分けし、週1回、3回腹腔内投与した。腫瘍体積および体重を週に2～3回測定し、データを記録した。腫瘍体積(V)の計算式は以下の通りである:
V=1/2×a×b2
ここで、aおよびbは、それぞれ長さおよび幅を表す。
相対容積(RTV)=VT /V0
tumor inhibition rate(%)=(CRTV -TRTV)/CRTV (%)ここで、V0 とVT は、それぞれテスト開始時とテスト終了時のtumor volumeを表す。CRTV とTRTV は、それぞれ、コントロールグループ(空白)と試験の端部にある試験グループの相対的なトンボ体積を表す。
IV. 試験結果
腹腔内注射(i.p.)投与は週1回、3回行った。観察22日目には、ADC‐27(3mg/kg)の腫瘍抑制率は63.3%に達し(P<0.0001), ADC‐26(3mg/kg)の腫瘍抑制率は49.1%に達した。ADC-27 ADC-26よりも強い抗腫瘍効果を示す。
投与中、各群の動物は正常体重を示し、ADCには明らかな副作用がないことが示唆された。試験結果を表3及び図5に示す。試験した抗体は腫瘍ベアリングヌードマウスにおけるU87MG異種移植腫瘍の成長を効果的に阻害することができ、用量依存的な様式を示す。
[表８]
試験例8:ヌードマウスにおけるヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト 562異種移植腫瘍に対するADCの有効性評価
I. 試験目的
BALB/cA-ヌードマウスを試験動物として使用し、ヌードマウスにおけるヒト咽頭癌胸水転移細胞デトロイト 562異種移植腫瘍に対する本発明のADC化合物の有効性を評価した。
II. 被験薬・材料
1. 被験薬
ADC-29(3mg/kg)
ADC-28(3mg/kg)
陰性対照ADC(3mg/kg):非B7H3標的と化合物20とのカップリングによって形成された配位子-毒素コンジュゲート。
2. 製剤化方法:薬物を全て希釈し、PBSで製剤化した。
3. 試験動物
Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd.から購入したBALB/cA-ヌードヌードマウス。
III. 試験方法
測定にはBALB/cAヌードマウス(雌、6～7週齢)を用いた。ヒト咽頭癌胸水転移細胞Detroit 562細胞(ATCC、カタログ番号ATCC(登録商標)CCL-138(商標))を皮下接種した。接種後10日目に各群8匹(D0)に無作為に群分けし、週1回、3回腹腔内投与した。腫瘍体積および体重を週に2～3回測定し、データを記録した。腫瘍体積(V)の計算式は以下の通りである:
V=1/2×a×b2
ここで、aおよびbは、それぞれ長さおよび幅を表す。
相対容積(RTV)=VT /V0
tumor inhibition rate(%)=(CRTV -TRTV)/CRTV (%)ここで、V0 とVT は、それぞれテスト開始時とテスト終了時のtumor volumeを表す。CRTV とTRTV は、それぞれ、コントロール群(ネガティブコントロール)とテスト終了時のテスト群の相対的な発生量を表している。.
IV. 試験結果
腹腔内注射投与は週1回、3回行った。観察の28日目に、ADC‐29(3mg/kg、3mpk)の腫瘍阻害率は72.27%に達し(P<0.001);ADC‐28(3mg/kg,3mpk)の腫瘍阻害率は56.2%に達した(P<0.001)。ADC-29 ADC-28よりも強い抗腫瘍効果を示す。
投与中、各群の動物は正常な体重を示したことから、ADCには明らかな副作用がないことが示唆された。試験結果を表4および図6に示す。試験した抗体は腫瘍ベアリングヌードマウスにおけるデトロイト562異種移植片腫瘍の成長を効果的に阻害し、用量依存的な様式を示すことができる。
[表９]
試験例9:U87-MG腫瘍ベアリングマウスを用いた薬効評価
I. 試験目的
BALB/cヌードマウスを試験動物として使用し、ヒト神経膠腫細胞U87MG異種移植腫瘍モデルにおいて腹腔内注射により投与されたB7H3-抗体薬物結合体の有効性を評価した。
II. 被験薬・材料
1. 被験薬
ADC-30 1mg/kg
ADC-30 3mg/kg
ADC-31 1mg/kg
ADC-31 3mg/kg
ブランク: PBS
2. 製剤化方法:薬物を全て希釈し、PBSで製剤化した。
3. 試験動物
BALB/cA-ヌードヌードマウスは、Shanghai Slac Laboratory Animal Co. Ltd.から購入した。
III. 試験方法
U87MG電池(ヒト脳星芽電池腫、中国科学アカデミーセルバンク、カタログ番号TCHu138)(2.5×106電池/マウス)をマウスの右肋骨に皮下接種した。腫瘍が14日間増殖し、167.49 mm3に達した後、動物を、1群あたり8匹の動物(d1)で5群に無作為にグループ分けした。
薬剤は週1回、計3回腹腔内注射した。腫瘍体積および体重を週間測定し、データを記録した。
Excel 2003統計ソフトウェアをデータ統計に使用した:平均値をavgとして計算し; SD値をSTDEVとして計算し; SEM値をSTDEV/SQRTとして計算し;異なる群間のP値をTTESTとして計算した。
チューブ体積(V)は次のように計算した: V=1/2×Llength ×Lshort 2
相対容積(RTV)=VT /V0
tumor inhibition rate(%)=(CRTV -TRTV)/CRTV (%)ここで、V0 とVT は、それぞれテスト開始時とテスト終了時のtumor volumeを表す。C RTV とT RTV は、それぞれ試験終了時の空白のコントロールグループ(車両)と試験グループの相対的な処理量を表している。.
IV. 試験結果
試験結果を図7に示す。腹腔内注射は週1回、計3回行った。観察18日目に、ADC‐30(1mg/kg)の腫瘍抑制率は0.31%に達した;ADC‐30(3mg/kg)の腫瘍抑制率は45.23%に達した(P<0.0001);ADC‐31(1mg/kg)の腫瘍抑制率は39.22%に達した(P<0.01);そしてADC‐31(3mg/kg)の腫瘍抑制率は80.24%に達した(P<0.0001)。同一用量では、ADC-31の腫瘍抑制効果はADC-30より有意に良好である。

Claims (46)

  1. Figure 2022511351000103
    配位子-薬物共役、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、配位子-薬物共役が式(-D)(式中、Yは-O-(CRA Rb)m -CR1 R2-C(O)-, -O-CR1 R2 -(CRA Rb)m-, -O-CR1 R2 -, -NH-(CRA Rb)m-CR1 R2 -C(O)- および-S-(CR A R b)m -CR 1 R2-C(O)-からなる群から選択されると、RAおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、水酸基、アミノ、シアノ、ニトロ基、水酸基アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群より選択されると、あるいはRAとRbがそれらが結び付けられている原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する。. .と、R 1はハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択されると、R 2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択されると、R1およびR2はそれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成すると、あるいはRAとR2がそれらが結び付けられている原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する。. .と、式中、式-D中の波線は水素原子、またはターゲット細胞によって発現される抗原に結合するリンカーユニットもしくは抗体への共有結合を表すと、m 0 ～4 の整数であると、と、の構成を含む、配位子-薬物共役。
    Figure 2022511351000104
  2. 配位子-薬物共役が式(-D1)(式中、R1はシクロアルキル又はシクロアルキルであり、好ましくはC3-6シクロアルキル又はC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキル、および好ましくはハイドロアトムからなる群から選択されると、またはR1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、波線は水素原子、またはターゲット細胞によって発現される抗原に結合するリンカーユニットまたは抗体への共有結合を表すと、mは0または1であると、と、の構成を含む、請求項1に記載の配位子-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000105
  3. 式(Pc-L-Y-Dr)のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物(式中、Yは-O-(CRa Rb)m-CR1 R2 -C(O)-, -O-CR1 R2 -(CRaRb)m -, -O-CR1 R2 -, -NH-(CRaRb)m -CR1 R2 -C(O)- および-S-(CR a R b)m-CR 1 R2 -C(O)-からなる群から選択されると、RaおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、水酸基、アミノ、シアノ、ニトロ基、水酸基アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群より選択されると、あるいはRaとRbがそれらが結び付けられている原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する。. .と、R 1はハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択されると、R 2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択されると、R1およびR2はそれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成すると、あるいはRaとR2がそれらが結び付けられている原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する。. .と、m 0 ～4 の整数であると、nは1 ～10 で、整数または10 進数であると、Pcは配位子であると、Lはリンカーユニットであると、と、で請求項1に記載のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  4. 請求項3に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物(式中、Yは-O-(CRa Rb)m -CR1R2 -C(O)-と、RaおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲンおよびアルキルからなる群から選択されると、R1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキル、および好ましくはハイドロアトムからなる群から選択されると、またはR1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、mは0または1であると、.
    Figure 2022511351000106
  5. Yがからなる群から選択される、請求項1～4のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物,, と、。
    Figure 2022511351000107
  6. YのO端子がリンカーユニットLに連結されている、請求項1～5のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000108
  7. 式(Pc-L-D1)のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物(式中、R1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキル、および好ましくはハイドロアトムからなる群から選択されると、またはR1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、mは0または1であると、nは1 ～10 で、整数または10 進数であると、Pcは配位子であると、Lはリンカーユニットであると、と、で請求項1に記載のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  8. nが2～8であり、整数または10進数であることができ、好ましくはnが3～8であり、整数または10進数であることができる、請求項3～7のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物。
  9. リンカー単位-Lis -L1 -L2 -L3-L4 -, L1が-(スクシンイミド-3-イル-N)-WOOBW-C(O)-および-C(O)-W-C(O)-からなる群より選択され、ここで、WはC1-8アルキル、C1-8アルキル-シクロアルキルおよび1～8個の原子を含む直鎖状ヘテロアルキルからなる群より選択され、ヘテロアルキルはN、OおよびSからなる群より選択される1～3個のヘテロ原子を含み、ここで、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび直鎖状ヘテロアルキルはそれぞれ独立して、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1個以上の置換基によりさらに置換されていてもよい、請求項3～8のいずれかに記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物;L2は-NR4(CH2 CH2O)1 CH2 CH2 C(O)-, -NR4(CH2CH2 O)p 1 CH2 C(O)-, -S(CH2)p C(O)-および化学結合から成る群から選択され、L2は好ましくは化学結合であり、p1は1から20の整数である;L3は2～7アミノ酸から構成されるペプチド残基であり、ここで、アミノ酸は、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1つ以上の置換基によって任意にさらに置換される;L4は-NR5(CR6 R7)t -, -C(O)NR5, -C(O)NR5(CH2)t -とケミカルボンドからなる群から選択され、ここでtは1～6の整数であり、L4は好ましくは-NR5(CR6 R7)t-である;R3, R4およびR5は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される;R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択される。
  10. L1が-(スクシンイミド-3-イル-N)-(CH2)s1 -C(O)-, -(スクシンイミド-3-イル-N)-CH2-シクロヘキシル-C(O)-、-(スクシンイミド-3-イル-N)-(CH2 CH2 O)sOOGsOOH -C(O)-および-C(O)-(CH2)s4 C(O)-からなる群より選択され、ここで、s1は2～8の整数であり、s2は1～3の整数であり、s3は1～8の整数であり、そしてs4は1～8の整数で請求項9に記載のリガンド薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物。
  11. L2が-NR4(CH2 CH2 O)p1 CH2C(O)-および化学結合からなる群より選択され、p1が6～12の整数で請求項9または10に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  12. L4が-NR5(CR6 R7)t -, R5から選択される、請求項9～11のいずれか一項に記載の配位子薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であり、R6およびR7が同一であるかまたは異なっており、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択され、tが1または2であり、好ましくは2で配位子薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  13. L3がフェニルアラニン、グリシン、バリン、リジン、シトルリン、セリン、グルタミン酸およびアスパラギン酸からなる群より選択される2～7アミノ酸からなるペプチド残基であり、好ましくはテトラペプチド残基であり、より好ましくはグリシン-グリシン-フェニルアラニン-グリシンのテトラペプチド残基で請求項9～12のいずれかに記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000109
  14. リンカー単位-Lis-L1 -L2 -L3-L4 -, L1がnであり、s1が2～8の整数で請求項3～13のいずれか1項に記載のリガンド薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物;L2は化学結合である;L3はテトラペプチド残渣である;L4は-NR5(CR6 R7)t -, R5であり、水素原子及びアルキルからなる群から選択され、R6及びR7は同一又は異なっており、それぞれ独立して水素原子及びアルキルからなる群から選択され、tは1又は2である。
  15. リンカーユニット-Lis -L1 -L2 -L3-L4 -, L1が-(スクシンイミド-3-イル-N)-CH2-シクロヘキシル-C(O)-で請求項3～13のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物;L2が-NR4(CH2 CH2 O)9 CH2C(O)-;L3はテトラペプチド残渣である;L4は-NR5(CR6 R7)t-であり、R5はHアトムとAlkからなる群から選択され、R6とR7は同一か異なっており、それぞれ独立して、HアトムとAlkからなる群から選択され、tは1か2である。
  16. 配位子に連結されたリンカー単位-LisのL 1端子、およびYに連結されたリンカー単位-LisのL 4端子で請求項9～15のいずれか1項に記載の配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000110
  17. -L-Yがここで、L1はCH2 -(スクシンイミド-3-yl-N)-(CH2)s 1-C(O)-および-(スクシンイミド-3-yl-N)-CH2-cyclohexyl-C(O)-からなる群から選択されると、L2は-NR4(CH2 CH2O)p 1 CH2 C(O)- またはケミカルボンドで、p 1 は6 ～12 の整数であると、L3はGGFGのテトラペプチド残渣であると、R1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択されると、またはR1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、R5, R6およびR7は同一であるか異なっており、それぞれ独立に、アルファ原子およびアルキルからなる群から選択されていると、s 1 は2 ～8 の整数であると、m 0 ～4 の整数であると、で請求項3～16のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000111
  18. -L-YがL2は-NR 4(CH 2 CH 2O)9 CH 2 C(O)-と、L3はGGFGのテトラペプチド残渣であると、R1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択されると、または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、R5, R6およびR7は同一であるか異なっており、それぞれ独立に、アルファ原子およびアルキルからなる群から選択されていると、m 0 ～4 の整数であると、で請求項17に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000112
  19. -L-Yがで請求項17に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物L2は化学結合である;L3はGGFGのテトラペプチド残渣である;R1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルである;R2がハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択される;または、R1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成する;R5が水素原子およびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子およびアルキルからなる群から選択される;s1は2～8の整数であり、好ましくは5である;m 0 ～4 の整数である。
    Figure 2022511351000113
  20. 式(-L-Y-)(式中、L2は化学結合であると、L3はGGFGのテトラペプチド残渣であると、R1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択されると、またはR1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、R5はハイドロアトムおよびアルキルからなる群から選択され、R6およびR7は同一または異なっており、それぞれ独立して、ハイドロアトムおよびアルキルからなる群から選択されると、s 1 は2 ～8 の整数であると、m 0 ～4 の整数であると、と、の構成を含む、配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000114
  21. 式(Pc-La-Y-Dr)のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物(式中、WはC1-8アルキル、C1-8アルキル-シクロアルキルおよび1～8個の原子を含む線状ヘテロアルキルからなる群より選択され、ヘテロアルキルはN、Oおよびsからなる群より選択される1～3個のヘテロ原子を含み、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび線状ヘテロアルキルはそれぞれ独立して、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1個以上の置換基によりさらに置換されていてもよいと、L2は-NR4(CH2 CH2 O)pOOFpOOG C(O)-および化学結合からなる群から選択され、ここでp1は1～20の整数であると、L3は2～7アミノ酸から構成されるペプチド残基であり、ここで、アミノ酸はハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1つ以上の置換基によって任意にさらに置換されると、R 1はハロゲン、シクロアルキルアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択されると、R 2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択されると、R1およびR2はそれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成すると、R4およびR5は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択されると、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択されると、m 0 ～4 の整数であると、Nは1 ～10 で、整数または10 進数であると、Pcは配位子であると、と、で請求項1～4のいずれか1項に記載のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000115
  22. 式(Pc-Lb-Y-Dr)のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物(式中、s 1は2 ～8 の整数で、できれば5 であると、Pc、R1, R2, R5 ～R7、mおよびnは、請求項21に定義されているとおりであると、と、で請求項21に記載のリガンド-薬物共役またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
    Figure 2022511351000116
    Figure 2022511351000117
  23. -L-Yがからなる群より選択される、請求項3～20のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物及び、.
    Figure 2022511351000118
    Figure 2022511351000119
    Figure 2022511351000120
  24. 及び、(式中、nは1 ～10 で、整数または10 進数であると、Pcは配位子であると、と、からなる群より選択される、請求項1～23のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  25. Pcが抗体またはその抗原結合フラグメントであり、抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト化抗体からなる群から選択される、請求項3～24のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩または溶媒和物。
  26. 抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗インテグリン抗体、抗Tenascin-C抗体からなる群より選択される、請求項25に記載の配位子薬物結合体またはその薬理学的に許容される塩または溶媒和物 抗SLC44A4抗体、抗メソテリン抗体およびその抗原結合断片 .
  27. トラスツズマブ、Pertuzumab、Nimotuzumab、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96およびGlematumamab、またはこれらの抗原結合フラグメントからなる群より、抗体または抗原結合フラグメントが選択される、請求項25に記載の配位子薬物結合体、または医薬上許容可能な塩またはその溶媒和物。
    Figure 2022511351000121
    Figure 2022511351000122
    Figure 2022511351000123
  28. 以下からなる群より選択される、請求項3～27のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物及び、式中、nは請求項3に定義される通りである。
    Figure 2022511351000124
  29. 式(D)または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはYは-O-(CRARb)m -CR1 R2 -C(O)-, -O-CR1R2 -(CRA Rb)m -, -O-CR1R2 -, -NH-(CRA Rb)m -CR1R2 -C(O)- および-S-(CR AR b)m -CR 1 R2 -C(O)-からなる群から選択されると、RAおよびRbは同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、重水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ、水酸基、アミノ、シアノ、ニトロ基、水酸基アルキル、シクロアルキルおよびヘテロシクリルからなる群より選択されると、あるいはRAとRbがそれらが結び付けられている原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する。. .と、R 1はハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択されると、R 2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択されると、R1およびR2はそれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成すると、あるいはRAとR2がそれらが結び付けられている原子と一緒に、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成する。. .と、m 0 ～4 の整数であると、でその薬学的に許容可能な塩と、の化合物。
    Figure 2022511351000125
  30. 式(D1)または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはR1はC3-6シクロアルキルアルキルまたはC3-6シクロアルキルであると、R2はハイドロアトム、ハロアルキルおよびC3-6シクロアルキルからなる群から選択されると、またはR1とR2がそれらが接続されている原子と一緒にC3-6シクロアルキルを形成すると、mは0または1であると、でその薬学的に許容可能な塩と、の化合物で請求項29に記載の式(D)の化合物。
    Figure 2022511351000126
  31. 以下からなる群から選択される、請求項29または30に記載の式(D)の化合物
    Figure 2022511351000127
    Figure 2022511351000128
  32. 式(LA-Y-Dr)または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、それらのジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容可能な塩と、(式中、WはC1-8アルキル、C1-8アルキル-シクロアルキルおよび1～8個の原子を含む線状ヘテロアルキルからなる群より選択され、ヘテロアルキルはN、Oおよびsからなる群より選択される1～3個のヘテロ原子を含み、C1-8アルキル、シクロアルキルおよび線状ヘテロアルキルはそれぞれ独立して、ハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1個以上の置換基によりさらに置換されていてもよいと、L2は-NR4(CH2 CH2 O)pOOFpOOG C(O)-および化学結合からなる群から選択され、ここでp1は1～20の整数であると、L3は2～7アミノ酸から構成されるペプチド残基であり、ここで、アミノ酸はハロゲン、水酸基、シアノ、アミノ、アルキル、クロロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシおよびシクロアルキルからなる群より選択される1つ以上の置換基によって任意にさらに置換されると、R 1はハロゲン、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群より選択されると、R 2は水素原子、ハロゲン、ハロアルキル、重水素化アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択されると、R1およびR2はそれらが結合している炭素原子と一緒になって、シクロアルキルまたはヘテロシクリルを形成すると、R4およびR5は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択されると、R6およびR7は同一または異なり、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、重水素化アルキルおよびヒドロキシアルキルからなる群から選択されると、m 0 ～4 の整数であると、と、の化合物。
    Figure 2022511351000129
  33. 公式(Lb -Y-Dr)の複合で請求項32に記載の公式(La -Y-Dr)の複合または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、そのジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩(ここで、R1, R2, R5 ～R7、s1およびmは、請求項32に定義されるとおり)。
    Figure 2022511351000130
  34. からなる群から選択される、請求項32または33に記載の公式(La -Y-Dr)のコンパウンド及び、
    Figure 2022511351000131
  35. 式(D1)の化合物、またはその互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、またはその混合物、またはその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下の工程を含む、方法数式(Y1)の複合と数式(Dr)の複合を圧縮して数式(D1)の複合を求め、記R1, R2及びmは、請求項30に定義されるとおりである。
    Figure 2022511351000132
  36. 式(Lb-Y-Dr)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下の式(IA)の化合物および式(IB)の化合物を縮合して、式(Lb-Y-Dr)の化合物を得ることと、工程を含む方法。
    Figure 2022511351000133
  37. 式(Lb-Y-Dr)の化合物、または互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を調製する方法であって、以下の式(IA)の化合物および式(IB)の化合物を縮合して、式(Lb-Y-Dr)の化合物を得ることと、工程を含む方法。
    Figure 2022511351000134
  38. 次のPcは式の化合物(LA -Y-Dr)と縮小後に結合され、式の化合物(Pc -LA -Y-Dr)が得られると、(式中、Pcは配位子であると、W, L2, L3, R1, R2, R5 ～R7、mおよびnは請求項21に定義されているとおりであると、と、工程を含む、式(Pc-LA-Y-Dr)の配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の調製法。
  39. 配位子および該配位子に連結された薬物を含む、配位子薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物であって、該薬物が請求項29～34のいずれか一項に記載の化合物から選択され、該薬物が好ましくは、リンカーを介して該配位子に連結されている、配位子薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  40. リガンドがモノクローナル抗体で請求項39に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
  41. 請求項29～34のいずれか1項に記載の化合物を配位子に、好ましくはリンカーを介して連結する工程を含む、請求項39または40に記載の配位子-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための方法。
  42. リガンドがモノクローナル抗体で請求項41に記載の方法。
  43. 請求項1～28のいずれか1項に記載の治療有効量のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または請求項29～31のいずれか1項に記載の式(D)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む、医薬組成物。
  44. 腫瘍を治療または予防するための薬剤の調製における、請求項1～28のいずれか1項に記載のリガンド-薬物結合体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、請求項29～31のいずれか1項に記載の式(D)の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、または請求項43に記載の医薬組成物の使用。
  45. 腫瘍が、HER2、HER3、B7H3またはEGFRの発現に関係する癌で請求項44記載の使用。
  46. 癌を治療および/または予防するための医薬の調製における、請求項1～28のいずれか一項に記載の配位子薬物結合体またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物、式(D)の化合物または請求項29～31のいずれか一項に記載の医薬的に許容されるその塩もしくは溶媒和物、または請求項43に記載の医薬組成物の使用であって、好ましくは、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、前立腺癌、腎臓癌、尿道癌、膀胱がん、肝臓癌、胃癌、子宮内膜がん、唾液腺がん、食道がん、黒色腫、神経芽腫、神経芽腫、肉腫、肺がん、結腸がん、直腸がん、大腸癌、白血病、骨がん、皮膚癌、甲状腺癌、膵臓がんおよびリンパ腫からなる群から選択される、使用。
JP2021516798A 2018-09-26 2019-09-25 エキサテカン類似体のリガンド－薬物コンジュゲート、その調製方法およびその適用 Active JP7558156B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811123833 2018-09-26
CN201811123833.1 2018-09-26
PCT/CN2019/107873 WO2020063676A1 (zh) 2018-09-26 2019-09-25 依喜替康类似物的配体-药物偶联物及其制备方法和应用

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2022511351A true JP2022511351A (ja) 2022-01-31
JPWO2020063676A5 JPWO2020063676A5 (ja) 2022-10-03
JP7558156B2 JP7558156B2 (ja) 2024-09-30

Family

ID=69953349

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021516798A Active JP7558156B2 (ja) 2018-09-26 2019-09-25 エキサテカン類似体のリガンド－薬物コンジュゲート、その調製方法およびその適用

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210353764A1 (ja)
EP (1) EP3858386A4 (ja)
JP (1) JP7558156B2 (ja)
KR (1) KR20210066833A (ja)
CN (1) CN112512591B (ja)
AU (1) AU2019349207A1 (ja)
BR (1) BR112021004656A2 (ja)
CA (1) CA3114137A1 (ja)
MX (1) MX2021003382A (ja)
TW (1) TWI826543B (ja)
WO (1) WO2020063676A1 (ja)
ZA (1) ZA202102544B (ja)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2021003446A (es) * 2018-09-30 2021-06-15 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd Conjugado analogo del anticuerpo anti-bth3 y exatecan, y uso medicinal del mismo.
CN111689980A (zh) * 2019-05-26 2020-09-22 四川百利药业有限责任公司 一种喜树碱药物及其抗体偶联物
CN118403182A (zh) * 2019-12-12 2024-07-30 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗密蛋白抗体药物偶联物及其医药用途
MX2022009044A (es) 2020-01-22 2022-08-11 Shanghai Senhui Medicine Co Ltd Conjugado de farmaco de derivado de eribulin, metodo de preparacion y aplicacion del mismo en medicina.
AU2021243080A1 (en) * 2020-03-25 2022-09-22 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Preparation method for antibody medicament conjugate
US20230140397A1 (en) * 2020-03-25 2023-05-04 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-psma antibody-exatecan analogue conjugate and medical use thereof
CN115103691A (zh) 2020-03-25 2022-09-23 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种含抗体药物偶联物的药物组合物及其用途
AU2021289927A1 (en) 2020-06-08 2023-01-19 Baili-Bio (Chengdu) Pharmaceutical Co., Ltd. Camptothecin drug having high-stability hydrophilic connecting unit and conjugate thereof
AU2021317378A1 (en) 2020-07-27 2023-03-09 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Anti-CD79B antibody-drug conjugate, and preparation method therefor and pharmaceutical use thereof
US20230405141A1 (en) * 2020-08-13 2023-12-21 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. Antibody drug conjugate
MX2022003397A (es) * 2020-09-15 2022-05-26 Baili Bio Chengdu Pharmaceutical Co Ltd Un farmaco de camptotecina y su conjugado de anticuerpo del mismo.
CN114249798A (zh) * 2020-09-24 2022-03-29 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种依喜替康类似物的结晶形式及其制备方法
IL301658A (en) 2020-09-30 2023-05-01 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co Ltd Drug compound consisting of antibody-drug conjugate and use of drug composition
WO2022068878A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07 映恩生物制药（苏州）有限公司 一种抗肿瘤化合物及其制备方法和应用
CN114456186B (zh) * 2020-10-12 2023-10-20 成都百利多特生物药业有限责任公司 一种喜树碱类衍生物及其配体-药物偶联物
CN113943310A (zh) * 2020-10-12 2022-01-18 四川百利药业有限责任公司 一种氘代的喜树碱衍生物及其抗体药物偶联物
CA3196940A1 (en) 2020-10-14 2022-04-21 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-her3 antibody and anti-her3 antibody-drug conjugate and medical use thereof
WO2022099762A1 (zh) * 2020-11-12 2022-05-19 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 一种抗体偶联物中间体及其制备方法
KR20230118891A (ko) * 2020-12-11 2023-08-14 위겐 바이오메더슨 테크널러지 (상하이) 컴퍼니 리미티드 신규한 캄프토테신 유도체, 이를 포함하는 조성물 및이의 용도
CN114652853B (zh) * 2020-12-22 2024-09-13 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗il-4r抗体-药物偶联物及医药用途
CN116888123A (zh) * 2021-02-09 2023-10-13 微境生物医药科技(上海)有限公司 用于adc制备的喜树碱衍生物
WO2022194257A1 (zh) * 2021-03-17 2022-09-22 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种喜树碱衍生物的制备方法
CN117157304A (zh) * 2021-04-15 2023-12-01 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种依喜替康类似物的结晶形式及其制备方法
TW202302649A (zh) 2021-04-26 2023-01-16 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 抗ｎｅｃｔｉｎ－４抗體和抗ｎｅｃｔｉｎ－４抗體－藥物偶聯物及其醫藥用途
CN113816969B (zh) * 2021-04-30 2024-01-16 联宁（苏州）生物制药有限公司 依喜替康类化合物、其抗体药物偶联物及其应用
IL308246A (en) * 2021-05-07 2024-01-01 Alx Oncology Inc Exataxane derivatives and antibody-drug conjugates thereof
US11806405B1 (en) 2021-07-19 2023-11-07 Zeno Management, Inc. Immunoconjugates and methods
KR20240038735A (ko) 2021-07-21 2024-03-25 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 항-trop2 항체 약물 접합체를 함유하는 약제학적 조성물 및 이의 적용
CN115850291A (zh) * 2021-09-24 2023-03-28 石药集团巨石生物制药有限公司 喜树碱衍生物及其用途
WO2023051814A1 (zh) 2021-09-30 2023-04-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用
TW202330040A (zh) * 2021-10-14 2023-08-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 抗ｈｅｒ２抗體藥物偶聯物和酪胺酸激酶抑制劑聯合在製備治療腫瘤的藥物中的用途
KR20240101682A (ko) 2021-11-15 2024-07-02 시스트이뮨, 인코포레이티드 이중특이 항체-캄프토테신 약물 접합체 및 이의 약학적 용도
US11814394B2 (en) 2021-11-16 2023-11-14 Genequantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. Exatecan derivatives, linker-payloads, and conjugates and thereof
WO2023088382A1 (zh) 2021-11-17 2023-05-25 石药集团巨石生物制药有限公司 抗体-药物偶联物及其用途
WO2023098889A1 (zh) 2021-12-03 2023-06-08 成都百利多特生物药业有限责任公司 抗人Trop2抗体-喜树碱类药物偶联物及其医药用途
KR20240125944A (ko) 2021-12-28 2024-08-20 지앙수 헨그루이 파마슈티컬스 컴퍼니 리미티드 항-ror1 항체 및 항-ror1 항체 약물 접합체 및 이의 의약적 용도
AU2023212240A1 (en) 2022-01-26 2024-07-11 Shanghai Mabgen Biotech Ltd. Pharmaceutical composition comprising anti-cd79b antibody-drug conjugate and use thereof
AU2023213783A1 (en) * 2022-01-28 2024-08-15 Duality Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Her3 antibody-drug conjugate and use thereof
JP2024520988A (ja) 2022-03-25 2024-05-28 バイリ－バイオ（チェンドゥ）ファーマスーティカル シーオー．，エルティーディー． Ｄｎａ毒性二量体及びその複合体
EP4319822A4 (en) * 2022-04-12 2024-10-16 Minerva Biotechnologies Corp ANTIVARIABLE MUC1* ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2023207773A1 (en) * 2022-04-29 2023-11-02 Shanghai Micurx Pharmaceutical Co., Ltd. Ligand-drug conjugate of camptothecin analogs, intermediates, preparation method therefor, pharmaceutical composition and application thereof
WO2023221971A1 (zh) * 2022-05-16 2023-11-23 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种含抗Nectin-4抗体药物偶联物的药物组合物及其用途
WO2023236949A1 (zh) * 2022-06-07 2023-12-14 映恩生物制药（苏州）有限公司 抗b7h3抗体-药物偶联物及其用途
WO2023237050A1 (en) * 2022-06-09 2023-12-14 Beigene, Ltd. Antibody drug conjugates
WO2024008102A1 (en) * 2022-07-05 2024-01-11 Wuxi Xdc (Shanghai) Co., Ltd. Linker for conjugation
US20240116945A1 (en) 2022-09-02 2024-04-11 Merck Sharp & Dohme Llc Exatecan-derived topoisomerase-1 inhibitors pharmaceutical compositions, and uses thereof
WO2024067811A1 (en) * 2022-09-30 2024-04-04 Beigene, Ltd. Ligand-drug conjugate of exatecan analogue, and medical use thereof
WO2024091437A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Merck Sharp & Dohme Llc Exatecan-derived adc linker-payloads, pharmaceutical compositions, and uses thereof
WO2024109840A1 (zh) * 2022-11-22 2024-05-30 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 稠环类化合物及其偶联物和用途
WO2024114626A1 (zh) * 2022-11-28 2024-06-06 苏州盛迪亚生物医药有限公司 抗her3抗体药物偶联物组合物及其医药用途
WO2024131835A1 (en) * 2022-12-20 2024-06-27 Hansoh Bio Llc Ligand-cytotoxicity drug conjugates and pharmaceutical uses thereof
WO2024153229A1 (zh) * 2023-01-19 2024-07-25 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗her2抗体药物偶联物治疗乳腺癌
WO2024199462A1 (zh) * 2023-03-30 2024-10-03 上海齐鲁制药研究中心有限公司 依喜替康衍生物及其抗体药物偶联物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014057687A1 (ja) * 2012-10-11 2014-04-17 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲート
WO2015146132A1 (ja) * 2014-03-26 2015-10-01 第一三共株式会社 抗ｃｄ９８抗体－薬物コンジュゲート
WO2015155976A1 (ja) * 2014-04-10 2015-10-15 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体－薬物コンジュゲート

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US6221335B1 (en) * 1994-03-25 2001-04-24 Isotechnika, Inc. Method of using deuterated calcium channel blockers
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US6504029B1 (en) 1995-04-10 2003-01-07 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Condensed-hexacyclic compounds and a process therefor
US6440710B1 (en) * 1998-12-10 2002-08-27 The Scripps Research Institute Antibody-catalyzed deuteration, tritiation, dedeuteration or detritiation of carbonyl compounds
ES2193921T3 (es) * 1999-12-03 2003-11-16 Pfizer Prod Inc Compuestos de sulfamoilheteroaril-pirazol como agentes antinflamatorios/analgesicos.
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
US7090843B1 (en) 2000-11-28 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2003000657A1 (fr) 2001-06-20 2003-01-03 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. Derives de diamine
US7659241B2 (en) 2002-07-31 2010-02-09 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
TW200413273A (en) * 2002-11-15 2004-08-01 Wako Pure Chem Ind Ltd Heavy hydrogenation method of heterocyclic rings
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
BR122018071808B8 (pt) 2003-11-06 2020-06-30 Seattle Genetics Inc conjugado
CA2624179A1 (en) * 2005-10-06 2007-04-12 Auspex Pharmaceuticals, Inc. Deuterated inhibitors of gastric h+, k+-atpase with enhanced therapeutic properties
US7750168B2 (en) * 2006-02-10 2010-07-06 Sigma-Aldrich Co. Stabilized deuteroborane-tetrahydrofuran complex
US8257706B2 (en) 2006-08-25 2012-09-04 Seattle Genetics, Inc. CD30 binding agents and uses thereof
ZA200902161B (en) 2006-10-27 2010-06-30 Genentech Inc Antiobodies and immunoconjugates and uses therefor
CA2859965A1 (en) 2011-12-21 2013-06-27 Ardelyx, Inc. Non-systemic tgr5 agonists
ES2617536T3 (es) 2012-01-13 2017-06-19 The General Hospital Corporation Compuestos anestésicos y métodos relacionados de uso
ES2690315T3 (es) 2012-06-15 2018-11-20 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation Compuestos de imidazol y triazol como inhibidores de DGAT-1
US9872924B2 (en) * 2012-10-19 2018-01-23 Daiichi Sankyo Company, Limited Antibody-drug conjugate produced by binding through linker having hydrophilic structure
AU2013360335B2 (en) * 2012-12-13 2017-12-07 Immunomedics, Inc. Dosages of immunoconjugates of antibodies and SN-38 for improved efficacy and decreased toxicity
JP5998289B2 (ja) 2014-01-31 2016-09-28 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体−薬物コンジュゲート
EP3954373A1 (en) * 2014-10-07 2022-02-16 Immunomedics, Inc. Neoadjuvant use of antibody-drug conjugates
WO2016127790A1 (zh) 2015-02-15 2016-08-18 江苏恒瑞医药股份有限公司 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用
US20170224837A1 (en) * 2016-02-10 2017-08-10 Immunomedics, Inc. Combination of abcg2 inhibitors with sacituzumab govitecan (immu-132) overcomes resistance to sn-38 in trop-2 expressing cancers
WO2019034177A1 (zh) 2017-08-18 2019-02-21 四川百利药业有限责任公司 具有两种不同药物的抗体药物偶联物
MX2021003446A (es) * 2018-09-30 2021-06-15 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd Conjugado analogo del anticuerpo anti-bth3 y exatecan, y uso medicinal del mismo.
WO2020244657A1 (zh) * 2019-06-06 2020-12-10 上海翰森生物医药科技有限公司 抗b7-h4抗体-药物偶联物及其医药用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014057687A1 (ja) * 2012-10-11 2014-04-17 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲート
WO2015146132A1 (ja) * 2014-03-26 2015-10-01 第一三共株式会社 抗ｃｄ９８抗体－薬物コンジュゲート
WO2015155976A1 (ja) * 2014-04-10 2015-10-15 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体－薬物コンジュゲート

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CLINICAL CANCER RESEARCH, vol. 22(20), JPN7023003509, 2016, pages 5097 - 5108, ISSN: 0005154120 *
薬学雑誌, vol. 137(5), JPN7023003508, 2017, pages 545 - 550, ISSN: 0005154119 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20210066833A (ko) 2021-06-07
BR112021004656A2 (pt) 2021-06-01
ZA202102544B (en) 2023-10-25
WO2020063676A1 (zh) 2020-04-02
AU2019349207A1 (en) 2021-04-08
MX2021003382A (es) 2021-05-27
CN112512591B (zh) 2024-08-16
CN112512591A (zh) 2021-03-16
TW202027795A (zh) 2020-08-01
JP7558156B2 (ja) 2024-09-30
EP3858386A1 (en) 2021-08-04
EP3858386A4 (en) 2022-10-12
TWI826543B (zh) 2023-12-21
CA3114137A1 (en) 2020-04-02
US20210353764A1 (en) 2021-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI826543B (zh) 依喜替康類似物的配體-藥物偶聯物、其製備方法及其應用
JP7408646B2 (ja) 抗－ｂ７ｈ３抗体－エキサテカンアナログコンジュゲート及びその医薬用途
JPWO2020063676A5 (ja)
WO2021190581A1 (zh) 一种含抗体药物偶联物的药物组合物及其用途
WO2021190602A1 (zh) 一种抗体药物偶联物的制备方法
WO2021190586A1 (zh) B7h3抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
WO2021115426A1 (zh) 抗密蛋白抗体药物偶联物及其医药用途
WO2021058027A1 (zh) 吡咯并杂芳基衍生物或其偶联物、其制备方法及其应用
CN113121639B (zh) 澳瑞他汀类似物及其偶联物、其制备方法及其应用
WO2023207710A1 (zh) 一类抗体药物偶联物、其药物组合物及应用
EP4374879A1 (en) Drug conjugate of eribulin derivative
CN115298186B (zh) 抗psma抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
WO2021121204A1 (zh) 抗cea抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
RU2793316C2 (ru) Конъюгат лиганд-лекарственное средство аналога экзатекана, способ его получения и его применение
RU2785664C2 (ru) Конъюгат антитело к b7h3-аналог экзатекана и его применение в медицине
CN118806924A (zh) 依喜替康类似物的配体-药物偶联物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
A524 Written submission of copy of amendment under article 19 pct

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524

Effective date: 20211209

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220921

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20220921

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20230830

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230919

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20231215

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240305

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240603

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20240903

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20240917

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7558156

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150