WO2023051814A1 - 吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用 - Google Patents

吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
WO2023051814A1
WO2023051814A1 PCT/CN2022/123462 CN2022123462W WO2023051814A1 WO 2023051814 A1 WO2023051814 A1 WO 2023051814A1 CN 2022123462 W CN2022123462 W CN 2022123462W WO 2023051814 A1 WO2023051814 A1 WO 2023051814A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkyl
group
antibody
cycloalkyl
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Application number
PCT/CN2022/123462
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
许建烟
蔡晓锋
屈博磊
章瑛
陈晓曦
贺峰
陶维康
祝令建
洪敏�
黄建
李燕兵
徐孝浪
胡志鹏
薛州洋
尤凌峰
Original Assignee
江苏恒瑞医药股份有限公司
上海恒瑞医药有限公司
成都盛迪医药有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 江苏恒瑞医药股份有限公司, 上海恒瑞医药有限公司, 成都盛迪医药有限公司 filed Critical 江苏恒瑞医药股份有限公司
Priority to AU2022353890A priority Critical patent/AU2022353890A1/en
Priority to CA3232764A priority patent/CA3232764A1/en
Publication of WO2023051814A1 publication Critical patent/WO2023051814A1/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material

Definitions

  • Rx is H or hydroxyl
  • R 5 is H, halogen or alkyl
  • R 8 is an alkyl group; preferably, R 8 is a C 1-6 alkyl group; more preferably, R 8 is a methyl group;
  • R 3 and R 4 form a ring together with the atoms they are connected to; preferably, R 3 and R 4 form a 3-membered carbocyclic ring together with the atoms they are connected to;
  • R 7 is an alkyl group; preferably, R 7 is a C 1-6 alkyl group; more preferably, R 7 is a methyl group;
  • the wavy line Indicates binding to Asn at position 297 of the Pc heavy chain
  • the present disclosure provides a Pc-(sugar chain N297), the structure of which is as follows:
  • L d is -NH-R a -CH 2 OC(O)-, -NH-CH 2 OR b -C(O)- or a bond;
  • R 20 is alkyl or cycloalkyl
  • R 13 is L a' -L b -L c -L d -:
  • X' is an alkylene group; preferably, X' is a C 1-6 alkylene group; more preferably, X' is a pentylene group; Y' is an oxygen atom;
  • Typical compounds disclosed in this disclosure include, but are not limited to:
  • peptide refers to a molecule composed of two or more amino acid molecules connected to each other by peptide bonds.
  • the starting material 1i in the ninth step of Example 2-11 was replaced with 4a (54 mg, 0.10 mmol), and the title product 4b (50 mg, yield: 80%) was obtained under the same reaction conditions.

Abstract

吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用。一种式(DL)的化合物及其抗体-药物偶联物，含有其的药物组合物，以及其在制备治疗癌症的药物中的用途。其中通式(DL)中的各基团如说明书中所定义。

Description

吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用 技术领域
本公开涉及一类吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物，其抗体-药物偶联物，及其医药用途。
背景技术
吡咯并苯并二氮杂卓(PBDs)是一类序列选择性DNA小沟结合剂，可以阻止DNA与转录因子的结合，引起细胞复制停滞，最终导致细胞死亡。其发挥作用不依赖细胞的复制周期，引起的DNA损伤较难修复，表现出较大的细胞毒性。PBD单体的第一个例子，天然抗肿瘤抗生素蒽霉素(Anthramycin)是在20世纪60年代被发现的。
当PBD形成二聚体结构(PBD二聚体)时可极大提高细胞毒性。它用于抗体药物偶联物中的报道有很多(WO2014057074，WO2014057119，WO2015052321，WO2016166307，WO2017004026，WO2019046859，WO2019065964等)。然而，更安全、更有效的PBD ADCs仍然在临床上有着急切的需求。
发明内容
本公开提供了一种吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其抗体-药物偶联物。
本公开提供一种抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其如下式结构所示：
Figure PCTCN2022123462-appb-000001
其中，Pc为抗体，该抗体的糖链可任选地被重构；
L为连接子；Pc通过其氨基酸或糖链与L结合，
y为约1至约10的载药量；
D如式(D)所示：
Figure PCTCN2022123462-appb-000002
其中：
R 1为H、氧代基、卤素或烷基；
R 2为H、烷基或
Figure PCTCN2022123462-appb-000003
W为H、-C(O)R t或-C(O)NH-R t，G为葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；R t为烷基或烷氧基烷基；
R 3为H或烷基；
R 4为H或烷基；
R 5为H、卤素或烷基；
或者R 3和R 4与其所连接的原子一起成环，或R 4和R 5与其所连接的原子一起成环；
R 6为H或烷基；
R 7为烷基或环烷基；或者R 6和R 7与其所连接的原子一起成环；
R 8为烷基或环烷基；
R x为H或羟基；
X为亚烷基或-(CH 2) m-X 1-(CH 2) n-；
X 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂环基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂环基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
Y为键、氮原子、氧原子或硫原子；
A为烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 9、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；
R 9为H、烷基和羟烷基；
m为1，2或3；n为1，2或3；
条件是当X为亚烷基时，1)R 1为氧代基，或2)R x为H，或3)R 4和R 5与其所连接的原子一起成环，或4)R 6和R 7与其所连接的原子一起成环，或5)R 7和/或R 8为环烷基；或6)A不是烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其如下式结构所示：
Figure PCTCN2022123462-appb-000004
其中，Pc为抗体，该抗体的糖链可任选地被重构；
L为连接子；Pc通过其氨基酸或糖链与L结合，
y为约1至约10的载药量；
D如式(D)所示：
Figure PCTCN2022123462-appb-000005
其中：
R 1为H、氧代基、卤素或烷基；
R 2为H、烷基或
Figure PCTCN2022123462-appb-000006
W为H、-C(O)R t或-C(O)NH-R t，G为葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；R t为烷基或烷氧基烷基；
R 3为H或烷基；
R 4为H或烷基；
R 5为H、卤素或烷基；
或者R 3和R 4与其所连接的原子一起成环，或R 4和R 5与其所连接的原子一起成环；
R 6为H或烷基；
R 7为烷基或环烷基；或者R 6和R 7与其所连接的原子一起成环；
R 8为烷基或环烷基；
R x为H或羟基；
X为亚烷基或-(CH 2) m-X 1-(CH 2) n-；
X 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂环基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂环基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
Y为键、氮原子、氧原子或硫原子；
A为烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 9、环烷基、芳基和杂环基；
R 9为H、烷基和羟烷基；
m为1，2或3；n为1，2或3；
条件是当X为亚烷基时，1)R 1为氧代基，或2)R x为H，或3)R 4和R 5与其所连接的原子一起成环，或4)R 6和R 7与其所连接的原子一起成环，或5)R 7和/或R 8为环烷基；或6)A不是烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R 1为H或氧代基，优选地，R 1为H。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R 2为H或C 1-6烷基，优选地，R 2为H。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R 2如以下结构所示：
Figure PCTCN2022123462-appb-000007
W为H或-C(O)NH-R，G为葡萄糖醛酸苷基；R t为C 1-6烷基或C 1-6烷氧基C 1-6烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R x为羟基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中：
R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子一起形成3元环烷基(3元碳环)；
R 5为H；R 6为H；
R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
X为亚烷基；优选地，X为C 1-12亚烷基；更优选地，X为亚戊基；
Y选自键、氮原子、氧原子或硫原子；优选地，Y为键或硫原子；更优选地，Y为键；
A选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 9、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；优选地，A选自C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自C 1-6羟烷基、C 1-6烷基、C 3-6环烷基C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和-C(O)R 9；
R 9选自H、烷基和羟烷基；优选地，R 9为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子一起形成3元碳环；
R 5为H；R 6为H；
R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
X为亚烷基；优选地，X为C 1-12亚烷基；更优选地，X为亚戊基；
Y选自键、氮原子、氧原子或硫原子；优选地，Y为键或硫原子；更优选地，Y为键；
A选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 9、环烷基、芳基和杂环基；优选地，A选自C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自C 1-6羟烷基、C 1-6烷基和-C(O)R 9；
R 9选自H、烷基和羟烷基；优选地，R 9为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子形成3元碳环；
R 5为H；R 6为H；
R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
X为-(CH 2) m-X 1-(CH 2) n-；
X 1为氧原子、环烷基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；优选地，X 1为氧原子、C 3-6环烷基、吡啶基或苯基；所述的C 3-6环烷基或苯基任选被一个或多个氨基或C 1-6烷基所取代；
m选自1，2或3；n选自1，2或3。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子一起形成3元环烷基(3元碳环)；
X为亚烷基；优选地，X为C 1-6亚烷基；更优选地，X为亚戊基；
R 6为H或烷基；优选地，R 6为H或C 1-6烷基；
R 7为烷基或环烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基或C 3-6环烷基；
或者R 6和R 7与其所连接的原子一起成环；优选地，R 6和R 7与其所连接的原子一起形成4-6元环；
R 8为烷基或环烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基或C 3-6环烷基；
条件是，R 7和R 8不同时为烷基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中：
R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
R 3为H；
R 4和R 5与其所连接的原子一起成环；优选地，R 4和R 5与其所连接的原子一起形成3元环烷基(3元碳环)；
R 6为H；
R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
X为亚烷基；优选地，X为C 1-12亚烷基；更优选地，X为亚戊基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L为-L a-L b-L c-L d-，
L a选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000008
其中星号*表示与L b结合，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000009
表示与Pc的重构的糖链结合；
L b选自-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-、-C(O)-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2O) 2-CH 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-NH-C(O)-(CH 2CH 2O) 4-CH 2CH 2-C(O)-、-CH 2-OC(O)-和-OC(O)-；
L c为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸(F)、丙氨酸(A)、脯氨酸(P)、异亮氨酸(I)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、赖氨酸(K)、瓜氨酸(Cit)、丝氨酸(S)、谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 3-7环烷基；
L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-、-NH-CH 2O-R b-C(O)-或键；
R a为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
R b为C 1-6烷基或C 3-7环烷基，所述C 1-6烷基和C 3-7环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 3-7环烷基、5-6元杂环基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L b为-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L c为-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVCit-、-GGVK-和-GGPL-；优选为-GGVA-。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中：
L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-，R a为苯基。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述抗体Pc为与肿瘤细胞结合且能被吞入肿瘤细胞内的抗体，优选自抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗Claudin18.2抗体、抗ROR1抗体、抗CD19抗体、抗Trop2抗体、抗CD79b抗体、抗SLC44A4抗体和抗Mesothelin抗体。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述y为1-8。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述y为1-4，优选自约1、约2、约3和约4，更优选自约2。y为抗体药物平均比值，可以为小数或整数。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述抗体从与抗体的Asn297结合的糖链与L结合，所述糖链为N297糖链。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其为如下结构：
Pc-(N297糖链)-[L-D]y
所述的N297糖链为重构的糖链，结合于Pc重链第297位的Asn；抗体Pc有两条重链，因此有2个第297位的Asn，所述的N297糖链可以有2个分别结合于Pc重链的2个N297，也可以只有1个结合于Pc重链的1个N297；
其中y为1-4，优选为1-2；
Pc、L、D如前所定义。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述糖链结构选自N297-(Fuc)SG1、N297-(Fuc)SG2、N297-(Fuc)SG3、N297-(Fuc)SG4和N297-(Fuc)SG5：
Figure PCTCN2022123462-appb-000010
结构简写如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000011
结构简写如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000012
结构简写如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000013
Figure PCTCN2022123462-appb-000014
结构简写如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000015
结构简写如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000016
式中，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000017
表示与Pc重链第297位的Asn结合，
L(PEG)表示-(CH 2CH 2O)qCH 2CH 2-NH-，q选自0-20，优选自1-10，右端的氨基表示与N297糖链的β-Man支链的1-3链侧或/和1-6链侧的非还原末端的N-乙酰基神经氨酸(NeuAc)的2位羧酸进行酰胺键合；
星号*表示与所述连接子L结合；优选地，星号*表示与各结构式连接子中的三唑环上的1位或3位的氮原子结合；
Gal代表半乳糖；GlcNAc代表N-乙酰基半乳糖；Man代表甘露糖；Fuc代表岩藻糖；NeuAc代表N-乙酰基神经氨酸。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物，所述的糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000018
其中q选自2或3；
Gal、GlcNAc、Man、Fuc、NeuAc如前所定义。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物，所述的糖链结构为：
Figure PCTCN2022123462-appb-000019
式中，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000020
表示与Pc重链第297位的Asn结合；
P 1、P 2各自独立地选自羟基、*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；
s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；
条件是，P 1、P 2不同时为羟基或*-(CH 2CH 2O)s 1-；
星号*表示与所述连接子L结合；优选地，星号*表示与各结构式连接子中的三唑环上的1位或3位的氮原子结合。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物，所述的N297糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000021
Figure PCTCN2022123462-appb-000022
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其选自以下的组：
组1：
Figure PCTCN2022123462-appb-000023
组2：
Figure PCTCN2022123462-appb-000024
组3：
Figure PCTCN2022123462-appb-000025
Figure PCTCN2022123462-appb-000026
组4：
Figure PCTCN2022123462-appb-000027
组5：
Figure PCTCN2022123462-appb-000028
组6：
Figure PCTCN2022123462-appb-000029
组7：
Figure PCTCN2022123462-appb-000030
组8：
Figure PCTCN2022123462-appb-000031
Figure PCTCN2022123462-appb-000032
组9：
Figure PCTCN2022123462-appb-000033
组10：
Figure PCTCN2022123462-appb-000034
组11：
Figure PCTCN2022123462-appb-000035
组12：
Figure PCTCN2022123462-appb-000036
组13：
Figure PCTCN2022123462-appb-000037
组14：
Figure PCTCN2022123462-appb-000038
Figure PCTCN2022123462-appb-000039
组15：
Figure PCTCN2022123462-appb-000040
组16：
[援引加入(细则20.6) 27.12.2022]　
Figure WO-DOC-FIGURE-2
和/或
Figure WO-DOC-FIGURE-1
;
组17：
Figure PCTCN2022123462-appb-000042
组18：
Figure PCTCN2022123462-appb-000043
其中y选自1-4，优选1-2；
所述的N297糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000044
Figure PCTCN2022123462-appb-000045
式中，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000046
表示与Pc重链第297位的Asn结合，
L(PEG)表示-(CH 2CH 2O)qCH 2CH 2-NH-，q选自0-20，优选自1-10；右端的氨基表示与N297糖链的β-Man支链的1-3链侧或/和1-6链侧的非还原末端的N-乙酰基神经氨酸的2位羧酸进行酰胺键合；
星号*表示与所述连接子L结合；优选地，星号*表示与各结构式连接子中的三唑环上的1位或3位的氮原子结合；
或者，所述的糖链为N297糖链，糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000047
式中，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000048
表示与抗体Pc重链第297位的Asn结合，可以是结合两个第297位的Asn位点，也可以是结合一个第297位的Asn位点；
P 1、P 2各自独立地选自羟基、*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；
星号*表示与所述连接子L结合；优选地，星号*表示与各结构式连接子中的三唑环上的1位或3位的氮原子结合；
s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；s 1，s 2，s 3，s 4按常规理解为整数；
条件是，P 1、P 2不同时为羟基或*-(CH 2CH 2O)s 1-；
优选地，所述的糖链为N297糖链，糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000049
Figure PCTCN2022123462-appb-000050
所述的Pc如前所定义，优选地，其中所述抗体选自抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗B7H3抗体、抗Claudin18.2抗体和抗CD19抗体；
更优选地，所述的抗HER2抗体包含序列如SEQ ID NO:1所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:2所示的重链；所述的抗Claudin18.2抗体包含序列如SEQ ID NO:3所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:4所示的重链；所述的抗HER3抗体包含序列如SEQ ID NO:5所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:6所示的重链。
在一些实施方案中，前述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其选自以下的组：
组2：
Figure PCTCN2022123462-appb-000051
组3：
Figure PCTCN2022123462-appb-000052
组4：
Figure PCTCN2022123462-appb-000053
Figure PCTCN2022123462-appb-000054
组8：
Figure PCTCN2022123462-appb-000055
组9：
Figure PCTCN2022123462-appb-000056
组11：
Figure PCTCN2022123462-appb-000057
所述的Pc如前所定义，优选地，其中所述Pc抗体选自抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗Claudin18.2抗体和抗CD19抗体；
更优选地，所述的抗HER2抗体包含序列如SEQ ID NO:1所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:2所示的重链；所述的抗Claudin18.2抗体包含序列如SEQ ID NO:3所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:4所示的重链；所述的抗HER3抗体包含序列如SEQ ID NO:5所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:6所示的重链；
其中y为1-2；
所述的N297糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000058
其中q选自2或3，
式中，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000059
表示与Pc重链第297位的Asn结合，可以是结合2个第297位的Asn位点，也可以是结合1个第297位的Asn位点；
右端的氨基表示与N297糖链的β-Man支链的1-3链侧或/和1-6链侧的非还原末端的N-乙酰基神经氨酸的2位羧酸进行酰胺键合；
星号*表示与所述连接子L结合；具体地，星号*表示与各结构式连接子中的三唑环上的1位或3位的氮原子结合；
或者，所述的N297糖链结构选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000060
式中，波浪线
Figure PCTCN2022123462-appb-000061
表示与Pc重链第297位的Asn结合，可以是结合2个第297位的Asn位点，也可以是结合1个第297位的Asn位点；星号*表示与所述连接子L结合，具体地，星号*表示与各结构式连接子中的三唑环上的1位或3位的氮原子结合。
在另一方面，本公开提供一种糖链结构，选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000062
式中，q选自0-20；优选地，q选自1-10；更优选，q选自2或3；其中，Oxa代表噁唑啉环。
在另一方面，本公开提供一种前述糖链的制备方法，其包含以下步骤：
Figure PCTCN2022123462-appb-000063
Figure PCTCN2022123462-appb-000064
Figure PCTCN2022123462-appb-000065
简写如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000066
式中，q选自0-20，优选自1-10；
其中，
第一步，化合物A与含有叠氮官能团的化合物反应得到化合物B；所述的化合物B为化合物B1与B2的混合物；
第二步，化合物B经反应得到化合物C；所述的化合物C为化合物C1与C2的混合物。
在一些实施方案中，前述的第一步反应使用了偶联剂，所述的偶联剂选自 HATU或DMTMM；所述反应的pH值范围为约4.5-约8.0；所述反应温度为约20℃-约60℃；所述的含有叠氮官能团的化合物选自11-叠氮基-3,6,9-三氧杂十一烷-1-胺或2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺；
前述的第二步反应是在碱性条件下和DMC或CDBMI存在的条件下进行的。
在一些实施方案中，前述的第一步反应所用的偶联剂为HATU；所述反应的pH值范围为约7.0-约8.5；所述反应的温度为20℃-约30℃；所述的含有叠氮官能团的化合物为11-叠氮基-3,6,9-三氧杂十一烷-1-胺；
前述的第二步反应是在三乙胺和DMC存在的条件下进行的。
在一些实施方案中，前述的第一步反应所用的偶联剂为DMTMM；所述反应的pH值的范围为约4.5-约6.5；所述反应的温度为45℃-约65℃；所述的含有叠氮官能团的化合物为2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺；
前述的第二步反应是在磷酸钾缓冲液和CDBMI存在的条件下进行的。
在另一方面，本公开提供一种式(OLS)所示的二糖化合物：
Figure PCTCN2022123462-appb-000067
P 3、P 4各自独立地选自羟基、N 3-(CH 2CH 2O)s 1-和N 3-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的N 3-(CH 2CH 2O)s 1-和N 3-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；
s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；
条件是，P 3、P 4不同时为羟基或N 3-(CH 2CH 2O)s 1-；
优选地，式(OLS)所示的二糖化合物选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000068
Figure PCTCN2022123462-appb-000069
在另一方面，本公开提供一种去糖基化抗体Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)，结构如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000070
分子式如：
Figure PCTCN2022123462-appb-000071
Pc如前所定义。
在另一方面，本公开提供一种Pc-(糖链N297)，结构如下：
Figure PCTCN2022123462-appb-000072
Pc如前所定义；
P 3、P 4各自独立地选自羟基、N 3-(CH 2CH 2O)s 1-和N 3-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的N 3-(CH 2CH 2O)s 1-和N 3-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；
s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；
条件是，P 3、P 4不同时为羟基或N 3-(CH 2CH 2O)s 1-。
在另一方面，本公开提供一种糖链重构抗体的制备方法，包括：
Pc(WT)→Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)→Pc-(糖链N297)
第一步，抗体Pc(WT)的去糖基化，在酸性条件下加入糖基转移酶进行反应，得到去糖基化抗体；所述的去糖基化抗体为Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)；
第二步，糖链的重构，将Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)在酸性条件下，在糖基转移酶的作用下，和式(OLS)所示的二糖化合物进行反应，在N297引入带有叠氮基的二糖糖链，得到糖链重构抗体Pc-(糖链N297)；
优选地，所述的酸性条件为pH6.5的PBS缓冲液；所述的糖基转移酶为Endo S酶。
在另一方面，本公开提供一种抗体-药物偶联物的制备方法，包括：
Pc(WT)→Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)→Pc-(糖链N297)
→Pc-(N297糖链)-[L-D]y
第一步，抗体Pc(WT)的去糖基化，在酸性条件下加入糖基转移酶进行反应，得到去糖基化抗体；所述的去糖基化抗体为Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)；优选地，所述的酸性条件为pH6.5的PBS缓冲液；所述的糖基转移酶为Endo S酶；
第二步，糖链的重构，将Pc-GlcNAc(Fucɑ1,6)在酸性条件下，在糖基转移酶的作用下，和式(OLS)所示的二糖化合物进行反应，在N297引入带有叠氮基的二糖糖链，得到糖链重构抗体Pc-(糖链N297)；优选地，所述的酸性条件为pH6.5的PBS缓冲液；所述的糖基转移酶为Endo S酶；
第三步，将上述的糖链重构抗体Pc-(糖链N297)和式(DL)所示的化合物在碱性条件下进行反应，得到抗体药物偶联物Pc-(N297糖链)-[L-D]y；优选地，所述的碱性条件为pH7.4的PBS缓冲液。
在另一方面，本公开提供一种式(DL)所示的化合物或其可药用的盐：
Figure PCTCN2022123462-appb-000073
其中：
R 11为H、氧代基、卤素或烷基；
R 12为H、烷基或
Figure PCTCN2022123462-appb-000074
W为H、-C(O)R t1或-C(O)NH-R t1，G选自葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；R t1选自烷基或烷氧基烷基；
R 13为L a’-L b-L c-L d-：
L a‘为
Figure PCTCN2022123462-appb-000075
L b选自-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-、-C(O)-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2O) 2-CH 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-NH-C(O)-(CH 2CH 2O) 4-CH 2CH 2-C(O)-、-CH 2-OC(O)-和-OC(O)-；
L c为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 3-7环烷基；
L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-、-NH-CH 2O-R b-C(O)-或键；
R a为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
R b为C 1-6烷基或C 3-7环烷基，所述C 1-6烷基和C 3-7环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 3-7环烷基、5-6元杂环基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
R 14为H、羟基或烷氧基；
或者R 13和R 14与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)；
R 15为H或烷基；
R 16为H或烷基；
R 17为H、卤素或烷基；
或者R 15和R 16与其所连接的原子一起成环，或R 16和R 17与其所连接的原子 一起成环；
R 18为H或烷基；
R 19为烷基或环烷基；或者R 18和R 19与其所连接的原子一起成环；
R 20为烷基或环烷基；
X’为亚烷基或-(CH 2) m’-X’ 1-(CH 2) n’-；
X’ 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂环基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂环基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
Y’为键、氮原子、氧原子或硫原子；
A’为烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 21、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；
R 21为H、烷基和羟烷基；
m'为1，2或3；n’为1，2或3；
条件是当X’为亚烷基时，1)R 11为氧代基，或2)R 14为H，或3)R 16和R 17与其所连接的原子一起成环，或4)R 18和R 19与其所连接的原子一起成环，或5)R 19和/或R 20为环烷基；或6)A’不是烷基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中R 13和R 14与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中
R 13为L a’-L b-L c-L d-：
L a’为
Figure PCTCN2022123462-appb-000076
L b选自-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-、-C(O)-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2O) 2-CH 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-NH-C(O)-(CH 2CH 2O) 4-CH 2CH 2-C(O)-、-CH 2-OC(O)-和-OC(O)-；
L c为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、 C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 3-7环烷基；
L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-、-NH-CH 2O-R b-C(O)-或键；
R a为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
R b为C 1-6烷基或C 3-7环烷基，所述C 1-6烷基和C 3-7环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 3-7环烷基、5-6元杂环基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 14为H或羟基；优选地，R 14为羟基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 11为H或氧代基，优选地，R 11为H。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 12为H、氧代基或C 1-6烷基，优选地，R 12为H。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 12如以下结构所示：
Figure PCTCN2022123462-appb-000077
W为H或-C(O)NH-R t1，G为葡萄糖醛酸苷基；R t1为C 1-6烷基或C 1-6烷氧基C 1-6烷基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中
R 11为H或烷基；优选地，R 11为H或C 1-6烷基；
R 15和R 16与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
R 17为H；R 18为H；
R 19是烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基；
R 20是烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基；
X’为亚烷基；优选地，X’为C 1-6亚烷基；更优选地，X’为亚戊基；
Y’选自键、氮原子、氧原子或硫原子；优选地，Y’为键或硫原子；更优选地，Y’为键；
A’为环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 21、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基； 优选地，A’选自C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自C 1-6羟烷基、C 1-6烷基、C 3-6环烷基C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和-C(O)R 21；
R 21选自H、烷基和羟烷基；优选地，R 21为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中：
R 11为H或烷基；优选地，R 11为H或C 1-6烷基；
R 15和R 16与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
R 17为H；R 18为H；
R 19是烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基；
R 20是烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基；
X’为-(CH 2) m’-X’ 1-(CH 2) n’-；
X’ 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；优选地，X’ 1为氧原子、C 3-6环烷基、吡啶基或苯基；所述的C 3-6环烷基、吡啶基或苯基任选被一个或多个氨基或C 1-6烷基所取代；
Y’为氧原子；
A’为烷基；优选地A’为C 1-6烷基；
m'选自1，2或3；n’选自1，2或3。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中：
R 11为H或烷基；优选地，R 11为H或C 1-6烷基；
R 15和R 16与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
R 17为H；
R 18为H或烷基；优选地，R 18为H或C 1-6烷基；
R 19为烷基或环烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基；
或者R 18和R 19与其所连接的原子一起成环；优选地，R 18和R 19与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
R 20为烷基或环烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基；
X’为亚烷基；优选地，X’为C 1-6亚烷基；更优选地，X’为亚戊基；
Y’为氧原子；
A’为烷基；优选地A’为C 1-6烷基；
条件是，R 19和R 20不同时为烷基。
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其中：
R 11为H或C 1-6烷基；优选地，R 11为H；
R 15为H；
R 16和R 17与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
R 18为H；
R 19是烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基；
R 20是烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基；
X’为亚烷基；优选地，X’为C 1-6亚烷基；更优选地，X’为亚戊基；Y’为氧原子；
A’为烷基；优选地A’为C 1-6烷基。
本公开公开的典型化合物包括但不限于：
Figure PCTCN2022123462-appb-000078
Figure PCTCN2022123462-appb-000079
Figure PCTCN2022123462-appb-000080
Figure PCTCN2022123462-appb-000081
Figure PCTCN2022123462-appb-000082
Figure PCTCN2022123462-appb-000083
Figure PCTCN2022123462-appb-000084
Figure PCTCN2022123462-appb-000085
在一些实施方案中，前述的化合物或其可药用的盐，其选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000086
Figure PCTCN2022123462-appb-000087
Figure PCTCN2022123462-appb-000088
Figure PCTCN2022123462-appb-000089
Figure PCTCN2022123462-appb-000090
在另一方面，本公开提供一种抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其包含如前任一项所述的式(DL)的化合物或其可药用的盐。
在另一方面，本公开提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在另一方面，本公开提供如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合物用作药物。
在另一方面，本公开提供如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合物，其用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途；
优选地，所述肿瘤选自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
在另一方面，本公开提供如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合 物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途；
优选地，所述肿瘤选自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
另一方面，本公开进一步涉及一种用于治疗和/或预防肿瘤或癌症的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的如前任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或如前任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或如前所述的药物组合物；
优选地，所述肿瘤或癌症选自卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌和食道癌。
可将活性化合物(包括化合物或抗体药物偶联物)制成适合于通过任何适当途径给药的形式，通过常规方法使用一种或多种药学上可接受的载体来配制本公开的组合物。因此，本公开的活性化合物可以配制成用于口服给药、注射(例如静脉内、肌肉内或皮下)给药，吸入或吹入给药的各种剂型。本公开的化合物也可以配制成持续释放剂型，例如片剂、硬或软胶囊、水性或油性混悬液、乳剂、注射液、可分散性粉末或颗粒、栓剂、锭剂或糖浆。
作为一般性指导，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以患者可以以单剂自我给药的方式。本公开化合物或组合物的单位剂量的表达方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。合适的单位剂量可以是0.1mg～1000mg。
本公开的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂、稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或药学上可接受的润湿剂等，此类组合物还可以含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。
药物组合物还可以是用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒提供活性成分， 通过加入水混合分散剂、湿润剂、悬浮剂或防腐剂中的一种或多种。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入受试者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、受试者的年龄、受试者的体重、受试者的健康状况、受试者的行为、受试者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合、疾病的严重性等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
本公开涉及靶向不同癌细胞、传染病生物体的能力改进和/或用于治疗自身免疫性疾病的偶联物，该偶联物包含靶向(结合)部分和属于药物的治疗部分。抗体靶向部分与化合物治疗部分经由增加治疗效力的胞内可裂解的键连接。
具体实施方式
术语
本文所用的术语只是为了描述实施方案的目的，并非旨在进行限制。除非另外定义，本文所用的全部技术术语和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。
除非上下文另外清楚要求，否则在整个说明书和权利要求书中，应将词语“包含”、“具有”、“包括”等理解为具有包含意义，而不是排他性或穷举性意义；也即，“包括但不仅限于”的意义。除非另有说明，“包含”包括了“由……组成”。
本公开所述的“抗体”在本文中以最广意义使用，并且包括不同的抗体结构，包括但不限于，单克隆抗体、多克隆抗体、鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗原结合片段，只要它们显示所需的抗原结合活性和特异性即可。优选地，本公开所述的“抗体”，指具有与天然抗体结构基本类似的结构，包括两条完整的轻链和两条完整的重链。
术语抗体-药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)，指单克隆抗体或者抗体片段通过连接单元与具有生物活性的毒性药物相连。本公开所描述的抗体或抗体片段可以通过任何方式偶联至效应分子。举例来说，抗体或抗体片段可以通过化学或重组方式附接至细胞毒性药物。制备融合物或偶联物的化学方式在本领域中是已知的。用于偶联抗体或抗体片段和药物的方法必须能够连接抗体与细胞毒性药物而不会干扰抗体或抗体片段结合至标靶分子的能力。
术语“药物”是指具有生物学活性的物质，例如细胞毒性剂或免疫调节剂。细胞毒性剂是能在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。本公开的一些实施方案中，药物可以表示为D。
近年来已经报道了通过酶促反应等重构不均匀抗体的糖蛋白质并均匀引入具有官能团的糖链的方法(ACS Chemical Biology2012,7,110，ACS Medicinal ChemistryLetters2016,7,1005)。已经尝试通过使用这种糖链重构技术部位特异性地导入药物，合成均匀的ADC(Bioconjugate Chemistry 2015,26,2233，Angew.Chem.Int.Ed.2016,55,2361-2367，US2016361436)。
本公开中的糖链的重构首先使用水解酶切除附加到蛋白质(抗体等)中的不均匀的糖链而仅仅留下末端的GlcNAc，制备添加了GlcNAc的均匀蛋白质部分(以下称为“受体”)。接着，准备另行制备的任意的糖链(以下称为“供体”)，使用糖基转移酶连结该受体和供体。由此可合成具有任意糖链结构的均匀的糖蛋白。
本公开中，“糖链”是指两个以上的单糖通过糖苷键连接的结构单元。具体的单糖或者糖链有时可以缩写形式表示，例如“GlcNAc－”、“MSG－”。结构式中使用这些缩写描述时，除非另有说明，否则还原末端上归属于与其它结构单元的糖苷键的氧原子或氮原子并不包含在表示该糖链的缩写中。
本公开中，除非另有说明，为方便起见，对作为糖链的基本单元的单糖的记载中，将其环结构中与构成环的氧原子结合且与羟基(或归属于糖苷键的氧原子)直接结合的碳原子标记为1位(仅唾液酸中为2位)。实施例化合物的名称以化学结构整体来标记，并不一定适用该规则。
本公开中，以符号(例如GLY、SG、MSG、GlcNAc等)来表示糖链时，除非有特别定义，否则连还原末端的碳都包含在符号中，但归属于N－或O－糖苷键中的N或O不包含在该符号中。
本公开中，如果没有特别说明，氨基酸的侧链与糖链连接时的部分结构用括号表示侧链部分，例如“(SG－)Asn”这样的表示。
抗体或其功能性片段可从其氨基酸残基(例如半胱氨酸、赖氨酸等)的侧链直接与L结合，或者可从抗体的糖链或重构的糖链与L结合，优选从抗体的糖链或重构的糖链与L结合，更优选从抗体的重构的糖链与L结合。
本公开的抗体的糖链为N连接型糖链或O连接型糖链。
N连接型糖链通过N糖苷键与抗体的氨基酸侧链结合，O连接型糖链通过O糖苷键与抗体的氨基酸侧链结合。
已知IgG在其重链的Fc区中的第297号天冬酰胺残基(以下称为“Asn297或N297”)中具有高度保守的N连接型糖链，有助于抗体分子的活性或动态等(Biotechnol.Prog.,2012,28,608-622,Sanglier-Cianferani,S.,Anal.Chem.,2013,85,715-736)。IgG恒定区中的氨基酸序列高度保守，在Edelman etal.,(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,Vol.63,No.1(May15,1969),pp.78-85)中，各氨基酸被Eu编号(Eu INDEX)确定。例如，Fc区中N连接型糖链加成的Asn297相当于Eu编号中的297位，即使由于分子片段化或区域缺损而实际的氨基酸位置发生变化，也可通过Eu编号表示而唯一地确定氨基酸。
本公开的抗体－药物偶联物中，更优选抗体或其功能性片段从与其Asn297的侧链结合的糖链(以下称为“N297糖链”)与L结合，更优选抗体或其功能性片段从所述N297糖链与L结合，该N297糖链为重构的糖链。
本公开的具有该重构的糖链的抗体称为糖链重构抗体。
SGP为Sialyl Glyco Peptide(唾液酸糖肽或N-乙酰基神经氨酸)的简称，是N连接型复合糖链的代表。可从鸡蛋的蛋黄中根据例如WO2011/0278681所述的方法分离、精制得到SGP。或者从市售所得。
本公开中，将仅在SG(10)的β－Man支链中的任意一方缺失了非还原末端的N-乙酰基神经氨酸的糖链结构称为MSG(9)，将仅在支链的1－3糖链具有唾液酸的糖链称为MSG1，将仅在支链的1－6糖链具有N-乙酰基神经氨酸的糖链称为MSG2。
术语“接头单元”、“连接片段”或“连接单元”是指一端与抗体或抗体片段连接而另一端与药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与药物相连。接头单元可以包含一种或多种接头构件。示例性的接头构件包括6-马来酰亚氨基己酰基、马来酰亚氨基丙酰基、缬氨酸-瓜氨酸、缬氨酸-丙氨酸、丙氨酸-苯丙氨酸、对氨基苄氧羰基、N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯、N-琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1羧酸酯和N-琥珀酰亚氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯。接头可以包括延伸物、间隔物和氨基酸单元，可以通过本领域已知方法合成，诸如US20050238649A1中所记载。接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头、或含二硫化物接头(Chari等，Cancer Research52:127-131(1992)；美国专利No.5208020)。
术语“肽”是指由2个或2个以上氨基酸分子通过肽键相互连接而成的分子。
术语“糖”包括单糖及双糖类之O-糖苷、N-糖苷、S-糖苷及C-糖苷(C-糖基)碳水化合物衍生物，且可来源于天然存在之来源或可来源于合成。示例性地，「糖」包括衍生物，诸如(但不限于)葡糖醛酸、半乳糖醛酸、半乳糖及葡萄糖及其衍生物。
本公开中的葡萄糖醛酸苷基具有如下结构：
Figure PCTCN2022123462-appb-000091
本公开中的半乳糖苷基具有如下结构：
Figure PCTCN2022123462-appb-000092
术语“载药量”或“平均药物结合数”也称为药物抗体比例(Drug-to-Antibody Ratio，DAR)，即抗体-药物偶联物中每个抗体所偶联的药物的平均数量。本公开的抗体－药物偶联物中，与1个抗体分子结合的药物结合数是影响其有效性、安全性的重要因素。抗体－药物偶联物的制造是通过规定反应的原料/试剂的使用量等反应条件以使药物的结合数为恒定而实施的，但是与低分子化合物的化学反应不同，通常得到的是不同数目的药物结合而成的混合物。每一分子抗体的药物结合数以平均值，即平均药物结合数或载药量(DAR：Drug to Antibody Ratio药物与抗体比率)来确定。载药量可在例如每个抗体偶联约1至约10个药物的范围内。在一些实施方式中，载药量在每个抗体偶联约1至约8个药物的范围内，优选在2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、3-4、3-5、5-6、5-7、5-8和6-8的范围内。示例性的，载药量可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物和抗体分子的结合数可控制，作为每个抗体的药物平均结合数(DAR)可结合1～10个范围的吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物，优选1～8个，更优选1～4个。在本公开的实施方式中，载药量可表示为y。可用常规方法如UV/可见光光谱法、质谱、ELISA试验和RP-HPLC测定载药量。本公开的实施方式中，抗体通过其N297糖链与连接子L结合，所述N297糖链结合于抗体重链第297位的Asn。当抗体有2个重链时，抗体的重链有2个第297位的Asn结合位点，即N297位点。所述的N297糖链可以结合于抗体重链的2个第297位的Asn，也可以结合于抗体重链的1个第297位的Asn。抗体－药物偶联物的通过N297糖链偶联药物的药物平均结合数为1～4，优选为1-3或优选为1-2。在一些实施方案中，本公开的N297糖链选自OLS-1、OLS-2、OLS-3、OLS-4、OLS-5、OLS-6和OLS-7时，DAR为1～2的范围。在一些实施方案中，N297糖链选自OLS-8、OLS-9、OLS-10、OLS-11和OLS-12时， DAR为1～4的范围(优选1.5～3.9的范围，更优选2.8～3.9的范围，最优选1-2的范围)。
本公开中抗体重链的2个N297位点可以重构2个糖链，或1个糖链。本公开中y 1表示糖链重构至抗体重链N297位的平均数量，即每个抗体重构的糖链的平均数。y 1可以为1-2，可以为约1.5、1.6、1.7、1.8、1.85、1.9、1.95、1.98和2。
载药量可以用以下非限制性的方法控制，包括：
(1)控制连接臂药物和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
术语“烷基”指饱和的直链或带有支链的脂肪族烃基，其具有1至20个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)碳原子(即C 1-20烷基)。所述烷基优选具有1至12个碳原子的烷基(即C 1-12烷基)，更优选具有1至6个碳原子的烷基(即C 1-6烷基)。非限制性的实例包括：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“亚烷基”指二价烷基，其中烷基如上所定义，其具有1至20个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)碳原子(即C 1-20亚烷基)。所述亚烷基优选具有1至12个碳原子的亚烷基(即C 1-12亚烷基)，更优选具有1至6个碳原子的亚烷基(即C 1-6亚烷基)。非限制性的实例包括：-CH 2-、-CH(CH 3)-、-C(CH 3) 2-、-CH 2CH 2-、-CH(CH 2CH 3)-、-CH 2CH(CH 3)-、-CH 2C(CH 3) 2-、-CH 2CH 2CH 2-、-CH 2CH 2CH 2CH 2-等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“烯基”指分子中含有至少一个碳碳双键的烷基，其中烷基的定义如上所述，其具有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳原子(即C 2-12烯基)。所述烯基优选具有2至6个碳原子的烯基(即C 2-6烯基)。非限制性的实例包括：乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“炔基”指分子中含有至少一个碳碳三键的烷基，其中烷基的定义如上所述，其具有2至12个(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个)碳原子(即C 2-12炔基)。所述炔基优选具有2至6个碳原子的炔基(即C 2-6炔基)。非限制性的实例包括：乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。非限制性的实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基等。烷氧基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和的单环全碳环(即单环环烷基)或多环系统(即多环环烷基)，其具有3至20个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即3至20元环烷基)。所述环烷基优选具有3至12个环原子的环烷基(即3至12元环烷基)，更优选具有3至8个环原子的环烷基(即3至8元环烷基，例如C 3-7环烷基)，最优选具有3至6个环原子的环烷基(即3至6元环烷基，例如C 3-6环烷基)。
所述的单环环烷基，非限制性的实例包括：环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基和环辛基等。
所述的多环环烷基包括：螺环烷基、稠环烷基和桥环烷基。
术语“螺环烷基”指环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环系统，其环内可以含有一个或多个双键，或其环内可以含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，条件是至少含有一个全碳环且连接点在该全碳环上，其具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即5至20元螺环烷基)。所述螺环烷基优选具有6至14个环原子的螺环烷基(即6至14元螺环烷基)，更优选具有7至10 个环原子的螺环烷基(即7至10元螺环烷基)。所述螺环烷基包括单螺环烷基和多螺环烷基(如双螺环烷基等)，优选单螺环烷基或双螺环烷基，更优选3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元单螺环烷基。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000093
其连接点可在任意位置；
Figure PCTCN2022123462-appb-000094
等。
术语“稠环烷基”指环之间共享毗邻的两个碳原子的多环系统，其为单环环烷基与一个或多个单环环烷基稠合，或者单环环烷基与杂环基、芳基或杂芳基中的一个或多个稠合，其中连接点在单环环烷基上，其环内可以含有一个或多个双键，且具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即5至20元稠环烷基)。所述稠环烷基优选具有6至14个环原子的稠环烷基(即6至14元稠环烷基)，更优选具有7至10个环原子的稠环烷基(即7至10元稠环烷基)。所述稠环烷基包括双环稠环烷基和多环稠环烷基(如三环稠环烷基、四环稠环烷基等)，优选双环稠环烷基或三环稠环烷基，更优选3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环稠环烷基。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000095
其连接点可在任意位置；
Figure PCTCN2022123462-appb-000096
Figure PCTCN2022123462-appb-000097
等。
术语“桥环烷基”指环之间共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环系统，其环内可以含有一个或多个双键，且具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)碳原子(即5至20元桥环烷基)。所述桥环烷基优选具有6至14个碳原子的桥环烷基(即6至14元桥环烷基)，更优选具有7至10个碳原子的桥环烷基(即7至10元桥环烷基)。所述桥环烷基包括双环桥环烷基和多环桥环烷基(如三环桥环烷基、四环桥环烷基等)，优选双环桥环烷基或三环桥环烷基。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000098
其连接点可在任意位置。
环烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氧代基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和的单环杂环(即单环杂环基)或多环杂环系统(即多环杂环基)，其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，且具有3至20个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即3至20元杂环基)。所述杂环基优选具有3至12个环原子的杂环基(即3至12元杂环基)；进一步优选具有3至8个环原子的杂环基(即3至8元杂环基)；更优选具有3至6个环原子的杂环基(即3至6元杂环基)；最优选具有5或6个环原子的杂环基(即5或6元杂环基)。
所述的单环杂环基，非限制性的实例包括：吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和高哌嗪基等。
所述的多环杂环基包括螺杂环基、稠杂环基和桥杂环基。
术语“螺杂环基”指环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环系统，其环内可以含有一个或多个双键，且其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，条件是至少含有一个单环杂环基且连接点在该单环杂环基上，其具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即5至20元螺杂环基)。所述螺杂环基优选具有6至14个环原子的螺杂环基(即6至14元螺杂环基)，更优选具有7至10个环原子的螺杂环基(即7至10元螺杂环基)。所述螺杂环基包括单螺杂环基和多螺杂环基(如双螺杂环基等)，优选单螺杂环 基或双螺杂环基，更优选3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元单螺杂环基。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000099
等。
术语“稠杂环基”指环之间共享毗邻的两个原子的多环杂环系统，其环内可以含有一个或多个双键，且其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其为单环杂环基与一个或多个单环杂环基稠合，或者单环杂环基与环烷基、芳基或杂芳基中的一个或多个稠合，其中连接点在单环杂环基上，且具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即5至20元稠杂环基)。所述稠杂环基优选具有6至14个环原子的稠杂环基(即6至14元稠杂环基)，更优选具有7至10个环原子的稠杂环基(即7至10元稠杂环基)。所述稠杂环基包括双环和多环稠杂环基(如三环稠杂环基、四环稠杂环基等)，优选双环稠杂环基或三环稠杂环基，更优选3元/4元、3元/5元、3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/3元、5元/4元、5元/5元、5元/6元、5元/7元、6元/3元、6元/4元、6元/5元、6元/6元、6元/7元、7元/5元或7元/6元双环稠杂环基。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000100
Figure PCTCN2022123462-appb-000101
等。
术语“桥杂环基”指环之间共用两个不直接连接的原子的多环杂环系统，其环内可以含有一个或多个双键，并且其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其具有5至20个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个)环原子(即5至20元桥杂环基)。所述桥杂环基优选具有6至14个环原子的桥杂环基(即6至14元桥杂环基)，更优选具有7至10个环原子的桥杂环基(即7至10元桥杂环基)。根据组成环的数目可以分为双环桥杂环基和多环桥杂环基(如三环桥杂环基、四环桥杂环基等)，优选双环桥杂环基或三环桥杂环基。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000102
等。
杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氧代基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的单环全碳芳环(即单环芳基)或多环芳环系统(即多环芳基)，其具有6至14个(例如6、7、8、9、10、11、12、13或14个)环原子(即6至14元芳基)。所述芳基优选具有6至10个环原子的芳基(即6至10元芳基)。所述的单环芳基，例如苯基。所述的多环芳基，非限制性的实例包括：萘基、蒽基、菲基等。所述多环芳基还包括苯基与杂环基或环烷基中的一个或多个稠合，或萘基与杂环基或环烷基中的一个或多个稠合，其中连接点在苯基或萘基上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环芳环系统中的环原子个数，非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000103
等。
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氧代基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“杂芳基”指具有共轭的π电子体系的单环杂芳环(即单环杂芳基)或多环杂芳环系统(即多环杂芳基)，其环内至少含有一个(例如1、2、3或4个)选自氮、氧和硫的杂原子(所述的氮可任选被氧化，即形成氮氧化物；所述的硫可任 选被氧代，即形成亚砜或砜，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-)，其具有5至14个(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个)环原子(即5至14元杂芳基)。所述杂芳基优选具有5至10个环原子的杂芳基(即5至10元杂芳基)，更优选具有5或6个环原子的杂芳基(即5或6元杂芳基)。
所述的单环杂芳基，非限制性的实例包括：呋喃基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、呋咱基、吡咯基、N-烷基吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡啶酮基、N-烷基吡啶酮(如
Figure PCTCN2022123462-appb-000104
等)、吡嗪基、哒嗪基等。
所述的多环杂芳基，非限制性的实例包括：吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、酞嗪基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、喹唑啉基、苯并噻唑基、咔唑基等。所述多环杂芳基还包括单环杂芳基与一个或多个芳基稠合，其中连接点在芳香环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环杂芳环系统中的环原子个数。所述多环杂芳基还包括单环杂芳基与环烷基或杂环基中的一个或多个稠合，其中连接点在单环杂芳环上，并且在这种情况下，环原子个数继续表示多环杂芳环系统中的环原子个数。非限制性的实例包括：
Figure PCTCN2022123462-appb-000105
Figure PCTCN2022123462-appb-000106
等。
杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，其可以在任何可使用的连接点被取代，取代基优选选自D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个。
术语“氨基保护基”是指为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，在氨基上引入的易于脱去的基团。非限制性的实例包括：(三甲基硅)乙氧基甲基、四氢吡喃基、叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Cbz)、笏甲氧羰基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Alloc)、三甲基硅乙氧羰基(Teoc)、甲氧羰基、乙氧羰基、邻苯二甲酰基(Pht)、对甲苯磺酰基(Tos)、三氟乙酰基(Tfa)、三苯甲基(Trt)、2,4-二甲氧基苄基(DMB)、 乙酰基、苄基、烯丙基、对甲氧苄基等。
术语“羟基保护基”是指在羟基上引入的易于脱去的基团，用于阻断或保护羟基而在化合物的其它官能团上进行反应。非限制性的实例包括：三甲基硅基(TMS)、三乙基硅基(TES)、三异丙基硅基(TIPS)、叔丁基二甲基硅基(TBS)、叔丁基二苯基硅基(TBDPS)、甲基、叔丁基、烯丙基、苄基、甲氧基甲基(MOM)、乙氧基乙基、2-四氢吡喃基(THP)、甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、对硝基苯甲酰基等。
术语“环烷基氧基”指环烷基-O-，其中环烷基如上所定义。
术语“杂环基氧基”指杂环基-O-，其中杂环基如上所定义。
术语“芳基氧基”指芳基-O-，其中芳基如上所定义。
术语“杂芳基氧基”指杂芳基-O-，其中杂芳基如上所定义。
术语“烷硫基”指烷基-S-，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟烷基”指烷基被一个或多个羟基取代，其中烷基如上所定义。
术语“甲叉基”指＝CH 2。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“羟基”指-OH。
术语“巯基”指-SH。
术语“氨基”指-NH 2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO 2。
术语“氧代”或“氧代基”指“＝O”。
术语“羰基”指C＝O。
术语“羧基”指-C(O)OH。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)、-C(O)O(环烷基)、(烷基)C(O)O-或(环烷基)C(O)O-，其中烷基和环烷基如上所定义。
本公开化合物可以存在特定的立体异构体形式。术语“立体异构体”是指结构相同但原子在空间中的排列不同的异构体。其包括顺式和反式(或Z和E)异构体、(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体、非对映异构体、(D)-和(L)-异构体、互变异构体、阻转异构体、构象异构体及其混合物(如外消旋体、非对映异构体的混合物)。本公开化合物中的取代基可以存在另外的不对称原子。所有这些立体异构体以及它们的混合物，均包括在本公开的范围内。可以通过手性合成、手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(-)-和(+)-异构体、(R)-和(S)-对映异构体以及(D)-和(L)-异构体。本公开某化合物的一种异构体，可以通过不对称合成或者手性助剂 来制备，或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，得到纯的异构体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过色谱法完成。
本公开所述化合物的化学结构中，键
Figure PCTCN2022123462-appb-000107
表示未指定构型，即如果化学结构中存在手性异构体，键
Figure PCTCN2022123462-appb-000108
可以为
Figure PCTCN2022123462-appb-000109
或
Figure PCTCN2022123462-appb-000110
或者同时包含
Figure PCTCN2022123462-appb-000111
和
Figure PCTCN2022123462-appb-000112
两种构型。对于所有的碳-碳双键，即使仅命名了一个构型，Z型和E型均包括在内。
本公开的化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含在本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指平衡存在并且容易从一种异构形式转化为另一种异构形式的结构异构体。其包括所有可能的互变异构体，即以单一异构体的形式或以所述互变异构体的任意比例的混合物的形式存在。非限制性的实例包括：酮-烯醇、亚胺-烯胺、内酰胺-内酰亚胺等。内酰胺-内酰亚胺平衡实例是在如下所示的A和B之间：
Figure PCTCN2022123462-appb-000113
如当提及吡唑基时，应理解为包括如下两种结构中的任何一种或两种互变异构体的混合物：
Figure PCTCN2022123462-appb-000114
所有的互变异构形式在本公开的范围内，且化合物的命名不排除任何互变异构体。
本公开的化合物包括其化合物的所有合适的同位素衍生物。术语“同位素衍生物”是指至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量不同的原子替代的化合物。可引入到本公开化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘等的稳定和放射性的同位素，例如分别为 2H(氘，D)、 3H(氚，T)、 11C、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 32p、 33p、 33S、 34S、 35S、 36S、 18F、 36Cl、 82Br、 123I、 124I、 125I、 129I和 131I等，优选氘。
相比于未氘代药物，氘代药物有降低毒副作用、增加药物稳定性、增强疗效、延长药物生物半衰期等优势。本公开的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本公开的范围之内。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换，其中氘的替换可以是部分或完全的，部分氘的替换是指至少一个氢被至少一个氘替换。
当一个位置被特别地指定为氘(D)时，该位置应理解为具有大于氘的天然丰度(其为0.015％)至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)。示例中化合物的具有大于氘的天然丰度可以是至少1000倍的丰度的氘(即至少15％的氘掺入)、至少2000倍的丰度的氘(即至少30％的氘掺入)、至少3000倍的丰度的氘(即至少45％的氘掺入)、至少3340倍的丰度的氘(即至少50.1％的氘掺入)、至少3500倍的丰度的氘(即至少52.5％的氘掺入)、至少4000倍的丰度的氘(即至少60％的氘掺入)、至少4500倍的丰度的氘(即至少67.5％的氘掺入)、至少5000倍的丰度的氘(即至少75％的氘掺入)、至少5500倍的丰度的氘(即至少82.5％的氘掺入)、至少6000倍的丰度的氘(即至少90％的氘掺入)、至少6333.3倍的丰度的氘(即至少95％的氘掺入)、至少6466.7倍的丰度的氘(即至少97％的氘掺入)、至少6600倍的丰度的氘(即至少99％的氘掺入)、至少6633.3倍的丰度的氘(即至少99.5％的氘掺入)或更高丰度的氘。
“任选的”或“任选”是指随后所描述的事件或环境可以但不必然发生，其包括该事件或环境发生或不发生两种情形。例如“任选被卤素或者氰基取代的C 1-6烷基”包括烷基被卤素或者氰基取代的情形和烷基不被卤素和氰基取代的情形。
“取代”或“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选1～6个，更优选1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和键的碳原子(如烯)结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上可药用的盐与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用的盐”是指本公开化合物的盐，可选自无机盐或有机盐。这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，例如氢氧化钠和氢氧化钾，以及有机碱，例如氨。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机酸。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”或“抑制有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
本文所用的术语“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂型，在合理的医学判断范围内，适用于与患者组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途是有效。
本文所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，反之亦然，除非上下文另外明确指出。
当将术语“约”应用于诸如pH、浓度、温度等的参数时，表明该参数可以变化±10％，并且有时更优选地在±5％之内。如本领域技术人员将理解的，当参数不是关键时，通常仅出于说明目的给出数字，而不是限制。
实施例与测试例
以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制本公开的范围。
本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
一、抗体实施例
以下抗体按抗体常规方法进行制备，例如可进行载体构建后，转染真核细胞如HEK293细胞(Life Technologies Cat.No.11625019)，纯化表达。
以下为抗HER2抗体Trastuzumab的序列(WO2020/063676A1的Trastuzumab)：Ab1轻链
Figure PCTCN2022123462-appb-000115
Ab1重链
Figure PCTCN2022123462-appb-000116
以下为抗Claudin18.2抗体的序列(WO 2021/115426 A1的抗Claudin18.2抗体h1902-5)：
Ab2轻链
Figure PCTCN2022123462-appb-000117
Figure PCTCN2022123462-appb-000118
Ab2重链
Figure PCTCN2022123462-appb-000119
以下为抗HER3抗体的序列(PCT/CN2021/123733的抗HER3抗体HER3-29)：
Ab3轻链：
Figure PCTCN2022123462-appb-000120
Ab3重链：
Figure PCTCN2022123462-appb-000121
以下为构建Claudin18.2高表达及中表达NUGC4细胞株的claudin18.2全长质粒序列：
Figure PCTCN2022123462-appb-000122
二、化合物实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10 -6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪或Bruker AVANCE NEO 500M，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)、氘代氯仿(CDCl 3)、氘代甲醇(CD 3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用Agilent 1200/1290 DAD-6110/6120 Quadrupole MS液质联用仪(生产商：Agilent，MS型号：6110/6120 Quadrupole MS)，waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生产商：waters，MS型号：waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector)，THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生产商：THERMO，MS型号：THERMO Q Exactive)。
高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。
手性HPLC分析测定使用Agilent 1260 DAD高效液相色谱仪。
高效液相制备色谱法使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281制备型色谱仪。
手性制备色谱法使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
激酶平均抑制率及IC 50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯 甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例2-1 1
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮1
Figure PCTCN2022123462-appb-000123
第一步
(2R,11aS)-8-(苄氧基)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮1b
将(2R,11aS)-8-(苄氧基)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)-二酮1a(8.0g，16.58mmol，采用专利申请“WO2016/149546A1中说明书第75页的实施例3，化合物16”公开的方法制备而得)置于三口反应瓶中，加入无水四氢呋喃(50mL)溶解，反应体系用氮气置换3次，冰水浴冷却至0～5℃，剧烈搅拌下滴加硼烷四氢呋喃络合物(1M，163mL，163mmol)，加毕，撤去冰水浴，升至室温搅拌2小时。冰水浴冷却至0～5℃，搅拌下缓慢滴加无水甲醇(200mL)淬灭反应，加毕，撤去冰水浴，升至室温继续搅拌2小时。减压浓缩除去有机溶剂，残余物中加入水(100mL)，用二氯甲烷萃取(60mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(80mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1b(5.6g，产率：72.1％)。
MS m/z(ESI):469.2[M+1]。
第二步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-羟基-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮1c
将1b(4.6g，9.81mmol)溶于无水四氢呋喃(100mL)中，加入钯碳(920mg，含量10％，干型)，氢气置换三次，加热至45℃，搅拌反应3小时。反应液过滤，滤饼用无水四氢呋喃(50mL)淋洗，滤液减压浓缩，真空干燥，得到粗品标题产物1c(3.6g，产率：96.9％)。产物不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):379.2[M+1]。
第三步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮1d
将粗品1c(1.7g，4.50mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入1,5-二溴戊烷(5.2g，22.62mmol)和无水碳酸钾(744mg，5.39mmol)，室温搅拌5小时。向反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(60mL×3)，合并有机相，依次用水(50mL×3)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1d(1.7g，产率：71.7％)。
MS m/z(ESI):527.2[M+1]。
第四步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯
1e
将1d(1.70g，3.23mmol)溶于无水二氯甲烷(30mL)中，冰水浴冷却，依次加入吡啶(440mg，5.56mmol)和氯甲酸烯丙酯(1.34g，11.12mmol)，冰浴下搅拌20 分钟。向反应液中加入二氯甲烷(30mL)稀释，再加入10％柠檬酸水溶液(20mL)，搅拌两分钟后静置分层，保留有机相。有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1e(1.89g，产率：95.8％)。
MS m/z(ESI):611.3[M+1]。
第五步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-羟基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯1f
将1e(1.89g，3.10mmol)溶于无水四氢呋喃(30mL)中，冰水浴冷却，加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，6.2mL，6.20mmol)，加毕，撤去冰水浴，室温搅拌20分钟。加入乙酸乙酯(60mL)稀释，依次用饱和氯化铵水溶液(30mL×5)和饱和氯化钠水溶液洗涤(30mL×2)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物1f(1.39g，产率：90.4％)。
MS m/z(ESI):497.1[M+1]。
第六步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2,5-二氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯1g
将1f(1.39g，2.80mmol)溶于无水二氯甲烷(30mL)中，冰水浴冷却，依次加入碳酸氢钠(1.41g，16.78mmol)和戴斯-马丁氧化剂(3.56g，8.39mmol)，加毕，撤去冰水浴，升至室温搅拌4小时。加入饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1g(1.14g，产率：82.4％)。
MS m/z(ESI):495.1[M+1]。
第七步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯1h
将1g(960mg，1.94mmol)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，用乙腈-干冰浴冷却至-40℃，滴加2,6-二甲基吡啶(624mg，5.83mmol)，搅拌5分钟，再加入三氟甲磺酸酐(1.09g，3.88mmol)，加毕，在-40℃继续搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1h(764mg，产率：62.9％)。
MS m/z(ESI):627.0[M+1]。
第八步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮1i
将1h(188mg，0.30mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，依次加入4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸(198mg，0.90mmol，韶远)、1,1-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(66mg，0.09mmol，adamas)、碳酸钾(207mg，1.50mmol)和水(0.5mL)，反应体系用氮气置换三次，室温搅拌12小时。加入二氯甲烷(50mL)稀释，用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到含有标题产物1i的混合物。将所得混合物溶于无水二氯甲烷(5mL)，加入四(三苯基膦)钯(104mg，0.09mmol)和对甲苯磺酸(155mg，0.90mmol)，氮气置换三次，室温搅拌12小时。反应液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物1i(120mg，产率：70.3％)。
MS m/z(ESI):569.2[M+1]。
第九步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯1j
将1i(120mg，0.21mmol)溶于无水二氯甲烷(3mL)中，冰水浴冷却，依次加入吡啶(50mg，0.63mmol)和氯甲酸烯丙酯(102mg，0.85mmol)，冰浴下搅拌20分钟。加入二氯甲烷(30mL)稀释，再加入饱和氯化铵水溶液(20mL)，搅拌两分钟后静置分层，保留有机相，水相用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相。有机相用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物1j(66mg，产率：47.9％)。
MS m/z(ESI):653.4[M+1]。
第十步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1l
将1j(66mg，0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1k(66mg，0.12mmol，采用专利申请“CN 111164208 A中说明书第223页的实施例45”公开的方法制备而得)，再加入无水碳酸钾(56mg，0.41mmol)，室温搅拌12小时。向反应液中加水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，依次用水(20mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1l(50mg，产率：46.7％)。
MS m/z(ESI):1061.7[M+1]。
第十一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯1m
将1l(50mg，0.047mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(17mg，0.28mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.24mL，0.24mmol)，加毕，室温搅拌2小时。加入乙酸乙酯(30mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL×2)和饱和氯化钠水溶液(20mL×2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1m(15mg，产率：33.6％)。
MS m/z(ESI):947.9[M+1]。
第十二步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮1
将1m(15mg，0.016mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(11.5mg，0.16mmol)和四(三苯基膦)钯(1.85mg，0.0016mmol)，氮气氛围下搅拌30分钟。减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物1(10mg，产率：83.0％)。
MS m/z(ESI):761.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)δ7.92(d,1H),7.42-7.40(m,1H),7.36-7.29(m,4H),7.22-7.18(m,2H),6.94(d,2H),6.85(s,1H),6.64(d,1H),6.52(d,1H),6.32(s,1H),5.32(t,1H),4.20-4.17(m,1H),4.14-4.09(m,2H),4.04-4.00(m,1H),3.97-3.93(m,2H),3.84-3.78(m,4H),3.67(s,3H),3.58-3.48(m,5H),2.78-2.75(m,1H),2.74-2.72(m,1H),2.66-2.63(m,2H),2.38-2.36(m,2H),1.85-1.79(m,4H),1.61-1.58(m,2H),1.49-1.44(m,3H),0.88-0.84(m,4H)。
实施例2-2 2
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-吗啉基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮2
Figure PCTCN2022123462-appb-000124
Figure PCTCN2022123462-appb-000125
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-吗啉基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮2a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为(4-吗啉基苯基)苯硼酸，采用相同的条件，得到标题产物2a(42mg，产率：23.7％)。
MS m/z(ESI):556.4[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-吗啉基苯基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯2b将实施例2-1 1第九步原料1i替换为2a(42mg，0.075mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物2b(45mg，产率：93.1％)。
MS m/z(ESI):640.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-吗啉基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯2c
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为2b(45mg，0.07mmol)，采用相同的反应条件条件，不经纯化得到粗品标题产物2c(89mg)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):1048.4[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-吗啉基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧 基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二
氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯2d
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为粗品2c(89mg)，采用相同的反应条件，得到标题产物2d(45mg，产率：68.4％)。
MS m/z(ESI):934.4[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-吗啉基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮2
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为2d(30mg，0.032mmol)采用相同的反应条件，得到标题产物2(22mg，产率：91.6％)。
MS m/z(ESI):748.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.41(s,1H),7.34-7.31(m,2H),7.07-7.05(m,1H),6.94-6.90(m,2H),6.86-6.83(m,1H),6.59-6.56(m,1H),6.33-6.30(m,1H),4.21-4.15(m,2H),4.14-4.09(m,1H),4.04-4.01(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.82(s,3H),3.75-3.73(m,4H),3.70(s,3H),3.63-3.59(m,2H),3.57-3.50(m,2H),3.27-3.23(m,2H),3.13-3.10(m,4H),2.77-2.72(m,1H),2.44-2.42(m,1H),2.03-1.98(m,2H),1.84-1.81(m,2H),1.60-1.56(m,2H),0.88-0.83(m,2H),0.69-0.64(m,2H)。
实施例2-3 3
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(环丙基硫基)苯基-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮3
Figure PCTCN2022123462-appb-000126
第一步
((4-环丙基硫基)苯基)硼酸
Figure PCTCN2022123462-appb-000127
将四氢呋喃(1mL)置于反应瓶中，反应体系用氮气置换三次，用干冰丙酮浴冷却至-78℃，滴加2.5M正丁基锂溶液(1.24mL，3.11mmol)，滴完后搅拌10分钟。滴加(4-溴苯基)(环丙基)硫烷(437mg，1.91mmol，采用公知的方法“Bioorganic and Medicinal Chemistry,2012,20(14),2982-2991”制备而得)的2mL四氢呋喃溶液，滴完后于-78℃继续搅拌1小时，滴加硼酸三异丙酯(488mg，2.59mmol)的2mL四氢呋喃溶液，滴完后将反应液升至室温，继续搅拌3小时。向反应液中加入10mL 水，搅拌30分钟，然后加入10mL 1M盐酸，搅拌30分钟。反应液减压浓缩，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到((4-环丙基硫基)苯基)硼酸(178mg，产率：48.1％)。
MS m/z(ESI):193.1[M-1]。
采用实施例2-1 1的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为((4-环丙基硫基)苯基)硼酸，制得标题产物3(20mg，总产率：22.5％)。
MS m/z(ESI):735.2[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,1H),7.56(s,1H),7.42-7.37(m,2H),7.34-7.28(m,3H),7.05(s,1H),6.85-6.81(m,1H),6.59-6.54(m,1H),6.34-6.30(m,1H),4.24-4.08(m,2H),4.05-3.99(m,1H),3.97-3.91(m,2H),3.83-3.77(m,2H),3.72-3.63(m,4H),3.61-3.45(m,3H),3.28-3.21(m,2H),2.76(dd,1H),2.45-2.39(m,1H),2.33-2.24(m,2H),2.07-1.95(m,2H),1.86-1.76(m,3H),1.63-1.52(m,2H),1.35-1.32(m,1H),1.10-1.05(m,2H),0.87-0.81(m,1H),0.70-0.53(m,4H)。
实施例2-4 4
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮4
Figure PCTCN2022123462-appb-000128
第一步
(S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮4a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)硼酸，采用相同的反应条件，得到标题产物4a(80mg，产率：49.8％)。
MS m/z(ESI):537.1[M+1]。
第二步
(S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯4b
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为4a(54mg，0.10mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物4b(50mg，产率：80％)。
MS m/z(ESI):621.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯4c
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为4b(50mg，0.08mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物4c(51mg，产率：74.6％)。
MS m/z(ESI):1029.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯4d
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为4c(51mg，0.05mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物4d(40mg，产率：87.5％)。
MS m/z(ESI):915.4[M+1]。
第五步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1H-吡唑-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮4
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为4d(37mg，0.04mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物4(25mg，产率：85.8％)。
MS m/z(ESI):729.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.08(d,1H),7.97(d,2H),7.92(d,1H),7.73-7.67(m,2H),7.64(d,2H),7.33-7.32(m,1H),6.86(s,1H),6.64-6.59(m,1H),6.49-6.41(m,2H),5.34(t,1H),4.28-4.24(m,2H),4.15-4.11(m,1H),4.05-4.01(m,2H),3.97-3.91(m,4H),3.82(s,3H),3.66(s,3H),3.61-3.54(m,1H),2.86-2.82(m,1H), 2.66-2.64(m,1H),2.38-2.35(m,1H),2.06-1.96(m,1H),1.87-1.81(m,4H),1.63-1.59(m,2H),0.72-0.59(m,4H)。
实施例2-5 5
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮5
Figure PCTCN2022123462-appb-000129
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮5a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为4-(4-四氢吡喃基)苯硼酸频哪醇酯，采用相同的反应条件，得到标题产物5a(116mg,产率：70％)。
MS m/z:555.2[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-
基)苯基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-
羧酸烯丙酯5b
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为5a，采用相同的反应条件，得到标题产物5b(58mg,产率：90.1％)。
MS m/z:639.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯5c
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为5b，采用相同的反应条件，得到标题产物5c(57mg,产率：60％)。
MS m/z:1047.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯5d
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为5c，采用相同的反应条件，得到标题产物5d(37mg,产率：80％)。
MS m/z:933.4[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮5
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为5d，采用相同的反应条件，得到标题产物5(24mg,产率：80％)。
MS m/z:747.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.52(s,1H),7.36(d,2H),7.32(s,1H),7.28(s,1H),7.21(d,2H),6.83(s,1H),6.31(s,1H),5.31(t,1H),4.22-4.17(m,2H),4.13-4.08(m,1H),4.03-3.99(m,2H),3.97-3.90(m,5H),3.81(s,3H),3.65(s,3H),3.56-3.46(m,4H),2.80-2.70(m,2H),2.65-2.62(m,1H),2.36-2.34(m,1H),2.07-1.93(m,5H),1.84-1.78(m,4H),1.61-1.53(m,2H),0.80-0.61(m,4H)。
实施例2-6 6
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮6
Figure PCTCN2022123462-appb-000130
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮6a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为(4-(1-甲基哌啶基-4-基)苯基)硼酸，采用相同的反应条件，得到标题产物6a(51mg，产率：30％)。
MS m/z(ESI):568.2[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯6b
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为6a(51mg，0.09mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物6b(52mg，产率：89％)。
MS m/z(ESI):652.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯6c
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为6b(52mg，0.08mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物6c(42mg，产率：50％)。
MS m/z(ESI):1060.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯6d
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为6c(42mg，0.04mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物6d(30mg，产率：80％)。
MS m/z(ESI):946.5[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮6
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为6d(30mg，0.032mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物6(19mg，产率：80％)。
MS m/z(ESI):760.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.55(s,1H),7.39(d,2H),7.34(s,1H),7.30(s,1H),7.21(d,2H),6.85(s,1H),6.33(s,1H),5.33(t,1H),4.25-4.19(m,2H),4.17-4.10(m,1H),4.05-4.01(m,2H),3.97-3.92(m,5H),3.83(s,3H),3.67(s,3H),3.62-3.48(m,4H),2.80-2.70(m,2H),2.69-2.63(m,1H),2.38-2.36(m,1H),2.03-1.97(m,8H),1.87-1.80(m,4H),1.61-1.53(m,2H),0.82-0.58(m,4H)。
实施例2-7 7
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮7
Figure PCTCN2022123462-appb-000131
Figure PCTCN2022123462-appb-000132
第一步
(S)-2-(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮7a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)硼酸，采用相同的反应条件，得到标题产物7a(80mg，产率：49.7％)。
MS m/z(ESI):538.1[M+1]。
第二步
(S)-2-(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯7b
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为7a(54mg，0.10mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物7b(50mg，产率：80％)。
MS m/z(ESI):622.2[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯7c
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为7b(50mg，0.08mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物7c(51mg，产率：63％)。
MS m/z(ESI):1030.5[M+1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯7d
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为7c(51mg，0.05mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物7d(37mg，产率：80.8％)。
MS m/z(ESI):916.4[M+1]。
第五步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮7
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为7d(37mg，0.04mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物7(25mg，产率：85.7％)。
MS m/z(ESI):730.3[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.13(s,2H),7.99(d,2H),7.92(d,1H),7.70-7.69(m,1H),7.64(d,2H),7.33-7.32(m,1H),6.86(s,1H),6.64-6.59(m,1H),6.33(s,1H),5.33(t,1H),4.29-4.24(m,2H),4.15-4.12(m,1H),4.05-4.02(m,2H),3.97-3.92(m,4H),3.83(s,3H),3.68(s,3H),3.62-3.53(m,1H),2.87-2.83(m,1H),2.66-2.64(m,1H),2.37-2.35(m,1H),2.06-1.95(m,1H),1.87-1.80(m,4H),1.63-1.58(m,2H),0.71-0.55(m,4H)。
实施例2-8 8
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮8
Figure PCTCN2022123462-appb-000133
实施例2-9 9
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2-羟乙基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮9
Figure PCTCN2022123462-appb-000134
实施例2-10 10
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2-羟基乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮10
Figure PCTCN2022123462-appb-000135
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(哌啶-4-基)-苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙脂10b
采用实施例2-1 1l的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯得到(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙脂10a，将10a(25mg，0.022mmol，置于圆底烧瓶中，加入二氯甲烷(1mL),冰浴下搅拌5分钟后加入1N盐酸(1mL)，室温下反应半小时后加入饱和碳酸氢铵溶液(10mL)淬灭反应，水(10mL×2)和二氯甲烷(20mL×2)萃取，将所得有机相干燥，旋蒸即可得到标题产物10b(20mg，98％)。
第二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(1-(2-羟基乙酰基)哌啶-4-基)苯 基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺环[苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯10c
将10b(20mg，0.021mmol)和羟基乙酸(1.8mg，0.023mmol)溶于四氢呋喃(1.5mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(16.3mg，0.042mmol)和N,N-二异丙基乙胺(8.1mg，0.062mmol)，加完后氮气置换三次，25℃搅拌反应3小时。反应液减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物10c(10mg，产率：47.1％)。
MS m/z(ESI):990.8[M+1]。
第三步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2-羟基乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮10
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为10c(10mg，0.01mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物10(8mg，产率：98.5％)。
MS m/z(ESI):804.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,1H),7.54(s,1H),7.38(d,2H),7.34(s,1H),7.30(s,1H),7.21(d,2H),6.85(s,1H),6.33(s,1H),5.33(t,1H),4.25-4.19(m,2H),4.17-4.10(m,1H),4.05-4.01(m,2H),3.98-3.92(m,2H),3.83(s,2H),3.67(s,2H),3.58-3.49(m,7H),2.77-2.68(m,4H),2.03-1.95(m,5H),1.86-1.79(m,3H),1.61-1.53(m,3H),1.50-1.44(m,3H),0.89-0.80(m,4H),0.69-0.65(m,2H)。
实施例2-11 11
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-乙酰基哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮
11
Figure PCTCN2022123462-appb-000136
采用实施例2-10的合成路线，将第二步试剂羟基乙酸替换为冰乙酸，制得标题产物11(18mg，总产率：76.3％)。
MS m/z(ESI):788.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,1H),7.53(s,1H),7.37(d,2H),7.33(s, 1H),7.30(s,1H),7.21(d,2H),6.85(s,1H),6.56(d,1H),6.32(s,1H),4.52(d,1H),4.25-4.17(m,1H),4.15-4.09(m,1H),4.06-3.99(m,1H),3.99-3.86(m,4H),3.82(s,3H),3.67(s,3H),3.59-3.52(m,1H),3.49(d,1H),3.12(t,1H),2.81-2.70(m,2H),2.58(t,1H),2.06-2.02(m,4H),1.87-1.72(m,7H),1.61-1.54(m,3H),1.49-1.39(m,2H),0.89-0.81(m,2H),0.81-0.76(m,1H),0.72-0.62(m,3H)。
实施例2-12 12
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-10-甲基-2-(4-吗啉基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮12
Figure PCTCN2022123462-appb-000137
实施例2-13 13
(S)-7-甲氧基-8-(3-(1-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮13
Figure PCTCN2022123462-appb-000138
Figure PCTCN2022123462-appb-000139
第一步
(E)-3-(1-((((2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙烯酸乙酯13b
将1c(300mg，0.79mmol)和(E)-3-(1-(((甲基磺酰基)氧基)甲基)环丙基)丙烯酸乙酯13a(378mg，1.52mmol，采用专利申请“CN104395312 B中说明书第32页的中间体2”公开的方法制备而得)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入碳酸钾(548mg，3.97mmol)，加完后氮气置换三次，升温至90℃搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13b(354mg，产率：84.1％)。
MS m/z(ESI):531.2[M+1]。
第二步
3-(1-((((2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,5,10,11,11a-六氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙酸乙酯13c
将13b(354mg，0.67mmol)溶于甲醇(6mL)中，加入六水合氯化钴(32mg，0.13mmol)，加完后氮气置换三次，搅拌30分钟，缓慢滴加2mL硼氢化钠(126mg，3.33mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液，滴完后搅拌反应2小时，继续滴加1mL硼氢化钠(76mg，2.01mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液，滴完后搅拌2.5小时。冰浴下向反应液中加入水(60mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，得到粗品标题产物13c(336mg)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):533.3[M+1]。
第三步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-((1-(3-乙氧基-3-氧代丙基)环丙基)甲氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13d
将13c(336mg，0.63mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，冰浴下加入吡啶(100mg，1.26mmol)，滴加氯甲酸烯丙酯(304mg，2.52mmol)，加完后搅拌15分钟。反应液中加入冰冷的10％柠檬酸溶液(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13d(313mg，产率：80.4％)。
MS m/z(ESI):617.3[M+1]。
第四步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-((1-(3-羟基丙基)环丙基)甲氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13e
将13d(300mg，0.49mmol)溶于16mL四氢呋喃和乙醇(V/V＝1:1)混合溶剂中，加入硼氢化钠(110mg，2.91mmol)和氯化锂(134mg，3.16mmol)，加完后氮气置换三次，搅拌反应1.5小时，向反应液中补加硼氢化钠(55mg，1.46mmol)和氯化锂(67mg，1.58mmol)，继续搅拌反应4小时。向反应液中加入氯化铵溶液(30mL)和水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13e(204mg，产率：72.9％)。
MS m/z(ESI):575.3[M+1]。
第五步
(2R,11aS)-8-((1-(3-溴丙基)环丙基)甲氧基)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13f
将13e(187mg，0.32mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(164mg，1.63 mmol)，冰浴下加入4-二甲氨基吡啶(12mg，0.10mmol)，滴加甲烷磺酰氯(112mg，0.98mmol)，加完后升至室温搅拌1.5小时。反应液中加入水(15mL)，用二氯甲烷萃取(6mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，将所得残余物溶于四氢呋喃(5mL)中，加入溴化锂(339mg，3.91mmol)，搅拌反应16小时。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，得到粗品标题产物13f(207mg)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):637.2[M+1]。
第六步
(2R,11aS)-8-((1-(3-溴丙基)环丙基)甲氧基)-2-羟基-7-甲氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13g
将13f(207mg，0.32mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，冰浴下加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.96mL，0.96mmol)，加毕，撤去冰浴，升至室温搅拌1.5小时。反应液中加入饱和氯化铵溶液(20mL)和水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物13g(160mg，产率：94.1％)。
MS m/z(ESI):523.1[M+1]。
第七步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)环丙基)甲氧基)-7-甲氧基-2,5-二氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13h
将13g(160mg，0.31mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下依次加入碳酸氢钠(154mg，1.83mmol)和戴斯-马丁氧化剂(390mg，0.92mmol)，加毕，撤去冰水浴，升至室温搅拌1.5小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13h(127mg，产率：79.7％)。
MS m/z(ESI):521.0[M+1]。
第八步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)环丙基)甲氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13i
将13h(127mg，0.24mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，氮气置换三次，用乙腈-干冰浴冷却至-40℃，滴加2,6-二甲基吡啶(78mg，0.73mmol)，搅拌5分钟，再加入三氟甲磺酸酐(138mg，0.49mmol)，加毕，在-40℃下继续搅拌40分钟。加入饱和氯化铵水溶液(8mL)淬灭，加入水(10mL)，用二氯甲烷萃取(6mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所 得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13i(66mg，产率：41.3％)。
MS m/z(ESI):653.0[M+1]。
第九步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)环丙基)甲氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮13j
将13i(66mg，0.10mmol)和对甲氧基苯硼酸(46mg，0.30mmol，韶远)溶于3.5mL四氢呋喃和水(V/V＝6:1)混合溶剂中，依次加入碳酸钾(70mg，0.51mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(23mg，0.031mmol，adamas)，加完后氮气置换三次，搅拌反应16小时。反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13j(31mg，产率：58.2％)。
MS m/z(ESI):527.1[M+1]。
第十步
(S)-8-((1-(3-溴丙基)环丙基)甲氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯13k
将13j(31mg，0.059mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，冰浴下加入吡啶(9.3mg，0.12mmol)，滴加氯甲酸烯丙酯(28mg，0.23mmol)，加完后搅拌15分钟。反应液中加入冰冷的10％柠檬酸溶液(4mL)，用二氯甲烷萃取(6mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物13k(33mg，产率：91.8％)。
MS m/z(ESI):611.1[M+1]。
第十一步
(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯13l
将13k(33mg，0.054mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中，加入1k(29mg，0.059mmol)和碳酸钾(23mg，0.17mmol)，加完后氮气置换三次，搅拌反应16小时。反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物13l(44mg，产率：80.0％)。
MS m/z(ESI):1019.3[M+1]。
第十二步
(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯13m
将13l(44mg，0.043mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，依次加入冰乙酸(15mg，0.25mmol)和四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.21mL，0.21mmol)，搅拌反应1小时。加入乙酸乙酯(5mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠水溶液(8mL)和饱和氯化钠水溶液(10mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物13m(36mg，产率：92.1％)。
MS m/z(ESI):905.8[M+1]。
第十三步
(S)-7-甲氧基-8-(3-(1-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮13
将13m(18mg，0.02mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，氮气置换三次，依次加入吡咯烷(8.9mg，0.13mmol)和四(三苯基膦)钯(2.4mg，0.002mmol)，反应搅拌30分钟。反应液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物13(8mg，产率：56.0％)。
MS m/z(ESI):719.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,1H),7.44(s,1H),7.37(d,2H),7.30(t,1H),7.04(s,1H),6.90(d,2H),6.80(s,1H),6.48(d,1H),6.29-6.25(m,1H),4.21-4.07(m,2H),3.99-3.89(m,2H),3.82-3.73(m,6H),3.69-3.61(m,3H),3.59-3.43(m,3H),3.27-3.20(m,2H),2.75(dd,1H),2.44-2.27(m,2H),2.07-1.95(m,2H),1.91-1.81(m,2H),1.65-1.56(m,2H),1.34(d,1H),0.87-0.81(m,1H),0.69-0.62(m,2H),0.59-0.46(m,4H)。
实施例2-14 14
(S)-7-甲氧基-8-((1-(3-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)丙基)环丙基)甲氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮14
Figure PCTCN2022123462-appb-000140
实施例2-15 15
(S)-8-((3-氨基-5-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)苄基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮15
Figure PCTCN2022123462-appb-000141
实施例2-16 16
(S)-7-环丙氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮16
Figure PCTCN2022123462-appb-000142
第一步
5-环丙氧基-4-羟基-2-硝基苯甲酸甲酯16b
将4-溴-5-环丙氧基-2-硝基苯甲酸甲酯16a(1.6g，5.07mmol，采用专利申请“CN112110918 A中说明书第54页”实施例18公开的方法制备而得)置于反应瓶中，加入1,4-二氧六环(20mL)溶解，依次加入联硼酸频那醇酯(3.22g，12.69mmol)、乙酸钾(1.49g，15.2mmol)和双三苯基磷二氯化钯(1.06g，1.51mmol，adamas)，加完后氮气置换3次，升温至101℃搅拌反应16小时。反应液过滤后减压浓缩，所得残余物溶于四氢呋喃(40mL)中，加入冰乙酸(5mL)，降温至0℃，滴入双氧水(10mL，35％)，加完后自然升温至室温，搅拌反应3小时，将反应温度降至0℃，滴入硫代硫酸钠饱和溶液(70mL)，加完后用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，依次用水(40mL)和饱和氯化钠溶液(40mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16b(902mg，产率：70.4％)。
MS m/z(ESI)：252.2[M-1]。
第二步
5-环丙氧基-4-羟基-2-硝基苯甲酸16c
将16b(900mg，3.55mmol)置于反应瓶中，加入四氢呋喃(8mL)、甲醇(2mL)、水(2mL)，再加入氢氧化锂一水合物(373mg，8.88mmol)，室温搅拌反应2小时，反应液浓缩，向所得残余物中加入乙酸乙酯(30mL)溶解，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液洗涤(15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物16c(770mg，产率：90.6％)。
MS m/z(ESI)：238.2[M-1]。
第三步
5-环丙氧基-2-硝基-4-((三异丙基硅基)氧基)苯甲酸16d
将16c(1.25g，5.23mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入三异丙基氯硅烷(5.04g，26.14mmol)，再加入咪唑(2.8g，41.17mmol)，加完后室温搅拌20小时。反应液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物中加入甲醇(10mL)和水(2.5mL)，室温搅拌3小时。反应液减压浓缩，残余物中加入乙酸乙酯(30mL)，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液洗涤(15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物16d(1.4g，产率：67.9％)。
MS m/z(ESI)：396.4[M+1]。
第四步
(S)-(6-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)(5-环丙氧基-2-硝基 -4-((三异丙基硅基)氧基)苯基)甲酮16e
将16d(1.4g，3.54mmol)溶于二氯甲烷(25mL)中，冰浴下，氮气置换3次加入N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(1.62g，4.26mmol，韶远)和三乙胺(536mg，5.30mmol)，加完后搅拌30分钟，再加入(S)-6-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷(854mg，3.54mmol，采用专利“CN 111164208 A中说明书第98页的中间体1-4”公开的方法制备而得)，加完后搅拌2小时。反应液依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16e(1.1g，产率：50.2％)。
MS m/z(ESI)：619.3[M+1]。
第五步
(S)-(2-氨基-5-环丙氧基-4-((三异丙基硅基)氧基)苯基)(6-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)甲酮16f
将16e(1.1g，1.78mmol)溶于乙醇(15mL)和四氢呋喃(5mL)混合溶液中，加入钯碳(200mg，含量10％，干型)，反应体系用氢气置换三次，室温搅拌反应2小时，反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物16f(620mg，产率：59.6％)。
MS m/z(ESI)：589.4[M+1]。
第六步
(S)-(2-(6-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羰基)-4-环丙氧基-5-((三异丙基硅基)氧基)苯基)氨基甲酸烯丙酯16g
将16f(1g，1.70mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入吡啶(403mg，5.10mmol)，将反应体系用氮气置换3次，降温至-65℃，缓慢滴入氯甲酸烯丙酯(205mg，1.70mmol)，加完后继续在-65℃搅拌20分钟，加入氯化铵(20mL)淬灭，分液，收集有机相，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16g(900mg，产率：78.9％)。
MS m/z(ESI)：671.3[M-1]。
第七步
(S)-(4-环丙氧基-2-(6-(羟甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羰基)-5-((三异丙基硅基)氧基)苯基)氨基甲酸烯丙酯16h
将16g(900mg，1.34mmol)溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入冰乙酸(8mL)，将反应体系用氮气置换3次，室温搅拌反应5小时，反应液经减压浓缩，残余物用乙酸乙酯(20mL)溶解，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液洗涤(15mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16h(643mg，产率： 86.1％)。
MS m/z(ESI)：559.3[M+1]。
第八步
(11aS)-7-环丙氧基-11-羟基-5-氧代-8-((三异丙基硅基)氧基)-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16i
将16h(620mg，1.11mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，加入碘苯二乙酸(536.8mg，1.66mmol)，将反应体系用氮气置换3次，加入2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(17.5mg，0.11mmol)，室温搅拌反应4小时，反应液依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16i(500mg，产率：81％)。
MS m/z(ESI)：557.3[M+1]。
第九步
(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-8-((三异丙基硅基)氧基)-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16j
将16i(500mg，0.899mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，反应体系用氮气置换3次，降温至-40℃，加入4-二甲氨基吡啶(438.8mg，3.59mmol)和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(712.2mg，2.69mmol)，加完后撤掉冷却浴，室温搅拌反应16小时，降温至-40℃后补加4-二甲氨基吡啶(438.8mg，3.59mmol)、叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(712.2mg，2.69mmol)，再升至室温反应10小时，加入氯化铵(15mL)淬灭，分液，收集有机相，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16j(420mg，产率：69.7％)。
MS m/z(ESI)：671.4[M+1]。
第十步
(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-8-羟基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16k
将16j(420mg，0.626mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)和水(0.1mL)的混合溶液中，加入醋酸锂(49.6mg，0.751mmol)，室温搅拌反应3.5小时，加入水(10mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×2)，收集有机相，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物16k(312mg，产率：96.8％)。
MS m/z(ESI)：513.6[M-1]。
第十一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代 -5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16l
将16k(26mg，0.051mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧基-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯(30mg，0.051mmol，采用专利“CN 111164208 A中说明书第103页的中间体3-10”公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(21.3mg，0.154mmol)，室温搅拌反应16小时，加入水(6mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×2)，收集有机相，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物16l(40mg，产率：76.4％)。
MS m/z(ESI)：1020.4[M+1]。
第十二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-环丙氧基-11-羟基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯16m
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为16l(40mg，0.039mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物16m(28mg，产率：78.9％)。
MS m/z(ESI)：903.2[M-1]。
第十三步
(S)-7-环丙氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮16
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为16m(28mg，0.031mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物16(20mg，产率：90.1％)。
MS m/z(ESI)：719.8[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.66(s,1H),7.46-7.44(m,1H),7.39-7.37(m,2H),7.31-7.30(m,1H),6.93-6.90(m,2H),6.85-6.84(m,1H),6.32-6.31(m,1H),4.23-4.16(m,2H),4.13-4.08(m,1H),4.04-3.99(m,1H),3.96-3.91(m,3H),3.91-3.86(m,1H),3.85-3.81(m,1H),3.76(s,3H),3.67(s,3H),3.57-3.49(m,2H),3.28-3.25(m,2H),2.79-2.74(m,1H),2.45-2.43(m,1H),2.08-1.97(m,4H),1.84-1.78(m,1H),1.59-1.53(m,2H),0.88-0.84(m,2H),0.81-0.77(m,2H),0.72-0.64(m,4H)。
实施例2-17 17
(S)-4-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡 咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,2,7a,8-四氢-10H,12H-螺[苯并呋喃并[5,4-e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-9,1'-环丙烷]-12-酮17
Figure PCTCN2022123462-appb-000143
实施例2-18 18
(S)-8-((5-(((S)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮18
Figure PCTCN2022123462-appb-000144
第一步
(2S,4R)-1-(5-环丙氧基-2-硝基-4-((三异丙基硅基)氧基)苯甲酰基)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯18a
将16d(6.5g，16.4mmol)溶于二氯甲烷(60mL)中，冰浴下，氮气置换3次加入草酰氯(2.3g，18.1mmol，阿达玛斯)，再滴入N,N-二甲基甲酰胺(0.3mL)，滴完 有大量气体产生，升至室温搅拌16小时。将(4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯(2.4g，16.53mmol，韶远)溶于二氯甲烷(60mL)中，冰浴保护，加入三乙胺(16g，158.1mmol)，再滴入上述的溶液，滴完后升至室温搅拌反应20小时。反应液依次用水(80mL)和饱和氯化钠溶液(80mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18a(8.6g，产率：100％)。
第二步
(2R,11aS)-7-环丙氧基-2-羟基-8-((三异丙基硅基)氧基)-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-5,11(10H)-二酮18b
将18a(8.6g，16.50mmol)溶于乙醇(150mL)中，加入还原铁粉(4.6g，82.40mmol)，再加入氯化铵(10.6g，198.20mmol)，反应体系用氮气置换三次，升至70℃搅拌反应16小时，反应液趁热通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到粗品标题产物18b(5.9g)，直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：461.6[M+1]。
第三步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-8-((三异丙基硅基)氧基)-1,2,3,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-5,11(10H)-二酮18c
将18b(5.9g，12.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中，依次加入咪唑(5.2g，76.4mmol)、叔丁基二甲基氯硅烷(5.8g，38.5mmol)、4-二甲氨基吡啶(3.2g，25.9mmol)，加完后室温搅拌20小时，加入水(120mL)，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，收集有机相，依次用水(100mL)和饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物18c(6.1g，产率：82.8％)。
MS m/z(ESI)：575.2[M+1]。
第四步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-8-((三异丙基硅基)氧基)-1,2,3,10,11,11a-六氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-5-酮18d
将18c(6g，10.4mmol)溶于四氢呋喃(60mL)中，冰浴下，滴入硼氢化锂的四氢呋喃溶液(1M，41.7mL，41.7mmol)，滴完后升至室温搅拌反应4小时，缓慢滴入甲醇(20mL)淬灭反应，浓缩反应液，所得残余物用乙酸乙酯(40mL)溶解，依次用水(25mL)和饱和氯化钠溶液(25mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18d(4.26g，产率：72.8％)。
第五步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-8-((三异丙基硅基)氧基)-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18e
将18d(6.5g，11.6mmol)溶于二氯甲烷(70mL)中，氮气保护降至0℃，依次加入吡啶(1.8mg，22.8mmol)、氯甲酸烯丙酯(5.6mg，46.5mmol)，0℃搅拌反应1小时，反应液依次用水(50mL)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18e(4.26g，产率：56.9％)。
MS m/z(ESI)：645.3[M+1]。
第六步
(2R,11aS)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-8-羟基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18f
将18e(4.26g，6.60mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺和水的混液(V/V＝50/1，25mL)中，加入醋酸锂(523mg，7.92mmol)，加完后室温反应4小时，加入乙酸乙酯(40mL)，依次用水(35mL×2)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18f(2.5g，产率：77.6％)。
MS m/z(ESI)：489.2[M+1]。
第七步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18g
将18f(2.5mg，5.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入1,5-二溴戊烷(5.88g，25.6mmol，阿达玛斯)、碳酸钾(847mg，6.14mmol)，室温搅拌反应16小时。加入乙酸乙酯(50mL)，依次用水(30mL×2)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18g(2.71g，产率：83.1％)。
MS m/z(ESI)：637.2[M+1]。
第八步
(2R,11aS)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-环丙氧基-2-羟基-5-氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚烷-10(5H)-羧酸烯丙酯18h
将18g(2.71g，4.25mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，加入四丁基氟化铵(1M，6.35mL，6.35mmol)，加完室温搅拌反应3小时。加入氯化铵溶液(30mL)，乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，依次用水(30mL×2)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18h(2.24g，粗品产率：>100％)。
MS m/z(ESI)：523.2[M+1]。
第九步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-环丙氧基-2,5-二氧代-2,3,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯18i
将18h(2.22g，4.25mmol)溶于二氯甲烷(40mL)中，降至0℃，加入碳酸氢钠(2.2g，26.2mmol)、戴斯-马丁氧化剂(5.44g，12.8mmol，阿达玛斯)，加完升至室温搅拌反应20小时。反应液依次用水(30mL×2)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物18i(1.62g，产率：72.6％)。
MS m/z(ESI)：521.2[M+1]。
第十步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-2-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯18j
将实施例2-1 1第七步原料1g替换为18i，采用相同的反应条件，得到标题产物18j(430mg，产率：66％)。
MS m/z(ESI):653.1[M+1]。
第十一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮18k
将实施例2-1 1第八步原料1h替换为18j，4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为4-甲氧基苯硼酸(韶远)，采用相同的反应条件，得到标题产物18k(82mg，产率：70％)。
MS m/z(ESI)：527.1[M+1]。
第十二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯18l
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为18k，采用相同的反应条件，得到标题产物18l(88mg，产率：93％)。
MS m/z(ESI)：611.2[M+1]。
第十三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯18m
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为18l(34mg，0.06mmol)，采用相同的反 应条件，得到标题产物18m(45mg，产率：79.4％)。
MS m/z(ESI)：1019.9[M+1]。
第十四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯18n
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为18m(45mg，0.04mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物18n(40mg，产率：100％)。
MS m/z(ESI)：905.7[M+1]。
第十五步
(S)-8-((5-(((S)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮18
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为18n(40mg，0.04mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物18(20mg，产率：62.9％)。
MS m/z(ESI)：719.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,1H),7.56(s,1H),7.45(s,1H),7.38(d,2H),7.33(s,1H),6.91(d,2H),6.85(s,1H),6.55(d,1H),6.31(s,1H),4.24-4.18(m,1H),4.14-4.08(m,1H),4.05-3.99(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.73-3.70(m,1H),3.62-3.58(m,1H),3.57-3.52(m,1H),3.50(d,1H),3.27-3.22(m,1H),2.79-2.74(m,1H),2.45-2.40(m,1H),2.06(d,1H),2.03-1.97(m,1H),1.84-1.78(m,4H),1.60-1.53(m,2H),1.37-1.33(m,1H),0.86(t,1H),0.81-0.76(m,1H),0.69-0.60(m,6H)。
实施例2-19 19
(S)-7-环丙氧基-8-((5-(((S)-7-环丙氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮19
Figure PCTCN2022123462-appb-000145
实施例2-20 20和21
(1aS,9aR,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧 基)-1a,9a,10,10a-四氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-3(1H)-酮
和
(1aS,9aS,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-3(1H)-酮
Figure PCTCN2022123462-appb-000146
第一步
(1S,3S,5S)-3-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷20b
将((1S,3S,5S)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)甲醇20a(246mg，2.17mmol，采 用专利申请“CN104098481 A中说明书第5页实施例5”公开的方法制备而得)置于反应瓶中，加入二氯甲烷(6mL)溶解，加入三乙胺(217mg，2.14mmol)、2,6-二甲基吡啶(455mg，4.25mmol)，降温至0℃，将反应体系用氮气置换3次，滴入叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(862mg，3.26mmol)，升至室温搅拌反应2小时。反应液中加入氯化铵(8mL)淬灭，分液，收集有机相，依次用水(6mL)和饱和氯化钠溶液(6mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物20b(470mg，产率：94.5％)。
MS m/z(ESI)：228.2[M+1]。
第二步
((1S,3S,5S)-3-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氮杂二环[3.1.0]己-2-基)(5-甲氧基-2-硝基-4-((三异丙基硅基)氧基)苯基)甲酮20c
将5-甲氧基-2-硝基-4-((三异丙基硅基)氧基)苯甲酸(657mg，1.78mmol，采用专利申请“WO2013053872A1中说明书第60页化合物2”公开的方法制备而得)置于反应瓶中，加入二氯甲烷(6mL)、三乙胺(297mg，2.94mmol)，冰浴下加入N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(812mg，2.13mmol，韶远)，升至室温搅拌反应1小时，再降温至0℃，向反应液中滴加20b(450mg，1.98mmol)和三乙胺(297mg，2.94mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液，加完升至室温搅拌反应1小时，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液洗涤(10mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物20c(930mg，产率：90.3％)。
MS m/z(ESI)：579.3[M+1]。
第三步
(2-氨基-5-甲氧基-4-((三异丙基硅基)氧基)苯基)((1S,3S,5S)-3-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氮杂二环[3.1.0]己-2-基)甲酮20d
将20c(903mg，1.56mmol)溶于乙醇(20mL)中，加入钯碳(180mg，含量10％，干型)，氢气置换三次，室温搅拌反应2小时，反应液通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，真空干燥，得到粗品标题产物20d(866mg)。
MS m/z(ESI)：549.3[M+1]。
第四步
(2-((1S,3S,5S)-3-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-2-氮杂二环[3.1.0]己-2-羰基)-4-甲氧基-5-((三异丙基硅基)氧基)苯基)氨基甲酸烯丙酯20e
将20d(347mg，0.633mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，加入吡啶(147mg，1.86mmol)，反应体系用氮气置换3次，降温至-65℃，缓慢滴入氯甲酸烯丙酯(76mg，0.631mmol)，加完后升至室温搅拌15分钟，加入10％柠檬酸溶液(6mL)淬灭，分液，收集有机相，依次用水(10mL)、碳酸氢钠溶液(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪 以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物20e(360mg，产率：90％)。
MS m/z(ESI)：633.4[M+1]。
第五步
(2-((1S,3S,5S)-3-(羟甲基)-2-氮杂二环[3.1.0]己烷-2-羰基)-4-甲氧基-5-((三异丙基硅基)氧基)苯基)氨基甲酸烯丙酯20f
将20e(360mg，0.569mmol)溶于四氢呋喃(2mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的混合溶液中，加入冰乙酸(8mL)，反应体系用氮气置换3次，室温搅拌反应3小时，反应液经减压浓缩除去有机相，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，依次用水(10mL)、碳酸氢钠溶液(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物20f(266mg，产率：90.1％)。
MS m/z(ESI)：519.2[M+1]。
第六步
(1aS,9aS,10aS)-9-羟基-5-甲氧基-3-氧代-6-((三异丙基硅基)氧基)-1,1a,9,9a,10,10a-六氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8(3H)-羧酸烯丙酯20g
将20f(266mg，0.513mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，反应体系用氮气置换3次，降温至0℃，加入碳酸氢钠(103.5mg，1.23mmol)，再加入(1,1,1-三乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(261mg，0.615mmol，adamas)，加完后升至室温搅拌1.5小时，加入二氯甲烷(10mL)稀释反应液，再依次用碳酸氢钠饱和溶液(10mL)、水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物20g(260mg，产率：98.1％)。
MS m/z(ESI)：517.2[M+1]。
第七步
(1aS,9aS,10aS)-9-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-5-甲氧基-3-氧代-6-((三异丙基硅基)氧基)-1,1a,9,9a,10,10a-六氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8(3H)-羧酸烯丙酯20h
将20g(260mg，0.503mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，反应体系用氮气置换3次，降温至-40℃，加入4-二甲氨基吡啶(438.8mg，3.59mmol)，加入叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(799mg，3.02mmol)，加完后撤掉冷却浴，室温搅拌反应16小时，降温至-40℃后补加4-二甲氨基吡啶(246mg，2.01mmol)、叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(399mg，1.51mmol)，再升至室温反应6小时，加入氯化铵(15mL)淬灭，分液，收集有机相，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物20h(209mg，产率：65.8％)。
MS m/z(ESI)：631.3[M+1]。
第八步
(1aS,9aS,10aS)-9-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-6-羟基-5-甲氧基-3-氧代-1,1a,9,9a,10,10a-六氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8(3H)-羧酸烯丙酯20i
将20h(209mg，0.331mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)和水(0.06mL)的混合溶液中，加入乙酸锂(26.3mg，0.398mmol)，反应体系用氮气置换3次，室温搅拌反应3小时，反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到粗品标题产物20i(160mg)。
MS m/z(ESI)：473.1[M-1]。
第九步
(1aS,9aS,10aS)-6-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-9-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-5-甲氧基-3-氧代-1,1a,9,9a,10,10a-六氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8(3H)-羧酸烯丙酯20j
将实施例2-1 1第十步原料1k替换为20i(71.8mg，0.151mmol)和(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯(77mg，0.131mmol，采用专利申请“CN 111164208 A中说明书第103页的中间体3-10”公开的方法制备而得)采用相同的反应条件，得到标题产物20j(41mg，产率：31.7％)。
MS m/z(ESI)：979.3[M+1]。
第十步
(1aS,10aS)-6-((5-(((S)-10-(烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-9-羟基-5-甲氧基-3-氧代-1,1a,9,9a,10,10a-六氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8(3H)-羧酸烯丙酯20k
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为20j(30mg，0.03mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物20k(26.5mg，产率：100％)。
MS m/z(ESI)：865.3[M+1]。
第十一步
(1aS,9aR,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-3(1H)-酮20
(1aS,9aS,10aS)-5-甲氧基-6-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1a,9a,10,10a-四氢苯并[e]丙环并[4,5]吡咯[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-3(1H)-酮21
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为20k(26.5mg，0.03mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物粗品。将粗品用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物(8mg，12mg)。
单一构型化合物(较短保留时间)：
MS m/z(ESI):679.3[M+1]。
HPLC分析：保留时间8.929分钟，(色谱柱：Waters Sunfire C18 4.6*75mm,3.5um；流动相：A(％)0.1％FA-H 2O/B(％)0.08％FA-ACN＝70/5＝＝>30/95)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.83(d,1H),7.45(s,1H),7.41-7.35(m,3H),7.30(s,1H),6.93-6.88(m,2H),6.84-6.81(m,1H),6.33-6.29(m,1H),4.23-4.16(m,1H),4.13-4.08(m,1H),4.04-3.99(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.83(s,3H),3.76(s,3H),3.66(s,3H),3.65-3.60(m,2H),3.58-3.51(m,2H),3.28-3.21(m,2H),2.79-2.74(m,1H),2.46-2.42(m,1H),2.03-1.96(m,2H),1.84-1.80(m,2H),1.61-1.53(m,2H),0.93-0.81(m,4H)。
单一构型化合物(较长保留时间)：
MS m/z(ESI):679.3[M+1]。
HPLC分析：保留时间9.612分钟。(色谱柱：Waters Sunfire C18 4.6*75mm,3.5um；流动相：A(％)0.1％FA-H 2O/B(％)0.08％FA-ACN＝70/5＝＝>30/95)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.72(d,1H),7.45(s,1H),7.40-7.36(m,2H),7.31-7.27(m,2H),6.93-6.89(m,2H),6.79(s,1H),6.31(s,1H),4.22-4.17(m,1H),4.13-4.04(m,2H),4.03-3.97(m,1H),3.96-3.91(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),3.74-3.71(m,1H),3.67(s,3H),3.58-3.52(m,2H),3.29-3.21(m,2H),2.79-2.73(m,1H),2.42-2.36(m,1H),2.03-1.96(m,2H),1.84-1.80(m,2H),1.61-1.53(m,2H),1.05-0.99(m,2H),0.88-0.83(m,2H)。
实施例2-22 22
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)-二酮22
Figure PCTCN2022123462-appb-000147
Figure PCTCN2022123462-appb-000148
第一步
(S)-8-羟基-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)-二酮22b
在100mL单口瓶中加入化合物(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)二酮22a(300mg，657.18μmol，采用专利申请“CN109180681A中说明书第8页的中间体005”公开的方法制备而得)，再加二氯甲烷(10mL)搅拌，冰浴冷至0-5℃，滴加甲磺酸(3mL)，并于0-5℃搅拌2小时。反应液加水，析出白色固体，抽滤，滤饼用少量水淋洗，收集滤饼，真空干燥，得到粗品标题产物(180mg)。所得粗品再加二氯甲烷(2mL×2)搅拌，反应液抽滤，滤饼用少量二氯甲烷淋洗，收集滤饼，真空干燥，得到标题产物22b(100mg，产率：42.0％)。
MS m/z(ESI)：367.50[M+1]。
第二步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-8-基)氧基)戊基)氧基)-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)-二酮22
在10mL单口瓶中加入化合物22b(60mg，163.77μmol)和化合物(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮22c(69mg，163.77μmol，采用专利申请“CN113166764A中说明书第105页的中间体6-7”公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(45mg，327.54μmol)，再加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，升温至50℃搅拌反应3小时。冷却至室温，反应液用高效液相色谱法(GILSON，色谱柱：PNtulips C18,30*150mm,5μm；流动相：水相(20mmol/L碳酸氢铵)和甲醇，梯度配比：甲醇70％-80％，流速：30mL/min)纯化，收集其相应组分，得到标题产物22(29mg，产率：25.2％)。
MS m/z(ESI)：707.30[M+1]。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.33-7.44(m,5H),7.16(s,1H),6.91-6.93(m,3H),6.68(s,1H),6.51(s,1H),4.67-4.70(m,1H),4.05-4.10(m,4H),3.78-3.80(s,6H),3.80-3.82(s,3H),3.15-3.27(m,3H),2.39-2.47(m,1H),2.21-2.31(m,1H),1.87-1.94 (m,6H),1.67-1.71(m,2H),0.63-0.71(m,4H)。
实施例2-26 26
(S)-7-甲氧基-8-(2-(2-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮26
Figure PCTCN2022123462-appb-000149
第一步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮26b
向原料(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)-二酮26a(250mg，426.07μmol，采用专利申请CN109180681 A说明书第8页中间体006公开的方法制备而得)中加入四氢呋喃(2mL)，室温搅拌，氮气置换3次，干冰-乙醇浴冷却至-78℃，滴加四硼酸锂(2.13mL，4.26mmol，2M四氢呋喃溶液)，并于-5℃搅拌24小时。反应液加冰水(20mL)淬灭，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物26b(118mg)。
MS m/z(ESI)：441.17[M+1]。
第二步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮26c
将原料26b(118mg，267.88μmol)溶于二氯甲烷(1mL)，冰浴至0-5℃，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(114mg，535.76μmol)，于0-5℃搅拌反应1小时。反应液直接用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物26c(90mg)。
MS m/z(ESI)：443.19[M+1]。
第三步
(S)-8-羟基-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮26d
将化合物26c(90mg，203.38μmol)，溶于二氯甲烷(2.8mL)，氮气置换3次，冰浴冷至0-5℃，滴加甲磺酸(1mL)，并于0-5℃搅拌2小时。反应液加冰水(20mL)淬灭，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物26d(20mg)。
MS m/z(ESI)：353.15[M+1]。
第四步
(S)-8-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮26f
在10mL单口瓶中加入原料26d(35mg，99.32μmol)、1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷26e(115mg，496.61μmol)、碳酸钾(82mg，595.93μmol)，加入N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，升温至50℃搅拌反应3小时。反应液加水(5mL)，水相用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物26f(30mg)。
MS m/z(ESI)：503.25[M+1]。
第五步
(S)-7-甲氧基-8-(2-(2-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5,11(10H)-二酮26h
在10mL单口瓶中加入原料26f(30mg，59.60μmol)、(S)-8-羟基-7-甲氧基-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5,11(10H)-二酮26g(25mg，59.60μmol，采用专利申请“CN113166764A中说明书第105页的中间体6-5”公开的方法制备而得)、碳酸钾(16mg，119.19μmol)，再加N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，升温至50℃搅拌反应3小时。反应液加水(5mL)，水相用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物26h(40mg)。
MS m/z(ESI)：841.55[M+1]。
第六步
(S)-7-甲氧基-8-(2-(2-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢 -1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)乙氧基)乙氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮26
在25mL反应管中加入原料26h(40mg，47.56μmol)，再加入四氢呋喃(2mL)搅拌，氮气置换3次，干冰-乙醇浴冷却至-78℃，滴加四硼酸锂(0.71mL，1.43mmol，2M四氢呋喃溶液)，并于-5℃搅拌7小时。反应液加冰水(5mL)淬灭，水相用二氯甲烷萃取(5mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(5mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用高效液相色谱法(GILSON，色谱柱：PNtulips C18,30*150mm,5μm；流动相：水相(20mmol/L碳酸氢铵)和甲醇，梯度配比：甲醇75％-90％，流速：30mL/min)纯化，得到标题产物26(8.7mg，产率：26.3％)。
MS m/z(ESI)：695.30[M+1]。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.45-7.47(m,5H),7.18-7.19(m,1H),6.87-6.99(m,3H),6.31(s,1H),4.20-4.25(m,1H),3.92-3.97(m,4H),3.38-3.90(m,12H),3.63-3.64(m,1H),3.35-3.44(m,4H),3.21-3.30(m,2H),2.74-2.84(m,1H),2.40-2.48(m,1H),2.01-2.09(m,1H),0.63-0.79(m,4H)。
实施例2-27 27
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,10,11,11a-四氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮27
Figure PCTCN2022123462-appb-000150
第一步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮27b
在25mL反应管中加入(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-10-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1,11a-二氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5,11(10H)-二酮27a(250mg，426.07μmol，采用专利申请“CN109180681A中说明 书第8页的化合物006”公开的方法制备而得)，再加四氢呋喃(2mL)搅拌，氮气置换3次，干冰-乙醇浴冷至-78℃，滴加四硼酸锂(2.13mL，4.26mmol，2.0M四氢呋喃溶液)，并于-5℃搅拌24小时。反应液加冰水(20mL)淬灭，水相用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱体系A纯化，得到标题产物27b(118mg)。
MS m/z(ESI)：441.17[M+1]。
第二步
(S)-8-(苄氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮27c
在25mL单口瓶中加入原料27b(118mg，267.88μmol)，加二氯甲烷(1mL)搅拌溶解，冰浴至0-5℃，分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(114mg，535.76μmol)，于0-5℃搅拌反应1小时。反应液用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物27c(90mg)。
MS m/z(ESI)：443.19[M+1]。
第三步
(S)-8-羟基-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮27d
在100mL单口瓶中加入原料27c(90mg，203.38μmol)，再加二氯甲烷(2.8mL)搅拌溶解，氮气置换3次，冰浴冷至0-5℃，滴加甲磺酸(1mL)，并于0-5℃搅拌2小时。反应液加冰水(20mL)淬灭，水相用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(20mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物27d(20mg)。
MS m/z(ESI)：353.15[M+1]。
第四步
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,10,11,11a-四氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮27
将27d(15mg，0.426mmol)置于反应瓶中，加入化合物(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮27e(34mg，0.639mmol，采用专利申请“CN113166764,A说明书第124页中间体6-7中公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(10mg，0.724mmol)，再加入N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，氮气置换三次，升温至50℃搅拌反应3小时，降温至室温，反应液直接用高效液相色谱法(GILSON，色谱柱：PNtulips C18,30*150mm,5μm；流动相：水相(20mmol/L碳酸氢铵)和乙腈，梯度配比：乙腈40％-70％，流速：30mL/min)纯化，得到标题产物27(16mg，产率：54.2％)。
MS m/z(ESI)：695.4[M+1]。
1H-NMR(400MHz,DMSO)δ7.42-7.47(m,1H),7.34-7.40(m,2H),7.27-7.343(m,2H),6.87-6.93(m,2H),6.50-6.57(d,1H),6.28-6.32(d,2H),6.23-6.28(d,1H),4.13-4.29(m,1H),3.88-3.99(m,4H),3.79-3.87(m,1H),3.72-3.78(s,3H),3.60-3.69(s,6H)，3.43-3.57(m,3H),3.08-3.31(m,4H),2.69-2.81(m,1H)，1.91-2.01(m,1H)，1.76-1.86(m,5H)，1.50-1.61(m,2H),0.46-0.69(m,4H)。
实施例2-29 29
(S)-7-甲氧基-8-((5-((((S)-7-甲氧基-2-(4-(甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮29
Figure PCTCN2022123462-appb-000151
第一步
(S)-8-((5-(氯甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮29b
在10mL单口瓶中加入原料27d(50mg，141.89μmol)、3,5-双(氯甲基)吡啶盐酸盐29a(75mg，354.72μmol)、碳酸钾(78mg，567.55μmol)，再加N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，升温至50℃搅拌反应3小时，反应液直接用高效液相色谱法(色谱柱：Batch ODS-C18,80g Flash；流动相：水相和乙腈，梯度配比：乙腈0％-60％，流速：50mL/min)纯化，得到标题产物29b(27mg)。
MS m/z(ESI)：492.20[M+1]。
第二步
(S)-8-羟基-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环 -2,1'-环丙烷]-5-酮29c
在250mL三口瓶中加入原料26g(1g，2.39mmol)，加四氢呋喃(20mL)搅拌溶解，氮气置换3次，干冰-乙醇浴冷至-78℃，滴加三乙酰氧基硼氢化锂(24mL，23.9mmol，1.0M四氢呋喃溶液)，并于-78℃搅拌1小时。反应结束后，反应液缓慢倒入冰水(200mL)中，水相用二氯甲烷萃取(200mL×3)，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤(100mL)，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，得到标题产物29c(870mg)。
Ms(ESI)：m/z 273.12[M+1]。
第三步
(S)-7-甲氧基-8-((5-((((S)-7-甲氧基-2-(4-(甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)吡啶-3-基)甲氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮29
在10mL单口瓶中加入原料29b(27mg，54.88μmol)、29c(25mg，54.88μmol)、碳酸钾(19mg，137.20μmol)，再加N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，升温至50℃搅拌反应3小时，反应液直接用高效液相色谱法(GILSON，色谱柱：Xtimate C18,30*150mm,5μm；流动相：水相(20mmol/L碳酸氢铵)和甲醇，梯度配比：甲醇65％-80％，流速：30mL/min)纯化，得到标题产物29(2.1mg)。
MS m/z(ESI)：728.30[M+1]。
1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.60(s,2H),8.02(s,2H),7.32-7.46(m,4H),7.20(s,1H),6.88-6.90(m,2H),6.66(s,1H),6.34(s,1H),5.17-5.21(m,5H),4.18-4.28(m,1H),3.75-3.82(m,9H),3.70-3.75(m,1H),3.55-3.68(m,2H),3.38-3.42(m,1H),3.23-3.26(m,1H),2.73-2.85(m,1H),2.37-2.45(m,1H),1.23-1.38(m,2H),0.60-0.69(m,4H)。
实施例2-30 30
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮30
Figure PCTCN2022123462-appb-000152
Figure PCTCN2022123462-appb-000153
第一步
(S)-4-(4-(8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯30a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为4-(4-叔丁氧羰基哌嗪)苯硼酸频那醇酯，采用相同的条件，得到标题产物30a(228mg，产率：62.3％)。
MS m/z(ESI)：655.5[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯30b
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为30a(228mg，0.04mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物30b(204mg，产率：79.3％)。
MS m/z(ESI)：739.5[M+1]。
第三步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯30c
将30b(100mg,0.14mmol)溶于无水二氯甲烷(1mL)，加三氟乙酸(0.3mL)，室温搅拌1小时。反应液减压浓缩除去有机溶剂，油泵抽干。残余物溶于乙酸乙酯(20mL)，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，真空干燥，得到粗品标题产物30c(70mg，产率：80.7％)。产物不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI)：639.5[M+1]。
第四步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(4-(2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯30d
将30c(70mg,0.11mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，加叔丁基二甲基硅氧烷基乙醛(96mg,0.55mmol，Acros)，室温搅拌30分钟。向反应液中缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(140mg,0.66mmol)，加毕，室温继续搅拌2小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物30d(60mg，产率：68.7％)。
MS m/z(ESI)：797.5[M+1]。
第五步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙
基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯30e
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为30d(45mg，0.07mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物30e(62mg，产率：68.4％)。
MS m/z(ESI)：1205.7[M+1]。
第六步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯30f
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为30e(62mg，0.05mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物30f(20mg，产率：39.8％)。
MS m/z(ESI)：978.0[M+1]。
第七步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮30
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为30f(20mg，0.02mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物30(10mg，产率：61.8％)。
MS m/z(ESI)：791.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.39(s,1H),7.33(s,1H),7.29(d,2H),7.21-7.15(m,1H),6.90(d,2H),6.85(s,1H),6.68-6.62(m,1H),6.54-6.50(m,1H),6.32(s,1H),5.33(t,1H),4.44-4.40(m,1H),4.22-4.09(m,4H),4.05-4.01(m,1H),3.97-3.90(m,3H),3.82(s,2H),3.67(s,3H),3.57-3.49(m,4H),3.27-3.20(m,2H),3.17-3.09(m,4H),2.03-1.95(m,3H),1.86-1.78(m,3H),1.62-1.55(m,2H),1.49-1.44(m,2H),1.35(d,1H),0.86(t,3H),0.80-0.76(m,1H),0.69-0.64(m,2H)。
实施例2-31 31
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((R)-2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮31
Figure PCTCN2022123462-appb-000154
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31a
将实施例2-1 1第十步原料1j替换为30b(260mg，0.35mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物31a(360mg，产率：89.3％)。
MS m/z(ESI)：1147.1[M+1]。
第二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31b
将实施例2-30 30第三步原料30b替换为31a(360mg，0.31mmol)，采用相同的反应条件，得到粗品标题产物31b(300mg)。
MS m/z(ESI)：933.5[M+1]。
第三步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(((R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31c
将31b(65mg,0.07mmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)中，加(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛(200mg,0.77mmol，毕得)，室温搅拌30分钟。向反应液中缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(115mg,0.54mmol)，加毕，室温继续搅拌1小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物31c(60mg，产率：82.2％)。
MS m/z(ESI)：1045.7[M-1]。
第四步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-((R)-2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]
吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯31d
将31c(60mg,0.06mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，加三氟乙酸(0.4mL)，室温搅拌10分钟。减压浓缩，油泵抽干。残余物溶于乙酸乙酯(20mL)，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物31d(14mg，产率：24.3％)。
MS m/z(ESI)：1007.9[M+1]。
第五步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((R)-2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮31
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为31d(14mg，0.01mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物31(10mg，产率：87.6％)。
MS m/z(ESI)：821.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.92(d,1H),7.40-7.38(m,1H),7.33(s,1H),7.31-7.28(m,2H),6.91(d,1H),6.85(s,1H),6.67-6.64(m,1H),6.53(d,1H),6.32(s,1H),5.33(t,1H),4.54-4.50(m,1H),4.44-4.41(m,1H),4.18-4.11(m,2H),4.04-4.01(m,1H),3.95-3.92(m,2H),3.82(s,2H),3.66(s,4H),3.56-3.50(m,3H),3.17-3.03(m,6H),2.74-2.71(m,1H),2.03-1.95(m,6H),1.85-1.77(m,5H),1.61-1.55(m,2H),1.48-1.44(m,2H),1.35(d,1H),0.86(t,4H),0.69-0.64(m,2H)。
实施例2-32 32
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羟基乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮32
Figure PCTCN2022123462-appb-000155
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(2-羟基乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯32a
将31b(50mg，0.05mmol)溶于无水二氯甲烷(5mL)和甲醇(0.5mL)中，依次加入2-羟基乙酸(4.1mg，0.05mmol，伊诺凯)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化吗啉盐(30mg，0.11mmol，韶远)，室温搅拌1小时。减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物32a(34mg，产率： 64.0％)。
MS m/z(ESI)：991.8[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-(2-羟基乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮32
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为32a(34mg，0.03mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物32(25mg，产率：90.5％)。
MS m/z(ESI)：805.9[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.39(s,1H),7.33-7.24(m,2H),7.04(s,1H),6.91(d,1H),6.83(s,1H),6.56(s,1H),6.52-6.47(m,1H),6.29(s,1H),4.60(t,1H),4.19-4.08(m,3H),3.98-3.89(m,3H),3.82-3.77(m,1H),3.69-3.62(m,3H),3.61-3.56(m,2H),3.55-3.40(m,6H),3.25-3.19(m,2H),3.17-3.09(m,3H),2.72(dd,1H),2.36-2.25(m,2H),2.19-2.15(m,1H),2.05-1.93(m,2H),1.86-1.73(m,4H),1.60-1.51(m,2H),1.46-1.41(m,1H),0.86-0.77(m,2H),0.69-0.51(m,3H)。
实施例2-33 33
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((S)-2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮33
Figure PCTCN2022123462-appb-000156
第一步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并 [1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯33a
将实施例2-31 31第三步原料(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛替换为(R)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛，采用相同的反应条件，得到标题产物33a(23mg，产率：82.0％)。
MS m/z(ESI)：1047.9[M+1]。
第二步
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-((S)-2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸烯丙酯33b
将33a(23mg，0.02mmol)溶于乙腈(2mL)，加三氟甲磺酸镱(28mg，0.05mmol，韶远)，加热至60℃继续搅拌16小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物33b(10mg，产率：45.2％)。
MS m/z(ESI)：1005.8[M-1]。
第三步
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(4-((S)-2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮33
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为33b(10mg，0.01mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物33(5mg，产率：61.3％)。
MS m/z(ESI)：821.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,1H),7.36(s,1H),7.31(s,1H),7.30-7.22(m,2H),6.88(d,1H),6.83(s,1H),6.63(br,1H),6.52-6.49(m,1H),6.29(s,1H),5.30(t,1H),4.50(br,1H),4.40(d,1H),4.17-4.06(m,2H),4.03-3.98(m,1H),3.95-3.87(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.58(m,4H),3.55-3.44(m,3H),3.20-3.05(m,6H),2.72(dd,1H),2.35-2.14(m,6H),2.02-1.93(m,3H),1.84-1.74(m,2H),1.58-1.51(m,2H),1.47-1.39(m,2H),1.34-1.30(m,1H),0.90-0.76(m,4H),0.67-0.59(m,2H)。
实施例2-34 34
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-((环丙基甲基)硫基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮34
Figure PCTCN2022123462-appb-000157
第一步
(4-((环丙基甲基)硫基)苯基)硼酸
将四氢呋喃(1mL)置于反应瓶中，反应体系用氮气置换三次，用干冰丙酮浴冷却至-78℃，滴加2.5M正丁基锂溶液(1.89mL，4.73mmol)，滴完后搅拌10分钟。滴加(4-溴苯基)(环丙基甲基)硫烷(700mg，2.88mmol，采用专利申请“WO2006/134341,A1中说明书第43页的实施例7”公开的方法制备而得)的5mL四氢呋喃溶液，滴完后于-78℃继续搅拌1小时，滴加硼酸三异丙酯(740mg，3.93mmol)的5mL四氢呋喃溶液，滴完后将反应液升至室温，继续搅拌3小时。向反应液中加入20mL水，搅拌30分钟，然后加入1M盐酸调节反应液pH为1，加完后搅拌30分钟。反应液减压浓缩，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物(4-((环丙基甲基)硫基)苯基)硼酸(352mg，产率：58.7％)。
MS m/z(ESI)：207.1[M-1]。
采用实施例2-1 1的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为(4-((环丙基甲基)硫基)苯基)硼酸，制得标题产物34(12mg，总产率：11.9％)。
MS m/z(ESI)：749.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.89(d,1H),7.55(s,1H),7.39-7.33(m,2H),7.32-7.22(m,3H),7.03(s,1H),6.84-6.81(m,1H),6.58-6.53(m,1H),6.32-6.28(m, 1H),4.23-4.16(m,1H),4.13-4.07(m,1H),4.03-3.98(m,1H),3.96-3.90(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.62(m,4H),3.60-3.46(m,3H),3.27-3.19(m,2H),2.90(d,2H),2.75(dd,1H),2.43-2.38(m,1H),2.34-2.25(m,1H),2.19-2.14(m,1H),2.06-1.94(m,2H),1.83-1.72(m,3H),1.62-1.51(m,2H),1.35-1.31(m,1H),1.00-0.94(m,1H),0.86-0.80(m,1H),0.64-0.57(m,1H),0.52-0.45(m,2H),0.26-0.20(m,2H)。
实施例2-35 35
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(环丁基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮35
Figure PCTCN2022123462-appb-000158
第一步
(4-(环丁基硫基)苯基)硼酸
将四氢呋喃(3mL)置于反应瓶中，反应体系用氮气置换三次，用干冰丙酮浴冷却至-78℃，滴加2.5M正丁基锂溶液(3.23mL，8.07mmol)，滴完后搅拌10分钟。滴加(4-溴苯基)(环丁基)硫烷(1.2g，4.94mmol，采用专利申请“EP1921074A1中说明书第17页的实施例14”公开的方法制备而得)的10mL四氢呋喃溶液，滴完后于-78℃继续搅拌1小时，滴加硼酸三异丙酯(1.27g，6.75mmol)的8mL四氢呋喃溶液，滴完后将反应液升至室温，继续搅拌3小时。向反应液中加入30mL水，搅拌30分钟，然后加入1M盐酸调节反应液pH为1，搅拌30分钟。反应液减压浓缩，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，有机相用无水硫酸 钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用CombiFlash快速制备仪以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物(4-(环丁基硫基)苯基)硼酸(821mg，产率：79.9％)。
MS m/z(ESI):207.1[M-1]。
采用实施例2-1 1的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为(4-(环丁基硫基)苯基)硼酸，制得标题产物35(10mg，总产率：12.8％)。
MS m/z(ESI)：749.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.57(s,1H),7.37(d,2H),7.29(t,2H),7.18(d,2H),7.06-7.03(m,1H),6.85-6.82(m,1H),6.59-6.54(m,1H),6.33-6.29(m,1H),4.24-4.16(m,2H),4.14-4.07(m,1H),4.04-3.92(m,4H),3.83-3.78(m,1H),3.71-3.64(m,4H),3.62-3.47(m,3H),3.26-3.19(m,2H),2.76(dd,1H),2.43-2.32(m,2H),2.21-2.15(m,1H),2.05-1.96(m,2H),1.84-1.76(m,4H),1.61-1.53(m,2H),1.36-1.32(m,1H),0.87-0.81(m,2H),0.69-0.53(m,4H)。
实施例2-36 36
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-环丙基哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮36
Figure PCTCN2022123462-appb-000159
采用实施例2-1 1的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为1-环丙基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)哌啶(采用专利申 请“KR102019/0109007A中说明书第59页的实施例10”公开的方法制备而得)，制得标题产物36(25mg，总产率：20.9％)。
MS m/z(ESI)：786.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.52(s,1H),7.38-7.31(m,2H),7.29(s,1H),7.19(d,2H),6.84(s,1H),6.54(d,1H),6.32(s,1H),4.24-4.16(m,1H),4.15-4.08(m,1H),4.05-3.99(m,1H),3.98-3.91(m,2H),3.81(s,3H),3.65(s,3H),3.57-3.46(m,2H),3.2 7-3.18(m,2H),3.02(br,2H),2.76(dd,1H),2.46-2.37(m,2H),2.29-2.17(m,2H),2.08-1.95(m,2H),1.88-1.76(m,4H),1.74-1.66(m,2H),1.63-1.51(m,4H),1.37-1.32(m,1H),0.89-0.74(m,3H),0.71-0.60(m,3H),0.48-0.38(m,2H),0.34-0.25(m,2H)。
实施例2-37 37
(S)-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮37
Figure PCTCN2022123462-appb-000160
采用实施例2-1 1的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)-1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶(采用专利申请“US2013/210798,A1中说明书第40页的实施例60”公开的方法制备而得)，制得标题产物37(16mg，总产率：20.7％)。
MS m/z(ESI)：828.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.50(s,1H),7.37-7.30(m,2H),7.28(s,1H),7.19(d,2H),6.83(s,1H),6.57-6.50(m,1H),6.29(s,1H),4.22-4.14(m,1H),4.12-4.06(m,1H),4.03-3.97(m,1H),3.96-3.89(m,2H),3.82-3.76(m,2H),3.70-3.61(m,4H),3.60-3.44(m,3H),3.25-3.09(m,4H),2.99(d,2H),2.75(dd,1H),2.43-2.36(m,2H),2.34-2.25(m,1H),2.05-1.93(m,2H),1.83-1.74(m,4H),1.71-1.52(m,6H),1.33(d,1H),0.83(t,1H),0.79-0.73(m,1H),0.69-0.51(m,3H)。
实施例2-38 38
(S)-8-((5-(((S)-2-(4-(1-(2,2-二氟乙基)哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮38
Figure PCTCN2022123462-appb-000161
采用实施例2-1 1的合成路线，将第八步试剂4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为1-(2,2-二氟乙基)-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧代硼烷-2-基)苯基)哌啶(采用专利申请“WO2020002487,A1中说明书第122页的实施例59第二步”公开的方法制备而得)，制得标题产物38(13mg，总产率：15.7％)。
MS m/z(ESI)：810.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.90(d,1H),7.52(s,1H),7.38-7.32(m,2H),7.29(s,1H),7.21(d,2H),6.84(s,1H),6.57-6.52(m,1H),6.32(s,1H),5.32(t,1H),4.23-4.17(m,1H),4.14-4.09(m,1H),4.05-3.99(m,1H),3.97-3.91(m,2H),3.83-3.80 (m,2H),3.68-3.64(m,3H),3.58-3.47(m,3H),3.27-3.19(m,2H),3.00(d,2H),2.80-2.70(m,3H),2.47-2.40(m,2H),2.30-2.22(m,2H),2.08-1.96(m,3H),1.85-1.78(m,3H),1.74-1.54(m,6H),1.37-1.31(m,1H),0.86(t,1H),0.81-0.75(m,1H),0.72-0.61(m,3H)。
实施例2-39 39
(S)-7-环丙氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-5-氧代-2-(4-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-1,11a-二氢-3H,5H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-5-酮39
Figure PCTCN2022123462-appb-000162
采用实施例2-1 1的合成路线，将第十步试剂1j替换为5b，将1k替换为16k，制得标题产物39(20mg，总产率：16.3％)。
MS m/z(ESI)：773.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.99(s,1H),7.73-7.65(m,2H),7.64-7.56(m,2H),7.47-7.39(m,1H),7.35(s,1H),7.28(d,1H),6.91(s,1H),6.64-6.58(m,1H),6.40-6.37(m,1H),4.30-4.14(m,2H),4.10-3.86(m,5H),3.73(s,2H),3.70-3.45(m,5H),3.32-3.27(m,1H),3.20(d,1H),2.89-2.76(m,2H),2.70(s,1H),2.48-2.35(m,2H),2.14-1.99(m,2H),1.86(br,4H),1.78-1.55(m,5H),1.43-1.39(m,1H),0.94-0.82(m,3H),0.80-0.61(m,5H)。
三、连接子-药物的实施例
实施例3-1 LD-1
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯 基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-1
Figure PCTCN2022123462-appb-000163
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(4-(叔丁氧羰基)哌嗪-1-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺
[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1b
将30b(66mg，0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-8-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1a(60mg，0.07mmol，采用专利申请“CN 111164208 A中说明书第123页的实施例1”公开的方法制备而得)，再加入无水碳酸钾(31mg，0.22mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用水(15 mL×3)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-1b(89mg，产率：81.7％)。
MS m/z(ESI)：1466.4[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1c
将LD-1b(89mg，0.06mmol)溶于无水二氯甲烷(0.5mL)，加入4N的盐酸1,4-二氧六环溶液(1mL)，室温搅拌1小时。反应液减压浓缩，油泵抽干，所得残余物溶于乙酸乙酯(20mL)，依次用饱和碳酸氢钠溶液(5mL×2)和饱和食盐水(5mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤后滤液减压浓缩。所得残余物溶于无水四氢呋喃(4mL)，加入甲醛水溶液(50mg，含量37％，0.62mmol)，室温搅拌30分钟。向反应液中缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(39mg，0.18mmol)，室温继续搅拌1小时。冰浴冷却，加入饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-1c(34mg，产率：44.2％)。
MS m/z(ESI)：1266.9[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-1d
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为LD-1c(34mg，0.03mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-1d(40mg，粗品产率：>100％)。
MS m/z(ESI)：1098.7[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-1
将LD-1d(10mg，0.01mmol)溶于1.1mL无水二氯甲烷和甲醇(V/V＝10:1)的混合溶剂，依次加入2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4,6,8,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酸LD-1e(3.9mg，0.01mmol，采用专利申请“CN 111164208 A中说明书第127页的实施例2”公开的方法制备而得)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(5mg，0.02mmol，韶远)，氮气置换三次，室温搅拌反应30分钟。反应液经减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-1(10mg，产率：73.2％)。
MS m/z(ESI)：1499.8[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),8.25-8.20(m,1H),8.19-8.10(m,1H),8.08-8.00(m,1H),7.79-7.64(m,2H),7.60(t,1H),7.57-7.53(m,1H),7.51-7.47(m,1H),7.46-7.42(m,2H),7.37-7.32(m,4H),7.29(s,2H),7.20(d,2H),7.05(s,1H),6.97(d,1H),6.72(s,1H),6.68-6.63(m,1H),6.56-6.52(m,1H),6.32(s,1H),5.76(t,1H),5.32(t,2H),5.19(d,1H),5.02(d,1H),4.84-4.76(m,1H),4.40-4.33(m,1H),4.23-4.15(m,2H),3.97-3.91(m,3H),3.80-3.73(m,5H),3.66(s,3H),3.62-3.58(m,2H),3.56-3.51(m,2H),3.41(t,1H),2.78-2.71(m,1H),2.64(s,2H),2.31-2.24(m,2H),2.04-1.96(m,9H),1.83-1.74(m,5H),1.59-1.44(m,8H),1.37-1.33(m,5H),0.89-0.86(m,5H),0.82-0.78(m,3H),0.65-0.55(m,4H)。
实施例3-2 LD-2
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(吗啉-4-基)苯基]-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-2
Figure PCTCN2022123462-appb-000164
Figure PCTCN2022123462-appb-000165
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-吗啉代苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧基-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-2a
将2b(51.4mg，0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入LD-1a(50mg，0.06mmol)和无水碳酸钾(25.6mg，0.19mmol)，室温搅拌16小时。向反应液中加入水(6mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，依次用水(10mL×3)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物LD-2a(65mg，产率：76.9％)。
MS m/z(ESI)：1367.9[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-吗啉代苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-2b
将LD-2a(65mg，0.05mmol)溶于无水四氢呋喃(3mL)中，冰水浴冷却，加入冰乙酸(17.1mg，0.29mmol)，再加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.24mL，0.24mmol)，加毕，撤去冰水浴，室温搅拌22小时。加入乙酸乙酯(6mL)稀释，依次用饱和氯化铵水溶液(10mL×2)和饱和氯化钠水溶液洗涤(10mL×2)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物LD-2b(59.5mg，产率：100％)。
MS m/z(ESI):1253.8[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-吗啉代苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-2c
将LD-2b(59.5mg，0.047mmol)溶于无水二氯甲烷(2mL)，依次加入吡咯烷(33.8mg，0.48mmol)和四(三苯基膦)钯(5.5mg，0.0047mmol)，氮气氛围下搅拌30分钟。减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-2c(45mg，产率：87.3％)。
MS m/z(ESI)：1085.6[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(吗啉-4-基)苯基]-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-2
将LD-2c(10mg，0.01mmol)溶于二氯甲烷和甲醇的混液(V/V＝10/1，2mL)中，依次加入LD-1e(3.86mg，0.01mmol)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(6.4mg，0.02mmol)，氮气氛围下搅拌30分钟。减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-2(2.1mg，产率：15.4％)。
MS m/z(ESI)：1486.9[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.42(s,1H),9.89(s,1H),8.24-8.18(m,1H),8.18-8.14(m,1H),8.14-8.10(m,1H),8.07-7.99(m,1H),7.78-7.73(m,1H),7.72-7.63(m,2H),7.62-7.57(m,1H),7.57-7.51(m,1H),7.51-7.39(m,3H),7.38-7.27(m,3H),7.23-7.16(m,2H),7.07-7.02(m,1H),6.93-6.88(m,1H),6.75-6.70(m,1H),6.69-6.62(m,1H),6.57-6.48(m,2H),6.31(s,1H),5.35-5.30(m,1H),5.23-5.14(m,1H),5.04-4.98(m,1H),4.84-4.77(m,1H),4.40-4.31(m,2H),4.23-4.12(m,2H),4.03-3.83(m,6H),3.81-3.71(m,5H),3.66(s,2H),3.63-3.48(m,5H),3.43-3.38(m,2H),3.28-3.20(m,2H),3.16-3.08(m,3H),2.80-2.60(m,7H),2.39-2.22(m,3H),2.10-1.92(m,4H),1.84-1.71(m,3H),1.61-1.49(m,3H),1.49-1.41(m,2H),1.37-1.32(m,1H),0.90-0.77(m,5H),0.74-0.67(m,1H),0.64-0.54(m,2H)。
实施例3-3 LD-3
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-5-[4-(环丙基硫基)苯基]-13-甲氧基-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-3
Figure PCTCN2022123462-appb-000166
第一步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(环丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮LD-3a
将实施例2-1 1第八步原料4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯硼酸替换为((4-环丙基硫基)苯基)硼酸，采用相同的条件，得到标题产物LD-3a(110mg，产率：69.9％)。
MS m/z(ESI)：543.1[M+1]。
第二步
(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(环丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢
-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯LD-3b
将实施例2-1 1第九步原料1i替换为LD-3a(110mg，0.20mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-3b(108mg，产率：85.0％)。
MS m/z(ESI)：627.1[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-2-(4-(环丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-3c
将实施例3-1 LD-1第一步原料30b替换为LD-3b(56mg，0.09mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-3c(90mg，产率：82.6％)。
MS m/z(ESI)：1354.8[M+1]。
第四步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-10-(烯丙氧基)羰基)-2-(4-(环丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-3d
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为LD-3c(90mg，0.07mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-3d(75mg，产率：91.0％)。
MS m/z(ESI)：1240.8[M+1]。
第五步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-((5-(((S)-2-(4-(环丙基硫基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-3e
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为LD-3d(75mg，0.06mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-3e(51mg，产率：78.7％)。
MS m/z(ESI)：1072.8[M+1]。
第六步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-5-[4-(环丙基硫基)苯基]-13-甲氧基-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三 烯-9'-羧酸酯LD-3
将实施例3-1 LD-1第四步原料LD-1d替换为LD-3e(17mg，0.02mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-3(5mg，产率：21.4％)。
MS m/z(ESI)：1473.5[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.90(s,1H),8.25-8.11(m,2H),8.09-8.00(m,1H),7.76(d,1H),7.74-7.64(m,2H),7.61(t,1H),7.57(s,1H),7.55-7.53(m,1H),7.50-7.48(m,1H),7.45-7.43(m,1H),7.40(d,2H),7.38-7.34(m,2H),7.33(s,1H),7.31(s,2H),7.22-7.17(m,2H),7.05(s,1H),6.73(s,1H),6.59-6.51(m,2H),6.32(s,1H),5.77(t,1H),5.33(t,1H),5.19(d,1H),5.06-4.98(m,1H),4.40-4.32(m,1H),4.25-4.17(m,2H),3.94(t,3H),3.79(s,3H),3.76-3.72(s,2H),3.67(s,3H),3.62-3.58(m,3H),3.56-3.52(m,3H),3.42(t,2H),3.15(d,1H),2.81-2.75(m,2H),2.30-2.24(m,2H),2.11-2.03(m,2H),2.02-1.95(m,5H),1.83-1.76(m,4H),1.61-1.51(m,4H),1.50-1.43(m,2H),1.10-1.07(m,2H),0.88-0.84(m,5H),0.81(t,3H),0.61-0.57(m,4H)。
实施例3-4 LD-4
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-2-氧代-5-[4-(1H-吡唑-1-基)苯基]-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-4
Figure PCTCN2022123462-appb-000167
采用实施例3-2 LD-2的合成路线，将第一步试剂2b替换为4b，制得标题产物LD-4(15mg，总产率：43％)。
MS m/z(ESI)：1467.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.90(s,1H),8.52-8.50(m,1H),8.29-7.98(m,4H),7.81(d,2H),7.78-7.64(m,3H),7.64-7.52(m,3H),7.52-7.42(m,3H),7.40-7.29(m,3H),7.25-7.15(m,3H),7.10-7.02(m,1H),6.77-6.63(m,2H),6.60-6.52(m,2H),6.33(s,1H),5.22-5.18(m,1H),5.05-5.00(m,1H),4.86-4.80(m,1H),4.40-4.32(m,1H),4.28-4.19(m,2H),4.02-3.38(m,24H),3.20-3.15(m,1H),2.72-2.61(m,2H),2.33-2.23 (m,2H),2.07-1.92(m,2H),1.89-1.68(m,4H),1.63-1.53(m,3H),1.49-1.45(m,3H),1.00-0.78(m,6H),0.73-0.53(m,4H)。
实施例3-5 LD-5
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(氧烷-4-基)苯基]-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-5
Figure PCTCN2022123462-appb-000168
采用实施例3-2 LD-2的合成路线，将第一步试剂2b替换为5b，制得标题产物LD-5(18mg，总产率：42％)。
MS m/z(ESI)：1485.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),8.31-7.94(m,3H),7.79-7.64(m,2H),7.63-7.44(m,7H),7.40-7.28(m,6H),7.25-7.15(m,1H),7.07-7.02(m,1H),6.80-6.64(m,2H),6.60-6.50(m,2H),6.32(s,1H),5.82-5.70(m,1H),5.26-5.15(m,1H),5.07-4.97(m,1H),4.87-4.76(m,1H),4.41-4.34(m,1H),4.25-4.16(m,2H),4.00-3.51(m,27H),3.18-3.12(m,1H),2.80-2.70(m,1H),2.68-2.60(m,2H),2.33-2.23(m,2H),2.10-1.94(m,6H),1.85-1.74(m,4H),1.62-1.53(m,3H),1.51-1.43(m,3H),0.87-0.80(m,6H),0.76-0.53(m,4H)。
实施例3-6 LD-6
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-12'-[(5-{[(7S)-5-{4-[1-(2-羟乙酰基)哌啶-4-基]苯基}-13-甲氧基-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-6
Figure PCTCN2022123462-appb-000169
实施例3-7 LD-7
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-2-氧代-5-[4-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苯基]-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-7
Figure PCTCN2022123462-appb-000170
采用实施例3-2 LD-2的合成路线，将第一步试剂2b替换为7b(70mg，0.11mmol)，制得标题产物LD-7(13mg，总产率：7.8％)。
MS m/z(ESI)：735.0[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.23-8.15(m,2H),8.12(s,2H),8.08-8.00(m,1H),7.98(d,1H),7.76(d,1H),7.73-7.55(m,4H),7.57-7.52(m,1H),7.51-7.40(m,2H),7.39-7.27(m,3H),7.23-7.16(m,2H),7.07-7.02(m,1H),6.75-6.70(m,1H),6.68-6.50(m,3H),6.32(s,1H),5.35-5.30(m,1H),5.22-5.15(m,1H),5.04-4.98(m,1H),4.84-4.77(m,1H),4.40-4.32(m,2H),4.29-4.16(m,2H),3.99-3.89(m,3H),3.87-3.71(m,5H),3.67(s,2H),3.64-3.50(m,4H),3.43-3.35(m,2H),3.29-3.22(m,2H),3.18-3.09(m,2H),2.88-2.79(m,2H),2.69-2.59(m,3H),2.40-2.32(m,2H),2.31-2.21(m,2H),2.10-1.92(m,4H),1.84-1.71(m,4H),1.61-1.50(m,3H),1.49-1.41(m,2H),1.39-1.32(m,1H),0.90-0.77(m,5H),0.75-0.66(m,1H),0.64-0.54(m,2H)。
实施例3-8 LD-8
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-[4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基]-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-8
Figure PCTCN2022123462-appb-000171
采用实施例3-2 LD-2的合成路线，将第一步试剂2b替换为6b，制得标题产物LD-8(13mg，总产率：29％)。
MS m/z(ESI)：1498.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),8.27-7.96(m,3H),7.83-7.63(m,2H),7.62-7.26(m,12H),7.24-7.14(m,3H),7.08-7.02(m,1H),6.75-6.68(m,1H),6.61-6.50(m,2H),6.32(s,1H),5.80-5.72(m,1H),5.24-5.15(m,1H),5.05-4.98(m,1H),4.87-4.77(m,1H),4.41-4.31(m,1H),4.25-4.16(m,2H),3.97-3.90(m,5H),3.88-3.72(m,9H),3.70-3.38(m,14H),3.27-3.10(m,2H),2.81-2.60(m,4H),2.31-2.22(m,2H),2.09-1.95(m,6H),1.86-1.69(m,4H),1.60-1.51(m,3H),1.49-1.42(m,3H),0.92-0.76(m,6H),0.73-0.55(m,4H)。
实施例3-9 LD-9
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-{3-[1-({[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}甲基)环丙基]丙氧基}-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-9
Figure PCTCN2022123462-appb-000172
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺
[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-9a
将实施例3-1 LD-1第一步原料30b替换为13k(58mg，0.01mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-9a(98mg，产率：84.5％)。
MS m/z(ESI)：1338.6[M+1]。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基
(11aS)-8-(3-(1-((((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-11-羟基-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-9b
将实施例2-1 1第十一步原料1l替换为LD-9a(98mg，0.07mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-9b(73mg，产率：81.4％)。
MS m/z(ESI)：1224.7[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-11-羟基-7-甲氧基-8-(3-(1-((((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-8-基)氧基)甲基)环丙基)丙氧基)-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-9c
将实施例2-1 1第十二步原料1m替换为LD-9b(73mg，0.06mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-9c(58mg，产率：88.4％)。
MS m/z(ESI)：1056.8[M+1]。
第四步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-{3-[1-({[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}甲基)环丙基]丙氧基}-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-9
将实施例3-1 LD-1第四步原料LD-1d替换为LD-9c(15mg，0.01mmol)，采用相同的反应条件，得到标题产物LD-9(17mg，产率：82.1％)。
MS m/z(ESI)：729.8[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),9.87(s,1H),8.26-8.09(m,2H),8.08-7.99(m,1H),7.81-7.64(m,2H),7.60(s,1H),7.55-7.42(m,5H),7.40-7.27(m,6H),7.22-7.11(m,2H),7.04(s,1H),6.91(d,2H),6.78-6.69(m,1H),6.27(s,1H),5.75(s,1H),5.13(d,1H),5.02(d,1H),4.82(d,1H),4.36(s,1H),4.26-4.13(m,2H),3.99-3.93(m,1H),3.86(s,6H),3.79-3.72(m,9H),3.67(s,3H),3.61-3.57(m,3H),3.53(d,2H),3.43-3.37(m,2H),3.14(d,1H),2.76(d,1H),2.65-2.62(m,1H),2.38-2.29(m,2H),2.00-1.95(m,2H),1.88-1.75(m,4H),1.62-1.54(m,3H),0.88-0.79(m,8H),0.64-0.56(m,3H),0.54-0.42(m,4H)。
实施例3-10 LD-10
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-{[1-(3-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}丙基)环丙基]甲氧基}-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-10
Figure PCTCN2022123462-appb-000173
实施例3-11 LD-11
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-13'-环丙氧基-8'-羟基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-11
Figure PCTCN2022123462-appb-000174
第一步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(2-((S)-6-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羰基)-4-环丙氧基-5-((三异丙基硅基)氧基)苯基)氨基甲酸酯LD-11a
将16f(900mg，1.53mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入三乙胺(231mg，2.29mmol)，氮气氛下降至0℃，加入三光气(204mg，0.69mmol)，搅拌10分钟后，滴入N-[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]-L-缬氨酰基-N-[4-(羟甲基)苯基]-L-丙氨酸酰胺(693mg，1.84mmol，依据专利“WO2020/006722A1”中说明书第161页实施例113所示的方法合成)与三乙胺(231mg，2.29mmol)的四氢呋喃(4mL)、N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)混合溶液，加完后升至40℃搅拌反应19小时。向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机相，依次用水(15mL×2)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱 法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物LD-11a(937mg，产率：73.3％)。
第二步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(4-环丙氧基-2-((S)-6-(羟甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-羰基)-5-((三异丙基硅基)氧基)苯基)氨基甲酸酯LD-11b
将LD-11a(930mg，0.05mmol)溶于四氢呋喃、甲醇和水的混液(V/V/V＝1/1/1，8mL)中，加入冰乙酸(8mL)，室温搅拌5小时。浓缩反应液，所得残余物用乙酸乙酯(10mL)溶解，依次用水(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物LD-11b(630mg，产率：76.5％)。
MS m/z(ESI)：878.3[M+1]。
第三步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11S,11aS)-7-环丙氧基-11-羟基-5-氧代-8-((三异丙基硅基)氧基)-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11c
将LD-11b(580mg，0.66mmol)溶于无水二氯甲烷(6mL)，依次加入碘苯二乙酸(319.5mg，0.99mmol)、2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(10.4mg，0.07mmol)，氮气氛围下搅拌16小时。反应液用氯化铵溶液(10mL)淬灭，分液，有机相用水(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物LD-11c(489mg，产率：84.6％)。
MS m/z(ESI)：876.3[M+1]。
第四步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11S,11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-8-((三异丙基硅基)氧基)-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11d
将LD-11c(489mg，0.56mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，氮气氛下，降至零下40℃，依次加入4-二甲氨基吡啶(545mg，4.46mmol)、叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(1g，3.79mmol)，升至室温搅拌16小时。反应液用氯化铵溶液(10mL)淬灭，分液，有机相用水(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物LD-11d(499mg，产率：90.3％)。
第五步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11S,11aS)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-8-羟基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11e
将LD-11d(499mg，0.50mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺和水的混液(V/V＝50/1,5mL)中，再加入醋酸锂(40mg，0.61mmol)，氮气氛下，室温搅拌3小时。反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取，有机相用水(10mL×2)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物LD-11e(419mg，产率：99.7％)。
第六步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)戊基)氧基)-11-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-环丙氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11f
将LD-11e(70mg，0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧基-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸烯丙酯(58.9mg，0.10mmol，采用专利“CN 111164208 A中说明书第103页的中间体3-10”公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(34.8mg，0.25mmol)，室温搅拌反应16小时，加入水(6mL)，乙酸乙酯萃取(10mL×2)，收集有机相，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-11f(111mg，产率：98.7％)。
MS m/z(ESI)：1338.6[M+1]。
第七步
4-((S)-2-((S)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基
(11aS)-8-((5-(((S)-10-((烯丙氧基)羰基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-环丙氧基-11-羟基-5-氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11g
将LD-11f(111mg，0.08mmol)溶于无水四氢呋喃(6mL)中，冰水浴冷却，加入冰乙酸(29.9mg，0.49mmol)，再加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M，0.4mL，0.42mmol)，加毕，撤去冰水浴，室温搅拌22小时。加入乙酸乙酯(10mL)稀释，依次用饱和氯化铵水溶液(10mL×2)和饱和氯化钠水溶液洗涤(10mL×2)。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物LD-11g(92mg，产率：90.6％)。
MS m/z(ESI)：1224.4[M+1]。
第八步
4-((S)-2-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酰氨基)苄基(11aS)-7-环丙氧基-11-羟基-8-((5-(((S)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氢-1H-苯并[e]吡咯 并[1,2-a][1,4]二氮杂-8-基)氧基)戊基)氧基)-5氧代-11,11a-二氢-1H,3H-螺[苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂-2,1'-环丙烷]-10(5H)-羧酸酯LD-11h
将LD-11g(92mg，0.08mmol)溶于无水二氯甲烷(3mL)，依次加入吡咯烷(53.5mg，0.75mmol)和四(三苯基膦)钯(8.7mg，0.0075mmol)，氮气氛围下搅拌30分钟。减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-11h(49mg，产率：61.7％)。
MS m/z(ESI)：1056.9[M+1]。
第九步
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-13'-环丙氧基-8'-羟基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-11
将LD-11h(25mg，0.02mmol)溶于二氯甲烷和甲醇的混液(V/V＝10/1，2mL)中，依次加入LD-1e(9.9mg，0.02mmol)和4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(16.4mg，0.06mmol)，氮气氛围下搅拌30分钟。减压浓缩除去有机溶剂，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题产物LD-11(14mg，产率：40.5％)。
MS m/z(ESI)：729.8[M/2+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.89(s,1H),8.25-7.99(m,4H),7.76(d,1H),7.73-7.57(m,3H),7.57-7.51(m,1H),7.51-7.41(m,3H),7.40-7.27(m,4H),7.24-7.16(m,2H),6.93-6.88(m,1H),6.76-6.70(m,1H),6.68-6.61(m,1H),6.57-6.49(m,2H),6.31(s,1H),5.35-5.30(m,1H),5.23-5.16(m,1H),5.04-4.97(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.42-4.30(m,2H),4.23-4.14(m,2H),3.99-3.82(m,3H),3.76(s,3H),3.67(s,2H),3.63-3.50(m,5H),3.44-3.39(m,2H),3.27-3.21(m,1H),3.18-3.09(m,2H),2.78-2.62(m,7H),2.40-2.33(m,2H),2.31-2.23(m,2H),2.20-2.16(m,1H),2.10-1.93(m,4H),1.84-1.68(m,4H),1.61-1.41(m,5H),1.36(s,1H),0.89-0.73(m,6H),0.72-0.51(m,5H)。
实施例3-12 LD-12
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(4S,6S,8S)-9-羟基-14-甲氧基-13-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2-氧代-3,10-二氮杂四环[9.4.0.0 3,8.0 4,6]十五-1(15),11,13-三烯-10-羧酸酯LD-12
Figure PCTCN2022123462-appb-000175
实施例3-13 LD-13
(2S,3S,4S,5R)-6-(4-{[(7S)-12-({5-[(7'S)-9'-[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲氧基)羰基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-12'-基氧基]戊基}氧基)-13-甲氧基-5-(吗啉-4-基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-9-羰基氧基]甲基}-2-[(2-甲氧基乙基)氨基羰基]苯氧基)-3,4,5-三羟基氧烷-2-甲酸LD-13
Figure PCTCN2022123462-appb-000176
实施例3-14 LD-14
(2S,3S,4S,5R)-6-(4-{[(7S)-12-({5-[(7'S)-9'-[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲氧基)羰基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-12'-基氧基]戊基}氧基)-5-[4-(环丙基硫基)苯基]-13-甲氧基-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-9-羰基氧基]甲基}-2-[(2-甲氧基乙基)氨基羰基]苯氧基)-3,4,5-三羟基氧烷-2-甲酸LD-14
Figure PCTCN2022123462-appb-000177
实施例3-15 LD-15
(2S,3S,4S,5R)-6-(4-{[(7S)-12-[(1-{3-[(7'S)-9'-[({4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲氧基)羰基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-12'-基氧基]丙基}环丙基)甲氧基]-13-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-9-羰基氧基]甲基}-2-[(2-甲氧基乙基)氨基羰基]苯氧基)-3,4,5-三羟基氧烷-2-甲酸LD-15
Figure PCTCN2022123462-appb-000178
实施例3-16 LD-16
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-13-环丙氧基-5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-16
Figure PCTCN2022123462-appb-000179
采用实施例3-2 LD-2的合成路线，将第一步试剂2b替换为18l，制得标题产物LD-16(16mg，总产率：50％)。
MS m/z(ESI)：1457.6[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),8.28-7.96(m,3H),7.79-7.64(m,2H),7.63-7.28(m,11H),7.24-7.17(m,2H),7.08-7.02(m,1H),6.91(d,2H),6.75-6.70(m,1H),6.60-6.51(m,2H),6.31(s,1H),5.80-5.74(m,1H),5.22-5.15(m,1H),5.05-5.00(m,1H),4.85-4.78(m,1H),4.40-4.33(m,1H),4.25-4.18(m,2H),4.00-3.70(m,20H),3.65-3.50(m,4H),3.18-3.10(m,1H),2.82-2.73(m,2H),2.31-2.25(m,2H),2.09-1.94(m,2H),1.84-1.72(m,4H),1.58-1.52(m,3H),1.50-1.43(m,3H),0.88-0.78(m,6H),0.68-0.55(m,8H)。
实施例3-17 LD-17
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰胺基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基苯基}甲基(7'S)-12'-[(5-{[(7S)-5-[4-(1-环丙基哌啶-4-基)苯基]-13-甲氧基-2-氧代-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-8'-羟基-13'-甲氧基-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸酯LD-17
Figure PCTCN2022123462-appb-000180
采用实施例3-2 LD-2的合成路线，将第一步试剂2b替换为(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-2-(4-(1-环丙基哌啶-4-基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氢-1H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-10(5H)-羧酸丙烯酯36b，制得标题产物LD-17(17mg，总产率：46％)。
MS m/z(ESI)：1524.7[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.89(s,1H),8.32-8.00(m,3H),7.79-7.42(m,9H),7.40-7.25(m,5H),7.25-7.15(m,2H),7.09-7.01(m,1H),6.75-6.62(m,2H),6.60-6.50(m,2H),6.32(s,1H),5.80-5.72(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.05-4.98(m,1H),4.85-4.77(m,1H),4.40-4.31(m,1H),4.26-4.17(m,2H),4.00-3.87(m,6H),3.85-3.51(m,20H),3.27-3.14(m,3H),3.07-2.97(m,1H),2.80-2.72(m,2H),2.32-2.20(m,2H),2.06-1.93(m,6H),1.86-1.70(m,4H),1.66-1.51(m,3H),1.50-1.42(m,3H),0.90-0.80(m,6H),0.66-0.29(m,8H)。
实施例3-18 LD-18
{4-[(2S)-2-[(2S)-2-{2-[2-(4-{2-氮杂三环[10.4.0.0 4,9]十六-1(12),4(9),5,7,13,15-六烯-10-炔-2-基}-4-氧代丁酰氨基)乙酰氨基]乙酰氨基}-3-甲基丁酰氨基]丙酰氨基]苯基}甲基(7'S)-8'-羟基-13'-甲氧基-12'-[(5-{[(7S)-13-甲氧基-2-氧代-5-{4-[1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基]苯基}-3,9-二氮杂三环[8.4.0.0 3,7]十四-1(14),4,10,12-四烯-12-基]氧基}戊基)氧基]-2'-氧代-3',9'-二氮杂螺[环丙烷-1,5'-三环[8.4.0.0 3,7]十四烷]-1'(14'),10',12'-三烯-9'-羧酸盐LD-18
Figure PCTCN2022123462-appb-000181
Figure PCTCN2022123462-appb-000182
采用实施例3-9 LD-9的合成路线，将第一步试剂13k替换为(S)-8-((5-溴戊基)氧基)-7-甲氧基-2-(4-(1-(2,2,2-三氟乙基)哌啶-4-基)苯基)-1,10,11,11a-四氢-5H-苯并[e]吡咯并[1,2-a][1,4]二氮杂庚环-5-酮37b，制得标题产物LD-18(20mg，总产率：20.6％)。
MS m/z(ESI)：1566.4[M+1]。
1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.91(s,1H),8.29-8.10(m,2H),8.09-7.97(m,1H),7.78-7.63(m,2H),7.62-7.57(m,1H),7.57-7.51(m,2H),7.50-7.46(m,1H),7.46-7.41(m,1H),2.40-7.26(m,7H),7.25-7.15(m,4H),7.10-7.01(m,1H),6.72(s,1H),6.53(s,2H),6.35-6.27(m,1H),5.76(s,1H),5.38-5.28(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.06-4.97(m,1H),4.86-4.75(m,1H),4.35(s,1H),4.20(s,2H),3.93(s,3H),3.84(s,4H),3.81-3.71(m,6H),3.68-3.64(m,3H),3.63-3.57(m,5H),3.56-3.51(m,2H),3.05-2.97(m,2H),2.81-2.72(m,1H),2.36(s,1H),2.30-2.24(m,1H),2.06-1.92(m,3H),1.86-1.64(m,10H),1.55(s,3H),1.49-1.43(m,1H),1.37-1.32(m,2H),0.90-0.77(m,8H),0.75-0.66(m,1H),0.65-0.54(m,3H)。
四、糖链合成实施例
实施例4-1糖链OLS-1(包含OLS-1-a和OLS-1-b)的合成
Figure PCTCN2022123462-appb-000183
Figure PCTCN2022123462-appb-000184
Figure PCTCN2022123462-appb-000185
第一步
OLS-1b(包括OLS-1b 1和OLS-1b 2)的合成
将OLS-1a(20mg，0.01mmol，采用公知的方法“Journal of Carbohydrate Chemistry,2017,36,336-346”制备而得)溶于1.2mL二甲亚砜和N,N-二甲基甲酰胺(V/V＝5:7)混合溶剂中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.55mg，0.02mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(0.1mL)，11-叠氮基-3,6,9-三氧杂十一烷-1-胺(1.51mg，0.007mmol，购于安耐吉)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(0.1mL)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(HATU，3.16mg，0.008mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(0.1mL)，在28℃搅拌反应6小时。反应液用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：XBridge Prep Amide 5um 19*150mm；流动相:A-水(0.01％氨水)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：30mL/min)，收集其相应组分，冻干得到标题产物OLS-1b(包括OLS-1b 1和OLS-1b 2)(4.7mg)。
MS m/z(ESI):1110.5[M/2+1]。
第二步
OLS-1(包含OLS-1-a和OLS-1-b)的合成
将OLS-1b(包括OLS-1b 1和OLS-1b 2)(1mg，0.45umol)溶于水(0.2mL)中，冰浴下加入三乙胺(2mg，0.02mmol)和2-氯-1,3-二甲基咪唑氯化物(1.14mg，6.75umol)的水溶液(0.1mL)，冰浴下搅拌反应，每隔2小时补加三乙胺(2mg，0.02mmol) 和2-氯-1,3-二甲基咪唑氯化物(DMC，1.14mg，6.75umol)的水溶液(0.1mL)，共搅拌反应8小时。反应液用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：Welch HILIC 5um 10*250mm；流动相:A-水(0.01％氨水)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：15mL/min)，收集其相应组分，冻干得到标题产物OLS-1(包含OLS-1-a和OLS-1-b)(0.2mg)。
MS m/z(ESI)：1101.7[M/2+1]。
实施例4-2糖链OLS-2(包含OLS-2-a和OLS-2-b)的合成
Figure PCTCN2022123462-appb-000186
Figure PCTCN2022123462-appb-000187
Figure PCTCN2022123462-appb-000188
第一步
OLS-2a(包括OLS-2a 1和OLS-2a 2)的合成
将OLS-1a(100mg，49.5μmol)溶于1mL 0.2M pH＝5.0的磷酸缓冲液得到A液，将2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(N 3-PEG 2-NH 2，100mg，574μmol，麦克林试剂)溶于1mL 0.2M pH＝7.0的磷酸缓冲液得到B液，将4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物(DMTMM，100mg，361μmol，毕得医药)溶于1mL水得到C液。
将700μL的A液、186μL B液、466μL C液混合，调节pH＝5.0，50℃孵育3小时，补加466μL C液，50℃孵育1.5小时。反应液用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：
Figure PCTCN2022123462-appb-000189
Prep C18 5μm OBD TM(19×250mm)；流动相：A-水：B-乙腈，梯度洗脱，流速：8mL/min)，收集其相应组分，冻干得到标题产物OLS-2a(包括OLS-2a 1和OLS-2a 2)(61mg)。
MS m/z(ESI)：1088.9[M/2+1]。
第二步
OLS-2(包含OLS-2-a和OLS-2-b)的合成
将OLS-2a(61mg，28mmol)、2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(CDMBI，30.4mg，140mmol)、磷酸钾(89.2mg，420mmol)在2.8mL水中混合，冰浴冷却并搅拌反应3小时。反应液生成沉淀时反应完成。反应液用凝胶色谱柱法纯化(填 料：GE Healthcare Sephadex TM G-25 Fine，流动相：在2‰的三乙胺的水相体系)，收集其相应组分，冻干得到标题产物OLS-2(包含OLS-2-a和OLS-2-b)。
MS m/z(ESI)：1079.9[M/2+1]。
实施例4-3糖链OLS-3的合成
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-3
Figure PCTCN2022123462-appb-000190
第一步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4-双(苄氧基)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-7-(苄氧基)-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂己环-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-3b
向装有(2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-6-(((2R,3S,4R,5R,6R)-5-叠氮基-4,6-双(苄氧基)-2-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)氧基)-7-(苄氧基)-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂己环OLS-3a(214mg，0.23mmol，采用公知的方法“Journal of the American Chemistry Society,2008,130,13790-13803”制备而得)的反应瓶中加入异丙醇(10mL)和乙酸乙酯(10mL)，然后加入镍(125mg)，氢气置换三次，控温15～25℃反应约65小时。反应液经硅藻土过滤，滤液减压浓缩，向所得残余物依次加入吡啶(5mL)和乙酸酐(69mg，0.68mmol)，控温15～25℃反应约2.5小时。将反应液用水(20mL)及乙酸乙酯(30mL)稀释，分液，收集有机相，水相再用乙酸乙酯萃取(10mL)。合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液(10mL×2)、水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题产物OLS-3b(185mg)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
第二步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-2,4-双(苄氧基)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aS)-7-(苄氧基)-8-羟基-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂己环-6-基)氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-3c
向装有OLS-3b(185mg，0.19mmol)的反应瓶中依次加入乙腈(5mL)、水(0.5mL)和硝酸铈铵(220mg，0.41mmol)，控温20～30℃反应约1.5小时。将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合溶液中，分液，收集有机相，水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取。合并有机相，依次用饱和亚硫酸钠溶液(20mL)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-3c(65mg，产率：40.1％)。
MS m/z(ESI)：832.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.41-7.17(m,25H),5.57(d,1H),5.39(s,1H),4.95-4.81(m,4H),4.62(d,1H),4.58-4.47(m,4H),4.41(d,1H),4.09-4.02(m,2H),3.90(t,1H),3.72-3.62(m,4H),3.54-3.46(m,3H),3.40-3.34(m,1H),3.09-3.03(m,1H),2.25(s,1H),1.71(s,3H)。
第三步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-8-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-7-(苄氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂己环-6-基)氧基)-2,4-双(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-3e
依次将N,N-二甲基甲酰胺(2mL)和2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-3d(24mg，0.073mmol，爱玛特)加入装有OLS-3c(28mg，0.034mmol)的反应瓶中，冷却至0℃。加入氢化钠(11mg，0.28mmol，含量60％)，加毕，在0℃反应约1小时，然后升温至15～25℃反应约15.5小时。将反应液倒入饱和氯化铵溶液(5mL)及水(20mL)的混合溶液中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取。合并有机相，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系C纯化，得到标题产物OLS-3e(33mg，产率：100.0％)。
MS m/z(ESI)：989.4[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.16(m,25H),5.70(d,1H),5.43(s,1H),4.87(d,1H),4.84-4.76(m,3H),4.70(d,1H),4.58-4.50(m,4H),4.39(d,1H),4.08-3.95(m,2H),3.93-3.85(m,2H),3.76-3.68(m,3H),3.62-3.51(m,9H),3.50-3.47(m,4H),3.34-3.31(m,1H),3.24-3.21(m,2H),3.11-3.06(m,1H),1.65(s,3H)。
第四步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-3-(苄氧基)-5-羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-双(苄氧 基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-3f
将化合物OLS-3e(84mg，0.085mmol)溶解于二氯甲烷(8mL)中，氮气氛下降温至-20℃，滴加三氟乙酸(1.5mL)，滴加完毕，升温至0℃搅拌反应约3小时。加入甲醇(4mL)淬灭反应，加入二氯甲烷(20mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)洗涤，水相用二氯甲烷(20mL)萃取。合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂体系D纯化所得残余物，得到标题产物OLS-3f(46mg，产率：60.1％)。
MS m/z(ESI)：901.4[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31-7.15(m,20H),5.70(d,1H),4.88-4.78(m,3H),4.69(s,2H),4.57-4.50(m,3H),4.43-4.39(m,2H),4.08-4.02(m,2H),3.82(t,2H),3.74-3.49(m,16H),3.46-3.37(m,2H),3.29(t,2H),3.11-3.06(m,1H),3.01-2.98(m,1H),1.66(s,3H)。
第五步
N-((3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-3,5-二羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-二羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-3g(非对映异构体混合物)
将化合物OLS-3f(50mg，0.055mmol)溶解于四氢呋喃(5mL)和水(1mL)中，加入5％氢氧化钯(14mg)、10％钯碳(15mg)和盐酸(1滴)。氢气置换三次。室温搅拌反应约3小时，过滤，滤液减压浓缩，得中间体粗品。另取一反应瓶，依次加入咪唑-1-磺酰基叠氮盐酸盐(29.1mg，0.057mmol，采用公知的方法“Organic Letters,2007,9,3797-3800”制备而得)、碳酸钾(39.2mg，0.28mmol)、五水硫酸铜(5.4mg，0.022mmol)及甲醇(2mL)，再将中间体粗品用甲醇(2mL)溶解后加入到反应瓶中，室温反应约16小时。过滤，滤液减压浓缩，加入乙醇(6mL)，过滤后所得滤液经减压浓缩得到标题产物OLS-3g粗品1。
将化合物OLS-3f(144mg，0.16mmol)溶解于四氢呋喃(4mL)和水(1mL)中，加入5％氢氧化钯(7mg)、10％钯碳(5mg)和盐酸(22mg，0.22mmol)。氢气置换三次，室温搅拌反应约3.5小时。向反应液中补加5％氢氧化钯(32mg)，10％钯碳(31mg)，氢气置换三次，室温搅拌反应约1.5小时。过滤，滤液减压浓缩得中间体粗品(112mg)。另取一反应瓶，依次加入咪唑-1-磺酰基叠氮盐酸盐(74.3mg，0.35mmol)、碳酸钾(102.7mg，0.74mmol)、五水硫酸铜(11.8mg，0.047mmol)及甲醇(6mL)，再取中间体粗品(89.3mg)加入到反应瓶中，室温反应约4.5小时。过滤，滤液减压浓缩，加甲醇(12mL)，过滤后所得滤液经减压浓缩得标题产物OLS-3g粗品2。
将以上两部分标题产物OLS-3g的粗品合并，用高效液相色谱法(色谱柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流动相：水相(10mM碳酸氢铵)和乙腈，梯度配比：乙腈0％-20％，流速：25mL/min)纯化，得到标题产物OLS-3g(80mg， 产率：68.7％)。
MS m/z(ESI)：541.2[M+1]。
1H NMR(400MHz,D2O)δ5.20(d,1H),4.75(s,1H),4.30-4.24(m,1H),3.94-3.84(m,5H),3.81-3.77(m,1H),3.76-3.70(m,11H),3.67-3.62(m,2H),3.60-3.52(m,1H),3.51-3.44(m,4H),2.03(s,3H)。
第六步
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7a R)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-3
冰浴下，将OLS-3g(50mg，0.093mmol)溶解于纯水(12mL)中，加入碳酸铯(1.80g，5.52mmol)和2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(420mg，1.93mmol，采用公知的方法“Helvetica Chimica Acta,2012,vol.95,1928-1936”制备而得)，0℃搅拌反应约13.5小时。用高效液相色谱法(色谱柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流动相：水和乙腈，梯度配比：乙腈0％-20％，流速：25mL/min)纯化反应液，得到标题产物OLS-3(15mg，产率：31.0％)。
MS m/z(ESI)：523.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.00(d,1H),5.38(s,1H),4.99(s,1H),4.65(s,1H),4.44-4.31(m,3H),4.12-4.02(m,3H),3.99-3.95(m,2H),3.89-3.87(m,1H),3.84-3.76(m,3H),3.75-3.65(m,9H),3.40(t,2H),3.37-3.35(m,1H),3.31-3.28(m,1H),2.67(s,2H),2.02(s,3H)。
实施例4-4糖链OLS-4的合成
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-5,6,7,7a-四氢-3aH-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-4
Figure PCTCN2022123462-appb-000191
Figure PCTCN2022123462-appb-000192
第一步
2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙-1-醇OLS-4b
将乙二醇OLS-4a(50.00g，805.57mmol)溶解于无水四氢呋喃(300mL)中，依次加入钠氢(4.93g，128.89mmol，含量60％)、四丁基碘化铵(5.37g，16.11mmol)，氮气氛下，在0℃搅拌反应30分钟，随后缓慢滴加对甲氧基苄氯(20.19g，128.89mmol)，约30分钟滴加完毕，升温至80℃搅拌反应16小时。将反应液倒入冰水中搅拌淬灭，加入乙酸乙酯(500mL)搅拌，分液，所得水相用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，有机相用水(250mL×3)，饱和氯化钠溶液(250mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4b(22.00g，产率：14.9％)。
MS m/z(ESI)：205.2[M+23]。
第二步
2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-4c
将OLS-4b(22.00g，120.74mmol)溶解于吡啶(98mL)中，在0℃加入对甲苯磺酰氯(27.62g，144.88mmol)。氮气氛下，0℃搅拌反应并缓慢恢复至室温反应16小时。加入乙酸乙酯(300mL)稀释反应液，用盐酸(10％，150mL×3)洗涤，有机相依次用水(150mL×3)、饱和氯化钠溶液(250mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4c(36.40g，产率：89.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.81(d,2H),7.33(d,2H),7.21(d,2H),6.88(d,2H),4.43(s,2H),4.23-4.17(m,2H),3.82(s,3H),3.68-3.61(m,2H),2.45(s,3H)。
第三步
3-(2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙氧基)丙-1-醇OLS-4d
将OLS-4c(36.40g，108.20mmol)、1,3-丙二醇(82.34g，1.08mol)溶解于甲苯(100mL)中，室温加入粉状氢氧化钾(15.18g，270.51mmol)，将混合物在氮气氛下加热至50℃，搅拌反应72小时。反应液倒入冰水(200mL)中，滴加浓盐酸至反应液pH为3～4，加入乙酸乙酯(300mL)萃取，分液，水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4d(15.60g，产率：60.0％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.28(d,2H),6.89(d,2H),4.51(s,2H),3.81(s,3H),3.79(t,2H),3.68(t,2H),3.65-3.59(m,4H),2.51(br.s,1H),1.88-1.82(m,2H)。
第四步
3-(2-((4-甲氧基苄基)氧基)乙氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯OLS-4e
将OLS-4d(15.60g，64.92mmol)溶解于吡啶(52mL)和二氯甲烷(52mL)的混合溶液中，在0℃加入对甲苯磺酰氯(18.56g，97.38mmol)，氮气氛下，0℃搅拌反应并缓慢恢复至室温反应16小时。加入乙酸乙酯(300mL)稀释反应液，依次用盐酸(10％，150mL×3)、水(150mL×3)和饱和氯化钠溶液(250mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4e(18.00g，产率：70.3％)。
MS m/z(ESI)：417.3[M+23]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,2H),7.34(d,2H),7.27(d,2H),6.90(d,2H),4.48(s,2H),4.16(t,2H),3.83(s,3H),3.53-3.49(m,6H),2.45(s,3H),1.96-1.91(m,2H)。
第五步
14-叠氮基-1-(4-甲氧基苯基)-2,5,9,12-四氧杂十四烷OLS-4f
将OLS-4e(8.00g，20.28mmol)、叠氮-二聚乙二醇(3.72g，28.39mol，爱玛特)溶解于甲苯(33mL)中，室温加入粉状氢氧化钾(2.84g，50.70mmol)，将混合物在氮气氛下加热至60℃，搅拌反应16小时。反应液倒入冰水(100mL)中，滴加浓盐酸至反应液pH为3～4，加入乙酸乙酯(100mL)萃取，分液，水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4f(6.3g，产率：87.9％)。
MS m/z(ESI)：376.3[M+23]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.29(d,2H),6.89(d,2H),4.52(s,2H),3.82(s, 3H),3.70–3.56(m,14H),3.40(t,2H),1.93-1.87(m,2H)。
第六步
2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙-1-醇OLS-4g
将OLS-4f(6.30g，17.83mmol)溶解于二氯甲烷(31mL)和水(3.1mL)中，室温下加入二氯二氰苯醌(4.45g，19.61mmol，阿拉丁)，氮气氛下，25℃搅拌反应1.5小时。反应液用硅藻土过滤，滤液加入二氯甲烷(150mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(100mL×2)、饱和亚硫酸氢钠溶液(100mL×2)、水(100mL)和饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4g(3.2g，产率：76.9％)。
第七步
2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-4h
将OLS-4g(3.20g，13.72mmol)溶解于吡啶(11mL)和二氯甲烷(11mL)中，冷却至0℃，加入对甲苯磺酰氯(3.14g，16.46mmol)，氮气氛下，0℃搅拌反应并缓慢恢复至室温反应16小时。加入乙酸乙酯(200mL)稀释反应液，依次用盐酸(10％，150mL×3)、水(150mL×3)、饱和氯化钠溶液(250mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4h(4.80g，产率：90.3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.79(d,2H),7.34(d,2H),4.14(t,2H),3.67-3.57(m,8H),3.51-3.46(m,4H),3.38(t,2H),2.44(s,3H),1.81-1.75(m,2H)。
第八步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-8-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-7-(苄氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂己环-6-基)氧基)-2,4-双(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-4i
依次将OLS-3c(340mg，0.41mmol)、N,N-二甲基甲酰胺(4.8mL)和2mL OLS-4h(398mg，1.03mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液加入反应瓶中，冷却至0℃。加入氢化钠(86mg，2.15mmol，含量60％)，0℃反应约0.5小时，然后升温至20～30℃反应约0.5小时。将反应液倒入饱和氯化铵溶液(10mL)及水(10mL)的混合溶液中，乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并有机相，依次用水(10mL)和饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4i(362mg，产率：84.6％)。
MS m/z(ESI)：1047.4[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.16(m,25H),5.70(d,1H),5.44(s,1H),4.87(d,1H),4.84-4.78(m,3H),4.71-4.68(m,1H),4.57-4.50(m,4H),4.41-4.38(m,1H),4.04-4.01(m,1H),3.97(t,1H),3.93-3.84(m,2H),3.76-3.68(m,3H),3.61-3.40(m,16H),3.34-3.27(m,3H),3.11-3.05(m,2H),1.78-1.72(m,2H),1.51(s,3H)。
第九步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3-(苄氧基)-5-羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-双(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-4j
依次将化合物OLS-4i(360mg，0.34mmol)和二氯甲烷(26mL)加入反应瓶中，氮气氛下冷却至-30～-20℃，滴加三氟乙酸(3.6mL)，滴加完毕，升温至-5～5℃搅拌反应约1.5小时。加入甲醇(5.1mL)淬灭反应，加入二氯甲烷(12.3mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(26mL×2)和饱和氯化钠溶液(13mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-4j(234mg，产率：71.0％)。
MS m/z(ESI)：959.7[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31-7.17(m,20H),5.64(d,1H),4.87(d,1H),4.84-4.79(m,2H),4.70(s,2H),4.58-4.50(m,3H),4.43-4.39(m,2H),4.05(t,1H),3.82(t,1H),3.74-3.36(m,23H),3.30(t,2H),3.10-3.07(m,1H),3.00-2.97(m,1H),2.21(br.s,1H),1.81-1.75(m,2H),1.66(s,3H)。
第十步
N-((3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3,5-二羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-二羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-4k(非对映异构体混合物)
将OLS-4j(150mg，158.72μmol)溶解于四氢呋喃(8mL)和水(2mL)中，加入氢氧化钯(50.0mg，含量15％)、钯碳(61mg，含量10％)和盐酸(1滴)。氢气置换三次，室温搅拌反应12小时。过滤除去催化剂，滤液减压浓缩，所得残余物溶解于甲醇(7mL)中，加入咪唑-1-磺酰基叠氮盐酸盐(6mg，220.41μmol)、碳酸钾(68mg，492.00μmol)和硫酸铜(5.7mg，22.83μmol)，室温搅拌反应12小时。过滤除去无机盐，用甲醇(3mL)淋洗固体，合并有机相，滤液减压浓缩，得到粗品标题产物OLS-4k(161mg)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：599.3[M+1]。
第十一步
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-5,6,7,7a-四氢-3aH-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-4
冰浴下，将粗品化合物OLS-4k(161mg，148.01μmol)溶解于纯水(8mL)中，加入2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(557mg，3.07mmol)和碳酸铯(3.00g，9.20mmol)，0℃搅拌反应12小时。用高效液相色谱法(色谱柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流动相：水(0.01％氨水)和乙腈，梯度配比：乙腈0％-30％，流速：25mL/min)纯化反应液，5mol％氢氧化钠溶液中冻干得到标题产物OLS-4(35mg，第十步和十一步两步总产率：38.2％)。
MS m/z(ESI)：581.3[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.02(d,1H),4.65(s,2H),4.30(s,2H),4.09-3.93(m,5H),3.86-3.77(m,4H),3.73-3.51(m,16H),3.40-3.28(m,5H),2.01(s,3H),1.88-1.81(m,2H)。
实施例4-5糖链OLS-5的合成
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-5
Figure PCTCN2022123462-appb-000193
第一步
1-((2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)甲基)-4-甲氧基苯OLS-5a
将OLS-4e(2.0g，5.07mmol)、2-叠氮基乙醇(593mg，6.08mmol)溶解于甲苯(7mL)中，室温加入粉状氢氧化钾(711mg，12.67mmol)，将混合物在氮气氛下加热至60℃，搅拌反应16小时。反应液倒入冰水(100mL)中，滴加浓盐酸至反应液pH为3～4，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-5a(1.09g，产率：69.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.27(d,2H),6.88(d,2H),4.50(s,2H),3.80(s,3H),3.62-3.55(m,10H),3.35(t,2H),1.91-1.85(m,2H)。
第二步
2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙-1-醇OLS-5b
将OLS-5a(1090mg，3.56mmol)溶解于二氯甲烷(5.0mL)和水(0.5mL)中，室 温加入二氯二氰苯醌(888mg，3.91mmol)，氮气氛下25℃搅拌反应1小时。加入二氯甲烷(150mL)稀释，依次用饱和碳酸氢钠溶液(100mL×2)、饱和亚硫酸氢钠溶液(100mL×2)、水(100mL)和饱和氯化钠溶液(100mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-5b(385mg，产率：57.2％)。
第三步
2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯OLS-5c
将OLS-5b(385mg，2.03mmol)溶解于吡啶(3mL)中，冷却至0℃，加入对甲苯磺酰氯(466mg，2.44mmol)，氮气氛下，0℃搅拌反应并缓慢恢复至室温反应4小时。加入乙酸乙酯(200mL)稀释反应液，依次用盐酸(10％，150mL×3mL)、水(150mL×3)和饱和氯化钠溶液(250mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥30分钟，过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-5c(509mg，产率：72.9％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,2H),7.34(d,2H),4.15(t,2H),3.63-3.59(m,4H),3.53-3.49(m,4H),3.35(t,2H),2.45(s,3H),1.82-1.76(m,2H)。
第四步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2R,4aR,6S,7S,8S,8aR)-8-(2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-7-(苄氧基)-2-苯基六氢吡喃并[3,2-d][1,3]二氧杂己环-6-基)氧基)-2,4-双(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-5d
依次将OLS-3c(437mg，0.53mmol)、OLS-5c(451mg，1.31mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(9.0mL)加入反应瓶中，冰水浴冷却，加入氢化钠(106mg，2.65mmol，含量60％)，控温0～10℃反应约0.5小时，然后升温至20～30℃反应约2.5小时。将反应液倒入饱和氯化铵溶液(10mL)及水(10mL)的混合溶液中，乙酸乙酯(15mL×3)萃取。合并有机相，依次用水(15mL)和饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物用薄层色谱法以展开剂体系C纯化所得残余物，得到标题产物OLS-5d(358mg，产率：67.9％)。
MS m/z(ESI)：1003.7[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40-7.16(m,25H),5.71(d,1H),5.44(s,1H),4.87(d,1H),4.84-4.78(m,3H),4.70(d,1H),4.57-4.50(m,4H),4.39(d,1H),4.06-4.01(m,1H),3.98-3.84(m,3H),3.76-3.68(m,3H),3.61-3.40(m,13H),3.34-3.31(m,1H),3.22(t,2H),3.11-3.05(m,1H),1.77-1.71(m,2H),1.64(s,3H)。
第五步
N-((2R,3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3-(苄氧基)-5-羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-双(苄氧基)-6-((苄氧基)甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-5e
将OLS-5d(342mg，0.34mmol)溶解于二氯甲烷(20mL)中，氮气氛下降温至 -20℃，控温-30～-20℃滴加三氟乙酸(3.4mL)，滴加完毕，升温至0℃搅拌反应约1.5小时。加入甲醇(4mL)淬灭反应，将反应液倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，用碳酸氢钠固体调节pH至7～8，分液，水相用二氯甲烷/甲醇(v/v＝10:1)混合溶剂萃取(10mL×2)，合并有机相。有机相用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用薄层色谱法以展开剂体系D纯化所得残余物，得到标题产物OLS-5e(193mg，产率：61.9％)。
MS m/z(ESI)：915.7[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31-7.17(m,20H),5.65(d,1H),4.87-4.79(m,3H),4.70(s,2H),4.58-4.50(m,3H),4.44-4.39(m,2H),4.04(t,1H),3.82(t,1H),3.74-3.63(m,10H),3.53-3.45(m,10H),3.26(t,2H),3.11-3.05(m,1H),3.00-2.98(m,1H),1.81-1.75(m,2H),1.66(s,3H)。
第六步
N-((3R,4R,5S,6R)-5-(((2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-3,5-二羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-2,4-二羟基-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3-基)乙酰胺OLS-5f(非对映异构体混合物)
将OLS-5e(190mg，207.64μmol)溶解于四氢呋喃(8mL)和水(2mL)中，加入氢氧化钯(66mg，含量15％)、钯碳(77mg，含量10％)和盐酸(1滴)。氢气置换三次，室温搅拌反应12小时。过滤除去催化剂，滤液减压浓缩，所得残余物溶解于甲醇(8mL)中，加入咪唑-1-磺酰基叠氮盐酸盐(56.7mg，270.50μmol)、碳酸钾(71mg，510.11μmol)和硫酸铜(9.3mg，37.25μmol)，室温搅拌反应12小时。过滤除去无机盐，用甲醇(3mL)淋洗固体，滤液减压浓缩，得到粗品标题产物OLS-5f(194mg)。产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：555.4[M+1]。
第七步
(2S,3S,4S,5R,6R)-4-(2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-2-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-5
冰浴下，将粗品OLS-5f(100mg，90.16μmol)溶解于纯水(6mL)中，加入2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(344mg，1.89mmol)和碳酸铯(1.76g，5.40mmol)，0℃下搅拌反应12小时，得反应液1。
冰浴下，将粗品OLS-5f(100mg，90.16μmol)溶解于纯水(6mL)中，加入2-氯-1,3-二甲基-1H-苯并咪唑-3-氯化物(339mg，1.87mmol)和碳酸铯(1.75g，5.39mmol)，0℃下搅拌反应12小时，得反应液2。
将反应液1和反应液2合并，用高效液相色谱法(色谱柱：Phenomenex C18，150*25mm，10μm；流动相：水(0.01％氨水)和乙腈，梯度配比：乙腈0％-30％，流速：25mL/min)纯化，5mol％氢氧化钠溶液中冻干得到标题产物OLS-5(22mg， 第六步和第七步两步总产率：19.8％)。
MS m/z(ESI)：537.1[M+1]。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.02(d,1H),4.66(s,2H),4.30(s,2H),4.10-3.95(m,5H),3.88-3.78(m,4H),3.68-3.53(m,12H),3.37-3.29(m,5H)。
实施例4-6糖链OLS-6的合成
(2R,3S,4S,5S,6S)-2-(14-叠氮基-2,5,9,12-四氧杂十四烷基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇OLS-6
Figure PCTCN2022123462-appb-000194
实施例4-7糖链OLS-7的合成
(2R,3S,4S,5S,6S)-2-((2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)甲基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇OLS-7
Figure PCTCN2022123462-appb-000195
实施例4-8糖链OLS-8的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-(14-叠氮基-2,5,9,12-四氧杂十四烷基)-4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-8
Figure PCTCN2022123462-appb-000196
实施例4-9糖链OLS-9的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-4-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-((2-(3-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)甲基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-9
Figure PCTCN2022123462-appb-000197
实施例4-10糖链OLS-10的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-10
Figure PCTCN2022123462-appb-000198
实施例4-11糖链OLS-11的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-((2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)甲基)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)丙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-11
Figure PCTCN2022123462-appb-000199
实施例4-12糖链OLS-12的合成
(2R,3R,4S,5S,6S)-2-(14-叠氮基-2,5,9,12-四氧杂十四烷基)-4-(2-(3-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)丙氧基)乙氧基)-6-(((3aR,5R,6S,7R,7aR)-7-羟基-5-(羟甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氢-5H-吡喃并[3,2-d]噁唑-6-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇OLS-12
Figure PCTCN2022123462-appb-000200
五、ADC合成实施例
实施例5-1 ADC-1
Figure PCTCN2022123462-appb-000201
(第三步中形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
第一步
在37℃条件下，向抗体Ab1的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液；10mg/mL，20mL)加入Endo S酶(19.16mg/mL，0.052mL)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到1-a的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。
第二步
在37℃条件下，向1-a的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，0.2mL)加入Endo S酶(1mg/mL，0.02mL)和OLS-3(0.28mg)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应1小时，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到1-b的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。y 1表示糖链重构至抗体重链N297位的平均数量，抗体重链的2个N297位点可以重构2个糖链，或1个糖链。
第三步
在25℃条件下，向1-b的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；8.02mg/mL，0.125mL)加入1,2-丙二醇(0.112mL)。将化合物LD-8(0.20mg)溶解于13 μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应5小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-1的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数：y＝1.88。
具有相似结构及分子量的抗体如Ab2、Ab3或Ab4等可采用类似制备1-a的步骤进行去糖基化，并通过与制备1-b类似的第二步骤重构糖链，然后通过类似制备ADC-1的第三步骤与药物连接子(LD)进行偶联，得到ADC。
实施例5-2 ADC-2
Figure PCTCN2022123462-appb-000202
(第二步中形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
第一步
在37℃条件下，向1-a的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，0.2mL)加入Endo S酶(1mg/mL，0.02mL)和OLS-4(0.31mg)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应1小时，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到2-a的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。y 1表示糖链重构至抗体重链N297位的平均数量，抗体重链的2个N297位点可以重构2个糖链，或1个糖链。
第二步
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-8(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-2的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数：y＝1.98。
实施例5-3 ADC-3
Figure PCTCN2022123462-appb-000203
(第二步中形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
第一步
在37℃条件下，向1-a的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，0.2mL)加入Endo S酶(1mg/mL，0.02mL)和OLS-5(0.29mg)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应1小时，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到3-a的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。y 1表示糖链重构至抗体重链N297位的平均数量，抗体重链的2个N297位点可以重构2个糖链，或1个糖链。
第二步
在25℃条件下，向3-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；6.88mg/mL，0.145mL)加入1,2-丙二醇(0.13mL)。将化合物LD-8(0.20mg)溶解于15μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-3的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数：y＝2。
实施例5抗体与糖链OLS-1的重构及ADC的偶联
以下步骤适合ADC-4、ADC-5、ADC-6、ADC-7、ADC-8、ADC-9的制备：
Figure PCTCN2022123462-appb-000204
第一步抗体糖链mAb-(OLS-1)的重构
在37℃条件下，向1-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；20.0mg/mL，0.1mL)加入Endo F3(D126A)酶(采用专利申请US10851174B2第21页公开的方法制备而得)(20mg/mL，0.05mL)、PBS缓冲水溶液(pH＝7.4，0.05mL)和OLS-1(1.19mg)，置于水浴振荡器，于37℃振荡反应5分钟，停止反应。将反应液用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，得到mAb-(OLS-1)的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。
mAb-(OLS-1)包含如下所示的mAb-(OLS-1)a 1、mAb-(OLS-1)a 2、mAb-(OLS-1)a 3和mAb-(OLS-1)a 4四种结构：
Figure PCTCN2022123462-appb-000205
Figure PCTCN2022123462-appb-000206
第二步ADC的合成
实施例ADC-4、ADC-5、ADC-6、ADC-7、ADC-8和ADC-9的制备，通过mAb-OLS-1与不同的药物连接子偶联，得到mAb-(OLS-1)-R。
其中mAb-(OLS-1)-R包含如下所示的mAb-(OLS-1)-Ra、mAb-(OLS-1)-Rb、mAb-(OLS-1)-Rc和mAb-(OLS-1)-Rd四种结构：
Figure PCTCN2022123462-appb-000207
Figure PCTCN2022123462-appb-000208
Figure PCTCN2022123462-appb-000209
ADC-4、ADC-5、ADC-6、ADC-7、ADC-8和ADC-9结构式如mAb-(OLS-1)-R所示，其中R基根据各实施例使用的药物连接子而不同，同时R基的三唑环具有两种结构。具有相似结构及分子量的抗体如Ab2、Ab3或Ab4等可采用类似制备1-a类似的步骤进行去糖基化，并通过与制备mAb-(OLS-1)类似的重构糖链，然后通过类似制备mAb-(OLS-1)-R的步骤与药物连接子(LD)进行偶联。
实施例5-4 ADC-4
R选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000210
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。将化合物LD-2(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-4的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.76。
实施例5-5 ADC-5
R选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000211
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。将化合物LD-3(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-5的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.37。
实施例5-6 ADC-6
R选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000212
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。将化合物LD-4(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-6的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.89。
实施例5-7 ADC-7
R选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000213
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。将化合物LD-8(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-7的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.80。
实施例5-8 ADC-8
R选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000214
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.2mg/mL，0.139mL加入1,2-丙二醇(0.125mL)。将化合物LD-9(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-8的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.80。
实施例5-9 ADC-9
R选自：
Figure PCTCN2022123462-appb-000215
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向mAb-(OLS-1)的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.2mg/mL，0.139mL)加入1,2-丙二醇(0.125mL)。将化合物LD-11(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-9的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数(DAR)：y＝1.31。
实施例5-10 ADC-10
Figure PCTCN2022123462-appb-000216
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-5(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-10的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝1.99。
实施例5-11 ADC-11
Figure PCTCN2022123462-appb-000217
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-11(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-11的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝1.93。
实施例5-12 ADC-12
Figure PCTCN2022123462-appb-000218
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44 mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-16(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-12的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝1.99。
实施例5-13 ADC-13
Figure PCTCN2022123462-appb-000219
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-2(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-13的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝1.99。
实施例5-14 ADC-14
Figure PCTCN2022123462-appb-000220
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-4(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-14的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝2.0。
实施例5-15 ADC-15
Figure PCTCN2022123462-appb-000221
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44 mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-17(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-15的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝1.48。
实施例5-16 ADC-16
Figure PCTCN2022123462-appb-000222
(所形成的三唑环具有几何结构，所得到的化合物包含上述作为R所示的两种结构。)
在25℃条件下，向2-a的PBS缓冲水溶液(pH＝7.4的PBS缓冲水溶液；7.44mg/mL，0.134mL)加入1,2-丙二醇(0.12mL)。将化合物LD-1(0.20mg)溶解于14μL二甲基亚砜，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃振荡反应12小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为7.4的PBS缓冲水溶液)，得到标题产物ADC-16的PBS缓冲液，于4℃冷藏储存。
MS计算每一分子抗体的平均药物结合数y＝1.97。
实施例5-18 ADC-18
Figure PCTCN2022123462-appb-000223
Figure PCTCN2022123462-appb-000224
第一步
在37℃条件下，向抗体Ab1的PBS缓冲水溶液(10.0mg/mL，0.35mL，23.6nmol，PBS缓冲水溶液为pH＝6.5，0.05M)加入Endo S(WT)(2.74mg/mL，13μL)；加毕，置于37℃摇床上，反应3小时后停止反应得到粗品1-a。
第二步
向粗品1-a的反应液中加入OLS-4(0.41mg，709nmol)。加毕，置于37℃摇 床上，反应1小时后停止反应。使用PBS 7.4缓冲溶液将反应液多次离心换液，除去多余的叠氮化物至终体积410μL，得到粗品2-a。
第三步
向粗品2-a的处理后的反应液中加入269μL 1,2-丙二醇，摇匀后加入LD-11溶液(0.21mg，142nmol，溶于41μL二甲基亚砜与100μL 1,2-丙二醇)；置于室温摇床上反应12小时。将反应液离心取上清液用1mL PBS 7.4缓冲溶液稀释后，用Hitrap Protein AHP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，所得溶液用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液(1M，pH＝8.0)调节至pH约为5.0，得到标题产物ADC-18的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。
MS计算平均值：y＝1.95。
实施例5-20 ADC-20
Figure PCTCN2022123462-appb-000225
Figure PCTCN2022123462-appb-000226
第一步
在37℃条件下，向抗体Ab3的PBS缓冲水溶液(10.0mg/ml，0.35mL，24.1nmol，PBS缓冲水溶液为pH＝6.5，0.05M)加入Endo S(WT)(Endo S(WT)2.74mg/mL，13μL)；加毕，置于37℃摇床上，反应3小时后停止反应得到粗品20-a。
第二步
向粗品20-a的反应液中加入OLS-4(0.42mg，724nmol)。加毕，置于37℃摇床上，反应1小时后停止反应。使用PBS 7.4缓冲溶液将反应液多次离心换液，除去多余的叠氮化物至终体积410μL，得到粗品20-b。
第三步
向粗品20-b的处理后的反应液中加入269μL 1,2-丙二醇，摇匀后加入LD-11溶液(0.21mg，145nmol，溶于41μL二甲基亚砜与100μL 1,2-丙二醇)；置于室温摇床上反应12小时。将反应液离心取上清液用1mL PBS 7.4缓冲溶液稀释后用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，所得溶液用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液(1M，pH＝8.0)调节至pH值约为5.0，得到标题产物ADC-20的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。 MS计算平均值：y＝1.98。
实施例5-22 ADC-22
Figure PCTCN2022123462-appb-000227
在37℃条件下，向抗体Ab2的PBS缓冲水溶液(10.0mg/ml，1.57mL，108nmol，PBS缓冲水溶液为pH＝6.5，0.05M)加入Endo S(WT)(1.16mg/ml，135uL)；加毕，置于37℃摇床上，反应3小时后停止反应得到粗品22-a。
向粗品22-a的反应液中加入OLS-4(1.88mg，3.25umol)。加毕，置于37℃摇床上，反应1小时后停止反应。使用PBS 7.4缓冲溶液将反应液多次离心换液，除去多余的叠氮化物至终体积1.8mL，得到粗品22-b。
向粗品22-b处理后的反应液中加入1.42mL 1,2-丙二醇，摇匀后加入LD-11溶液(0.93mg,650nmol，溶于180μL二甲基亚砜与200μL 1,2-丙二醇)；置于室温摇床上反应12小时。将反应液离心取上清液用4mL PBS 7.4缓冲溶液稀释后，用Hitrap Protein A HP蛋白纯化柱纯化(洗脱相：pH为3.0的醋酸缓冲水溶液)，所得溶液用三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液(1M，pH＝8.0)调节至pH约为5.0，得到标题产物ADC-22的亲和洗脱液，于4℃冷藏储存。
MS计算平均值：y＝1.96。
生物学评价
测试例1、PBD类化合物对肿瘤细胞体外增殖抑制测试
一、实验目的
本实验的目的是为了检测本公开中的化合物对不同肿瘤细胞系SK-BR-3肿瘤细胞(人乳腺癌细胞，ATCC，货号HTB-30)、NCI-H23(人非小细胞肺癌细胞，南京科佰，货号CBP60132)和MKN45(人胃癌细胞，南京科佰，货号CBP60488)的增殖抑制活性，以不同浓度的化合物体外处理细胞，经6天培养后，采用CTG(
Figure PCTCN2022123462-appb-000228
Luminescent Cell Viability Assay，Promega，货号：G7573)试剂对细胞的增值进行检测，根据IC 50值来评价该化合物的体外活性。
二、实验方法
1、细胞培养：SK-BR-3、NCI-H23和MKN45细胞分别用含10％FBS(Gibco，10099-141)的McCoy's 5A培养基(ThermoFisher，货号16600108)、RPMI 1640培养基(ThermoFisher，货号11875119)进行培养。
2、细胞铺板：分别将SK-BR-3、NCI-H23和MKN45用胰酶(0.25％Trypsin-EDTA(1x)，Life Technologies，货号25200-072)消化后，使用各自培养基进行重悬计数，使密度为1.48×10 4个/mL，每孔135μL铺至96孔板(corning，货号3903)，使每孔细胞数为2000，于37℃，培养24小时。
3、药物配制：在圆底96孔板中配制PBD类药物。配药板1第一列为0.05mM，此后从第二列到第四列3倍梯度稀释于DMSO中，第五列到第六列5倍梯度稀释于DMSO中，第七列到第第九列10倍梯度稀释于DMSO中，第十列为DMSO。 配药板2中第一列至第十列每孔加入相应培养基196μL，从配药板1的第一列至第十列吸取4μL溶液至配药板2，混匀后，吸取15μL加入昨天铺好的细胞中，继续37℃，培养6天。
4、CTG检测：取出细胞培养板，平衡至室温。每孔加入75μL CTG，避光室温反应10分钟，酶标仪(BMG labtech，PHERAstar FS)读取发光值。
三、数据分析
用Graphpad Prism 5对数据进行处理分析，试验结果参见下表1。
表1本公开化合物对三株肿瘤细胞系增殖抑制的IC 50(nM)。
实施例编号 SK-BR-3 NCI-H23 MKN45
2-1 0.07 0.02 0.02
2-2 0.05 0.02 0.09
2-3 0.20 0.05 0.49
2-4 0.71 0.34 1.45
2-5 1.84 0.41 0.91
2-6 0.24 0.03 0.06
2-7 0.08 0.04 0.07
2-9 1.25 0.23 0.19
2-10 0.63 0.2 0.61
2-11 0.32 0.11 0.69
2-13 1.64 1.42 4.35
2-16 0.36 0.18 0.26
2-21 0.28 0.12 0.57
2-22 0.26 0.08 0.17
2-26 2.12 2.98 2.42
2-27 5 7.28 7.51
2-29 0.08 0.02 0.02
2-30 0.21 0.02 0.04
2-31 0.37 0.08 0.10
2-32 0.78 0.09 0.13
2-33 0.73 0.30 0.38
2-34 1.42 0.62 1.37
2-35 1.70 0.84 2.73
2-39 0.58 0.39 0.84
测试例2、Caludin18.2-ADC体外药效实验
一、实验目的：
利用CTG(CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay ○R，Promega，G7573)检测Claudin18.2-ADC在体外对人胃印戒细胞癌细胞株NUGC4的杀伤作用。
二、实验方法：
1、细胞准备：
人胃印戒细胞癌细胞株NUGC4(南京科佰，CBP60493)；
通过电转染的方法将含有claudin18.2全长序列的PCDH质粒(SEQ ID NO:7)转染进NUGC4细胞，加压筛选两周，检测claudin18.2的表达量，并根据表达量利用流式细胞术分选出不同表达水平的单克隆细胞株。分别得到高表达人Claudin18.2的NUGC4/hCLDN18.2 1#单克隆细胞株，和中度表达人Claudin18.2的NUGC4/hCLDN18.2 11#单克隆细胞株。
2、第1天，收集NUGC4、NUGC4(WT)11#、NUGC4/hCLDN18.2 1#细胞，调整密度为2.5×10 4/mL，在96孔白色透明底板中加入90μL/孔，约为2500个细胞每孔。37℃，5％CO 2培养箱过夜培养。
3、第2天，在96孔板中稀释样品，起始浓度为400nM，5×梯度稀释，9个浓度点，向细胞板中加入10μL/孔稀释好的样品。37℃，5％CO 2培养4天。
4、第8天，取出细胞培养板，加入50μL/孔Cell Titer-Glo Reagent，室温放置2～3分钟，在PHERAstar FS microplate reader(BMG LABTECH)上读取荧光数值。
三、数据分析
利用GraphPad Prism软件进行数据分析。
Figure PCTCN2022123462-appb-000229
四、结论
在高表达细胞系上，ADC-22有良好的杀伤活性。
测试例3、HER3-ADC体外药效实验
一、实验目的
本实验的目的是检测HER3-ADC样品对细胞杀伤作用，根据IC 50和Emax来评价HER3-ADC的体外活性。
二、实验方法：
1、HER3表达细胞株MCF7(ATCC,HTB-22)、FaDu(ATCC,HTB-43)、SW620(南京科佰，CBP60036)用胰酶消化，并用每个细胞对应的新鲜培养液终止消化。1000rpm离心后用新鲜培养液重悬，计数后将细胞悬液密度调整为3703细胞/mL。以每孔135μL加入到96孔细胞培养板中，第11列不铺细胞只加入135μL 的培养基，5％CO 2，37℃培养16小时。
2、HER3-ADC样品用PBS稀释成15μM(10×浓度)。以此为首浓度用PBS五倍稀释，共8个浓度。每孔加入15μL的10×浓度溶液。5％CO 2，37℃培养4天。
3、每孔加入50μL CTG，室温下避光孵育10分钟，将白色底膜贴在细胞培养板底部，置于酶标仪Victor3(PE)上读取化学发光。
三、数据分析
本实验的数据使用了数据处理软件GraphPad prism5.0。
表2 Her3-ADC药物在MCF7、FaDu、SW620上的杀伤效果
Figure PCTCN2022123462-appb-000230
四、结论
在不同HER3表达水平的细胞系上，ADC-20有良好的杀伤活性。
测试例4、HER2-ADC体外药效实验
一、实验目的
本实验的目的是检测HER2-ADC样品对细胞杀伤作用，根据IC 50和Emax来评价HER2-ADC的体外活性。
二、实验方法：
1、HER2表达细胞株MCF7(ATCC,HTB-22)、SK-BR-3(ATCC,HTB-30)用胰酶消化，新鲜培养液中和，1000rpm离心后用培养液重悬，计数后将细胞悬液密度调整为3703细胞/mL，以每孔135μL加入到96孔细胞培养板3903中，第11列不铺细胞只加入135μL的培养基，5％二氧化碳37℃16小时培养。
2、HER2-ADC样品用PBS稀释成15μM(10×浓度)。以此为首浓度,用PBS五倍稀释,共8个浓度。每孔加入15μL的10×浓度溶液。5％CO 2，37℃培养4天。
3、每孔加入70μL CTG，室温下避光孵育10分钟，将白色底膜贴在细胞培养板底部，置于酶标仪Victor3(PE)上读取化学发光。
三、数据分析
本实验的数据使用了数据处理软件GraphPad prism5.0。
表3 Her2-ADC药物在SK-BR-3、T47D上的杀伤效果
Figure PCTCN2022123462-appb-000231
四、结论
在不同HER2表达水平的细胞系上，ADC-18有良好的杀伤活性，且杀伤活性与抗原表达量相关，即细胞表面HER2表达量越高，ADC杀伤的活性越强。
虽然为了清楚的理解，已经借助于实例等详细描述了上述发明，但是描述和实例不应当解释为限制本公开的范围。本文中引用的所有专利和科学文献的公开内容通过引用完整地清楚结合。

Claims (37)

  1. 一种如下式所示抗体-药物偶联物或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100001
    其中，Pc为抗体，该抗体的糖链是未重构的或重构的糖链；
    L为连接子；Pc通过其氨基酸或糖链与L结合，
    y为约1至约10的载药量；
    D如式(D)所示：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100002
    其中：
    R 1为H、氧代基、卤素或烷基；
    R 2为H、烷基或
    Figure PCTCN2022123462-appb-100003
    W为H、-C(O)R t或-C(O)NH-R t，G为葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；R t为烷基或烷氧基烷基；
    R 3为H或烷基；
    R 4为H或烷基；
    R 5为H、卤素或烷基；
    或者R 3和R 4与其所连接的原子一起成环，或R 4和R 5与其所连接的原子一起成环；
    R 6为H或烷基；
    R 7为烷基或环烷基；或者R 6和R 7与其所连接的原子一起成环；
    R 8为烷基或环烷基；
    R x为H或羟基；
    X为亚烷基或-(CH 2) m-X 1-(CH 2) n-；
    X 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂环基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂环基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基 独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
    Y为键、氮原子、氧原子或硫原子；
    A为烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 9、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；
    R 9为H、烷基和羟烷基；
    m为1，2或3；n为1，2或3；
    条件是当X为亚烷基时，1)R 1为氧代基，或2)R x为H，或3)R 4和R 5与其所连接的原子一起成环，或4)R 6和R 7与其所连接的原子一起成环，或5)R 7和/或R 8为环烷基；或6)A不是烷基。
  2. 根据权利要求1所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R 1为H或氧代基；优选地，R 1为H。
  3. 根据权利要求1或2所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R 2为H或C 1-6烷基；优选地，R 2为H。
  4. 根据权利要求1或2所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R 2为
    Figure PCTCN2022123462-appb-100004
    W为H或-C(O)NH-R t，G为葡萄糖醛酸苷基；R t为C 1-6烷基或C 1-6烷氧基C 1-6烷基。
  5. 根据权利要求1至4中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述R x为羟基。
  6. 根据权利要求1至5中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中：
    R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
    R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子一 起形成3元环烷基；
    R 5为H；R 6为H；
    R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
    R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
    X为亚烷基；优选地，X为C 1-12亚烷基；更优选地，X为亚戊基；
    Y选自键、氮原子、氧原子或硫原子；优选地，Y为键或硫原子；更优选地，Y为键；
    A选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 9、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；优选地，A选自C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自C 1-6羟烷基、C 1-6烷基、C 3-6环烷基C 1-6烷基、C 1-6卤代烷基和-C(O)R 9；
    R 9选自H、烷基和羟烷基；优选地，R 9为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基。
  7. 根据权利要求1至5中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中：
    R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
    R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子一起形成3元碳环；
    R 5为H；R 6为H；
    R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
    R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
    X为-(CH 2) m-X 1-(CH 2) n-；
    X 1为氧原子、环烷基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；优选地，X 1为氧原子、C 3-6环烷基、吡啶基或苯基；所述的C 3-6环烷基或苯基任选被一个或多个氨基或C 1-6烷基所取代；
    m选自1，2或3；n选自1，2或3。
  8. 根据权利要求1至5任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中：
    R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
    R 3和R 4与其所连接的原子一起成环；优选地，R 3和R 4与其所连接的原子一起形成3元碳环；
    X为亚烷基；优选地，X为C 1-6亚烷基；更优选地，X为亚戊基；
    R 6为H或烷基；优选地，R 6为H或C 1-6烷基；
    R 7为烷基或环烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基或C 3-6环烷基；
    或者R 6和R 7与其所连接的原子一起成环；优选地，R 6和R 7与其所连接的原子一起形成4-6元环；
    R 8为烷基或环烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基或C 3-6环烷基；
    条件是，R 7和R 8不同时为烷基。
  9. 根据权利要求1至5中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
    R 1为H或烷基；优选地，R 1为H或C 1-6烷基；更优选地，R 1为H；
    R 3为H；
    R 4和R 5与其所连接的原子一起成环；优选地，R 4和R 5与其所连接的原子一起形成3元碳环；
    R 6为H；
    R 7是烷基；优选地，R 7为C 1-6烷基；更优选地，R 7为甲基；
    R 8是烷基；优选地，R 8为C 1-6烷基；更优选地，R 8为甲基；
    X为亚烷基；优选地，X为C 1-12亚烷基；更优选地，X为亚戊基。
  10. 根据权利要求1至9中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L为-L a-L b-L c-L d-，
    L a选自：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100005
    其中星号*表示与L b结合，波浪线
    Figure PCTCN2022123462-appb-100006
    表示与Pc的重构的糖链结合；
    L b选自-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-、-C(O)-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2O) 2-CH 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-NH-C(O)-(CH 2CH 2O) 4-CH 2CH 2-C(O)-、-CH 2-OC(O)-和-OC(O)-；
    L c为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 3-7环烷基；
    L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-、-NH-CH 2O-R b-C(O)-或键；
    R a为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
    R b为C 1-6烷基或C 3-7环烷基，所述C 1-6烷基和C 3-7环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 3-7环烷基、5-6元杂环基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基。
  11. 根据权利要求10所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L b为
    -C(O)-CH 2CH 2-C(O)-。
  12. 根据权利要求10所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中L c为-GGVA-、-VA-、-GGFG-、-GGPI-、-GGVK-和-GGPL-；优选为-GGVA-。
  13. 根据权利要求10所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中
    L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-，R a为苯基。
  14. 根据权利要求1至13中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述Pc为与肿瘤细胞结合且能被吞入肿瘤细胞内的抗体；优选地，所述Pc选自抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗Claudin18.2抗体、抗ROR1抗体、抗CD19抗体、抗Trop2抗体、抗CD79b抗体、抗SLC44A4抗体和抗Mesothelin抗体。
  15. 根据权利要求1至14中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述y为1至8，优选为1至4。
  16. 根据权利要求1至15中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，所述Pc通过其N297糖链与L结合，所述N297糖链结合于Pc重链第297位的Asn。
  17. 根据权利要求1至16中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐， 其为如下结构：
    Pc-(N297糖链)-[L-D]y
    所述的N297糖链为重构的糖链，结合于Pc重链第297位的Asn；
    其中y为1至4，优选为1至2；
    Pc、L、D如权利要求1中所述。
  18. 根据权利要求1至17中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述的糖链为N297糖链，结构选自如下所述的[N297-(Fuc)SG1]、[N297-(Fuc)SG2]、[N297-(Fuc)SG3]、[N297-(Fuc)SG4]和[N297-(Fuc)SG5]：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100007
    式中，波浪线
    Figure PCTCN2022123462-appb-100008
    表示与Pc重链第297位的Asn结合，
    L(PEG)表示-(CH 2CH 2O)qCH 2CH 2-NH-，右端的氨基表示与N297糖链的β-Man支链的1-3链侧或/和1-6链侧的非还原末端的N-乙酰基神经氨酸的2位羧酸进行酰胺键合；q为0至20，优选为1至10；
    星号*表示与所述连接子L结合；
    优选地，所述的糖链结构为：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100009
    ；其中q为2或3。
  19. 根据权利要求1至17中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其中所述的糖链结构为：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100010
    式中，波浪线
    Figure PCTCN2022123462-appb-100011
    表示与Pc重链第297位的Asn结合；
    P 1、P 2各自独立地选自羟基、*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；星号*表示与所述连接子L结合；
    s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；
    条件是，P 1、P 2不同时为羟基或*-(CH 2CH 2O)s 1-；
    优选地，所述的糖链结构选自：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100012
    Figure PCTCN2022123462-appb-100013
  20. [援引加入(细则20.6) 27.12.2022]　
    根据权利要求1至19中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，其选自以下的组：
    组1：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100014

    Figure PCTCN2022123462-appb-100015

    组2：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100016

    组3：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100017

    组4：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100018

    组5：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100019

    组6：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100020

    Figure PCTCN2022123462-appb-100021

    组7：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100022

    组8：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100023

    组9：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100024

    组10：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100025

    组11：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100026

    Figure PCTCN2022123462-appb-100027

    组12：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100028

    组13：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100029

    Figure PCTCN2022123462-appb-100030

    组14：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100031

    组15：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100032

    组16：
    Figure WO-DOC-FIGURE-3
    和/或
    Figure WO-DOC-FIGURE-4
    ；
    组17：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100034

    组18：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100035

    其中：
    y选自1至4，优选为1至2；
    所述的N297糖链结构选自：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100036

    式中，波浪线
    Figure PCTCN2022123462-appb-100037
    表示与Pc重链第297位的Asn结合，星号*表示与所述连接子L结合；
    L(PEG)表示-(CH 2CH 2O)qCH 2CH 2-NH-，q选自0-20，优选自1-10；右端的氨基表示与N297糖链的β-Man支链的1-3链侧或/和1-6链侧的非还原末端的N-乙酰基神经氨酸的2位羧酸进行酰胺键合；
    或者，所述的N297糖链结构选自：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100038

    式中，波浪线
    Figure PCTCN2022123462-appb-100039
    表示与Pc重链第297位的Asn结合；
    P 1、P 2各自独立地选自羟基、*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的*-(CH 2CH 2O)s 1-和*-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；星号*表示与所述连接子L结合；
    条件是P 1、P 2不同时为羟基或*-(CH 2CH 2O)s 1-；
    所述的Pc如权利要求14所述；优选地，其中所述Pc选自抗HER2抗体、抗HER3抗体、抗Claudin18.2抗体和抗CD19抗体；
    更优选地，所述的抗HER2抗体包含序列如SEQ ID NO:1所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:2所示的重链；所述的抗Claudin18.2抗体包含序列如SEQ ID NO:3所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:4所示的重链；所述的抗HER3抗体包含序列如SEQ ID NO:5所示的轻链，和序列如SEQ ID NO:6所示的重链。
  21. 一种式(DL)所示的化合物或其可药用的盐：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100040
    其中：
    R 11为H、氧代基、卤素或烷基；
    R 12为H、烷基或
    Figure PCTCN2022123462-appb-100041
    W为H、-C(O)R t1或-C(O)NH-R t1，G选自葡萄糖醛酸苷基或半乳糖苷基；R t1选自烷基或烷氧基烷基；
    R 13为L a’-L b-L c-L d-：
    L a’为
    Figure PCTCN2022123462-appb-100042
    L b选自-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-、-C(O)-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2O) 2-CH 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-NH-C(O)-(CH 2CH 2O) 4-CH 2CH 2-C(O)-、-CH 2-OC(O)-和-OC(O)-；
    L c为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 3-7环烷基；
    L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-、-NH-CH 2O-R b-C(O)-或键；
    R a为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
    R b为C 1-6烷基或C 3-7环烷基，所述C 1-6烷基和C 3-7环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 3-7环烷基、5-6元杂环基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
    R 14为H、羟基或烷氧基；
    或者R 13和R 14与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)；
    R 15为H或烷基；
    R 16为H或烷基；
    R 17为H、卤素或烷基；
    或者R 15和R 16与其所连接的原子一起成环，或R 16和R 17与其所连接的原子 一起成环；
    R 18为H或烷基；
    R 19为烷基或环烷基；或者R 18和R 19与其所连接的原子一起成环；
    R 20为烷基或环烷基；
    X’为亚烷基或-(CH 2) m’-X’ 1-(CH 2) n’-；
    X’ 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂环基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂环基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；
    Y’为键、氮原子、氧原子或硫原子；
    A’为烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 21、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；
    R 21为H、烷基和羟烷基；
    m'为1，2或3；n’为1，2或3；
    条件是当X’为亚烷基时，1)R 11为氧代基，或2)R 14为H，或3)R 16和R 17与其所连接的原子一起成环，或4)R 18和R 19与其所连接的原子一起成环，或5)R 19和/或R 20为环烷基；或6)A’不是烷基。
  22. 根据权利要求21所述的化合物或其可药用的盐，其中R 13和R 14与相连的原子一起形成亚胺键(N＝C)。
  23. 根据权利要求21或22所述的化合物或其可药用的盐，其中：
    R 13为L a’-L b-L c-L d-：
    L a’为
    Figure PCTCN2022123462-appb-100043
    L b选自-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-、-C(O)-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2) 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-C(O)-NH-(CH 2CH 2O) 2-CH 2-C(O)-、-C(O)-CH 2CH 2-NH-C(O)-(CH 2CH 2O) 4-CH 2CH 2-C(O)-、-CH 2-OC(O)-和-OC(O)-；
    L c为由2至7个氨基酸残基构成的肽残基，其中所述氨基酸残基是由苯丙氨酸、丙氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、 谷氨酸或天冬氨酸所形成的残基，所述氨基酸残基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基、C 1-6烷氧基和C 3-7环烷基；
    L d为-NH-R a-CH 2O-C(O)-、-NH-CH 2O-R b-C(O)-或键；
    R a为苯基或5-6元杂环基，所述苯基和5-6元杂环基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基；
    R b为C 1-6烷基或C 3-7环烷基，所述C 1-6烷基和C 3-7环烷基是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、氧代基、羟基、氰基、氨基、C 1-6烷基、C 3-7环烷基、5-6元杂环基、卤代C 1-6烷基和C 1-6烷氧基。
  24. 根据权利要求21所述的化合物或其可药用的盐，其中R 14为H或羟基；优选地，R 14为羟基。
  25. 根据权利要求21至24中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 11为H或氧代基；优选地，R 11为H。
  26. 根据权利要求21至25中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 12为H或C 1-6烷基；优选地，R 12为H。
  27. 根据权利要求21至25中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中所述R 12如以下结构所示：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100044
    W为H或-C(O)NH-R t1，G为葡萄糖醛酸苷基；R t1选自C 1-6烷基或C 1-6烷氧基C 1-6烷基。
  28. 根据权利要求21至27中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
    R 11为H或烷基；优选地，R 11为H或C 1-6烷基；
    R 15和R 16与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
    R 17为H；R 18为H；
    R 19是烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基；
    R 20是烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基；
    X’为亚烷基；优选地，X’为C 1-6亚烷基；更优选地，X’为亚戊基；
    Y’选自键、氮原子、氧原子或硫原子；优选地，Y’为键或硫原子；更优选地，Y’为键；
    A’为环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、羟基、羟烷基、烷基、烷氧基、-C(O)R 21、环烷基、环烷基烷基、卤代烷基、芳基和杂环基；优选地，A’选自C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基，所述的C 3-6环烷基、5至6元杂环基、苯基或5至6元杂芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自C 1-6羟烷基、C 1-6烷基、C 3-6环烷基C 1-6烷基、卤代C 1-6烷基和-C(O)R 21；
    R 21选自H、烷基和羟烷基；优选地，R 21为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基。
  29. 根据权利要求21至27中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
    R 11为H或烷基；优选地，R 11为H或C 1-6烷基；
    R 15和R 16与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
    R 17为H；R 18为H；
    R 19是烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基；
    R 20是烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基；
    X’为-(CH 2) m’-X’ 1-(CH 2) n’-；
    X’ 1为氮原子、氧原子、硫原子、环烷基、杂芳基或芳基；所述的环烷基、杂芳基或芳基任选被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自氨基、羟基、羟烷基、烷基和烷氧基；优选地，X’ 1为氧原子、C 3-6环烷基、吡啶基或苯基；所述的C 3-6环烷基、吡啶基或苯基任选被一个或多个氨基或C 1-6烷基所取代；
    Y’为氧原子；
    A’为烷基；优选地A’为C 1-6烷基；
    m'选自1，2或3；n’选自1，2或3。
  30. 根据权利要求21至27中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
    R 11为H或烷基；优选地，R 11为H或C 1-6烷基；
    R 15和R 16与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
    R 17为H；
    R 18为H或烷基；优选地，R 18为H或C 1-6烷基；
    R 19为烷基或环烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基；
    或者R 18和R 19与其所连接的原子一起成环；优选地，R 18和R 19与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
    R 20为烷基或环烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基或C 1-6羟烷基；
    X’为亚烷基；优选地，X’为C 1-6亚烷基；更优选地，X’为亚戊基；
    Y’为氧原子；
    A’为烷基；优选地A’为C 1-6烷基；
    条件是，R 19和R 20不同时为烷基。
  31. 根据权利要求21至27中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其中：
    R 11为H或C 1-6烷基；优选地，R 11为H；
    R 15为H；
    R 16和R 17与其所连接的原子一起形成3-6元碳环；
    R 18为H；
    R 19是烷基；优选地，R 19为C 1-6烷基；
    R 20是烷基；优选地，R 20为C 1-6烷基；
    X’为亚烷基；优选地，X’为C 1-6亚烷基；更优选地，X’为亚戊基；
    Y’为氧原子；
    A’为烷基；优选地A’为C 1-6烷基。
  32. 根据权利要求21至27中任一项所述的化合物或其可药用的盐，其选自：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100045
    Figure PCTCN2022123462-appb-100046
    Figure PCTCN2022123462-appb-100047
    Figure PCTCN2022123462-appb-100048
    Figure PCTCN2022123462-appb-100049
    Figure PCTCN2022123462-appb-100050
    Figure PCTCN2022123462-appb-100051
    Figure PCTCN2022123462-appb-100052
    Figure PCTCN2022123462-appb-100053
    Figure PCTCN2022123462-appb-100054
  33. 一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1至20中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或根据权利要求21至32中任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
  34. 根据权利要求1至20中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或根据权利要求21至32中任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或根据权利要求33所述的药物组合物用作药物。
  35. 根据权利要求1至20中任一项所述的抗体-药物偶联物或其可药用的盐，或根据权利要求21至32中任一项所述的式(DL)所示化合物或其可药用的盐，或根据权利要求33所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途；
    优选地，所述肿瘤为卵巢癌、肺癌、胃癌、子宫内膜癌、睾丸癌、宫颈癌、胎盘绒毛膜癌、肾癌、尿路上皮癌、大肠癌、前列腺癌、多形性神经胶质母细胞瘤、脑肿瘤、胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤、肝癌、膀胱癌或食道癌。
  36. 一种式(OLS)所示的二糖化合物：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100055
    P 3、P 4各自独立地选自羟基、N 3-(CH 2CH 2O)s 1-和N 3-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-，所述的N 3-(CH 2CH 2O)s 1-和N 3-(CH 2CH 2O)s 2-(CH 2CH 2CH 2O)s 3-(CH 2CH 2O)s 4-是未被取代的或各自独立地被一个或多个取代基所取代，其中每个取代基独立地选自卤素、C 1-6烷基、C 3-6环烷基和C 1-6烷氧基；
    s 1选自1-10，优选1-5；s 2选自0-10，优选1-5；s 3选自1-10，优选1-5；s 4选自0-10，优选1-5；
    条件是，P 3、P 4不同时为羟基或N 3-(CH 2CH 2O)s 1-；
    优选地，式(OLS)所示的二糖化合物选自：
    Figure PCTCN2022123462-appb-100056
  37. 一种糖分子，其为：
    N 3-(CH 2CH 2O)q-CH 2CH 2-NH-NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-2Manα1-6
                                                                 Manβ1-4GlcN-Oxa
                           NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-2Manα1-3
    或
                           NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-2Manα1-6
                                                                 Manβ1-4GlcN-Oxa
    N 3-(CH 2CH 2O)q-CH 2CH 2-NH-NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-2Manα1-3
    式中，q为0-20；优选地，q为1-10；更优选地，q为2或3；其中，Oxa代表噁唑啉环。
PCT/CN2022/123462 2021-09-30 2022-09-30 吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用 WO2023051814A1 (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2022353890A AU2022353890A1 (en) 2021-09-30 2022-09-30 Pyrrolo benzodiazepine derivative, and conjugate, preparation method and use thereof
CA3232764A CA3232764A1 (en) 2021-09-30 2022-09-30 Pyrrolo benzodiazepine derivative, and conjugate, preparation method and use thereof

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111164628.1 2021-09-30
CN202111164628 2021-09-30
CN202111399183 2021-11-19
CN202111399183.5 2021-11-19
CN202210363759.0 2022-04-07
CN202210363759 2022-04-07
CN202210836645 2022-07-15
CN202210836645.3 2022-07-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023051814A1 true WO2023051814A1 (zh) 2023-04-06

Family

ID=85781380

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2022/123462 WO2023051814A1 (zh) 2021-09-30 2022-09-30 吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用

Country Status (4)

Country Link
AU (1) AU2022353890A1 (zh)
CA (1) CA3232764A1 (zh)
TW (1) TW202330608A (zh)
WO (1) WO2023051814A1 (zh)

Citations (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US20050238649A1 (en) 2003-11-06 2005-10-27 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2006134341A1 (en) 2005-06-13 2006-12-21 Merck Sharp & Dohme Limited Therapeutic agents
EP1921074A1 (en) 2005-08-31 2008-05-14 Astellas Pharma Inc. Thiazole derivative
WO2013053872A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
US20130210798A1 (en) 2010-10-28 2013-08-15 John Q. Tan Soluble guanylate cyclase activators
WO2014057074A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014057119A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN104098481A (zh) 2013-04-10 2014-10-15 浙江九洲药物科技有限公司 一种沙格列汀中间体的制备方法
CN104395312A (zh) 2013-06-21 2015-03-04 四川海思科制药有限公司 4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物、其制备方法以及应用
WO2015052321A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CN105246894A (zh) * 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
WO2016149546A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Cellerant Therapeutics, Inc. Isoquinolidinobenzodiazepines
WO2016166307A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Van Berkel Patricius Hendrikus Cornelis Site-specific antibody-drug conjugates
US20160361436A1 (en) 2015-01-09 2016-12-15 Isis Innovation Limited Antibody conjugates and methods of making the antibody conjugates
WO2017004026A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Immunogen, Inc. Anti-cd 123 antibodies and conjugates and derivatives thereof
CN109071502A (zh) * 2016-01-26 2018-12-21 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂*
CN109180681A (zh) 2017-08-18 2019-01-11 四川百利药业有限责任公司 一种dna毒性二聚体化合物
WO2019046859A1 (en) 2017-09-02 2019-03-07 Abbvie Inc. ANTI-EGFR-DRUG ANTIBODY (ADC) CONJUGATES AND USES THEREOF
WO2019065964A1 (ja) 2017-09-29 2019-04-04 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
KR20190109007A (ko) 2018-03-16 2019-09-25 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 TGase 2 억제제로서의 퀴놀린-5,8-디온 유도체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
WO2020002487A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Compounds
WO2020006722A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Cross-linked pyrrolobenzodiazepine dimer (pbd) derivative and its conjugates
WO2020063676A1 (zh) 2018-09-26 2020-04-02 江苏恒瑞医药股份有限公司 依喜替康类似物的配体-药物偶联物及其制备方法和应用
WO2020196475A1 (ja) * 2019-03-25 2020-10-01 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
WO2020196474A1 (ja) * 2019-03-25 2020-10-01 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
WO2020196712A1 (ja) * 2019-03-27 2020-10-01 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲートとｐａｒｐ阻害剤の組み合わせ
US10851174B2 (en) 2011-03-03 2020-12-01 University Of Maryland, Baltimore Core fucosylated glycopeptides and glycoproteins: chemoenzymatic synthesis and uses thereof
CN112110918A (zh) 2019-06-21 2020-12-22 劲方医药科技(上海)有限公司 螺环取代的嘧啶并环类化合物，其制法与医药上的用途
WO2021115426A1 (zh) 2019-12-12 2021-06-17 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗密蛋白抗体药物偶联物及其医药用途
CN113166764A (zh) 2018-11-14 2021-07-23 第一三共株式会社 抗cdh6抗体-吡咯并苯并二氮杂环庚三烯衍生物缀合物
CN113260621A (zh) * 2019-01-03 2021-08-13 乐高化学生物科学股份有限公司 安全性得到提高的吡咯并苯并二氮杂二聚体化合物及其用途
WO2021193951A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 公益財団法人野口研究所 ポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物、及び抗体薬物複合体の前駆体
CN114949236A (zh) * 2021-02-22 2022-08-30 中国科学院上海药物研究所 二糖连接子、二糖-小分子药物偶联物以及糖链定点抗体-药物偶联物，其制备方法及用途

Patent Citations (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US20050238649A1 (en) 2003-11-06 2005-10-27 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2006134341A1 (en) 2005-06-13 2006-12-21 Merck Sharp & Dohme Limited Therapeutic agents
EP1921074A1 (en) 2005-08-31 2008-05-14 Astellas Pharma Inc. Thiazole derivative
US20130210798A1 (en) 2010-10-28 2013-08-15 John Q. Tan Soluble guanylate cyclase activators
US10851174B2 (en) 2011-03-03 2020-12-01 University Of Maryland, Baltimore Core fucosylated glycopeptides and glycoproteins: chemoenzymatic synthesis and uses thereof
WO2013053872A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
WO2014057074A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014057119A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CN105246894A (zh) * 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
CN104098481A (zh) 2013-04-10 2014-10-15 浙江九洲药物科技有限公司 一种沙格列汀中间体的制备方法
CN104395312A (zh) 2013-06-21 2015-03-04 四川海思科制药有限公司 4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物、其制备方法以及应用
WO2015052321A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20160361436A1 (en) 2015-01-09 2016-12-15 Isis Innovation Limited Antibody conjugates and methods of making the antibody conjugates
WO2016149546A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 Cellerant Therapeutics, Inc. Isoquinolidinobenzodiazepines
WO2016166307A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Van Berkel Patricius Hendrikus Cornelis Site-specific antibody-drug conjugates
WO2017004026A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Immunogen, Inc. Anti-cd 123 antibodies and conjugates and derivatives thereof
CN109071502A (zh) * 2016-01-26 2018-12-21 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂*
CN109180681A (zh) 2017-08-18 2019-01-11 四川百利药业有限责任公司 一种dna毒性二聚体化合物
WO2019046859A1 (en) 2017-09-02 2019-03-07 Abbvie Inc. ANTI-EGFR-DRUG ANTIBODY (ADC) CONJUGATES AND USES THEREOF
WO2019065964A1 (ja) 2017-09-29 2019-04-04 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
CN111164208A (zh) 2017-09-29 2020-05-15 第一三共株式会社 抗体－吡咯并苯并二氮杂卓衍生物偶联物
KR20190109007A (ko) 2018-03-16 2019-09-25 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 TGase 2 억제제로서의 퀴놀린-5,8-디온 유도체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
WO2020002487A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Compounds
WO2020006722A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd Cross-linked pyrrolobenzodiazepine dimer (pbd) derivative and its conjugates
WO2020063676A1 (zh) 2018-09-26 2020-04-02 江苏恒瑞医药股份有限公司 依喜替康类似物的配体-药物偶联物及其制备方法和应用
CN113166764A (zh) 2018-11-14 2021-07-23 第一三共株式会社 抗cdh6抗体-吡咯并苯并二氮杂环庚三烯衍生物缀合物
CN113260621A (zh) * 2019-01-03 2021-08-13 乐高化学生物科学股份有限公司 安全性得到提高的吡咯并苯并二氮杂二聚体化合物及其用途
WO2020196474A1 (ja) * 2019-03-25 2020-10-01 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
WO2020196475A1 (ja) * 2019-03-25 2020-10-01 第一三共株式会社 抗ｈｅｒ２抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲート
WO2020196712A1 (ja) * 2019-03-27 2020-10-01 第一三共株式会社 抗体－ピロロベンゾジアゼピン誘導体コンジュゲートとｐａｒｐ阻害剤の組み合わせ
CN112110918A (zh) 2019-06-21 2020-12-22 劲方医药科技(上海)有限公司 螺环取代的嘧啶并环类化合物，其制法与医药上的用途
WO2021115426A1 (zh) 2019-12-12 2021-06-17 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗密蛋白抗体药物偶联物及其医药用途
WO2021193951A1 (ja) * 2020-03-26 2021-09-30 公益財団法人野口研究所 ポリエチレングリコール鎖を有する糖化合物、及び抗体薬物複合体の前駆体
CN114949236A (zh) * 2021-02-22 2022-08-30 中国科学院上海药物研究所 二糖连接子、二糖-小分子药物偶联物以及糖链定点抗体-药物偶联物，其制备方法及用途

Non-Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ACS CHEMICAL BIOLOGY, vol. 7, 2012, pages 110
ACS MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 7, 2016, pages 1005
ANGEW. CHEM. INT. ED., vol. 55, 2016, pages 2361 - 2367
BIOCONJUGATE CHEMISTRY, vol. 26, 2015, pages 2233
BIOORGANIC AND MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 20, no. 14, 2012, pages 2982 - 2991
BIOTECHNOL. PROG., vol. 28, 2012, pages 608 - 622
CHARI ET AL., CANCER RESEARCH, vol. 52, 1992, pages 127 - 131
EDELMAN ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. U.S.A., vol. 63, no. 1, 15 May 1969 (1969-05-15), pages 78 - 85
HELVETICA CHIMICA ACTA, vol. 95, 2012, pages 1928 - 1936
JOURNAL OF CARBOHYDRATE CHEMISTRY, vol. 36, 2017, pages 336 - 346
JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMISTRY SOCIETY, vol. 130, 2008, pages 13790 - 13803
ORGANIC LETTERS, vol. 9, 2007, pages 3797 - 3800
SANGLIER-CIANFERANI, S., ANAL. CHEM., vol. 85, 2013, pages 715 - 736

Also Published As

Publication number Publication date
CA3232764A1 (en) 2023-04-06
AU2022353890A1 (en) 2024-04-04
TW202330608A (zh) 2023-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI826543B (zh) 依喜替康類似物的配體-藥物偶聯物、其製備方法及其應用
TWI820044B (zh) 抗體－吡咯并苯二氮呯衍生物複合體
CN114025844B (zh) 蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂及其使用方法
CN109790171B (zh) 吡咯并苯并二氮杂二聚物前体及其配体-连接体缀合化合物
JP6895254B2 (ja) ペプチド模倣化合物及びその抗体−薬物コンジュゲート
WO2022170971A1 (zh) 生物活性物偶联物及其制备方法和用途
TW201512174A (zh) 細胞增生抑制劑及其結合物
WO2021190602A1 (zh) 一种抗体药物偶联物的制备方法
JP2023545581A (ja) カンプトテシン系誘導体及びそのリガンド－薬物複合体
TWI716976B (zh) 高活性sting蛋白激動劑
CN111925367A (zh) 稠环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用
CN106243127B (zh) 抗体药物偶联物、中间体、制备方法、药物组合物及应用
CN114163444A (zh) 一种用于雄激素受体蛋白靶向降解的嵌合体化合物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2019141153A1 (zh) 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂及其用途
WO2023051814A1 (zh) 吡咯并苯并二氮杂卓类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用
EP4317144A1 (en) Heterocycle substituted ketone derivative, and composition and medicinal use thereof
CN115403584A (zh) 2-硫代-2,3-二氢嘧啶-4-酮衍生物、药物组合物及其制备方法和应用
CN113880833A (zh) 联苯多环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用
CN107660208B (zh) 包含cti药效团的双功能细胞毒性剂
CN116785449A (zh) 苯并吡咯并杂环类化合物及其偶联物、其制备方法及其应用
WO2023232142A1 (zh) 一种药物化合物及其用途
WO2023221975A1 (zh) 包含蛋白降解剂类生物活性化合物的抗体药物偶联物及其制备方法和用途
TW202400788A (zh) 用於靶向遞送治療劑的雙環雜環及其配體
WO2024022444A1 (zh) 稠环类化合物、其制备方法及其在医药上的应用
CN115536576A (zh) 磺酰苯甲酰胺类衍生物及其偶联物、其制备方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22875194

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 3232764

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2022353890

Country of ref document: AU

Ref document number: AU2022353890

Country of ref document: AU

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2022353890

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20220930

Kind code of ref document: A

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112024006314

Country of ref document: BR